專利名稱：木犀草素及其衍生物的鉑類配合物、制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一類木犀草素及其衍生物的鉑類配合物、制備方法 及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥(惡性腫瘤〉是目前威脅人類生命的最主要的疾病之一。近年來腫瘤的發(fā)病率和死 亡率急劇上升，世界衛(wèi)生組織曾披露的腫瘤發(fā)展趨勢表明，從1996年以來全球每年新確診的 腫瘤患者均在1030萬以上，到1999年底全球腫瘤患者總數(shù)己逾4000萬人，全世界每年約有 700萬人死于各種腫瘤，2001年世界腫瘤發(fā)病率和死亡率比1990年上升了 22%，是僅次于心 血管疾病的第2大死因。通過我國衛(wèi)生部較為系統(tǒng)的國家衛(wèi)生服務(wù)調(diào)查分析報告結(jié)果表明， 我國全國腫瘤患數(shù)量達到286.5萬人左右，同時每年約有212.7萬名新增腫瘤患者，全國腫 瘤死亡人數(shù)每年約有154萬人左右。
目前臨床上抗腫瘤藥物的主要分為烷化劑、抗代謝藥、金屬鉑類、植物生物堿和其它天 然藥、細(xì)胞毒素類抗生素等。鉑類抗腫瘤藥是一類最重要的抗腫瘤藥物，是20世紀(jì)60年代 開發(fā)的新型抗腫瘤藥。與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的重要區(qū)別是，其作用機制獨特，抗腫 瘤的選擇性好。其主要作用靶點為DNA，作用于DNA鏈間及鏈內(nèi)交鏈，形成DDP DNA復(fù)合物， 干擾DNA復(fù)制，或與核蛋白及胞漿蛋白結(jié)合，屬周期非特異性藥。現(xiàn)已相繼成功開發(fā)了順式-二氯二氨合鉑即順鉑(Cisplatin)、順式-1，卜環(huán)丁烷二羧酸二氨鉑即卡鉑(Carboplatin)、 (Z)—二氨(羥基乙酸-O" -02)鉑即奈達鉑(Nedaplatin)、 1R—反式一 (1， 2 —環(huán)已二胺一N， N')[草酸(Z—) —0， 0']合鉑即奧沙利鉑(Oxaliplatin)、順式-[(4R， 5R) -4， 5-雙(氨甲基)-2-異丙基l， 3-二惡垸](雙齒)鉑即舒鉑(Su叩la)和l，2二氨甲基-環(huán)丁垸 -乳酸合鉑即洛鉑(Lobaplatin)等，鉑類抗腫瘤藥具有抗腫瘤譜廣、作用強等特點，而且鉑 類抗腫瘤藥還與其它抗腫瘤藥物有很好的協(xié)同作用，不但提高了對已有腫瘤的抑制率，而且 擴大了抗腫瘤譜，由此鞏固了鉑類抗腫瘤藥在臨床治療中的地位。1995年WHO對上百種抗腫 瘤藥物進行排名，順鉑在療效及市場等方面的綜合評價位于第二位。有統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，我國 所有的化療方案中有70% 80%以鉑為主或有鉑類藥物參加配伍。
但目前鉑類抗腫瘤藥物存在毒性較大，如骨髓抑制、腎臟毒性、神經(jīng)損傷等，溶解度不 好、抗癌譜相對較窄、還有耐藥性等缺點。因此，設(shè)計和合成新型的鉑類抗腫瘤藥物仍是現(xiàn)在抗癌藥研究的主要方向之一 (M A Jakuper，M.Galanski,B.K.Keppler. Tumour-inhibiting platinum complexes—state of art and future perspectives. Rev Physiol Biochem Pharmacol, 2003:146:1-53)。
中藥中有很多具有抗腫瘤、解毒作用的成分。近兩年為減少鉑類化療藥物的毒副作用、 提高療效、減少腫瘤復(fù)發(fā)和避免抗藥性的產(chǎn)生，把中藥中的有效成分與鉑結(jié)合尋找新藥是一 個新的開發(fā)方向，這類化合物的水溶性好、毒性低、抗腫瘤作用強的特點，可有效解決上述 問題。如中藥斑蝥的有效成分斑蝥素與鉑配合物的研究(ZL 97102797. 8、 200510085430.9)， 經(jīng)過臨床前的動物試驗研究，顯示了較好的抗腫瘤效果和較低的副作用。另外，還有使用中 藥有效成分與鉑類聯(lián)合用藥的研究，如將木犀草素與鉑類藥物進行聯(lián)合應(yīng)用(專利申請?zhí)?200610074209.8)，具有協(xié)同抗腫瘤作用，且減少兩者用量，減低其毒副作用。
木犀草素(luteolin)屬于黃酮類化合物，主要存在于木犀草、金銀花、白毛夏枯草、 辣椒等天然藥物、蔬菜和果實中。其化學(xué)名為3'， 4'， 5, 7—四羥黃酮，分子式為d晶。0e， 分子量為286.2，結(jié)構(gòu)式如下
<formula>formula see original document page 6</formula>
文獻報道木犀草素具有抗菌、抗炎、保護心血管、解痙、祛痰、抑制酶活性、免疫調(diào)節(jié)、 抗氧化、抗輻射、利尿、利膽等藥理作用。目前研究證實木犀草素對多種實體瘤、腹水癌和 白血病細(xì)胞都有顯著抑制作用，既可以直接專用于腫瘤細(xì)胞干擾細(xì)胞代謝，抑制細(xì)胞生長， 又可以增強肌體免疫功能，發(fā)揮抗腫瘤作用(李星霞。木犀草素的藥理活性研究。中國藥房， 2007; 18: 1421 — 1424)。利用這些作用與鉑類藥物聯(lián)合使用或形成配合物使用將得到更好的 治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類木犀草素及其衍生物的鉑類配合物，其結(jié)構(gòu)式為:
<formula>formula see original document page 6</formula>或<formula>formula see original document page 7</formula>
(II)
式(n)中R可以為H, "—V^ K，R3NR4R5，但不限于這些取代基。
其中R,可以為(CH2) n，n=l-4; R2可以為H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基， 叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基，但不限于這些取代基。
R3= (CH2) ，n=l-4; R4和R產(chǎn)H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基， 但不限于這些取代基。
At和A2可以是H、 Na+、 K+、 NH4+，優(yōu)選H、 Na+， A!和&可以相同或不同。
當(dāng)R為H時，且Ai和A2均為H，結(jié)構(gòu)式(II)即為式(I); A!和A2為Na+、 K+、 NH/時， 式(n)即為式(I )的鈉鹽、鉀鹽或銨鹽。
當(dāng)R為哌嗪衍生物"—、y "時，Ri可以為(CH2) n，n=l-4，優(yōu)選1-2; !^可以為H，甲 基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基，優(yōu)選甲基、 乙基、異丙基、羥乙基，但不限于這些取代基。A,和A2可以為H、 Na+、 K+、 NH4+，優(yōu)選H、 Na+， A^B A2可以相同或不同。
當(dāng)R為R3歐時，&可以為(CH2) ,n=l-4，優(yōu)選l-2; 1 4和Rs可以為H,甲基，乙基， 丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，但不限于這些取代基。&和Rs可以相同或不同，優(yōu) 選H、甲基、乙基、丙基。A,和A2可以為H、 Na+、 K+、 NH/，優(yōu)選H、 Na+， Ai和A2可以相同或 不同。
本發(fā)明另一目的為提供一種前述化合物的制備方法。 一、式(I)的制備方法如下 (1)先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑，具體合成路徑及化學(xué)反應(yīng)式如下-
K2(PtCl4)——^——^ K2(PtI4)K2(PtI4)-^~^ Pt(NH3)2I2
(2)再將合成的二碘二氨合鉑與木犀草素(d孔。06)合成木犀草素合氨絡(luò)鉑，具體合成路
徑及化學(xué)反應(yīng)式如下
AgN03
Pt(NH3)2I2-^ [Pt(NH3)2(H20)2](N03)2(N03)2 + C15H10O6 -^ C15H1406N2Pt
二碘二氨合鉑制備的具體步驟
先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑取含有20g氯亞鉑酸鉀(K2(PtCl4), 48mmol) 水溶液，與4—10倍量的KI飽和溶液混合，水浴加熱，反應(yīng)溶液成黑色，加入2-4倍量的氨水 (1: 1)，形成深黑黃色結(jié)晶，溶液為無色溶液，過濾，用冷水洗滌，再用冰冷的乙醇和乙醚 洗滌，空氣千燥，得到二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2)。
KI飽和溶液用量優(yōu)選4-6倍量。 木犀草素合氨絡(luò)鉑制備的具體步驟
將合成的二碘二氨合鉑與木犀草素合成木犀草素合氨絡(luò)鉑依次加入12. 5g二碘二氨合鉑 (Pt(NH3)2I2, 26ramo1)、 2—4倍量AgN03溶液，過濾除去AgI。向濾液中加入卜l. 2倍量木犀草 素，避光、加熱攪拌20-50小時，反應(yīng)混合物過濾后，得溶液，減壓濃縮析出固體，過濾得到 棕黑色固體，少量水洗，避光空氣干燥，得到木犀草素合氨絡(luò)鉑。
二、式(II)的制備方法如下
(一) R二H時
取制備式(I)所得木犀草素鉑配合物適量，加入2-6倍量氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液 攪拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，靜置，過濾并用乙醇洗滌，得木犀草素合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀
—/"X —r，
(二) R二為""時
① 取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙猓Q取4-10倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-40°C 水浴下反應(yīng)1-4小時，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2-3倍量氨水(1: 1)，繼續(xù)反應(yīng) 2-4小時，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，干燥得黃色粉末，即二碘二氨合鉑〔Pt(NH丄IJ。
② 取步驟①制得的二碘二氨合鉑〔Pt(NHj山，〕適量、加入2 — 4倍量AgN03溶液，于 20-4(TC下反應(yīng)24-36小時。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt (NH3)2(H20)2](點)2無色透 明濾液。
◎取木犀草素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入1-1.2倍摩爾量的酸水溶液和哌嗪衍生物，20-4(TC下反應(yīng)5-10小時，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到木犀草素與哌 嗪衍生物的縮合物。
取步驟②制備的[Pt(朋3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的 縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-8(TC反應(yīng)24-48小時，再加入2-6 倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得木犀草素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽。
將步驟④制備的木犀草素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的 鹽酸溶液，攪拌、靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得產(chǎn)物哌嗪基衍生物 木犀草素合氨絡(luò)鉑。
(三)當(dāng)R為R肌Rs時:
① 取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取8-14倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-40°C 下反應(yīng)1-4小時，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2 — 4倍量氨水(1: 1),繼續(xù)反應(yīng)2-4 小時，過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2)。
② 取步驟①制得的二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2，〕適量、加入2—4倍量AgN03溶液，于 20-4(TC下反應(yīng)24-36小時。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt (NH3)2(H20)2] (N0》2無色透 明濾液。
◎取木犀草素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入等摩爾的R3CH0水溶液和R4R5NH， 20-40 "下反應(yīng)5-10小時，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到縮合物。
④ 取步驟②制備的[Pt(NH3)2(H20)J(N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟(D制備的 縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-8(TC反應(yīng)24-48小時，再加入2-6 倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得8—取代胺基垸基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉑 鈉鹽或鉀鹽。
⑤ 將步驟④制備的8 —取代胺基垸基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入 2-4倍量的鹽酸溶液攪拌，靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得8 —取代胺 基垸基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉑。
上述制備方法中提及的用量均為摩爾比。
本發(fā)明目的之三為提供所述鉑類配合物在制備治療癌癥的藥物方面的用途。 本發(fā)明還提供含有本發(fā)明鉑配合物的藥物組合物，本發(fā)明所述鉑配合物還可包括其藥學(xué) 上可接受的鹽，溶劑化物和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物必要時可含有藥物可接受的載體。本發(fā)明的組合物，在制成藥劑時
可以制成任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液 劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑、緩釋制劑、控釋制劑。本發(fā)明的 制劑，優(yōu)選注射劑型，如凍干粉針劑、無菌粉針、小水針、大輸液、注射用乳劑等。
本發(fā)明的藥物組合物，在制成藥物制劑時，可按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備。
本發(fā)明的藥物組合物，在制成藥物制劑時，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，如 黏合劑、填充劑、稀釋劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、濕潤劑和包衣劑等。
適用的填充劑包括纖維素、甘露醇、乳糖和其他類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、 聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑，例如硬脂酸鎂。適宜 的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉。
可通過混合、填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進行反復(fù)混合可使活性物 質(zhì)分布在整個使用大量填充劑的組合物中。
口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、口服液、乳劑、糖漿劑，或者可以 是一種在使用前可用水或其他適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加 劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、硬質(zhì)酸鋁凝膠或 氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們 可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油；防腐劑，例如對羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙 酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的調(diào)味劑和著色劑。
對于注射劑，制備的液體劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可 以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其 裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩 沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍， 并在真空下將水分除去。
本發(fā)明的藥物制劑，在制備成藥劑時可選擇性地加入適合的藥物可接受的載體，所述藥 物可接受的藥物載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、半胱 氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、 EDTA二鈉、EDTA鈣鈉、 一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、 磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、 麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖酐、淀粉、蔗糖、甘露醇、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明 膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、 滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的藥物制劑在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服1一3次，每次可l —3劑。本發(fā)明的藥物組合物，可以是單位劑量形式，在制成藥劑時，單位劑量的藥劑可含有本 發(fā)明的鈾配合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)O. l — 1000mg， 占單位制劑總重量的0.1-99.9%，其余為藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)上可接受的載體以重量 計可以是制劑總重量的0. 1-99. 9%。
本發(fā)明的鉑配合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、和相應(yīng)的結(jié)晶形態(tài)的物質(zhì)可以是 它們的堿金屬、堿土金屬或銨類物質(zhì)的鹽，如果必要，也可以是酸式鹽，如鹽酸、硫酸、磷 酸、硝酸、甲磺酸、苯磺酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、丁二烯酸、乳酸、乳糖酸、富馬酸 等藥學(xué)上常用的酸形成的鹽。溶劑化物可以是水合物，包括一水合物、二水合物、三水合物 等。
本發(fā)明所用原料的純度只要達到化學(xué)純以上即可，來源均可從市場購得。 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)所合成的目標(biāo)配合物體內(nèi)外具有明顯的抑癌作用，活性優(yōu)于現(xiàn)有藥物順鉑， 且毒性降低，可以應(yīng)用其治療癌癥。
具體實施例方式
下面的實施例、試驗例可更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。 (實施例l〕制備二碘二氨合鉑
取氯亞鉑酸鉀20g (48mmo1)加水1000ral在三口燒瓶中攪拌溶解，稱取碘化鉀47g (283ramo1)投入反應(yīng)液中，在氮氣保護、避光室溫反應(yīng)2小時，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。 取16ml濃度為7. 5鵬ol/ml氨水(120mmo1)，繼續(xù)避光室溫反應(yīng)2小時，過濾，并用水(30ml X2次)、乙醇(30mlX2次)、乙醚(30mlX2次)洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑 Pt(NH丄l2共21. 129g，收率93. 4%。 (實施例2) [Pt (NH3) 2 (H20) J (N03) 2
取硝酸銀8. 16g(48mmol)和純凈水240ml投入到500ml茄瓶中攪拌，加入實施例1制備 二碘二氨合鉑共11.592g (24酬o1)，通入氮氣保護、避光、室溫反應(yīng)24小時。濾除碘化銀 沉淀，并用水(20mlX3次)洗滌，得[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液。 (實施例3)制備木犀草素合氨絡(luò)鉑(II)
取實施例1制備的二碘二氨合鉑12. 5g (26rnmo1)，加入9. 3g AgN03 (55鵬o1) AgN(V溶液， 過濾除去AgI。向濾液中加入7.5g (26腿o1)木犀草素，避光60士5。C攪拌35小時，反應(yīng)混 合物經(jīng)硅膠藻土層過濾后，得溶液，減壓濃縮至150ml，過濾得到棕黑色固體，少量水洗， 避光空氣干燥，得到木犀草素合氨絡(luò)鉑10. 9g，收率82%。
11紅外光譜 Max 3424 (NH) ，1651 (C=0) ，549 (Pt-0)
元素分析理論值C(%) 35. 09;H (%) 2. 73;,5. 46 實測值C(%) 35.17;H (%) 2. 66;N(%)5. 53 (實施例4)木犀草素合氨絡(luò)鉑鈉鹽
取實施例3所得木犀草素鉑配合物0. 513g (lramol)，加入3ml 2Mol/L氫氧化鈉溶液攪 拌溶解，繼續(xù)反應(yīng)l小時，加入10ml無水乙醇，析出沉淀，靜置2小時，過濾并用無水乙醇 洗漆3次、乙醚洗滌2次，得木犀草素合氨絡(luò)鉑鈉鹽0.49g，收率為88.3°/0。
紅外光譜 Max : 3429 (NH) ，1657 (C=0) ,558 (Pt-0)
元素分析理論值C(%) 32.32;H (%) 2. 15;N(%)5. 03 實測值C(%) 32. 20;H (%) 2. 27;N(%) 5. 01 (實施例5)制備8-乙基哌嗪亞甲基木犀草素二氨合鉑(II)
取木犀草素12. 2g (42mmol)，室溫下溶解于750ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(45鵬o1) 水溶液，5. 12 g(45mmol)乙基哌嗪，室溫下反應(yīng)5小時，冰浴冷卻至5'C有大量固體生成， 用丙酮重結(jié)晶，得8-乙基哌嗪亞甲基木犀草素10.5g。取8-乙基哌嗪亞甲基木犀草素 10. 4g(25. 2咖o1)，加入200ml0. 5Mol/L氫氧化鈉溶液(100咖ol)攪拌溶解，加入實施例2制 備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液25mmo1，通入氮氣保護、避光、60。C反應(yīng)24小時。 將反應(yīng)液冷卻至5。C，加入105ml 0. 5mol/L鹽酸溶液(52. 5腿ol)攪拌30分鐘，靜置2小時， 有大量沉淀生成，過濾并依次用水(50mlX2次)、乙醇(50mlX2次)、乙醚(50ml X 2次)洗滌， 得產(chǎn)物共7.9g，收率為51.5%。 TR版/cm"
紅外光譜 Max : 3420 (NH) ,1658 (C=0) ，573 (Pt-0) 元素分析理論值C(%) 4L31;H (%) 4. 38;N(%)8. 76 實測值- C(%) 4L44;H (%) 4. 26;N(%)8. 88 (實施例6)制備8-異丙基哌嗪乙基木犀草素二氨合鉑(II)
取木犀草素6. lg (21咖o1)，室溫下溶解于300ml無水乙醇中，攪拌下加入乙醛(25rnrno1) 水溶液，3.2 g(25raraol)異丙基哌嗪，室溫下反應(yīng)6小時，冰浴冷卻至5匸有大量固體生成， 用丙酮重結(jié)晶，得8-異丙基哌嗪乙基木犀草素5.8g。取8-異丙基哌嗪乙基木犀草素5.5 g (12. 5mmo1),加入100ml 0. 5mol/L氫氧化鈉溶液(50ranol)攪拌溶解，加入實施例2制備的 [Pt(NH3)2(H20)J(N03)2無色透明濾液12咖o1，通入氮氣保護、避光、60。C反應(yīng)20小時。將反 應(yīng)液冷卻至5t:，加入55ml0. 5raol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時，有沉淀生成，過 濾并用水(20mlX2次)、乙醇(20mlX2次)、乙醚(20mlX2次)洗滌，得產(chǎn)物共4. 9g，收率為
1261%。
TRKBr /cm-l
紅外光譜 Max 3424 (NH) ，1653 (00) ，559 (Pt-0)
元素分析理論值C(%) 43. 18;H (%) 4. 80;N (%) 8. 40 實測值C(%) 43. 34;H (%) 4. 73;N(%)8. 51 (實施例7)制備8-羥乙基哌嗪亞甲基一木犀草素二氨合鉑(II )
取木犀草素4. lg (14tnmo1)，室溫下溶解于260ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(15mmol) 水溶液和羥乙基哌嗉(15mmol)，室溫下反應(yīng)4小時，冰浴冷卻至5'C有固體生成，用丙酮重 結(jié)晶，得8-羥乙基哌嗪亞甲基木犀草素3.9g。取8-羥乙基哌嗪亞甲基木犀草素3.4g (7. 9ramo1)，加入60ml 0. 5mol/L氫氧化鈉溶液(30mmo1)攪拌溶解，加入實施例2制備的 [Pt(NH3)2(H20)2] (N03)2無色透明濾液7.9鵬o1，通入氮氣保護、避光、60。C反應(yīng)15小時。將 反應(yīng)液冷卻至5°C,加入40ml 0.5mol/L鹽酸溶液攪拌20分鐘，靜置2小時，有沉淀生成， 過濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10ml X 2次)洗滌，得產(chǎn)物共2. 8g，收率 為55%。
TRKBr /cm.1
紅外光譜 Max : 3426 (NH) ,1656 (00) ,571 (Pt-0) 元素分析理論值C(%) 40. 31;H (%) 4. 27;N(%)8. 55 實測值C(%) 40. 44;H (%) 4. 15;N(%)8. 51 〔實施例8〕制備8- (N-甲基-N-乙基胺基)亞甲基一木犀草素二氨合鉑(II)
取木犀草素4. 3g (15mrno1)，于室溫下溶解于280ml無水乙醇中，攪拌下加入甲醛(18mmo1) 水溶液和CH3NHCH2CH3 (18匪o1)，室溫下反應(yīng)5小時，冰浴冷卻至5。C有固體生成，用丙酮重 結(jié)晶，得8- (N-甲基-N-乙基胺基)亞甲基一木犀草素4.0g。取8- (N-甲基-N-乙基胺基) 亞甲基一木犀草素3.6克(lO咖ol)，加入70ml0. 5mol/L氫氧化鈉溶液攪拌溶解，加入實施 例2制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液10mmo1，通入氮氣保護、避光、55'C反應(yīng)18 小時。將反應(yīng)液冷卻至5'C,加入45ml0.5mol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時，有沉淀 生成，過濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10ml X 2次)洗滌，得產(chǎn)物共3g， 收率為521
KBr , 一l
紅外光譜 Max : 3428 (NH) ，1657 (OO) ，555 (Pt-0) 元素分析理論值C(%) 39. 04;H (%) 3. 94;N(%)7. 19 實測值C(%) 38. 91;H (%) 4. 07;N(%) 7. 28 (實施例9〕制備8- (N， N-二甲基胺基)乙基一木犀草素二氨合鉑(II)
取木犀草素2.6g (9咖o1)，室溫下溶解于150ml無水乙醇中，攪拌下加入乙醛(lO咖ol)水溶液和CH3NHCH3 (lOmmol)，室溫下反應(yīng)4小時，冰浴冷卻至5'C有固體生成，用丙酮重結(jié) 晶，得8- (N， N-二甲基胺基)乙基一木犀草素2.4g。取8- (N， N-二甲基胺基)乙基一木 犀草素2. 3克(6. 4mmo1)，加入50ml0. 5mol/L氫氧化鈉溶液攪拌溶解，加入實施例2制備的 [Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液6. 5mmo1，通入氮氣保護、避光、65。C反應(yīng)16小時。將 反應(yīng)液冷卻至5'C加入40ml0.5mol/L鹽酸溶液攪拌30分鐘，靜置2小時，有沉淀生成，過 濾并用水(10mlX2次)、乙醇(10mlX2次)、乙醚(10mlX2次)洗滌，得產(chǎn)物共2. ig，收率為 56%。
TRKBr /cm-i
紅外光譜 Max : 3427 (NH) ,1653 (C=0) ，564 (Pt-0) 元素分析理論值C(%) 39. 04;H (%) 3. 94;N(%)7. 19 實測值C(%) 39. 16;H (%) 3. 99;N(%) 7. 07
(試驗例1〕抗肝癌活性研究
取4 6周齡、體重17 20g雄性裸小鼠110只，在右腋窩皮下接種濃度為IX 107ml的 人肝癌細(xì)胞株單細(xì)胞懸液0.2ml，接種24小時后將小鼠隨機分為11組，每組分別靜脈給順 鉬3、 5mg/kg (陽性對照組)、等體積的生理鹽水(陰性對照組)、實施例5化合物組3、 5、 10、 15mg/kg、實施例8化合物組3、 5、 10、 15mg/kg，連續(xù)給藥隔天給藥一次，給藥4次， 均為腹腔注射給藥，10天后取出皮下瘤體稱重，計算抑瘤率。抑瘤率的計算公式
對照組平均瘤重一給藥組平均瘤重 抑瘤率％= 對照組平均瘤重 X100
表1.目標(biāo)化合物抗肝癌活性研究結(jié)果
化合物動物數(shù)量(只)劑量(mg/kg)抑瘤率(％)
順鉑10367. 9
順鉑10570. 5
實施例510372.8
實施例510580. 2
實施例5101084. 7*
實施例5101585. 3*
實施例810371. 9
實施例810574.9
實施例8101078. 5
實施例8101582.7**與順鉑5mg組比較，p<0. 05
注由于溶解度限制，靜脈注射給藥順鉑對裸鼠的最大給藥劑量為5mg/kg。 (試驗例2〕抗卵巢癌活性研究
取體重17 20g、4 6周齡雄性裸小鼠IIO只，在背部皮下近腋窩處接種濃度為1X107ml 的人卵巢癌細(xì)胞株單細(xì)胞懸液0. 2ml， 2周后將小鼠隨機分為11組，每組分別靜脈給順鉑3、 5mg/kg (陽性對照組)、等體積的生理鹽水(陰性對照組)、實施例4化合物組3、 5、 10、 15 mg/kg、實施例8化合物組3、 5、 10、 15 tng/kg,隔2天給藥1次，給藥4次，均為腹腔注 射給藥，接種后30天試驗結(jié)束，取出皮下瘤體稱重，計算抑瘤率。
表2.目標(biāo)化合物抗卵巢癌活性研究結(jié)果
化合物動物數(shù)量(只)劑量(mg/kg)抑瘤率(％)
順鉑10336. 4
順鉑10540. 3
實施例510339. 2
實施例510544. 6
實施例5101050. 8*
實施例5101552. 5*
實施例810339. 4
實施例810541. 3
實施例8101043. 7
實施例8101545. 6
*與順鉑5mg組比較，p<0.05
(試驗例3〕毒性初步研究
取體重120 160g、 6周齡大鼠100只，隨機分為10組，每組分別靜注順鉑5mg/kg (陽 性對照組)、等體積的生理鹽水(陰性對照組)、實施例4化合物組5、 10、 15、 20 mg/kg、 實施例8化合物組5、 10、 15、 20 mg/kg，連續(xù)給藥5天。大鼠死亡后立即解剖。試驗前后 觀察大鼠一般情況，結(jié)束后處死大鼠，稱取胸腺、脾臟濕重，取肝臟、腎臟、脊髓制作切片， HE染色后鏡檢，觀察對這些臟器的毒性。
用藥后，可觀察到大鼠的攝食和活動明顯減少，其中胸腺、脾臟重量見下表
15表3.目標(biāo)化合物對免疫器官的影響研究結(jié)果 化合物~劑量(mg/kg)~脾(g/100g7 x土sd)~~胸腺(g/1000g"; x土sd)
承與順鉑5tng組比較，p〈0. 05， 林與順鉑5mg組比較p〈0. 01
(制劑實施例1)實施例3化合物注射液的制備 處方
實施例3化合物 20. 0g
亞硫酸鈉 2.0g
加氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至 7. 0 8. 0
注射用水加至 2000ml 制成1000支
工藝①取1600ml注射用水置配液缸中，加入處方全量的亞硫酸鈉，攪拌至溶解；②加入處 方量的實施例3化合物，攪拌，用氫氧化鈉溶液調(diào)ra值至7.0 8.0，加注射用水至全量； 先用0. 45 u m的微孔濾膜過濾，再用0. 22的微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中， 壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗合格后即得成品。 (制劑實施例2)實施例3化合物凍干粉針劑的制備
實施例3化合物 25. 0g
甘露醇 200.0g
用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至 7. 0 8. 0
注射用水加至 3000ml 制成1000支
工藝①取2500ml注射用水置配液缸中，加入處方全量甘露醇，攪拌至溶解；②加入處方量 的實施例3化合物，攪拌并用氫氧化鈉溶液調(diào)ra值至7.0 8.0，加注射用水至全量；先用 0.45um的微孔濾膜過濾，再用0.22微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中；④冷
16
0. 305 ±0. 054林
0. 268 ±0. 096 0. 296 ±0. 091** 0. 295 ±0. 062** 0. 298 ±0.083** 0. 286±0. 104* 0. 283 ±0. 086* 0. 282 ±0. 076* 0. 277±0. 064 0. 271±0. 087
0. 917±0. 292* 0. 659±0. 316 0. 906±0. 305* 0. 915±0. 257* 0. 806 ±0. 332 0. 734 ±0. 246 0. 918±0. 294* 0. 861 ±0. 242* 0. 732±0. 314 0. 663±0. 325
55558888
白銷例例例例例例例例
《工w實實實實實實實§凍干燥(預(yù)凍，使溫度下降至一4(TC， 4小時后以每分鐘0. 15'C的升溫速率將溫度升至一5 'C，在此溫度下升華干燥16小時，再以每分鐘0.4。C的升溫速率將溫度升至4(TC，在此溫度 下干燥7 10小時)；⑤壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗合格后即得成品。 (制劑實施例3)實施例5化合物凍干粉針劑的制備
實施例5化合物 25g
普朗尼克(F-68) 2g
甘露醇 125g
注射用水加至 2500ml 制成1000支
工藝①取2000ml注射用水置配液缸中，加入處方全量的普朗尼克(F-68)和甘露醇，攪拌 至溶解；②加入處方量的實施例5化合物，攪拌至溶解，加注射用水至全量；先用0.45yra 的微孔濾膜過濾，再用0.22um的微孔濾膜精濾至澄明；③將濾液灌封于西林瓶中； 冷凍 干燥(預(yù)凍，使溫度下降至一4(TC， 4小時后以每分鐘0. 15。C的升溫速率將溫度升至一5'C， 在此溫度下升華千燥16小時，再以每分鐘0.4"C的升溫速率將溫度升至4(TC，在此溫度下干 燥7 10小時)；⑤壓蓋，貼標(biāo)簽，包裝，檢驗合格后即得成品。 〔制劑實施例4)實施例8化合物片劑的制備
實施例8化合物 20. 0g
乳糖 45.0g
微晶纖維素 30.0g
羧甲基纖維素鈉 4.0g
硬脂酸鎂 l.Og
3%聚維酮溶液 適量 制成1000片
工藝將實施例8化合物粉碎，過80目篩，取處方量化合物與乳糖、微晶纖維素，混合均勻， 加3%聚維酮溶液制軟材，過18目篩制顆粒，5(TC以下通風(fēng)干燥30 — 40分鐘后整粒，加入 硬脂酸鎂，混勻，壓片即得。
1權(quán)利要求
1、一個木犀草素鉑類配合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(I)
2、 一類木犀草素衍生物鉑類配合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(II):<formula>formula see original document page 2</formula>(II)其中r代表h, r' —NV7N —m, r3nr4R5 。R,代表(CH2) n,n=l-4; R2代表H，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，羥甲基、羥乙基、羥丙基。&代表(CH2) ，n=l-4; R4和Rs代表甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基。R4和Rs可以相同或不同。^和Az可以是H、 Na+、 K+、 NH4+， &和&可以相同或不同，R、 八2不同時為H。一
3、 權(quán)利要求2的鉑配合物，當(dāng)R為哌嗪衍生物"—^^^ "時，R,優(yōu)選CH2、 CH2CH2; &優(yōu)選甲基、乙基、異丙基、羥乙基。A,和A2優(yōu)選H、 Na+， A,和A2可以相同或不同。當(dāng)R為諸線時，R3優(yōu)選CH2、 C跳;R4和Rs可以相同或不同，優(yōu)選甲基、乙基、丙基。Ai和A2優(yōu)選H、 Na+， A,和A2可以相同或不同。
4、 權(quán)利要求1的鉑配合物的制備方法，依次包括以下步驟(1)先將氯亞鉑酸鉀合成中間體二碘二氨合鉑取含有20g氯亞鉑酸鉀(K2(PtCl4)，48mmol)水溶液，與4-10倍量的KI飽和溶液混合，水浴加熱，反應(yīng)溶液成黑色，加入2-3倍 量的氫氧化氨溶液，形成深黑黃色結(jié)晶，溶液為無色溶液，過濾，用冷水洗滌，再用冰冷的 乙醇和乙醚洗滌，空氣干燥，得到二碘二氨合鉑(Pt(NH3)2I2)。KI飽和溶液優(yōu)選4-6倍量。(2)將合成的二碘二氨合鉑與木犀草素合成木犀草素合氨絡(luò)鉑依次加入12.5g二碘二 氨合鉑(Pt(NH3)2I2, 26mmol)、 1-1. 5倍量AgN03，過濾除去AgI。向濾液中加入l-l. 2倍量木 犀草素，避光、加熱攪拌20-50小時，反應(yīng)混合物過濾后，得溶液，減壓濃縮析出固體，過濾 得到棕黑色固體，少量水洗，避光空氣干燥，得到木犀草素合氨絡(luò)鉑。
5、 權(quán)利要求4制備所得木犀草素鉑配合物適量，加入2-6倍量氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀 溶液攪拌溶解，再加入2-6倍量乙醇，靜置，過濾并用乙醇洗滌，得木犀草素合氨絡(luò)鉬鈉鹽 或鉀鹽。
6、 權(quán)利要求2或3的鉑配合物的制備方法，依次包括以下步驟,一 /~\ —(1) 當(dāng)R為"、寸① 取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙猓Q取4-10倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-40。C 水浴下反應(yīng)1-4小時，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2-3倍量氨水，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時， 過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，干燥得黃色粉末，即二碘二氨合鉑〔Pt(NH.,)山〕。② 取步驟①制得的二碘二氨合鉑〔Pt(NH3)2I2,〕適量、加入1-1. 5倍量AgN03， 20-40 'C下反應(yīng)24-36小時。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH3)2(H20)2] (N03)2無色透明濾液。③ 取木犀草素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入1-1.2倍摩爾量的醛水溶液和哌嗪衍生 物，20-4(TC下反應(yīng)5-10小時，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到木犀草素與哌 嗪衍生物的縮合物。 取步驟②制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1.2倍量步驟③制備的 縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-8(TC反應(yīng)24-48小時，再加入2-6 倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得木犀草素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽?！?qū)⒉襟E④制備的木犀草素哌嗪基衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入2-4倍量的鹽酸溶液，攪拌、靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得產(chǎn)物哌嗪基衍生物 木犀草素合氨絡(luò)鉑。(2) 當(dāng)R為R馬5時:①取適量氯亞鉑酸鉀加水?dāng)嚢枞芙?，稱取8-14倍量碘化鉀投入反應(yīng)液中，在20-4CTC 下反應(yīng)l-4小時，得黑色溶液(碘亞鉑酸鉀)。再加入2 — 3倍量氨水，繼續(xù)反應(yīng)2-4小時， 過濾，并用水、乙醇、乙醚洗滌，抽干得黃色粉末，即二碘二氨合鉑(Pt(NH:i)山〕。鉑(Pt(亂)山，)適量、加入1-1.5倍量AgN03， 20-40 'C下反應(yīng)24-36小時。濾除碘化銀沉淀，并用水洗滌，得[Pt(NH3)2(H20) J (N03)2無色透明濾液。◎取木犀草素溶解于無水乙醇中，攪拌下加入等摩爾的R3CH0水溶液和R4R5NH， 20-40 'C下反應(yīng)5-10小時，冷卻至有固體生成，濾集固體，重結(jié)晶，得到縮合物。④ 取步驟②制備的[Pt(NH3)2(H20)2](N03)2無色透明濾液，加入1-1. 2倍量步驟③制備的 縮合物(用4-8倍量的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液溶解)，60-80'C反應(yīng)24-48小時，再加入2-6 倍量乙醇，靜置、過濾并用乙醇洗滌、干燥，得8 —取代胺基垸基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉬 鈉鹽或鉀鹽。⑤ 將步驟④制備的8 —取代胺基烷基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉑鈉鹽或鉀鹽溶于水，加入 2-4倍量的鹽酸溶液攪拌，靜置，有沉淀生成，過濾并用水、乙醇、乙醚洗滌，得8 —取代胺 基烷基木犀草素衍生物合氨絡(luò)鉑。上述制備方法中提及的用量均為摩爾比。
7、 以權(quán)利要求1-3任何一項鉑配合物為活性成分的藥物組合物。
8、 權(quán)利要求7所述的組合物，是注射劑。
9、 權(quán)利要求l一3所述任一鉑類配合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域中一類新的具有藥用價值的木犀草素或其衍生物與鉑的配合物及其鹽類，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式(I)或(II)，本發(fā)明還公開了涉及了一種前述配合物及其鹽類的制備方法和所述配合物及其鹽類在制備治療癌癥的藥物方面的用途。
文檔編號C07F15/00GK101456881SQ20081018312
公開日2009年6月17日 申請日期2008年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月13日
發(fā)明者樺 劉, 孟小平, 閻亞矢, 陳小平 申請人:北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司