專利名稱：一種植物耐逆性蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物耐逆性蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
土壤鹽漬化對(duì)農(nóng)業(yè)的威脅是一個(gè)全球性的問題，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球鹽堿土約有10億公 頃，占世界陸地面積近7.6%。我國(guó)是一個(gè)發(fā)展中的農(nóng)業(yè)大國(guó)，全國(guó)鹽堿土約有0.2 億多公頃占全國(guó)耕地面積的1/3。鹽分脅迫能顯著的抑制植物的生長(zhǎng)，甚至導(dǎo)致植物 的死亡。在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中，不同植物形成了不同的機(jī)制來(lái)適應(yīng)鹽分的脅迫，同 時(shí)其抗鹽能力也各不相同。大多數(shù)農(nóng)作物都對(duì)鹽分非常敏感，而鹽生植物雖然能在 高鹽條件下生存，但它們的經(jīng)濟(jì)價(jià)值往往非常有限，提高作物的抗鹽能力已經(jīng)成為 我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和科研中的重要內(nèi)容。
植物對(duì)鹽分的抗性是一個(gè)多基因控制的復(fù)雜性狀。鹽分對(duì)植物的影響涉及到植 物體內(nèi)的各個(gè)方面和代謝過(guò)程。包括離子毒害，滲透脅迫和氧化脅迫以及光合作用。 因此，對(duì)抗鹽、耐鹽相關(guān)蛋白及其編碼基因的研究具有重要的意義。
蛋白激酶基因是一類在信號(hào)傳遞途徑中起重要作用的基因。Saijo等將OsCZ^《7 基因?qū)胨?，轉(zhuǎn)基因植株中一些脅迫響應(yīng)基因的誘導(dǎo)表達(dá)增強(qiáng)，C^CZ)P《7基因的 表達(dá)水平與植株的抗鹽和抗旱能力密切相關(guān)。擬南芥AtCDPKl和AtCDPK2基因的 表達(dá)可以被鹽和干旱誘導(dǎo)，但不被低溫或高溫誘導(dǎo)，推測(cè)這兩個(gè)基因參與了滲透脅 迫信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)(Urao et al.， Mol. Gen. Genet.， 1994, 244: 331-340)。研究發(fā)現(xiàn)，兩種Ca2+ 依賴的蛋白激酶AtCDPKl和AtCDPKla激活脅迫誘導(dǎo)基因HVA1表達(dá)(Sheen, Science, 1996,274: 1900-1902)。另一種參與鹽脅迫信號(hào)傳導(dǎo)的擬南芥蛋白激酶基因 AtGSKl編碼的蛋白與糖原合成酶激酶GSK3相似。擬南芥突變體互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， AtGSKl可以恢復(fù)鹽誘導(dǎo)基因PMR2A的表達(dá)，并且該基因在鹽和ABA脅迫下上調(diào) 表達(dá)(Charrier et al.， Plant Physiol, 2002,130: 577-590)。
在真核生物中有一類非常保守的MAPK激酶途徑，與鹽脅迫造成的氧化脅迫應(yīng) 答反應(yīng)有關(guān)。已鑒定的與鹽脅迫相關(guān)的MAPK激酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的組分有擬南芥 AtMEKKl、AtMEKl/AtMEK2、AtMPK4、ANPl以及煙草NPKl、AtMPK3禾口 AtMPK6 等(Kovtun et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 2000， 97:2940-2945; Ichimura et al.， Biochem. Biophys. Res. Commun" 1998, 253: 532-543; Moon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003,100:358-363)。 AtMPK3基因可同時(shí)受干旱、高鹽或低溫的誘導(dǎo)，脅迫條件下
AtMPK3基因5min內(nèi)就被誘導(dǎo)表達(dá)，以后表達(dá)持續(xù)增加至24h后達(dá)到峰值。鹽脅迫 可以誘導(dǎo)AtMEKKl的表達(dá)，而AtMEKKl又可激活A(yù)tMPK4，使植物耐鹽性增強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種植物耐逆性蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。 本發(fā)明所提供的植物耐逆性蛋白，名稱為GmPK，大豆屬大豆(G/yc/"ema;c (Linn.)Merr)，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)
1) 序列表中的SEQIDW.2的氨基酸殘基序列；
2) 將序列表中的SEQIDW.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的 取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐逆性功能的蛋白質(zhì)。
其中，序列表中的序列2由352個(gè)氨基酸殘基組成。GmPK是絲氨酸/蘇氨酸類 蛋白激酶，自序列2的氨基端第4-260氨基酸為蛋白激酶催化結(jié)構(gòu)域序列。
所述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十個(gè)氨基酸 殘基的取代和/或缺失和/或添加。
為了使(a)中的GmPK便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序 列組成的蛋白質(zhì)的N端或C端連接上如表1所示的標(biāo)簽。
表l.)際簽的序列標(biāo)簽殘基序列
Poly-Arg5-6 (通常為5個(gè))RRRRR
Poly-His2-10(通常為6個(gè))HHHH朋
FLAG8DYKDDDDK
Strep-tag II8WSHPQFEK
c-myc10EQKLISEEDL
上述(b)中的GmPK可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá)得 到。上述(b)中的GmPK的編碼基因可通過(guò)將序列表中SEQIDJVT2: 1的DNA序 列中缺失一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)的錯(cuò)義突變， 和/或在其5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。
為了便于蛋白的分泌表達(dá)，還可在所述GmPK的氨基末端添加上信號(hào)肽序列。 上述植物耐逆性蛋白的編碼基因(GmPX)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 上述植物耐逆性蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一
1) 自序列表中SEQIDW: l的5'端的第351至1406位核苷酸-，
2) 序列表中SEQIDJV2: 1的核苷酸序列；
3) 編碼序列表中SEQIDW2: 2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；
4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQIDJVfc: 1限定的DNA序列雜交的核苷酸 序列。
上述高嚴(yán)謹(jǐn)條件可為在0.1xSSPE(或O.lxSSC)， 0.1。/。SDS的溶液中，在65°C
下雜交并洗膜。
其中，序列表中的SEQIDW: 1由1531個(gè)脫氧核苷酸組成，自5，端的第351 至1406位核苷酸為Gm尸尺的開放閱讀框(Open Reading Frame, ORF)，序列表中序 列1編碼序列表中序列2的氨基酸殘基序列。
含有本發(fā)明基因的重組表達(dá)載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及宿主菌均屬于本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
實(shí)驗(yàn)表明，將本發(fā)明耐逆性蛋白的編碼基因整合到擬南芥基因組中過(guò)表達(dá)，可 顯著提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性和抗旱性。本發(fā)明的基因可用于培育高度耐鹽和抗旱 的作物品種，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。


圖1為過(guò)表達(dá)GmPK基因的擬南芥轉(zhuǎn)基因植株(轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥)的耐鹽 性鑒定(處理的NaCl濃度為200mM)。
圖2.轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的抗旱性鑒定結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。 下述實(shí)施例中的百分含量，如無(wú)特別說(shuō)明，均為質(zhì)量百分含量。 實(shí)施例1、植物耐逆性蛋白及其編碼基因的獲得
分析大豆品種綏農(nóng)14的葉片為材料構(gòu)建的cDNA文庫(kù)中獲得的ESTs,發(fā)現(xiàn)一 個(gè)滲透脅迫相關(guān)的EST，用tblast程序搜索GenBank的數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，用 RT-PCR的方法從大豆品種文豐7號(hào)(統(tǒng)一編號(hào)ZDD02611;中國(guó)國(guó)家種質(zhì)資源庫(kù) 提供)的葉片中克隆到一個(gè)植物耐逆性蛋白的cDNA。具體方法為
用200mMNaCl溶液浸泡萌發(fā)后生長(zhǎng)2周的大豆品種文豐7號(hào)的幼苗的根部6 小時(shí)，收獲葉片提取RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，以該cDNA為模板，用引物 PK1F (5'-TGCTACGCACACACAAACACA-3')和PK1R (5'曙TATGTCCCATGCGGAAAACTT誦3 ，)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
PCR反應(yīng)體系為lOxBuffer 2.5pl， dNTP 2.5mM， PK1F 5pM, PK1R 5pM, cDNA 20ng,T叫酶1U，加去離子水至25pl。
PCR反應(yīng)程序先94。C 5min;然后94°C 30S， 60°C 30s， 72°C lmin，擴(kuò)增
35個(gè)循環(huán)；最后72。C延伸8min。
PCR擴(kuò)增得到1.5kb左右的片段，即獲得的全長(zhǎng)cDNA命名為Gm尸《。經(jīng)過(guò)測(cè) 序表明，Gm尸尺長(zhǎng)1531bp，具有序列表中序列1的核苷酸序列，自序列1的5'端的 第351至1406位核苷酸為Gm尸《的編碼序列，編碼一條長(zhǎng)352個(gè)氨基酸的蛋白 GmPK， GmPK具有序列表中序列2的氨基酸殘基序列。自序列2的氨基端第4-260 氨基酸為蛋白激酶催化結(jié)構(gòu)域序列。
實(shí)施例2、植物耐逆性蛋白及其編碼基因的功能驗(yàn)證
1、 在擬南芥中過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
將GmPK的ORF克隆pBI121載體并置于35S啟動(dòng)子控制下，具體方法為
根據(jù)上述GmAT/iY2cDNA序列設(shè)計(jì)引物，序列如下所示Fl: 5，-CGCGTCGACATGGAGAAATACGAGCTCGT-3'(下劃線標(biāo)注的是Sal I酶識(shí)別 位點(diǎn))；Rl: 5'-CTGCTCGAGTTAACTGACATGAAATTCCC-3'(下戈機(jī)標(biāo)注的是 Xhol酶識(shí)別位點(diǎn))。
用200mMNaCl溶液浸泡萌發(fā)后生長(zhǎng)2周的大豆品種文豐7號(hào)的幼苗的根部6 小時(shí)，取葉片提取RNA并反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈cDNA，以該cDNA為模板，以Fl和 Rl為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
PCR擴(kuò)增得到1077bp的片段，測(cè)序表明，該片段具有序列1的5'端的第351至 1406位的核苷酸序列。
將擴(kuò)增得到的片段用Sal I和Xho I雙酶切，將得到的片段插入到pBI121載體的 SalI和XhoI酶識(shí)別位點(diǎn)之間，得到重組載體。將該重組載體進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定， 將經(jīng)過(guò)測(cè)序表明含有GmPK的ORF的重組載體命名為pBI121- GmPK。
2、 轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的獲得
用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)pBI121- GmPK擬南芥，具體方法為將重組載體pBI121-GmPK轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株GV3101獲得重組菌，將該重組菌利用PCR方法驗(yàn)證。利用 以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蘸花法轉(zhuǎn)化(Clough SJ Bent AF， Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana， The Plant Journal, 1998/16/ P735-743. [4])，通過(guò)鑒定正確的含有重組載體 pBI121- GmNHX2的農(nóng)桿菌菌株GV3101 ，將pBI121- GmNHX2轉(zhuǎn)入擬南芥Columbia 生態(tài)型獲得Tn代轉(zhuǎn)pBI121- GmPK擬南芥。
將獲得的T。代轉(zhuǎn)pBI121- GmPK擬南芥種子種植在含有50mg/L卡那霉素的MS 培養(yǎng)基上篩選，獲得陽(yáng)性植株，將獲得的陽(yáng)性植株逐代在含有50mg/L卡那霉素的MS培養(yǎng)基上篩選獲得純合體的轉(zhuǎn)基因株系。篩選獲得的純合的株系用RT-PCR驗(yàn) 證，提取16個(gè)正常條件下生長(zhǎng)的pBI121- GmPK擬南芥株系和野生型(Columbia生 態(tài)型)的RNA并反轉(zhuǎn)錄得到eDNA第一鏈；以該cDNA為摸板，用引物PK6F: 5 ， -CCAAGGAGCTTGTTGCCATG-3 ， ， PK6R: 5 ，-GATTCTCCTAGCTGGATTTG匿3 ， 進(jìn)行PCR擴(kuò)增，整合了 pBI121- GmPK的陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因擬南芥植株應(yīng)擴(kuò)增得到671bp 的片段。結(jié)果表明獲得16個(gè)RT-PCR鑒定正確的轉(zhuǎn)？81121-GmPK擬南芥株系，選 擇其中三個(gè)株系(L6、 L11和L13)作為其耐鹽性和耐旱性鑒定的材料。
3、 轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的耐鹽性鑒定
將野生型擬南芥(Columbia生態(tài)型)和轉(zhuǎn)pBI121- GmPK擬南芥的3個(gè)株系(L6、 L11和L13)的種子均勻的播種于MS培養(yǎng)基上，于4t:放置3天后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室 于22°C,16h光照/8h黑暗條件下生長(zhǎng)1周后，移入含有200mMNaCl的MS固體培養(yǎng) 基上，繼續(xù)在該溫度和光照條件下進(jìn)行脅迫處理7天。鹽處理7天后保持>75%的綠 色葉片面積的植株計(jì)為存活，存活率為存活的植株數(shù)占處理的總植株數(shù)的百分?jǐn)?shù)。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，每次每個(gè)株系至少60粒種子。
結(jié)果如圖l所示，結(jié)果表明，在200mM處理下，野生型和轉(zhuǎn)基因植株的生長(zhǎng) 和根長(zhǎng)都受到抑制，但轉(zhuǎn)基因植株的生長(zhǎng)表現(xiàn)要明顯好于野生型，轉(zhuǎn)基因植株能維 持綠色的葉片并繼續(xù)生長(zhǎng)，而野生型植株則逐漸白化死亡。過(guò)表達(dá)GmPK基因的擬 南芥植株(轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥)株系L6、 Lll和L13在200 mMNaCl處理下， 轉(zhuǎn)基因植株的存活率分別為74.4%、 86.5%、 79.8%，而野生型的存活率為16.1%， 表明GmPK基因在擬南芥中過(guò)表達(dá)可以提高轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽性。圖1中，wt表示 野生型；L6、 Lll和L13表示3個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥株系。
4、 轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的抗旱性鑒定
將野生型(Columbia生態(tài)型)和轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的3個(gè)株系(L6、 Lll 和L13)的種子均勻的播種于MS培養(yǎng)基上，于4r放置3天后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室于22 'C，16h光照/8h黑暗條件下生長(zhǎng)l周后，移栽至土壤中生長(zhǎng)l周后，停止?jié)菜?8天 后，恢復(fù)澆水3天后，葉片恢復(fù)綠色并能繼續(xù)生長(zhǎng)的植株計(jì)為存活，存活率為存活 的植株數(shù)占處理的總植株數(shù)的百分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，每次每個(gè)株系30個(gè)植株用于 抗旱鑒定。
結(jié)果表明，轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥的L6、 Lll和L13株系的存活率分別為 60.45%、 79.31%、 65.78%，而野生型只有16. 67%存活，表明GmPK基因在擬南芥中過(guò) 表達(dá)可以提高轉(zhuǎn)基因植株的抗旱性。圖2中，wt表示野生型；L6、 L11和L13表示 3個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)pBI121-GmPK擬南芥株系。
<160〉2
<210〉1
<211>1531
<212>腿
<213〉大丑屬大旦(G7yc/"e wax (Linn.) Merr)
<400〉1
tgctacgcacacacaaacacaaac3ca^g3attcttttgtctctttcttatcagtatttt60
cttcccctgcgttaaagttaaagttgcaattcctctgtctgttccttcaattcttcaaat120
cccgaaattgtcatttttaatctcgctgcaaattgcgctcacgattctttgctttccttc180
gaaactctccttctttctctctcataaataaattcgccacctttgtattt240
ttgcgtaactgctctgcaccttattgattcttctctctctctccattctccaactctcca300
tttcgatctgcagctccccgctttcaaagctctgaaatttccgattcggg360
acgagctcgtgaaggat已tagg3tctggg3atttcggtgtggccaggctcatgcgacaca420
ggagcttgttgccatg犯atgggtc織agsttgatgaga480
atgttgcg昭a(bǔ)accatagaagtcttcggcaccccaatattattcggttca540
agg鄉(xiāng)tggttctgactccaacccatctgggtattgttatggagtstgcggctggtggag600
agctctttgagaggatttgcagtgctggaagattcagcgacgatatt.tct660
tccagcagctcatctcaggeigttsgctsctgtcattccatgc犯atctgtcatcgagact720
tg鄉(xiāng)Ctgg3ttggstggcagcccsgccccacggctcaaaatttgtg已tt780
ttggctattctaagtcatctctgcttcattctgLggcctaagtc認(rèn)ggtggg8accccgg840
cctacattgcacctgaggttctttcacgtag卿g城gatgga犯gttagcagatgtat900
ggtcctgtggagtgactctttatgtaatgctggtgggagcatacccatttg肌gaccaag960
aaatttcaggaaaac cat c aatcg犯ttatggctgttcaatacaagattc1020
cagactacgttcacatatctcaagactgtagacatcttctatctcgcatttttgtggcaa1080
atccagctaggsg犯tcaccatt犯ggaaatcaagtcccacccatggtttgtaaagaact1140
tgcccagagsgtagctcaagctgcctacta犯ccca^cct1200
tttctcttcagagtatagaggacatcatgaatattgttgagg鄉(xiāng)c頃ggctccacctc1260
cagcatccaggtC3attgg8ggatttggctgggg郷卿1320
c^a^ga^gc ggctgsgactgaagaag3犯ga^gtcaaggaagcac1380
aagcaagtggggaatttCEttgtcag"ttaaaaagtgtttatttttagatagageLgc肌1:tg1440
attcttggtttcctttgcacttagctaagttc^ctaaggtgagtgtgttttgcttgtat1500
gtataaaattaagttttccgC￡ltggg3C3t1531
<210> 2<211〉 352 <212〉 PRT <213>大豆屬大豆(
<400〉 2 Met Glu Lys 1
Val Ala
Lys Tyr
lie lie 50
Glu Val 65
Ala Gly
Glu Asp
Tyr Cys
Thr Leu 130 Gly Tyr 145
Gly Thr
Arg
lie
35
Asn
Tyr
Leu
20
Glu
His
Glu 5
Met Arg Arg
Leu Val
Val Leu Thr
Gly Glu
Glu
His 115 Leu
Ala 100 Ser
Leu
85
Arg
Arg
Gly
Ser
Pro
70
Phe
His
His
Leu 55 Thr
Lys
Lys
Lys
40
Arg
Asp
Asp
25
lie
lie
10
Thr
Gly Lys Asp Glu Asn
Ser Gly Asn
His Pro Asn
Glu Leu
Val
45
lie
His Leu Gly Glu Arg lie
Tyr Phe Phe
Met Gin lie
Asp Gly Ser Ser Lys Ser
Pro Ala
Asp Gly Lys
Met Leu
Leu 180 Gly
Tyr 165 Ala
Ala
Ser 150 lie
Asp
Tyr
Pro 135 Leu
Cys 120 Ala
Gin 105 His
Val Trp
Pro
Val 195
Phe Arg Lys Thr lie Asn Arg
Phe 200 lie
Ser 185 Glu
Met
Cys 90 Gin
lie
75
Ser
lie
60
Val
Met
Ala Gly
Leu lie Ser
Arg Asp Leu Pro Arg Leu
Leu His Ser
Ala Pro Glu
Val 170 Cys
Asp
Ala
Arg 155 Leu
Lys 140 Pro
Lys 125 lie
Val
30
Ala
Arg
Glu
Arg
Gly 110 Leu
Phe Gly 15
Ala Met
Arg Glu
Phe Lys
Tyr Ala
80 Phe Ser 95
Val Ser Glu Asn
Cys Asp Phe
Lys Ser Arg Gly Val Thr Gin Glu
Ser
Arg
Leu 190 Pro
Thr Val 160 Glu Tyr 175
Tyr Val Lys Asn
Asp 205
Val Gin Tyr Lys lie Pro
210 215 220
Asp Tyr Val His lie Ser Gin Asp Cys Arg His Leu Leu Ser Arg lie 225 230 235 240
Phe Val Ala Asn Pro Ala Arg Arg lie Thr lie Lys Glu lie Lys Ser
245 250 255
His Pro Trp Phe Val Lys Asn Leu Pro Arg Glu Leu Thr Glu Val Ala
260 265 270
Gin Ala Ala Tyr Tyr Arg Lys Glu Asn Pro Thr Phe Ser Leu Gin Ser
275 280 285
lie Glu Asp lie Met Asn lie Val Glu Glu Ala Lys Ala Pro Pro Pro
290 295 300
Ala Ser Arg Ser lie Gly Gly phe Gly Trp Gly Gly Glu Glu Glu Glu 305 310 315 320
Glu Asp Glu Thr Lys Glu Ala Val Ala Glu Thr Glu Glu Asp Glu Tyr
325 330 335
Glu Lys Arg Val Lys Glu Ala Gin Ala Ser Gly Glu Phe His Val Ser 340 345 350
權(quán)利要求
1、一種植物耐逆性蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №.2的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQ ID №.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐逆性功能的蛋白質(zhì)。
2、 權(quán)利要求l所述的植物耐逆性蛋白的編碼基因。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述植物耐逆性蛋白的cDNA 基因具有下述核苷酸序列之一1) 自序列表中SEQIDJV2: 1的5，端的第351至1406位核苷酸；2) 序列表中SEQIDM: 1的核苷酸序列；3) 編碼序列表中SEQIDW: 2蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；4) 在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQIDW2: 1限定的DNA序列雜交的核苷酸 序列。
4、 含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐逆性蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體。
5、 含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐逆性蛋白的編碼基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。
6、 含有權(quán)利要求2或3所述的植物耐逆性蛋白的編碼基因的宿主菌。
7、 權(quán)利要求1所述的植物耐逆性蛋白及其編碼基因在提高植物耐逆性中的應(yīng)用。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物為水稻、小麥、玉米、 大豆、棉花、馬鈴薯、油菜、甘薯、綠豆、紅小豆、橡膠、香蕉、西紅柿、黃瓜、 苜?；驍M南芥。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于所述耐逆性為耐鹽性和/或抗 旱性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種植物耐逆性蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。該植物耐逆性蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №.2的氨基酸殘基序列；2)將序列表中的SEQ ID №.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有植物耐鹽功能的蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)表明，該蛋白具有很高的耐鹽性和抗旱性，將該蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)入植物中，可提高植物的耐鹽性和抗旱性。
文檔編號(hào)C07K14/415GK101386646SQ20081022531
公開日2009年3月18日 申請(qǐng)日期2008年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月29日
發(fā)明者關(guān)榮霞, 劉章雄, 周國(guó)安, 常汝鎮(zhèn), 張麗娟, 李向華, 李英慧, 王克晶, 邱麗娟, 金龍國(guó) 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所