專利名稱：：雷公藤二萜類內酯衍生物、其藥物組合物及其在抗生殖系統(tǒng)腫瘤中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及藥物化學領域，具體地，本發(fā)明涉及一類雷公藤二薛類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物及含有治療有效劑量的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物及常規(guī)的藥學輔料的藥物組合物及其劑型，以及該藥物組合物的應用。
背景技術：
：雷公藤(TripterygiumWilfordiiHookF)又稱黃藤，屬衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，中國有四種，其中有三種入藥，分別是主產(chǎn)于長江中下游地區(qū)的雷公籐，主產(chǎn)于長江流域及西南的昆明山海棠及主產(chǎn)于東北和日本的東北雷公藤。雷公藤最早收載于《神龍本草經(jīng)》，其主要化學成分有二辟、三碎、倍半碎、生物堿等，近二十年來的研究表明它具有抗腫瘤、抗炎、免疫抑制、抗生育、抗菌等活性。雷公藤植物在民間用于治療腫瘤已有多年歷史，其中活性成分之一是雷公藤內酯醇。雷公藤內酯醇除了已得到廣泛的抗腫瘤作用研究外，還曾經(jīng)進入臨床試驗，用于治療白血病，但由于雷公藤內酯醇的毒副作用，限制了其在臨床中應用。以往對雷公藤內酯醇的結構改造大多局限在水溶性基團的引進上，主體結構上并無根本性改動。當這類前藥進入體內后，通過水解或代謝后仍然轉變?yōu)槔坠賰弱ゴ荚隗w內發(fā)揮藥效作用，這就決定了它們不可能從根本上改善雷公藤內酯醇的毒副作用。同時以往對雷公藤內酯醇衍生物的抗肺瘤藥效研究大多無特異性，因此抗腫瘤瘤譜不夠明確。本發(fā)明的重點在于對雷公藤內酯醇構效關系的深入研究，對其結構進行了不同于現(xiàn)有技術的改造和修飾，獲得了一批新型結構的雷公籐二碎類內酯衍生物，其中最有代表性的一種結構改造方式是用手性的環(huán)氧代替了以往認為是雷公藤內酯醇活性必需基團的Cl鄰-OH。進一步通過各種制劑手段將這些衍生物制成各種劑型，在隨后的藥理毒理實驗研究中發(fā)現(xiàn)這些衍生物對于腫瘤疾病，尤其是生殖系統(tǒng)的胂瘤具有良好的治療作用，其中制備的(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇的作用尤其明顯，具有高效、低毒、特異性強的特點，具有很好的用于治療腫瘤等增生性疾病的開發(fā)前景，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一類雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物。本發(fā)明的另一目的是提供包括上述雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物以及常規(guī)的藥學輔料的藥物組合物及其劑型。本發(fā)明的再一目的是提供上述藥物組合物的用途。根據(jù)本發(fā)明，提供以下通式(l)所示的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>(1)其中，C5和C6以碳碳單^t或碳碳雙鍵相連；當C5和C6以碳碳單鍵相連時，P和Q分別表示連接在C5位和Q位上的氫、氧、羥基、卣素、巰基、C1C6烷氧基、C1C6烷胺基或C1C6烷巰基；當Cs和C6以碳碳雙鍵相連時，此時Cs除與C4、C6以及C,o連接外無其他取代基團，P不代表任何取代基團，C6位上取代基Q則僅代表氫原子；CwXY表示C,4位處的結構是Ci4CH2Q、C14(OH)CH2OH、C14OS(0)OCH2或C14OS02OCH2.，W和Z分別表示連接在d2位和(^3位上的氧、羥基、卣素、巰基、C1C6烷氧基、C1C6烷胺基或C1C6烷巰基；在上式中，連接X、Y、Z、W、P和Q的"——"代表"一"或者":根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(2)所示結構，(2)其中，C14XY為(14S)-14,21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C,2和Cu位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氬；或者根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物具有以下通式(3)所示結構，(3)其中，C14XY為(14S)-14，21-環(huán)氧結構，W為卩(R)構型的卣素，Z為a(R)構型的羥基，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫；或者根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物具有以下通式(4)所示結構，其中，C14XY為(14S)-14，21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C,2和C,3位的a(S)構型的氧，C5和C6以碳碳雙鍵相連，Q為氫；或者根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物具有以下通式(5)所示結構，r"^i、Z9、2108O21(5)其中，C14XY為(14R)-14,21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C,2和C,3位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫；或者根據(jù)本發(fā)明的雷公籐二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物具有以下通式(6)所示結構，其中，C14XY為C14(OH)CH2OH、C14OS(0)OCH^C14OS02OCH2，C"位的構型為(R)構型或(S)構型，W與Z為分別連接在(312和Cn位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二薛類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物選自由以下化合物組成的組(1)(14S)-M-脫羥基-14^1-環(huán)氧雷公藤內酯醇(2)(14R)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇14(3)(5R，14S)-5a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(5)(14S)-A"-脫氫-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(6)(MS)-l鄰-羥甲基表雷公藤內酯醇(7)(14S,硫S)-14a,21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(8)(14S，硫R)-14a,21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(9)(MS)-Ma21-乙二醇環(huán)硫酸酯雷公藤內酯醇更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的雷公藤二辟類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物為(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)。本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物的合成方法概括如下通式(1)所示的化合物是以雷公藤內酯酮(LLDT-1)為起始物。例如，如反應流程式(l)所示，以雷公藤內酯酮(LLDT-1)為起始物，在非質子極性溶劑中，于室溫條件下，利用亞曱基化試劑在C,4處形成S和R構型的一對環(huán)氧化合物(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)與(14R)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-69);將(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公籐內酯醇(LLDT-67)溶解于非質子極性溶劑中，于加熱條件下，由二氧化硒氧化得到(5R,14S)-5a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-68),同時得到少量A"-脫氫化合物(14S)-A"-脫氫-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-70);將(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)溶解于非質子極性溶劑中，用親核試劑開環(huán)氧得到(12R,13R,14S)-12P-氯-13a-羥基-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-76)。LLDT說LLDT-70LLDT-76反應流程式(l)例如，如反應流程式(2)所示，以雷公藤內酯酮(LLDT-1)為起始物，用Tamao格氏試劑進攻雷公藤內酯醇的<314-位羰基得到含硅的中間體(14S)-1鄰-異丙氧基二甲基硅曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-81)，該中間體進行簡單萃取濃縮后，不經(jīng)分離純化直接溶解于質子極性溶劑與非質子極性溶劑的混合溶劑中，氧化水解脫硅得到(14S)-l鄰-羥甲基表雷公藤內酯醇(LLDT-62);進一步以(14S)-l叫-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)為原料，在極性溶劑中，石咸性條件下，利用二氯亞石風將鄰二醇結構轉化為五元環(huán)亞硫酸酯結構的(14S,硫S)-14a,21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-77)和(14S,硫R)-14a,21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-78);兩者進一步在氧化條件下轉化為同一飽和的環(huán)硫酸酯化合物(148)-1401，21-乙二醇環(huán)硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-79)。反應流程式(2)此外，(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)也可通過如下方式獲得，如反應流程式(3)所示，以(14S)-l鄰-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)為原料，用磺酰化試劑將C^位的末端羥基磺?；蟮玫?14S)-l鄰-磺酰氧基曱基表雷公籐內酯醇(其中R為磺酰基)，在堿的作用下合環(huán)得到(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)。9S一OC9S,一，Qo〕、o18<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>反應流程式(3)另外，本發(fā)明也提供含有治療有效劑量的上述雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物以及常規(guī)的藥學輔料的藥物組合物。在根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中，所述雷公藤內酯醇衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物的含量為0.001~99.9wt%。本發(fā)明的藥物組合物的劑型可以為經(jīng)胃腸道給藥的劑型或非經(jīng)胃腸道給藥劑型。所述經(jīng)胃腸道給藥的劑型可以為溶液劑、乳劑、片劑、膠嚢劑等。所述的非胃腸道給藥劑量可以為注射劑，包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內注射等注射途徑；經(jīng)皮膚給藥，如外用洗劑、軟膏劑、貼劑等；經(jīng)粘膜給藥，如舌下、鼻腔、直腸、陰道、耳道等。本發(fā)明的藥物組合物的活性組分雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物可以被單一用藥，也可以與其它抗肺瘤藥物聯(lián)合治療。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以進一步包括一種或多種其它抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物為影響腫瘤細胞核酸生物合成的藥物；直接破壞肺瘤細胞DNA阻止其復制的藥物；嵌入腫瘤細胞DNA中干擾轉錄過程的藥物；干擾有絲分裂影響腫瘤細胞蛋白質合成的藥物；或通過抑制環(huán)氧化酶(COX-2)產(chǎn)生抗肺瘤作用的藥物。其中，所述影響腫瘤細胞核酸生物合成的藥物可以為5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)、巰噪呤(6-Mercaptopurine)、曱氨蟲萊呤(Methotrexate)、阿糖胞苷(Cytarabine)和羥基脲(Hydroxyurea)等；所述直接破壞胂瘤細胞DNA阻止其復制的藥物可以為氮芥(ChlormethineHydrochloride)、環(huán)磷酰胺(Cytoxam)、噻替派(Thiotepa)、白消安(Busulfan)、絲裂霉素C(MitomycinC)、博來霉素(Bleomycin)、順柏(Cisplatin)、奧馬鉬(OP)、草酸柏(Oxaloplatin)、DWA2114R、CI-973、洛鉑(Lobaplatin)、喜樹堿(Camptothecin)、依托泊香(Etoposide)等；所述嵌入胂瘤細胞DNA中干擾轉錄過程的藥物可以為放線菌素D(ActinomycinD)、阿霉素(ADM)、依達比星(Idambicin)以及絲裂蒽醌(NVT)、安丫啶(mAMSA)等；所述干擾有絲分裂影響腫瘤細胞蛋白質合成的藥物可以為如長春堿(VLB)和長春新堿(VCR)、碳長春堿(VRB)、紫杉醇(Taxol)、紫杉特爾(Taxotere)、L-門冬酰胺酶(L-asparaginase)或三尖^^面旨石威(Harringtonine)等；戶斤述通過抑制環(huán)氧化酶(COX-2)產(chǎn)生抗肺瘤作用的藥物可以為阿司匹林(Aspirin)、。引噪美辛(Indomethaein)、布洛芬(SpansuleCapsulaeIbuprofeni)、尼美舒利(Nimesulide)、塞來昔布(Celecoxib)、羅非昔布(Rofecoxib傳。藥物聯(lián)合治療時，雷公藤內酯醇衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物與其它化療藥物可以是同時給藥、可以是序貫給藥，也可以是分開給藥。此外，本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備用于治療肺瘤、以及與腫瘤相關的疾病的藥物中的應用，其中，藥物活性組分以0.001~10mg/kg的量被使用。這樣的給藥劑量通常能產(chǎn)生有效的治療效果。如(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)以1.0、2.0、4.0mg/kg的劑量口服給藥能明顯抑制人前列腺癌、卯巢癌棵小鼠移植瘤的生長。但是，給藥劑量將根據(jù)治療對象、受治療者的年齡(月齡或周齡)、一般健康狀況、給藥途徑、個體對藥物的敏感性以及病情的嚴重程度等作相應的調整，以對受治療者施用含本發(fā)明化合物治療有效量的藥物制劑。這些制劑可以通過傳統(tǒng)的方法利用傳統(tǒng)的輔料制成。本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療患有胂瘤等增生性疾病的溫血動物，所述"腫瘤"包括良性腫瘤和惡性腫瘤良性腫瘤主要有神經(jīng)膠質瘤、纖維瘤、脂肪瘤、血管瘤等；惡性胂瘤主要包括由上皮組織發(fā)生的惡性腫瘤如鱗狀上皮癌、乳腺癌、卵巢癌等，由中胚層組織發(fā)生的惡性胂瘤如纖維肉瘤、骨肉瘤、淋巴肉瘤等，以及由胚胎細胞、神經(jīng)細胞或未成熟組織發(fā)生的惡性胂瘤和由造血細胞發(fā)生的惡性腫瘤等。所述"溫血動物"包括人和其它動物，如嚙齒類動物和哺乳類動物。所述"增生性疾病"的含義包括肺瘤、不典型增生，但不局限于腫瘤和不典型增生。本發(fā)明的藥物組合物還可以用于與腫瘤相關的疾病，包括前列腺癌、人卵巢癌、神經(jīng)膠質瘤、胃癌、粒細胞性白血病、結腸癌、乳腺癌、阿霉素敏感的乳腺癌、阿霉素抗藥的乳腺癌等腫瘤疾病。優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物用于治療前列腺癌和卵巢癌。本發(fā)明中所-使用的一些術語具有如下意義"低級"指碳原子數(shù)為1~6個的直鏈或支鏈碳鏈。"烷氧基"可為曱氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、2-曱基丁氧基、1，2-二曱基丙氧基、1-乙基丙氧基、己氧基等，以曱氧基和乙氧基為佳。"烷胺基"可為曱胺基、乙胺基、丙胺基、異丙胺基、丁胺基、異丁胺基、仲丁胺基、叔丁胺基、戊胺基、異戊胺基、叔戊胺基、新戊胺基等一級低級烷胺基，或二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二異丙胺基、二丁胺基、二異丁胺基等二級低級烷胺基，這些基團中較好的有曱胺基、乙胺基、二曱胺基、二乙胺基。"烷巰基"可為曱巰基、乙?guī)€基、丙巰基、異丙巰基、丁巰基、異丁巰基、仲丁巰基、^又丁巰基、戊巰基、異戊巰基、^又戊巰基、新戊巰基、2-曱基丁巰基、1，2-二曱基丙巰基、1-乙基丙巰基、己巰基等，以曱巰基和乙?guī)€基為佳。"極性溶劑，，為例如乙酸乙酯、二氧六環(huán)、丙酮或一又丁醇等；"非質子極性溶劑"指例如二曱亞砜、N，N-二曱基曱酰胺、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)或乙二醇雙曱醚等；"質子極性溶劑，，指例如曱醇、乙醇、丙醇或叔丁醇等；"加熱條件"指室溫以上至溶劑回流溫度；"亞曱基化試劑"指例如Corey亞曱基化試劑、Simmons-Smith試劑或重氮曱烷等；"磺?；噭?指例如曱磺酰氯、乙磺酰氯、苯磺酰氯、對曱苯磺酰氯、三氟曱磺酰氯或三氟曱磺酸肝等；"親核試劑"指例如氯化氫或吡啶鹽酸鹽等；22"藥學上可接受的鹽"具體的可列舉與丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸等有機酸和天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸形成酯后再與無機堿形成的鹽，如鈉、鉀、4丐、鋁鹽和銨鹽，或與有機堿形成的鹽，如曱胺鹽、乙胺鹽、乙醇胺鹽等，或與賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸等堿性氨基酸形成酯后的鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸的鹽，或與曱酸、乙酸、苦味酸、曱磺酸等有機酸的鹽。"光學異構體"的含義包括對映異構體、非對映異構體、光學異構體的混合物及純光學異構體。有益效果本發(fā)明合成了高效、低毒的雷公藤二萜類內酯衍生物，使其能夠實際地用于腫瘤疾病的治療。體外藥效結果顯示，所獲得的一系列雷公藤二碎類內酯衍生物中，用(14S)-14,21-環(huán)氧結構代替了以往認為是活性必需基團的Cl鄰-OH的4個衍生物均表現(xiàn)出了較強的抗腫瘤作用，這無疑是結構改造方向上的一種重大突破。急性毒性實驗結果表明本發(fā)明中的雷公藤二萜類內酯衍生物(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67),0。/。死亡劑量LDo高達20mg/kg,而其先導化合物雷公藤內酯醇的半數(shù)致死劑量0)5()則僅為0.5mg/kg,因此，(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇的毒性遠低于雷公藤內酯醇(LLDT-2)，使得可安全使用的劑量范圍大為提高。從體內藥效結果可知，(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)對生殖系統(tǒng)腫瘤具有明顯的抑制作用，且表現(xiàn)出了高度的特異性，因而更有利于降低其毒副作用。本發(fā)明的藥物組合物能夠制成有利于溫血動物的組織、器官吸收利用的制劑形式，其在治療腫瘤等增生性疾病方面具有良好的應用前景。圖1為說明LLDT-67對人卵巢癌SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。圖2為說明LLDT-67對人卵巢癌SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的照片，其中鼠尾代表該成活鼠移植瘤已不可檢出。圖3為說明LLDT-67對人前列腺癌PC-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。圖4為說明LLDT-67對人前列腺癌PC-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的照片。圖5為說明LLDT-67對人前列腺癌DU-145棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。圖6為說明LLDT-67對人前列腺癌DU-145棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用照片。圖7為說明LLDT-67對人胃癌SGC-7901棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。圖8為說明LLDT-67對人胃癌SGC-7901棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的照片。圖9為說明LLDT-67對人乳腺癌MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。24圖10為說明LLDT-67對人乳腺癌MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的照片。圖11為說明LLDT-67對人肝癌SMMC-7721棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的曲線圖。圖12為說明LLDT-67對人肝癌SMMC-7721棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用的照片。具體實施例方式下面結合實例對本發(fā)明進行進一步闡述，但這些實施例絕不是對本發(fā)明的任何限制，本發(fā)明的范圍由權利要求決定。制備實施例所用儀器及主要實驗材料如下Fisher-Johns顯微熔點儀(溫度未經(jīng)校正)，JASCODIP-181旋光儀，Perkin-Elmer599B型和NicoleMagan750型紅外光語儀，BmkerAM-400型和VarianMercuryplus-400型核磁共振儀，MAT-711和MAT-95型質譜儀，H及200-300目柱層析硅膠(青島海洋化工廠)，HSGF254TLC板(煙臺市化工研究院)。制備實施例1(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)25IXDT畫1IXDT-67將(CH3)3S01(59.6mg，0.27mmol)和NaH(60%,9.5mg,0.24mmol)以固體形式混合，氬氣保護下加入2mL無水二曱亞石風，室溫攪拌20min，向其中滴加溶有雷公藤內酯酮(LLDT-1)(53.7mg，0.15mmol)的無水二曱亞砜溶液(2mL),攪拌反應。TLC檢測原料轉化完全，加入3mL水淬滅反應，乙酸乙酯萃取，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，所得粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:5)，立體專一性地得到白色固體(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)(47.5mg，0.13mmol，產(chǎn)率85%)。'H畫R(CDC13，300MHz)34.67(s，2H)，3.88(d，/=2.9Hz,1H),3.52(d,/=3,1Hz,1H),3.40(d,J=5.5Hz,1H)，2.84(d，/=5.2Hz，1H);2.80-2.69(m,2H),2.37-2.25(m，1H)，2.21-2.05(m,2H)，1.91-1.80(m,2H)，1.57(dd,/=12.4,4.9Hz,1H)，1.29-1.17(m,1H)，1.06(s，3H)，0.86(d，/=6.8Hz,3H)，0.80(d,/=6.8Hz,3H);3C畫R(CDC13，100MHz)(5173.2(C)，160.2(C),125.2(C),69.9(CH2),65.2(C),65.0(C)，58.4(C),56.8(CH)，55.9(CH)，55.6(C),54.1(CH),47.9(CH2),40.4(CH):35.6(C),30.2(CH2)，23.4(CH2),23.2(CH),19.8(CH3)，17.6(CH3)，17.0(CH2)，13.5(CH3);IR(KBr)3427,3016，2981,2929，1745,1674,1442,1022cm-1;MS(EI,70eV)w/z(%)373([M+l]+,2),372(M+,1),357(5),343(21)，91(100);HRMS(EI)calcd.forC21H2406372.1573,found372.1578;Anal.(C21H2406)calcd.C67,73，H6.50,foundC67.71,H6.51;[a]2D0-138(c0.109,CHC13);mp245-246°C.制備實施例2(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)和(14R》14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷7>藤內酯醇(LLDT-69)IXDT-1IXDT-67IXDT-69氬氣保護下將(CH3)3S01(374mg,l,7mmol)和"BuOK(174mg,1.5mmol)溶于6mL干燥的二曱亞砜中，該混合體系于室溫下攪拌20min。將溶解于6mL干燥二曱亞砜溶劑中的雷公藤內酯酮(LLDT-1)(360mg，1.0mmol)加入上述混合物中，室溫下攪拌反應至底物轉化完全，加入10mL水淬滅反應，乙酸乙酯萃取，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑后將粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:5)。所得白色固體用半制備HPLC分離得到一對差向異構體(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)(0.196g,0.53mmol,產(chǎn)率53%)和(14R)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-69)(0.126g，0.34mmol,產(chǎn)率34%)。(14R)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-69):'H畫R(CDC13,300MHz)(54.79(dt，J=16.8，2.6Hz，1H)，4.60(dd,/=16.8,2.8Hz，1H)，3.81(d,■/=3.1Hz,1H),3.52(d,/=3.1Hz，1H),3.38(d，/=4.2Hz，1H),2.89(d,/=4.7Hz,1H)，2.85(d，■/=4,7Hz,1H)，2.81-2.72(m,1H),2.39-2.27(m,1H)，2.17(dt,/=14.3,4.2Hz，1H),2.11-1.94(m，1H),1.94-1.81(m,2H),1.47-1.29(m，2H),0.96(s，3H),0.89((!，/=6.8Hz，3H)，0.77(d,/=6.8Hz,3H);13C麗R(CDC13,100MHz)3173.2(C)，161.6(C),125.4(C),70.8(CH2)，65.9(C)，64.6(C):58.3(C)，57,2(CH)，56.2(CH)，55.9(C),54.7(CH),48.2(CH2)，36.9(CH):36.1(C),28.4(CH2),26.9(CH2),23.0(CH)，21.7(CH3)，20,2(CH3),17.3(CH3),16.6(CH2);IR(KBr)3433,2947，2929,1768,1755,1689，1442cm-1;MS(EI,70eV)m/z(%)372(M+,1),357(9),343(18),325(34)，259(100);HRMS(EI)calcd.forC21H2406372.1573,found372.1586;[a]2D0-156(c0.135，CHC13);mp177-179°C.制備實施例3(14S)-14卩-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)IXDT-1IXDT-81ULDT-62在反應瓶中稱量4美屑(108mg,4.5mL)，氬氣置換保護反應體系；將異丙氧基二曱基氯曱基硅烷(0.72ml，4.0mmol)溶于7mL無水四氫呋喃中，氬氣保護下取lmL該溶液滴加入4美屑反應體系中，并加入兩滴1,2-二溴乙烷，4(TC攪拌下引發(fā)格氏反應，隨后將剩余的硅烷試劑的四氫吹喃溶液逐滴滴入反應體系中，5min滴力口冗畢,jt匕時反應體系呈暗灰色?；亓髟摲磻w系45min，隨后冷卻至0。C。將5容于無水四氬p夫喃的雷公藤內酯酮(LLDT-1)(358mg，1.0mL)滴加入上述新鮮制備的格28氏試劑中。室溫下攪拌反應2小時，飽和氯化銨溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸出溶劑得一單一加成產(chǎn)物。該加成產(chǎn)物不經(jīng)純化直接于40。C下溶于5mL曱醇和8mL四氫呋喃的混合溶劑中，攪拌下依次加入KHC03(416mg,4.2mmol)、KF(464mg,4.9mmol)和H2O2(30%,1.1mL,9.71mmol)。40。C下反應，TLC(環(huán)己烷乙酸乙酯=l:l)檢查原料消失后，硫代硫酸鈉水溶液(50%)中止反應。反應混合物用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鈉干燥。濃縮后的粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯環(huán)己烷=1:3)得白色固體(14S)-l鄰-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)(273mg，0.70mmol，產(chǎn)率70%)。麗R(CDC13,300MHz)<54,67(s，2H),4.26(d,11.8Hz,1H)，3.87-3.80(m，2H),3.64(d,/=11.5Hz,1H),3.46(d，/=3.3Hz，1H),2.76-2.64(m,1H)，2.45(sept，/=6.9Hz，1H),2.37-2.25(m,1H)，2.23-2.04(m，2H)，1.89(t,J=14.1Hz,1H),1.55(dd,/=12.6,5.2Hz,1H),1.25-1.13(m，1H),1.07(s,3H),0.91(d,J^6.9Hz，3H),0.89(d，>/=6.9Hz,3H);13CNMR(CDC13，100MHz)3173.2(C)，160.2(C)，125.4(C),74.4(C)，70.0(CH2),67.5(C)，65.3(C),65.2(CH2)，65.0(C),56.5(CH)，56.1(CH),54.4(CH)，40.3(CH),36.0(C)，30.1(CH2)，25.5(CH),23.4(CH2),20.9(CH3),18.6(CH3)，17.1(CH2),13.7(CH3);IR(KBr)3415,3361,2966,2927，2875,1755，1724,1672，1439，1074,1018cm";MS(EI，70eV)附/z(%)391([M+l]+,2)，372(1)，71(100);HRMS(EI)calcd.forC21H2707(M+H)+391.1757,found391.1752;[a]2D0-116(c0.085，CHC13);mp237-239°C.制備實施例4(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇29(LLDT-67)IJLDT-621XDT-80IXDT-67將(14S)-14卩-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)(0.50g，1.3mmol)溶于干燥的吡啶中(4.0mL)。將該溶液冷卻至0。C后滴加入MsCl(0.61mL,7.7mmol)。室溫下攪拌反應10min,減壓蒸出;容劑。殘留物加水稀釋，乙酸乙酯萃取，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。濃縮所得粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:2)得到一無色油狀物(14S)-14-C-甲磺酰氧曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-80)(0.390g,0.85mmol,產(chǎn)率50%)。將(14S)-14-C-曱磺酰氧曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-80)(0.504g，1.1mmol)溶解于20mL甲醇溶劑中，加入K2C03(1.33g，9,6mmol)。室溫下攪拌反應20min后減壓蒸出溶劑，殘留物加水稀釋，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:5)得到白色固體(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)(307mg,0.82mmol,產(chǎn)率65%)。(14S)-14-C-曱磺酰氧曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-80):NMR(CDC13，300MHz)34.70-4.57(m,4H)，3.80(d,/=3.2Hz,1H)，3.77(d，/=5.6Hz,1H)，3.47(d,/=3.2Hz,1H),3.10(s,3H),2.77-2.67(m，1H)，2.54(sept">/=6.9Hz,1H),2.37-2.26(m，1H),2.25-2.06(m,1H)，1.91(dd,/=14.8，13.4Hz，1H),1.54(dd，《/=12.9,305.1Hz，1H),1.28-1,13(m,2H),L07(s,3H),0.92(d,J=7.7Hz,3H)，0.89(d,/=7.7Hz,3H);13C畫R(CDC13，100MHz)(5173.2(C)，160.1(C)，125.4(C)，74.5(C),72.0(CH2),69.9(CH2)，67.8(C),65.1(C),63.3(C),55.9(CH)，55.4(CH)，54.0(CH),40.5(CH)，37.5(CH),36,0(C)，29.7(CH2),25.6(CH3),23.5(CH2)，20.5(CH3),18.5(CH3),17.1(CH2),13.5(CH3);IR(KBr)3483,3024，2972,2937,1749，1674,1446,1354,1174cm-1;MS(EI,70eV)m/z(%)468(M+)，450(3),432(1)，407(1),354(17)，111(100);HRMS(EI)calcd,forC22H28S09468.1454,found468.1457;[a報-114(c0.530，Acetone).制備實施例5(5R，14S)-5a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-68)和(MS)-A"-脫氫-M-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-70)IXDT-67IXDT-68IXDT-70將(14S)-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)溶解于8mL1,4-二氧六環(huán)中，加入Se02(111mg,1.0mmol)。反應體系在回流狀態(tài)下反應24h，隨后停止反應，將反應體系冷卻至室溫，硅藻土過濾，乙酸乙酯洗滌濾渣，減壓除去溶劑。殘留物用乙酸乙酯和飽和碳酸鈉溶液處理，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。濃縮后的粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析純化(洗脫劑CH2Cl2)得到白色固體(5R,14S)-5-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-68)(38.8mg，0.1mmol，產(chǎn)率50%)和(14S)-△5'6-脫氫-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-70)(7.4mg，0.02mmol，產(chǎn)率10%)。(5R，14S)-5a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-68):'H醒R(CDC13，300MHz)<54.92(dt,/=17.1,3.1Hz,1H),4.71(dd，/=17.1,3.9Hz，1H),3.92(d,3.3Hz，1H)，3.63(d，《/=3.3Hz，lH),3.40((!，/=4.8Hz,1H),2.86((!，/=5.1Hz，1H),2,79(d，《/=5.1Hz,1H),2.41-2.04(m,4H),1.95-1.74(m,2H),1.29(dd，12.7,4.9Hz,1H)，1.12(s,3H),0.87(d,/=6.8Hz,3H)，0.84(<!，/=6.8Hz，3H);13C畫R(CDC13,腦MHz)(5173.2(C)，159.0(C)，128.0(C),72,3(C),68.7(CH2)，65.8(C),63.2(C),58.4(C),56.4(CH)，55.5(C)，55.0(CH),54.5(CH)，48.0(C)，40.6(C),31.0(CH2),24.6(CH2)，23.4(CH),19.7(CH3)，17.8(CH3),17.4(CH2)，16.2(CH3);IR(KBr)3479,2956，1736，1668，1442，1037cm-1;MS(EI,70eV)m/z(%)389([M+l]+，2),373(2),359(100),341(18);HRMS(EI)calcd.forC21H2507(M+H)+389.1601,found389.1606;[a]2D0-120(c0.223,CHC13);mp233-235。C.(14S)-A5，6-脫氬-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-70):'H畫R(CDC13，300MHz)(56.03(d，《/=3.7Hz,1H),4.95(d，■/=16.0Hz，1H),4.83(dd,/=16.0，2.5Hz,1H),3.86(d,3.0Hz,1H),3.56-3.48(m,2H)，2,92(d，/=4,9Hz,1H)，2.86(d，《/=4.9Hz,1H),2.51-2.40(m,1H)，2.36-2.21(m，1H),1,90(sept.,J=6.8Hz,1H),1.52-1.34(m,2H)，1,29(s,3H),0.92(d,J=6.8Hz,3H),0.78(d,/=6.8Hz,3H);13C畫R(CDC13,100MHz)<5173.0(C),153.1(C)，140.4(C)，126.9(C)，121.8(CH),68.9(CH2),65.1(C),64.4(C)，61.3(C),56.6(CH),55.8(C),54.2(CH),53.7(CH),48.4(CH2),37.2(C),30.3(CH2)，23.1(CH),22.8(CH3),20.3(CH3),17.2(CH3)，17.1(CH2);IR(KBr)3433,2979，2927，1747,1657,1358,1024cm-1;MS(EI，70eV)w/z(%)370(M+:13),355(22),341(91)，327(95),115(100);HRMS(EI)calcd.forC21H2206370.1416,found370.1404;[a]2D0-443(c0.174,Acetone);mp205-207°C.制備實施例6(12R,13R,14S)-12(3-氯-13a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-76)IXDT-67ULDT-76將(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)溶解于6mL丙酮中，加入6mL鹽酸溶液(1.67%,2.7mmol)?；旌衔镌诨亓鳡顟B(tài)下反應7h。減壓蒸出溶劑后所得殘留物用水處理，乙酸乙酯萃取，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮后的粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:3)得到白色固體(12R,13R,14S)-12卩-氯-13a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公籐內酯醇(LLDT-76)(17.5mg,0.043mmol，產(chǎn)率39%)。畫R(CDC13,300MHz)<54.69(s,2H),4.16(d,■/=5.7Hz,1H),3.75(d，/=5.7Hz,1H),3.46(d,/=6.0Hz,1H),2.93-2.83(m,2H),2.78(d，J=5.1Hz，1H),2.36-2.25(m,1H)，2.21-2.04(m，2H),1,94-1.74(m,2H),1.59(dd,/=12.3，4.7Hz,1H),1.35-1.21(m,1H),1.03(s，3H),0.99(d，/=2.2Hz,3H)，0.96(d,2.2Hz,3H);13C畫R(Acetone-d6,100MHz)c5173.7(C)，162.2(C),124.6(C)，76.6(C),70.7(CH2)，69.9(C):60.3(CH),59.8(C),58.3(CH),58.2(C),58.2(CH),48.0(CH2),40.2(CH):35,8(C),31.3(CH2)，28.8(CH),23.1(CH2)，18.0(CH3)，17.4(CH2)，16.3(CH3),13.9(CH3);IR(KBr)3462，2933,2252，1743,1674,1439,1003cm-1;MS(EI,70eV)附/z(%)408(M+,9),390(3),373(8),365(100);HRMS(EI)calcd.forC21H25C106408.1339，found408.1339;[a]2D5-97.9(c1.15，Acetone);mp174-175°C.制備實施例7(14S，硫S)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-77)和(14S,硫R)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-78)IXDT-62IXDT-77IXDT-78將(14S)-14卩-羥曱基表雷公藤內酯醇(LLDT-62)(78mg，0.2mmol)溶解于6mL無水CH2C12中，滴加干燥的Et3N(0.21mL，1.6mmol)。反應體系冷卻到0°C，在氬氣保護下將SOC12(0.3mL，1.2mmol)小心加入反應體系中，攪拌反應2h后，加入水中止反應，CH2Cl2萃取，有機層用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮后的粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析分離純化(洗脫劑乙酸乙酯環(huán)己烷=1:5)得到白色固體(14S,硫34S)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-77)(39.2mg,0.09mmol,產(chǎn)率43。/。)和(14S,硫R)-14，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-78)(30.5mg,0,07mmol，產(chǎn)率36%)。(14S，硫S)-14a,21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-77):NMR(CDC13，300顧z)<54.93(d,>/=9.6Hz，1H),4.68(s，2H),4.58(d,/=9.6Hz,1H),3.84(d，J=3.0Hz,1H),3.71(d，《/=5.7Hz,1H)，3.61(d,J=2.9Hz，1H),2.78-2.67(m,1H)，2.61(sept.,6.9Hz，1H)，2.38-2.26(m，1H)，2.25-2.05(m,2H)，1.91(t,J=14.1Hz，1H)，1.54(dd，12.6,4.5Hz,1H),1.26-1.14(m,1H),1.07(s，3H)，0.95(d，7=6.9Hz,3H)，0,93(d,J=6.9Hz,3H);13C麗R(CDC13，100MHz)(5173.1(C)，159.8(C),125.5(C)，91,9(C),74.1(CH2),69.9(CH2),65.1(C)，64.9(C),61.7(C),56.5(CH)，55.6(CH),55.5(CH),40.4(CH),35.8(C),30.0(CH2),25.7(CH)，23.3(CH2),20.6(CH3),18.7(CH3),17.1(CH2)，13.5(CH3);IR(KBr)3475，2972,2933，2875,1745,1680,1441,1219,1018cm";MS(EI，70eV)w/z(%)436(M+，2)，407(1),393(6),241(100);HRMS(EI)calcd.forC21H24S08436.1192,found436.1199;[a]2D5-97.0(c0.400，Acetone);mp269-271°C.(14S,克R)-14a,21-乙二醇環(huán)亞碌^酸酯雷7^藤內酯醇(LLDT-78):畫R(CDC13,300MHz)34.80(d,/=9.6Hz,1H)，4.68(s,2H),4.58(d,/=9.6Hz，1H),3.843.0Hz,1H),3.79(d,/=5.6Hz,1H)，3.53(d,=3.0Hz,1H)，2.80-2.68(m,1H),2.38-2.26(m，1H),2.24-2.02(m,3H),1.96(t,/=14.1Hz，1H),1.54(dd，《/=12.6，5.1Hz,1H),1.28-1.15(m,1H),1.10(s,3H),0.92(d,/=6.8Hz,3H)，0.90(d，/=356.8Hz,3H);"C麗R(CDC13，100MHz)"73.1(C)，159.9(C),125.3(C),92.5(C)，74.1(CH2),69.9(CH2),66.5(C),65.0(C)，61.0(C),58.3(CH),55.4(CH)，54.7(CH)，40.4(CH)，35.7(C),30,2(CH2)，25.7(CH)，23.3(CH2)，20.5(CH3),18.2(CH3),17.0(CH2)，13.4(CH3);IR(KBr)3435:2970,2933,2877,2254,1755,1674,1444，1346，1223,1020cm";MS(EI,70eV)w/z(%)436(M+，7),421(9),71(100);HRMS(EI)calcd.forC21H24S08436.1192，found436.1182;[a招-96.9(c0.425,Acetone);mp160-162°C.制備實施例8(14S)-14a,21-乙二醇環(huán)硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-79)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>IXDT-77或IXDT-78IXDT-79將(14S,硫S)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-77)或(14S,硫R)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-78)(40mg:0.092mmol)溶解于4mL乙腈中，依次加入高碘酸鈉(31mg,0.14mmol)，RuCl33H20(6mg，0.028mmol)和1mL水，室溫下攪拌反應15min，減壓蒸出溶劑，濃縮物用水稀釋后用乙酸乙酯萃取，水、飽和食鹽水洗滌有機相，無水硫酸鈉干燥，濃縮后的粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析純化(洗脫劑乙酸乙酯:環(huán)己烷=1:4)得到白色固體(14S)-14a,21-乙二醇環(huán)硫酸酯雷公藤內酯醇(LLDT-79)(36mg，0.079mmol,產(chǎn)率86%)。HNMR(CDC13,300MHz)34.9210.0Hz，1H),4.72-2.63(m,3H),3.87(d,3.0Hz,1H),3.83(d，5.6Hz,1H)，3.65(d,/=3.0Hz，1H),2.79-2.68(m,1H),2.51(sept"/=6.8Hz,1H),2.39-2.07(m:3H)，1.98C14.2Hz,1H),1.53(dd,/=12.6,5.2Hz,1H),1.29-1.14(m,1H)，1,09(s，3H),0.99(d，/=6.8Hz,3H)，0.97(d,/=6.8Hz,3H);13C畫R(CDC13,100MHz)3172.9(C),159.4(C),125.6(C),91.3(C),73.4(CH2),69.9(CH2),66.3(C),65.2(C)，61.9(C)，58.3(CH),55.7(CH),55.5(CH)，40.3(CH)，35.7(C)，30.2(CH2)，25.5(CH),23.2(CH2),20.4(CH3)，18.3(CH3)，17.0(CH2),13.4(CH3);IR(KBr)3442，2970,2941，1749，1676，1441,1394,1217,1001cm-1;MS(EI,70eV)m/z(%)452(M+:8),437(10)，423(10),111(100);HRMS(EI)calcd.forC21H24S09452.1141,found452.1169;[a說-107(c0.275,CHC13);mp205-207。C.制備實施例9含有LLDT-67的適用于人類應用的幾種代表性劑型(1)LLDT-67口服制劑軟膠嚢劑或口服液口服液LLDT-674mg/ml亞油酸乙酯l%(w/w)乙二醇乙醚17%(w/w)CremophorEL52%(w/w)(聚氧乙烯蓖麻油)辛酸/癸酸甘油酯30%(w/w)使用以適量水稀釋后口服她嚢IXDT-674mg/ml亞油酸乙酯8%(w/w)乙二3S壘16%(w/w)C腿ophorEL48%(w/w)(聚氧乙烯蓖麻油)辛酸/癸酸甘油酯28%(w/w)軟膠嚢劑，口服液各組分范圍IXDT-674mg/ml亞油酸乙酯0-510%(w/w)乙二醇乙醚10~20%(>/w)CremophorEL3560%(聚氧乙烯蓖麻油)辛酸/癸酸甘油酯2050%(w/w)LLDT-67注射用4十劑注射液1:IXDT-670.5mg/ml大豆油15%(w/w)磷脂PL曙100M2%(w/w)甘油注射用水2.5%(w/w)80.5%(w/w)注射液1各組分范圍1XDT-67大豆油0.5mg/ml-20%(w/w)磷脂PL-100M0.53%(w/w)甘油注射用水注射液2:IXDT-67丙二醇0.5~3%(w/w)加至100g2mg/ml2%(w/w)CremophorEL18%(聚氧乙烯蓖麻油)生理鹽水80%(w/w)注射液2各組分范圍IXDT-672mg/ml丙二醇l~10%(w/w)CremophorEL5~25%(w/w)(聚氧乙烯蓖麻油)生理鹽水加至100g(3)LLDT-67軟骨劑LLDT-674mg/g硬脂酸甘油酯3.5%(w/w)硬脂酸12%(w/w)液體石蠟6%(w/w)白凡士林l%(w/w)羊毛脂5%(w/w)蒸餾水加至100gLLDT-67軟膏劑各組分范圍LLDT-674mg/g硬脂酸甘油酯16%(w/w)硬脂酸8~20%(w/w)液體石蠟3~10%(w/w)白凡士林0.54%(w/w)羊毛脂2~8%(w/w)蒸餾水加至100g藥效學評價實施例以下實施例中，受試樣品由本發(fā)明化學合成實施例提供，以先導化合物雷公藤內酯醇(LLDT-2)作為陽性對照。實驗實施例1本發(fā)明的9個化合物對體外培養(yǎng)的人卵巢癌SK-OV-3細胞的增殖抑制作用。方法人印巢癌SK-OV-3細胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(Gibco,美國)培養(yǎng),培養(yǎng)條件為37。C、5%C02。月中瘤細胞0.7x104/孔接種于96-孔板，24小時后，加入貯備液為二甲基亞砜配制(1(T2M)、生理鹽水稀釋的各化合物，使培養(yǎng)基中終濃度為10-4、10-5、l(T6、l(T7、1(T8M，作用72小時。棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細胞。用磺酰羅丹明B(SulforhodamineB,SRB)溶液染色。洗去未結合SRB后，Tris溶解與蛋白結合的SRB，酶標儀在560nm波長下測定OD值。按下列公式計算細胞生長抑制率抑制率KOD值賴孔-OD值輛孔)/OD值對照孔x100。/。。結果判定標準無效1(T5M<50%;有效1(T5M250%。根據(jù)各濃度的抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度IC50。結果在本發(fā)明的9個化合物中，6個化合物LLDT-67、LLDT-68、LLDT-69、丄LDT-70、LLDT-76、LLDT-78劑量依賴性地抑制體外培養(yǎng)41的人卵巢癌SK-OV-3細胞生長，顯示其具有有效的體外抗腫瘤作用。具體結果見表l。表l.化合物對人卵巢癌SK-OV-3細胞的增殖抑制作用樣品SK-OV畫3ic50編號10-4M10-5M10-6M10'7M10-8M評價(pM)IXDT-296.194.693.493.252.9有效0,009LLDT-6258.70000無效IXDT-6792.393.393.543.10有效0.101IXDT-6894.494.35.300有效1.864IXDT-6994,694.027.31.00有效1.560IXDT-7093.992.490.15.98.6有效0.574IXDT-7691,092.391.427.83.5有效0.143IXDT-7750.90000無效IXDT-7893.692.3000有效5.102IXDT-7983.70.4000.0無效實驗實施例2本發(fā)明的9個化合物對體外培養(yǎng)的人乳腺癌MDA-MB-468細胞的增殖抑制作用。方法人乳腺癌MDA-MB-468細胞用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基(Gibco，美國)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37。C、5%C02。肺瘤細胞0.7x104/孔接種于96-孔板，24小時后，加入用二曱基亞砜配制(1(T2M)、生理鹽水稀釋的化合物，使培養(yǎng)基中各化合物的終濃度為l(T4、l(T5、l(T6、10:1(T8M，作用72小時。棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細胞。用磺酰羅丹明B(SulforhodamineB，SRB)溶液染色。洗去未結合SRB，Tris溶解與蛋白結合的SRB，用酶標儀在560nm波長下測定OD值。按下列公式計算細胞生長抑制率抑制率=(OD值對照孔-OD值給藥孔)/OD值對照孔xlOOQ/。。結果判定標準無效1(T5M<50%;有效10-5M250%。根據(jù)各濃度的抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度IC50。結果在本發(fā)明的9個化合物中，5個化合物LLDT-67、LLDT-68、LLDT-69、LLDT-70、LLDT-76劑量依賴性地抑制體外培養(yǎng)的人乳腺癌MDA-MB-468腫瘤細胞的生長，顯示其具有有效的體外抗腫瘤作用。具體結果見表2。表2.化合物對人乳腺癌MDA-MB-468細胞的體外增殖抑制作用樣品MDA-MB-468評價ic50編號10-4M10-5M1(T6M10'7M10-8M(MM)IXDT-294.893.693.093.131.5有效0.012IXDT-6260.03.2000無效IXDT-6794.894,092.925.07.0有效0.176IXDT-6895.8卯.825.717,717.6有效2.369LLDT-6994.193.911.01.61,5有效1.918IXDT-7094.392.344.06.28.0有效1.138IXDT-7692.991.890.717.94.7有效0.207IXDT-7770,74.10.400.2無效LXDT-7891.746.84.20,61.8無效IXDT-7973.424.51.82.41.3無效實驗實施例3本發(fā)明的9個化合物對體外培養(yǎng)的人前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用。方法人前列腺癌PC-3細胞用含10%胎牛血清的F-12培養(yǎng)基(Gibco，美國)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C、5%C02。月中瘤細胞0.7xl0V孔接種于96-孔板，24小時后，加入用二曱基亞砜配制(1(T2M)、生理鹽水稀釋的化合物，使培養(yǎng)基中各化合物的終濃度為l(T4、io-5、l(T6、io-7、1CT8M，作用72小時。棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細胞。用磺酰羅丹明B(SulforhodamineB,SRB)溶液染色。洗去未結合SRB，Tris溶解與蛋白結合的SRB,用酶標儀在560nm波長下測定OD值。最后用以下列公式計算細胞生長抑制率抑制率=(OD值對照孔-OD值給藥孔)/OD值對照孔x100。/。。結果判定標準無效1(T5M<50%;有效10-5M》50%。根據(jù)各濃度的抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度ICso。結果在本發(fā)明的9個化合物中，6個化合物LLDT-67、LLDT-68、LLDT-69、LLDT-70、LLDT-76、LLDT-78劑量依賴性地抑制體外培養(yǎng)的人前列腺癌PC-3腫瘤細胞的生長，顯示其具有有效的體外抗腫瘤作用。具體結果見表3。表3.化合物對人前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用樣品PC-3IC50-評價編號1(T4M1(T5M10-6M10.7M10-8M(fiM)IXDT-270.368.966.567.113.5有效0.022IXDT-6238.96,1004.6無效IXDT-6769.667.166.319.70有效0.266IXDT-6867,755,74.900有效7.340IXDT-6969,367.715.400有效2.701IXDT-7069.763.036.000.1有效1.803LLDT-7669.963,460.414.30有效0.472IXDT-7760.316.83.84.35,3無效20.013IXDT-7870.857.99.500有效6.515IXDT-7953.818.6004.1無效13.934實驗實施例4LLDT-67對人腫瘤細胞的體外增殖抑制作用方法SRB法，MTT法RPMI1640、DMEM、F12或5A培養(yǎng)基(Gibco)，內含10%胎牛血清，根據(jù)腫瘤細胞生長需要加以選擇，對腫瘤細胞進行培養(yǎng)；培養(yǎng)條件為37°C、5%C02。按照0.4-1.5x104細胞/孔的數(shù)目接種肺瘤細胞于96-孔板，24小時后，加入用二曱基亞砜配制、生理鹽水稀釋的LLDT-67,使培養(yǎng)基中LLDT-67的終濃度為0.008-40(iM;培養(yǎng)基中二曱基亞石風的終濃度不超過0.1%。LLDT-67處理72小時。SRB法貼壁細胞采用SRB法。藥物作用72小時后棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細胞。用磺酰羅丹明B(SulforhodamineB，SRB)溶液染色。洗去未結合SRB，用Tris溶解與蛋白結合的SRB，用酶標儀在560nm波長下測定OD值。MTT法懸浮細胞采用四氮唑鹽(MTT)還原法。藥物作用72小時后加MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，加入三聯(lián)液(10%SDS-5%異丁醇-0.01MHC1)，C02培養(yǎng)箱中過夜。用酶標儀在570nm波長下測定OD值。采用下列公式計算細胞增殖生長抑制率抑制率=(OD值對照孔—OD值給藥孔)/OD值對照孔x100%根據(jù)各濃度的抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度ICso。結果LLDT-67劑量依賴性地抑制多種體外培養(yǎng)人腫瘤細胞的增值生長，ICso在0.14|LiM-5.99jaM之間，有很強的體外抗腫瘤活性(表4)。表4.LLDT-67對人腫瘤細胞的體外增殖抑制作用細胞名稱腫瘤類型ic50(.Molt畫4T-'淋巴'1"生人白血病細J包才朱0.25HL-60急性粒細胞人白血病細胞才朱0.27A549肺癌0.70SGC畫7麵胃癌0.18MKN-28胃癌5.63MKN-45胃癌5.99Bel-7402肝癌0.29SMMC-7721肝癌0.33786-0腎癌0.39HCT-116結腸癌0.22<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>實驗實施例5LLDT-67對人腫瘤耐藥細胞的體外增殖抑制作用方法SRB法，MTT法用含10%胎牛血清的RPMI1640或DMEM培養(yǎng)基(Gibco)培養(yǎng)多藥耐藥細胞及其親本林腫瘤細胞；培養(yǎng)條件為37°C、5%C02。MCF-7、MCF-7/ADR細胞的培養(yǎng)液中除RPMI1640培養(yǎng)液外，還含1mM丙酮酸鈉和0.01mg/ml牛胰島素。耐藥細胞林在培養(yǎng)液中加入2阿霉素(K562/A02、MCF-7/ADR細胞培液)或1的長春新堿(KB/VCR細胞培液)維持耐藥，實驗前一周停藥。按照0.6-1.5xl04田胞/孔的數(shù)目接種腫瘤細胞于96-孔板，24小時后，加入用二曱基亞砜配制、生理鹽水稀釋的LLDT-67、阿霉素、長春新石咸。培養(yǎng)基中LLDT-67的終濃度為0.008|aM-40|iM,阿霉素及長春新堿的終濃度0.005-400pM。培養(yǎng)基中二曱基亞砜的終濃度不超過0.1%。藥物作用細胞72小時。貼壁性細胞采用SRB法。藥物作用72小時后棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細胞，SRB溶液染色，然后洗去未結合SRB，Tris溶解與蛋白結合的SRB，用酶標儀在560nm波長下測定OD值。懸浮性細胞采用MTT法。藥物作用72小時后加入MTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時，加入三聯(lián)液(10%SDS-5%異丁醇-0.01MHC1)，0)2培養(yǎng)箱中過夜。用酶標儀在570nm波長下測定OD值。采用下列公式計算細胞增殖生長抑制率抑制率=(OD值對照孔-OD值給藥孔)/OD值對照孔x100%。根據(jù)各濃度抑制率，采用Logit法計算半數(shù)抑制濃度IC50。結果LLDT-67對耐藥細胞顯示出和其相應親本細胞相近的細胞增殖生長抑制作用，有體外抗多藥耐藥作用，可能對耐藥腫瘤的治療有效(表表5.LLDT-67對人肺瘤多藥耐藥細胞的體外增殖抑制作用細胞名稱腫瘤類型IXDT-67AdrVCRRFIC50(,RFIC50(,RFK562白血病細月包阿霉素敏感林0.561.090.6183.46NTNTK562/A02白血病細l包阿霉素耐藥抹0.8058.74NT48<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>注NT,nottested,未檢測；RF,ResistanceFactor,耐藥因子，評價化合物抗耐藥作用的指標，計算公式為RF=IC5o(耐藥細胞林)/ICso(敏感親本細胞抹)。實驗實施例6LLDT-67對人卵巢癌細胞SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人卵巢癌SK-OV-3細胞來自上海胂瘤醫(yī)院；BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree，無特定病原體級)]，雌性，體重18土2g,由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。SK-OV-3細胞5xl0"只接種于棵小鼠右側腋窩皮下，形成移植瘤后再在棵小鼠體內傳2代后使用。取生長旺盛的瘤組織，在無菌條件下，用剪刀剪成lmn^左右的小塊，用套管針接種于棵小鼠左側腋窩皮下，待胂瘤生長至100-200mm3左右，將動物隨機分組(d0)。LLDT-67按1.0、2.0、4.0mg/kg，口服給藥，每天1次，連續(xù)21d。陽性對照絲裂霉素(MMC)5mg/kg,尾靜脈注射，于第1天給藥1次。給藥過程中，每周兩次稱鼠重，測量瘤體積，腫瘤體積(tumorvolume，TV)=l/2xaxb2(a、b分別表示長、寬)。根據(jù)測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume,RTV)，RTV=Vdt/Vd0(Vd0為d0天測量時胂瘤體積，Vdt為給藥dt天測量時腫瘤體積)?？鼓[瘤活性的評價指標為相對腫瘤體積比T/C(%),T/C(%)=TRTV/CRTVxl00%。結果判定標準T/C(%)<40%，有效；T/C(°/。)^40%，無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物的毒性情況。結果LLDT-67在1.0、2.0、4.0mg/kg劑量時T/C(%)分別為50.2%、12.5%、2.6%，劑量依賴性地抑制人卯巢癌SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤生長；另外，在所用劑量及給藥方式時，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用。(見表6、圖1和2)。表6.LLDT-67對人卵巢癌細胞SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用劑量、動物數(shù)體重(g)TV(mm3)T/C組別-RTVP值給藥方式開始最后開始最后dod2i(%)溶劑0.4ml/只P.o121219.818.6142137010對照l-7/3w±44±640±4.9MMC5mg/kg,i.v6620.319.21376424.846.9<0.05dl/3w±29±165±1.4LXDT-671mg/kg,P.o6620.317.31406965.150.2<0.0550<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>實驗實施例7LLDT-67對人前列腺癌細胞PC-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人前列腺癌PC-3細胞來自日本，BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree,無特定病原體級)],雄性，體重20±2g,由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。將體外生長旺盛的人前列腺癌PC-3細胞消化，計數(shù)，按lxlO"只接種于棵小鼠腋下，待肺瘤生長至100-150mn^左右，將動物隨才幾分組(dO)。LLDT-67按0.5、1.0、2.0mg/kg,口月良給藥，每天1次，連續(xù)25d。陽性對照絲裂霉素(MMC)5mg/kg，尾靜脈注射，于第1天給藥1次。給藥過程中，每周兩次稱鼠重，測量瘤體積，肝瘤體積(tumorvolume,TV)=l/2xaxb2(a、b分別表示長、寬)。根據(jù)測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume,RTV),RTV=Vdt/Vd0(Vd0為d0天測量時腫瘤體積，Vdt為給藥dt天測量時的腫瘤體積)?？鼓[瘤活性的評價指標為相對腫瘤體積比T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTVxl00%。結果判定標準T/C(%)<40%,有效；T/C(%)^40%,無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物的毒性情況。結果LLDT-672.0mg/kg時，T/C(%)為1.630/o，能夠顯著抑制人前列腺癌PC-3棵小鼠移皮下移植瘤的生長，抑制率高達98.37%,顯示出非常強的抗腫瘤作用；另外，在所用劑量及給藥方式下，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用。(見表7、圖3和4)。表7.LLDT-67對人前列腺癌細胞PC-3棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用組別劑量、給藥方式動物數(shù)體重(g)TV(mm勺RTV開始最后開始最后dod21溶劑0.4ml/只，p.o6621.518.0996216.5對照1-7x3.5w±20±170±2.3MMC5mg/kg,i.v6620.518.8983373.6dlx3.5w±25±105±1.5LLDT-672mg/kg,p.o6622.521.89910.130.111-7x3.5w±30±6.9±0.06IXDT-671mg/kg,p.o6621.719.0984114.3l-7x3.5w±31±213±2.2LXDT-670.5mg/kg,p.o6622.219.0967418.8l-7x3.5w±47±147±4.3T/C(%)p值<0.0555.6.63<0.0167.0>0.05134.9>0.05實驗實施例8LLDT-67對人前列腺癌細胞DU-145棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人前列腺癌DU-145細胞來自美國ATCC(AmericanTypeCultureCollection);BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree，無特定病原體級)]，雄性，體重20±2g，由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。處死荷瘤小鼠，解剖取出皮下腫瘤組織，用剪刀剪成lmn^左右的小塊，用套管針接種于小鼠左側腋窩皮下，待肺瘤生長至100-200mm3左右，將動物隨機分組(dO)。LLDT-67按0.5、1.0、2.0mg/kg,口服給藥，每天1次，每周5天，連續(xù)給藥4周；陽性對照藥多西他賽10mg/kg，尾靜脈注射，分別于第1天、第7天給藥2次。給藥過程中，每周2次稱鼠重，測量瘤體積，腫瘤體積(tumorvolume,TV)=l/2xaxb2(a、b分別表示長、寬)。根據(jù)測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume,RTV),RTV=Vdt/Vd0(Vd0為do天測量時肺瘤體積，Vdt為給藥dt天測量時的腫瘤體積)?？鼓[瘤活性的評價指標為相對肺瘤增殖率T/C(%),T/C(%)=TRTV/CRTVxl00%。結果判定標準T/C(%)<40%,有效；T/C(%)$40。/。，無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物的毒性情況。結果LLDT-671.0、2.0mg/kg給藥時，其T/C(%)分別為56.4%、50.4%，顯示一定程度地抑制人前列腺癌DU-145棵小鼠皮下移植瘤生長作用；另外，在所用劑量及給藥方式下，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用。(見表8、圖5和6)。表8.LLDT-67對人前列腺癌細胞DU-145棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用.組別劑量、給藥方式動物數(shù)體重(g)TV(mm3)-RTVT/CP值開始最后幵始最后do(%)溶劑0.4ml/只p.o6622.024.711210987.1對照x4w±16±405±2.6多西他賽10mg/kg，dl、d5x4wi.v6623.224.0108±29340±1003.3±1.047.1<0,05LLDT-672mg/kg,l-5x4wp.o6618.724.7107±16381±147±1.550.4<0.05LLDT-67lmg/kg,l-5x4wp.o6621.323.2109±47414±1054.1±0.956.4<0.05LLDT-670.5mg/kg，l-5><4wp.o6622.726.5110±28701±2666.6±2.792.5>0.05實驗實施例9LLDT-67對人胃癌細胞SGC-7卯1棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人胃癌SGC-7901細胞來自上海市第六人民醫(yī)院；BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree，無特定病原體級)],雌性，體重18±2g，由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。處死荷瘤小鼠，解剖取出皮下腫瘤組織，用剪刀剪成1mm3左右的小塊，54用套管針接種于小鼠左側腋窩皮下，待腫瘤生長至100-200mn^左右，將動物隨機分組(d0)。LLDT-67按1.0、2.0、4.0mg/kg,口服給藥，每天1次，每周5次，連續(xù)3周。陽性對照藥絲裂霉素(MMC)5mg/kg,尾靜脈注射，于第1天給藥1次。給藥過程中，每周兩次稱鼠重，觀'J量瘤體積，腫瘤體積(tumorvolume,TV)=l/2xaxb2(a、b分別表示長、寬)。根據(jù)測量的結果計算出相對腫瘤體積(relativetumorvolume,RTV)，RTV=Vdt/Vd0(Vd0為d0天測量時腫瘤體積，Vdt為給藥dt天測量時的腫瘤體積)?？狗瘟龌钚缘脑u價指標為相對腫瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTVxl00%。結果判定標準T/C(°/。)<40%，有效；T/C(%)240%，無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物的毒性情況。結果LLDT-674.0mg/kg給藥時，其T/C(%)為35.0%，能夠抑制人胃癌SGC-7901棵小鼠皮下移植瘤的生長；另外，在所用劑量及給藥方式下，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用(見表9、圖7和8)。表9.LLDT-67對人胃癌細胞SGC-7901棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用動物數(shù)體重(g)TV(mm3)劑量、-T/C組別開最開最dod21RTVP值給藥方式(％)始后始后溶劑0.4ml/只po121218.722.5153164311.155對照l-5/3w±47±689±4.7MMC5mg/kg,iv6618.520.51573642.321.0<0.05dl/4.5w±12±192±1.2IXDT-674mg/kg,6620.021.61535473,935.0<0.05l-5/3w7±65±230±1.9LLDT-672mg/kg，PO6618.321.316011777.568.0>0.05l陽5/3w±35土312±1.8LLDT-67lmg/kg,6619.322.8157147310.091.0>0.05l-5/3w±42±411±4.0實驗實施例10LLDT-67對人乳腺癌細胞MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人乳腺癌MDA-MB-468購自美國ATCC(AmericanTypeCultureCollection);BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree，無特定病原體級)]，雌性，體重18±2g，由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。將體外生長旺盛的人乳腺癌MDA-MB-468紳瘤細胞消化，計數(shù)，按lxlO々只接種于棵小鼠腋下，待腫瘤生長至100-150mm3左右，將動物隨機分組(dO)。LLDT-674要1.0、2.0、4,0mg/kg,口服給藥，每天1次，每周5次，連續(xù)2.5周。陽性對照絲裂霉素(MMC)5mg/kg,尾靜脈注射，于第1天給藥1次。給藥過程中，每周兩次稱鼠重，測量瘤體積，腫瘤體積(tumorvolume，TV)=1/2xaxb2(a、b分別表示長、寬)。根據(jù)測量的結果計算出相對腫瘤體積(relative56tumorvolume,RTV)，RTV=Vdt/Vd0(Vd0為d0天測量時腫瘤體積，V&為給藥dt天測量時的腫瘤體積)。抗腫瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTVxl00o/o。結果判定標準T/C(%)<40%,有效；T/C(%)^40%，無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物的毒性情結果LLDT-67在1.0、2.0、4.0mg/kg的劑量時對人乳腺癌MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤未顯示出生長抑制作用；另外，在所用劑量及給藥方式下，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用(見表IO、圖9和10)。表10.LLDT-67對人乳腺癌細胞MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用動物數(shù)體重(g)TV(mm.組別劑量、給藥開最開最dod17RTVT/CP值方式始后始后(%)溶劑對0.4ml/PO121219.520,4131±2213±17.1±昭只296484.5l-5/2.5wMMC5mg/kg,iv6619.318.5130±1509±11.9±70.0>0.05l/2.5w193283.8IXDT-674mg/kg,PO6619.819.2134±2663±19.6±115,0>0.05l-5/2.5w221195.6IXDT-672mg/kg,po6619.520.3136±2268±16.8±98.0>0.05l-5/2.5w283362.0IXDT-671mg/kg,po6619.721.0130±2145±17.0±99.0>0.05l-5/2.5w362279.1實驗實施例11LLDT-67對人肝癌細胞SMMC-7721棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用方法采用棵小鼠皮下移植瘤模型人肝癌SMMC-7721細胞源自中國第二軍醫(yī)大學；BALB/C棵小鼠[SPF級(specific-pathogenfree,無特定病原體級)]，雌性，體重18±2g，由中科院上海藥物所提供，合格證編號SCXK(滬)(2004-0002)。處死荷瘤小鼠，解剖取出皮下腫瘤組織，用剪刀剪成lmn^左右的小塊，用套管針接種于小鼠左側腋窩皮下，待腫瘤生長至100-150mn^左右，將動物隨機分組(d0)。LLDT-671.0、2.0、4.0mg/kg,口服給藥，每天1次，每周5d,連續(xù)3周；陽性對照絲裂霉素(MMC)5mg/kg，靜脈注射，于第1天給藥1次。每周2次稱鼠重并測量瘤體積(tumorvolume，TV)，TV=l/2xaxb2，其中a、b分別表示長、寬。根據(jù)測量的結果，計算相對腫瘤體積(relativetumorvolume,RTV),RTV=Vdt/Vd0(Vdo為do天測量時腫瘤體積，V&為給藥dt天測量時的肺瘤體積)。抗肺瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率T/C(%)，T/C(%)=TRTV/CRTVxl00%。結果判定標準T/C(%)<40%，有效；T/C(%)240%，無效。另外，可通過小鼠行為學、二便及體重變化初步判定化合物毒性情況。結果LLDT-67在1.0、2.0、4.0mg/kg的劑量時對人肝癌SMMC-7721棵小鼠皮下移植瘤無生長抑制作用；另外，在所用劑量及給藥方式下，LLDT-67對棵小鼠無明顯的毒副作用(見表ll、圖11和12)。表11:LLDT-67對人肝癌細胞SMMC-7721棵小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用動物數(shù)體重(g)TV(mm3)劑量、給藥方T/C組別開最開最RTVP值式dod2i(%)壬臺后始后0.4ml/只115±1158±10,7±溶劑對照po121220.925.8l隱5/3w312563.15g/kg，111±472±4.2±MMCiv6621.823.739.0<0.05dl/3w141891.44mg/kg,111±1166±10.4±IXDT-67po6620.521.898.0>0.05l-5/3w194133.02mg/kg,110±1566±14.6±LLDT-67po6618.325.7137.0>0.05卜5/3w133805.2lmg/kg，114±1641±15.1±7IXDT-676620.325.8142.0>0.05l-5/3w20566.1實驗實施例12LLDT-67的初步藥物代謝動力學研究方法采用雄性Sprague-Dawley大鼠(體重約250g)開展藥代動力學實驗，其中3只大鼠灌胃口月良LLDT-67(4mg/kg),另外3只大鼠靜注(bolusdosing)LLDT-67(2mg/kg)。給藥后才安0、5、15、30min、1、1.5、2、5、及8h的時間點采血樣，肝素抗凝得血漿樣品，應用液相-質譜(LC/MS)聯(lián)用技術測定血漿中的LLDT-67的濃度，采用非房室模型方法計算相關藥動學參數(shù)(所得參數(shù)見表12)。59表12大鼠給藥LLDT-67后的藥動學參數(shù)(用非房室模型分析)<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>*Cmax:測得的最大血藥濃度；rpeak:達峰時間；^t/C0-llh:血藥濃度時間曲線下面積(從0h到llh);T!/2:消除半衰期；Mir:平均滯留時間；C丄清除率；Fss:穩(wěn)態(tài)時表觀分布容積；F:口服生物利用度。結果大鼠上進行的藥代動力學研究結果表明，口服給藥(4mg/kg)后，LLDT-67在胃腸道中吸收較快，15min達峰。其平均總暴露水平^t/C為59.3ng'h/mL。LLDT-67的大鼠平均口服生物利用度約為7%。靜脈注射給藥后，LLDT-67在大鼠的穩(wěn)態(tài)表觀分布體積為2.14-2.60L/kg;血漿總清除率為4.42~4.89L/h/kg。靜脈注射給藥后，LLDT-67在大鼠體內的消除半衰期約為0.5h。LLDT-67可進行口服給藥或靜注給藥。實驗實施例13LLDT-67初步急性毒性研究方法ICR小鼠，體重18-20克，購自中英合資西普爾-必凱實驗動物有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK(滬)2003-0002。LLDT-67混懸于0.2%HPMC中(續(xù)碾磨)。實'險動物分為10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg三個給藥組，每組4只，雌、雄各半。單次灌胃給藥后觀察死亡率及毒性情況，共觀察14天。結果10mg/kg和20mg/kg的給藥組，未見小鼠死亡，30mg/kg的給藥組，死亡率為25%(1/4,第5天死亡)。在本實—驗條件下，LLDT-670%死亡劑量(LDo)為20mg/kg。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的雷公藤二萜類內酯衍生物，特別是(148)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(LLDT-67)，明顯抑制多種體外培養(yǎng)的肺瘤細胞的生長，抑制作用具有明顯的劑量依賴性，其ICso在0.10-5.99iiM之間，顯示LLDT-67具有很強的體外抗胂瘤活性。進一步的體內藥效實驗證明LLDT-67對于人前列腺癌PC-3棵小鼠皮下移植瘤和人卵巢癌SK-OV-3棵小鼠皮下移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，并能一定程度地抑制人前列腺癌DU-145棵小鼠皮下移植瘤生長，對人胃癌SGC-7901棵小鼠皮下移植瘤的生長則僅在高濃度(4mg/kg)下有較弱的抑制作用，而對人肝癌SMMC7721棵小鼠皮下移植瘤和人乳腺癌MDA-MB-468棵小鼠皮下移植瘤的生長則基本無抑制作用。上述體內藥效實驗中均未表現(xiàn)出明顯的毒副反應。表明LLDT-67能夠特異性地抑制生殖系統(tǒng)腫瘤的生長。對LLDT-67的藥物代謝動力學研究表明其可進行口服或靜脈注射給藥。初步急性毒性實驗表明LLDT-67(LDo約為20mg/kg)毒性遠遠低于其先導化和物LLDT-2(LD5o為0.5mg/kg左右)。所有的實驗結果均表明LLDT-67在治療腫瘤疾病方面具有高效、低毒、特異性強的特點，具有良好的用于治療包括前列腺癌、人卵巢癌的等生殖系統(tǒng)腫瘤疾病的應用前景。權利要求1、通式(1)所示的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物其中，C5和C6以碳碳單鍵或碳碳雙鍵相連；當C5和C6以碳碳單鍵相連時，P和Q分別表示連接在C5位和C6位上的氫、氧、羥基、鹵素、巰基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基或C1～C6烷巰基；當C5和C6以碳碳雙鍵相連時，此時C5除與C4、C6以及C10連接外無其他取代基團，P不代表任何取代基團，C6位上取代基Q則僅代表氫原子；C14XY表示C14位處的結構是C14(OH)CH2OH、或W和Z分別表示連接在C12位和C13位上的氧、羥基、鹵素、巰基、C1～C6烷氧基、C1～C6烷胺基或C1～C6烷巰基；在上式中，連接X、Y、Z、W、P和Q的代表或者2、如權利要求1所述的雷公藤二辟類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(2)所示結構，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，C4XY為(14S)-14，21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C,2和C,3位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫。3、如權利要求1所述的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(3)所示結構，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，Cl4XY為(14S)-14，21-環(huán)氧結構，W為P(R)構型的卣素，Z為a(R)構型的羥基，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫。4、如權利要求1所述的雷公藤二辟類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(4)所示結構，(4)其中，C14XY為(14S)-14,21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C12和C,3位的a(S)構型的氧，Cs和C6以碳碳雙4建相連，Q為氬。5、如權利要求1所述的雷公藤二薛類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(5)所示結構，(5)其中，C,4XY為(14R)-14,21-環(huán)氧結構，W與Z為分別連接在C,2和C,3位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氫。6、如權利要求1所述的雷公藤二碎類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其具有以下通式(6)所示結構，(6)其中，C14XY為c14(oh)ch2oh、c14os(o)och4c14oso2och2，Cm位的構型為(R)構型或(S)構型，W與Z為分別連接在C,2和Cu位的a(S)構型的氧，P為a(R)構型的氫或羥基，Q為氬。7、如權利要求1所述的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其為選自由以下化合物組成的組中的一個(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(14R)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(5R，14S)-5a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(12R,13R，14S)-12p-氯-13a-羥基-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(14S)-A"-脫氫-14-脫羥基-14，21-環(huán)氧雷公藤內酯醇(14S)-1鄰-羥曱基表雷公藤內酯醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(14S，硫S)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(14S,硫R)-14a，21-乙二醇環(huán)亞硫酸酯雷公藤內酯醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(14S)-14a，21-乙二醇環(huán)硫酸酯雷公藤內酯醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>8、如權利要求1所述的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物，其特征在于，其為(14S)-14-脫羥基-14,21-環(huán)氧雷公藤內酯醇。9、一種藥物組合物，其特征在于，含有治療有效劑量的權利要求1所述的雷公藤二薛類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物以及常規(guī)的藥學輔料。10、如權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述雷公藤內酯醇衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物的含量為0.001~99.9wt%。11、如權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物進一步包括一種或多種選自影響腫瘤細胞核酸生物合成的藥物；直接破壞腫瘤細胞DNA阻止其復制的藥物；嵌入腫瘤細胞DNA中干擾轉錄過程的藥物；干擾有絲分裂影響腫瘤細胞蛋白質合成的藥物或通過抑制環(huán)氧化酶產(chǎn)生抗腫瘤作用的藥物的抗腫瘤藥物。12、如權利要求911所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物被制成經(jīng)胃腸道給藥的劑型或非經(jīng)胃腸道給藥劑型。13、權利要求9~11任一項所述的藥物組合物在制備用于治療人體生殖系統(tǒng)腫瘤的藥物中的應用。14、如權利要求13所述的應用，其特征在于，所述人體生殖系統(tǒng)腫瘤為前列腺癌或卵巢癌。15、如權利要求13所述的應用，其特征在于，所述藥物組合物中雷公藤內酯醇衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽以0.001~10mg/kg的量被使用。全文摘要本發(fā)明涉及通式(1)所示雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽及水合物，本發(fā)明還提供了一種包括治療有效劑量的通式(1)所示的雷公藤二萜類內酯衍生物、其光學異構體及其藥學上可接受的鹽和水合物以及常規(guī)的藥學輔料的藥物組合物及其劑型，本發(fā)明還涉及所述藥物組合物的應用。本發(fā)明篩選了高效、低毒的雷公藤二萜類內酯衍生物，使其能夠用于制備治療腫瘤疾病的藥物。本發(fā)明的藥物組合物能夠制成有利于溫血動物的組織、器官吸收利用的劑型，其在治療腫瘤等增生性疾病方面具有良好的應用前景。文檔編號C07J73/00GK101481401SQ20081016730公開日2009年7月15日申請日期2008年10月10日優(yōu)先權日2008年4月10日發(fā)明者鍵丁,進任,馮慧瑾,川李,征李,李援朝,林莉萍,勇甘,繆澤鴻申請人:中國科學院上海藥物研究所