專利名稱：藥物化合物及其藥用用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體涉及一系列新化合物及其藥用用途。

背景技術：
從天然產(chǎn)物中尋找新藥或先導化合物的研究是當前國內(nèi)外創(chuàng)制新藥的重要研究方向和非?；钴S的研究領域。除了從天然產(chǎn)物直接研究開發(fā)成有效的新藥物外，天然產(chǎn)物還是新藥開發(fā)所依賴的新先導化合物取之不盡的源泉。與天然產(chǎn)物相關的新的化學成分要遠遠多于其他來源的化合物，已發(fā)表的、來自天然產(chǎn)物的40％化學結(jié)構在合成化學成分中是沒有的，世界上大約有250000種植物，其中僅10％已被進行過生物測試，除了這些植物外，還有更多的生物如海洋生物和微生物尚有待于進一步研究，天然產(chǎn)物提供的多種多樣的化合物為進一步開發(fā)候選藥物提供了豐富多樣的結(jié)構類型，以天然產(chǎn)物為先導化合物，結(jié)合結(jié)構與生物活性關系和代謝等研究進一步進行結(jié)構修飾和類似物合成，以提高藥效和降低毒性，往往從一個有效的天然先導化合物可以衍生出一系列新藥。這一過程已經(jīng)成為新藥創(chuàng)制的重要途徑，而且已經(jīng)取得了豐碩的成果。如抗瘧藥青蒿素(artemisinin)和其衍生物蒿甲醚(artemether)、抗癌藥紫杉醇(taxol)及其類似物紫杉醚(taxotere)、長春堿(vinblastine)和長春新堿(vincristine)和它們的結(jié)構修飾物長春地辛(vindesine)和治療早老性癡呆藥石杉堿甲(huperzine A)及其衍生物希普林(schiperine)等。因此，以天然產(chǎn)物為基準，開發(fā)新的藥物成為醫(yī)藥科研工作者涉足的重點領域。
丹參是中藥中經(jīng)典的活血化瘀的藥味，其具有活血化瘀作用的物質(zhì)基礎為水溶性成分，丹參水溶性成分多具有酚酸性結(jié)構，即丹酚酸A、B、C、D、E等有效成分，其中丹參丹酚酸F是活性化合物，但我們在藥物研究過程中發(fā)現(xiàn)，丹參丹酚酸F的結(jié)構決定了它的一些缺陷，比如穩(wěn)定性差、膜通透性差、生物利用度低等，因此，很多醫(yī)藥工作者希望通過結(jié)構的改造，得到新的化合物，以期達到改變這些缺陷的目的。因此，針對丹參丹酚酸F結(jié)構缺陷進行改造，發(fā)現(xiàn)新的化合物具有廣泛而科學意義。


發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們科研人員將丹參丹酚酸F進行結(jié)構改造，得到一系列化合物，通過穩(wěn)定性實驗、LogP測定、藥效學等實驗，對新的合成化合物進行篩選，選擇穩(wěn)定性、膜通透性好，生物利用度高等優(yōu)點的化合物，藥效學實驗表明，這類化合物具有更好的藥理作用，本發(fā)明新化合物具有治療心腦血管疾病、保肝、抗肝纖維化、抗肺纖維化、治療血脂異常、抗腫瘤等作用。
本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)的。
化合物
其中R1-R4是H、C2-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲?；?、乙酰基、丙?；?、丁酰基和戊?；械囊环N，或R1和R2、R3和R4一起形成-O-(CH2)n-O-(n＝1-5)；其中R5是H、鹽、芳香烴、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體中的一種；其中R1-R5不能同時為H。
其中R5中芳香烴為苯基，其任選的被鹵素、-OH、C1-C6-烷基和C1-C4-烷氧基中任意基團取代1-3次。
其中化合物鹽為Na、K、Li、Ca、Mg鹽中的一種。
化合物
其中R1-R4是H、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁酰基、戊?；?0種L-氨基酸中的一種，或R1和R2、R3和R4一起形成-O-(CH2)n-O-(n＝1-5)；其中R5是C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、-NHCH(OH)(CH2)nCH3(n＝1-3)、

中的一種，其中R6是H、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁?；臀祯；械?種。
上述化合物為活性成分組成藥物組合物。
上述化合物為原料制備的藥物制劑。
上述化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。
上述化合物在制備治療肝損傷和肝纖維化藥物中的應用。
上述化合物在制備治療肺纖維化藥物中的應用。
上述化合物在制備治療心率失常藥物中的應用。
上述化合物在制備治療血脂異常藥物中的應用。
上述化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。
上述化合物在制備治療抗衰老藥物中的應用。
上述的藥物制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑或凍干粉針劑。
一、穩(wěn)定性研究 實驗藥物 藥物1丹參丹酚酸A； 藥物2丹參丹酚酸F 藥物3
藥物4丹酚酸A乙基酯； 藥物5丹酚酸A甲基酯； 藥物6丹酚酸A異丙基酯； 藥物7苷氨丹酚酸A； 藥物8精氨丹酚酸A； 藥物9牛磺丹酚酸A； 藥物10二乙胺丹參酚酸A； 藥物11乙酰丹酚酸A； 藥物12本發(fā)明新化合物； 實驗方法將上述實驗藥物測定含量后，加水完全溶解，60℃放置3天后，低溫濃縮干燥，再進行含量測定，實驗結(jié)果見表1 表1不同化合物穩(wěn)定性研究結(jié)果

實驗結(jié)論通過上述實驗表明，丹參丹酚酸A化學結(jié)構的改造需要進行深入的研究，結(jié)構改造后的藥物2-11在穩(wěn)定性方面雖然有所改善，但含量降低幅度還是很大，而發(fā)明的新化合物的含量降低不到1％，符合化學藥品原料藥有關物質(zhì)的要求，充分說明本發(fā)明新化合物具有科學意義。
二、LogP的測定 實驗藥物 藥物1丹參丹酚酸A； 藥物2丹參丹酚酸F 藥物3
藥物4丹酚酸A乙基酯； 藥物5丹酚酸A甲基酯； 藥物6丹酚酸A異丙基酯； 藥物7苷氨丹酚酸A； 藥物8精氨丹酚酸A； 藥物9?；堑し铀酇； 藥物10二乙胺丹參酚酸A； 藥物11乙酰丹酚酸A； 藥物12

其中R為-NHCH(R1)COOH，R1為L-氨基酸中任一種氨基酸的側(cè)鏈。
藥物13本發(fā)明新化合物； 脂水分配系數(shù)(logP)是用來表示化合物的親脂性、透過生物膜的性能及與受體(包括酶)間疏水性結(jié)合力的一種參數(shù)，在定量構效關系的研究中很重要。
實驗方法將藥物溶解于不同pH緩沖鹽水中，搖床振搖72小時，靜置24小時，取水相測定。計算其分配系數(shù)。樣品溶解于水飽和正辛醇中；平衡時溶劑量為油、水相各2ml；平衡操作選擇渦旋法；油水分離選擇離心法；樣品量測定選擇用高效液相色譜法測定水中樣品量。含量測定方法色譜條件參考《中國藥典》(2005年版，一部)丹參藥材項下丹酚酸含量測定方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水-甲酸(30∶69∶1)為流動相；流速為1.0ml/min；檢測波長為286nm。
取實驗藥物適量，精密稱定，置25ml量瓶中，加水飽和的正辛醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，取2ml置5ml離心管中，分別加入不同pH值的緩沖鹽溶液，渦旋5分鐘，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘。取水相，用水適當稀釋后，取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以外標法計算其濃度。
表2不同化合物Logp的測定結(jié)果
實驗結(jié)論上述實驗表明，本發(fā)明的新化合物比實驗1-10中LogP值高2-4數(shù)量級，結(jié)合上述化合物的pKa值，說明本發(fā)明新化合物更易通過生物膜，會具有更好的生物利用度，充分說明本發(fā)明具有科學意義。
三、藥理實驗 實驗1 對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用 實驗動物健康SD大鼠，體重200-300g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3
實驗試劑洛氏液；肝素鈉。
實驗儀器二道生理記錄儀；恒溫槽。
實驗方法將大鼠隨機分組正常對照組，模型組，實驗藥物組。正常對照組給予含氧洛氏液，模型組給予氮飽和洛氏液，實驗藥物組給予含氮飽和藥物(實驗藥物用洛氏液配置)。取大鼠，尾靜脈注射肝素鈉(1000U/kg)，15分鐘后擊暈，開胸，將心臟迅速取出，移至貯有4℃洛氏液的培養(yǎng)皿中，清洗心臟殘留血液，在液面下迅速把主動脈接于灌流的套管上，并以線結(jié)扎固定。立即以含氧洛氏液進行灌流。灌注壓70cm水柱，灌流溫度(38±5)℃，流速(11.5±0.5)mL/min。用蛙心夾夾住心尖部并與換能器相連，二道生理記錄儀描記心率變化。心臟復跳并心率顯示正常后，穩(wěn)定30min，再進行實驗。正常對照組，以含氧洛氏液持續(xù)灌流110min；模型組，以含氧洛氏液灌流30min后，改用氮飽和洛氏液灌注40min(此為缺氧灌注)，再恢復含氧洛氏液灌流40min；給藥組實驗方法基本同模型組，僅在缺氧灌注時改用不同濃度的氮飽和受試藥物灌注。
實驗結(jié)果結(jié)果見表3。
表3 對缺氧再給氧灌注損傷大鼠離體心臟冠脈流量的影響

注與模型組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗2 對麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用 實驗動物健康SD大鼠，體重240-260g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3 丹酚酸A甲基酯 實驗試劑20％烏拉坦按；碘酒；試劑盒；1％TTC。
實驗儀器呼吸機；心電圖機；眼科鑷；全自動生化分析儀；數(shù)碼相機。
實驗方法將大鼠隨機分組空白對照組、本發(fā)明藥物組。置于相同環(huán)境預飼養(yǎng)2天，自由飲食。預飼養(yǎng)結(jié)束后，進行試驗，動物稱重，20％烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機，按10～12ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸∶呼比為1∶1。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機，測正常心電圖。剪去胸前手術區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到結(jié)扎標志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進針深度為1～1.5mm，寬2～3mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標志(S-T段無改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機，動物恢復自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分別記錄心電圖。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。

實驗結(jié)果結(jié)果見表4。
表4對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響
注與模型組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗3 對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷保護作用的研究 實驗動物健康SD大鼠，體重240-260g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3 精氨丹酚酸A； 實驗試劑0.1％多聚賴氨酸；肝素；TTC染液；甲醛。
實驗儀器電熱毯；冰箱；烘箱。
實驗方法將大鼠隨機分組，分別為空白對照組、本發(fā)明藥物組。各組連續(xù)尾靜脈給藥3天，第4天藥后20分鐘用改良線栓法制成大腦中動脈阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，將其仰臥固定。分離右側(cè)頸總動脈(CCA)、頸內(nèi)動脈(ICA)及頸外動脈(ECA)，結(jié)扎ECA與CCA，用動脈夾夾閉ICA遠心端后，迅速于ECA與ICA分叉處作一切口，插入一端加熱成光滑球形并涂了0.1％多聚賴氨酸的尼龍線(直徑為0.25mm，距球端18mm處作標記，插入前沾肝素溶液)，插入深度為18mm，實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導致腦缺血。結(jié)扎入口處，尼龍線外留約1cm，縫合皮膚。2小時后輕輕提拉所留線頭至略有阻力，實現(xiàn)大腦中動脈再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h內(nèi)用電熱毯維持大鼠的體溫，體溫維持在肛溫36.5～37.5℃。動物入選標準，按Longa五級評分法，取神經(jīng)功能行為評分為1、2、3、4分的動物，(0分無神經(jīng)缺損癥狀；1分對側(cè)前肢不能完全伸直；2分向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)；3分向?qū)?cè)傾倒；4分不能自己行走或昏迷)。腦梗塞范圍測定，模型大鼠再灌注24h，行為學評分后，斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在-20℃冰箱冷凍10min，在冰盤上冠狀切成6片，迅速將腦片置于TTC染液中，37℃避光溫孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量百分比作為腦梗塞范圍。
腦含水量測定TTC染色稱重后，將大腦置于120℃真空干燥器內(nèi)烘干12h稱干重。腦含水量＝(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100％。
實驗結(jié)果結(jié)果見表5。
表5對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷大鼠腦梗塞范圍及腦水含量的影響
注與空白對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗4 對CCl4致大鼠肝纖維化的影響 實驗動物雄性健康Wistar大鼠，體重180-200g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3 二乙胺丹參酚酸A 實驗試劑CCl4；豬油；膽固醇。
實驗方法將大鼠均隨機分組正常組、本發(fā)明藥物組，除正常對照組外，其余各組大鼠首次于皮下注射CCl4 5ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％CCl4橄欖油3ml/kg，共6周。在實驗期間除正常組外，第1～2周各組均給予20％豬油加0.5％膽固醇的玉米粉飼料，第3～6周飼以普通飼料。各給藥組在造模開始時即同時灌胃給予相應劑量的藥液，給藥體積1ml/100g，給藥時間共12周。各組用藥周期完成后，乙醚麻醉下剖腹，經(jīng)下腔門靜脈采血，并取一部分肝組織制成肝勻漿，用于檢測羥脯氨酸(Hyp)含量。另取肝組織作HE染色用于組織病理學觀察。
實驗結(jié)果結(jié)果見表6 表6對肝纖維化模型大鼠肝組織中Hyp的影響
注與空白對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗5 對小鼠肺纖維化模型的影響 實驗動物8-12周齡、雄性、昆明種小鼠，體重18-22g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3 丹參丹酚酸A 實驗試劑注射用博萊霉素A5；PBS液；乙醚。
實驗儀器實驗臺。
實驗方法將小鼠用乙醚麻醉后仰臥于實驗臺上，固定頭部及四肢，切開頸部皮膚，由氣管一次性注入博萊霉素A5溶液0.05ml(含藥0.1mg，5mg/kg)。注藥完畢后縫合皮膚，將小鼠直立、旋轉(zhuǎn)，盡量使藥液在肺內(nèi)均勻分布。手術過程嚴格無菌操作。空白對照組以同樣方法注入等量生理鹽水代替博萊霉素A5，動物清醒后隨意進食。小鼠造模24小時后隨機組分別為空白對照組、本發(fā)明藥物組，每組10只?？瞻讓φ战M灌胃給予蒸餾水0.2ml/10g，每日三次；給藥組，造模后灌胃給予各相應劑量的藥液。以上各組，連續(xù)給藥28天。
實驗結(jié)果結(jié)果見表7。
表7對肺纖維化模型小鼠肺系數(shù)的影響
注與空白對照組比較，**P＜0.01；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗6 對大鼠肝腫瘤抑制的比較 實驗動物Wistar大鼠，150g-180g，雌雄不分。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3 二乙胺丹參酚酸A； 實驗試劑戊巴比妥鈉。
實驗儀器銀夾；測量儀。
實驗方法將大鼠隨機分組生理鹽水組，本發(fā)明實驗藥物組；大鼠作W256的肝內(nèi)接種，接種7天后，用戊巴比妥鈉按35mg/kg的劑量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，測量肝上腫瘤表面最大徑(a)和最小徑(b)，按(a*b2)/2＝V(腫瘤體積)。分離胃、十二指腸動脈、肝總動脈和肝固有動脈，結(jié)扎胃、十二指腸動脈遠端，以銀夾阻斷肝總動脈，于手術放大鏡下在胃十二指腸動脈上切口并插入外徑0.3mm導管后再送入肝固有動脈，然后按實驗分組分別注入受試藥物，術后拔管結(jié)扎胃十二指腸動脈，放開肝總動脈銀夾，再縫合切口，將大鼠置于動物室待蘇醒，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，手術后8天，按上法檢測腫瘤體積。
實驗結(jié)果結(jié)果見表8 表8各組藥物對腫瘤的抑制比較
注與生理鹽水組比較**P＜0.01；與實驗藥物3組比較P＜0.05。
實驗7 抗衰老實驗 實驗動物老齡上海系小鼠。
本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3丹參丹酚酸F 實驗方法將小鼠隨機分組對照組，本發(fā)明藥物組、實驗藥物組，雌雄各半。本發(fā)明藥組每天灌胃給藥，對照組給予蒸餾水，共給藥3周。將小鼠斷尾取血50μl，按照鄰苯三酚自氧化的方法測定SOD的活性。將小鼠斷頭處死，取出肝臟，用濾紙吸去殘血，剪碎稱重，加生理鹽水，制備成1％勻漿，采用硫代巴比妥酸法測定肝組織中LPO的含量。
實驗結(jié)果結(jié)果見表9 表9對衰老小鼠SOD、LPO的影響
注與對照組比較**P＜0.01；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗8 對氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常的影響 實驗動物Wistar大鼠，150g-180g。
本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗藥物3組精氨丹酚酸A 實驗試劑烏拉坦；氯化鈣。
實驗儀器心電圖機。
實驗方法將大鼠隨機分為組生理鹽水對照組，本發(fā)明藥物組、實驗藥物組。大鼠20％烏拉坦經(jīng)腹腔注射麻醉(1.2mg/kg)后，仰臥位固定，針形電極插入動物四肢皮下，記錄標準肢體II導聯(lián)心電圖。若心電圖有缺血或其它異常表現(xiàn)，則從本實驗中剔除。尾靜脈緩慢注射受試藥物或等容量生理鹽水10min后，于10s內(nèi)經(jīng)尾靜脈推注完2％氯化鈣(140mg/kg)，觀察給藥后心律失常出現(xiàn)時間、持續(xù)時間、心律失常發(fā)生率及死亡率。
實驗結(jié)果尾靜脈注射2％氯化鈣可誘發(fā)實驗大鼠100％發(fā)生心律失常，死亡率高達100％；與生理鹽水組比較，本發(fā)明藥物物組能明顯推遲心律失常的發(fā)生(P＜0.01)，縮短心律失常的持續(xù)時間(P＜0.01)，能夠降低心律失常發(fā)生率及死亡率。實驗結(jié)果見表10 表10對氯化鈣誘發(fā)大鼠心律失常的影響
注與正常組比較**P＜0.01；與實驗藥物3組比較#P＜0.05。
實驗9 對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響 實驗動物Wistar大鼠，150g-180g。
實驗藥物 本發(fā)明新化合物 實驗試劑烏拉坦；烏頭堿。
實驗儀器心電圖機；恒流泵。
實驗方法將大鼠隨機分組生理鹽水對照組，本發(fā)明藥物組。麻醉、固定和記錄心電圖的方法同實驗8。尾靜脈緩慢注射受試藥物或等容量生理鹽水10min后，將10mg/L烏頭堿以10μg/(1ml/min)用恒流泵經(jīng)尾靜脈灌注。記錄大鼠出現(xiàn)室性早搏(VE)、室性心動過速(VT)、心室纖顫(VF)的時間，計算各組動物發(fā)生VE、VT、VF所需烏頭堿的用量，并進行組間比較。
實驗結(jié)果結(jié)果見表9。
表11對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的影響
注與正常組比較**P＜0.01。
實驗10 調(diào)節(jié)血脂作用的研究 實驗動物健康SD大鼠，體重240-260g。
實驗藥物 本發(fā)明藥物1
本發(fā)明藥物2
實驗試劑豬油；膽酸鹽；丙基硫氧嘧啶；吐溫80；膽固醇；丙二醇；蔗糖；肝素。
實驗儀器生化檢測儀；天平。
實驗方法將大鼠，適應性喂養(yǎng)一周以后，按體重隨機分為正常對照組、模型組、實驗藥物組。除正常對照組每天上午8點-9點灌胃1.0ml/100g的蒸餾水外，其余各組灌胃1.0ml/100g脂肪乳劑，組方為30％豬油、10％膽固醇、2％膽酸鹽、0.2％丙基硫氧嘧啶、20％吐溫80、20％丙二醇、10％蔗糖，用蒸餾水溶成100ml，連續(xù)10天。禁食12小時眶靜脈叢取血，檢測血清TC、TG、HDL-C及LDL-C含量，并按血清TC水平重新分組。調(diào)整分組后，各組大鼠每天上午按上述造模試驗方法給予脂肪乳劑，乳劑配方變?yōu)?0％豬油、5％膽固醇、2％膽鹽、0.2％丙基硫氧嘧啶、10％吐溫、10％丙二醇、5％蔗糖用蒸餾水溶成100ml，下午1點-2點按各組給藥劑量尾靜脈給藥，連續(xù)給藥4周，給藥量為20mg/kg。給藥4周結(jié)束后，禁食12小時，股動脈取血，一部分血液用1％肝素抗凝(約4ml)，用于血液流變學檢測。另一部分血液分離血清用于生化指標的檢測。試驗期間每周稱一次體重，按體重調(diào)整給藥量，并測定攝食量。給藥4周分別檢測血清TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。
實驗結(jié)果結(jié)果見表12 表12給藥4周對大鼠血脂的影響

注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
實驗結(jié)論通過上述藥理實驗表明，本發(fā)明新的化合物具有很好的治療心腦血管疾病等方面的藥理作用，充分說明本發(fā)明藥物組合物具有科學意義。
注將上述藥理實驗中的本發(fā)明藥物與本發(fā)明所述的任一化合物進行替換，其實驗結(jié)論與上述實驗結(jié)論相同。
注上述化合物經(jīng)過碳譜、氫譜的檢測，分析數(shù)據(jù)確定為所述的化合物。
二、制備實施例 實施例1 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F加入蒸餾水中，攪拌溶解后過濾，濾液滴加飽和無水碳酸鉀，調(diào)節(jié)PH值，室溫攪拌，析出固體。反應液過濾，真空干燥得黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.86，7.16，7.91，6.22，7.12，6.86，6.88，6.72，7.16。
碳譜(ppm)128.5，130.2，148.8，146.4，116.4，120.3，148.0，115.6，170.0，129.2，113.6，147.2，146.5，117.2，120.4，137.4，120.2。
實施例2 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法取丹參酚酸F，加入甲醇中，滴入硫酸，氮氣保護下啟動磁力攪拌，并加熱至回流。TLC檢測反應完畢，將反應液旋蒸至干，剩余物加入乙酸乙酯和水混合液，分出乙酸乙酯相，水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液旋蒸，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.86，6.99，7.91，6.22，6.92，6.86，6.81，6.82，7.26，3.73(OCH3)。
碳譜(ppm)127.5，129.2，148.8，147.4，115.4，120.3，147.7，116.1，169.5，129.2，113.6，145.2，145.5，117.2，120.0，137.3，120.2，52.0(OCH3)。
實施例3 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法在氮氣保護下加入丹參酚酸F，無水異丙醇，濃硫酸；攪拌升溫，出現(xiàn)回流現(xiàn)象，TLC檢測反應完畢。將反應液旋蒸至干，剩余物加入乙酸乙酯和水混合液，分出乙酸乙酯相，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋蒸，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得淺黃色泡沫狀固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.85，7.13，8.01，6.25，7.02，6.84，6.87，6.74，7.20，4.31(CH)，1.35(2CH3)。
碳譜(ppm)127.8，127.0，148.1，146.8，114.9，120.0，145.9，116.7，166.9，127.3，113.4，146.6，146.1，117.0，120.3，137.0，120.5，68.6(CH)，24.0(2CH3)。
實施例4 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F加入無水丙酮中，攪拌溶解后加入無水碳酸鉀，降溫至0℃滴加硫酸二甲酯，滴加完畢，室溫反應，TLC檢測反應完畢。反應液過濾，濾液減壓蒸干。將得到的固體溶于氫氧化鈉-甲醇溶液中，回流反應，TLC檢測反應完畢。反應液過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)PH值為酸性，減壓蒸干，用乙酸乙酯萃取，合并有機相，干燥，過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得四甲基丹參酚酸F。
氮氣保護下四甲基丹參酚酸F，加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，得淡黃色粉末。氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將間氟苯酚滴入反應體系中，滴畢，室溫反應，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.76，7.05，7.98，6.24，6.97，6.82，6.83，6.77，7.13，6.94-7.02(-Ph-)，3.70(4OCH3)。
碳譜(ppm)127.8，128.2，147.0，148.1，114.4，119.6，146.0，115.6，167.3，128.5，112.6，147.7，146.0，115.2，119.7，137.1，120.3，147.0，123.2，115.9，159.7。
實施例5 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F加入二氯甲烷中，攪拌溶解后加入三乙胺，降溫至0℃滴加乙酰氯，滴加完畢，繼續(xù)反應，TLC檢測反應完畢。向反應液中滴加水，分液，有機相水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋蒸，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得淺黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.84，7.18，8.08，6.23，7.02，6.85，6.89，6.78，7.17，2.1(4CH3)。
碳譜(ppm)128.7，129.9，149.0，147.2，116.1，121.5，148.0，115.6，170.6，130.4，114.3，146.0，145.3，121.9，123.6，137.2，119.9，20.1(4CH3)，169.0(4C＝0)。
實施例6 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F加入DMF中，再加入無水二氯甲烷和氟化鉀，攪拌后升溫，110℃反應，TLC檢測反應完畢。反應液過濾，濾液倒入水中，調(diào)PH值后，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液旋蒸，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.76，6.95，8.02，6.24，6.96，6.76，6.87，6.72，7.15，5.90(4CH2)。
碳譜(ppm)126.8，128.4，147.3，147.9，114.5，119.3，147.8，116.6，170.1，128.0，113.1，146.7，147.0，118.2，119.3，137.4，120.0，101.2(2CH2)。
實施例7 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F加入無水DMF中，攪拌溶解后加入無水碳酸鉀，室溫滴加烯丙基溴，滴加完畢，80℃反應，TLC檢測反應完畢。反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得黃色固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.68，7.04，7.99，6.25，7.07，6.79，6.86，6.71，7.16，3.73(OCH3)，5.14-6.08(12H)，4.55-4.954(CH2)。
碳譜(ppm)126.2，130.8，146.5，147.8，114.2，119.7，146.7，118.1，169.5，128.5，112.2，145.7，145.5，115.7，119.2，136.5，120.4，116.4(4CH2)，133.6(4CH)，66.5-73.7(4CH2)。
實施例8 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F，加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，得淡黃色粉末。氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將N-異丙基哌嗪滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.56，7.13，8.06，6.31，6.92，6.76，6.81，6.82，7.20，4.31(CH)，1.35(2CH3)，2.52-3.16(4CH2)，2.27(CH3)。
碳譜(ppm)128.5，120.2，148.8，146.4，116.4，120.3，144.0，118.9，162.8，129.2，113.6，147.2，146.6，117.2，120.4，136.0，118.5，46.2-55.7(4CH)，43.1(CH3) 實施例9 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F，加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，得淡黃色粉末。氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將2-羥基丙胺滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.66，6.99，7.92，6.27，7.12，6.76，6.83，6.69，7.13，2.80-4.12(3H)，1.21(CH3)。
碳譜(ppm)127.5，127.5，147.3，146.9，115.7，120.6，145.4，117.9，166.7，128.3，113.2，147.7，146.3，117.5，120.8，136.5，118.7，50.8(CH2)，68.3(CH)，22.0(CH3)。
實施例10 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法在氮氣保護下，二亞甲基二氧丹參酚酸F加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將N-烯丙基哌嗪滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.86，7.12，7.96，6.18，7.09，6.84，6.89，6.77，7.15，2.71-3.18(4CH2)，3.88-6.15(3H)。
碳譜(ppm)125.5，128.0，147.3，148.6，116.5，119.5，147.3，116.8，170.7，128.4，113.3，146.5，144.9，117.2，119.0，137.8，120.2，101.6(2CH2)，93.1(CH)，45.0-55.2(4CH2)，147.3(CH)。
實施例11 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下四乙基丹參酚酸F加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將N-乙基哌嗪滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.78，7.14，7.99，6.15，7.17，6.79，6.86，6.73，7.18，0.90-1.51(5CH3)，2.30-4.18(8CH2)。
碳譜(ppm)127.2，131.5，146.0，145.9，115.8，118.8，145.4，117.7，169.5，127.4，115.8，145.4，144.9，115.7，116.2，137.9，120.4，45.0-67.2(9CH2)，12.1-16.7(5CH3)。
實施例12 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F，加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，得淡黃色粉末。氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將異丙胺滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.83，7.16，8.00，6.27，7.08，6.88，6.96，6.85，7.13，1.25(2CH3)，3.94(CH)。
碳譜(ppm)126.7，128.9，149.0，147.6，116.9，120.5，144.8，116.9，166.4，130.2，113.7，146.0，146.2，116.4，120.6，138.2，120.5，23.3(2CH3)，41.1(CH)。
實施例13 原料為丹參丹酚酸F； 制備方法氮氣保護下丹參酚酸F，加入無水乙醚，冰浴下向反應液中滴加草酰氯，滴畢，室溫反應，將反應液減壓蒸干，得淡黃色粉末。氮氣保護下將此固體溶于四氫呋喃中，并加入無水碳酸鉀，冰浴下將四氫呋喃溶液(含甘氨酸)滴入反應體系中，滴畢，室溫反應過夜，反應液過濾，濾液減壓蒸干，柱層析純化，收集產(chǎn)品相，旋蒸至干得固體，得到下述化合物
以得到的化合物為活性成分組成藥物組合物，或者制備成藥物制劑； 得到的化合物圖譜數(shù)據(jù)如下 氫譜(ppm)6.82，7.18，8.01，6.22，7.18，6.85，6.93，6.75，7.16，3.90(CH2)。
碳譜(ppm)126.0，129.9，146.8，147.5，115.7，120.8，145.4，117.3，167.8，126.9，113.3，146.2，146.8，115.9，121.1，137.8，120.3，43.0(CH2)，173.2(COOH)。
注上述核磁共振儀器型號ARX400；核磁試劑鹽為氘代甲醇，其他為氘代丙酮。
注本發(fā)明所要求保護的具體技術方案，不限于上述實施例所表達的技術方案的具體組合。
權利要求
1.化合物
其中R1-R4是H、C2-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁酰基和戊?；械囊环N，或R1和R2、R3和R4一起形成-O-(CH2)n-O-(n＝1-5)；其中R5是H、鹽、芳香烴、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體中的-種；其中R1-R5不能同時為H。
2.化合物
其中R1-R4是H、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲?；?、乙酰基、丙?；?、丁?；⑽祯；?0種L-氨基酸中的一種，或R1和R2、R3和R4一起形成-O-(CH2)n-O-(n＝1-5)；其中R5是C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、-NHCH(OH)(CH2)nCH3(n＝1-3)、
中的一種，其中R6是H、C1-C6直鏈飽和烷基、C1-C6直鏈飽和烷基各種支鏈化的同分異構體、C1-C6不飽和烷基、C1-C6不飽和烷基支鏈化同分異構體、甲?；?、乙酰基、丙?；⒍□；臀祯；械囊环N。
3.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中R5中芳香烴為苯基，其任選的被鹵素、-OH、C1-C6-烷基和C1-C4-烷氧基中任意基團取代1-3次。
4.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其中化合物鹽為Na、K、Li、Ca、Mg鹽中的一種。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物，其中化合物為活性成分組成藥物組合物。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物，其中化合物為原料制備的藥物制劑。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。
8.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療肝損傷和肝纖維化藥物中的應用。
9.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療肺纖維化藥物中的應用。
10.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療心率失常藥物中的應用。
11.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療血脂異常藥物中的應用。
12.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。
13.根據(jù)權利要求1或2所述的化合物在制備治療抗衰老藥物中的應用。
14.根據(jù)權利要求6所述的藥物制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑或凍干粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新發(fā)現(xiàn)的化合物及其藥用用途，其特征在于將丹參丹酚酸F進行結(jié)構改造，通過穩(wěn)定性實驗、Lop測定、藥效學實驗等篩選出穩(wěn)定性、膜通透性好、生物利用度高的新化合物，在治療心腦血管等疾病方面具有更好的藥理作用。
文檔編號C07C69/732GK101768080SQ20081024672
公開日2010年7月7日 申請日期2008年12月30日 優(yōu)先權日2008年12月30日
發(fā)明者顧群, 孫學偉, 李志剛, 徐春霞, 孫德杰, 米長江, 金治剛 申請人:北京本草天源藥物研究院