可溶性il-17ra/rc融合蛋白以及相關(guān)方法

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專利名稱：：可溶性il-17ra/rc融合蛋白以及相關(guān)方法可溶性IL"17RA/RC融^^白以A^目關(guān)方法
背景技術(shù)：
：細(xì)胞因子是介導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)的可溶性小蛋白質(zhì)，所g物學(xué)效應(yīng)包括對多種細(xì)胞類型的生長和分化的調(diào)節(jié)(參見例如，AraiWW，j朋汰及ev.fiM微59:783(19卯)；Mosma叫C"/r.0/;/汰/附附腳/15:311(1991);PaulandSeder，ce//76:241(1994))。屬于細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)包括白細(xì)胞介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子和其他的調(diào)節(jié)性分子。例如，人類白細(xì)胞介素-17是一種刺激白細(xì)胞介素-6、胞內(nèi)粘附^1、白細(xì)胞^"-8、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子和前列腺素E2的表達(dá)的細(xì)胞因子，它還參與了CD34"HtiL前體選擇成熟為嗜中'l!i^立細(xì)胞的過程(Yao"",//附/w"/w/:755:5483(1995);Fossiez"/五平她d甜2593(1996))。結(jié)合細(xì)胞因子的受體逸常由一種或多種膜內(nèi)在蛋白質(zhì)構(gòu)成，它們以高親和力結(jié)合細(xì)胞因子，并將這一結(jié)合事件通過某些受體亞基的胞質(zhì)部分傳導(dǎo)至細(xì)胞?；诟鞣N細(xì)胞因子受體的J!^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的相似性，可以將各種細(xì)胞因子受體分為幾類。已經(jīng)證實(shí)的一些細(xì)胞因子及其受體的體內(nèi)活性，表明了雞的細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、細(xì)胞因子激動(dòng)劑和細(xì)胞因子拮抗劑具有臨床應(yīng)用前景，并且也表明需要這些其他的細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、細(xì)胞因子激動(dòng)劑和細(xì)胞因子拮抗劑。例如，已經(jīng)證實(shí)的促炎細(xì)胞因子家族的體內(nèi)活性，表明了促炎襯的拮抗劑具有多種臨床應(yīng)用前景，并且樣明需要這些促炎襯的拮抗劑。圖1A和lB是人類IL-17RCxl(SEQD)NO:2)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。對于密碼子被外顯子/內(nèi)襯接頭剪接的那些絲酸，已除去接頭部分以將完整的密碼子包含在內(nèi)。圖2A和2B是人類IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。圖3是人類IL"17RA(SEQIDNO:21)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。5圖4A和4B是本文所述的位于SEQIDNO:157和158中的一種本發(fā)明優(yōu)選的可溶性多肽的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。這一可溶性多肽既包括來自人類IL-17RA(SEQIDNO:21)的外顯子，也包括來自人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的外顯子。圖5是使用實(shí)施例34所述方法進(jìn)行的一種典型測定的結(jié)果的示意圖。該圖;WPrizm軟件程序生成的。Y值4議標(biāo)準(zhǔn)化的MFI值，所i^標(biāo)準(zhǔn)化過程;l將只有配體的孔的MF1值設(shè)為最大值(100。/。)，將沒有配體/沒有可溶性受體的對照孔的MFI值設(shè)為最小值(0。/。)，由此表示配體與細(xì)胞的結(jié)合百分比。用軟件計(jì)算了每條曲線的IC5(Ht。圖6顯示了在移植物抗宿主疾病(GVHD)的小鼠模型中橫月mlL-17RA-Fc進(jìn)行治療的效力。將受體小鼠(C57BL/6xDBA/2Fl)分至各處理組中(PBS或mlL-17RA-Fc)。通itJtM內(nèi)注射(每次注射150照)，從而對鼠進(jìn)行IL-17RA誦Fc治療，在-l天時(shí)進(jìn)行第一次注射，之后每隔一天注射一次，直至第15天。在第0天時(shí)，將來源于B6小鼠的8xl(T個(gè)^^脾淋巴細(xì)自過靜脈內(nèi)注射至受體小鼠(C57BL/6xDBA/2F1(BDF1);每組n-10)體內(nèi)。每周對小鼠的體重變化監(jiān)測3次，體重變化是這一模型中疾病惡化的特征性指標(biāo)。在H7RA-Fc治療組的小鼠中，體重下降并不嚴(yán)重(由空心三角形表示)，并JL^著小于PBS對照組的體重下斷由實(shí)心方^4示)(p<0.05)。M實(shí)施方式本發(fā)明通過提W1炎細(xì)胞因子IL-17A和IL-17F的拮抗劑滿足了上述需要。糾而言，所述促炎細(xì)胞因子IL-17A和IL-17F具有高度的序列相似性，并具有許多共同的生物學(xué)性質(zhì)，而且都由激活的T細(xì)胞產(chǎn)生。它們都作為可^ii各種自身免疫性和炎性疾病進(jìn)程的因子，所述疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和哮喘。事實(shí)上在一些人類疾病的小鼠模型中，能夠抑制IL-17A功能的試劑顯著斷氐了疾病的發(fā)病率和嚴(yán)重^JLIL-17A通過與其同源受體(cognatereceptor)IL>17受^^IL-17R)^目互作用而介導(dǎo)其效應(yīng)，但是還未識別到IH7F的受體。以前我們已經(jīng)才pLit了IL-17RCAIL-17A和IH7F二者的受體，并且以相近的高親和力與二者結(jié)合。另一方面，IL-17R以高親和力與IL-17A結(jié)合，^a僅以非常4氐的親和力與IL-17F結(jié)合。與上述^it^目一致的是，已顯示可溶形式的IL-17R4表達(dá)6任一種受體的細(xì)胞中阻斷IL-17A的結(jié)^^和信號傳導(dǎo)，但是它不M擾IH7F與IL-17RC的結(jié)合或IL-17F對IL^7RC的作用。既然有人已經(jīng)提出IL-17A干預(yù)可以作為對一些自身免疫性疾病的有效療法，那么使用能夠阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL47F的活性的本發(fā)明的拮抗劑應(yīng)該能夠比僅耙向這兩種細(xì)胞因子之一的療法更l阮勢，所ii^發(fā)明的拮抗劑包括可溶性的IL-17RC和IL"17RC/IL-17RA受體。除了相關(guān)組合物和方法"卜，本發(fā)明還提供了上述拮抗劑用于炎性疾病的用途。A)綜述免疫相關(guān)疾病和炎性疾病是相當(dāng)復(fù)雜并且通?；ハ嚓P(guān)聯(lián)的多種生物途徑的表現(xiàn)或結(jié)果，所述生物途^^正常生理M下對于下述過程非常重要對損害或損傷的應(yīng)答，對損害或損傷的修復(fù)，以^t于外來生物體產(chǎn)生先天或后天的防御。當(dāng)上^常生^it徑導(dǎo)致附加的損害或損傷時(shí)就會(huì)發(fā)生疾病或病癥，所述損害或損傷可能直接與應(yīng)答的強(qiáng)度相關(guān)，或作為異常調(diào)節(jié)或itW，J激的結(jié)果，或作為自身的反應(yīng)，或;Ui述方式的組合。雖然上述疾病的發(fā)生通常會(huì)涉及多個(gè)步驟的途徑，并通常會(huì)涉及多種不同的生物系統(tǒng)/途徑，但是對上述一種或多種途徑中的關(guān)銑吝、進(jìn)行干預(yù)仍可具有緩解性或治療性效果。治療性干預(yù)可以通過拮抗有害過禾l/途徑或刺激有利過銜途徑而進(jìn)行。已經(jīng)知道并已廣j^JWf究過許多免疫相關(guān)疾病。這類疾病包括免疫介導(dǎo)的炎性疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的腎臟疾病、肝膽管疾病、炎'病(IBD)、銀屑病和哮喘)、非免疫介導(dǎo)的炎性疾病、傳染性疾病、免疫缺陷性疾病、瘤形成等。r淋巴細(xì)胞cr細(xì)胞)是哺乳動(dòng)物的免^i答的一個(gè)重要部分。T細(xì)胞，識別由主要組織相容性復(fù)^^(MHQ中的基因編碼的自身^"(self-molecule)相關(guān)的抗原。所述抗原與MHC^1—^J(L于抗原呈遞細(xì)胞、病毒感染的細(xì)胞、癌癥細(xì)胞、移植物等的表面。T細(xì)胞系統(tǒng)會(huì)清除這些可負(fù)N"宿主哺乳動(dòng)物的Ai:產(chǎn)生iW的發(fā)生改變的細(xì)胞。T細(xì)胞包括輔助T細(xì)J^細(xì)J^性T細(xì)胞。輔助T細(xì)胞在識別到抗原呈遞細(xì)胞上的抗原一MHC復(fù)合物后會(huì)大量增殖。輔助T細(xì)胞還分泌多種細(xì)胞因子，即淋巴因子，它們在B細(xì)胞、細(xì)胞條性T細(xì)胞和多種參與免C^答的，細(xì)胞的激活中起關(guān)4t性作用。7在體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中的一個(gè)關(guān)鍵事件是輔助T細(xì)胞的激活和克隆擴(kuò)增。輔助T細(xì)胞的激活過^^始于T細(xì)胞受體(TCR)""CD3復(fù)合物與抗原呈遞細(xì)I^4面上的抗原一MHC的相互作用。這一相互作用介導(dǎo)了生物化學(xué)事件并導(dǎo)^tn^2的高親和性受體(有時(shí)AlL-4的高親和性受體)的表達(dá)，所iii物化學(xué)級聯(lián)事^^導(dǎo)靜息的輔助T細(xì)J5&i^細(xì)胞周期(G0期轉(zhuǎn)變至Gl期)。激活的T細(xì)皿過增殖和分化周期，成為記憶細(xì)M效應(yīng)細(xì)胞。除了通過TCR介導(dǎo)的信號"卜，T細(xì)胞的激活還涉及由抗原呈遞細(xì)JW^L的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的或通過與抗原呈遞細(xì)胞和1細(xì)胞上的膜結(jié)*子的相互作用誘導(dǎo)的另外的共刺激。另夕卜，R^呈遞細(xì)J^面Ji^達(dá)的B7^"與T細(xì)J^面Ji^達(dá)的CD28和CTLA-4^"之間的相互作用也導(dǎo)致T細(xì)胞的激活。激活的T細(xì)J^4達(dá)更多數(shù)量的細(xì)胞粘附^"，例如ICAM-1、整聯(lián)蛋白、VLA-4、LFA-1、CD56等等。在混合淋巴細(xì)J^養(yǎng)物或混合淋巴細(xì)J3^應(yīng)物(MLR)中的T細(xì)J^f殖是一種^^物刺激免疫系統(tǒng)的能力的公認(rèn)指標(biāo)。在多種免a答中，炎癥細(xì)胞浸潤受傷或感染的位置。遷移細(xì)胞可為嗜中'l^細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)M淋巴細(xì)胞，它們都可通過受影響組織的組織學(xué)檢查而確定。參見Cw/r做/iVotoco/y/附附"wofogy，ed.JohnE.Coligan，1994，.JohnWiley&Sons,Inc。可通過抑制免a答治療免疫相關(guān)疾病。能抑制有免疫刺激活性的分子的可溶性受體和/或中和抗體對于治療免疫介導(dǎo)疾病和炎性疾病將是有利的。可以應(yīng)用能抑制免C^答的W(直接應(yīng)用蛋白質(zhì)或通過4MM激動(dòng)劑)來抑制免M答，并由jH^^免疫相關(guān)疾病。白細(xì)胞襯-17(IL-17A)已被識別為松鼠猴(Saimiri)親r淋巴細(xì)胞皰療病毒(HSV)編碼的蛋白質(zhì)的細(xì)胞直系同源物(參見Rouvieretal.，J.ImmunoL,150(12):5445-5456(1993);YaoetaL，J.Immunol"122(12):5483-5486(1995)和Yaoetal"Immunity,3(6):811-821(1995))。后續(xù)的鑒定研究顯示，這一蛋白是負(fù)化多種外周組織中誘，A^答的有效細(xì)胞因子。IL-17AA—種大小約為32kDa的由^i鍵連接的同二聚體細(xì)胞因子，它僅由CD4+激活的記憶T細(xì)J!fe^成和分泌(參見Fossiezetal.，IntRev.ImmunoL，16:541-551(1998)的綜述)。特別地，IL-17被合成為一種帶有一個(gè)19至23個(gè)g的N端信號序列的155個(gè)M酸的前體多肽，并且以由二"^#^接的同二聚##蛋白的形式分泌。D-17A公開于W09518826(1995)、WO9715320(1997)和W09704097(1997)以及美國專利No.6，063^372。8雖然H7A的組織分布范圍很窄，但是它卻^L現(xiàn)對多種類型的細(xì)JI^Rr有多重生物學(xué)活性。已經(jīng)發(fā)5UL-17A能夠刺激多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生。它誘導(dǎo)粘附細(xì)胞例如成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6、IL"8、IL-12、白血病抑制因子(LIF)、前列腺素E2、MCP-1和G"CSF。IL-17A還能夠誘導(dǎo)ICAM-1的表面表達(dá)、T細(xì)胞的增殖和CD34+人類祖細(xì)胞的生長以及分化為嗜中性粒細(xì)胞。IL-17A還參與骨代謝，并且它還被證明在以激活的T細(xì)胞的存在和TNFw的產(chǎn)生為特征的病理性疾病中起重JHt用，所述病理性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨^LA^物的柏動(dòng)(VanBezooijenetal.，J.BoneMiner.Res.14:1513-1521(1999))。已發(fā)現(xiàn)來自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液組織的激活T細(xì)胞分泌的lL-17A數(shù)量高于來自正常個(gè)體或骨關(guān)節(jié)炎患者的量(ChabaudetaL，ArthritisRheum.42:963-970(1999))。表明這種促炎細(xì)胞因子^^Mii:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的滑液炎癥。除了IL"17A的促炎作用夕卜，它似乎iiit過另一種機(jī)制參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理學(xué)。例如，已顯示IL-17A可以誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化因子(ODF)的mRNA在成骨細(xì)胞中的表ii(Kotokeetal.，J.Clin.Invest,103:1345-1352(1999))。ODF刺激祖細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞，破骨細(xì)胞是參與骨吸收的細(xì)胞。由于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液中IL-17A的水平顯著增高，因此IH7A誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成似乎在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨吸收中起關(guān)鍵作用。IL-17A還被認(rèn)為在某些其他自身免疫性障礙例如多發(fā)性硬化中起關(guān)鍵作用(Matuseviciusetal.，Mutt.Scler.，5:101-104(1999))。另外i3L^示，^LA類巨噬細(xì)胞中，IL-17A通iiJ&內(nèi)信號傳導(dǎo)刺激Ca、iiA^和[cAMP]的減少(Jovanovicetal.，J.Immunol.,160:3513(1998))。用IL"17A^h理成纖維細(xì)胞^i秀導(dǎo)NF-KB的激活(Yaoetal.，Immunity,3:811(1995)，JovanovicetaL，見上文)，而用IL-17A處理巨噬細(xì)胞會(huì)激活NF-KB和促細(xì)胞分裂劑激活的蛋白激斷Shalom-Bareketal.，J.Biol.Chem.，273:27467(1998))。此外，IL-17A還與參與骨和軟骨生長的哺乳動(dòng)物細(xì)胞因子樣因子7具有序列相似性。與IL-17A多肽具有序列相似性的雞蛋白質(zhì)有人類胚胎來源白細(xì)胞^"相關(guān)因子(EDIRF)和白細(xì)胞^h素-20。與IL-17A的多種作用相一致的是，發(fā)現(xiàn)IH7A的細(xì)胞表面受體廣;^達(dá)于許多組織和細(xì)胞類型中(YaoetaL，Cytokine,9:794(1997))。雖然才艮據(jù)人類IL-17A受體(IL-17R)的^^酸序列(866個(gè)^t^酸)預(yù)計(jì)該蛋白具有一個(gè)單跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)525個(gè)JL^酸的長胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，但是該受體序列是獨(dú)特的，并不類似于來自細(xì)胞因子/生長因子受體家族的任何受體的序列。將這一發(fā)現(xiàn)與IL-17A本身與雞已知蛋白不相似這一i人i。4目結(jié)合，表明H7A及其受體可能屬于一^Ht號傳導(dǎo)蛋白和受體的新家族。已經(jīng)證實(shí)H^17A的活性是通it^合其獨(dú)特的細(xì)#面受體而被介導(dǎo)的，其中以前的研究顯示將T細(xì)胞與可溶形式的IL-17A受體多Jibf目接觸會(huì)抑制由PHA、伴刀豆球蛋白A和抗TCR單克隆^/^誘導(dǎo)的T細(xì)自殖和IL^2的產(chǎn)生(Yaoetal.，J.Immunol.,155:5483-5486(1995))。因此，人們對于識別和表征與已知細(xì)胞因子受體特別AIU7A受體具有同源性的新多肽具有濃厚的興趣。IL-17F的表頓式似乎與IH7A的相似，以至于它僅包M活的CD4十T細(xì)^單核細(xì)胞(Starnesetal.J.Immunol.167:41374140(2001))。已經(jīng)證實(shí)IL-17F在成纖維細(xì)胞中諸導(dǎo)G"CSF、IL-6和IL"8(HymowitzetaLEMBOJ.20:5322-5341(2001》，在內(nèi)皮細(xì)胞中諸導(dǎo)TGF-p(StarnesetaLJ.Immunol.167:4137-4140(2001》.最近報(bào)道了一種由樹突細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子IL-23可以——主要在記憶T細(xì)胞中-^h導(dǎo)IL"17A和IL-17F的產(chǎn)生(AggarwaletaLJ.Biol.Chem.278:1910-1914(2003))。jH^卜，在患關(guān)節(jié)炎和哞喘的^n^體內(nèi)均顯示出IL-17A和H^17F二者的it^iiiL上調(diào)(參見Moseleyetal.CytokineGrowthFactorRev14:155-174(2003)的綜述)。對于關(guān)節(jié)炎而言，上述細(xì)胞因子作用方式的特征為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的軟骨和關(guān)節(jié)損傷。例如，已經(jīng)證實(shí)在關(guān)節(jié)軟骨移植物中，IH7A聚糖和膠原的合成來增強(qiáng)基質(zhì)的降解(Caietal.Cytokine16:10-21(2001);A加retalArthritisRheum44:2078-2083(2001》。與IL-17A相似，已顯示在小鼠體內(nèi)IH7F的it4達(dá)也會(huì)增加肺嗜中'l^細(xì)胞的募集，并導(dǎo)致Thl相關(guān)細(xì)胞因子4^中的表i^f加，所述Thl相關(guān)細(xì)胞因子包括IL-6、IFN個(gè)IP誦10和MIG(Starnesetal.J.Imm皿oL167:4137-4140(2001))。M受變應(yīng)原攻擊的哮喘患者的T細(xì)胞中IH7F也會(huì)上調(diào)(KawaguchietalJ.Iimmmol167:44304435(2001))，i^50L-17F能誘導(dǎo)NHBE中IL-6和IL-8的產(chǎn)生。與IL-17A不同的是，IH7F似乎在體外能夠抑制血管發(fā)生(StarnesetaLJ.Immunol167:4137-4140(2001))。在多種人類組織中用RNA印跡^^r測不到IL-17F的mRNA，但發(fā)現(xiàn)它在激活CD4十T細(xì)^單核細(xì)JJ^會(huì)顯著itM^誘導(dǎo)。同樣，在小鼠中，發(fā)現(xiàn)Th2細(xì)胞和肥大細(xì)胞(mastcell)在被激活時(shí)會(huì)表達(dá)IL-17F。(參見Dumont^ExpertOpin.Ther.Patents13(3)(2003))。與IL"17A類似，在小鼠中^JLIL-17F的表達(dá)可組國23上調(diào)。IL-17細(xì)胞因子/受體家族似乎4化了細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)獨(dú)特的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，這個(gè)系統(tǒng)可以為免^1答和炎癥應(yīng)答的處理提#—種新的手段。因此，本發(fā)明基于對新的IL-17家族受體IL47RC以及它與IL"17A和IL-17F二者相結(jié)合的能力的發(fā)JL起初是在使用生物信息學(xué)手段尋找與IL"17RA相關(guān)的蛋白質(zhì)時(shí)識別出了IL-17RC，并且是通欲碼IH7受糾目關(guān)蛋白IL-17RC的cDNA識別出它的。雖然IL-17RC與能結(jié)合IL-17家族典型成員IH7A的IL-17受體(IL-17RA)具有明顯的相似性，而且也識別了IL-17細(xì)胞因子家族的五個(gè)其他成員，但是之前并未報(bào)道IL-17RC的特異性配體。然而如2005年6月10日提交的z〉布號為No.20060002925的美國專利申請No.ll/150^533所述，IL-17A和IH7F被識別為IL-17RC的特異性配體。具體而言，使用被編碼人類IH7RA(hlL-17RA)或IL-17RC(ML-17RC)的構(gòu)建體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的幼倉鼠腎細(xì)胞(BHK)識別了上述配體。佳月針對hlL-17RA的單克隆^M^針對hlL-17RC的多克隆抗血清，通過FACS分析確證了受體在表面的表達(dá)。為評估細(xì)胞因子的結(jié)合，4M了生物素化形式的人類IL-17A、C、D、E和F，以及熒光染料綴合的鏈親和素，通過流式細(xì)胞^測細(xì)胞因子與^L轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合。結(jié)果清楚g^^定轉(zhuǎn)染的表達(dá)ML-17RA的BHK細(xì)胞不出所料地明顯結(jié)合人類IL-17A(hn^l7A),而用空表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞不能與所測試的WIL"17家;^員相結(jié)合。i^見察到了人類IL-17F(ML-17F)與hlL-17RA轉(zhuǎn)染細(xì)胞的相對較弱的結(jié)合，但是所測試的IL-17家族的^成員沒有明顯的結(jié)合。還檢測了，BL"17家;^員與WL"17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合，注意到這些細(xì)Jf&^45(L出與ML-17F的明顯結(jié)合。彭卜，觀察到這些細(xì)胞與MI^17A明顯結(jié)合，但是不與hlL"17C、D或E結(jié)合。上述數(shù)^iiE明ML-17RCAhlL-17F和hlL-17A二者的共同受體。此外，還檢測了各種細(xì)胞因子濃度下的熒光水平，以確定WL-17A和F對于ML-17RA和hlL-17RC的相對親和力。通過比較M細(xì)胞因子在其轉(zhuǎn)染體上的平均熒光強(qiáng)度，注意到hlL-17A與WL-17RA的結(jié)合要比WL-17F強(qiáng)得多，但^f起來兩種細(xì)胞因子與hlL-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合都同樣好。^(i得關(guān)注的是，細(xì)胞因子與同時(shí)表達(dá)兩種受體的細(xì)胞的結(jié)合看^M^是加和性的，沒有協(xié)同性的跡象。接著，通過嘗試與未標(biāo)記的細(xì)胞因子的竟?fàn)幮越Y(jié)合，研究了這種結(jié)合的特染的BHK細(xì)胞-"^培養(yǎng)，并通itFACS定量分析結(jié)合的生物素化物質(zhì)的量7結(jié)果顯示hlL-17A和F與ML-17RC的結(jié)合都是特異性的，因?yàn)闈舛?^f增加的未標(biāo)記細(xì)胞因子^p擾生物素化物質(zhì)的結(jié)合。事實(shí)上，未標(biāo)記的hlL"17A和F可以有效地與生物素化形式的這兩種細(xì)胞因子相互竟?fàn)幗Y(jié)合ML-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞，這表明這兩種細(xì)胞因子以相近的親和力與hlL-17RC結(jié)合，并且它們的結(jié)合位點(diǎn)縱使不同也是有所重疊的。未標(biāo)記的H7A也能與生物素化的WL-17A和F有艦竟?fàn)幗Y(jié)合hlH7RA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，而^M示記的ML-17F絲出基本上不能與ML-17A竟?fàn)幗Y(jié)合hlL^17RA。這表明雖然hlH7F表現(xiàn)出結(jié)合hlL"17RA的特異性，^^1這種相互作用的親合度似乎比ML"17A和ML-17RA之間的相互作用要弱得多。進(jìn)行了飽和結(jié)合研究以測量WL^17A和F與WL-17RC和ML"17RA結(jié)合的親和力。在飽和結(jié)^^fr下，將穩(wěn)^JJihlH7RA或hlL"17RC的BHK細(xì)胞系與硪化的hlL-17A或F—起培養(yǎng)，以測定每種細(xì)胞因子對于每種受體的親和常數(shù)。hlL-17A以相近的親和力與hlL"17RA和ML-17RC結(jié)合《表l)。具體而言，如方法部分中所述，使用被所示受體轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞來測定對于hlL-17A和ML-17F的Kd值。結(jié)果顯示的是來自三次平行實(shí)驗(yàn)測定的平均Kd值。表lWL國17AML-17FML畫17RC(x1)10.6nM1.0nMML-17RA1.9nMi表示hlL-17RC的xl剪接變體。此夕卜，MH7F對WL-17RC的親和力與ML-17A對這一受體的親和力相當(dāng)接近(見上表l)。然而與使用生物素化細(xì)胞因子所得到的結(jié)^目一致的是，這表明雖然hlL-17A和F以相近的親和力與hlL-17RC結(jié)合，但是它們對hlL-17RA的親和力卻迥然不同。hlL-17RC以高親和力結(jié)合hn^r7A和F的這一觀察結(jié)果表明，表達(dá)ML-17RC的細(xì)胞對于WL-17A和F應(yīng)有相等的應(yīng)答能力。另一方面，由于hlL-17RA以高親和力結(jié)合WH7A，而與h!L-17F的相應(yīng)親和力要"j氐約100(Hi"，這表明表達(dá)ML-17RA的細(xì)胞在生理奈件下可能只對hlL-17A有應(yīng)答。在之前的研究中已顯示出ML-17RA的表達(dá)十分廣泛，但是^iHii了其在itjfiL細(xì)胞中的表達(dá)較高，而在絲組織中較低。因jtb^測了UL-17RC的表達(dá)，以確定各表#式中的重疊程度。RNA印跡分;tt顯示，H7RC在自織例如腎上腺、前列腺、肝l^甲;^J泉中表ii^平較高，而在JtiL組織中沒有可^r測的扇Ji。為進(jìn)一步研究這些受僻MfcitiL細(xì)胞中的表達(dá)，還用多^ltFACS分析^"測了生物素化WL-17A和F與外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)合。結(jié)杲昆示UL-17A幾乎與所檢測的所有PBMC亞群都結(jié)合，而H7F與任何上iiit群都沒有可檢測的結(jié)合。這一結(jié)果與hlL-17RA以高親和力結(jié)合hlH7A但不結(jié)合WL-17F的能力相符，而且與在PBMC中檢測不到hlL-17RC的inRNA的結(jié)果HM目符?？傊?，上述數(shù)據(jù)表明IL-17RC優(yōu)先在非itjk組織中表達(dá)，而IL"17RA優(yōu)先扭血細(xì)胞中表達(dá)。hlL"17A和F與ML-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的高親和力結(jié)合表明可溶形式的ML-17RC可能是一種有效的治療手段。這類分子可能是這兩種細(xì)胞因子的有效拮抗劑。為直接檢驗(yàn)上述推斷，以Fc-融^白的形式產(chǎn)生了可溶形式的人類hlL-17RC,并測試了它抑制H7A和F的結(jié)合的能力。然后將上i^t果與用可溶形式的UL-17RA獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。在結(jié)合反應(yīng)中使用了濃度*增加的WL"17RC-Ig或WL-17RA-Ig，并^^IFACS分析來評估可溶性受體對于生物素化細(xì)胞因子與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合的影響?？扇苄訳L"17RC以基本相同的程度抑制與WL^17A和F的結(jié)合，而IH7R家族的另一成員WL"17RD的Fc-融^^白卻沒有作用。另一方面，可溶性WL"17RA有,阻斷了WL-17A的結(jié)合，但是對WL"17F的結(jié)合^^L有作用。在^"測hlL-17A與造血細(xì)胞的結(jié)合時(shí)也得到了相似的結(jié)果。這一結(jié)合可以被ML-17RA-Ig和WL"17RC-Ig有放地阻斷，但不會(huì)自I^17RD-Ig阻斷。上述數(shù)提與親和力測量所得到的結(jié)目一致，表明可溶性受體與它們的膜錨定形式的作用相同。作為評估人類ML"17RC-Ig與hlH7A和F結(jié)合的能力的另一種方式，Biacore^才/Hf估了可溶性受體對這些細(xì)胞因子的親和力?？扇苄訫L"17RC以高親和力結(jié)合hlL-17A和F(42)，這為將這一試劑在體內(nèi)用作WL^17A和F兩者效果的拮抗劑的想法提供了額外的支持。具體而言，將可溶性受^t獲到芯片上，并如下所述J4ii行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。ND=沒有可檢測的結(jié)合。42<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由于人類的剪接變體非常多，因處我們僅針對這些分子的一個(gè)亞群進(jìn)行了初始實(shí)驗(yàn)。凈ici^擇用于這一分析的那些分子也不盡相同，有的含有外顯子7，有的不含有外顯子7，但是與小鼠的相應(yīng)^不同的是所有的剪接變體^^有整個(gè)外顯子8。存在于小鼠夕卜顯子8序列中部的隱藏剪接受體并不存在于人類外顯子8中。然而，所測試的，剪接變體可以含有或不含有WL-17RC外顯子12。這些變體被命名為UL-17RCxl(在外顯子組成上與上述的小鼠xl相同)、hlL^17RCx4(在外顯子組成上與上述的小鼠x4相同)、hEL-17RCx2和ML-17RCx7。另外，在293F細(xì)胞中短暫表iiil些剪接變體，并測試了它們結(jié)合生物素化的小鼠和A^類IL"17A和F的能力，測試結(jié)果總結(jié)于^3中。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表示完全包含于轉(zhuǎn)錄物中的外顯子。2(+)表示可檢測的明顯的細(xì)胞因子結(jié)合，所^合是^HFACS所測熒光的顯著增加而評估的。(-)表示熒光波有明顯的變化。與之前的實(shí)^^^f目一致的是，hlL-17RCxl可以與hlL-17A和F兩者結(jié)合，但是不與任一種小鼠細(xì)胞因子結(jié)合。hlL-17RCx4也可以與這兩種人類細(xì)胞因子結(jié)合，與其小鼠相應(yīng)分子類似，它可以結(jié)合mlL-17F但不結(jié)合mn^l7A。ML-17RCx2和x7不能結(jié)合測試的四種細(xì)胞因子中的^—種，但是它們在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表面有顯著的表達(dá)，因?yàn)獒槍L-17RC的多克隆^iL清能染色CD8+細(xì)胞(數(shù)據(jù)未示出)。上^合實(shí)驗(yàn)的結(jié)^4^定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞中^f到了很好的重復(fù)?？傊鲜鰯?shù)據(jù)支持了下i^論IL-17RC蛋白的關(guān)鍵部分是結(jié)合人類細(xì)胞因子所必需的。多種出版物都涉;SJL-17A,狄較少的出版物涉;SJL-17F,^H人為它們會(huì)加重小鼠體內(nèi)的J!^^誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)和人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的疾病進(jìn)程和嚴(yán)重程度。檢測了被膠原免疫而誘發(fā)CIA的小鼠的關(guān)節(jié)和引流淋巴結(jié)(DLN)中的mlL"17A和F兩者的表達(dá)。通過實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行的分析清楚地證實(shí)，與未免疫的對照相比，在患病小鼠的上述兩種組織中這兩種細(xì)胞因子均上調(diào)，清楚地表明表達(dá)與疾病相關(guān)。此外，ii^目同組織中檢測了mlL-17RA和mlL"17RC的相對表達(dá)。然而，在這種情況下，并沒有發(fā)現(xiàn)^"-受體的表達(dá)與疾病之間的可重復(fù)的相關(guān)性。而且，DLN與非造jfiL組織(后足討目比，表ii^JC平有明顯的差異。與前述研究人類受體表達(dá)的實(shí)M勤目一致，發(fā)現(xiàn)mlL-17RA4ilifiL組織中的表達(dá)更高，mlL-17RC在非造^L組織中的表達(dá)更高。這一數(shù)據(jù)表明mlH7A和mlL-17F表達(dá)的^L形式與疾病相關(guān)，^明這兩種必需受體在患病組織和正常組織中都有，a明中和這些細(xì)胞因子可食^1防止疾病J^的有效療法。因此，證明IH7A和F的同源受體為IL-17RC。值得注意的是，UL-17RC以相似的親和力結(jié)^WL"17A和F。由于這兩個(gè)IL-17家;^員具有55%的序列同一性，因此它們具有共同的受體可能也并不意夕卜。然而，UL-17RA與hlL"17A結(jié)合的親和力很高，但是與hlH7F結(jié)合的親和力JH^近100(HI"，&明在生理?xiàng)l件下WL-17RA不會(huì)結(jié)合hlL"17F。這暗示著表達(dá)hlL"17RC的細(xì)胞應(yīng)該對ML-17A和F都產(chǎn)生應(yīng)答，而^f5l^達(dá)hlL-17RA的細(xì)胞應(yīng)該^M"IL"17A有應(yīng)答。這一差異可能，響這些細(xì)胞因子對不同組織的作用。通#達(dá)分析，顯示雖然IL-17RA的表達(dá)十分廣泛，^L是它^itjk細(xì)胞中的表達(dá)更高，而IL-17RC傾向于在非itiL組織中表達(dá)而不4itjfe細(xì)胞中表達(dá)。與此一致的是人類外周血單核細(xì)胞的所有亞群都結(jié)合ML"17A，但郭不結(jié)合UL-17F。而且，&明非造血組織將會(huì)對IL-17A和F都有應(yīng)答，而itjk細(xì)l&4fMTL-17A有應(yīng)答。對于細(xì)胞因子與不同IH7RC剪接變體結(jié)合的這一檢測發(fā)現(xiàn)了受體中的細(xì)胞因子結(jié)合所必需的兩部分，這兩部分在小鼠和人類細(xì)胞因子的結(jié)^Nr性上有細(xì)微的差異。而且，不論所檢測的受體種類，對于細(xì)胞因子而言這些結(jié)^#性都是一致的。如^3中的數(shù)據(jù)所示，由于hBL-17A和Ff5l^合人類xl變體和人類x4變體，因此，外顯子12和整個(gè)外顯子8都是這些細(xì)胞因子結(jié)合IL-17RC所必需的。上述所有同種型#^有整個(gè)外顯子8和外顯子12,但是它們在是否含有外顯子7方面有所差異。ii4明夕卜顯子7不是結(jié)合人類細(xì)胞因子所必需的。從現(xiàn)有信息似乎可以明顯看出生成IH7A和n^l7F兩者功能的拮抗劑的重要性，賄信息表明IL-17A和F的表達(dá)與多種自身免疫性和炎性疾病的進(jìn)程都有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。這兩種細(xì)胞因子可誘導(dǎo)絲炎性細(xì)胞因子和趨化因子以及M金屬蛋白酶，它們會(huì)加重自身免疫性關(guān)節(jié)炎中的M^、和骨損傷。這"^劑可以作為與hL"17A和F有關(guān)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和務(wù)他炎性疾病的有效療法。因此，開發(fā)了可溶形式的人類IH7RC作為IL-17A和IL-17F兩者的拮抗劑。這些可溶性IL-17RC多肽是有治療效果的。然而，由于M因素，可溶性IL-17RCflb爭由SW技術(shù)中可用的多種不同生產(chǎn)系統(tǒng)分泌。而且分泌的量也不足以滿足工業(yè)生產(chǎn)的需要。因此，在本領(lǐng)域中需要開發(fā)能夠^L量表ii^分泌的IL-17A和IL-17F的拮抗劑，所述的表達(dá)量和分泌量能夠被放大至用于工業(yè)生產(chǎn)。因此，本發(fā)明通過提供可^Ji^分泌的IL"17A和IL-17F拮抗劑滿足了上述需要。M而言，本發(fā)明基于開發(fā)和發(fā)現(xiàn)了多種非天然存在的可溶fe^或可溶性多肽，所述非天然存在的可溶性襯或可溶性多肽能夠結(jié)合、拮抗和/或阻斷IH7A和IL"17F與其同源受體的結(jié)合。所述可溶性多肽包括IH7RC的一部分。所述可溶性多JI;a可同時(shí)包括IL"17RC的一^P^IL-17RA的一部分("IL畫17RC/IL國17RA")0圖4A和4B以;SJSEQIDNO:157和15鵬述了一種這樣的優(yōu)選實(shí)施方案。這種可溶性多肽包括人類IH7RA(SEQIDNO:21)的外顯子l-6和人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的外顯子8-16。更M而言，這種可溶性多肽是與Fc襯融合的，所述Fc分子例如SEQD)No:157和158中包含的Fc5。然而，本領(lǐng)域技#員可以容易地認(rèn)識到，可以4狄^fi^c^以及能導(dǎo)致形成二聚體的做輛襯。因此，IL-17F和IL"17A活性的拮抗劑，例如本發(fā)明的IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA可溶性受體，可用于炎性疾病的治療性療法，特別是作為IL-17F和IL-17A兩者的拮抗劑單獨(dú)或結(jié)合用于治療與這些M有關(guān)的疾病。此外，IL-17A和IL"17F活性的拮抗劑，例如本發(fā)明的可溶性受體，可用于，炎性疾病的治療性療法，例如在下列疾病的治療中可以(單獨(dú)M共同地)結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A，所述疾病例如銀屑病、特應(yīng)性和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、感染性>^克、多器官功能衰竭，炎'lt^損傷例如哮喘、慢性阻塞'l^病(COPD)、氣道高瓦應(yīng)性、慢性支氣管炎、過敏性哞喘、細(xì)菌性肺炎、銀屑病、濕滲，以及炎性腸病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病(Crohn，sdisease)、幽門螺^^桿菌(/^//cM"cte,/>^")感染、由于皿炎癥(即由于感染、損傷等)引起的內(nèi)粘連和/或,、系統(tǒng)性紅斑狼瘙(SLE)、多發(fā)，lt^化、系統(tǒng)*1±^化病、腎病綜合征、器官同種^^tt物排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、腎、肺、心臟等器官的移植排斥、M菌細(xì)胞壁(SCW)誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦A/牙周炎、皰務(wù)性間質(zhì)角膜炎、包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病的癌癥、血管M、再狹窄和川崎病。細(xì)胞因子受體亞基以多結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)為特征，包括一個(gè)配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個(gè)通常M信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的^結(jié)構(gòu)域。多聚體細(xì)胞因子受體包括單體、同二聚體(例如，PDGF受^oa和pp同種型，紅細(xì)胞生成素受體，MPL[血小M成素受體和G-CSF受體)、亞^p^有酉沐結(jié)合結(jié)構(gòu)域和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的異二聚體(例如PDGF受體ap同種型)和由具有不同功能亞基構(gòu)成的多聚體(例如H^2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、Hy7和GM-CSF受體)。一些受體亞基是多種受體所共有的。例如，AIC2B亞基AIL-3和GM-CSF受體所共有的組成部分，它本身不能結(jié)合配體，但包括一個(gè)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。許多細(xì)胞因子受體基于其結(jié)構(gòu)和功能^T被歸入四個(gè)相關(guān)家族中的一個(gè)。例如I型itife受體的特征在于具有一個(gè)包M守半MJL^J^WSXWS基序的結(jié)構(gòu)域。在某些itiL受體中還存在以_=^鍵環(huán)為特征的，結(jié)構(gòu)域，包括蛋白激酶結(jié)構(gòu)域、纖連蛋白m型結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)的綜述可參見Urdal，^汰及gw他M^C/^肌26:221-228，1991和Cosman，Q^toA/"e5:95~106，1993。通常認(rèn)為在促^^物體獲得新生物功能的選擇壓力下，在已有受體基因的復(fù)制過巻17中會(huì)產(chǎn)生新的受體家M員，導(dǎo)致產(chǎn)生多基因家族。因此家^員就^^有祖先基因的殘留痕跡，可以利用這些特征來分離和識別務(wù)他的家族成員。因此，本發(fā)明涉;SJI^17A和IL-17F的拮抗劑，所述拮抗劑能夠通過^""種配體對應(yīng)的一種或多種受體阻斷^種配體的結(jié)合和/或信號傳導(dǎo)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這類拮抗劑是基于圖l-4所示的IL-17RC的多肽結(jié)構(gòu)?；谑欠窈幸恍┨囟ǖ耐怙@子，IH7RC受體具有許多種剪接變體。如下所述，這些外顯子中有一些是酉&^(IL"17A和/或IL^17F)結(jié)合所必需的。本發(fā)明部分地基于這一發(fā)現(xiàn)IL"17RC和IL^17家族的其他成員例如IL-17RA(SEQIDNO:21之間具有相似的結(jié)構(gòu)("結(jié)構(gòu)域")。具體而言，識別了三個(gè)結(jié)構(gòu)域1)結(jié)構(gòu)域1(SEQIDNO:159和160)包括IL-17RC的外顯子8"10。這對應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基193^276和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的絲^J^208-291。2)結(jié)構(gòu)J^2(SEQIDNO:161和162)包括IL-17RC的外顯子ll-13。i^t應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基277-370和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的^iJ^^J^92-385。3)結(jié)構(gòu)J^3(SEQIDNO:163和164)包括IL-17RC的外顯子14-16。i^J"應(yīng)于IH7RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基371-447和IL"17RCx4(SEQEDNO:166)的M^j386-462。因此，本發(fā)明涉4于圖l所示外顯子的不同組合的可溶性IU7RC多肽。M而言，這些可溶性多肽的實(shí)例包括1)變體1210(SEQIDNO:67和68)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l"6和8畫16，并通iti^接物(SEQIDNO:176和177)融合有FclO(SEQIDNO:174和175)。變體1210還具有來自otPA(示于SEQIDNO:178的多肽序列)的一個(gè)前原信號一re^prosignalpeptide),也可以佳月Fc5或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替FclO。2)變體1390(SEQIDNO:69和70)，它包括人類IL"17RCxl的外顯子l-6和8-16,并融合有FclO(SEQD)NO:174和175)。變體1390還具有一個(gè)天然信號序列。也可以佳月Fc5或本領(lǐng)域已知的,等同物代替Fc10。3)變體1341(SEQIDNO:71和72),它包括鼠類II^17RA的外顯子l-6和人類IL-17RCxl的外顯子^16,并通過連接物(SEQIDNO:176和177)融合有FclO(SEQIDNO:174和175)。變體1341還具有來自鼠類IH7RA(SEQIDNO:181)的一個(gè)ff號肽。也可以使用Fc5或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc10。4)變體1342(SEQIDNO:73和74)，它包括A^類IL-17RCxl的外顯子8"16，通iti^接物(SEQIDNO:176和177)融合有FclO(SEQIDNO:174和175)。變體1342還具有來自otPA(示于SEQIDNO:178的多肽序列)的一個(gè)前原信號肽。也可以偵月Fc5或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc10。5)變體Sl(SEQIDNO:77和78),它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-7，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體Sl還具有天然信號序列。也可以使用Fc10或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。6)變體S2(SEQIDNO:81和82)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-8，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S2ii具有天然信號序列。也可以4錢Fcl0或本領(lǐng)域已知的^^T等同物^R^Tc5。7)變體S3(SEQIDNO:85和86)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-9，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S3還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。8)變體S4(SEQIDNO:89和90),它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-10,并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S4還具有天然信號序列。也可以4MFcl0或本領(lǐng)域已知的任啊等同物代替Fc5。9)變粘5(SEQIDNO:93和94)，它包括人類EL47RCxl的外顯子l-11，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180).變粘5還具有天然信號序列。也可以4MFclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。10)變粘6(SEQIDNO:97和98)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子14-16，并融合有Fc5(SEQK)NO:179和180)。變體,具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。11)變體S7(SEQIDNO:101和102),它包括人類H7RCxl的外顯子ll-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S7還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。12)變體S10(SEQIDNO:105和106)，它包^v^類IH7RCxl的外顯子7-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S10還具有天然信號序列。也可以使用Fcl0或本領(lǐng)域已知的^^T等同物>^#^^5。13)變體S11(SEQIDNO:109和110),它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-7和14-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S11還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的，等同物代替Fc5。14)變體S12(SEQIDNO:113和114),它包括人類IL-17RCxl的外顯子l畫7和11-16,并融合有Fc5(SEQD)NO:179和180)。變粘12還具有天然信號序列。也可以4^1Fcl0或^^々頁域已知的4彿等同物^R^Tc5。15)變體S13(SEQIDNO:117和118)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-13和人類IL-17RA的外顯子7-9，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變粘13還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。16)變粘14(SEQIDNO:121和122)，它包括鼠類IL-17RA的外顯子1^6、人類H7RCxl的外顯子8-13和鼠類IH7RA的外顯子7-9,并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S13還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的《^T等同物^^^Fc5。17)變體1407(SEQIDNO:139和140),它包括人類EL-17RA的外顯子1-10和人類IL-17RCxl的外顯子8-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體1407還具有來自人類IL-17RA的天然信號肽。也可以使用FclO或W域已知的B等同物代替Fc5。18)變體1459(SEQIDNO:151和152)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-6和8"16,并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)，并具有一個(gè)Leu21Ala的置換(與IL-17RCxl相比)。變體1459還具有來自otPA(多肽序列示于SEQIDNO:178)的一個(gè)前原信號肽。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。19)變體1454(SEQEDNO:157和158)包括人類IL-17RA的外顯子1^6和人類IL-17RCxl的外顯子8"16,與Fc5(SEQIDNO:179和180)融合。變體1454iE具有來自人類IL-17RA的天然信號Jl!L也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。變體1454多肽的成熟形式示于SEQIDNO:183,它由SEQIDNO:182所示的核酸分子編碼。可以橫月其他分泌信號序列代替人類IL-17RA信號序列以用于在真核細(xì)胞中的表達(dá)，所述，分^ft號序列包括例如人類IL-17RC信號序列(例如SEQIDNO:2的M^JJ-20)、otPA前原信號序列(SEQIDNO:178)、人類生長激素信號序列(SEQIDNO:168和169)以;^A類CD3難號序列(SEQIDNO:172和173)。任選地，可以切除或缺失變體1454的C端的^J^14(SEQIDNO:183的^658(Lys))。上述變體僅4化了有PHIt目的本發(fā)明實(shí)施方案。>$^頁域技^員基于本申請?zhí)貏e是其中附圖1"4的教導(dǎo)，不必進(jìn)行過多的實(shí)驗(yàn)就能夠容易地設(shè)計(jì)和測試務(wù)他的IL-17RC變體和/或IL-17RC/IL-r7RA變體。例如，可以用于代^Ui文7iS開的信號肽的^fc信號肽包括人類生長激素信號lfc(SEQIDNO:168和169)、鼠類免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH26-10)(SEQIDNO:170和171)或人類CD33(SEQIDNO:172和173)。除M發(fā)明以外，本發(fā)明提供了本發(fā)明的可溶性受體的新用途。這些可溶性受體可以僅基于IL"17RC(命名為"IH7RC，，或"可溶性IL"17RC，，或"sIL"17RC",這些命名在本文中可以互換使用)，或可以基于IL-17RA與IL-17RC相組合的部分("IL"17RC/IL"17RA"、"雜合RC/RA"、"RC/RA"、"IL-17RA/RC，，或其任何變體，例如變體1454，這些命名在本文中可以互換使用)。本發(fā)明還提供可用于人類炎性疾病和自身免疫性疾病的可溶性IL"17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽片段和融錯(cuò)白。本發(fā)明的可溶性受體可用于阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL^17F和/或IL-17A的活性，以用于治療下述炎癥和炎性疾病，例如#4病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、IBD、IBS、結(jié)腸炎、哞喘、同種^W植物排斥、免疫^h導(dǎo)的腎病、肝膽管疾病、多發(fā)'I^M匕、動(dòng)脈粥樣硬化、肺瘤生妙快或退行性關(guān)節(jié)疾病，以;s^^文/^f的，炎性疾病。SEQIDNO:l提供了一種示例性的編碼人類IL-17RC("IL"17RCxr，)的核苷酸序列；它所編碼的多肽示于SEQIDNO:2。IL-17RCAlL-17A(SEQIDNO:13和14)和IL-17F(SEQIDNO:15和16)的共同受體。IL"17RC可以以單體、同二聚體或異二聚體的形式起作用。優(yōu)選地，H7RC以同二聚體形式作為IL-17A和/或IL"17F的受體。如本申請所述，單體受體或同二聚體受體均可只含有IL-17RC，或者可含有其他IH7家族受體例如IL-17RA的部分("IL-17RC/IH7RA")。因此，本發(fā)明包^it樣的可溶性受體，所述可溶性受體包括IL"17RC與IL-17RA、H7RE或任何其他IL-17家族受體相組合的部分。IL-17RC還可以作為IL-17相關(guān)細(xì)胞因子的異二聚體受體的亞基。例如，IH7RC可以與IL-17RA或另一種IH7樣受體形成異二聚體。IH7RC公開于同為本申請人所有的美國專利申請No,10/458，647和同為本申請人所有的國際申請公，O01/04304中，這兩篇文獻(xiàn)均通過援引的方式全文納A^^文。對編碼IL-17RC(SEQIDNO:l)的人類cDNAjL隆的分析揭示了一個(gè)編碼692個(gè)M酸(SEQIDNO:2)的開放讀碼框，該開放讀碼框中包括一個(gè)約20個(gè)^J^i^(SEQIDNO:2的4J^^JJ至20)的推定的信號序列、一個(gè)大約431個(gè)M酸^(SEQIDNO:2的絲^i^21"452;SEQIDNO:3)的JI&^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、一個(gè)約20個(gè)^J^^(SEQIDNO:2的募J^j453-473)的跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)大約203個(gè)M^J^SEQIDNO:2的M^j474至677)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。jtk^卜，SEQIDNO:22^4了一個(gè)配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。SEQIDNO:165也顯示了編碼人類IL-17RC的一種變體(命名為"IL-17RCx4")的另一個(gè)示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:166。預(yù)計(jì)的信號肽為SEQIDNO:165的^1"60和SEQD)NO:166的^1-20;!^卜結(jié)構(gòu)^SEQIDNO:165的^61-1401和SEQIDNO:166的g21-467;跨膜結(jié)構(gòu)^U(;SEQIDNO:165的gl402-1464和SEQIDNO:166的殘基468-488;胞內(nèi)結(jié)構(gòu)^SEQIDNO:165的錄1465-2121和SEQIDNO:166的組489畫707。SEQIDNO:4也顯示了編碼人類IL-17RC的一種變體(命名為"IL"17RC-1")的另一個(gè)示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:5。IL-17RC-l公開于同為本申請A;斤有的美國專利申請No.l0/458，647和同為本申請A^斤有的國際申請公布WO01/04304中，這兩篇文獻(xiàn)均通過援引的方式全文納^^文。序列分析顯示IL"17RC-1為一種截短形式的受體多肽。也就是說，IL-17RC-1缺少SEQIDNO:2的^J^^J^l-113。SEQIDNO:10表示含有IH7RC的N末端部分的IL-17RC-1多肽的g酸序列。對IL-17RC和IL-17RC-1的^^酸序列進(jìn)行比較，nkJL現(xiàn)這兩種多肽分別4W不同的剪接變體。IL-17RC的^tJ^列包括一個(gè)17個(gè)M酸的區(qū)與SEQIDNO:2的絲^J^39至355)，而IH7RC-1沒有這一區(qū)段；IL"17RC-1在tt酸479^包括一個(gè)13個(gè)^J^的區(qū)與SEQIDNO:5的^J^J^350至362)，而IH7RC沒有這一區(qū)段。SEQIDNO:ll顯示了一種含有上述兩個(gè)^J^酸區(qū)段的多肽，而SEQIDNO:12顯示了一種不含有上述13個(gè)JL^酸區(qū)段和17個(gè)M酸區(qū)段的多肽的JL^齡列。SEQIDNO:23也顯示了編碼人類IH7RC的一種變體(命名為"IL"17RC-6")的又一個(gè)示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:24。IL-17RC-6與SEQIDNO:2所示的IH7RC^目比含有一個(gè)25個(gè)^^酸戎基的缺失。M而言，IL-17RC-6不含有SEQIDNO:2的募J^i^94至氨基酸殘基118。對編碼IL"17RC-6(SEQIDNO:23)的人類cDNA克隆的分析顯示，它含有一個(gè)大約427個(gè)^J^^(SEQIDNO:24的^J^JJ-427)的胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、一個(gè)大約20個(gè)^酸^(SEQIDNO:24的g酸^428-448)的跨膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)大約218個(gè)^酸^(SEQIDNO:24的M酸^J449至667)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。SEQIDNO:25顯示了編碼鼠類IL-17RC的一種變體的一個(gè)示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:26。鼠類IL-17RC是鼠類IH7A(SEQIDNO:17和18)和鼠類IH7F(SEQIDNO:19和20)的共同受體。對編碼IL-17RC(SEQIDNO:25)的鼠類cDNA克J^ii行的分析揭示了一個(gè)大約449個(gè)絲酸^(SEQIDNO:27)的JI^卜西沐結(jié)合結(jié)構(gòu)域。另外，SEQIDNO:2械表了一個(gè)配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。SEQDONO:29顯示了編碼鼠類IL-17RC的一種變體的另一個(gè)示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:30。IH7RC基因位于染色體3p25-3p24，如下所述，這一區(qū)域與多種障礙和疾病相關(guān)。RNA印跡分析顯示，IL-17RC基因在曱擬泉、腎JJ泉、前列#肝1^且織中有很強(qiáng)的表達(dá)，在心臟、小腸、胃和氣管組織中表達(dá)較弱。相反地，它在腦、胎盤、肺、骨骼肌、腎臟、膝泉、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、外周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中表達(dá)極少或不表達(dá)。上述MJ^結(jié)果顯示IL-17RC序列可以用于區(qū)分各種不同的組織。如下所述，本發(fā)明提供包括與參照#^^序列具有至少70%、至少80%、或至少90%、或大于95%,例妨6%、97%、98%或大于99%或更高的同一性的M酸序列的分離多肽，所述參照^J^序列為SEQIDNO:2的JL^^i^21-692,其中所述分離的多肽可以特異,結(jié)合這樣一種私本，所述，能特異性結(jié)^^有SEQIDNO:2的^J^列的多肽。本發(fā)明還提供包括與參照氨基酸序列具有至少70%、至少80%或至少90%同一性的M酸序列的分離多肽，所述參照絲酸序列選自(a)SEQIDNO:2的M^JJl至452,(b)SEQIDNO:10的^Jj^^21至435,(c)SEQIDNO:2的JL&^J^1至677和(d)SEQIDNO:2的^J^^^l至692,其中所述分離的多肽可以特異'1^結(jié)合這樣一種脅，所述抗體能特異性結(jié)合由SEQIDNO:2的絲,列或SEQIDNO:10的^酸序列構(gòu)成的多肽。示例性多肽包括^^有SEQIDNO:2、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:ll或SEQIDNO:12的脈酸序列的多肽。本發(fā)明還提供包括^卜結(jié)構(gòu)域的分離的多肽，其中所ii^卜結(jié)構(gòu)域包括氨基酸序列SEQIDNO:2的^tJ^l&21至452或者^酸序列SEQIDNO:IO的氨基酸^21至435。這類多肽還可包括位于所i^卜結(jié)構(gòu)域^J^端位置的跨膜結(jié)構(gòu)域，其中所述跨膜結(jié)構(gòu)域包括SEQIDNO:2的^酸^j453至473。這些多M可包括位于所it^膜結(jié)構(gòu)^^末端位置的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，其中所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括SEQIDNO:2的M酸殘基474至677或者SEQIDNO:10的^J^^J457至673，^i^，這類多^ii可包括位于所iiJ^卜結(jié)構(gòu)域^J^末端位置的信號分泌序列(signalsecretorysequence),其中所述信號分泌序列包^^tJ^列SEQIDNO:2的M^Ja至20。本發(fā)明還包括IL-17RC多肽的變體，其中所述多肽變體的M酸序列與SEQIDNO:2的絲齡列具有至少70yo同一性、至少80%同一性、至少卯％同一性、至少95%同一性或大于95%的同一性，并且其中多肽變體的M^列與SEQIDNO:2的絲斷列之間的做差異都是由一個(gè)或多傳守性氨基^i換導(dǎo)致的。此外，本發(fā)明還提供上文公開的能與IH7F(例如SEQIDNO:16所示的人類IL-17F多肽序列)結(jié)合的分離的多肽。人類IH7F多核苷酸序列示于SEQIDNO:15。小鼠IL-17F多核苷酸序列示于SEQIDNO:19，其相應(yīng)的多肽示于SEQIDNO:20。本發(fā)明還提供上文公開的能與EH7A(例如SEQIDNO:14所示的人類IL-17A多肽序列)結(jié)合的分離的多肽。^v類IL-17A多核苷酸序列示于SEQIDNO:13。小鼠IL-17A多核苷酸序列示于SEQIDNO:17，其相應(yīng)的多肽示于SEQIDNO:18。本發(fā)明還4^供下述的分離的多#^^位，所述分離的多I^表位包括M絲列SEQIDNO:2或3的至少15個(gè)連續(xù)的絲^1^。示例性多肽包括含有SEQIDNO:2或3或者由SEQIDNO:2或3組成的多肽，含有SEQIDNO:2或3或者由SEQIDNO:2或3組成的多肽的抗原'l;i^位，或者^^有SEQIDNO:2或3或者由SEQIDNO:2或3組成的多肽的功能性H7A或IH7F結(jié)合片段。此外，本發(fā)明還提供上文>^的能結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮絲中和DL-17F或H7A的活性的分離的多肽。本發(fā)明還包括IL-17RC多肽變體，其中所述多肽變體的^J^序列與SEQIDNO:2的^J^^i^具有至少70o/o同一性、至少80%同一性、至少90%同一性、至少95%同一'14^大于95%的同一性，例切6%、97%、98%或大于99%或更高的同一性，并且其中多肽變體的絲斷列與SEQH)NO:2的相應(yīng)絲斷列之間的l沐差異都是由一個(gè)或多傳守性絲紅換導(dǎo)致的。這類保守性^J^^換在本文中有述。j^卜，本發(fā)明還提供上文公開的能結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL"17A的活性的分離的多肽。本發(fā)明還提供藥物組合物，所述藥物組^包括可藥用載體和至少一種這類表達(dá)載M包^it類表達(dá)載體的重組病毒。本發(fā)明還包括藥物組合物，所述藥物組^包括可藥用載體和本文所述的多JiUlM。本發(fā)明還4^供了融合蛋白，所述嚴(yán)^f"白包括IL-17RC多Jli^p免疫球蛋白部分。在這類融錯(cuò)白中，免疫球蛋白部分可為免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，例如人類Fc片段。本發(fā)明還包括編碼這類融^"白的分離的核^^。參考下文的*#^述可以更清楚地認(rèn)識到本發(fā)明的上述方面和務(wù)他方面。jH^卜，下文引用了多種參考文獻(xiàn)，它們都以援引的方式全文納a^文。在下文的說明中廣泛^J^！了多種術(shù)語。^供下狄義以便理解本發(fā)明。本文所^^的"核酸"或"核^^"指多核苷酸，例如4W^糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、^fe苷酸、通過聚合Sl^iC^(PCR)生成的片段，和通過^^T連接^Jl、^J^^JI、內(nèi)切8^用和外切,用生成的片段。核酸W可由天然存在的核苷酸^MM^J成(例如DNA和RNA)，或者可由天然存在的核苷酸的類似物構(gòu)成(例如天然存在的核普酸的oXtl^形式)，或由它們的組合構(gòu)##^包括例如用卣4、、烷^、:j^疊一u^代一個(gè)或多個(gè)ik，或者，官能化為醚或酯。jHi^卜，整^HNp^P可以被其立體上和電子J^目似的結(jié)構(gòu)所取代，例如氮雜^^1,類似物。>^^部分的修飾的實(shí)例包^^化的噤呤和嘧咬、?；泥溥驶蜞滓Щ騘^知的雜環(huán)取代。核酸#可以通過磷酸二酯鍵相連接或者通過這類鍵的類似物相連接。磷酸二酯鍵的類似物包括M磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸硒酰酯(phosphorosdenoate)、磷酸二硒酰酯(phosphorodiselenoate)、^M戈:^J^酸酯(phosphoroanilothioate)、SM^fe褲酸酯(phosphoranilidate)，募J^磷酸酯等等。術(shù)語"核酸^^"還包括所謂的"肽核術(shù)語"核酸分子的互4傳"指的是具有與參照核苷酸序列反向互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子。例如，序列5，ATGCACGGG3，與5，CCCGTGCAT3，互補(bǔ)。腳趙術(shù)語"簡并核苷酸序列"指的是與編碼一種多肽的參照核酸^^相比具有一個(gè)或多個(gè)簡并密碼子的核苷酸序列。簡并密碼子具有不同的核苷酸^1體，但是卻編碼相同的M^l&(即GAU和GAC三聯(lián)體均編碼Asp)。術(shù)語"結(jié)構(gòu)基因"指的是這樣一種核酸分子，它會(huì)被轉(zhuǎn)錄為信使RNA(mRNA),該信^RNA^被^^為特定多肽的特征性^J^酸序列。"分離的核^^，，為未^^在生物體基因MDNA中的核^^。例如，從細(xì)胞的基因組DNA中分離出來的編碼生長因子的DNA分子就是一種分離的DNAM。分離的核^^的另一個(gè)實(shí)例為未^^在生物體基因組中的化學(xué)合成的核^子。從特定物種中分離的核酸^^要小于該物種染色體的完整DNA襯。"核酸襯構(gòu)建體"為一種單絲雙鏈的經(jīng)過人類千預(yù)而被修飾、從而含有以自然界中不存在的排列方式組^f連接的核酸區(qū)段的核酸分子。"線性DNA"是指具有游離的5，和3，末端的非環(huán)柳NA襯。線性DNA可以從例如質(zhì)粒的閉合環(huán)狀DNA^^通itil消化或物理破壞來制備。"互補(bǔ)DNA(cDNA)"為^^mRNA模^itiill轉(zhuǎn)^Jl^備生成的單toNA分子。通常，^^與mRNA的"^p分互補(bǔ)的引物來啟動(dòng)反轉(zhuǎn)錄。4^頁域技仏員還^^1術(shù)語"cDNA"來指由這種單^DNA^^及其互補(bǔ)DNA^I且成的雙toNAW。術(shù)語"cDNA"還^^yjlNA^^合成的cDNA^^的克隆。"啟動(dòng)子"為指導(dǎo)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄的核苷斷列。通常，啟動(dòng)子位于基因的5，非編碼區(qū)，接ii^構(gòu)基因的轉(zhuǎn)^^位點(diǎn)。具有啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄功能的啟動(dòng)子中的序列元件通常以共有核苷酸序列為特征。這些啟動(dòng)子元件包括RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)、TATA^列、CAAT序列、分化特異'ItiL件(DSE;McGehee""，Mo/L￡>tocWw"7:551(1993))、環(huán)AMP應(yīng)答元件(CRE)、血清應(yīng)答元件(SRE;Treisman，S柳/n歸/"C騰e"5M六47(1990))、糖J^激素應(yīng)答元件(GRE),以及，轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)*點(diǎn)，例如CRE/ATF(0，Reilly""，/.及VAC^e肌267:19938(1992》、AP2(Yed/.fi/dC&肌269:25728(1994》、SP1、cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB;Loeken，G^"e^^w.3:253(1993))和八聚體因子(綜述可參見Watson""/L，eds"Mofec"/ar<說e(7e"e，她ed.(TheBenjamin/CummingsPublishingCompany,Inc.1987)和Lemaigre和Ro鵬eau，歷0c&抓/.3ft5:l(1994))。如果啟動(dòng)子為一種i秀導(dǎo)型啟動(dòng)子，那么轉(zhuǎn)^il^^J應(yīng)于誘導(dǎo)劑而提高。與此不同的是，如果啟動(dòng)子為細(xì)L^型啟動(dòng)子，那么^"^it率就不受"^導(dǎo)劑的調(diào)節(jié)。還已知一些抑制型啟動(dòng)子。"核心啟動(dòng)子"包括啟動(dòng)子功能所必需的核苷酸序列，包括TATA盒和轉(zhuǎn)錄起泉。才娥這一定義，核心啟動(dòng)子在缺少可增強(qiáng)活'liil賦予組織特異性活性的特定序列時(shí)可能具有或不具有可檢測的活性。"調(diào)控元件"為調(diào)節(jié)核心啟動(dòng)子活性的核苷酸序列。例如，調(diào)控元件可包括能與下述的細(xì)胞因子結(jié)合的核苷酸序列，所述細(xì)胞因子可以使轉(zhuǎn)錄專一地或優(yōu)先#特定細(xì)胞、組織或細(xì)胞器中進(jìn)行。這些類型的調(diào)控元件通常與以"細(xì)胞特異性"、"組織特異性"或"細(xì)胞器特異性"方狄達(dá)的基因相關(guān)聯(lián)。"增強(qiáng)子"是一種肯缺高轉(zhuǎn)^t率的調(diào)^t件，所述轉(zhuǎn)^t率的提高與增強(qiáng)子相對于轉(zhuǎn)^^位點(diǎn)的距離或方向沒有關(guān)系。"異源DNA"指的是并不天然存在于給定宿主細(xì)胞中的一種DNA分子或一群DNA分子。對于特定宿主細(xì)胞而言的異源DNA分子可以^^有來源于宿主細(xì)胞物種的DNA(即內(nèi)源DNA)，前4Ij!宿主DNA與非宿主DNA(即外源DNA)相組合。例如，含有與包括轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的宿主DNA區(qū)段有^i^接的編碼多肽的非宿主DNA區(qū)段的DNAM^L認(rèn)為是異源DNA分子。反過來，異源DNA^可以包括與外源啟動(dòng)子有^t^接的內(nèi)源基因。作為另一實(shí)例，如果一種包括來源于野生型細(xì)胞的基因的DNA^被引入缺少該野生型基因的突變體細(xì)胞中，則這種DNA^^^M^認(rèn)為是異源DNA。"多肽"為絲^Jitit^^^接形成的聚^,包括天然形成的多薛合成多肽。少于約10個(gè)絲^^的多肽-"^被稱為"肽"。"蛋白質(zhì)"是包^^個(gè)或多個(gè)多肽鏈的大W。蛋白質(zhì)也可能含有非自分例dMt^團(tuán)。產(chǎn)生蛋白質(zhì)的細(xì)胞可能Wt類取^f^(J^M非肽類取^引入到所述蛋白質(zhì)中，并且根椐不同細(xì)胞類型可能會(huì)引入不同的取*。本文中定義的蛋白質(zhì)是根據(jù)它們的KJ^^鏈結(jié)構(gòu)定義的；通常并不特別指明例dMt類基團(tuán)等^M^，但是它們可以存在。由非宿主DNA分子編碼的肽或多肽為"異源"肽或多肽。"克隆載體"為能夠在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制的核^^，例如質(zhì)粒、粘絲噬菌體?？寺≥d傾常含有一個(gè)或少IUVh限制性內(nèi)切核^i尸^位點(diǎn)，從而可以以確定性方式插入核^予而不喪失載體1^的生物學(xué)功能，也可以插Alfe碼標(biāo)記基因的核苷酸序列，所述才斜己基因適用于識別和篩選^^斤述克隆載^#化的細(xì)胞。才封逸因通常包括能夠提供四環(huán)素私l^氨千青霉素私性的基因。"^i^體"為編碼能夠在宿主細(xì)胞中表達(dá)的基因的核^^。通常，^Ji^體包4^一個(gè)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子、一個(gè)基因和一個(gè)轉(zhuǎn)^^止子?；騘iiii常處于啟動(dòng)子的控制之下，這樣的基因被稱為與啟動(dòng)予嗜^b^接"。#^她，如果一頓控元件能夠調(diào)節(jié)一個(gè)核心啟動(dòng)子的活性，則稱該調(diào)節(jié)元件與該核心啟動(dòng)f有^ii接"。"重組宿主"為含有異源核^^例如克隆栽絲表戰(zhàn)體的細(xì)胞。在本文中，重組宿主的一個(gè)實(shí)例為通it4ii^體產(chǎn)生IH7RC的細(xì)胞。相反地,IL~17RC可以由IH7RC的"天然來源"的且不含有表達(dá)載體的細(xì)胞產(chǎn)生。"整合轉(zhuǎn)化體"為異源DNA被整合到細(xì)胞的基因組DNA中的重組宿主細(xì)胞。"融合蛋白"為由包括至少兩個(gè)基因的核苷酸序列的核酸分子所表達(dá)的雜合蛋白。例如，融合蛋白可以包括與一種可結(jié)合親和基質(zhì)的多IM目融合的IL47RC多肽的至少一部分。這樣的融合蛋白為使用親和色鐠分離大量IL"17RC提供了手段。術(shù)語"受體"指的是可以與被稱為"配體"的生物活性分子相結(jié)合的細(xì)jf^目關(guān)蛋白。這種相互作用介導(dǎo)了配體對細(xì)胞的作用。受體可為膜結(jié)合受體、細(xì)胞溶質(zhì)受體或核受體；單體受體(例如促甲狀l^:素受體、卜腎上腺素能受體)或多聚體受體(例如PDGF受體、生長激素受體、IL-3受體、GM-CSF受體、G"CSF受體、紅細(xì)胞生成素受體和IL"6受體)。膜結(jié)M體的特征在于具有多結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)，包括^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和通常^信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的胞內(nèi)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。在某些膜結(jié)合受體中，J^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)^結(jié)構(gòu)域位于構(gòu)成完整功能性受體的分離的多^Lh。"-^:而言，配體與受體的結(jié)^^導(dǎo)致受體的構(gòu)象變化，所述構(gòu)象變化會(huì)引^L應(yīng)結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)其他分子之間的相互作用，這又會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞代謝的變化。通常與受^B己體相互作用相關(guān)的代謝事件包括基因轉(zhuǎn)錄、磷酸化、去磷酸化、環(huán)AMP產(chǎn)量提高、細(xì)胞鉀的運(yùn)動(dòng)、細(xì)lfej^旨類的運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞粘附、肌醇脂類的xK解^^^^旨的xK解。"可溶性受體"是不與細(xì)艦結(jié)合的受體多肽。可溶性受頓常為沒有跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域、也沒有M連接方式例如通it^基磷脂酰肌醇(gpi)與細(xì)l&^相連的配體結(jié)^t體多肽?？扇苄允荏w可包括附加的#^^基，例如為便于純化多肽而提供的親和標(biāo)簽，或者用于提供多肽與底物的結(jié)*點(diǎn)的親和標(biāo)簽，或免疫球蛋白恒定區(qū)序列。許多細(xì)胞表面受^M"有天然存在的可溶*財(cái)應(yīng)物，它們是由蛋白水解產(chǎn)生的或由以其他方式剪接的mRNA翻譯產(chǎn)生?？扇苄允荏w可為單體、同二聚體、異二聚體或多聚體的形式，多聚體受M常包括不多于9個(gè)亞基、優(yōu)g包括不多于6個(gè)亞基、最優(yōu)i^包括不多于3個(gè)亞轉(zhuǎn)導(dǎo):，就稱所述受體多a^4Ui沒有跨膜和胞;多肽區(qū)段。"胞因子i:^:可溶性受體通常包括胞夕卜細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域而不^^膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。例如，^r束性的可溶性受體包括SEQH)NO:167(多核苷酸)和SEQIDNO:21(多肽)表示的IL-17RA的可溶性受體。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全能夠確定已知細(xì)胞因子受體序列中哪一段序列包括胞夕卜細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域而不含跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。jH^卜，^域技術(shù)人員通過遺傳密碼子可以容易地確定編碼這類可溶性受體多肽的多核苷酸。術(shù)語"分泌信號序列"指的是編碼這樣一種肽的DNA序列，所述肽("分泌狀"辨為一種較大多肽的4分，指引所述較大多l(xiāng)fci^v合成該多肽的細(xì)胞的分泌途徑。所述較大多皿常在所述分泌途徑中被切割以除去分泌肽。"分離的多肽"為^上不含有夾雜的細(xì)胞組分的多肽，所述夾雜的細(xì)胞組分例如天然狀態(tài)下與所述多肽共存的糖類、脂類或，蛋白質(zhì)性質(zhì)的雜質(zhì)。通常，分離的多肽制品所含有的所述多肽的^^很高，即至少約80%純度，至少約90%純度、至少約95%純度、高于95%純度，例如96%、97%或98%或更高的純度，或高于99%的純度。顯示某種^^蛋白制品含有分離多肽的一種方法是對所述蛋白質(zhì)制品進(jìn)行的十二^J^酸鈉(SDS)-聚丙烯SUfe皿電泳并對所述^J&進(jìn)^^馬斯亮藍(lán)染色^，出現(xiàn)單一條帶^明所述制品含有分離的多肽。然而，術(shù)發(fā)'分離的"并不排除同一種多肽的不同物理形式的存在，例如二聚體形式或者糖基減衍生化形式。本文中4M的術(shù)語"^J^端"和"^^端，，指的是多肽中的位置。在上下iiyt許的情況下，在^5l多肽的某一特定部分或序列時(shí)^^這些術(shù)語，用于表示接近的關(guān)系或相對位置。例如，位于多肽內(nèi)的一^R參考序列的^S^端的某一段序列指的是所述序列接i^斤述參考序列的^^端，但并不一定是位于整個(gè)多肽的^J^端。術(shù)語"表達(dá)"指的絲因產(chǎn)物的生物合成。例如，對于結(jié)構(gòu)基因而言，狄包括將所i^構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄為mRNA并將所iimRNA^^為一個(gè)或多個(gè)多肽。本文中使用的術(shù)語"剪接變體"指的是從一個(gè)基因轉(zhuǎn)錄而得的RNA的不同形式。剪接變體天然地是通過利用轉(zhuǎn)錄的RNA分子內(nèi)的不同剪#^點(diǎn)而產(chǎn)生的，或者也有少數(shù)時(shí)^bl利用獨(dú)立轉(zhuǎn)錄的RNA^"之間的不同剪M點(diǎn)產(chǎn)生，可肯fe^—個(gè)相同基因會(huì)轉(zhuǎn)錄出;WmRNA。剪接變體可能編碼具有不同M酸序列的多肽。本文中還^^l術(shù)語"剪接變體"表示由基因轉(zhuǎn)錄而來的mRNA剪接變體所編碼的多肽。本文所^^的術(shù)語"免疫調(diào)節(jié)劑"包括細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、共刺^子、造血因子等，還包括上述分子的合成類似物。術(shù)語"互4M^抗互4h^對"指的是在合適糾下形成非措結(jié)合的穩(wěn)定配對的不相同的部分。例如，生物素和親^^(或鏈親和素)為互凈h^/抗互4H^t的典型成員。其他示例性的互^h^/抗互^h^對包括受^/配體對、抗/^^f、(或半抗原或表位對、正義/反義多核苷M等等。在隨后需要互4H^/抗互4H^對解離的情況下，互4H^/抗互4f^對的結(jié)合親和力M地小于l09M"1。"抗獨(dú)特型抗體"為可與免疫球蛋白的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域結(jié)合的抗體。在本文中，皿特型M可與抗D^17RC私沐的可變區(qū)結(jié)合，因此皿#^#可以銜以IL47RC的表位。"抗體片段"為抗體的一部分，例如F(ab，)2、F(abh、Fab，、Fab等等。不論結(jié)構(gòu)如何，抗體片段都可以與完整抗體所識別的同一抗原相結(jié)合。例如，抗IL-17RC單克隆M片段可以與IL"17RC的表"ii^合。術(shù)語"脅片段"還包括能結(jié)^^異性^f、的合成多!Ul^因W生產(chǎn)的多肽，例如由輕鏈可變區(qū)組成的多肽、由重M^^^可變區(qū)組成的"Fv"片段、輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)通itJifci^接物相連接的重組單鏈多肽分子("scFv蛋白")和由模擬高可變區(qū)的募J^Jia^的最小識別^:。"嵌合^^"為這#""種重組蛋白，它含有來源于"^^物脅的可變結(jié)構(gòu)域和互^卜決定區(qū)，而^k^的^^P分來源于人類^^。"人源^^^"為這#-"種重組蛋白，其中將單克隆脅中的來源于鼠狄疫球蛋白的重鏈可變區(qū)和^^可變區(qū)的鼠類互補(bǔ)決定區(qū)絲到人類可變結(jié)構(gòu)域中。用于人類治療用途的來源于鼠類M的人源化^K例如可以結(jié)合或中和人類蛋白的人源4^9的構(gòu)建是44^頁域技^Mv員的能力范圍之內(nèi)的。本文所使用的"治療劑"為與抗體部分綴合而產(chǎn)生可用于治療的綴合物的分子或原子。治療劑的實(shí)例包括藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、#劑、硼^^物、光活化劑或染料以A^性同位素。"可^r測標(biāo)記"為與扭體部分綴合而產(chǎn)生可用"f^斷的分子的M或原子?？蓹z測標(biāo)記的實(shí)例包^^劑、光活化劑、；^t性同位素、熒光試劑、順磁性離子或其^f示記部分。30本文^J^的術(shù)語"親和標(biāo)l"指的是這樣一種多肽片段，它可以與另一多肽連接，從而使得可以純4^檢測所述另一多JljUL者提^^斤述另一多肽與底物結(jié)合的位點(diǎn)。原則上可以^^,具有可獲得的^Ml，特異性結(jié)合物的肽或蛋白作為親和標(biāo)善。親和標(biāo)4包括多組氨酸鏈、蛋白A(Nilsson""，^M丑0/.4:1075(1985);Nilsson""，Me欲^wfc五"gww/L7卵:3(1991))、谷胱甘^S絲酶(Smi也andJohnson,(7e"e67:31(1988))、Glu畫Glu親和才^(Grussenmeyer"7VM^c"dM,82:7952(1985))、P物質(zhì)、FLAG肽(Hopp^"A，說》tecA朋fogv6:1204(1988))、鏈親和素結(jié)合JlUl，^^It4位或結(jié)合結(jié)構(gòu)域。總體上可^^見FordC"A，iVo紐/zi￡^ess/wi戶"i"^cfl/fow2:95(1991)。編碼親和標(biāo)簽的DNA分子是可從供應(yīng)商(例如PharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)處購買的。"^:體"與脅片勸目對，表示未與治療劑綴合的完整糾?？妹{包括多克隆M和單克隆抗體，以及某些重組抗體例如嵌合M和人源化M。本文所4線的術(shù)語":fe^組f包括完整^/^和M片段。"免疫綴合物"為#組分與治療劑或可^"測#^形成的綴合物。本文所使用的術(shù)語"抗體融合蛋白"指的是包括一種抗體組分和一種IL-17RC多肽組分的重組分子。M融合蛋白的實(shí)例包^it^H種蛋白，所述蛋白包括IL-17RC的J^卜結(jié)構(gòu)域，還包括Fc結(jié)構(gòu)^MU^f結(jié)合區(qū)域。"目標(biāo)多肽"或"目標(biāo)肽"為包括至少一個(gè)表位、并JL^目標(biāo)細(xì)胞(例如肺瘤細(xì)胞或攜帶傳染物抗原的細(xì)胞)Ji^達(dá)的^J^^列。T細(xì)J3&識別由主J^組織相容性復(fù)絲襯呈遞的針對目標(biāo)多狄目標(biāo)肽的^4位，并通常裂解目標(biāo)細(xì)胞，或?qū)?，免疫?xì)g集至目標(biāo)細(xì)胞的位置，由此殺死目標(biāo)細(xì)胞。"抗原性肽"為與主要組織相容性復(fù)合物分子結(jié)合而形成MHC-肽復(fù)合物細(xì)l^法林巴細(xì)胞應(yīng)^?？乖葱噪哪軌蚪Y(jié)^^適的主要組織相容性復(fù)合物^^WI"發(fā)細(xì)I^性T細(xì)胞應(yīng)答，例如針對結(jié)合或表達(dá)抗原的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞,或特異性細(xì)胞因子的釋故。抗原性肽可以結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞或目標(biāo)細(xì)胞上的I類或n類主要組織相容性復(fù)絲分子。在真核細(xì)胞中，RNA聚合酶n催化結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)^而產(chǎn)生mRNA?？梢栽O(shè)計(jì)核酸分子以使其包括RNA聚合酶n模板，在所述^^板中RNA轉(zhuǎn)錄物具有與特定mRNA的序列互補(bǔ)的序列。所itRNA轉(zhuǎn)錄物被稱為"反^RNA"，編碼該反^RNA的核酸^^被稱為"反義基因"。反:5CRNA分子能夠結(jié)冶TiiRNA襯，導(dǎo)致mRNA翻譯的抑制。"特異性針對IL"17RC的反義寡核苷酸"或"IL47RC反義寡核苷酸"為具有下述序列的寡核苷酸(a)所述序列能夠與7L-77及C基因的-"^^成穩(wěn)定的三蝶旋，或(b)所述序列能夠與ZL^7及C基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的一^P^^I定的雙螺北"核酶"為具有催化中心的核^子。該術(shù)語包括RNA酶、自剪接RNA、自切割RNA和^f亍上述催化功能的核^^子。編碼核酶的核酸^"^L稱為"核酵基因"。"外部引導(dǎo)序列"為能引導(dǎo)內(nèi)源性核酶RNA酶P結(jié)合特定種類胞內(nèi)mRNA并導(dǎo)IbnRNAteNA酶P切割的核i^子。編碼外部引導(dǎo)序列的核酸^^L稱為"外部引導(dǎo)序列基因"。術(shù)語"變體IL47RC基因"指的是編碼具有修飾形式的SEQIDNO:2M酸序列的多肽的核酸分子。這類變體包括天然存在的IH7RC基因的多態(tài)性，以及含有絲齡列SEQIDNO:2的保守性絲^j:換的合絲因。H7RC基以通過例如在嚴(yán)4^ft下，測定一種基因是否與具有核苷餅列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4的核酸分子或其互補(bǔ)核^子雜交，從而識別變體IL47RC基因?；蛘撸梢酝ㄟ^序列比較識別變體IH7RC基因。如M比對最大相符性時(shí)兩個(gè)絲斷列的M^J^目同，赫這兩個(gè)絲齡列具有"100%的氨基酸序列同一性"。類似地，如^4比對最大相符性時(shí)兩個(gè)核苷酸序列的核苷W^目同，就稱這兩個(gè)核苷^列具有"100。/o的核苷^f列同一性"。序列比較可以使用標(biāo)準(zhǔn)軟^N^^進(jìn)行，例如由DNASTAR(Madison，Wisconsin)生產(chǎn)的LASERGENE生物信息學(xué)軟件包中所含有的軟件。其皿過測定最優(yōu)比對而比較兩個(gè)核苷酸或M斷列的方法是本領(lǐng)域技^Mv員7^的(參見，例如，PeruskiandPeruski，/"fem""/w/幼eiV，5/ofogy:7bo/sG"e"o附/c朋</她/mi/flr,(ASMPress,Inc.1997)，WuCA(編著)，"InformationSuperhighwayandComputerDatabasesofNucleicAcidsandProteins，,見于/"G朋e歷otec/r朋fo狄第123-151頁(CRCPress,Inc.1997)和Bishop(編著)，(7fi/￡/eto/Tu附a"(e"o附eCiw^w^/"g，第2版(AcademicPress,Inc.1998))。下文將描述用于測定序列同一性的M方法。無論使用什么具體方法來識別變體/Z^17RC基因或變體IH7RC多肽，都能力，而從功能上表征所迷基因或多肽。還可以^^本i^斤述的生物學(xué)或生物化學(xué)測定方法，,變體IL47RC基因或變體IL^7RC多肽與酉沐例如IH7A和/或IL47F結(jié)合的能力，而從功能Ji^iE所迷基因或多肽。本文中使用的術(shù)語"等位基因變體"指的是位于相同染色體基因座上的某一基因的,兩種或多種變化形式。等位基因變體天然M過突變產(chǎn)生，并可能導(dǎo)致^中的表型多態(tài)性?；蛲蛔兛赡苁浅聊?編碼的多I^L有改變)，或者可能所編碼的多肽的JL^酸序列有所改變。本文中使用的術(shù)語等位基因變#^￡指的是由基因的等位基因變g碼的蛋白質(zhì)。術(shù)語"直系同源物"指的是從一個(gè)物種獲得的多肽或蛋白是從另一不同物種獲得的多肽或蛋白的功能類似物。直系同源物之間的序列差異是物種形成的結(jié)果。"旁系同源物"是由一種生物產(chǎn)生的不同^構(gòu)相關(guān)的蛋白質(zhì)。認(rèn)為旁系同源物^l通it^因復(fù)制產(chǎn)生的。例如，a-珠蛋白、p-^:蛋白和Mit蛋白招Utb之間互為旁系同源物。本發(fā)明包括H7RC基因的功能性片段。在本發(fā)明的上下文中，IL47RC基因的"功能性片段"指的是編碼IL47RC多肽的"^分的核^^，所述多肽的一^分為本文所述的結(jié)構(gòu)域或至少能特異'1^結(jié)合抗IH7RC松體。由于標(biāo)準(zhǔn)分析方法的不準(zhǔn)確性，聚合物的分子量和長度棘理解為近似值。當(dāng)這類值絲示為"大約"X或"近似"X時(shí)，應(yīng)理解的^IJ^示的值應(yīng)為實(shí)際C)IL-17RA和IL-17RC多核苷酸il基因的制備^^1基于SEQIDNO:l、SEQIDNO:4的多核苷酸探針，通過篩選人類cDNAi^或基因組iL^，可以獲得編碼人類IL-17RA或IL^7RC基因的核酸分子或編碼本發(fā)明的任何可溶汰多肽的多核苷酸。上述技術(shù)是公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，可以使用市售的克隆試劑盒完成。例如參見Ausubel"oA(編著)，/"Mo/mitor5油欲第3&JohnWiley&Sons1995;Wu"oi，/wGe從5/她c^朋/ogy，CRCPress,Inc.1997;AvivandLeder，Ato，"owi似i75^狄.1408(1972);Huynhe"/""ConstructingandScreening33cDNALibrariesinXgtlOandXgtll，，見于ZW^Ctow/wg:J7V"crfca/々/wvac/r/，Glover(編著)，第49頁(IRLPress,1985);Wu(1997)，第47-52頁。^JI核苷^列基于IL-17RA或IL-17RC基因或cDNA的核苷^列的寡核苷酸引物，通過聚合SI^式反應(yīng)(PCR)，也可以獲得編碼人類IH7RA或IL"17RC基因的核酸分子。在下述文獻(xiàn)中提供了用PCR篩選文庫的-^:性方法例如,YuC"UseofthePolymeraseChainReactiontoScreenPhageLibraries"見于M^/Zroifc/"歷o/o;gy，75:尸CRC"/re",朋flfJ/^Z/ortfeiw,White(編著)，HumanaPress,Inc.,1993。此夕卜，在下述文獻(xiàn)中描述了使用PCR分離相關(guān)基因的技術(shù)例如，Preston,"UseofDegenerateOligonucleotidePrimersandthePotymeraseChainReactiontoCloneGeneFamUyMembers"見于Me^油/wMfec油r歷o/ogv，Ko/L/5:PCKPratoco&:C"/re"fWhite(編著)，HumanaPress,Inc.1993?；蛘撸赏ㄟ^使用互為引物(mu加allypriming)的長寡核苷酸和本文所述的核苷酸序列合成核酸分子，來獲得IH7RA或IL"17RC基因(參見例如，Ausubd(1995))。^JH聚合SI^^應(yīng)的已知技術(shù)能夠合成至少兩千個(gè)4長度的DNA^"(Adang""/，iV朋,Mofec;歷"2:1131(1993);Bambot""/，PO2:266(1993),Dillon"/""UseofthePolymeraseChainReactionfortheRapidConstructionofSyntheticGenes，，見于M^/wcfe//iMofec"/fl"歷ofogv，Koi/5:戶Oi^ratoco/s:C"ire","w"々/1//ca&"s，White(編著),第263-268頁(HumanaPress,Inc.1993)和Holowadmk"niL，尸CRMe欲0血Jpp/:4:299(1995))。關(guān)于多核苷酸合成的綜述可以參見例如，GlickandPasternak^5/otec/r朋/e;gy，做"y4p/,/cflriwwy及ec6/"flrtf^DA^4(ASMPress1994);ItakuraCa/l，j"肌iev.歷oc/te肌53:323(1984)和Climiea"iVoaiVW74cflfii:5tiS7:633(1990)。D)IL-17RA或IL-17RC基因變體的制備本發(fā)明提供了多種編碼本文公開的IH7RA或IL"17RC多肽的核酸分子，包括DNA和RNA^。本領(lǐng)域技^A員應(yīng)容易地認(rèn)識到，由于遺傳密碼子的簡并性，這些多核苷酸分子中可食沐許多種序列變體。此外，本發(fā)明還提供了分離的可溶性科、同二聚體、異二聚體和多聚體形式的受體多肽，它們包括與SEQD)NO:2的受體多Jlfci4^上同源的IL"r7RC的至少一^P分。因此，本發(fā)明考慮到了包粘EQIDNO:l或SEQIDNO:4的簡并核苷酸的編碼IL-17RA或IL-17RC多肽的核酸分子以及它們的RNA等價(jià)物。本領(lǐng)域技^A員應(yīng)容易地認(rèn)識到，由于遺傳密碼子的筒并性，這些多核苷酸分子中可能有許多種序列變體。SEQIDNO:7為涵蓋編碼SEQIDNO:2的IL-17RC多肽的所有核^^的簡并核苷^列。本領(lǐng)域技HO^員應(yīng)認(rèn)識到，通過將SEQIDNO:7中的T^換為U,SEQIDNO:7的簡并序列還提供了編碼SEQIDNO:2的所有RNA序列。因此，本發(fā)明考慮到了包樹EQIDNO:l的核苷酸154至核苷^2229的編碼IH7RC多肽的核酸分子，以及它們的RNA等價(jià)物。類似地，通過將SEQIDNO:6中的T^換為U，SEQIDNO:6的IL-17RC-l簡并序列^^供了編碼SEQIDNO:5的所有RNA序列。表4示出了表示簡并核苷酸位置的單字母編碼。"解析"是用編碼字母表示的核苷酸。"互^傳"表示的是互補(bǔ)核苦酸的編碼。例如，編碼Y表示C或T,其互^H^R^示A或G，A與T互^卜，G與C互4卜。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>勤示出了對于某給定氨基酸而言涵蓋所有可能密碼子的簡并密碼子。勤<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>本領(lǐng)域"fit技"員應(yīng)當(dāng)理解的是，由于筒并密碼子^J(^碼某一M酸的所有可能的密碼子，在確定簡并密碼子的過程中會(huì)引入一定的不確定性。例如，絲氨酸的簡并密碼子(WSN)在有些情況下可能編^ft氨^(AGR),精氨酸的簡并密碼子(MGN)在有些情況下可能編碼絲氨酸(AGY)。編碼苯丙氨酸和亮氨酸的密碼子之間M在類似的關(guān)系。因此，簡并序列所涵蓋的一些多核苷酸可能編碼變^J^酸序列，但是4^域"f^技術(shù)人員可以參照SEQIDNO:6的M酸序列容易地識別這類變體序列?？梢匀绫緄^斤i^易J^t變體序列進(jìn)行功能性測試。不同的物種可^4現(xiàn)出"偏好密碼子使用"?？傮w而言可參見Grantham""，7V"dl爿c她to《:1893(1980);Haas"dC"zr.倫A6:315(1996)、Wain-HobsonC"A,(7微":355(1981);GrosjeanandFiers，G微(1982);Holm,TV""爿c她":3075(1986);Ik咖ura，/脅A艦授573(1982);SharpandMatassi，C"ir.Op/汰G柳"Dev.4:851(1^4);Kane，C"/r.印/汰歷她cA"6:494(1995)和Makrides，紐柳:512(1996)。本文所偵月的術(shù)語"偏好密碼子使用"或"偏好密碼子"在本領(lǐng)域中是指在某一物種的細(xì)胞中最通常^^1的蛋白質(zhì)密碼子，因此偏好編>%^種#^的可能密碼子(iL45)中的一種或幾種密碼子。例如，ACA、ACC、ACG或ACT都可能編碼氨基酸蘇氨酸(Thr)，但是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中ACC是最常用的密碼子；在，物種例如昆蟲細(xì)胞、酵母、病^或細(xì)菌中，可能^^好使用不同的Thr密碼子。可以使用多種^^U頁域已知的方法在本發(fā)明的多核苷酸中引入某一特定物種的偏好密碼子。M好密碼子序列引入重MDNA中可以例如通過使蛋白在特定細(xì)胞類型或物種中更有^^*，從而提高蛋白質(zhì)的產(chǎn)量。因此，本文公開的簡并密碼子序列可以作為在本領(lǐng)域常用的和本文公開的各種細(xì)胞類型和物種中優(yōu)化多核苷i^達(dá)的模板。可以測試和優(yōu)化含有偏好密碼子的序列在各種物種中的表達(dá)，并如本i^斤/iHf^^f亍功能測試?？梢酝ㄟ^多種方法分離編碼IH7RA或IL"17RC的cDNA，例如可以4吏用完整人類cDNA的或部分人類cDNA或基于所公開序列的一組或多組筒并探針^^ft^:測。還可以利用本文公開的^RJjl4A類IH7RA或IL^7RC序列設(shè)計(jì)引物，使用聚合Sl^i^Ji來克隆cDNA。此外，可以佳月cDNAiL^轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，并用針對IL"17RA或IL"17RC多肽的抗體ij^r測目的cDNA的表達(dá)。37本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，SEQIDNO:l所公開的序列代表的是人類IL-17RC的一個(gè)等位基因，預(yù)計(jì)也會(huì)存在等位基因變體^R剪接?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)探測來自不同個(gè)體的cDNAi^或基因組i^，從而克隆這一序列的等位基因變體。本文公開的核苷酸序列的等位基因變體，包括含有;m突變的等^i基因變體和突變導(dǎo)it^酸亭列改變的等^i基因變體，以及作為本文公開的絲斷列的等錄因變體的蛋白質(zhì)，都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。通過替代方式剪接的mRNA產(chǎn)生仍保留IU7RC多肽性質(zhì)的cDNA分子，以及由這些cDNA和mRNA編碼的多肽，也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)?？梢酝╥tf^輛克隆這些序列的等位基因變;^剪接變體。、一、佳月上述方法，本領(lǐng)域"fit技^A員可以制備多種編碼包括IH7RC受體亞基的-^P分或其等位基因變體、絲留野生型IH7RC受體的酉沐結(jié)合M的可溶性受體的多肽，所itlH7RC受體亞基的""^分與SEQIDNO:l或SEQIDNO:4基本同源，或編碼SEQIDNO:2或SEQIDNO:5的4^序列或其片段或其等位基因變體。這類多te可以包括本文總^^開的雞多肽區(qū)段。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，分離的核^子可以在嚴(yán)M件下與包括本文公開的核苷酸序列的核酸分子雜交。例如，所述核酸分子可以在嚴(yán)#降下與包樹EQIDNO:l或SEQIDNO:4的核苷酸序列的核^^子雜交，或與包括與SEQIDNO:l或SEQIDNO:4互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子雜交，或與它們的片段雜交。j而言，嚴(yán)^Ht應(yīng)選擇為在確定的離子強(qiáng)度和pH值下比特定序列的熱解^i顯度(TmX氐大約5r:。Tm為(在確定的離子強(qiáng)度和pH值下)50y。的耙序列與完全匹配的探針雜交時(shí)的溫度。在雜交后可以在嚴(yán)^泮下或在高WM件下洗滌核酸分子以除去未雜交的核酸分子。參見，例如，Sambrook""，楊/mi/arC7o"/"g:JAfa"做/，第2版(ColdSpringHarborPress1989);Ausubd(編著)，Cwre"f/V她co/s/"脅fecw/ar必/Io/og);(JohnWileyandSons,Inc.1987);BergerandKimmel(編著)，G"/rfletoM9/m1/"rrecA"i々Me$，(AcademicPress,Inc.1987);和Wetmur，OiTliev.5/oc/re肌26:227(1990))。序列分析^t件例M)LIGO6.0(LSR;LongLake,MN)和iV/mei*iVe/w&r(PremierBiosoftInternational;PaloAlto，CA)以^S^些因特網(wǎng)網(wǎng)站都是可用的工具，可以用于分析給定序列并基于用戶確定的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算Tm。對于特定的多核苷酸雜交，本領(lǐng)域技術(shù)人員完全能夠選"^合適的雜交條件和洗滌糾。本發(fā)明還4^供與SEQIDNO:2(IL-17RC)和SEQIDNO:21(EL-17RA)多肽或它們的直系同源物多肽具有基本上相似的序列同一性的分離IH7RA或IL-17RC多肽。本文所用的術(shù)語"i^U^目似的序列同一性"指的是與SEQIDNO:2所示序列或其直系同源物具有至少70。/0、至少80%、至少90%、至少95%，例如96%、97%、98%或大于95%的序列同一性的多肽。例如，IL-17RA或IH7RC受體變體和直系同源物可以用于產(chǎn)生針對AJIIL"17RA或IL"17RC的免C^答和交U應(yīng)的抗體。這類^^可如本文所述的^A源化^L修飾，并用于治療4艮屑病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥，以^于本文所述的務(wù)他治療性應(yīng)用。本發(fā)明還考慮到了可以用以下兩種標(biāo)準(zhǔn)識別的IL"17RA或IH7RC或IL"17RC/IL-17RA變員^子一種標(biāo)準(zhǔn)是測定所編碼的多肽與本文所述的^-^J^^列(例如^J^^列SEQIDNO:2(IL-17RC)、SEQIDNO:21(IL"17RA)或SEQIDNO:158和183(IL"17RCH7RA))的相似性，另一種標(biāo)準(zhǔn)是雜交測定。所述變體包括下述核酸分子(1)^嚴(yán)格洗滌M下仍然能與具有本文所述核苷酸序列(例如IL47RC的核苷酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4(或其全長互4H^)，或IL-17RC/IL-17RA的核苷酸序列SEQIDNO:157(或其全長互##9)的核酸分子雜交的核酸分子，其中所述洗滌嚴(yán)格度等同于含0.1%808的0.5乂-2xSSC，溫度55國65匸；和(2)所編碼的多肽與本i^斤述的氨基酸序列(例如^J^序列SEQIDNO:2和SEQIDNO:158)具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%,或大于95%，例切6%、97%、98%或99%的序列同一性的核酸分子。或者，iH7RC變體可^Jj征為下述核酸分子(1)在高^格洗滌條降下仍然能與具有本文所述核酸分子(例如核苷酸序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:4(或其4^互^h^)，或核苷^列SEQIDNO:157(或其全長互^M機(jī)))雜交的核酸分子，其中所述洗滌嚴(yán)格度等同于^0.1%808的0.1x-0.2xSSC，溫JL50-65"C;和(2)所編碼的多肽與本i^斤述的絲^列(例如^J^酸序列SEQIDNO:2和SEQIDNO:158)具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、或大于95%,例切6%、97%、98%或99%的序列同一性的核^子。本發(fā)明提供了例如含有與SEQIDNO:158的200-458氨基酸^(它包括IH7RC的外顯子8-16)、或SEQD)NO:158的32-45atJ^li^它包括BL"17A的外顯子1-6以^SJL-17RC的外顯子8"16)、或SEQID]\0:158的1-458#1^^1基、或SEQIDNO:158的32-690JL^^Jl^SEQIDNO:158的l-6卯^J^絲基的序列具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%和至少99.5%的序列同一性的分離的多肽，其中所述多肽能夠結(jié)合IL"17A和/或IH7F。在某些實(shí)施方案中，所述多肽不含有SEQIDNO:158的1-690M^J^SEQD)NO:158的l-458^J^^l基。在某些實(shí)施方案中，所述多肽不是通過下財(cái)法產(chǎn)生的(a辟養(yǎng)已導(dǎo)A^達(dá)栽體的細(xì)胞，所述表達(dá)載體含有有效連接的下列元件轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子、編碼含有SEQIDNO:158的l-6卯氨基酸殘基或SEQIDNO:158的1458氛基酸殘基的多肽的DNA序列、以》^轉(zhuǎn)錄終止子；以及(b)回收所表達(dá)的多肽。所述多J3iiE可在下列疾病的治療中用于結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F，所述疾病包括銀屑病、特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、萊姆病(Lymedisease)關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿桊性休克、多器官功能衰竭、炎'l!i^損傷例如哮喘、慢性阻塞',疾病(COPD)、氣道高紐性、慢性支氣管炎、過敏性哞喘、細(xì)菌性肺炎、4^病、濕滲和炎性腸病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌(^//co^c妙/^/柳')感染、由JtM炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的內(nèi)粘連和/或旨、系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、多良癡性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)'l!i^化、系統(tǒng)'l!i^化癥、^JL病、腎病綜^^征、敗血癥、器官移植排斥反應(yīng)、移^ti物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移植排斥反應(yīng)、M^菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦炎/牙周炎、單純皰滲性角J^質(zhì)炎(herpeticstromalkeratitis)、骨質(zhì)i^M^、神經(jīng)炎、單純皰務(wù)性角M^質(zhì)炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌#管形成(如卵巢癌、宮頸癌和前列腺癌)、B細(xì)lfe^巴瘤、T細(xì)J!^沐巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。本發(fā)明提供了編碼一種多肽的分離的核^^",所述被編碼的多肽與SEQIDNO:158的200-458氨基酸殘基(它包括IL-17RC的外顯子8^16)、SEQD)NO:158的32-458^^i^(它包括IL-17A的外顯子l"6以;SJL-17RC的外顯子8-16)、或SEQIDNO:158的l-458^J^^基、或SEQIDNO:158的32-690^J^酸^4iLSEQID]\0:158的1~690#^^1^具有至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%和至少99.5%的序列同一性，其中所述多肽能夠結(jié)合IL-17A和/或IL-17F。在某些實(shí)施方案中，所述被編碼的多肽不含有SEQIDNO:158的1-690^^^JJISEQD)NO:158的l-458^^基。在某些實(shí)施方案中，所述多肽不是通過下述方法產(chǎn)生的(a辟養(yǎng)已導(dǎo)A4達(dá)載體的細(xì)胞，所&達(dá)載體含有有效連接的下列元件轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子、編碼^^有SEQIDNO:158的1-690氨基酸殘基或SEQD)NO:158的145aU^i基的多肽的DNA序列、以^^轉(zhuǎn)^if止子；以A(b)回收所表達(dá)的多肽。所述多J^可在下列疾病的治療中用于結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和BL-17A和/或IL-17F，所述疾病包括銀屑病、特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎，內(nèi)毒素血癥，關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，萊姆病關(guān)節(jié)炎，#^病關(guān)節(jié)炎，^A呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿桊汰休克、多器官功能衰竭、炎',損傷例如哮喘、慢性阻塞,疾病(COPD)、氣道高站性、慢性支氣管炎、過敏性哞喘、細(xì)菌',炎、#^病、濕#炎'病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌感染、由JM炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的，內(nèi)粘連和/或,、系統(tǒng)性紅斑狼齊(SLE)、狼備性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)'I4^化、系統(tǒng)'l^t化癥、狄病、腎病綜合征、觸癥、器官移^tt排斥A^、移^t物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移^tt排斥^、M菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦^l/牙周炎、單純皰滲1±角^質(zhì)炎、骨質(zhì)疏松、神經(jīng)炎、單純皰務(wù)性角J^質(zhì)炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌#管形成(如卵巢癌、宮頸癌和前列腺癌)、B細(xì)lfe^巴瘤、T細(xì)JJ^巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。本發(fā)明還提供了編碼一種多肽的分離的核i^子，其中所述核i^子能夠在特定雜交M下與SEQIDNO:157的598-1374核苷酸(或其全長互4H^)、SEQIDNO:157的94-137磁苷斷或其4^互^H^)、SEQIDNO:157的l國1374核苷酸(或其4^互4H^)、SEQIDNO:157的94-207條苷^(或其4H^互4W9或SEQIDNO:157的1-2070核苷酸(或其全長互4H^)雜交，所述特定雜交M為在雜交溶液(5xSSC(lxSSC為0.15M氣/tt^l和0.015M梓檬酸鈉)、0.02%十二^fo^酸鈉(SDS)、0.1。/oN-十二^U^酸鈉、1%封閉試劑)中于62匸預(yù)雜交1小時(shí)，然后用2xSSC,0.1%SDS在室溫下嚴(yán)格洗滌兩次，每次5分鐘，再在62X:下用0,5xSSC,0.1%SDS洗滌15^4t;其中所述被編碼的多肽能夠結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL"17F。所述^L編碼的多M可用于治療銀屑病、特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、萊姆病關(guān)節(jié)炎、銀屑病、關(guān)節(jié)炎、威^A呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿毒性休克、多器官功能衰竭、炎'^N員傷例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、氣道高^性、慢性支氣管炎、過敏性孝喘、細(xì)菌',炎、銀屑病、濕#炎性腸病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌感染、由炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的腹腔內(nèi)粘連和/或膿腫、系統(tǒng)性紅斑狼瘙(SLE)、狼瘙性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)'頓化、系統(tǒng)'|化癥、硬皮病、腎病綜合征、J5Ul癥、器官移植排斥反應(yīng)、移;ti物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移^t排斥反應(yīng)、,菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦A/牙周炎、單純皰療性角J^質(zhì)炎、骨質(zhì)疏松、神經(jīng)炎、單純皰務(wù)性角MJ^炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌^管形成(如卵巢癌、宮頸癌、前列腙_癌)、B細(xì)胞林巴瘤、T細(xì)Jffe^巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。本發(fā)明還提供了含有SEQBONO:183的l-426^^J^、SEQIDNO:183的1-657絲^J^SEQIDNO:183的l-658^^J^的分離的多肽。絲地，所述多Jlbi可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。所i^疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的衍生物。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)J^性("ADCC")和/或蜂H^，性細(xì)J^性("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQIDNO:183的427-657^^i絲SEQIDNO:183的427-658^J^1^。所述多JM可^J4包括分;i;Ht號序列，例如人類IL-17RA(例如SEQIDNO:184和185)、人類IL"17RC(例如SEQD)NO:2的l-20^J^i^)、otPA前原信號晰SEQIDNO:178)、人類生長激素(SEQIDNO:168和169)以及人類CD33(SEQIDNO:172和173)。所述多肽可在培養(yǎng)的細(xì)胞中被重^E^達(dá)，所述細(xì)胞例如原核細(xì)胞(例如:^桿菌)和真核細(xì)胞(例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如中國倉鼠卵巢細(xì)#酵母細(xì)胞例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴斯德畢赤酵母(Pidiiapastoris))。本發(fā)明還提供了編碼含有SEQIDNO:183的1426^^l基的多肽的分離的核^^。所述核^^可為例如SEQIDNO:182的核苷酸序列。^i^&，所述被編碼的多皿可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的衍生物。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)J^性("ADCC")和/或4h^，性細(xì)l^)!i("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQIDNO:183的427-657^tJ^i#SEQIDNO:183的427-658^^1^。所述^L編碼的多肽i^可^i^包括分泌信號序列，例如人類IH7RA(例如SEQIDNO:184和185)、人類IL國17RC(例如SEQIDNO:2的l-20絲^t^)、otPA前原信號肽(SEQIDNO:178)、人類生長激素(SEQEDNO:168和169)以及人類CD33(SEQIDNO:172和173)。所述被編碼的多肽可在培養(yǎng)的細(xì)胞中被重姿J^達(dá)，所述細(xì)胞例如原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)和真核細(xì)Jffe(例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如中國倉鼠卵巢細(xì)胞和酵母細(xì)胞例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris))。本發(fā)明還提供了一種表達(dá)載體，所述載體含有有^i^接的下列元件a)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子；b)編碼一種多肽的DNA區(qū)段，所述被編碼的多肽含有SEQIDNO:183的l-426狄絲基；以及c)轉(zhuǎn)錄終止子。所述被編碼的多腿可包括免疫J^蛋白部分。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的衍生物。所it免il^^蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性("ADCC")和/或4H^依賴性細(xì);j^性("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQIDNO:183的427-657jtJ^^J^SEQIDNO:183的427-658^tJ^^。所述被編碼的多Jte可任選地包括分泌信號序列，例如人類IL-17RA(例如SEQIDNO:184和185)、人類IL-17RC(例如SEQIDNO:2的1-20^J^^J^)、otPA前原信號肽(SEQIDNO:178)、人類生長激素(SEQIDNO:168和169)以及人類CD33(SEQIDNO:172和173)。所述被編碼的多肽可在培養(yǎng)的細(xì)胞中被重纟1^達(dá)，所述細(xì)胞例如原核細(xì)胞(例如;t^桿菌)和^fe細(xì)胞(例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如中國倉鼠卵巢細(xì)l^酵母細(xì)胞例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris))。本發(fā)明還4^供了一種產(chǎn)生多肽的方法，包括培養(yǎng)已被導(dǎo)A^文所述的表ii^體的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞表達(dá)由所iiDNA區(qū)段編碼的多肽；以及回i!t^斤^^達(dá)的多肽。本發(fā)明還提供了一種組合物，所i^ia合物包含含有SEQIDNO:183的l-426M^l基的多肽以及可藥用的載體。任選地，所述多g可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。所狄疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的衍生物。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性("ADCC")和/或4h^依賴性細(xì)J^性("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQIDNO:183的427-65Tt^^li^SEQIDNO:183本發(fā)明還提供了一種治療患有疾病的受試者的方法，所述方法包M予所述受"^"含有SEQIDNO:183的l-426^M基的多肽，其中所述多肽能夠結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和IL-17A和/或nrl7F的活性，并且其中所述疾病選自銀屑病、特應(yīng)性皮炎和"^觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、萊姆病關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿桊性休克、多器官功能衰竭、炎'li^損傷例如哞喘、慢性阻塞',疾病(COPD)、氣道高M(jìn)性、慢性支氣管炎、過敏性哞喘、細(xì)菌#^炎、銀屑病、濕瘆和炎性腸病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌感染、由炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的腹腔內(nèi)粘連和/或膿肺、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、狼癍性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)'l!i^化、系統(tǒng)性硬化癥、M病、腎病綜合征、敗血癥、器官移植排斥M、移;fct物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移植排斥反應(yīng)、M^菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦il/牙周炎、單純皰瘆性角J^t炎、骨質(zhì)疏松、神經(jīng)炎、單純皰務(wù)性角g質(zhì)炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌鈔管形成(如卵巢癌、宮頸癌和前列腺癌)、B細(xì)g巴瘤、T細(xì)胞林巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。>^地，所述多^ii可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。所述免疫^l蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的衍生物。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有^^依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)J^性("ADCC")和/或矛HN^性細(xì)J^性("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQB0NO:183的427-657JU^ll^SEQIDNO:183的427-658^^Jl。本發(fā)明還提供了一種治療患有疾病的受^"的方法，所述方法包M予所述受試者一種組絲，所i^^包含含有SEQIDNO:183的l-426^絲基的多#可藥用的栽體，其中所述多肽能夠結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL"17F的活性，并且其中所述疾病選自銀屑病、特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、萊姆病關(guān)節(jié)炎、#4病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿毒性休克、多器官功能衰竭、炎',損傷例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、氣道高反應(yīng)性、慢性支氣管炎、過敏性哮喘、細(xì)菌',炎、銀屑病、濕麵炎.f錫病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌感染、由皿炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的tt內(nèi)粘連和/或旨、系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、狼瘙性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)'I;4^化、系統(tǒng)'ti^化癥、^C病、腎病綜合征、敗血癥、器官移植排斥反應(yīng)、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移植排斥反應(yīng)、M^菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦炎/牙周炎、單純皰滲性角J^t炎、骨質(zhì)琉險(xiǎn)、神經(jīng)炎、單純皰務(wù)性角J^t炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌#管形成(如卵巢癌、宮頸癌和前列腺癌)、B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞林巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。任選地，所述多l(xiāng)kJ^可包括免疫球蛋白部分，例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以來源于例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgM、IgE或它們的矛汴生物。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可以具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性("ADCC")和/或^H^依賴性細(xì)胞條性("CDC")。所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)可為例如Fc5、FclO、SEQIDNO:183的427-657M^J^SEQEDNO:183的427-658^^i基。本發(fā)明還提供了能夠與含有SEQIDNO:183的l-426^^i^、SEQIDNO:183的l-657^J^^J^V或SEQIDNO:183的l-658^J^^^的多肽特異性結(jié)合的抗絲脅片段。所述^/^脅片m自多克隆脅、鼠類單克隆*、來源于鼠類單克隆M的人源化M、*片段、中和^^和人類單克隆M。4i^4,所述^/^片段可為選自下列的片段F(ab，)2、F(ab)2、Fab，、Fab、Fv、scFv和最小識別iH^。本發(fā)明還提供了能夠與本文所述的抗^:^片段特異性結(jié)合的，#^*。本發(fā)明還提供了含有SEQIDNO:183的l-426^^JJ^免疫球蛋白部分的融M白。^i^，所述免疫球蛋白部分可為免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，例基。本發(fā)明還提供了編碼上^^融合i白的分離的核酸分子，例如S^QIDNO:182的l-1971核苷酸和SEQIDNO:182的l-197磁苷酸。4^發(fā)明^￡4^供了含有上述融^"白和可藥用栽體的組合物。所述組合物可以用于治療本i^斤述的一種或多種不同疾病。序列同一性百分?jǐn)?shù)可通過常規(guī)方法測定。參見例如，Altechul"d，5wtt她欲.歷汰他603(1986)和HenikoffandHenikoff，油汰M,《9:10915(1992)。簡而言之，^^1空位開放罰分為10，空^4伸罰分為1，并使用表6所示的Henikoff和Henikoff(如上iiiL獻(xiàn))的"BLOSUM62"評分矩陣，將兩個(gè)M酸序列進(jìn)行比對以優(yōu)化t時(shí)分?jǐn)?shù)(用標(biāo)準(zhǔn)單字母編碼表示#^酸)。同一性百分?jǐn)?shù)按下式計(jì)算([相同匹配物的總數(shù)I/[較長序列的長度+為比對兩序列而在較A亭列中引入的空位數(shù)])(100)。表6ARNDcQEGHIKMFPSTwYA4R-15N誦206D-2誦216C0-3-3-39Q-1100-35E-1002■425G0-20-1-3誦2-26H-201-l隱300-28I-1-3-3誦3-l-3-3-34-1-2-3■4-1隱2-3-324K隱l20-1隱311-2-l-3-25M-l-l-2-3-l0國2-3-212-15F國2-3誦3-3-2-3-3誦3-l00-306P-1-2-2國l-3-1-1-2-2-3-3-1-2■4S1-l10-1000-1-2-20隱l-2-l4T0墨l0-l-1-1-1-2-2-1國l隱l誦l-2-115W-3-3■4曙2誦2-3-2-2-3-2-3陽l1-3-211Y-2-2-2-3-2-1-2-32-1誦l-2-13-3-2-227V0隱3-3-3—1-2-2-3-331-21-1-2-20陽3-1本領(lǐng)域技術(shù)人員了解有多種已知算法可以用于比對兩個(gè)M酸序列。Pearson和Lipman的"FASTA"相似性搜索算法^l一種合適的蛋白質(zhì)比對方法，可用于檢測本文公開的^J^序列和一種推定的n^l7RC變體的M^列之間的同一性水平。FASTA算法描述于PearsonandLipman，jRwa7VW/Jcfld5tA85:2444(1988)和Pearson，￡>i^;w/:7&:63(1990)。簡而言之，F(xiàn)ASTA首先在不考慮保守性M酸置換、插入或缺失的條件下，識別查詢序列(例如SEQIDNO:2或SEQIDNO:3)和測試序列共有的、具有最高密度同一性(在ktup變量-l時(shí))或同一'樹(在ktup變J^2時(shí))的區(qū)域，從而表征序列相似性。然后通過^^I絲紅換矩陣H^;斤有配對的^^酸的相似性，對具有最高密度同一性的十個(gè)區(qū)域迸行再評分，并將各區(qū)域的末端"修剪"為僅包括那些對最高評分有貢獻(xiàn)的殘基。如果有一些區(qū)域的得分高于"閾(cutofO"值(通過基于序列長度和k加iHi預(yù)定的公式計(jì)算得出)，則檢測修剪后的初始區(qū)域以確定這些區(qū)域是否參與形成有空位的近似比對。最后，使用改進(jìn)的Needleman畫Wunsch-Sellers算法(NeedlemanandWunsch，/楊A(yù)錄444(1970);Sellers,5Z4M/.J/p/:26:787(1974))比對兩個(gè)^J^^列的得分最高的區(qū)域，該算法中考慮了M酸插入和缺失。FASTA分析的示例性M為ktup=l、空位開放罰h10、空位延伸罰^l以及置換矩I^BLOSUM620可以如Pearson，^yigwM15:63(1990)的附錄2所述，通過修改評分矩陣文件("SMATRIX")，將上述^lt引AJASTA禾I^中。也可以使用上述公開的比值，將FASTA用于測定核^子的序列同一性。對于核苷酸序列比對而言，ktup值可為l至6、^^i^為3至6、最優(yōu)逸地為3，^fe^^:的設(shè)置同上所述。本發(fā)明包^it樣的核酸分子它所編碼的多肽與本文公開的JL^酸序列相比含有保守性的JL^酸改變。例如，可獲得如下變體所述變體包^SEQIDNO:2或21的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的置換，其中用烷基氨基酸置換IH7RA或IH7RC氨基酸序列中的烷基氨基酸、用芳香族氨基酸置換IL-17RA或H7RC氨基酸序列中的芳香族氨基酸、用含硫的氨基酸置換IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的含硫M酸、用含羥基的氨基酸置換IL-17RA或IL-17RC氨基酸序列中的含羥基氨基酸、用酸性氨基酸置換IL-17RA或IL-17RC絲絲列中的酸性絲酸、用堿性絲紅艦-17RA或IL-17RCM酰亭列中的>5^性#^酸，或用二元iN^^^l^IL"17RA或IL"17RC絲斷列中的二元jf^^絲酸。在常JL^酸中，例如，"保守性^酸置換"可用下列各組內(nèi)的絲^J^目置^M兌明(l)甘氨酸、丙氨酸、翔氨酸、亮氨酸和異亮氨酸，(2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，(3)絲氨酸和蘇氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨i^和天冬,，以及(6)賴氨酸、精氨酸和組氨酸。BLOSUM62表為來源于蛋白質(zhì)序列區(qū)段的約2，000次局部多重比對的M酸置換矩陣，代表了多于500組相關(guān)蛋白質(zhì)的高度保守區(qū)域(HenikoffandHenikoff,iVwiVW/X^wi5tif/^X4卵:10915(1992》。因此，可以使用BLOSUM62置換頻率來確定可被引WJ本發(fā)明絲斷列中的保守性絲酸置換。雖然可以M于化學(xué)'M來設(shè)計(jì)"tJ^i:換(如上所述的)，但是術(shù)語"保守性J(J^^換"^^^指的是在BLOSUM62表中數(shù)值大于-l的那些置換。例如，如果某一^J^^^換在BLOSUM62表中用數(shù)值為0、1、2或3表征，則該置換為保守性置換。4緣這一系統(tǒng)，優(yōu)選的保守性^^M換在BLOSUM62表中的表征數(shù)值至少為l(例如l、2或3),而更優(yōu)選的保守性氨基酸置換在BLOSUM62表中的表;^Elt值至少為2(例如2或3)。IL-17RC的M變體可表征為與相應(yīng)M酸序列(例如SEQIDNO:2或21)具有至少70。/0、至少80%、至少卯％、至少95%或大于95%例奶6%、97%、98%或99%或更高的序列同一性，其中所述JL^酸序列的變化來自于一個(gè)或多^守性^J^i:換。例如可以通過用核苦酸4戈替SEQIDNO:l或SEQIDNO:4所示的核苷酸，在1-171^或11^1711<:基因中引入保守性#^改變。可以通it^fe苷酸定向誘變、接頭分區(qū)誘變、使用聚合Sl^it^應(yīng)的誘變等方法(參見Ausubd(1995);和McPherson(編著)，D/mto/Mwtog欲esis..爿Practfcfl/^4/;/wYWic/r(IRLPress1991))，獲得這類"保守性^J^"變體?？赏ㄟ^與抗IL"17RC抗^!t異性結(jié)合的能力來識別變體IL-17RC多肽。本發(fā)明的蛋白質(zhì)還可包括非天然存在的JLi^^。非天然存在的JU^包括但不限于反^3-曱絲氨酸、2，4-曱醇絲氨酸、順式4^絲氨酸、反式4-羥Ut氨酸、iV-甲基甘氨酸、別蘇氨酸、甲基蘇氨酸、羥基乙基半賄酸、羥基乙基高半Jj3t^酸、硝l^tj^、同型^jl^(homoglutamine)、六氫哌微酸、瘞wj^酸、脫Ut氨酸、3-和本甲絲氨乾33-二甲^Jt氨酸、^L-亮氨酸、正纈氨酸、2-氮雜苯丙氨酸、3-氮雜苯丙氨酸、4-氮雜苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。在4^頁域中，一些用于將非天然存在的絲i^^引入蛋白質(zhì)的方法是已知的。例如，可以佳月這樣一種體外系統(tǒng)，該系統(tǒng)中使用化學(xué)MSM匕抑制物tRNA抑制了無義突變。合^&酸和^JJlMttRNA的方法是^2M頁域中已知的。通常，在一種含有^桿菌(五."http://)8304是取物和市售的酶類和其他試劑的無細(xì)胞系統(tǒng)中，進(jìn)行含有無義突變的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)^，。通過色鐠法純化蛋白質(zhì)。參見例如，Robertson"flA，/.爿肌C&抓5^c:J":2722(1991)、Ellman""，7W^欲^wfe￡>igwM^2似:301(1991);Chung""，5W朋ce259:806(1993)和Ch皿g""A,PSrwiVa,，/爿aidLf/5^卯:10145(1993)。在第二種方法中，通過微注射突變mRNA和化學(xué)^J^M匕抑制物tRNA，在非洲蟾蜍(Xenopus)卵母細(xì)胞中進(jìn)行翻譯(Turcatti""，/C7^肌2TZ:19991(1996))。在第三種方法中，在不含有所要取代的天然M酸(例如苯丙氨酸)而含所需的非天然存在的IL^酸(例如2-氮雜苯丙氨酸、3-氮雜苯丙氨酸、4-氮雜苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酸)的培養(yǎng)基中培養(yǎng);tM桿菌細(xì)胞。非天然存在的氨基酸就被引入蛋白質(zhì)中而替代了其天然對應(yīng)物。參見KoideWA，歷oc/^抓":7470(1994)。可以通過體外化學(xué)修飾將天然存在的M^l^轉(zhuǎn)化為非天然存在的種類?？梢?[匕學(xué)^^與定點(diǎn)誘變相結(jié)合，以進(jìn)一步擴(kuò)ylli換的范圍(WynnandRichards,iV0te//1Sc力2:395(1993))?？梢杂糜邢迶?shù)量的非保守性JL^酸、不是由遺傳密碼子編碼的M酸、非天然存在的M酸和非天然g^I^IL"17RA或BW7RC的^J^^l基?？梢愿鶕?jù)下述本領(lǐng)域已知的方法識別本發(fā)明多肽中的關(guān)^:M酸，例如定點(diǎn)誘變或丙氛酸掃描(alanine"Sca皿ing)誘變(Cu皿inghainandWells，5W欲ce2:1081(1989);BassnA,A^，/爿c"dSciK&4朋:4498(1991);CoombsandCorey,"Site-DirectedMutagenesisandProteinEngineering,"見于7Vote//w.^4"flr/>w/s朋"i)es/g"，Angeletti(編著)，第259隱311頁(AcademicPress,Inc.1998))。在丙氨酸掃描誘變技術(shù)中，對襯中的每個(gè)^J-位置都引入單個(gè)的丙氨酸突變，并測試所得的突變體分子的生物活性，從而識別分子活性的關(guān)鍵絲^1^。還可參見，旭toii"aiL，丄說MO^饑277:4699(1996)。雖然可以^JI序列分析iMi—步確^JL"17RA或IL"17RC配體結(jié)合區(qū)域，但是也可以通過結(jié)構(gòu)的物理分析來測定對于IL-17RA或IL-17RC結(jié)合活性(例如IL-17RC與I1-17A或IL"17F的結(jié)合，以;SJL"17RA與IL"17A的結(jié)合)^作用的JL^酸，所述結(jié)構(gòu)的物理分析可通過例如下述的方法并結(jié)合對推定的接觸位點(diǎn)^J^的突變而測定核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和力標(biāo)記。參見例如，deVos"dl，化/柳ce255:306(1992)，Smi也"/.^/o厶"4:柳9(1992)和WlodaverWd，JERS丄e汰3卯:59(1992)。*^而言，識別了以下三個(gè)結(jié)構(gòu)域1)結(jié)構(gòu)域1(SEQIDNO:159和160)包括IL"17RC的外顯子8"10。i^J"應(yīng)于IH7RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基193-276和IL"17RCx4(SEQIDNO:166)的^J^i^208-291;2)結(jié)構(gòu)J^2(SEQIDNO:161和162)包括n^l7RC的外顯子ll-13。i^J"應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基277-370和BL"17RCx4(SEQIDNO:166)的M^J^92-385;493)結(jié)構(gòu)^3(SEQIDNO:163和164)包括IL-17RC的外顯子14"16。i^J"應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的氨基酸殘基371-447和IL"17RCx4(SEQIDNO:166)的狄^j386-462。可以用已知的誘變方法和篩選方法制備多個(gè)Mg換并進(jìn)行測試，所述方法例如Reidhaar-Olson和Sauer(5We"ce2^/:53(1988))或Bowie和Sa股r(iVwiV^7JawiScit/5^S6:2152(1989))中公開的方法。簡而言之，以Ji^者公開的方法包括同時(shí)隨^M匕多肽中的兩個(gè)或多個(gè)位置、篩選功負(fù)fe性多肽，并隨后對誘變的多肽測序以確定在^-位置上可以置換的圖譜。務(wù)他可以使用的方法包括嗟菌體展示(例如Lowmane"/1，^:10832(1991);Ladner^人的美國專利No.5^223,409;Huse的國際申請公布WO92/06204)和區(qū)域定向誘變(DerbyshireC"A，(7e"e":145(1986)和NerCdl，Z)A^7:127，(1988))。此外，可克隆。,'二，還可以通itSteimner，池/臟，389(1994);Stemmer，iVw泡7W:10747(1994)和國際申請公布WO97/20078中公開的DNA^i且技術(shù)，產(chǎn)生所公開的IL-17RC或IL-17RA核苷酸和多肽序列的變體。簡而言之，通it將"^體DNA隨機(jī)片殺f匕，然后佳月PCRi^f亍重新iE^JMi^亍體外同源重組，從而產(chǎn)生隨機(jī)引入的點(diǎn)突變，以產(chǎn)生變體DNA^。這一技術(shù)可以通過使用母體DNA分子的家族(例如來自不同物種的等位基因變體或DNA分子)進(jìn)行改進(jìn)，以在過程中引入另外的可變性。對所需活性的選擇或篩選，接著進(jìn)行另外的^1誘變和測定提供了序列的'fel"進(jìn)化"，這種進(jìn)化是通iti^擇所需的突變并同時(shí)篩選掉有害的改變而實(shí)現(xiàn)的。本文公開的誘變方法可以與高通量自動(dòng)篩選方法相結(jié)合，以檢測宿主細(xì)胞中克隆的誘變多肽的活性?？梢约言耂d/R化裝置從宿主細(xì)胞中回Jjt^碼生物活性多肽或與抗IL-17RC或IL-17RA^結(jié)合的多肽的誘變DNA分子，并對其快速測序。這些方、^f吏得可以iStil確定目的多肽中個(gè)別^J^l^的重要性，并可以應(yīng)用于未知結(jié)構(gòu)的多肽。本發(fā)明還包括IL-17RC或IH7RA多肽的"功能性片段"和編碼這類功能性片段的核酸分子。這些功能性片段可以單獨(dú)M-^結(jié)合一個(gè)或多個(gè)配^即IL-17A和IH7F兩者)?？梢赃M(jìn)行核酸分子的常規(guī)缺失分析，以獲得編碼EL-17RC或IL-17RA多肽的核^子的功能性片段。例如，可以用及必l核酶來消化具有SEQIDNO:l或SEQIDNO:4的核苷酸序列的DNA分子，以獲得一系列嵌狄失。然后將所述片段插A^達(dá)載體的合適的讀碼框中，分離所表達(dá)的多肽并測試其與抗IH7RC:^結(jié)合的能力?；蛘呖梢圆?捐外切核酸酶消化而使用寡核苷酸定向誘變，來引入缺失或者終止密碼子來限定所需片段的產(chǎn)生?；蛘呖梢?^l聚^Sl^iU^來合j^IL-17RC或IL^17RA^因的特定片段。這一通用方法在HorisbergerandDiMarco，66:507(1995)所總結(jié)的對于干擾素的一端或兩端截短的研究中有所示例。jW^卜，用于蛋白質(zhì)功能性分析的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在下述文獻(xiàn)中有所描述例如，Treuter""，G肌(7e""2掀113(1993);ContentC"/，"Expressionandpreliminarydeletionanatysisofthe42kDa2-5Asynthetaseinducedbyhumaninterferon"/"to/mwi^"fems，Cantell(編著)，第65-72頁(Nijhoff1987);Herschman，"TheEGFReceptor,"見于Co"加/<^4"/腳/O//7Vo/^#Yi/fe"，7，BoyntonC(編著)第169-199頁(AcademicPress1985);Coumailleau""，/CAe饑270:29270(1995);Fukunaga"dL,/.C&抓270:25291(1995);YamaguchiCd，丑/oc/ie肌/^flmjflcM50:1295(1995)和MeisdCd，A/o/ec:3決1(1996)。本發(fā)明還考慮到了與本文公開的氨基酸序列相比具有氨基酸改變的IL-17RC或IL-17RA^因的功能性片段?？梢匀缟纤鵬iiikit過測定與所公開的核苷酸和M酸序列的同一性水平，基于結(jié)構(gòu)來識別變體IU7RC或IL-17RA基因。另一種基于結(jié)構(gòu)識別變體基因的方法是測定一種編碼潛在變體IL"17RC或IL-17RA基因的核酸W是否能夠與包括例如SEQIDNO:l或SEQIDNO:4的核苷酸序列的核酸分子雜交。本發(fā)明還包括^J^IH7RC或IH7RA多肽的功能性片段、IL-17RC和/或IL-17RA多肽的抗原性表位、帶有表位的部分或配體結(jié)合部分，以及編碼IL-17RC和/或IL"17RA多肽的這類功能性片段、^^'li^位、帶有表位的部分或西沐結(jié)^P分的核^^。^l這類片Wt產(chǎn)生多肽，以用于產(chǎn)生能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL"17F的活性的可溶1"生受體或結(jié)合襯。本議義的"功能性"IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多狄其片段的特征是它們能夠通過其誘導(dǎo)或抑制M細(xì)胞功能的能力或與IL-17A和/或IL-17F特異性結(jié)合的能力，從而阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL"17A和/或IL"17F的炎癥活性、增殖活性或^M匕活性。如上文所述，IL-17RA和IL-17RC都是以本文所述的獨(dú)特細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域?yàn)樘卣鞯?。因此，本發(fā)明M慮了^^1包括下艦的融錯(cuò)白(a)包括一個(gè)或多個(gè)上雌構(gòu)域的多肽襯；以及(b)包括一個(gè)或多個(gè)上^構(gòu)域的功能性片段。所，M白的絲多肽部分可以來自另一種細(xì)胞因子受體，例如IL-17樣受體、IL-17RA、IL-17RE、IL-17RD，或來自可以促i^斤述融M白分泌的非天然和/或非相關(guān)的分泌信號肽。本發(fā)明還提供包括本文所逝L"17RC或IH7RA多肽的配體結(jié)合部分的多肽片段或肽。這類片M肽可包括IL"17RC或IL-17RA的與其各自配/^(IL-17A和/組-17F)結(jié)合的部分。對于IL-17RC或IL-17RA多肽(包括變體和融^^白)而言，本領(lǐng)域"fit技術(shù)人員<捐以Ji^l和^2所列出的信息，可以容易地產(chǎn)生編碼該變體的完整簡并多核苷酸序列。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用標(biāo)準(zhǔn)軟件基于本文所述的核苷酸和^J^^列設(shè)計(jì)IL-17RC或n^l7RA變體。E)IL~17RC、IL-17RA和II^17RC/II^17RA多肽的制備本發(fā)明的多肽包括錄多肽；可溶性科、同二聚體、異二聚體和多聚體形式的受體；全長受體；受體片段(例如配體結(jié)合片段和^^Ii4位)、功能性片段、和融M白，它們樹以才娥常^t絲重組宿主細(xì)胞中產(chǎn)生。為了絲IL國17RC、IL畫17RA和IL-17RC/IL-17RA^因，必須將編碼所述多肽的核齡子與控制^Ji^體中的轉(zhuǎn)^ii的調(diào)辦列有^i^接，然后再引入宿主細(xì)胞中。適于篩選帶有^Ji^體的細(xì)胞的才斜e^因。適于在M細(xì)胞中產(chǎn)生外源蛋白質(zhì)的表i^^it常含有:(l)編碼細(xì)菌復(fù)制起泉的原核DNA^件和抗生素抗'l^示記，以便于表ii^體在細(xì)菌宿主中生"^對其進(jìn)行篩選；(2傳制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的^feDNAiL件，例如啟動(dòng)子；和(3傳制轉(zhuǎn)錄物的加工的DNAit件，例如轉(zhuǎn)fJf止/多腺苷酸化序列。如上所述，表達(dá)載^ii可以包含編碼分泌序列的核苷酸序列，所述分泌序列指導(dǎo)異源多J!fci^宿主細(xì)胞的分泌途徑。例如，IH7RC表達(dá)載體可包括IU7RC、IL"17RA和IL-17RC/IL"17RA基因和來源于,分泌基因的分泌序列。本發(fā)明的IL-17RC、BL-17RA和IH7RC/IL-17RA蛋白可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞的實(shí)例包括非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero;ATCCCRL1587)、人類胚胎腎細(xì)胞(293JIEK;ATCCCRL1573)、幼倉鼠腎細(xì)胞(BHK畫21，BHK-570;ATCCCRL8544，ATCCCRL10314)、犬腎細(xì)胞(MDCK;ATCCCCL34)、中國倉鼠卵巢細(xì)l&(CHO-Kl;ATCCCCL61;CHODG4452(Chasine,"，S纖Ce汰層"G微il22:555，1986))、大鼠垂體細(xì)J&(GH1;ATCCCCL82)、HeLaS3細(xì)胞(ATCCCCL2.2)、大鼠肝癌細(xì)胞(H-4-II-E;ATCCCRL1548)、SV40轉(zhuǎn)化的猴腎細(xì)J3&(COS"1;ATCCCRL1650)和鼠類胚胎細(xì)胞(NIH-3T3;ATCCCRL1658)。對于哺乳動(dòng)物宿主而言，轉(zhuǎn)f^翻譯調(diào)節(jié)性信號可以來源于哺乳動(dòng)物病毒，例如，腺病毒、牛乳頭狀瘤病毒、猿猴病毒等等，其中的調(diào)節(jié)性信號與具有高表i^jc平的特定基因相關(guān)。合適的轉(zhuǎn)^^，控序列還可來自哺乳動(dòng)物基因，例如，肌動(dòng)蛋白基因、i^^基因、J3/L^l蛋白基因禾，^r屬^t蛋白基因。轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列包括足以指導(dǎo)RNA合成的起始的啟動(dòng)子區(qū)域。合適的真核細(xì)胞啟動(dòng)子包括小鼠^r^^蛋白I基因的啟動(dòng)子(Hamer"/.^/i/^G"e""六273(1982))、皰滲病毒的7^啟動(dòng)子(McKniglit，O//3J:355(1982))、SKW早期啟動(dòng)子(Benoist"aA，7Va/w^^>決304(1981))、勞斯肉瘤病毒啟動(dòng)子(Gorman"d，7Vtf/'/』c<idL79:6777(1982))、巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子(Foecking&"，G柳e45:101(1980))和小鼠乳腺瘤病毒啟動(dòng)子(總體參見，Etcheveriy，"ExpressionofEngineeredProteinsinMammalianCellCulture"見于外她/"五"《/"從/^"^:7^"">/651做</外^//"，Cleland(編著)，第163-181頁(JohnWiley&Sons,Inc.1996))?；蛘?，如果原核啟動(dòng)子受真核啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)，可以佳月該原核啟動(dòng)子(例如噬菌體T3RNA聚合酶啟動(dòng)子)來控制哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的基因表達(dá)(Zhou"fl"MA艦^:4529(1990)和Kaufman"《iViidl爿c她紐":4485(1991))。在某些實(shí)施方案中，將編碼IU7RC、IH7RA和IL-17RC/IL-17RA可溶性受體多肽的DNA序列，或編碼IL"17RC、IL-17RA或IL^7RC/IL"17RA多肽的片段的DNA^列與表達(dá)載體中的表達(dá)所需的其"^il傳元件有^U^接，所述其他遺傳元件通常包括轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子和終止子。載^f^t常含有一個(gè)或多個(gè)可篩選的標(biāo)記和一個(gè)或多個(gè)復(fù)制起氛，但是^U頁域技^pv員應(yīng)認(rèn)識到，在某些系統(tǒng)中可篩選標(biāo)記可以在另一載體中提供，并且可通過^至宿主細(xì)胞基因組中W1供夕卜源DNA的復(fù)制。啟動(dòng)子、終止子、可篩選才朽6、載體和^*^件的選#^是^^頁域技^A員能力范圍之內(nèi)的常旨為。許多這類元件都在文獻(xiàn)中有述并可從供應(yīng)商處商購?？扇苄允荏w復(fù)合物的多個(gè)組分可以共同轉(zhuǎn)染到各自的表達(dá)載體上，或a包括在同一個(gè)表達(dá)載體中。表達(dá)蛋白質(zhì)復(fù)合物中的多個(gè)組分的這類技#本領(lǐng)域中是>^的?？梢詌^糾標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將^i^體引入宿主細(xì)胞中，所述標(biāo)準(zhǔn)^M^包括磷酸鉤轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、賴戰(zhàn)射介導(dǎo)的iHit和電穿孔等等?？梢院Yi^p擴(kuò)增轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，以4l^^"有^L穩(wěn)、定^ii宿主細(xì)l^因組的^Ji^體的重la宿主細(xì)胞。用于將栽體引入絲細(xì)胞的技術(shù)以朋顯性可篩選才封己篩iiil類穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體的技術(shù)在下列文獻(xiàn)中有述例如，Ausubel(1995)和Murray(ed.)，Ge朋7hm^r"/w/￡jgpmss/o"iVotoco/s(HumanaPress1991)。例如，一種合適的可篩選標(biāo)記為可提供新霉素抗生素抗性的基因。在這種情況下，要^在存在新霉素類藥物的條降下進(jìn)行篩選，所述新霉素類藥物例如G^418等等。還可以^^)篩選系統(tǒng)錄高目的基因的表狄平，這一過程被稱為"擴(kuò)增"。擴(kuò)增按照下述步^ii行^^在4MC平篩選藥物的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染體，然后*增加篩選藥物的量，以篩選能夠高水平表達(dá)所引入基因的產(chǎn)物的細(xì)胞。一種合適的可擴(kuò)增可篩選標(biāo)記為二氬葉酸^^SI(DHFR)，它可提供對甲氨喋呤的抗性。也可以佳月務(wù)他藥物抗性基因(例如潮霉素抗性、多藥物抗性、噪呤霉素乙il^移酶)?；蛘?，可以使用可引入4^型變化的標(biāo)記，例如綠色熒光蛋白或細(xì)^4面蛋白例如CD4、CD8、I類MHC和胎盤堿性磷酸酶，從而可通過例如FACS^i^^K分離技術(shù)的方法將轉(zhuǎn)染細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染細(xì)l^目分離。還可以通過使用病毒送遞系統(tǒng)由培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生本發(fā)明的多肽?？捎糜谶@一目的的示例性病毒包括腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、皰療病毒、牛痘病毒和腺伴隨病4(AAV)。腺病毒為一種雙toNA病毒，它是目前研究最透徹的用于iMit異源核酸的基因絲載^K綜述可參見Becker""，Jfe仇。//歷o/1<:161(1994)和DouglasandCuriel，5We"ce&臉必c/"e"4(1997))。腺病毒系統(tǒng)的優(yōu)勢包括可以容納相對較大的DNA插入物、能夠生長至高滴度、能夠感染多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型和能夠與^^有不同啟動(dòng)子的多種5^載^目兼容。通過缺失部分腺病毒基因組，可以容納較大的異源DNA插入物(最高達(dá)7kb)?？梢酝ㄟ^直接連接或通過，共轉(zhuǎn)M粒的同源重組將這些插入物引入病毒DNA。一種方案是缺失病毒載體所必需的￡7基因，這使得病毒不食t^宿主細(xì)胞未^^供^7基因的條降下進(jìn)^f復(fù)制。例如，腺病毒載體感染的人類293細(xì)胞(ATCC編號CRL"1573，45504，45505)可以作為粘附細(xì)胞或在懸浮培養(yǎng)中以相對高的細(xì)胞密度生長，以產(chǎn)生顯著量的蛋白質(zhì)(參見，Gamier"Q;totec/i朋/.":145(1994))。54本發(fā)明的多Jte可以在頭他高等的^^細(xì)胞中表達(dá)，所述高等真核細(xì)胞例如鳥類細(xì)胞、真菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母細(xì)JJ^植物細(xì)胞。桿狀病毒系M^供了將克隆的基因引入昆蟲細(xì)胞的有效手段。合適的表達(dá)載體基于苜蓿4IL^^^04wtogra//mcaft》/7i/cfl)多核型多角體病^(AcMNPV),并^^有爿>^的啟動(dòng)子，例如果錄(Drosophila)熱休克蛋白(^p)70啟動(dòng)子、苜蓿4艮玟^j^fe型多角體病毒立即早期基因啟動(dòng)子(/e-7)和延時(shí)早期WJT啟動(dòng)子、桿狀病毒p^啟動(dòng)子和果蠅金屬硫蛋白啟動(dòng)子。另一種制備重組桿狀病毒的方法^J^了Luckow所述的基于轉(zhuǎn)座子的系統(tǒng)(Luckow，""A,/.Wra/L67:4566(1993))。這-^M絲載體的系統(tǒng)以BAC-to-BAC試劑盒(LifeTechnologies,Rockville，MD)的形式出售。這一系統(tǒng)中使用了含有Tn7轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)運(yùn)載體PFASTBAC(LifeTechnologies),從而以被稱為"bacmid"的;^t粒的形式將編碼多肽的DNAiJlil1至雄桿菌所含有的桿狀病毒基因組中。參見，Hill-PerkinsandPossee，丄Ge汰Fra/172:971(1990)、Bo皿ing，Ge汰Wra/L75:1551(1994)和Chazenbaik^andRapoport，/.5/wc&肌27化1543(1995)。jH^卜，極栽體可包括在所表達(dá)多肽的C端或N端框內(nèi)融合的編碼表位標(biāo)各的DNA，所i^^i^^N如Glu-Glu表位才樹Grussenmeyer""/L,Phc:，，"cad似":7952(1985))。朗^頁域已知的技術(shù)，將含有編碼本發(fā)明多肽的基因的#^栽>^#化至;^桿菌中，并針對bacmid進(jìn)行篩選，含有被中斷的/flcZ基因的即表明為重組桿狀病毒。然后佳月常^U支術(shù)分離含有bacmidDNA的重組桿狀病毒基因組?？梢詫κ纠缘腜FASTBAC載體進(jìn)^^目當(dāng)大程度的修飾。例如，可以除去多角體蛋白啟動(dòng)子并替換為桿狀病毒威性蛋白啟動(dòng)子(^L稱為Pcw，p6"或MP啟動(dòng)子)，所述桿狀病毒堿性蛋白啟動(dòng)子^f狀病毒感染的較早期表達(dá)，并被證實(shí)有利于表達(dá)分泌蛋白(參見例如，Hill-PerkinsandPossee,/Ge汰77:971(1990)、Bonning，"/Ge汰75:1551(1994)和ChazenbalkandRapopoit/.歷o/:C&抓27(9:1543(1995)。在這類絲載輛建體中可以^^1長形式或短形式的堿性蛋白啟動(dòng)子。jH^卜，可以用來源于昆蟲蛋白的分泌信號序列替代天然分;^ft號序列，從而構(gòu)建#^載體。例如，可4^i建體中使用來自蛻皮素葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(EGT)、蜜蜂蜂毒肽(InvitrogenCorporation;Carlsbad,CA)或桿狀病^gp67(PharMingen:SanDiego，CA)的分-JHt號序列來代替天然IL-17RC分^fl:號序列。使用重組病毒或bacmid來轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。合適的昆蟲宿主細(xì)胞包括來源于ffLBn^-21的細(xì)胞系、草地貪^^/wwto/iteiYi戶"gijpmto辨卵巢細(xì)胞系例如55,ATCCCRL1711)、S/21AE和卿(InvitrogenCorporation;S油Diego，CA),以;5L^J^耐德(Schneider)-2細(xì)J^來源于甘蘭尺蠖(rr/d^p/MwViw/)的HIGHFIVEO細(xì)胞系(Invitrogen)(美國專利No.5300，435)。可以^J1市售的無血清培養(yǎng)基^養(yǎng)和維持細(xì)胞。合適的培養(yǎng)基為用于S0細(xì)胞的S000n(LtfeTeclmologies)或ESF921(ExpressionSystems);以;SJ^于甘蘭尺蠖細(xì)胞(r.w/)的Ex-cellO405(JRHBiosciences,Lenexa，KS)或ExpressFiveO(LifeTeclmologies)。當(dāng)使用重組病毒時(shí)，接種密度大約為2-&105個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞由接種密JLi長至l-2xl(^個(gè)細(xì)胞時(shí)加入重組病4^液，感染復(fù)lt(MOI)為0.1至10,更通常鵬m。用于在桿狀病毒系統(tǒng)中生產(chǎn)重組蛋白的成熟技術(shù)在下列文獻(xiàn)中給出Murray(編著)，第147-168頁，BaUey等人的"ManipulationofBaculovimsVectors"(TheHumanaPress,Inc.1991);C7wi/"g么'￡^ressio"&敗鵬，第2版，Glover""(編著)，第205-244頁，Patel等人的"Thebaculovimsexpressionsystem"(OxfordUniversityPress1995);Ausubel(1995),第16~37至16-57頁；Richardson(編著),^rcwfov/ms(TheHumanaPress,Inc.1995)和/We/"五"g/"從W"g:iV"cfc，Cleland"o/l(編著)，第183-218頁，Lucknow的"InsectCellExpressionTechnology"(JohiiWiley&Sons,Inc.1996)。還可以^^l真菌細(xì)lfe(包^母細(xì)胞)WJi^文所述的基因。用于這一目的的特別受關(guān)注的酵母物種包括釀酒酵母(5tfcc/^/Ywg;c然cer^v/s/從)、巴斯德畢赤酵母(Pfc似"/wi對w/s)和甲,赤酵母(Pfc似"附^/^朋//1)。用于在酵母中的表達(dá)的合適啟動(dòng)子包括來自C^4U(半乳糖)、戶GJT(磷酸甘油酸酯激酶)、/4Z)好(醇脫氳酶)、爿OA7(醇氧化酶)、HIS4(組氨醇脫氬酶)等的啟動(dòng)子。已經(jīng)設(shè)計(jì)出了許多酵母克隆載體并且它們都是容易獲得的。這類載體包括基于YIp的載體例如YIp5、YRp栽體例如YRp17、YEp載體例如YEp13，以及YCp栽體例如YCpl9。用外源DNA轉(zhuǎn)化釀酒酵母(Xcem^/ffe)細(xì)胞并由此生產(chǎn)重組多肽的方法爿>開于下列文獻(xiàn)例如，Kawasaki的美國專利No.4,599^11、Kawasaki等人的美國專利No.4,931^73、Brake的美國專利No.4,870,008、Welch等人的美國專利No.5，037，743和Murray等人的美國專利No.4,845,075。通過由可篩選標(biāo)記確定的表型篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，所述可篩選才封2it常為藥物抗'1±^能夠在缺少特定營養(yǎng)物(例如亮氨酸)的條降下生長的能力。一種^^適的用于釀酒酵母的載體系統(tǒng)為由Kawasaki等A(美國專利No.4，931073)^開的PO77載體系統(tǒng)，該系統(tǒng)使得可以通it^含葡萄糖的培養(yǎng)基上的生長來篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。*^可用的美國專利No.4,599^11、Kingsman等人的美國專利No.4，615,974和Bitter的美國專利]\0.4，977，092)和醇脫氬酶基因的啟動(dòng)子和終止子。還可參見美國專利No.4,990,446、5,063,154、5，139,936和4，661，454。用于其它酵母的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)也是^^w4頁域已知的，所述，酵母包括多形漢森酵母(fl"做se"wAz/w/jwwp/f")、粟酒^t酵母(5"c始仍""/wwwwj^s/wwiAe)、乳酸克魯維酵母(AZi(^mwf3;cestoc泡)、脆壁克魯維酵母(A7i^w/w^ces加g戰(zhàn)s)、玉蜀黍黑粉菌(CMfogo附fl[K剩、巴斯德畢赤酵母(Pfc綠/wisftwis)、曱醇畢赤酵母(ftc/r/tf/we欲flrwW/ctf)、季氏畢赤酵母(PfcA/^《"說^///)和麥芽糖假絲酵母(GwwZ/d"附《//做")。參見例如，Gleeson"/.Af&w6/d/32:3459(1986)和Cregg的美國專利No.4,882^279?？梢圆臡tMcKnight等人的美國專利No.4，935^349的方法使用曲霉(勿《^//鄉(xiāng))細(xì)胞。Sumino等人的美國專利No.5，162228中公開了轉(zhuǎn)化產(chǎn)黃頂孢霉(^^附柳/"/c/w^sw^e""/w)的方法。Lambowitz的美國專利No.4，486，533中公開了轉(zhuǎn)化鏈^(/Veww/wra)的方法。例如，下列文獻(xiàn)公開了使用甲醇畢赤酵母作為宿主生產(chǎn)重組蛋白的用途Raymond的美國專利No.5，716，808、Raymond的美國專利No.5，736383、Raymond"F做WW:11-23(1998)和國際申請公布WO97/17450、WO97/17451、WO98/02536和WO98/02565。用于轉(zhuǎn)化曱陣舉赤酵母的DNA^^通常應(yīng)制備為雙鏈環(huán)形質(zhì)粒形式，^H^k^轉(zhuǎn)化前進(jìn)行線性化。為了在甲醇畢赤酵母中生產(chǎn)多肽，質(zhì)粒中的啟動(dòng)子和終止子可為甲^赤酵母基因的啟動(dòng)子和終止子，例如甲S^赤酵母的醇利用基因(^t/(^4yW^)。，可用的啟動(dòng)子包^^二羥基丙酮合H(DHAS)、甲^氳Sl(FMD)和iilL化氳Sl(CAT)基因的啟動(dòng)子。為幫助DNAl^^tAJ宿主染色體，優(yōu)^#質(zhì)粒的整個(gè)表達(dá)區(qū)#在宿主DNA序列兩端的側(cè)翼。一種可用于甲醇畢赤酵母的合適的可篩選標(biāo)己為EC:丄i.21)，并且可:使得ai/:宿主細(xì)M缺少腺噤呤^;降下生長。對于需要盡量減少曱醇使用的;Wt工業(yè)工藝而言，可以使用缺失了兩種甲醇利用基因04t/Gi和JC/G2)的宿主細(xì)胞。為了產(chǎn)生分泌蛋白，宿主細(xì)胞可為空泡蛋白酶基因(PEW和尸i^/)缺陷型細(xì)胞。使用電穿孔來幫助將含有編碼目的多肽的DNA的質(zhì)粒引入甲醇畢赤酵母細(xì)胞。^f捐指數(shù)衰減脈沖電場，通過電穿孑L4H匕曱醇畢赤酵母細(xì)胞，所述電場的場強(qiáng)為2.5至4.5kV/cm，優(yōu)選地為約3.75kV/cm,時(shí)間常數(shù)(t)為l至40亳秒，最^^i^為約20毫秒。還可以將表達(dá)載體引入植物原M體、完整的植物組織或分離的植物細(xì)胞中。將表達(dá)載體《1入植物組織的方法包括用根瘤土壤桿菌04gra^cten'"w似m^ic^is)直接感染植物組織或?qū)⒅参锝M織與根瘤Ji^桿菌共培養(yǎng)、Wi介導(dǎo)的iHiH、DNA注躲電穿孔等等。參見例如，Horsch"aA，5tfew""7:1229(1985)，Klein""，飾te由o/柳:268(1992)和Me^油/"Mtofor朋"5fotec/r朋fogy，GIick""(編著)，第67-88頁，Miki等人的"ProceduresforIntroducingForeignDNAintoPlante"(CRCPress,1993)?；蛘撸幋a本發(fā)明多肽的基因也可以在原核宿主細(xì)胞中表達(dá)?？捎糜谠谠怂拗髦斜磉_(dá)IL"17RC多肽的合適啟動(dòng)子是^2M頁域技"員公知的，包括能夠識別T4、T3、Sp6和T7聚合酶的啟動(dòng)子、"筮菌體的PR和Pi啟動(dòng)子、；^桿菌的印啟動(dòng)子、recv4啟動(dòng)子、熱^K克啟動(dòng)子、/act/K5啟動(dòng)子、似c啟動(dòng)子、啟動(dòng)子、/^ft4啟動(dòng)子和/flcZ啟動(dòng)子、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)的啟動(dòng)子、芽孢桿菌(Bacmus)的噬菌體的啟動(dòng)子、鏈霉菌(Str印tomyces)的啟動(dòng)子.、3J寇菌體的//啟動(dòng)子、pBR322的6/fl啟動(dòng)子和氯霉素乙St^酶基因的CAT啟動(dòng)子。關(guān)于原核啟動(dòng)子的綜述^T參見Glick^/.i>idMicra6/M/:277(1987)，Wateon""，她fecw/"r歷o/ogv<紐(7e"e，4欲￡Vi(BenjaminCummins1987)，和Ausubel""(1995,合適的原核宿主包括;^桿菌和枯草芽抱扦菌(5"^//鄉(xiāng)5""6說鄉(xiāng))/^適的大腸桿菌菌林包括BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH41、DH5、DH51、DH5IF'、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HB101、JM101、JM105、JM109、JM110、K38、RR1、Y1088、Y1089、CSH18、ER1451和ER1647(參見例如，B蘭n(編著)，編mz/"r倫/柳Z^/ox:(AcademicPress1991))。合適的枯草芽孢桿菌菌抹包括BR151、YB886、MI119、MH20和B170(^^見例如，Z)iVJC7wi/"g:爿iVacdai/v4/^raflc/r，Glover(編著)中Hardy的"BacillusCloningMethods"(IRLPress1985))。當(dāng)在例如大腸桿菌的細(xì)菌中表ii^發(fā)明的多肽時(shí)，多肽可食誠常以不可溶顆粒的形式保留在細(xì)胞質(zhì)中，或者可^it過細(xì)菌分泌序列定向至周質(zhì)空間。對于前一種情況，可以，細(xì)胞、回,粒并且使用例如異硫氰^Jl^尿素使其變性。然后通過稀釋變性液(例如用含有尿素和還原型和氧化型谷胱甘肽的溶液進(jìn)行透析，然后再用緩沖鹽溶液進(jìn)行透析M吏變性的多肽重新折疊并二聚化。對于后一種情況，可以通過破碎細(xì)胞(例如超聲破碎或滲it^破碎;K吏得周質(zhì)空間中的內(nèi)綠秋并回收蛋白質(zhì)，從而以從周質(zhì)空間中回收可溶性和功能性形式的多肽，這樣就無需進(jìn)行變性和重新折疊。在原核宿主中表達(dá)蛋白質(zhì)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的(參見例如，D7V^4C7o"/"g2:^E;gwess/o"5^她鵬，第2艮GloverC"A(編著)，第15頁,Williams等人的"Expressionofforeignproteinsinco//usingplasmidvectorsandpurificationofspecificpolyclonalantibodies"(OxfordUniversityPress1995);^Pr/"cijo/ey"</々/|//€^附，第137頁,Ward等人的"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies"(Waey國Liss，Inc.1995)和iV她/w￡>ig/"mig..做<//Vacifce,ClelandC(編著)，第101頁，Geot^iou的"ExpressionofProteinsinBacteria，，(JohnWiley&Sons,Inc.1996))。例如Ausubel(1995)中提供了用于將^Ji^體引入細(xì)菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)JJ&^植物細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)方法。方法在例如/Vvte/"五"g/"^r^"g.'7W"c^fesa""/Vflclfce，Clelanddd(編著)，第163頁，Etcheveny的"ExpressionofEngineeredProteinsinMammalianCellCulture"(Waey-Liss，Inc.1996)中給出?；厥沼杉?xì)菌系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法在例如DAC4C7朋/"g￡^wes^wiS>fems，第2氣Glover"a/1(編著)，第59-92頁，Giisshammer的"Purificationofover-producedproteinsfromcells"(OxfordUniversityPress1995)中給出。A^f狀病毒系統(tǒng)中分離重組蛋白的成熟方法在Richardson(編著)，5tfCMfoWrws1^&^rcssfo"_flratoco&(TheHumanaPress,Inc.1995)中有所描述?；蛘撸梢証^I完全固相合成法、局部固相合成法、片段縮合法或經(jīng)典的溶液合成法來合^^發(fā)明的多肽。這些^^成方法^1;^領(lǐng)^^支^A員7^的(^^見例如，Merr迅eld，/爿肌5W::2149(1963);Stewart"d,"SolidPhasePeptideSynthesis"(第2版)，(PierceChemicalCo.1984);BayerandRapp，尸取3:3(1986);AthertonC《尸伊^feJ/Vflctt'cfl/y4//www^(IRLPress1989);FieldsandColowick"Solid-PhasePeptideSynthesis,"Me幼^wfe/w￡>1矽腳/鄉(xiāng)第289巻(AcademicPress1997)和Lloyd-WilliamsC"A,Or柳/cfl/々/w做cAesto說e^yw幼es/s<尸伊6V/es做cfiVote/朋(CRCPress,Inc.1997))。完全化學(xué)合成策略的一些修^:略，例如"天然化學(xué)連接"和"表達(dá)的蛋白質(zhì)連接"也是本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)方法(參見例如，DawsonC《5We"ce266:776(1994);Hackeng"""油/7Jca^MKS49￥:7845(1997);Dawson，五"矽腳A2S7:34(1997);Muir""/，iVoc:A^Yt/A495:6705(1998)和SeverinovandMuir，/Ote肌本發(fā)明的肽和多肽包絲EQIDNO:2、SEQH)NO:5或SEQIDNO:21的至少6個(gè)、至少9個(gè)或至少15個(gè)連續(xù)氨基酸戎基。例如，多肽可包括SEQIDNO:2、SEQIDNO:5和/或SEQIDNO:21的至少6個(gè)、至少9個(gè)或至少15個(gè)連續(xù)M酸殘基。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述多肽包括上述M酸序列的20、30、40、50、100或更多個(gè)連續(xù)殘基。編碼這類肽和多肽的核酸分子可用作聚合sm^C^的S1物和探針。此外，本發(fā)明的多肽及其片私在高等真核細(xì)胞中可以以牟體、同二聚體、異二聚體或多聚體的形^4達(dá)?？梢约言逻@類細(xì)jJMt產(chǎn)生至少含有IL^17RC多肽的一部分("含IL-17RC的受體"或"含IH7RC的受體多肽")或IH7RC和IU7RA兩者結(jié)合的一部分(以牟沐、同二聚M異二聚體的形式)的IH7RC單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體多肽，或者可以^^這類細(xì)胞作為篩選系統(tǒng)中的測試細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)方面，由培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生至少包括IL-17RC或IL-17RA的J^卜結(jié)構(gòu)域的配體結(jié)合部分的本發(fā)明的多肽，并且所述細(xì)Ji^L用于篩i^^斤述受體的配體，所述西沐包括天然配體IL"17F以^SJL"17A，或者甚至包括天然S沐的激動(dòng)劑和拮抗劑?？偠灾?，這一方法包括將編碼受體的cDNA或基因與其表i^斤需的，遺傳元件(例如轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子)相結(jié)合，然后將所得的表^^^入至宿主細(xì)胞中。選擇表達(dá)該DNA并產(chǎn)生功能性受體的細(xì)胞并將其用于多種篩選系統(tǒng)中?？蒦Nl同的細(xì)胞中表達(dá)單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體復(fù)絲的^組分。W卜，單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體復(fù)^的組姊可以與跨膜結(jié)構(gòu)絲^fe膜融^PW目融合，以使得可以如上所述^yjL^i合物并篩選轉(zhuǎn)染體。為測定本發(fā)明的多肽，適用于表iilH7RC和IL-17RC/IL"17RA受體或已知能結(jié)合IL-17A或IL"17F的其他受體并轉(zhuǎn)導(dǎo)受體介導(dǎo)的信號的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如表iilL-17R的細(xì)胞)，包括冑汰達(dá)可與IL-17RC形成功能性復(fù)合物的其他受體亞基的細(xì)胞。還^i^f吏用與待表達(dá)的受體來自于同一物種的細(xì)胞。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞的增殖依賴于夕卜部提供的it^生長因子。這一類型中優(yōu)選的細(xì)胞系為人類TF-1細(xì)胞系(ATCC保藏號CRL-2003)和AML^193細(xì)胞系(ATCC保藏號d9589),它們是GM-CSF絲'tiA類白血病細(xì)胞系，這一類型中優(yōu)選的細(xì)胞系還有BaF3(Palacios和Steinmete^O//W:727-734，(1985))，它AlL-3依賴性鼠類前B細(xì)胞系(pre"Bcellline)。其他細(xì)胞系包括BHK細(xì)胞、COS-l細(xì)J!fe^CHO細(xì)胞?？梢詫^適的宿主細(xì)l&^行基因工程^，以使其產(chǎn)生目的細(xì)胞應(yīng)答所需的必需受體亞J^，細(xì)JJ^且分。這一方法的優(yōu)勢在于由于可對細(xì)胞系進(jìn)行基因工程^it使其表i^源于^^r物種的受體亞基，因此就克服可來源于物種特異性的潛在限制?？梢钥寺∪祟愂躛cDNA的物種直系同源物并用于來自相同物種的細(xì)胞系中，例如在BaF3細(xì)胞系中使用小鼠cDNA。因此，可以對，于il^生長因子(例如GM-CSF或ILO)的細(xì)胞系進(jìn)行基因工程^it,使其變^f^于另一種通itlL"17RC或IL-17RA受體起作用的細(xì)胞因子，例如IL^17F或IL"17A。在篩選測定中佳月表達(dá)功能性受體的細(xì)胞。本領(lǐng)域已知有多種合適的測定方法。這些測定方法基于對目標(biāo)細(xì)胞中的生物應(yīng)答的檢測。一種這類的測定方法為細(xì)胞增殖測定。分別^在或不存在測試^^物的4Hf下培養(yǎng)細(xì)胞，并檢測細(xì)胞增殖，所述^^測細(xì)胞增殖的方法例如測量氮^^I腺嘧咬的摻入，或者基于3^4，&二甲基噻唑-2-基)^2，5-二苯基四唑溴(MTT)的代謝降解的比色測定(Mosman，/Jwm"m/:M^h.65:55~63，(1983))。另一種測定形i^^l經(jīng)itii一步基因工程&造而表達(dá)報(bào)告基因的細(xì)胞。禍^R告基因與能響應(yīng)受糾目關(guān)it徑的啟動(dòng)子元件相連接，所述測定檢測報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄的激活。這，一方面的M的啟動(dòng)子元件為血清應(yīng)答元件即SRE。參見例如ShawCflA，Ce//56:563-572，(1989)。一^N^選的這類^^4"基因?yàn)榭M光素酶基因(deWet"a/.，MMO汰7:725，(1987))。^^I本領(lǐng)域已知的方法(例如Baumgartner"a"/C/^肌2砂:29094畫29101，(1994);SchenbornandGoiffin，^Pw附煤tf誦A^tes47:11，1993)通it^Ut^測螢光素酶基因的表達(dá)。螢光素酶活性測定試劑盒可從例如PromegaCorp.,Madison,WI商購。這一類型的目標(biāo)細(xì)胞系可以用來篩選化學(xué)物質(zhì)庫、P艮制M細(xì)I^養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)肉湯、i^樣本、^本等等。例如，可以用一系列限制M細(xì)J!fe^養(yǎng)基樣^!，J定目標(biāo)細(xì)胞以識別產(chǎn)生配體的細(xì)胞。然后用陽性細(xì)胞產(chǎn)生哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中的cDNAi^，將所ii^分為多個(gè)混M(pool),轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞中并進(jìn)行表達(dá)。然后測定來自轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)M本，再次分成多個(gè)混^#，再次轉(zhuǎn)染，傳代，并再次測定陽性細(xì)胞，以分離編碼配體的克隆的cDNA。61本發(fā)明提供的另一種篩選方法包括^^雜合的受體多肽。這種雜合多肽分為兩大類。在第一類中，IL-17RC的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域連接另一受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。第二類雜合受體多肽包括IL"17RC的胞夕卜(配體結(jié)合)結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:3)和IL-17RA(SEQIDNO:21)以及另一受^(優(yōu)選為iijk細(xì)胞因子受體)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。所絲二類的本發(fā)明受體的齡的單體、同二聚體、異二聚體和多聚體在已知能夠?qū)λ龅牧硪皇?gt;^#導(dǎo)的信號進(jìn)行應(yīng)答的細(xì)胞中表達(dá)?？傊?，這兩類雜合受體使得可以識別用于開發(fā)檢測IL-17F或IL-17A的測定方法的應(yīng)答細(xì)胞類型。jHW卜，這類細(xì)Jte可以用于4^在IL^17F或IL-17A的條件下，在竟?fàn)幮蜏y定中測定本發(fā)明的可溶性受⑩抗劑。在這類測定中，存在本發(fā)明的可溶性受體時(shí)，增殖或IH7F或IH7A的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的降^^明本發(fā)明的可溶性受^"有拮抗活性。此外，IH7RC-可溶性受體結(jié)合測定是一種基于細(xì)胞的測定方法，它還可^于評估一種可溶性受體是否能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和II^17F或IL"17A的活性。本發(fā)明提供了一種表達(dá)載體，所ii^達(dá)栽體含有有^i^接的下列元件a)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子；b)編碼多肽的DNA區(qū)段，其中所述被編碼的多肽含有與SEQD)NO:158的33-458^^i^具有至少95。/o序列同一性的M酸序列，其中所述多肽能夠結(jié)合IL-17A和/或IL-17F;以及c)轉(zhuǎn)^Jf止子。所^DNA區(qū)g可編碼分^Ht號序列。所^DNA區(qū)段還可編碼免疫球蛋白部分，例如免疫^^蛋白重鏈恒定區(qū)，例如SEQIDNO:158的459-690tJJ^基。任選地，所&ii^體可被導(dǎo)入培養(yǎng)的細(xì)胞，例如^桿菌或中國倉鼠卵巢細(xì)胞，其中所述細(xì)M達(dá)由所述DNA區(qū)^:編碼的多肽。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為一種生產(chǎn)多肽的方法，包括培養(yǎng)已被導(dǎo)A^利要求13的表達(dá)載體的細(xì)胞，其中所述細(xì)#達(dá)由所述DNA區(qū)段編碼的多肽；以及回il^斤ii^達(dá)的多肽。本發(fā)明還提供了一種組合物，所述組^包括含有與SEQIDNO:158的33-458氨基酸^具有至少95%序列同一性的ll^酸序列的分離的多肽以及可藥用的栽體。所述多JM可含有免疫球蛋白部分(例如免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，例如來自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或它們的變體或突變體的Fc區(qū)域，SEQEDNO:175的l-232^^i^，以;SJSEQIDNO:158的459490絲^l&)。本發(fā)明還提供了一種治療患有由于IL"17A和/或IL-17F活性所引起、維持或惡化的疾病的受錄的方法，所i^r法包條予所述受絲含有與SEQIDNO:158的33-458^J^酸^具有至少95"/o序列同一性的Jl^酸序列的分離的多肽，其中所述多肽能夠結(jié)合、阻斷、減少、拮抗或中和IL-17A和/或II^17F，并JI^斤述疾病選自銀屑病、特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、菜姆病關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、膿毒性休克、多器官功能衰竭、炎'1^N員傷例如哞喘、慢性阻塞',疾病(COPD)、氣道高^性、慢性支氣管炎、過敏性哮喘、細(xì)菌性肺炎、銀屑病、濕^炎'1^病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病、幽門螺桿菌感染、由Jtt炎癥(即感染、損傷等)導(dǎo)致的腹腔內(nèi)粘連和/或膿腫、系統(tǒng)性紅斑狼瘙(SLE)、狼瘙性腎炎、I型糖尿病、冠心病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)'f4^更化癥、^病、腎病綜合征、JiBbfe癥、器官移植排斥AJI、移植物抗宿主疾病(GVHD)、(例如腎、肺、心臟的)移植排斥反應(yīng)、M菌細(xì)胞壁(SCW)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦勿牙周炎、單純皰滲性角賂質(zhì)炎、骨質(zhì)疏松、神經(jīng)炎、癌癥包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病、癌#管形成(如卵巢癌、宮頸癌和前列腺癌)、B細(xì)胞林巴瘤、T細(xì)胞林巴瘤、嚢性纖維化、再狹窄和川崎病。F)IL-17RC,IL畫17RA和IL-17RC/D^17RA融^~白和^^^的制備IL^17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL"17RA類似物的一個(gè)大類是具有本文公開的氨基酸序列的突變氨基酸序列的變體。IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA類似物的另一個(gè)大類由如下所述的抗獨(dú)特型抗體及其片段提供。此外，含有皿特型可變結(jié)構(gòu)域的重組抗體也可^U^作類似物(參見例如，Monfardini"A，v4srac:爿肌戶/^s/d""s(1996))。由于^life特型IL-17RC抗體的可變結(jié)構(gòu)域類似于IL-17RC,因此這些結(jié)構(gòu)域可提供IL-17RC結(jié)合活性。生產(chǎn)皿4W催化抗體的方法^1本領(lǐng)域^M^員已知的(參見例如，Joron"，WXci672:216(1992)、Friboulet""，^p/A5/odi肌5te^"o/147:229(1994)和Avalle"《爿肌TVFJowi緣118(1998))。識別IL"17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL^7RA類似物的另一種方法使用了組合文庫。構(gòu)建和篩選喧菌體展示文庫和其^i且合文庫的方法在下列文獻(xiàn)中有述例如，KayCdl，i%flge鄉(xiāng)<尸e/rtiVfes做rfiVo,e/附(AcademicPress1996);Verdine的美國專利No.5，783^384、Kay等人的美國專利No.5，747^334和Kauffman等人的美國專利No.5，723323.IL-17RC、IL"17RA和IL-17RC/IL"17RA多肽可用于體內(nèi)和體外用途。例如，可將可溶形式的IH7RC加入到細(xì)JI^養(yǎng)基中，以抑制由培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17RC配^K即IL-17F和/或IL-17A)的作用。可以^^IL-17RC、IL-17RA和IH7RC/IL-17RA的融^^白絲姊分離相應(yīng)的多肽。如下所述，特定的IL"17RC、n^l7RA和II^17RC/IL"17RA融M白還具有診斷用途和治療用途。一種類型的融M白包括能導(dǎo)向由重組宿主細(xì)胞產(chǎn)生的IH7RC多肽的肽。為指導(dǎo)IL-17RC多肽J^X真核宿主細(xì)胞的分泌途徑，在il-17RC表達(dá)載體中提供了分;:;Hr號序列OiM^稱為信號肽、前導(dǎo)序列、前原序列或前序列)。雖然分泌信號序列可來源于DL"17RC，合適的信號序列也可以來源于另一種分泌蛋白或完全從頭合成。將分泌信號序列與IL-17RC編碼序列有^i^接，以使得這兩個(gè)序列處于正確的讀碼框中，并且它們的位置使得可以指導(dǎo)新合成的多肽i4A^宿主細(xì)胞的分泌途徑。分泌信號序列通常位于編碼目的多肽的核苷酸序列的5，端，但是某些分^ft號序列也可以位于目的核苷酸序列的，位置(參見例如，XVelch等人的美國專利No.5,037,743;Ho!land等人的美國專利No.5,143,830)。雖然由哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生的IL"17RC、IL"17RA和IH7RC/IL"17RA的分泌信號序列(例如美國專利No.5，641，655所述的組織型纖illS^原激活物信號序列)可用于相應(yīng)多肽在重組哺乳動(dòng)物宿主中的表達(dá)，但是對于酵母細(xì)胞中的表達(dá)而言還^_優(yōu)選^^1酵母的信號序列。^^適的酵母信號序列的實(shí)例為來源于酵母交配外^L素ot-因子(由MFo/基因編碼)、轉(zhuǎn)化斷由SC/C2基因編碼)或酸性磷酸酶(由戶好05基因編碼)的那些酵母信號序列。參見例如，Romanos""ExpressionofClonedGenesinYeast"見于Z)A^4O!o"/"g2:爿/Vm/fctf/々/w做c/r，第2i^GloverandHames(編著)，第123-167頁(OxfordUniversityPress1995)?？梢酝╥t^Ji^碼^卜結(jié)構(gòu)域(例如含有整個(gè)SEQIDNO:3或其""^分或非人類受體的相應(yīng)區(qū)域的多肽)的截短型DNA，來制備本發(fā)明的可溶性受體多肽。優(yōu)艦，所制備的^卜結(jié)構(gòu)域多肽形^J^上不含有跨膜多肽區(qū)W^胞內(nèi)多肽區(qū)段。為了指導(dǎo)受體結(jié)構(gòu)域從宿主細(xì)胞的輸出，將受體DNA與編碼分泌肽例如t-PA分泌肽的另一DNA區(qū)勸目連接。為了便于純化分泌的受體結(jié)構(gòu)域，可以在受體多JliUi融—段C端延伸序列，例如多組氨酸標(biāo)4、P物質(zhì)、Flag肽(Hopp""，fi/otecA"ofo狄6:1204-1210，(1988);可購自EastmanKodakCo"NewHaven，CT)或絲具有可獲得的^Mi特異性結(jié)^^的多賦蛋白。在另一種方法中，H17RC、IH7RA或IL-17RC/IL-17RA的受體I^卜結(jié)構(gòu)域或其部分可以與免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)-"^融合表達(dá)，所述免疫^l蛋白重鏈恒定區(qū)通常為Fc片段，它含有兩個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域和一^N^鏈區(qū)域，但是不含有可變區(qū)(參見，Sledziewski，AZ等人的美國專利No.6，018，026和5，750^75)。本發(fā)明的可溶性多肽包^il類融合蛋白。SEQroNO:64顯示了一種這類融M白。這類融^"白通常以多聚體分子的形式分泌，其中所^Fc的各部分feb之間以^it鍵連接，并且兩個(gè)受體多JI;ME排布Ji^此十分接近。il種類型的融合蛋白可用于>^^液中親和純化同源配體，可用作體外測定工具在體外通過特異性滴定配體而阻斷、抑制或減少信號，并且可作為體內(nèi)拮抗劑(通過腸胃外給藥以結(jié)合循環(huán)系統(tǒng)中的配體并將配^w循環(huán)系統(tǒng)中清除)。為了純化配體，可在有利于受^"配體結(jié)合的務(wù)降下(通常接i^t理?xiàng)l降的溫度、pH和離子強(qiáng);^)，向含有配體的樣本(例如限定條件的細(xì)胞培養(yǎng)基或組織提取物)中加入IL"17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA-Ig嵌棘'然后通過^JI蛋白A的混^分離嵌合配體復(fù)#,蛋白A被固定于固相載體(例如不可溶1±#脂)上。然后使用常規(guī)化學(xué)技^(例如鹽梯度或pH梯度)、3y^配體?；蛘?，可#^合體本身結(jié)合在固相載體上，然后如上所iiiik^行結(jié)紳、艦?？稍隗w內(nèi)^^1嵌M來調(diào)節(jié)炎性應(yīng)答包括急性期應(yīng)答，例如血清淀粉^白A(SAA)、CSJI性蛋白(CRP)等等。通it^胃外途徑(例如通it^L內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)注射)給予具有高結(jié)合親和力的嵌合沐。循環(huán)系統(tǒng)中的^結(jié)合酉沐，并^ML通itJL常生理過^w循環(huán)系統(tǒng)中清除。為了在測定中使用，可通itFc區(qū)域^^^與載^4目結(jié)合，并用于ELISA方法中。為輔助分離^^發(fā)明的多肽，優(yōu)i^采用使用了配體結(jié)合受體(或抗體、互4H^/抗互4h^對中的一個(gè))或其結(jié)合片段和市售的生物傳感器裝置(BIAcore,PharmaciaBiosensor,Piscataway，NJ)的測定系統(tǒng)。4^P這類受體、^#^、互#琳/抗互4H^對中的一個(gè)或其片段固定于受體芯片的表面。這種裝置的^^公開于Karlsson，//加附m"0A745:229-40，1991和CuiminghamandWells，/歷W2^:554-63，1993。使用胺或^L^化學(xué)方法，將受體、抗體、互4f^/抗互4附中的一個(gè)或其片段^H^接至葡絲纖維上，所述葡緣纖^^至流通池中的金膜上。使測,本流過該池。如^^樣本中存在配體、表^互#[^/抗互#^對中的另一個(gè)，它們就會(huì)分別與固定化的受體、抗體或互補(bǔ)體/抗互41^對中的一個(gè)相結(jié)合，導(dǎo)致介質(zhì)的折射率iLi改變，這可通過金膜的表面等離子共^(plasmonresonance)的變化而進(jìn)^^"測。這一系統(tǒng)可以測定結(jié)65^E4率和解離速率，由此可以計(jì)算親和力并評估結(jié)合的化學(xué)計(jì)量學(xué)。或者，可以4^1SELDI(TM)^支^(aphergen，Inc.,PaloAlto，CA)分析配^/受體的結(jié)合。配體結(jié)^t體多Jte可以用于4^域已知的頭他測定系統(tǒng)。這些系統(tǒng)包括用于測定結(jié)合親和力的Scatehard分析(參見Scatehard，^"".AT5"d52:660-72，1949)和測熱法測定(Cunninghametal.，5We"ce255:545-48，1991;Cunninghametal"5We""紙821-25，1991)。本發(fā)明還提供了多種其他的多肽融M和^^有一個(gè)或多個(gè)多肽融合昧的相關(guān)多聚體蛋白。例如，可以如美國專利No.5，155，027和5，567，584所公開的那樣，以與二聚化蛋白相融合的形式制備可溶性H7RC、IL"17RA或IL-17RC/IL-17RA受體多肽。在這方面優(yōu)選的二聚化蛋白包括免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，例如IgGyl和人類K輕鏈。可以在經(jīng)過基因工程^的細(xì)胞中表ii^發(fā)明的免疫球蛋白可溶性融合體，以產(chǎn)生多種多聚體IL-17RC、IU7RA或IL-17RC/IL"17RA受體類似物?？蓪⒈景l(fā)明的可溶性多肽與輔助結(jié)構(gòu)域相融合，以使它們靶向于特定的細(xì)胞、組織或大分子(例如膠原或表達(dá)IH7F或IL-17A的細(xì)胞)。本發(fā)明的多肽可以與兩個(gè)或多^分相融合，所述部分例如用于純化的親和標(biāo)洛，以及乾向結(jié)構(gòu)域。多肽融^ii可以包括一個(gè)或多^H^割位點(diǎn)，特別是在結(jié)構(gòu)域之間的切割位點(diǎn)。參見，TuanetaL，OwmeWver/幼we及e鄉(xiāng)w/rW:l畫9，1996.在細(xì)菌細(xì)胞中，經(jīng)常需要以融^白的形^^達(dá)異源蛋白以減弱所表達(dá)蛋白的辜性、增加其穩(wěn)、定'l^p增加其回^t率。例如，可以以包4^^胱甘Jlfc^轉(zhuǎn)移酶多肽的融^^白的形式表達(dá)EH7RC(或^^T本發(fā)明的多肽)。谷胱甘船-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白通常為可溶性的，并且可以使用固化谷胱甘Jli^^易地將其從大腸桿菌^物中純化。在類似的方法中，可以^^直^>定^^^"脂柱分離>^有麥芽糖結(jié)^"白多肽的IL-17RC融^"白，可以佳月IgG"Sepharose純化含有截短型蛋白A基因的C末端的融M白，在細(xì)菌細(xì)胞中以融^"白的形^達(dá)異源多肽的成熟才支^^例如WilliamsCa""ExpressionofForeignProteinsinco//UsingPIasmidVectorsandPurificationofSpecificPolyclonalAntibodies,"見于DA^42:jPracifcfl/4p/wwic/r，第2氣GloverandHames(編著)，第15-58頁(OxfordUniversityPress1995)中有所描述。此々卜，也可以使用市售的表達(dá)系統(tǒng)。例如，PINPOINTXa蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)(PromegaCorporation;Madison,WI)提供的方法使用了包括親和素的樹脂來分離包括在表i^it程中^Ci物素化的多肽的融M白。66可以用于分離由原核細(xì)M真核細(xì)I^達(dá)的異源多肽的肽標(biāo)逸包括多組氨酸標(biāo)對它對鎳螯合樹脂具有親和力)、c-z^c標(biāo)洛、鈣調(diào)蛋白結(jié)M白(可使用鈣調(diào)蛋白親和色鐠法分離)、P物質(zhì)、RYIRS標(biāo)^(它可與抗RYIRSM結(jié)合)、Glu-Glu標(biāo)l和FLAG標(biāo)善(它可與抗FLAG抗體結(jié)合)。參見例如，Luo""，歷oc/re饑329:215(1996);Morganti"A，歷她c/t朋A歷0C&肌25:67(1996)和Zheng""，G^"eM6:55(1997)。編碼這類肽才絡(luò)的核酸^f"可^^例如Sigma-AIdrichCorporation(StLouis，MO)商購。另一種形式的融錯(cuò)白包括本發(fā)明的多脈免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)通常為Fc片段，它含有兩個(gè)或三個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)鉸鏈區(qū)域，^a是不^"有可變區(qū)。例如，Chang等人的美國專利No.5，723，12彌述了一種包括人類干擾素和人類免疫球蛋白Fc片段的融^白。干擾素的C端與Fc片段的N端通過一個(gè)ftki^接物部射目連接。^i^接物的一個(gè)實(shí)例為主要含有T細(xì)胞隋.財(cái)列的肽，它K免疫活性的?！N示例性的^i^接物具有下述絲斷列GGSGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:9)。在這種融^^白中，一種示例性的Fc^5分為人類y4鏈，該^^溶液中穩(wěn)定并JL^L有或幾乎沒有^傳激活活性。因此，本發(fā)明考慮到了包括IL-17RC部分或IL"17RC和IL"17RA部分以及人類Fc片段的IL47RC或IL"17RC/IL47RA融合蛋白，其中所述IL-17RC部分的C端與Fc片段的N端通過JI^接物相連接，例如包括SEQIDNO:2、SEQIDNO:5或SEQIDNO:21的^J^酸序列的至少一部分的肽。IH7RC和IL-17RA的部分均可為J^卜結(jié)構(gòu)域或其任意片段。例如，融M白可包括SEQIDNO:3的氨基酸和一個(gè)Fc片段(例如人類Fc片段)(SEQIDNO:64)。這類融^^白的另一實(shí)例為變體1454(SEQIDNO:157和158)，所述變體包括與Fc5融合的人類IL47RA的外顯子l七和人類IH7RCxl的外顯子8-16(SEQIDNO:179和180)。變體1454還具有來自人類IL-17RA的天然信號肽。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的，等同物代替Fc5。在另一個(gè)變化方案中，本發(fā)明的融^白包括一個(gè)IgG序列、一個(gè)與所述IgG序列的^J^末端共價(jià)連接的IL"17RC、IL"17RA或IL-17RC/II^17RA部分和與所述IH7RC或IL-17RA部分的^J^末端共價(jià)連接的信號肽，其中所述IgG序列由下列元件以下&頃序組成鉸鏈區(qū)域、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。因此，所述IgG序列不含有CH結(jié)構(gòu)域。這些部分可以顯示本文所述的生物活性，例如能夠結(jié)合IL-17A和/或IL"17F。生產(chǎn)包括抗體部分和非抗體部分的融M白的通用技賴述于LaRochelle等人的EP742830(WO95/21258)。包括IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA部分和Fc部分的融合蛋白可被用作例如體外測定工具。例如，可以佳月IL"17RC-免疫球蛋白融^"白來檢測生物樣本中是否存在IL-F，其中使用IH7RC部^合配體，使用大W(例如使用蛋白A或抗Fc抗體)將融M白結(jié)合到固相栽體上。可以佳JI這類系統(tǒng)識別能夠千"itlL-17家族配體(例如IL-17F或IL-17A和IL-17F兩者)與其受體的結(jié)合的拮抗劑和、激動(dòng)劑。本發(fā)明還提供多種其他的多肽融合體。例如，可以將能產(chǎn)生目的生物學(xué)功能(例如結(jié)合IL-17A)的整個(gè)結(jié)構(gòu)域或其""^分和來自細(xì)胞因子受體家族的另一成員(即IL-17RA)的等同功能性結(jié)構(gòu)域與IL-17RC的"^分相融合，以產(chǎn)生不同的W(即IL-17RC/IL"17RA)0可以在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)多肽融合體，以產(chǎn)生多種這樣的融合類似物。IL-17RC、IL-17RA或n^l7RC/IL"17RA多肽可以與兩個(gè)或多^NP分或結(jié)構(gòu)樹目融合，例如與用于純/f匕的親和標(biāo)逸和耙向結(jié)構(gòu)J^目融合。多肽融^^i可以包括一個(gè)或多物割位點(diǎn)，特別是在結(jié)構(gòu)域之間的切割位點(diǎn)。#^見例如，Tuand",Gwiwec6ver/sw/e及ew"rc/r34:1(1996)。可以利用本領(lǐng)域技^Mv員已知的方法，通過制備融M白的每個(gè)組成部分并用化學(xué)方法將它們綴合在"^^制備融M白。或者，可以^^已知4支術(shù)產(chǎn)生位于合適讀碼框內(nèi)的編碼融^S"白的^Ha^部分的多核苷酸，并用本iL^斤述的方法表達(dá)該多核苷酸。對融合蛋白進(jìn)^s^;割和化學(xué)切割的通用方法描述于例如Ausubd(1995)第16-19至16-25頁中。還可通ii^"結(jié)構(gòu)進(jìn)行物理分析;^^征IL-17RC和/或IH7RA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述的結(jié)構(gòu)物理分析可用對配體激動(dòng)劑的推定的接觸位點(diǎn)氨基酸的突變并結(jié)合例如下列的技術(shù)來測定核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和標(biāo)記。參見例如，deVos&"A，5We"ce255:306(1992)，Smithd，/Afo/L歷"224:899(1992)和WlodaverFi5S5X欲豫59(1992)。本發(fā)明還考慮到了經(jīng)化學(xué)修飾的IL"17RC或IL"17RCH7RAi且合物，其中所述多肽與聚合物相連接。示例性的IH7RC或IL"17RC/IL"17RA多肽為不含有功能^^膜結(jié)構(gòu)域的可溶性多肽，例如由SEQIDNO:3或SEQIDNO:21的^J^^Jia成的多肽。通常，所述聚合物為水溶性的，以使得所述綴#不會(huì)在例如生理環(huán)境的水性環(huán)竟中沉淀。合適的聚合物的實(shí)例為經(jīng)過修飾而具有單個(gè)反應(yīng)基團(tuán)的聚合物，例如用于酰基化反應(yīng)的活性酯或用于娛J^ftA應(yīng)的醛。這樣就可以控制聚合的程度。活性醛的實(shí)例為聚乙二醇丙醛或其單(C1-C10)烷氧基或芳氧基衍生物(參見例如，Harris等人的美國專利No.5J52，714)。聚*可為直鏈聚^^或支鏈聚絲。此外，也可以^^聚^#的》'^^生產(chǎn)IL47RC或IL"17RG1L-17RA綴^/。用于治療的本發(fā)明綴合物可以包括可藥用的水溶性聚^部分。合適的水溶性聚^^包括聚乙二醇(PEG)、單甲拿JJ，EG、單(C1-C10)烷^L^PEG、芳lU^PEG、敉N-乙烯基p比咯酮)PEG、三氟代乙絲Sti^tresyl)單甲liJ^PEG、PEG丙醛、碳酸喊珀酰亞胺酯PEG、丙二醇同聚物、^!L化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如丙三醇)、聚乙烯醇、葡聚糖、纖維素或^f^于糖類的聚合物。合適的PEG的分子量為約600至約60，000，包括例如，5000、12000、20000和25000。IL-17RC綴^^還可以包括這類水溶性聚^的^^物。IL-17RC綴合物的一個(gè)實(shí)例包括IL"17RC部分(或IL"17RC/IL"17RA部分)和連接到該IL-17RC部分的N端的聚)^lL化物部分。PEG是一種合適的，;^l^化物。例如，H7RC(或IL"17RC/IL"17RA)可通過一個(gè)被稱為"聚乙二醇化"的過程而toEG修飾?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何聚乙二醇化反應(yīng)來進(jìn)行IL"17RC的聚乙二^f匕(參見例如，EP0154316、Delgado"0淑ai/及evfews/"77rera/^"tfcDragC"mVr9:249(1992)、DuncanandSpreafico，O/汰27:290(1994)和FrancisC"A，i/iZ//fe附"to/幼:l(1998))。例如，可通過有反應(yīng)性的聚乙二醇分子的?；磻?yīng)或烷基化^JI來進(jìn)行聚乙二醇化。在另一種方法中，通it^合活化的PEG而形^JL-17RC綴合物，在活化的PEG中，PEG的末端羥基或氨基基團(tuán)被活化的連接物所取代(參見例如，Karasiewicz等人的美國專利No.5^382,657)。通過酰基化的聚乙二醇化通常需要^PEG的活化酯衍生物與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多M應(yīng)。活化的PEG酯的實(shí)例為酯化為N-鞋J^讀酰亞胺的PEG。本文所^f^J的術(shù)語"Sfc^化"包括在IL-17RC或IL"17RC/IH7RA和水溶性聚絲之間的下述類型的鍵驗(yàn)、絲曱酸酯和絲甲酸乙酯等等。通過酰基化制備聚乙二醇化的IU7RC或IL-17RC/IL-17RA的方法通?？砂ㄏ率霾襟E(a)^JL-17RC或IL^17RC/EH7RA多肽與PEG(例如PEG的S^生物的活化酯)反應(yīng)，反應(yīng)條件應(yīng)使得一個(gè)或多個(gè)PEG基團(tuán)連接到DL^17RC或IL"17RC/IH7RA上，和(b)獲得反應(yīng)產(chǎn)物。通常，應(yīng),已知^^t和所需結(jié)果確定用于?；磻?yīng)的優(yōu)化的反應(yīng)條件。例如，PEG:EW7RC(或PEG:IL-17RC/IL"17RA)的比值越大，則多聚乙二醇>(匕的IL-17RC(或IL-17RC/IL-17RA)產(chǎn)物的百分比越高。通過m^化產(chǎn)生的聚乙二^^產(chǎn)物通常為多聚乙二sff匕產(chǎn)物，其中的賴氨^E-tJ^基團(tuán)通itSfeJ^i^^基團(tuán)而a乙二降化。連M的一個(gè)實(shí)例為^。通常，所得的IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA應(yīng)為至少95"M)單聚乙二醇化、雙聚乙二醇^^三聚乙二醇化，但是皿MM可形成一些高JL^乙二醇化的產(chǎn)物種類?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)純化方法將聚乙二醇化的產(chǎn)物種類與未綴合的H7RC或IL-17RC/IL"17RA多^bN分離，所述標(biāo)準(zhǔn)方法例如透析、超濾、離子交換色語和親和色譜等等。通過^^化的聚乙二醇化通常包括^PEG的末端,生物^在還原劑的條降下與IL-17RC或IL-17RC/n^l7RAA應(yīng)。PEG基團(tuán)可通過-CH2-NH基團(tuán)連接到多肚。通itiE原性烷基化產(chǎn)生單聚乙二醇化產(chǎn)物的衍生作用利用了可進(jìn)行衍生作用的不同類型的伯胺基團(tuán)的反應(yīng)活性的差異。通常，進(jìn)行反應(yīng)的pH值使得可以利用賴氨酸^的s-^J^基團(tuán)與蛋白質(zhì)N端^的(x^J^之間的pKa值的差異。通itit種選棒性衍生作用，可以控制含有活性基團(tuán)例如搭基的水溶法聚合物與蛋白質(zhì)的連接。與聚合物的綴合主要J^t在蛋白質(zhì)的N末端，而對，活性基團(tuán)(例如賴氨酸側(cè)鏈#^)則沒有顯著的#^。本發(fā)明提供了IH7RC或IL-17RC/IL-17RA單聚^^綴^^的14^一的制劑。用于產(chǎn)生基本均一的單聚合物IL-17RC或IL-17RC/II^17RA綴合物分子群體的ii^性;^^化可包括下述步驟(a)在ii^性^^化M和合適的pH值條降下，佳IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽與活性聚乙二醇A^,所述合適的pH值^Hf允許對IL-17RC或II^17RC/IL-17RA^J^末端的a-募J^基團(tuán)進(jìn)行選棒性修飾，和(b)獲得反應(yīng)產(chǎn)物。用于ii^im^化的還原劑應(yīng)在水溶液中穩(wěn)定，并且僅能ii^在iE^性^^化的初始過程中產(chǎn)生的Schiff喊。示例性的還原劑包括硼氳化鈉、氰基硼氳化鈉、二曱胺硼烷、三甲胺硼絲p比咬硼烷。對于基本均一的單聚合物IL"17RC或IL"17RC/IL"17RA偶聯(lián)物的群體而言，還原性烷基化反應(yīng)條件應(yīng)使得水溶性聚合物部分能夠選擇性連接到IL-17RC或IL"17RC/IH7RA的N端。這樣的^1##通?？商?#對賴氨酸^^基團(tuán)和N端的a-tJ^基團(tuán)之間的pKa的差異。pH值還姊響所^^的聚合物與蛋白質(zhì)的比例。通常，如果pH較低，則需要聚合物遠(yuǎn)多于蛋白質(zhì)的量，因?yàn)榇藭r(shí)N末端a基團(tuán)的^JI活性較低、需要更多的聚^以獲得最優(yōu)化的反應(yīng)務(wù)降。如果pH值較高，則聚^7:IL-17RC(或聚^^:IL-17RC/IL"17RA)的比例就不需要很大，因?yàn)榇藭r(shí)可以獲得反應(yīng)活性較高的基團(tuán)。通常，pH值應(yīng)在3至9之間或在3至6之間。這一方法可以用于制備含有IH7RC或IL-17RC/IL-17RA的同二聚體、異二聚M多聚體可溶性受體綴^詠。需要考慮的另一因素為水溶性聚合物的分子量。通常，聚合物的^量越高，能連接到蛋白質(zhì)上的聚^b^"的數(shù)目M少。對于聚乙二a^f匕^^而言，典型的分子量為約2kDa至約100kDa、約5kDa至約50kDa、或約12kDa至約25kDa。水溶性聚合物與IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA的摩爾比通常應(yīng)為1:1至100:1。通常，對于多聚乙二醇化，水溶性聚合物與IH7RC或IL-17RC/IL-17RA的摩爾比應(yīng)為1:1至20:1;對于單聚乙二^f匕，水溶性聚^與IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA的摩爾比應(yīng)為和1:1至5:1。用于生產(chǎn)包括多肽和水溶性聚合物部分的綴合物的通用方法是本領(lǐng)域中已知的。參見例如，Karasiewicz等人的美國專利No.5082,657;Greenwald等人的美國專利No.5，738，846;Nieforth"",C7/汰7%er.59:636(1996);Monkarsh"fl"J""/:5/0c/^肌3/7:434(1997))。il一方法可用于制備含有IL-17RC的同二聚、異二M多聚可溶性受體綴#。本發(fā)明考慮了包括本文所述的肽或多肽，例如可溶性受體或抗體的組合物。這類組^^還可包^^體。所述載體可為常規(guī)的有機(jī)載M無;bL載體。載體的實(shí)例包括水、緩沖液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、^M由和玉米油等等。G)IL^17RC或IL47RC/IL^7RA多肽的分離本發(fā)明的多肽可被純化^目對于雜質(zhì)大W(特別是M蛋白質(zhì)和核酸傳至少約80%的純度、至少約90%的純度、至少約95%的純度、或大于95%,例如96%、97%、98%或大于99%的純度，并且不含有感染性物質(zhì)和熱原。本發(fā)明的多肽還可被純化至藥用級純度，即大于99.9%的純度。在某些制品中，純化的多肽1^上不含有其他多肽，特別是不含有動(dòng)物來源的其他多肽?？梢?M分級分離方法和/或常規(guī)純4匕方法以iyf從天然來源(例:^人類纟且織來源)純化出的IH7RC或IL-17RC/IL~17RA制品、合成的IL-17RC或IL-17RC/IL"r7RA多肽和從重組宿主細(xì)胞中純化出的重組IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多IMPIL"17RC或IL"17RC/IL-17RA多肽融合體。通常，可以^^l^^銨沉淀法和酸或^^劑萃取法iMt樣^Mi行分級分離。示例'li的純化步驟可包括羥基磷灰石、分子篩、FPLC和反相高效斜目色譜。合適的色譜介質(zhì)包括衍生化的葡，、瓊脂糖、纖維素、聚丙烯,和特制皿等等。PEI、DEAE、QAE和Q^f生物也是合適的。示例性色譜介質(zhì)包括苯基、丁M辛基基團(tuán)衍生化的介質(zhì)，例如苯基-S印haroseFF(Pharmacia)、Toyopearl丁差A(yù)50(TosoHaas，Montgomeryville,PA)、辛基國Sepharose(Pharmacia)等等；或者聚丙烯酸樹脂例如AmberchromCG71(TosoHaas)等等。合適的固相載體包括玻璃珠、基于^的樹脂、基于纖維素的*^3旨、瓊脂^tm、交聯(lián)瓊脂糖m、M乙烯m、交聯(lián)聚丙烯酰胺樹脂等等在其^^l條降下不可溶的載體?？梢杂胇^性基團(tuán)對這些載^ii^f參飾，所iiA^性基因使^^白質(zhì)可以通過^^基團(tuán)、^!^基團(tuán)、^J^基團(tuán)、鞋l^基團(tuán)^V或,分與^^體il接。偶聯(lián)化學(xué)方法的實(shí)例包括溴化氰活化、N-羥^珀to胺活化、環(huán)氧化物活化、^活化、SW活化和用于碳二亞J^f禺聯(lián)化學(xué)法的^^iJ^衍生物。上#務(wù)他固體介質(zhì)都是^域公知并廣泛使用的，均可^^t應(yīng)商處商購。用于多肽分離和純化的M方法的選擇是常規(guī)的設(shè)計(jì)問題，并且部分W^:于所選##1體的性質(zhì)。參見例如，4/"妙C"Ara腳to;g7YJ5p/^:在(PharmaciaLKBBiotechnology1988)和Doonan，iV她/"jPwn^iriwi(TheHumanaPress1996)。用于IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA分離和純化的其他變化方法可由本領(lǐng)^^支^Mv員i殳計(jì)得出。還可以利用特定的'M分離本發(fā)明的多肽。例如，可以^^固定^f^r屬離子吸附色^(IMAC)來純化富含組氨酸的蛋白質(zhì)，包括那些帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白質(zhì)。簡而言之，首先使^負(fù)載二價(jià)金屬離子以形成螯合物(Sulkowski^rmwfe/"5/0c/^抓3:1(1985))?；谒褂玫慕饘匐x子，富含組氨酸的蛋白質(zhì)將以不同的親和力吸附在這一基質(zhì)上，然后可用竟?fàn)幮韵疵?、降低pH或^J^強(qiáng)4^劑的方法將它們洗脫下來。M純化方法包括使用凝集素親和色鐠和離子交換色鐠純^^t基化蛋白(M.Deutecher，(編著)，五"gww/:"2:529(1990))。在本發(fā)明的另外的實(shí)施方案中，可以構(gòu)建目的多肽和親和標(biāo)^(例如麥芽糖結(jié)合蛋白，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)的融合本以便于純化。此外，也可以利用本發(fā)明的可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL"17RA多肽(例如含有IL-17RC的可溶性受體)的配體結(jié)合性質(zhì)進(jìn)行純化，例如，可以使用親和色譜方法，先將IL-17F配體結(jié)合扭上，將含有IL-17RC的受體與柱結(jié)合，然后^^吏用標(biāo)準(zhǔn)色語方法進(jìn)行艦。也可以通過如上所述的化學(xué)合成方法制備IL-17RC、IL"17RA或IL-17RC/IL"17RA多JlUL其片段。這些多肽可為單絲多聚體形式；糖基4t^非糖^^化形式；聚乙二醇化或非聚乙二醇化形式；并且可以含有或不含有起始H)針對IL-17RC或IL47RC/IL-17RA蛋白的M的制備例如^JUIL"17RC或IL47RC/IH7RA^達(dá)載體的表達(dá)產(chǎn)物或從天然來源分離的IL"17RC或IH7RC/IL"17RA作為抗原，可以獲得針對IH7RC或IL47RC/II^17RA的抗體。特別有用的抗IL"17RC或IH7RC/IL"17RA^l可以與IH7RC或IL"17RC/IL^7RA"特異性結(jié)合，。當(dāng)^M"有下述兩種'M的至少一種時(shí)認(rèn)為抗體是特異性結(jié)合抗體(l)抗體以閾值水平的結(jié)合活性結(jié)合IL"17RC或IL"17RC/IH7RA，和(2)^/^與IL47RC或IH7RC/IL"17RA的相關(guān)多Jii^L有明顯的交iL^。對于第一種'M而言，當(dāng)M與IH7RC或IL47RC/EH7RA多肽、M表位的結(jié)合親和力(Ka)為106M^或更高、^^i^為107]V^或更高、更/ffei^為108m4或更高、最mJ4為io9iv^或更高時(shí)，認(rèn)為^/^是特異性結(jié)合脅?？贵w的結(jié)合親和力可以由本領(lǐng)域技^A員容易地測定，例如可通itScatehard分析測定(Scatehard，J"汰7VTJc"fli:5^57:660(1949))。對于第4性質(zhì)而言，例如，當(dāng)抗體可通過標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印跡分析檢測到EL47RC或IH7RC/IH7RA，但是檢測不到已知多肽時(shí)，認(rèn)為糾與相關(guān)多肽襯沒有明顯的交XAJL已知相關(guān)多肽的實(shí)例包括已知的細(xì)胞因子受體?？梢允褂脭y帶抗原性H7RC或IL47RC/IL"17RA^位的JI^多*產(chǎn)生抗IL"17RC或IL47RC/IL47RA私沐。本發(fā)明的攜帶抗原'l!i^位的^多肽含有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQroNO:5或本文公開的另一M酸序列中所含的至少9個(gè)或15至約30個(gè)M酸的序列。然而，含有本發(fā)明的M^列的更大部分的肽或多肽，含有本發(fā)明的多肽的30至50個(gè)M酸或最多至含有本發(fā)明多肽的整個(gè)M酸序列的任何長度的肽或多肽，也可以用于誘導(dǎo)與IH7RC或IL47RC/IH7RA結(jié)合的抗體。需要選擇攜帶表位的肽的^J^齡列以使得所述肽在水性溶劑中基本可溶(即所述序列包括相對多的親水性殘基，而通常應(yīng)狄含有疏水性殘基)。此外，也可能需要含有脯氨酸殘基的氨基^列以用于產(chǎn)生M。例如，可使用Jameson-Wotf的方法(JamesonandWolf,C^5/OS4:181,(1988))，利用LASERGENE^司(DNASTAR;Madison，WI)的PROTEAN^(3.14版)，來識別IL"17RC中的潛在^^、性位點(diǎn)。在所述分析中^^J默認(rèn)的^it。Jameson-Woif方法通it^^r個(gè)進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測的主要子程序，預(yù)測潛在的抗原決^。簡而言之，首先^^Hopp"Woods方法(Hopp"fl/L，AW/Jowi5^C/5^7S:3824(1981))來識別>^*4最高的局部親水性的區(qū)域的氨基,列(##1::平均七個(gè)^)。在第二步中，^J^Emini方法(EminiFrafo^55:836(1985))來計(jì)算表面概率(^lt:表面決定閾值(0.6)=1)。第三步，使用Karplus-Schultz方法(KarplusandSchultz，iVfl似nv/ssmsc/^e"72:212(1985))來預(yù)測主鏈的柔性(參數(shù)柔性閾值(0.2)=1)。在所述分析的第四步和第五步中，對數(shù)據(jù)應(yīng)用(1!11011"^8111311方法(外《//€/^"<外她/"5^"c/"re說e7V/"");/es<iVo,e/"Co//iw附fltfo"，F(xiàn)asman(編著)，第549-586頁，Chou的"PredictionofProteinStructuralClassesfromAminoAddComposition"(PlenumPress1990))和Garnier-Robson方法(Garniera/L，/及V/L220:97(1978))進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測(01011^38111311#^::構(gòu)象表=6辦蛋白質(zhì)；a區(qū)域閾值=103;P區(qū)域闊值=105;Garnier-Robson參數(shù)a和P決定常數(shù)=0)。在第六個(gè)子程序中，結(jié)合了柔性;|^:和親水#_/溶劑趨近性因子以確定表面輪廓值，^^名為"抗原性指數(shù)"。^，對抗原性指M用財(cái)展函數(shù)，所述函數(shù)通過分別附加各自峰值的20%、40%、60%或80%對主要表面峰值進(jìn)行擴(kuò)展以4M嘗因表面區(qū)樹目對于內(nèi)部區(qū)域的流動(dòng)性所產(chǎn)生的附加自由能。然而，由于螺旋區(qū)域可能柔',小，因此這種計(jì)算方法不適用于位于蝶旋區(qū)域中的^主要峰。可以使用Hopp/Woods親水性曲線來確定SEQIDNO:3中潛在抗原性最強(qiáng)的區(qū)J^(Hoppetal.，Phc:7Va汰Jc<wi7&3824"3828，1981;Hopp，/./附w"汰朋:1誦18，1986和TriquieretaL，7VWe/"五"g/"從W"gJ2:153畫169，1998)。所述曲線基于一個(gè)滑動(dòng)的六g窗口。不考慮^^^蓋的G、S和T戎基以;5L^露的H、Y和W^。此外，例如使用DNASTARProtean程序(DNASTAR^Inc.,Madison，WI),通過Jameson-Wolf曲線圖預(yù)測的SEQIDNO:3中的IH7RC抗原'l^^位作為優(yōu)選的抗原'l!i^位，并JL^領(lǐng)域技"員可以確定該抗原'錄位。所述^f'Ii^位包括(1)SEQIDNO:3的絲^l&73至絲^^82;(2)SEQIDNO:3的^J^i^95至^J^^104;(3)SEQIDNO:3的絲酸絲111至絲^JJ19;(4)SEQIDNO:3的絲^t&179至絲^i^186;(5)SEQD)NO:3的^J^^200至^J^i^205;(6)SEQIDNO:3的絲^i&229至^J^J^36;(7)SEQH)NO:3的^J^l^264至絲^J^268;和(8)SEQIDNO:3的^J^J^75至^J^i^281。本發(fā)明考慮了抗原性肽X至Y的^""種用于產(chǎn)生抗IH7RC抗體的用途，或作為工具篩選或識別本發(fā)明的中和性單克隆脅的用途。本發(fā)明狄慮了包括^f性^X至Y的至少一種的多肽。本發(fā)明考慮了本文所述的任何抗原性^il表位用于產(chǎn)生針對IL-17RC的抗體的用途，以及用于識別和篩選中和性的抗IH7RC單克隆抗體的用途，所述抗IU7RC單克隆^^可以結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮M中和IL-17r和/或IL-17A的活性(單獨(dú):^結(jié)^^)0此外，合適的抗原還包括如下所述的IL-17RC或IL"17RC/IL-17RA多肽，所述IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽包括上文z〉開的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域或胞外結(jié)構(gòu)域以及另一種細(xì)胞因子的胞外結(jié)構(gòu)域，例如I類或n類細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)域，例如可形成可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA異二聚體或多聚體多肽等等的結(jié)構(gòu)域?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技^A員公知的方法制備如下所述的多克隆抗體，所述多克隆抗體針對重組IL"17RC或IH7RC/IL"17RA蛋白或者針對從天然來源分離的IL47RC或IH7RC/IL"17RA。參見例如，//M/MM/10cAe附/cfl/(Manson編著)，第l-5頁，Green等人的"ProductionofPolyclonalAntisera"(HumanaPress1992)和DA^4Cto"/"g2:￡^wess/o"柳紐微，第2&Glover""A(編著),第15頁，Williams等人的"Expressionofforeignproteinsin￡1co//usingplasmidvectorsandpurificationofspecificpolyclonalantibodies"(OxfordUniversityPress1995)?？赏ㄟ^使用佐劑來增加IL~17RC或IL47RC/IL"17RA多肽的免疫原性，所述佐劑例如alum(氫氧化鋁)或弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑?？捎糜诿庖叩亩嚯囊舶ㄈ诤香宥嚯?，例如IH7RC或IL"17RC/IL"17RA或其"^分與免疫球蛋白多Jl^與麥芽糖結(jié)^"白融，成的融合體。多肽免疫原可為全長分子或其一部分。如果多肽部分為"半抗原類型"，則優(yōu)^M^該部分與大^載^K例如鑰孔ili&L藍(lán)素(KLH)、牛血清清蛋白(BSA)或破傷風(fēng)類毒素)^目連接或結(jié)合以用于免疫。雖然多克隆抗體通常是在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生，例如在馬、牛、狗、雞、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、山羊或綿羊體內(nèi)產(chǎn)生，但是本發(fā)明的抗IH7RC或IH7RC/IL47RA:^^也可以來源于類人靈長類抗體。在狒##^內(nèi)產(chǎn)生可用于診斷和治療的抗體的通用技術(shù)可參見例如，Goldenberg等人的國際專利申請公^AVO91/11465和Losman&"，/"t/Gi"cer斬:310(1990)?；蛘撸梢援a(chǎn)生抗IH7RC或IL"17RC/IL"17RA的單克隆M。針對特定抗原的嚙齒類單克隆抗體可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法獲得(參見例如，Kohler《油/""256:495(1975);Co%and(編著)，C"/r朋/jRratoc<&/"/附附"朋fow，/，第2.5.1國2.6.7頁(JohnWiley&Sons1991)"CoIigan，，];C7o"/"g2:/^y欲ms，第2氣Glover"/!(編著)，第93頁，Picksley等人的"Productionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedin五.rf，(OxfordUniversityPress1995))。簡而言之，單克隆抗體可通過下述步驟獲得用含有IH7RC或IH7RC/IL"17RA基因表達(dá)產(chǎn)物的組^^注射小鼠，Uk清樣本以確i人旨的產(chǎn)生，取出脾臟以獲得B^淋巴細(xì)胞，將B-淋巴細(xì)胞與骨髄瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜錢細(xì)胞，克隆雜錢細(xì)胞，篩選產(chǎn)生針對^f、的糾的陽性克隆，培養(yǎng)產(chǎn)生針對^f、的抗體的克隆，以^雜錢細(xì)鵬#^中分離脅。jtt^卜，本發(fā)明的抗IL47RC或IL-17RC/IH7RA^^也可以來源于人類單克隆*。人類單克隆^^可由轉(zhuǎn)基因小鼠獲得，所述轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)it^因工程改造而能^4十對^^'1±^激進(jìn)行應(yīng)狄而產(chǎn)生特異性的人類脅。^il種技術(shù)中，將人類重妙^4因^t件引入小鼠品系中，所述小鼠品系來源于在內(nèi)源性重#3^^因座中含有定向中斷的胚胎干細(xì)胞系。轉(zhuǎn)基因小鼠可以^^成特異性針對人類抗原的人類M，所述小鼠可以用于產(chǎn)生分泌人類^#^的雜^|細(xì)胞。由轉(zhuǎn)基因小鼠獲得人類拔沐的方法在例:ipGreen"dl，7Va/reG柳a7:13(1994)，Lonberg"《胸臟565:856(1994)和Taylor"《紐/畫"汰6:579(1994)中有所描述?？梢允褂枚喾N成熟技^^雜^i細(xì)i^養(yǎng)物中分離和純/f傳克隆抗體。這類分離技術(shù)包括^J^蛋白ASepharose的親和色鐠、^"篩色語和離子交換色譜(參見例如，Coligan第2.7.1-2.7.12頁以及第2.9.1-2.9.3頁；Me幼o(hù)血/"Mofec"/"r及》fogy，20，第79-104頁，Baines等人的"PurificationofImmunoglobulinG(IgG)"(TheHumanaP謂，Inc.1992))。對于特定用途可能需要制備抗IL47RC或IH7RC/IL"17RAM的片段。這類絲片段可通過例如對糾的蛋白Slil^解而獲得?？赏ㄟ^4捐常財(cái)法對完整抗^^4行胃蛋白酶消^il木瓜蛋白酶消化，而獲得M片段。例如，抗體片段的產(chǎn)生可通過^J^胃蛋白酶對抗體進(jìn)行S^l切割以提供被稱為F(ab，)2的5S片段而實(shí)現(xiàn)。還可以^Jl^Jjli^試劑對這一片段進(jìn)一步切割，從而產(chǎn)生3.5S的Fab，單價(jià)片段。^i^，在切割^中可以朋^^封閉基團(tuán)，所絲基是由于二硫鍵斷裂而產(chǎn)生的?；蛘?，使用胃蛋白酶的酶促切割可直接產(chǎn)生兩個(gè)單價(jià)的Fab片段和一個(gè)Fc片段。上述方法在例如下述的文獻(xiàn)中有所描述Goldenberg的美國專利No.4j331，647，Nisonoff"爿fc/r丑Zoc/^肌^B/opyw.卵:230(1960);Porter，5/oc/re肌/73:119(1959)、EdelmanCn/"Afe欲orfs/w五"矽附ofogV7，第422頁(AcademicPress1967)和Coligan，第2.8.1-2.8.10頁和第2.10.-2.10.4頁。也可以佳月其他切割抗體的方法，例如分離重鏈以形成單價(jià)的輕鏈-重鏈片段、對片段進(jìn)4tii一步切割，或者絲酶技術(shù)、化學(xué)技絲遺傳技術(shù)，只要所得的片段能夠與可M整^^識別的抗原相結(jié)合即可。例如，F(xiàn)V片段包括VH和VL鏈的聯(lián)M。這種聯(lián)合可能是非M的，例如在Inbar"flA，iVa/'/爿cfld:5ti砂:2659(1972)中有所描述?；蛘?，可變鏈可以以分子間二硫鍵的形式連接，或通過例如戊二醛的化學(xué)試劑相交聯(lián)(^^見例如，Sandhu，C說i^v.歷0tecA.":437(1992))。Fv片段可包^ifitJlfci^接物相連接的VH和V!^鏈?？赏ㄟ^構(gòu)建包括由M苷酸連接的編碼VH和V^結(jié)構(gòu)域的DNA^列的結(jié)構(gòu)基因，從而制^^這種單^^抗原結(jié)M白(scFv)。將所述結(jié)構(gòu)基因插Wj表ii^體中，然后將所&達(dá)載體引入宿主細(xì)胞例如;U^桿菌中。重組宿主細(xì)Jlfe^成由肽連接物橋連兩個(gè)V結(jié)構(gòu)域的單鏈多肽。用于產(chǎn)生scFv的方法在例如WhitlowC"，Me幼fwfe:爿G附/;做/wi似/"￡>i^wK/flgy2:97(1991)中有所描ii(也可參見，Bird""，5W柳ce2^:423(1988);Lad股傳人的美國專利No.4,946,778;Pack""/.,5/c/rec/i朋fogv":1271(1993)和Sandhu，iLJi文)。例如，可通it^體外使淋巴細(xì)胞與IL47RC或IH7RC/IL"17RA多^M目接觸并在噬菌M類似載體中篩選抗體展示i^ij^l得scFV(例如通過使用固定化或被才封己的IL"17RC或IL"17RCH7RA蛋白質(zhì)或肽)?？赏ㄟ^篩i^示于例如^桿菌的細(xì)菌錄示于嗟菌^K喧菌體展示)上的隨機(jī)li^隼，從而獲得編碼具有潛在IL"17RC或IL"17RC/IL"17RA多JI^合結(jié)構(gòu)域的多肽的基因。編碼多肽的核苷酸序列可通過多種方法iy茅，例如可通itl^機(jī)誘變和隨機(jī)多核苷酸合成ijt^得?？梢约言逻@些隨機(jī)WL示iL^對能與已知乾標(biāo)湘互作用的肽進(jìn)行篩選，所述已知^f示可為蛋白質(zhì)或肽，例如配M受體、生物大W或合成大分子或者有M質(zhì)或無M質(zhì)。創(chuàng)建和篩^il種隨機(jī)Wl示i^隼的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的(Ladner等人的美國專利No.5^223,409、Ladner等人的美國專利No.4，946，778、Ladner等人的美國專利No.5，403，484、Lad股HF人的美國專利No.5，571，698和Kay"fl/"/%，D/s/i鄉(xiāng)<jP一V/es朋</iV她/附(AcademicPress,Inc.1996))，并且隨機(jī)Wl示it^和用于篩^l類t隼的試劑盒可從例如下列的供應(yīng)商處商購，例如CLONTECHLaboratories,Inc.(PaloAlto，CA),InvitrogenInc.(SanDiego，CA)，NewEnglandBiolabs，Inc.(Beverty，MA)，和PharmaciaLKBBiotechnologyInc.(Piscataway，NJ)?？梢浴禴I本文公開的IL47RC或IH7RC/IH7RA^列來篩選隨機(jī)肽展示文庫，以識別可以結(jié)合IL47RC或IL"17RC/EH7RA的蛋白質(zhì)?？贵w片段的另一種形式為編碼單鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的肽。CDIUk("最小識別#")可通過構(gòu)建編碼目的^的CDR的基因而獲得?？赏ㄟ^例dHM聚合Sl^iU^從產(chǎn)生抗體的細(xì)胞的RNA來合成可變區(qū)，從而制名^這類基因(參見，j如，LarrickCM"e幼^w/s:Ciw/wi"/<wi似Jfe說/wfe/"￡>igwi0/ogy2:106(1991);3/(9朋c/朋"/y4"幼fwZ/es:iV<w/c/fo"，jEyig/nm^ng朋"C7zVifca/^4，//1//做，RitterC"A(編著),第166頁，Courtenay國Luck的"GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies"(CambridgeUniversityPress1995)和M(9朋cfo""/iV/"czjp/es做rf々/;//cflrtfe"s，BirchC《(編著)，第137'頁,Ward等人的"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies"(Wiley-Liss，Inc.1995))?；蛘?，抗H7RC或IL"17RC/IL"17RA^^可來源于"人源化"的單克隆抗體。人源化單克隆^^是通過將來自小統(tǒng)疫球蛋白重一^^可變區(qū)的小鼠互補(bǔ)決定區(qū)轉(zhuǎn)移J^類可變區(qū)結(jié)構(gòu)域中而產(chǎn)生的。然后將人類抗體的典型g替換至鼠類相應(yīng)物的框架區(qū)中。使用來源于人源^#"克隆松體的^組^€^了可能與鼠類恒定區(qū)的免疫原'斜目關(guān)的潛在問題。用于克隆鼠類免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的通用技術(shù)在例如Orlandi"外w7Vfl/7爿awiSdt/5^恥:3833(1989)中有所描述。用于產(chǎn)生人源化單克隆抗體的技術(shù)在例如下列的文獻(xiàn)中有所描述Jones"d,Ate,e幼:522(1986);CarterC/Vo"油/7^cfldM卵:4285(1992);Sandhu,Cr敘itev.":437(1992);Singerefa/.，/./附附肌750:2844(1993);Sudbir(編著)，Pratoco/s(HumanaPress,Inc.1995);/V她/"五"g/"從W"g:朋J/VYicdce，Cldandd"/L(編著)，第399-434頁，Kelley的"EngineeringTherapeuticAntibodies"(JohnWUey&Sons,Inc.1996)和Queen等人的美國專利No.5,693,762(1997)。此外，可以使用本領(lǐng)域已知的方法和本文所述的方法對本發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IH7RA^Ml脅片^it:行聚乙二^f匕?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)^^抗IL"17RC或IL"17RC/IL^7RA^iL抗體片M疫動(dòng)物，從而制備多克隆^*#^抗體。參見例如M^欲^wfe/M0fec11/欲//fi附"朋c/f柳/c"/外她0&，Manson(編著)，第1-12頁,Green等人的"ProductionofPolyclonalAntisera，，(HumanaPress1992)。還可參見Coligan，第2.4.1-2.4.7頁?；蛘撸赏╥tJi述技術(shù)"f^I抗IL"17RC或D^17RC/IL-r7RA抗M抗體片段作為免^f、來制備單克隆皿^M。再或者，可以4捐上述技術(shù)制備人源化皿#^抗#^類人靈長類皿#^^。制備皿#^抗體的方法在例如下述的文獻(xiàn)中有所描述Irie，美國專利No.5J08，146、Greene等人的美國專利No.5，637，677和VarthakaviandMinocha，/.Ge汰77:1875(1996)。可將抗IL-17RC或IH7RC/IH7RAi^與可^"測^ie^目綴合，以形成抗IH7RC或IL-17RC/IL-17RA^疫綴^^。合適的可^^測才封己包括例如;^性同位素、熒光才朽己、化學(xué)iuy^i己、酶才朽己、生物^Ut^ie^J^體金。制備和檢測這類帶有可檢測^i己的免疫綴絲的方法是4^頁域技權(quán)員^^的，并且將在可檢測;^i己可為育feiiit^自顯影;l^測的;^j"性同位素。對本發(fā)明目的特別有用的同位素為"H、1251、1311、35S和"C?？笻7RC或IH7RCH7RA免疫綴合物還可以用熒光化合物進(jìn)行標(biāo)記。通過將免疫綴^暴S^合適波長的光下，并檢測產(chǎn)生的熒光，可以確定熒ib^ie^的存在。熒ib^^e^包括異^^^t素、羅丹明、藻紅蛋白、!l^^白、別g蛋白、鄰^=^^熒胺。或者，可通過將抗體組分與化學(xué)發(fā)光化合物相偶聯(lián)，而使抗IL"17RC或IL-17RCH7RA^疫綴絲帶有可;^測的才射己。通過^i^測化學(xué)M過程中產(chǎn)生的光的存在來確定帶有化學(xué)ilibf示簽的免疫綴合物的存在。化學(xué)iubf封e^^物的實(shí)例包括魯米i若、^^米諾、芳香族吖咬酯、咪哇、吖M和草酸酯。類似地，可以使用生物JUfc^^iM示^^發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RAit疫綴合物。生物^Ufe^存在于生物系統(tǒng)中的一jyt學(xué)JDt^應(yīng)，其中催化性蛋白提高了化學(xué)^jt^的效率。通過檢測JUfe^確^t物iUt蛋白的存在?？捎糜诓判嗉旱纳颺^^包括螢光素、螢光素si^水母iut蛋白?；蛘撸赏ㄟ^將抗IH7RC或n^l7RC/IL"17RA^^組分與酶連接，而使抗IL"17RC或IL-17RC/IL-17RAit疫綴合物帶有可檢測的^i己。當(dāng)抗IL-17RC或IH7RC/IL"17RA酶綴^b與合適的底物一^育時(shí)，Sl^分與底物^i產(chǎn)生可檢測的化學(xué)物質(zhì)，所述檢測可通過例如分ifejtl法、^fe^或目測法進(jìn)行?？捎糜谑苟嗵禺愋悦庖呔Y^^帶有可檢測才射i的酶的實(shí)例包拾P"半專Ut普酶、葡萄糖氧4fc^、it!U匕物Sl^^l性^^。M域技7p^員應(yīng)當(dāng)知曉能夠^ll本發(fā)明^^的^^適的才射己?？梢?賴本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將才封己物部^^合到抗IL"17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體上。用于這方面的一^T法在下列文獻(xiàn)中有所描述KennedyC7/汰C似肌7ftl(1976);Schursd"A，CZ/汰C嵐勿"S2:l(1977)，Shih&《/擬7/Cer俯IIOI(1990);Stein"《Gi"cci"紐5汰.1330(1990)和Col^an，Jg^:X。此外，可使用與親和素、鏈親和素和生物素綴合的抗IH7RC或IL-17RC/IL"17RA抗體來增加免疫化學(xué)檢測的便利性和通用性(參見例如，WUchekC(編著)，"Avidin-BiotinTechnology,"Mgi/Kwfe/"￡>igwM/ogy，^b/1(AcademicPress1990)和M^/w必/"Mfec油尸胸/ogv，W/。，Manson(編著)，第149-162頁，Bayer^"人的"ImmunochemicalApplicationsofAvidin-BiotinTechnology"(TheH咖anaPress，Inc.1992)。用于進(jìn)4亍免疫測定的方法^l/iH^的。參見例如，A/wwcfowa/^i^cwZ/ey.-iVWift^",五"一m^"g，做</C7/"/co/y4^//ca//<9"，RitterandLadyman(編著)，第180-208頁，Cook和Self的"MonoclonalAntibodiesinDiagnosticImmunoassays，，(CambridgeUniversityPress,1995);Mcwiocfowa/^4wft'fow/fes:^Mi一/esJ，//ca/^"s，BirchandLennox(編著)，第107國120頁，Peny的"TheRoleofMonoclonalAntibodiesintheAdvancementofImmunoassayTechnology"(Waey-Liss，Inc.1995)和Diamaiidis，/附附朋o鵬^[v(AcademicPress,Inc.1996)o^^發(fā)明i^慮到了用于對IL"17RC或IL^7RC/IL^7RA^因^Jiii行免疫診斷測定的試劑盒。這類試劑盒包括至少一個(gè)含抗IL-r7RC或IL-17RC/IL-17RA抗體或抗體片段的容器。試劑盒還可包括裝有能指示IL-17RC或IL-17RC/IH7RA^i^私沐片段的存在的一種或多種試劑的另一容器。這類指示試劑的實(shí)例包括可檢測才封己，例如,性標(biāo)記、熒光才朽己、化學(xué)JUb^i己、酶才封己、生物JU^朽e^膠體M等。試劑盒還可包括指"H^IH7RC/IL-17RA蛋白的方法。例如，文字i兌明書可能^i兌明包裝內(nèi)的抗體或M片段可用于^r測IL-17RC或IH7RC/IL"17RA。文字^h可直接印在容器上，或者可以以包裝糾的形iC^供。I)本發(fā)明的IL"17RC或IL^7RC/II^17RA多肽的治療用途具有可溶性H7RC或IL"17RC/IL"17RA活性的^tJ^酸序列可通過結(jié)合配體IL-17A和IL-17F(單獨(dú)地或共同地)，并因此阻止所述配體與內(nèi)源性IL-17RC和/或EL-17RA受體的結(jié)合，從而可用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。這類拮抗劑例如可溶性IL"17RC或IL"17RC/IL"17RA還可以通過抑制IL-17A和/或IH7F與內(nèi)源性EL-17RC和/或IH7RA受體的結(jié)合，從而可用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。因此，本發(fā)明包括具有IL-17RC或IL-17RC/IL"17RA活性的蛋白質(zhì)、多Jlfc^JI^例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL"17RA多肽、IL"17RC或IL"17RA多肽片段、IL"17RC或IL-17RC/IL"17RA類似物以;SJL-17RC或IL-17RC/IL-17RA融^^白)用于受試者的用途，所述受試者缺少足夠量的所述多肽或產(chǎn)生了過量的IL-17A和/或IL-17F。本發(fā)明的多肽(例如可溶性IH7RC和/或IL-17RC/IL-17RA)還可用于治療產(chǎn)生過量IL"17A、IL17F、IL"17RA或IL-17RC的受試者。合適的受^"包括哺乳動(dòng)物，例如人類。例如，這類可溶性多狀可用于結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和IL"17F(單獨(dú)地或共同地)，可用于治療炎癥和炎性疾病，例如銀屑病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、IBD、IBS、結(jié)腸炎、哞喘、同種^^植物排斥、免疫介導(dǎo)的腎臟疾病、肝膽管疾病、多發(fā)'ti^化、動(dòng)脈粥樣硬化、肺瘤生"^a速或退行性關(guān)節(jié)病，以^L^文公開的務(wù)他炎性病癥。在絲的實(shí)施方案中，所述可溶性受體包括IL-17RC(SEQIDNO:3)并可為#、同二聚體、異二聚體或多聚體的形式，它們能夠在體內(nèi)結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮M中和IL-17F和D^17A(單獨(dú)賦共同地)。如本文所述，針對這類IH7RC牟本、同二聚體、異二聚體或多聚體的抗體和結(jié)合多肽也可以用作IL-17RC活性的拮抗劑和IH7A和IH7F的拮抗劑(單獨(dú)M共同地)。在M優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述可溶性受體同時(shí)包括IL-17RC和IL-17RA的一部分。一種這樣的M實(shí)施方案為一種IU7變體1454(SEQIDNO:157和158)，它包括與Fc5(SEQIDNO:179和180)融合的人類Ibl7RA的外顯子l"6和人類IL-17RCxl的外顯子8-16。變體1454還具有來源于人類IH7RA的天然信號肽。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。此外，本文中還描述了多克ll^單克隆的抗IL"17F中和抗體能夠在基于細(xì)胞的中和測定中結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A的活性。針對對應(yīng)于IH7RCcDNA的mRNA的組織分布分析顯示，/LJ7及C基因的mRNA在曱M、腎上腺、前列^^肝Jlil且織中有很強(qiáng)的表達(dá)，而在心臟、小腸、胃和氣管組織中表ii3^弱。特別地，IH7RC在非T細(xì)J!^卜周血細(xì)胞系包括單核細(xì)胞、B-細(xì)胞和髓系細(xì)胞中穩(wěn)定Mk4^達(dá)。而且，IL-17RC的mRNA在來源于^J統(tǒng)的細(xì)胞系中有確信的表達(dá)。^4達(dá)IL-17RC的細(xì)胞系為陣列上存在的所有5個(gè);U^細(xì)胞系。相M，在腦、胎盤、肺、骨骼肌、腎臟、、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、外周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中沒有表狄?guī)缀鯖]有表達(dá)。IL-17RC所結(jié)合的配^(IL-17F和/或IL-17A)參與誘導(dǎo)炎性應(yīng)答并促進(jìn)炎性疾病，這是憑借它們能夠增加炎性介質(zhì)包括IL"ip、IL-6和TNF-a的產(chǎn)生，以及能夠增加與嗜中.,細(xì)胞的增殖、成熟和趨^(qū)f^目關(guān)的介質(zhì)的產(chǎn)生的能力實(shí)現(xiàn)的(綜述于Witowskietal.CelLMol.LifeScL61:56"7-579(2004))。因此，本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案涉及可溶性IH7RC多肽和可溶性的用途，所述疾病例如銀屑:、銀屑病關(guān)節(jié)炎、^應(yīng)性皮炎、炎性M:、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBD、IBS、克羅恩病、憩室病、哮喘、旨炎、I型糖尿病(IDDM)、J3jM^癌、Jl^炎、格雷夫斷病(Gravesdisease)、結(jié)腸癌和腸癌、自身免疫性疾病、膿毒癥、器官或骨髓移植；由于內(nèi)毒素血癥、創(chuàng)傷、手^感染引起的炎癥；淀粉樣變；脾大；移植物抗宿主疾?。缓脱装Y的抑制，免疫抑制，itit細(xì)胞、免疫細(xì)胞、炎性細(xì)胞或淋巴樣細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)鄉(xiāng)包括TM和Th2細(xì)胞)的增殖的抑制，對病原M抗原的免疫應(yīng)答的抑制，或其他需^P制IL-17F和/或IL-17A的疾病。此外，可溶性IL-17RC和可溶性IL-17RC/IL"17RA多肽可用于(1)阻斷、抑制、減少、拮抗或中和通itlL-17RA或IL"17RC進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，以用于治療急性炎癥，即由創(chuàng)傷、組織損傷、手術(shù)、脒>^#或感染導(dǎo)致的炎癥，以及慢性炎性疾病例如津喘、炎'歸病(IBD)、IBS、慢性結(jié)腸炎、脾大、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、復(fù)發(fā)性急性炎癥發(fā)作(例如結(jié)核病)，以;sj^于治療淀粉樣變和動(dòng)脈粥樣硬化、卡斯特爾曼氏病(Castleman，sdisease)、哮喘，以及，與急性期應(yīng)答的誘導(dǎo)相關(guān)的疾病。(2)阻斷、抑制、減少、拮抗或中和H7RA或IL"17RC的信號傳導(dǎo)，以阻斷或抑制免疫細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、白細(xì)胞)中的信號傳導(dǎo)，用于治療自身免疫性疾病，例如IDDM、多發(fā)'ti^化(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼^(SLE)、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBS和IBD。4M本發(fā)明的多肽阻斷、抑制、減少或拮皿itlL"17RC和/或IL"17RA進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，還可有益于J^JI象、腎臟、腦垂體和神經(jīng)細(xì)胞的疾病?？捎幸嬗贗DDM、NIDDM、Ml^炎和^y^癌。IL-17RC和/或IL"17RA可以作為癌癥的治療乾標(biāo)，其中本發(fā)明的拮抗劑可抑制癌細(xì)胞生長并實(shí)現(xiàn)免疫介導(dǎo)的殺傷(HolligerP，andHoogenboom，H:NatureBiotech.16:1015-1016，1998)。本發(fā)明的可溶性多Jte可用于治療腎病，例如腎小球硬化癥、膜性腎病、淀粉樣變(該疾病也會(huì)影響除腎臟^卜的其^J且織)、腎動(dòng)樂^^^匕癥、^^種起源的腎小球腎炎、腎臟的纖維增生性疾病以及與SLE、IDDM、n型糖尿病(NIDDM)、腎l^t瘤和^fe疾病相關(guān)的腎功能障礙。(3)激動(dòng)、增強(qiáng)、增加或啟動(dòng)通過IL-17RA或IL"17RC進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，用于治療自身免疫性疾病，例如D)DM、MS、SLE、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBS和IBD。本發(fā)明的可溶性多肽可向淋巴細(xì)J!&iL其他免疫細(xì)胞傳導(dǎo)信號，以使得它們分化、改變它們的增^改變細(xì)胞因子或細(xì)胞表面蛋白的產(chǎn)生，從而改善自身免疫。特別地，將T輔助細(xì)胞應(yīng)答調(diào)制為另一種細(xì)胞因子分泌模式可能改變自身免疫性應(yīng)答，從而錄疾病(Sm他JAetal.，丄/附附"""/仰:4841-4849，1998)。類似地，可以使用激動(dòng)性可溶性多肽4fff號傳導(dǎo)至免疫細(xì)胞、消耗免疫細(xì)胞和改變免疫細(xì)胞，所述免疫細(xì)胞與哮喘、過^t性疾病和特應(yīng)性疾病有關(guān)。通itlL-17RC和/或IL"17RA進(jìn)行的信號傳導(dǎo)可有益于膝泉、腎臟、腦垂體和神經(jīng)細(xì)胞的疾病?？捎幸嬗贗DDM、NIDDM、^^炎和^^癌。本文所述的可溶性IL-17RC或IH7RC/IL-17RA多肽可用于結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IH7F或IL-17A的活性(單獨(dú)ijk^共同地)，可用于治療如上所述的自身免疫性疾病、特應(yīng)性疾病、NIDDM、旨炎和腎臟功能障礙。可溶形式的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA也可用于拓Et由Th細(xì)胞介導(dǎo)的抗體應(yīng)答和/或皿淋巴細(xì)MM免疫細(xì)胞產(chǎn)生IL-4或^fe細(xì)胞因子。本發(fā)明的可溶性多肽可用作IH7A和/或IL-17F的拮抗劑。這種拮抗效果可通過直接中和或通過與IL-17A或IH7F的結(jié)合實(shí)現(xiàn)。除了拮抗用途"卜，本發(fā)明的可溶性受體可以結(jié)合IL-17F或n^l7A,將為配體的運(yùn)栽蛋白將配#運(yùn)至體內(nèi)不同的組織、器官和細(xì)胞中。這樣，本發(fā)明的可溶性受體可以與能指導(dǎo)可溶性受^-配體復(fù)合物到達(dá)特異性位置(例如組織、特異性免疫細(xì)絲腫瘤)的分子、多M化學(xué)部W目融合或相偶聯(lián)。例如，可以通itlH7F的作用誘導(dǎo)炎癥和局部急性期應(yīng)答蛋白，從而有益于急性感染或某些癌癥。因此，本發(fā)明的可溶性受體可用于特異性指導(dǎo)IL-17A或IL^7F的作用。參見，Cosman，D.Q;toA/"e5:95-106，1993;andFernandez畫Botran，R^P^汰/"ve就Drwgs9:497-513，2000。炎癥^^Ai物體防^Kt/V物質(zhì)的一種保護(hù)性應(yīng)答。炎癥M是一種涉及多種細(xì)胞介質(zhì)和體液介質(zhì)的事件。一方面，炎性應(yīng)答的抑制可使宿主成為免疫妥協(xié)宿主；然而如果不進(jìn)^^r查，炎癥可導(dǎo)致一些嚴(yán)重的并發(fā)癥，包拾匱性炎性疾病(例如銀屑病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、炎性腸病等等)、感染性休克和多器官功能衰竭。重要的是，這些不同的疾病狀態(tài)都涉及相同的炎性介質(zhì)。這些具有炎癥特征的疾病對于人類的發(fā)病率和致死率有很大的影響。因jH^艮顯然的是，抗炎性蛋白質(zhì)例如本發(fā)明的可溶li多財(cái)于多種人類和動(dòng)物疾病有著重要的治療前景，所述疾病包括從哮喘和變態(tài)反應(yīng)到自身免疫和感染性休克。1.關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎一包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和由損傷引起的關(guān)節(jié)炎等等——A很常見的炎性疾病，并且可以用抗炎性蛋白質(zhì)例如本發(fā)明的可溶性多肽進(jìn)fr治療。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種影響整個(gè)身體的全身性疾病，它是最常見的一類關(guān)節(jié)炎。該疾病以關(guān)節(jié)滑膜的炎癥為特征，會(huì)導(dǎo)致疼痛、僵硬、溫?zé)?、發(fā)紅和肺脹。炎癥細(xì)g故能夠消化骨和軟骨的酶類。作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的后果，發(fā)炎的關(guān)節(jié)膜(滑膜)^t蝕并損壞骨和軟骨，導(dǎo)致關(guān)節(jié)的退化、劇痛和，生3S^。所涉及的關(guān)節(jié)將變形和彎曲，導(dǎo)致^iR動(dòng)能力喪失。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種免疫介導(dǎo)疾病，其特征尤其在于炎癥和隨后的組織損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的失能和致死率上升。在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)的局部會(huì)產(chǎn)生多種細(xì)胞因子。許多研究證實(shí)IL-l和TNF-a這兩種原型促炎細(xì)胞因子在滑液炎癥和進(jìn)行性關(guān)節(jié)損壞的機(jī)理中起了重要作用。事實(shí)上，對患有RA的患者給予TNF"a和IL-1的抑制劑可使得炎癥的臨床指標(biāo)和生理指標(biāo)游到^^改善，并減少骨4曼蝕和軟骨損壞的絲性指標(biāo)。然而，雖然具有上述有益絲，但是有相當(dāng)百分比的患者對于這些藥物沒有反應(yīng)，&明在關(guān)節(jié)炎的病理生理學(xué)中還涉及M的介質(zhì)(Gabay，E;^抓C^/汰說dl7%er.2(2):135-149，2002)。其中一種介質(zhì)可能為EL-17A或IH7F,這樣看來，能結(jié)合EH7F或IL-17A或抑制IH7r或IL"17A活性的一類分子，例如可溶jilH7RC或IL-17RC/IL-17RA，就可能作為有價(jià)值的療法以減輕類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他關(guān)節(jié)炎疾病中的炎癥。本領(lǐng)域中已知有一些類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型。例如，在^f、誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，小鼠會(huì)發(fā)生與人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分類似的慢性炎性關(guān)節(jié)炎。由于CIA的免疫學(xué)特征和病理學(xué)特征都與RA相似，因此可將這一模型作為篩選潛在的抗人類炎癥的化合物的理想模型。CIA模型是一種/^p的小鼠模型，它,于^J^生的免C^答和炎性應(yīng)答。免疫應(yīng)答包括6>細(xì)#004+T-細(xì)胞的相互作用，所i^目互作用響應(yīng)于作為抗原給予的膠原，并導(dǎo)致產(chǎn)生抗^f、抗體。某些上述抗體與小鼠的天然膠原發(fā)生交X^并激活4H^^^作用，導(dǎo)致產(chǎn)生炎癥的介質(zhì)，對于該介質(zhì)的組織應(yīng)答就導(dǎo)致了炎癥期。^J^CIA模型的一個(gè)優(yōu)勢在于已經(jīng)知道了其發(fā)病機(jī)制的^^IL理。已經(jīng)識別了n型^^、上的相關(guān)T-細(xì)l&^B-細(xì)Ji&4位，也已經(jīng)確定了與免疫^h導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎相關(guān)的多個(gè)免疫學(xué)W:(例如i^型超^UJI和^^:^9和炎癥^lt(例如細(xì)胞因子、趨化因子和M降解酶類)，因此就可將這些Wt^于評估待測^^物在CIA模型中的效力(Wooley，Owr.Op/汰3:407-20，1999;WilliamsetaL，/附附w"o/:卵:9784國788，1992;MyersetaL，丄1>5tiW:1861畫78,1997;和WangetaL，/附附ww"92:8955-959,1995)。一組研究顯示抗小鼠IL"17抗體在小鼠CIA模型中相對于對照小鼠緩解了癥狀，il4明從概念上看本發(fā)明的可溶性多肽可以用于治療人類疾病。無論是預(yù)防.,藥還是^^型動(dòng)物已經(jīng)出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥^給藥，單次給予特異性抗小鼠IL-17的大鼠:iiir清均能減輕動(dòng)物體內(nèi)的關(guān)節(jié)炎癥狀(Lubberteetal,爿rrAW泡朋w肌5tf:650-9，2004)。因此，可以使用IL"17RC-Fc或IL"17RC/IL-17RA-Fc來中和IL"17A和/或IL-r7F,用于治療特定的人類疾病，例如關(guān)節(jié)炎、銀屑病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、炎'^病(IBD)、IBS、結(jié)腸炎和本文公開的，炎-性疾病。將本發(fā)明的可溶性多斷例如IL"17RC-Fc或，n^l7RC/IL-17RA可溶l!i蛋白和融合蛋白)給予上述CIA模型小鼠，以評估它們作為IL-17F和IL"17A的拮抗劑以銜眸疾病癥狀和改變疾病進(jìn)程的用途。此外，結(jié)果顯示本發(fā)明的可溶他的IL-17A或n-17F拮抗劑也可以用于,疾病癥狀和改變疾病進(jìn)程。而且，由于IL"17A和/或IL"17F誘導(dǎo)n^ip和TNF"a的產(chǎn)生，而H^ip和TNF-a又都參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制和疾病進(jìn)程，那么全身'I^局部給予上述的可溶性多l(xiāng)就有可能抑制RA中的炎性應(yīng)答。出于示例而非P艮制的意圖，以每只小鼠10畫200Mg的量注射IL^17RC-Fc(每周l至7次，注射最多持續(xù)辯限于4周，通it^:下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥途徑)可以顯著減少疾病評^(后足評分、炎"疾病的JLt)。^4tlL-17RC-Fc^藥的開始時(shí)間(例如在J&^免疫之前給藥或在膠原免疫時(shí)給藥，或在第二;^^免疫^的^^r時(shí)間點(diǎn)給藥，包括在已^jt疾病的時(shí)間點(diǎn)給藥)，IL-17RC可以有效地預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和mjh疾病的進(jìn)程。，可能的療法包括IH7RC/IH7RA多肽等等。2.內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素血癥是一種嚴(yán)重的疾病，它通常由傳染物(例如細(xì)菌和^傳染性疾病致病物)、膿毒癥、中毒性休克綜合征或免疫妥協(xié)患者所經(jīng)受的枳^會(huì)性感染等等所導(dǎo)致。可用于治療的抗炎性蛋白質(zhì)(例如本發(fā)明的可溶性多肽)可幫助預(yù)防和治療人類和動(dòng)物的內(nèi)毒素血癥。這些可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕內(nèi)毒素血癥中的炎癥和病理作用。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥涉及許多在傳染性疾病中產(chǎn)生病理作用的促炎性介質(zhì)，LPS誘導(dǎo)的^動(dòng)物內(nèi)毒素血癥是一種被廣泛，和接受的用于研究促炎性藥物或免疫調(diào)節(jié)劑的藥理作用的模型，。LPS由革蘭氏陰性細(xì)菌產(chǎn)生，是感染性休克的發(fā)病機(jī)制中的一種主要的致病因子(GlausneretaL，丄tf"c^W&732，1991)。在實(shí)驗(yàn)中通過向動(dòng)物單次注射LPS就可以有^bfc誘導(dǎo)類似休克的狀態(tài)。由細(xì)胞響應(yīng)于LPS所產(chǎn)生的分子可直接或間接地把向于病原體。雖然上述生物應(yīng)答可以保護(hù)宿主不受病原體的侵害，但是它們也會(huì)產(chǎn)生有害的作用。因此，由嚴(yán)重的革蘭氏陰性細(xì)菌感染所導(dǎo)致的先天免疫的大M^刺激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子和，^"過量產(chǎn)生，并會(huì)導(dǎo)5tiLt致命綜合征即感染性休克綜合征，該綜合征的特征為發(fā)燒、低血壓、彌散性血管內(nèi)凝集和多器官功能衰竭(Dumitruetal.O//1071-1083，2000)。LPS的這些毒性作用大多與巨噬細(xì)胞激活導(dǎo)致的多種炎性介質(zhì)的釋放有關(guān)。給予中和性抗TNF抗體可以預(yù)防LPS的桊性，錄明在這些介質(zhì)中TNF似乎起了關(guān)鍵性作用(BeutleretaL，5W幼"229:869，1985)。已經(jīng)證實(shí)，對C57B1/6小鼠注射l照的;^桿菌LPS，在注射后約2小時(shí)就可以導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中EL"6、TNF-a、IL-1和急性期蛋白(例如SAA)的顯著增加。LPS的毒性似乎是由上述細(xì)胞因子介導(dǎo)的，因?yàn)獒槍ι鲜鼋橘|(zhì)的被動(dòng)免疫可^lt死率I^^(BeutleretaL，Science229:869，1985)。用于預(yù)防和/或治療感染性休克的潛在的免疫干預(yù)策略包括抗TNFmAb、IL-1受⑩抗劑、LIF、IL-10和G"CSF?？梢詫ι蟐lps誘導(dǎo)的模型給予本發(fā)明的可溶性多肽，以評估il-17rc或il-17rc/il-17ra用于M)^癥狀和改變lps誘導(dǎo)的疾病的進(jìn)程的用途。jH^卜，據(jù)即M^il類拮抗劑也可以用;^^lps誘導(dǎo)的模型的癥狀和改變^病進(jìn)程。所述模型顯示出lps注^^導(dǎo)了ih7f的產(chǎn)生，而所述可溶性多肽可用于治療疾病。由于lps誘導(dǎo)了可能與內(nèi)毒素血癥的病理學(xué)有關(guān)的促炎因子的產(chǎn)生，因此可以使用拮抗劑可溶性多肽中和il-17f活性或中和^fc促炎性因子，以減輕內(nèi)毒素血癥的癥狀，例如在內(nèi)毒素性休克中所見的癥狀。3.炎',病obd)在美國大約有500，000人患有炎性腸病(ibd),該疾病影響結(jié)腸和/或JLM(潰瘍性結(jié)腸炎)，小腸和(克羅恩病)。這些疾病的發(fā)病機(jī)制還不清楚，但是都與受影響組織的慢性炎^M目關(guān)。本發(fā)明的可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕ibd、UC和相關(guān)疾病的炎癥和病理作用。潰瘍性結(jié)腸炎(uc)是一種;^(通常被稱為結(jié)腸)的炎性疾病，其特征在于結(jié)腸的粘膜或最內(nèi)層襯膜的炎^潰瘍。這種炎癥使得結(jié)腸經(jīng)常排空從而導(dǎo)致腹瀉。癥狀包括大便^lt以;M目關(guān)的腹部絞痛、；^和體重減輕。雖然還不知道UC的確切病因，但是最近的研究表明;!M^的天然防御系統(tǒng)正在^i體內(nèi)的被;N^認(rèn)為是外來的蛋白質(zhì)(一種"自身免疫性M")。也許由于這些蛋白質(zhì)類似于腸道內(nèi)的細(xì)菌蛋白質(zhì)，所以它們可能會(huì)啟動(dòng)或刺激炎性過程，而所述炎性過程會(huì)開始破壞結(jié)腸襯膜。由于結(jié)腸的襯膜被破壞，因而會(huì)形成潰瘍##^:粘液、J^p血液。這一疾病通常從，部分開始，可能最^蔓M整個(gè)大腸。炎癥的^Oj^作會(huì)導(dǎo)致腸壁增厚^jLM部分產(chǎn)生瘢痕組織。在疾病嚴(yán)重時(shí)可育^L生結(jié)腸組織壞死或膿毒癥。潰瘍性結(jié)腸炎的癥#嚴(yán)重程度上^^有所不同，其發(fā)病可為漸發(fā)性或M性的。許多因素(包^"吸系統(tǒng)感染或應(yīng)激)^能引起義病。雖然目前沒有有效的治療uc的療法，但是已有的治療方法都主要關(guān)注于抑制結(jié)腸襯膜的異常炎性過程。目1H"用于治療該疾病的治療方法包括皮質(zhì)類固醇免疫抑制劑(例如硫喳嘌呤、巰噤#曱氨喋呤)和#^^^:。然而，長期使用免疫抑制劑例如皮質(zhì)類固醇和硫喳噪"^^導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，包M骼變細(xì)、白內(nèi)障、感染和對肝臟和骨髓的影響。對于現(xiàn)有療法無效的患者而言，手術(shù)也是一種選擇。手術(shù)包^7除整個(gè)結(jié)腸和JJ^。已經(jīng)有幾種可部分模擬潰瘍性結(jié)腸炎的動(dòng)物模型。最廣泛使用的模型為2，4，6-X^J^t酸(TNBS)/乙醇誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型，該模型是在結(jié)腸中誘導(dǎo)l"曼性炎癥和潰瘍。當(dāng)通過直腸內(nèi)滴注將TNBS注入易感小鼠的結(jié)腸時(shí)，它可以在結(jié)腸粘^Ji誘導(dǎo)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在這種情況下可導(dǎo)致以整個(gè)大腸壁上的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的稠密浸潤為特征的大面積粘膜炎癥。除了這種組織病理學(xué)特征W卜還伴隨有以下臨床特征進(jìn)行性體重減輕(消耗)、血昧腹瀉、JL^脫^^;U^壁增厚(Neiira也etal./"tem.及ev./附附""M":51>62，2000)。另一種結(jié)腸炎模型使用右旋糖酐硫酸酯鈉(DSS)來誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎，該疾病的表現(xiàn)為血性腹瀉、體重減輕、結(jié)腸變短和伴有嗜中'1^細(xì)J3&^潤的粘膜潰瘍。DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的組織學(xué)特征為炎性細(xì)胞浸潤至固有層中，并伴有淋巴樣增生、灶性隱窩損傷和上皮潰瘍。這些改變被認(rèn)為是由于DSS對上皮的毒性作用和借助于固有層細(xì)胞的吞喧作用、以及產(chǎn)生TNF-a和IF]V/而形成。雖然這一模型已被廣泛使用，但;U)SS的枳J^A類疾病的相關(guān)度方面還有一些問題沒有解決。DSS^型被認(rèn)為是一種不依賴T細(xì)胞的模型，因?yàn)樵赥細(xì)胞缺陷型動(dòng)物例如SCID小鼠中也觀察到了相似癥狀?？梢詫NBS或DS&j莫型給予本發(fā)明的可溶性多肽，以評估它們用于^j^癥狀和改變胃腸道疾病進(jìn)程的用途。W卜，結(jié)絲示這些可溶性多財(cái)IL-17F和/或H7A的抑制或中和作用為以下推論提供了證據(jù)即它們(或類似分子)也可以用于銜醉結(jié)腸A/IBD模型的癥狀和改變疾病進(jìn)程。4^病是一種超過七百萬美國A^5患有的慢性狄疾病。#4病在新生皮膚細(xì)胞生長異常時(shí)發(fā)生，導(dǎo)致發(fā)炎、肺脹和因舊^^食化夠快的脫落而產(chǎn)生的鱗片狀她。斑塊狀#4病絲常見的類型，其特絲于表面帶有銀白色的鱗片的發(fā)炎的^:塊("損傷")。銀屑病可肯^限于少^L^塊或者也可能涉及中JL^較大面積的龍決，最常出現(xiàn)的部位為頭皮、膝部、肘部和軀干部。雖然看^M艮明顯，但是4^屑病并不是一種接觸傳染的疾病。該疾病的發(fā)病機(jī)制包括受影響組織的慢性炎癥。本發(fā)明的可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕銀屑病、M炎性;^疾病、^^和粘膜變態(tài)^JI和相關(guān)疾病的炎癥和病理作用。銀屑病是一種T-細(xì)l^h導(dǎo)的狄炎性疾病，可引起相當(dāng)程度的不適。狄一種目前無法治愈的疾病，并且可侵害所有年齡的A^。在歐洲和北美洲，有大約2%的4患有銀屑病。雖然患有輕度銀屑病的個(gè)M?？梢约言戮植克?8物控制疾病，但是^:界仍有超過一百萬的患者需要紫外線治療或全身性免疫抑制治療。不幸的是，紫外線輻照治療的不便和危險(xiǎn)性以及許多療法的毒性限制了這些療法的長期使用。此外，患者通常會(huì)在停止免疫抑制療法后的m^時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)銀屑病，有些時(shí)候還會(huì)由反彈。本發(fā)明的可溶性多肽可用于診斷系統(tǒng)中，以檢測循環(huán)系統(tǒng)中的H7F或IL-17A水平，和檢測與急性期炎性應(yīng)答相關(guān)的IL-17F或IL"17A。>^目關(guān)實(shí)施方案中，可以使用本發(fā)明的可溶性多Jlb險(xiǎn)測循環(huán)系統(tǒng)中或局部作用的IH7F或IL-17A多肽。B沐或受體多肽水平的升高或降低可指示病理性疾病，包括炎癥或癌癥。已知IH7r^^導(dǎo)相關(guān)的急性期炎性應(yīng)答。jH^卜，對急性期蛋白質(zhì)或m(例如IL"17A或IH7F)的檢測可以作為某些疾病狀態(tài)(例如哮喘、銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、IBD和IBS)的慢性炎性病癥的指標(biāo)。這類病癥的檢測可以有助于疾病的診斷，并可幫助醫(yī)生選擇合適的療法。除了本文所述的務(wù)他疾病模型"卜，還可以佳JI重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小IL^型，在體內(nèi)測量本發(fā)明的可溶性多財(cái)來源于人類銀屑病損傷的炎'Iil且織的活性。已經(jīng)開發(fā)了一些人類細(xì)I^L^LA^疫缺陷型小鼠的小鼠模型(統(tǒng)稱為異種移植物模型)；參見例如，CattanAR^DouglasE，M:513國22，1994和Flave11，DJ，及e附"tofog/co/Ort"to狄":67-82，1996。作為一種#4病的體內(nèi)異種移植物模型，將人類銀屑病^i且織^^SCID小鼠模型中，并用合適的拮抗劑攻擊。此外，也可以使用本領(lǐng)域中的其他銀屑病動(dòng)物模型來評估IL"17A和IL-17F拮抗劑，例如將人類銀屑病^m:移植物;ltAAGR129小鼠模型中，并用^^適的拮抗劑攻擊(例如參見，Boyman，O.etal.，/Onlinepublication#20031482，2004，該文獻(xiàn)以援引的方式納A^^文)。本發(fā)明的能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A和IL"17F兩者的活性的可溶性多肽是優(yōu)選的拮抗劑，其他的IH7A和IL"17F拮抗劑也可以用于該模型中。類似地，可將來源于人類結(jié)腸炎、IBD、IBS、關(guān)節(jié)炎或m炎性損傷的組織或細(xì)胞用于該SCHM^型，以評估本文所述的IL"17A和IL-17F拮抗劑的抗炎録?？梢酝ㄟ^將本發(fā)明的可溶性多！^予帶有人類炎性組織(例如銀屑病損傷等等)的SCID小鼠或本iL^斤述的^M^型，對設(shè)計(jì)用于^JU本發(fā)明的可、溶14多肽來消除、^^或減輕炎癥的療法進(jìn)行測試。使用4^頁域公知的方法測:Ht治療A^中抗炎效果隨時(shí)間的增加，從而測量療法的^并進(jìn)^^計(jì)學(xué)評估。一些示例性方法包括但不限于例如在銀屑病模型中測量^Jf度、真皮上層中炎性細(xì)胞的數(shù)量和角化不全的^U，J。這類方法是本領(lǐng)域已知的，并在本文有記載例如參見，Zeigler，M.etal.丄W/wve^W:1253，2001;Zollner，T.M.etaL義C7/汰/"ve就J狄671，2002;Yamanaka，N.etal.3f/cra6/汰//挑附"朋/145:507，2001;Raychaudhuri，S.P.etal.份./Z)e騰toA嵌931，2001;Boehncke，W.Hetal.Der附fltoA及戰(zhàn)2W:104，1999;Boehncke,W.HetaL././wve議De尸附fl/W"6:596，2001;Nickoloff，B.J.etaL爿肌/iWAW"6:580，1995;Boehncke，W.Hetal./Cn似汰戶"幼o(hù)/:24:1,1997;Sugai，J.，M.etal./Z)c附fltoil5ti77:85，1998;和VilladsenL.S.etal./C7/汰//fve就J":1571，2003。還可以使用例如流式細(xì)I&^(或PCR)的公知方法，測量樣本中炎性細(xì)M損傷細(xì)胞的數(shù)量、IBD^分(體重減輕、腹竭、狄出血、結(jié)腸長度)以及CIA和RA模型的足疾病評#炎癥評分，從而隨時(shí)間監(jiān)測炎癥。例如，適用于在這類模型中檢測的治療策略包括使用下述藥物基于阻斷H^17RC和/或IH7RA與其相應(yīng)配體的相互作用而進(jìn)行的直接治療，所述藥物為可溶性IL-17RC或IL-17ROIL-17RA，或^f&IL"17A和IH7F拮抗劑(單獨(dú)地或共同地)，或相關(guān)綴^或拮抗劑。銀屑病為一種慢性炎性狄疾病，該疾病與增生性上皮角質(zhì)形成細(xì)脅浸潤性單核細(xì)胞(包括CD4+記憶T細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)相關(guān)(Christophers,/"A爿rc/r.爿/fer欲/附/w""W，7/汰.199，1996)。目前認(rèn)為5f^中的抗原對于該疾病的iLi和該疾病的病理學(xué)有重要的作用。然而，認(rèn)為對自身抗原的耐受度下降介導(dǎo)了銀屑病的病理學(xué)。樹突細(xì)J^CD4+T細(xì)胞被認(rèn)為在下述的抗原呈遞和識別過程中起重要作用，所述抗原呈遞和識別過程介導(dǎo)了導(dǎo)致所述病理的免疫應(yīng)答。我們最近基于CD4+CD45RB轉(zhuǎn)移模型開發(fā)了一種銀屑病模型(DavenportetaL，/"temartlJ附附""o/i/fai"附"co"2:653-672)。將本發(fā)明的可溶性多肽給予小鼠。對疾病評^(^J^損傷和炎性細(xì)胞因子)的抑制表明所述可溶性多toJ"于^L^病的效力。5.特應(yīng)性皮炎.AD是一種常見的慢性炎性疾病，其特征在于輔助T細(xì)胞亞類2(Th2)的iUL活躍的細(xì)胞因子。雖然尚不知itAD的確切病因?qū)W，但是已知有多種因素與其相關(guān)，包括itl活躍的Th2免疫應(yīng)答、自身免疫、感染、變應(yīng)原和遺傳傾向。該疾病的關(guān)鍵特征包針燥病(M干燥)、瘙癢癥(J^^輛)、結(jié)膜炎、炎性^J^損傷、金黃色葡萄球菌(5te/i卸foaccMS做wtts)感染、血液嗜酸粒細(xì)胞增多、血清IgE和IgGl水平升高和伴有T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨喧細(xì)胞、和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤的慢性皮炎。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌的定殖或感染會(huì)加劇AIMH^這種M疾病轉(zhuǎn)為永久性慢性疾病。AD常見于患有哮喘和變應(yīng)性鼻炎的患者中，并且通常為變應(yīng)性疾病的初始表現(xiàn)。在西方國家中約有20。/o的A^患有這類變應(yīng)性疾病，在發(fā)達(dá)國家的AD發(fā)病率因?yàn)槲粗脑騣^i^上升。AD通常起始于童年期，并經(jīng)常可從青^^一直持續(xù)直至成年。目前針對AD的療法包括局部M激素治療、口服環(huán)孢菌素A、非皮質(zhì)類固醇免疫抑制劑例如他克莫司(油膏形式的FK506)和干擾素Y。雖然有多種針對AD的療法，但是許多患者的癥狀并沒有得到改善，或者他們對藥物有不M應(yīng)，這就需J^找M更有效的治療劑。本發(fā)明的可溶性多肽可用于中和IL-17F和IL-17A，用于治療特定的人^類疾病，例如特應(yīng)性皮炎、炎性^J統(tǒng)疾病和本文公開的M炎性疾病。6.哮喘IL-17對于氣道中的變應(yīng)原誘導(dǎo)的T細(xì)胞激活和嗜中'lt^立細(xì)胞內(nèi)流具有重，用。IL-17的受體在氣道中表ii(Yao，etal.Immunity3:811(1995))在過敏性哮喘中，化學(xué)引誘物EL-8、GRO^和由EW7刺激的人類支氣管上皮細(xì)胞(HBEC)和人類支氣管成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2(1\1-2)可以極大地誘導(dǎo)IL-17介導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞募集(Yao，etal.//附w"朋/755:54&(1995));Molet，etaL/j/fer狄C//wJ附附w"o/J做:4鄧(2卵")。IL-17舳，J激HBEC釋放嗜中'I^細(xì)胞激活因子IL"6(FossieAetal，/~JW:25W(7妙6)機(jī)inden，etaL/^爿rcA爿/feis)^附附""o〃26:779(2001))，并且已在體外證實(shí)IL-17可以與TNF-口協(xié)同作用而延^A類嗜中性粒細(xì)胞的存活時(shí)間(Laan，etal.五",及^/，/r/2:M7(2003))。jH^卜，IL-17能夠通過增強(qiáng)涉及氣道重塑的細(xì)胞因子的分泌，從而增強(qiáng)哮喘中的炎性應(yīng)答，所述細(xì)胞因子例如促纖維變性(profibrotic)細(xì)胞因子IL-6和IL"11和炎性介質(zhì)粒細(xì)胞集落刺激因子(G^CSF)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)(Molet，etal./爿/fe/gvC7/w/附附w朋/臨店4i據(jù)顯示，哮喘的急性重度惡化與氣道中嗜中'fci^細(xì)胞的募集和激活相關(guān)，這樣看來IL-17可食tjt哮喘中起了重要作用.患有輕度哮喘的患者表現(xiàn)出游離的可溶性IL-17A蛋白局部濃度的可檢測的升高(Molet^etaLJAllergyClinImmunol108:430(2001》，另夕卜，通過使絲的人類志愿者暴露于封閉豬舍中以誘導(dǎo)發(fā)生嚴(yán)重的氣道炎癥時(shí)，該志愿者的支氣管肺泡間隙中的游離的可溶1"生IL-17A蛋白濃度的表現(xiàn)出明顯升高(Fossiez，etal，JExpMed183:2593(1996)和Linden，etaLIntArchAllergyImmunol126:179(2001》。此外，痰中的IL-17水平與個(gè)體氣道高反應(yīng)性的提高相關(guān)(Barczyk^etal.RespirMed97:726(2003)。在氣道高反應(yīng)性的動(dòng)物模型中，4:敏化的小鼠慢性pAX卵清蛋白可導(dǎo)致支氣管嗜酸錄細(xì)胞炎癥，并可在發(fā)炎的肺組織和支氣管嗜中'錄細(xì)胞中早期誘導(dǎo)IL國17mRNA的表ii(Hemngs，etaLAmJRespirCellMolBiol28:42(2003)?？笽L-17單克隆脅顯著I^f氐了支氣管嗜中'雄細(xì)胞內(nèi)流，但^k^^提高了支氣管肺泡灌洗液和血清中的IL"5水平，并Jii加重了變應(yīng)原誘導(dǎo)的支氣管嗜酸1±*立細(xì)胞內(nèi)流，it^明IH7A可能^4決定在如上所述的^^攻擊后的嗜中'1^立細(xì)#嗜酸1^細(xì)胞累積的平斷同上)。在IL-17家M員中，IL"17F與IL"17A的關(guān)系最近。由IU7A介導(dǎo)的生物活性與由H7F介導(dǎo)的生物活性類似，其中IL-17F刺^LIL"6、IL-8和G^CSF的產(chǎn)生(Hurst,etal.JImmunol169:443(2002))。IL-17Fi^內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)IL-2、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-口和單核細(xì)^^化蛋白(MCP)的產(chǎn)生(Starnes，etal.JImmunol167:4137(2001))。類似地，變應(yīng)原攻擊可以增加過敏性哞喘患者的局部IL畫17F水平(Kawaguchi，etaLJImmunol167:4430(2001))。將IH7F基因送遞至鼠類肺部可提高支氣管肺泡間隙中的嗜中'l!^立細(xì)胞水平，而IU7F基因的(Oda，etal.AmJRespirCritCareMed171:12(2005))。除哮-^卜，還有一些慢性炎性氣道疾病也以氣道中的嗜中'雄細(xì)胞募集為特征，已有損道稱IL"17在一些呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，所述呼吸系統(tǒng)疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)、細(xì)菌性肺炎和嚢性纖維化病(Linden,etal.EurRespirJ15:973(2000)，Ye，etaLAmJRespirCellMolBiol25:335(2001)3ahman，etal.ClinImmunol115:268(2005))。在體夕卜炎^j^型中，已顯示抗IL-17A和/或抗IL"17F治療性^"對慢性炎性氣道疾病有治療效果。IL-17F和/或IL"17A活性的拮抗劑，例如n^l7RC可溶性受體和其^(包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆，和中和^9,抑制IL-17A和/或II^17F誘導(dǎo)培養(yǎng)的HBEC或支氣管成纖維細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子的能力可以被用于度量這類拮抗劑防止因IH7A和/或F刺激所直^致的炎性介質(zhì)的產(chǎn)生的效力。如^PAJL^17F和/或IL"17A活性的拮抗劑(例如本發(fā)明的可溶性多肽)可以顯著I^f氐炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)，那么就可以預(yù)計(jì)所述拮抗劑能夠有M治療與t曼性氣道炎^M目關(guān)的炎性癥狀。7.腸易激綜合敘"IBS")腸易激綜合M示以腹部疼痛或不適和異常糸M更習(xí)慣為特征的疾病。可以基于IBS患者的朝Nt習(xí)慣可以將IBD患者分為三種主要的類幹主要為經(jīng)常排便或大便木碌的患者；主要為不經(jīng)常#1線大便干硬的患者；以及朝M更習(xí)慣不定或大便正常的患者(Talleyeta1.，2002)。腸運(yùn)動(dòng)性的改變、上皮功能的異常、糞便和空^t過的異常以;SJ[激柯能與癥擬目關(guān)，而內(nèi)臟的超^JI是大多數(shù)患者的重^lt征。推測影響^i信號傳導(dǎo)的遺傳因素和傳入信號的中m理的失調(diào)可能^f吏個(gè)體易于在接觸特定環(huán)^患上IBS。研究還證實(shí)，結(jié)腸中的炎性應(yīng)答會(huì)增加平滑肌和腸道神經(jīng)的每:感性，由此擾亂腸的感覺-運(yùn)動(dòng)功能(Collinsetal.，2001)。IBS和IBD在臨^Ji有交叉，在患^L確診為IBD4^前經(jīng)常被報(bào)告絲出ffi辦癥狀，而且已經(jīng)確診為IBD的患者在^l期時(shí)出5ejBS癥狀的情況比預(yù)計(jì)的要多。因此，這些疾病可能以高于預(yù)計(jì)的頻率共存，或者可能IBS和IBD是存在與一個(gè)連續(xù)鐠中不同端點(diǎn)的疾病。然而應(yīng)該注意到的是，大多itlBS患者的結(jié)腸活檢標(biāo)本看^^是iE常的。盡管如此，IBSiiA^地影響了相當(dāng)多的個(gè)體(2000年在美國的患病個(gè)體大約有1600萬)，導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)一共為17億美元(2000年)。因此，在各種高發(fā)病率和造成高經(jīng)濟(jì)花費(fèi)的腸胃疾病和病癥中，IB敗次于胃食管返流疾病(GERD)而排在第4。但是與GERD不同的是,IBS的治療現(xiàn)狀并不令人滿意(TalleyetaL,2002;Farhadietal.，2001;Collinsetal.，2001),說明治療IBS的需求顯然并未得到滿足。目前已提出的疾病模型都基于下述假設(shè)中柩灃經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或消化道的神經(jīng)回路、免疫回路或神經(jīng)免疫回路對中樞(##上的)或外周(組織刺激、A#、感染)系統(tǒng)中正常穩(wěn)態(tài)的波動(dòng)的M性增強(qiáng)(Talleyetal.，2002)。這種增強(qiáng)的反應(yīng)性導(dǎo)致消化itii:動(dòng)性的失調(diào)、上皮功負(fù)^免疫和通透性)失調(diào)和內(nèi)臟的超^t^應(yīng)，這些^^又導(dǎo)致了IBS癥狀?？赡苡卸喾N不同H在IBS的發(fā)病機(jī)制中起作用，包括刺激神經(jīng)元的W的作用和參與啟動(dòng)炎性過程的分子的作用。發(fā)明人掌握的多種的H都已知與神經(jīng)元的可能的活,I^目關(guān)，因?yàn)樗鼈冎苯佑缮窠?jīng);^4絲者它們的受體糾經(jīng)元Ji^達(dá)，所述內(nèi)部W包括IL-17D、IL"17B和IL"31。此外，有多個(gè)H7家族成員和相關(guān)分子與消化道炎^f目關(guān)，所M員包括IL"17A、IL"17F、IL-23和11^31?？梢栽诩膊〉膭?dòng)物模型中測^il些^"的體內(nèi)抑制劑效力。已經(jīng)提出了一些^^以IBS的關(guān)鍵特征的動(dòng)物模型，這些模型中涉及耙向中樞的剌激(應(yīng)激)和耙向外周的刺激(感染，炎癥)。可以用于測定抑制劑治療IBS的效力的體內(nèi)動(dòng)物模型的兩個(gè)實(shí)例為(i)主要;^以原發(fā)性CNS定向的IBS發(fā)病機(jī)制的模型(應(yīng)激模型)，和(ii)主要模擬消化道定向的應(yīng)激(即消化道炎癥、感染或物理應(yīng)激)的誘導(dǎo)物的模型。然而應(yīng)當(dāng)注意的是，在CNS或在胃腸(GI)道中發(fā)生的事件并不是相互獨(dú)立的，IBS的癥狀很可能應(yīng)歸因于從CNS向GI的信號傳導(dǎo)或從GI向CNS的信號傳導(dǎo)之間的復(fù)雜的相互作用。J)藥物學(xué)制劑為了用于藥物用途，可^^常M法將本發(fā)明的可溶性多肽配制為用于腸胃外illit特別是靜脈內(nèi)illit或皮下illit的制劑。靜脈內(nèi)給藥可以通過以下方式進(jìn)行快速濃注、控辯例如使用微M^^適技術(shù))或通常為一小時(shí)至幾小時(shí)內(nèi)的輸注。通常，藥物制劑應(yīng)包^tit蛋白以及可藥用的載體，例如生理鹽水、緩沖鹽溶液或5%葡萄糖水溶液等等。制劑還可包括一種或多種賦形劑、防腐劑、助溶劑、緩沖劑或者防止容器表面的蛋白質(zhì)損失的清蛋白等等。當(dāng)使用這類結(jié)合療法時(shí)，可將各細(xì)胞因子混合為單一的制劑或者各細(xì)胞因子可以以各獨(dú)立的制劑形式給藥。配制的方法是本領(lǐng)域公知的，并且公開于例如及柳/m，"'s/%flr/iiace"#ca/5We"ces，Gennaro，ed"MackPublishingCo"EastonPA，1990中，該文獻(xiàn)通過援引納A4^文。治療劑量通常應(yīng)為0.1至100mg/kg患者體重/天，優(yōu):^為0.5-20mg/kg/天，賴"確的劑量可由臨床醫(yī)生，現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)，并考慮游治療疾病的'M和嚴(yán)重程度以及患者個(gè)^ft征等等因素來確定。劑量的確定是在4^貞域"fit技術(shù)人員能力范圍之內(nèi)的。通常應(yīng)在化療或骨髓移^給予蛋白質(zhì)，可給予最多ii28天的時(shí)間M給予JJ^、板計(jì)數(shù)達(dá)到S0，000/mm3，優(yōu)gX0，000/mm3為止。更通常地，蛋白質(zhì)可被給予一周或^時(shí)間，通常*予一至三天。通常，本發(fā)明的可溶性多肽治療有效量為足以使淋巴樣細(xì)胞或骨髓祖細(xì)胞的增殖和/或分化在臨床上產(chǎn)生顯著增加的量，所述的增加表現(xiàn)為循環(huán)系統(tǒng)中成熟細(xì)胞(例如血小板或嗜中'1^細(xì)胞)水平的增加。因此，對血小板疾病的治療可持續(xù)至血小板計(jì)數(shù)達(dá)到至少20，000/mm3、to^為50，000/mm3為止。本發(fā)明的可溶性多^ii可以與^^細(xì)胞因子聯(lián)合給94成素；G"CSF和GM-CSF。在聯(lián)合治療方案中，M細(xì)胞因子的日劑量通常為EPO，150U/kg;GM-CSF，5-15]g/kg;11^3，l國51g/kg;和G"CSF，l國25Ig/kg。與EPO聯(lián)合的療法例如可用于EPO水平較低的貧血患者。通常，可溶性多肽的給藥劑量會(huì)根據(jù)下列因素而變化例如患者的年齡、體重、身高、性別、總體醫(yī)學(xué)狀況和病史。通常需要向受者提供的這類可溶性多肽的劑量范圍為約lpg/kg至10mg/kg(藥物量/患者體重)，但是根據(jù)情況也可以給予更低或更高的劑量。將本發(fā)明的可溶性多M予受錄的給藥途徑可為靜脈內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥、JtM內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、胸膜內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、通it^部導(dǎo)管的輸注給藥或者在損傷區(qū)直接注射給藥。當(dāng)通過注射給予治療性蛋白質(zhì)時(shí)，給藥可以通趙續(xù)輸注或單次或多次濃注的方式進(jìn)行。其條藥途徑包括口月峰藥、粘膜給藥、肺部給藥和經(jīng)皮給藥?？贘^iilil1適用于聚酯m、玉米蛋白#^類蛋白質(zhì)m、聚腈基丙烯酸酯#^基于月旨類的系統(tǒng)(;^見例如，iVote/wDe/iVe/y:i%"/ca/iyjwte鵬，Sanders和Hendren(編著)，第255-288頁，DiBase和Morrel的"OralDeliveiyofMicroencapsulatedProteins"(PlenumPress1997))。例如胰島素鼻內(nèi)給藥的方式說明了鼻內(nèi)iHi菱的可行性(參見例如，HinchcliffeandDlurn,^rfuDragZ)e//v.35:199(1999))?？梢灾苽浒扇苄訧L-17RC或抗IL"17RC抗體的干顆M液體顆粒，并在干粉分散器、液體溶J^A器或噴霧器的幫助下用于^NJ^藥(例如，PettitandGombotz，r游五CH^6:343(1998);Patton"《她Dr"g歸'v.紐35:235(1999))。這一方法可通iiAERX糖尿病控制系統(tǒng)得到說明，該系統(tǒng)為一種可以將氣溶皿島素iilitJJt內(nèi)的手控電子PAA器。研究顯示，^量大到48，000kDa的蛋白質(zhì)可以在4頓超聲波的輔助下以治療濃度穿it^JUHit，這證明了經(jīng)皮給藥的可行性(Mitragotri""A，5tfen"2砂:850(1995))。使用電穿孔的經(jīng)皮送遞提供了用于給予本發(fā)明的可溶性多肽的另一種方式(PottsWa"歷她c/M2化213(1997))?？梢愿鶕?jù)已知方法配制含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組#，以制備其中治療性蛋白和可藥用栽體組合形成混合物的可藥用組合物。當(dāng)一種組合物的給藥可被接受該組合物的患者耐受時(shí)，就將該組合物稱為"可藥用載體"。可藥用載體的一個(gè)實(shí)例為無菌磷^it緩沖液。^^適的載體^1本領(lǐng)域技^^員7>知的。參見例如，Gennaro(編著)，及側(cè)/wgtow's尸/MWifttice"ifcflr/iyc/e"ces，第19版(MackPublishingCompany1995)。出于治療目的，可以給予患者治療有效量的本發(fā)明的可溶性多#可藥用載體。當(dāng)所給予的^^發(fā)明的治療性W和可藥用載體的組合的量產(chǎn)生^的生理學(xué)作用時(shí)，就稱該量為"治療有效量"。如果一種藥物的存在導(dǎo)致當(dāng)接受給藥的患者的生理狀況發(fā)生可檢測的改變時(shí)，就稱該藥物產(chǎn)生了顯著的生理學(xué)作用。例如，如果一種用于治療炎癥的藥物的存在減輕了炎性應(yīng)答，就稱該藥物產(chǎn)生了顯著的生理學(xué)作用。含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組合物可以以液體形式、氣溶膠形式或固體形式提供。液體形式的實(shí)例為可注射溶液和口服懸液。示例性的固體形式包括膠嚢、片劑和控釋形式?？蒯屝问降膶?shí)例為微量滲透^4i^物(Bremer"歷她c/r朋/1掀239(1997);Z)i*"gDe//ve/y<5^欲鵬,RanadeandHollinger(編著)，第95-123頁，Ranade的"ImplanteinDrugDeliveiy，，(CRCPress1995);iV她/"分他ms，SandersandHendren(編著)，第239-254頁,Bremer^人的"ProteinDeliverywithInfusionPumps"(Ple肌mPress1997);/Vvfe/"De//veij:i%j/ca/^sterns,Sanders和Hendren(編著)，第93畫117頁,Yewey等人的"DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant"(PlenumPress1997))。脂質(zhì)#^1供了一種通過以下給藥途徑將治療性多l(xiāng)id^it至受錄的方法靜脈內(nèi)、鵬內(nèi)、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、皮下，或口月峰藥、PilA^藥或鼻內(nèi)給藥。脂質(zhì)體是由被脂質(zhì)雙層包圍的一個(gè)或多個(gè)水性區(qū)室組成的微嚢(總體參見，Bakker畫Woudenbei^""/L，/C7/汰Af/cra6/o/L/"AdZ)/s:"fS^，/1/):S61(1993);Kim，46:618(1993)和細(xì)g一醒，Ranade和Hollinger(編著)，第3畫24頁，Ranade的"Site"Spec迅cDrugDeliveryUsingLiposomesasCarriers"(CRCPress1995))。脂質(zhì)體在組成上與細(xì)皿類似，因此脂質(zhì)體可以用于^^藥并且是可生物降解的。才娥制備方法的不同，脂質(zhì)體可為單層的或多層的，脂質(zhì)體的直徑大小可為0.02jim至10nm以上。脂質(zhì)體中可包封多種藥物分配于脂雙層中的疏水性藥物和分配于內(nèi)部水性空間中的親水性藥物(參見例如，Machy""/!，丄扭ftwwwes/"CM5/ofogj;爿""尸/wwwwico/ogv(JohnLibbeyl987)和Ostroe/"/1,J附eWcfl"丄及做p./^flmi^6:1576(1989))。jlt外，還可以通過改變脂質(zhì)體的大小、脂雙層的數(shù)目、液體組分以及改變脂質(zhì)體的荷電特#表面特性，從而控制被包封藥物的治療利用度。脂質(zhì)體可吸附在a所有類型的細(xì)^Jl,并緩慢#^^斤包封的藥劑?；蛘?，吸附的脂質(zhì)體可被呑喧性細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)吞作用^脂質(zhì)體脂質(zhì)會(huì)在^S^內(nèi)被降解而釋放所包封的藥物(Scherphofdd,^"汰7V.EJaw;fc"6:368(1985))。在靜脈內(nèi)給藥^，小脂質(zhì)^K0.1至1.0nm)通常^J^Hi于肝Jii^脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)Jf^聶取，而大于3.0nm的脂質(zhì)體會(huì)員部沉積。可以利用這種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞優(yōu)先攝取艮小脂質(zhì)體的特性來將化學(xué)治療劑送遞到巨噬細(xì)#肝旨瘤中?？梢酝ㄟ^一些方法來繞it^斤述網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，所述方法包括用大劑量的脂質(zhì)體顆粒飽和或用藥物手^i^棒I^AW吏巨噬細(xì)胞失活(aaassei1"^""朋2:428(1984))。jJt^卜，已顯示在脂質(zhì)體膜中摻A^t脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以顯著地降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取(Allendfl/L，及VcA/抓倫/i一.Jc似7腳:133(1991);AllenC《腸c似肌5一/f,Jc似"50:9(1993))。還可以通it^L變磷脂組分或在脂質(zhì)體中插入受體或西沐，從而制名4fe向于特定細(xì)胞或器官的脂質(zhì)體。例如，已有人使用用高含量的非離子型表面活性劑制備的脂質(zhì)體iMfe向于肝臟(Hayakawa"日本專利04^244，018;Kato"d，歷M5w/A76:960(1993))。這些制劑通過下itit程制備將大豆磷脂酰膽喊、a-生育酚和乙tt氬化狄油(HCO-60)在甲醇中混合；將混^^在真空中濃縮；然后將混合物在水中重溶。已顯示^f^^^櫚,脂St^(DPPC)與大豆衍生化齒醇葡萄糖苷混合物(SG)和膽固醇(Ch)制備的脂質(zhì)體制劑可以靶向于肝li(Shimizu"/1，fiw//12決881(1997))?；蛘撸梢栽谥|(zhì)體表面結(jié)合各種乾向酉沐，例如M、*片段、糖類、維生素類和#^蛋白。例如，可以用支鏈型半專m脂類衍生物修飾脂質(zhì)體，以使其耙向于脫唾液酸糖蛋白(半孝Ut)受體，該受體專一iik^肝臟細(xì)胞的表面表達(dá)(KatoandSugiyama，CWt及ev.Tto.Gwrie/"輛":287(1997);Murahashi"A，尸/^r肌5//120:259(1997))。類4她，Wu"d，He/witotogv27:772(1998)中已證明，^J1脫唾液録球蛋白才封己脂質(zhì)體可以減短脂質(zhì)體的血漿半衰期，并^^提高肝細(xì)m脫唾^^球蛋白標(biāo)記的脂質(zhì)體的攝取。另一方面，可以通過預(yù)先注射脫唾液g球蛋白來抑制含有支鏈型半專Ut脂類衍生物的脂質(zhì)體在肝臟中的累積(MurahashiCdl，5"汰20:259(1997))。聚烏頭酸化(polyaconitylated)人類血清清蛋白脂質(zhì)體提供了^J旨質(zhì)體靶向于肝細(xì)胞的另一種手^(Kamps"Phc:7Virt，/爿awjtSci94:1168197(1997))。此外，Geho等人的美國專利No.4，603，04禍?zhǔn)隽艘环N定向于肝細(xì)胞的月旨質(zhì)體嚢泡i!Bt系統(tǒng)，該系統(tǒng)特務(wù)性針對與肝臟的特化代謝細(xì)Jf^目關(guān)的肝膽管受體。在一種更常用的組織靼向手段中，用特異性針對目標(biāo)細(xì)J!&Ji^達(dá)的配體的生物素化抗體對目標(biāo)細(xì)胞J^fffi標(biāo)記(Harasym"""爿咖.Dmg及ev.":99(1998))。在游離抗^^#漿中清除^,給予鏈親^^綴合的脂質(zhì)體。在另一種方法中，直^P耙向絲連接到脂質(zhì)體上(Harasym&d，DmgZ)e//v.紐":99(1998))。可以<^標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)微包封技術(shù)將多#抗體包封在脂質(zhì)體內(nèi)(參見例如，AndersonC《/附附肌3i:1099(1981);Anderson《Cii"cer50:1853(1990)和CohenC《歷oc/r/肌歷—Jc似/船:95(1991);丄—柳erec^iwtow，第2版，VoLm，Gregoriadis(編著)，第317頁，Ahing等人的"PreparationandUseofLiposomesinImmunologicalStudies"(CRCPress1993);Wassefd"/:，Me欲.五"g;/wMiW:124(1987))。如上所述，可用于治療的脂質(zhì)體可含有多種組分。例如，脂質(zhì)體可含有聚乙二醇的脂類衍生物(Allendfl"爿c似7J50:9(1993))?？梢栽O(shè)計(jì)可降解的聚楊郷來##治療性蛋白較高的全身水平。4^1例如下述的可降解聚合物來制備，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、^^、酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚^，其中蛋白質(zhì)^^t捕獲在聚^^中(GombotzandPettit，歷^wi乂"g"te0^饑6:332(1995);/),MgDe//vj^sterns,RanadeandHollinger(編著)，第51-93頁，Ranade的"RoleofPolymersinDrugDelivery"(CRCPress1995);外她/"Dd/vciy:i^拜'cfl/加fems，Sanders和Hendren(編著)，第45-92頁，Roskos和Maskiewicz的"DegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDelivery"(PlenumPress1997);Bartus"i，5^腳2《i:1161(1998);PutneyandBurke，7V"似fe5/她cA朋/flgy76:153(1998);Putney,O/zr.C^p/".Cfee肌必/oA2:548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的納^M可以作為用于靜脈內(nèi)iHit治療性蛋白的栽#<>#^見例如，Gref""，及》tecA朋/L70:167(1997))。本發(fā)明還考慮到了具有H7A和/或IH7F結(jié)合活性的經(jīng)化學(xué)修飾的多肽，例如IL-17RC或IL-17RC/IL^17RA科、同二聚體、異二聚M多聚體形式的可溶性受體，其中所述所述受體為一種如上所述地與聚合物相連接的多肽。本領(lǐng)域技^A員也可以如下^X^/斤ii^設(shè)計(jì)其他劑型，所itiL棘例如，AnselandPopovich，JP/ra/TimceM^i/F(9/ms朋"/Sy他附s1，第5版(Lea&Febiger1990)，Gennaro(ed.)，及e附/"^to"'si%"miace"/fca//SWe"m1，第19版(MackPublishingCompany1995)，和RanadeandHollinger，/)，1^//，&彌微(CRCPress1996)。例如，藥物組#可以以試劑盒的形式4^供，所述試劑盒包括裝有一種本發(fā)明的可溶性多肽的容器。治療性多肽可以以用于單次或多次劑量的可注射溶液的形式提供，或者以可在注射前重溶的無菌粉末形式提供?；蛘?，這類試劑盒可包括一個(gè)用于給予治療性多肽的干粉噴射器、液體氣溶J!^L生器或噴霧器。這類試劑盒還可包括關(guān)于所述藥物組合物的適應(yīng)癥和^^^方法的文字信息。此外，這類信息可以包拾^下聲明，聲明已知對IL"17RC或IL-17RA過敏的患者禁用所iil且^L含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組合物可以以液體形式、氣皿形式或固體形式提供。液體形式的實(shí)例為可注射溶液、氣溶膠、滴劑、局部用溶液和口服懸液。示例性的固體形式包括膠嚢、片劑和控，式?？蒯屝问降膶?shí)例為微量滲透泵和植入物(Bremer"丑/ofec/wiM10:239(1997);Z)eftvCTj^ste附s，Ranade和Hollinger(編著)，第95-123頁，Ranade的"ImplantsinDrugDelivery"(CRCPress1995);iV她/"De/Zve/j:i%"/cfl/分他ms，Sanders和Hendren(編著)，第239-254頁，Bremer等人的"ProteinDeliverywithInfusionPumps，，(PlenumPress1997);iVvte/wDe//vw加tems，Sanders和Hendren(編著),pages93-117頁,Yewey等人的"DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant"(PleiiumPress1997))。^fe固體形式包括乳劑、糊劑和^M^部應(yīng)用形式等等。脂質(zhì)^^供了一種通過以下給藥途徑將治療性多l(xiāng)iUllill至受試者的方法靜脈內(nèi)、艦內(nèi)、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、皮下，或口月峰藥、^A^藥或鼻內(nèi)給藥。脂質(zhì)體是由被脂質(zhì)雙層包圍的一個(gè)或多個(gè)水性區(qū)室組成的微嚢(總體參見，Bakker-Woudenbei^"/C7/汰廁cra6/oA/"yfecAD/&72(SW/i/i/l":S61(1993);Kim，D，斬:618(1993)和ZV"gZ)e/A^加fe鵬，Ranade和HoIlinger(編著)，第3-24頁,Ranade的"Site"Spec迅cDrugDeliveryUsingLiposomesasCarriers"(CRCPress1995))。脂質(zhì)體在組成上與細(xì)皿類似，因此脂質(zhì)體可以用于安全*藥并且是可生物降解的。根據(jù)制備方法的不同，脂質(zhì)體可為單層的或多層的，脂質(zhì)體的直徑大小可為0.02nm至l(Him以上。脂質(zhì)體中可包封多種藥物分配于脂雙層中的疏水性藥物和分配于內(nèi)部水14空間中的親水性藥物(參見例如,Machy"A，丄—sw附es/"O//5/ofo狄爿""i%<w7Mflco/o|gy(JohnLibbeyl987)和Ostro""/l，爿附er/cfl"/./fosp.尸/wir/M^6:1576(1989))。Jt^卜，還可以通過改變脂質(zhì)體的大小、脂雙層的數(shù)目、液體組分以及改變脂質(zhì)體的荷電特#表面特性，從而控制被包封藥物的治療利用度。脂質(zhì)體可吸附在M所有類型的細(xì)l&Ji，并緩慢#^^斤包封的藥劑?；蛘撸降闹|(zhì)體可被吞喧性細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)吞作用^脂質(zhì)體脂質(zhì)會(huì)在^SI^內(nèi)被降解而釋放所包封的藥物(Scherphofd"，^i汰iV丄/4owiW6:368(1985))。在靜脈內(nèi)給藥^，小脂質(zhì)體(0.1至1.0nm)通常^i^于肝li^脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)J&^取，而大于3.0nm的脂質(zhì)體會(huì)M部J5L^。可以利用這種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞優(yōu)先攝:^小脂質(zhì)體的特性來將化學(xué)治療劑送遞到巨噬細(xì)#肝旨瘤中。可以通過一些方法iM&it/斤述網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，所i^r法包:^用大劑量的脂質(zhì)體顆粒^^或用藥物手^i^擇'I^iib使巨噬細(xì)胞失活(Claassen""/L，爿c似朋2:428(1984))。jtb^卜，已顯示在脂質(zhì)體膜中摻A^脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以顯著地降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取(AllenW5/oc似肌5—一.Jc似M幼:133(1991);AllenC《歷ocA/抓及V//rj^.^c似U5&9(1993》。還可以通過改變磷脂組分或在脂質(zhì)體中插入受體或配體，從而制^Hfe向于特定細(xì)胞或器官的脂質(zhì)體。例如，已有^U吏用用高含量的非離子型表面活性劑制備的脂質(zhì)體棘向于肝臟(HayakawaW"，日本專利04-244，018;Kato"flA，5nZ/:i6:960(1993))。這些制劑通過下述過程制備將U磷脂it4a喊、a-生育酚和乙M氫化E^油(HCO-60)在甲醇中混合；將混合物在真空中濃縮；然后將混合物在水中重溶。已顯示使用1櫚,脂酰膽堿(DPPC)與大豆衍生化甾醇葡萄糖苷^^(SG)和膽固醇(Ch)制備的脂質(zhì)體制劑可以耙向于肝斷Shimizu""，5wZ/:，:881(1997))?；蛘?，可以在脂質(zhì)體表面結(jié)合各種耙向配體，例如抗體、抗體片段、糖類、維生素類和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。例如，可以用支鏈型半享Ut脂類衍生物修飾脂質(zhì)體，以使其耙向于脫唾液酸糖蛋白(半享Ut)受體，該受體專一^肝臟細(xì)胞的表面表ii(KatoandSugiyama，CWtiev.7%er.C"/rferSy議74:287(1997);Murahashi"說M/Vmr機(jī)20:259(1997))。類似地，WuCa/L,〃e/witotog);27:772(1998)中已證明，^^l脫唾液赫球蛋白才朽己脂質(zhì)體可以減短脂質(zhì)體的血漿半衰期，并^J^提高肝細(xì)l^t脫唾液^球蛋白標(biāo)記的脂質(zhì)體的攝取。另一方面，可以通過預(yù)先注射脫唾^^臺(tái)球蛋白來抑制含有支鏈型半孚m脂類衍生物的月旨質(zhì)體在肝臟中的累積(Murahashi"fl/L,歷o/L，:259(1997))。聚烏頭酸44^v類血清清蛋白脂質(zhì)^44供了^J3旨質(zhì)^向于肝細(xì)胞的另一種手段(Kamps"d，iVwiVfl/，/爿c"d&iW:11681(1997))。此夕卜，Geho等人的美國專利No.4，603，04機(jī)述了一種定向于肝細(xì)胞的脂質(zhì)體嚢泡iMit系統(tǒng)，該系統(tǒng)特異性針對與肝臟的特化代謝細(xì)船目關(guān)的肝膽管受體。在一種更常用的組織靶向手段中，用特異性針對目標(biāo)細(xì)^Ji^達(dá)的配體的生物素化抗體對目標(biāo)細(xì)胞^ii^^標(biāo)記(Harasym^rfuZ)mgZ)e//v.及w.":99(1998))。在游離抗^fl^L從血漿中清除之后，給予鏈親和素綴合的脂質(zhì)體。在另一種方法中，直M耙向^^連接到脂質(zhì)體上(Harasym"/1，爿r/u"""gM/v.紐32:99(1998))?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)微包封技術(shù)將本發(fā)明的可溶性多肽包封在脂質(zhì)體內(nèi)(參見例如，Anderson《/"yfecA/附腳汰3i:1099(1981);AndersonCVi"cc50:1853(1990)和CohenC歷oc/r/肌jftfdi:95(1991);rec/^fogv，第2&第m巻Gregoriadis(編著)，第317頁，Alving等人的"PreparationandUseofLiposomesinImmunologicalStudies"(CRCPress1993);Wassef""A，五"gww^"9:124(1987))。如上所述，可用于治療的脂質(zhì)體可含有多種組分。例如，脂質(zhì)體可含有聚乙二醇的脂類衍生物(Allen"及Vc似肌W5仇9(1993))。可以設(shè)計(jì)可降解的聚#1來絲治療性蛋白較高的全身水平。4M例如下述的可降解聚合物來制備微球，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、聚原酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚合物，其中蛋白質(zhì)^L捕獲在聚^^中(GombotzandPetti仁itoow/"gflteOre抓6:332(1995);Z)e/iv^y分ste/MS，Ranade和Hollinger(編著)，第51-93頁，Ranade的"RoleofPolymersinDrugDeIivery，，(CRCPress1995);iVote/wDeftVeij:i^拜'cfl/爭tems，Sanders和Hendren(編著)，第45-92頁，Roskos和Maskiewicz的"DegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDeIivery，，(PlenumPress1997);BartusC"A，5We"ce2W:1161(1998);PutneyandBurke，iV"/"w歷她di"o/柳76:153(1998);Putney,Op/汰Or微5io/:2:548(1998)),聚乙二醇(PEG)包被的納米顆粒&可以作為用于靜脈內(nèi)送遞治療性蛋白的載體(參見例如，Gref"《泡艦哉167(1997))。本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以如下述文獻(xiàn)所述地設(shè)計(jì)其他劑型，所述文獻(xiàn)例如,AnselandPopovich,尸/^r鵬ce"/fcfl/Z)os"geFwms朋"De//vy分他/ws，第5版(Lea&Febiger1990);Ge皿aro(編著)，及柳/wgtow's尸/f"r應(yīng)m/to/5We"ces，第19版(MackPublishingCompany1995)和RanadeandHoUinger，Z>/*"g/>e//ve/3;^stemy(CRCPress1996)。本發(fā)明考慮了本發(fā)明的可溶性多JliU且^，以及包括本文所述的相同多肽的方法和治療用途。這類組^還可包M體。所述載體可為常規(guī)的有機(jī)載體或無機(jī)載體。載體的實(shí)例包括水、緩沖溶液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、麻油和玉米油等等。K)4^基因小鼠的制備可對轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因工程組，以使其在所有組織中it^達(dá)IH7F、IL-17A、IL-17RA或II^17RC基因，或^l且織特異'Iiil組織優(yōu)先性調(diào)控元件的控制下ii^達(dá)IL-17F、IL-17A、IL"17RA或IL-17RC基因?？梢允褂眠@些it^達(dá)產(chǎn)物來表征由it^達(dá)導(dǎo)致的表型，并且該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以作為因過量的IL-17F、IL-17A、IH7RA或IL"17RC導(dǎo)致的人類疾病的模型。it^JiJi述任一產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因小鼠也可以作為模型生物反應(yīng)器，用于生產(chǎn)H7RA或IL"17RC，例如在較大動(dòng)物的乳或血液中生產(chǎn)任一種本發(fā)明的可溶性多肽。制備轉(zhuǎn)基因小鼠的方法是^U頁域技仏員乂i^p的(參見例如，OverexpressionandKnockoutofCytokinesinTransgenicMice,Jacob(編著)，第111-124頁，Jacob的"ExpressionandKnockoutofInterferonsinTransgenicMice"(AcademicPress,Ltd.1994);MonasterskyandRobl(編著)，StrategiesinTransgenicAnimalScience(ASMPress1995)和GeneExpressionSystems:UsingNaturefortheArtofExpression,Fernandez和Hoeffler(編著)，第367曙397頁，Abbud和Nilson的"RecombinantProteinExpressioninTransgenicMice，，(AcademicPress,Inc.1999))。例如，一種制備表達(dá)H7RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法可以使用有生育能力的成年雄鼠(種鼠)(B6C3fl，2-8月aconicFarms,Germantown，NY))、切除輸精管的雄鼠(絕育鼠)(B6D2fl，2"8月斷aconicFarms))、青春期前的有生育能力的雌鼠(^0(B6C3fl，4-5周斷aconicFarms))和成年的有生育能力的雌鼠(受體)(B6D2fl，2-4月斷aconicFarms))。4W^it應(yīng)培養(yǎng)一周，然后以大約8IU/小鼠的量腹膜內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素(SigmaChemicalCompany;StLouis,MO)，然后在46"47小時(shí)后以8IU/小鼠的量雌內(nèi)注射人類絨^J^促性^L素(hCG)(Sigma)以誘導(dǎo)超排卵。在激素注射^使供沐與種鼠交配。通常在hCG注射后13小時(shí)內(nèi)iLl排卵。通it^交配次日早Ji^陰道塞的存在以確認(rèn)交配完成。在外M術(shù)鏡(surgicalscope)下收集受精卵。收集輸卵管并將其中的卵放在含有透明質(zhì)酸斷Sigma)的尿分析栽玻片上。將卵用透明質(zhì)酸酶洗滌一次并用Whitten，sW640培養(yǎng)基洗滌兩次(如例如MeninoandO，CIaray，Biol.R印rod.77:159(1986)和Dienhart^Downs，Zygote4:129(1996)中所述)，所述培養(yǎng)基已在5%C02、5%02和90%N2且371C的條件下孵育過。然后將卵儲(chǔ)存于37rV5。/oC02培養(yǎng)箱中直至用于微注射。4^^有IL-17RC編碼序列的10至20^:克的質(zhì)粒DNA線性化、皿純化并重懸于10mMTris-HCl(pH7.4)、0.25mMEDTA(pH8.0)中，4吏其終濃Jl^5-10納;L/微升，以用于微注射。例如，IH7RC編碼序列可編^^"有SEQIDNO:2的M^^21至452的多肽。將質(zhì)粒DNA微注射至收集的卵中，所述卵被置于一滴W640培養(yǎng)基中并用溫?zé)岬慕?jīng)C02平衡的礦物油覆蓋。將DNApA/V注射針頭中(從0.75mmlD、lmmOD的硼^C璃毛細(xì)管中拉出)，并注射至每個(gè)卵中。用注射針頭穿透每個(gè)卵，ii^一個(gè)或兩個(gè)單倍體原核中。將皮升量級的DNA注射至原核中，在不接觸核仁的情況下將注射針頭抽出。重復(fù)這一步驟直^J"所有的卵進(jìn)行注射。將微注射成功的卵^^至含有預(yù)充氣的W640培養(yǎng)基的器官組織培養(yǎng)亞中，婦7t:/5V。C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過l第二天，將雙細(xì)Jte胎絲至假懷孕的受體中。在與切除輸精管的絕育鼠交配后存在交配塞的小鼠被識別為受體。麻醉受體并刮去其后背左側(cè)的毛，將其置于外科顯微鏡下。在^JUi切一小口，，開位于J^P和膝t間的腹部中間區(qū)域的肌肉壁，所述區(qū)域*架、后背(saddle)和后M^斤P艮定。將生殖器官外置于一個(gè)小的外^^術(shù)布上。^J3旨肪墊在手^r上捧故，并^""個(gè)嬰JL血管鑷(Roboz，Rockville，MD)與脂肪墊相連街并掛在小鼠的后背上，以防止器官滑回體腔。含有礦物油并在^交^^有W640和氣泡的細(xì)移液管，將12-17*康的來自于前一天注射的雙細(xì)l^胎轉(zhuǎn)移至受體體內(nèi)。在受體體內(nèi)固定一個(gè)膨脹的安^(ampulla)，使輸卵管保持在"^和粘液嚢之間，并用28g針頭在輸卵管接近粘液嚢的地亨劃一劃口，注意不要?jiǎng)澠芧或粘液嚢200880017391.0說明書第100/165頁將移液管插入輸卵管的劃口中并^A^胎，允許第一個(gè)氣^A^液管中逸出。將脂肪墊輕^y^^j度，m生殖器官滑回體腔。用^縫合jt^壁并用縫合夾夾住m。將小鼠置于371C的載物片加溫器上至少加熱四個(gè)小時(shí)使其將受體^J"地放回籠中，使其M19-21天。在出生后，g昏19-21天時(shí)斷奶，將斷奶后的小鼠掩性別分別飼養(yǎng)在不同的籠中，用干凈的剪刀剪下小鼠尾部0.5cm作為活;^樣;m用于基因分型)。例如使用QiagenDneasy試劑盒，按照廠商的說明用斷尾中制名^基因組DNA。佳月PCR分析基因紐LDNA，所述PCR的引物被設(shè)計(jì)為可擴(kuò)增IL"17RC基因或勤目同質(zhì)粒中$j入的可篩選標(biāo)記基因。在確認(rèn)動(dòng)物為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物之后，通過將轉(zhuǎn)基因雌鼠與野生型雄鼠一^飼養(yǎng)或?qū)⑥D(zhuǎn)基因雄鼠與一只或兩只野生型雌鼠一起飼養(yǎng)，使其與近親品系回交。在幼鼠出生和斷奶后，按性別分離并斷^Ci^f亍基因^^型。、為檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因在活體動(dòng)物中的表達(dá)，進(jìn)行了部分肝切除術(shù).在上腹部緊挨著劍狀軟骨(zyphoidprocess)下方進(jìn)行外科準(zhǔn)備。佳月無菌技#胸骨下切一個(gè)L5-2cm的小切口，將肝臟左側(cè)葉外置。4^j4-0絲線在下葉處打結(jié)，使下葉露在體齢卜。使用無創(chuàng)鉗夾住絲線結(jié)，并在第一個(gè)結(jié)附a置另一個(gè)可吸收的Dexon(AmericanCyanamid;Wayne，N丄)的環(huán)。>^1>€1011結(jié)處^^^^^^切除，并將大約100mg的切下的flfl且織置于無菌培^m中。將切下的肝臟部分轉(zhuǎn)移至一個(gè)14ml聚丙烯圓底試管中，并在液氮中i^it冷凍，在干水上#。用^和縫合夾縫合外^術(shù)部位，在手術(shù)后將動(dòng)物籠置于37"C加熱墊Ji24小時(shí)。在手術(shù)后每天檢查動(dòng)物并在手術(shù)后7-10天移去縫合夾。使用RNA溶液雜交測定法或聚合S^i^JI^"測每只轉(zhuǎn)基因小鼠的IH7RCmRNA^J^K平。除了制備it^達(dá)IL-17F、IH7A、IL-17RA或IL-17RC的轉(zhuǎn)基因小鼠"卜，也可以對不表iiJi述4i^r基因或表達(dá)異常低的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因工程^。這種轉(zhuǎn)基因小IUC供了與缺少IH7F、IL^17A、IL"17RA或IL-17RC相關(guān)的疾病的有用模型。如上所述，可以^^I^X^因、核酶基因或夕卜部引導(dǎo)序列基因來抑制IL-17RC基因的表達(dá)。例如，為制名^[^JilL"r7RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，可m述抑制序列耙向IL-17RCmRNAo制##定基因表達(dá)異常低的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法;^本領(lǐng)J^技^A員已知的(參見例如，MethodsinGeneBiotechnology,第205-224頁，Wu等人的"GeneUndere鄰ressioninCulturedCellsandAnimalsbyAntisenseDNAandRNAStrategies,，(CRCPress1997))。104另一種制備M不表達(dá)或完全不表達(dá)IL-17RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法是產(chǎn)生這樣一種小鼠，該小鼠體內(nèi)的至少一個(gè)正常的IL-17RC等位基因被無功能的IL-17RC基因所替換。設(shè)計(jì)無功能IH7RC基因的一種方法;l將另一基因(例如一種可篩選標(biāo)記基因)插入至編碼IL-17RC的核B子中。制備這種被稱為"基因敲除小鼠"的標(biāo)準(zhǔn)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(參見例如，OverexpressionandKnockoutofCytokinesinTransgenicMice，Jacob(編著)，第111國124頁，Jacob的"ExpressionandKnockoutofInterferonsinTransgenicMice"(AcademicPress,Ltd.1994)和MethodsinGeneBiotechnology,第339-365頁，Wu等人的"NewStrategiesforGeneKnockout"(CRCPress1997))。通過下面的非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例lIH7RC基因的表達(dá)^f^J^HumanMultipleTissueBlots試劑盒(ClontechLaboratories,Inc"PaloAlto，CA)進(jìn)行RNA印跡分析。用^純化的PCR產(chǎn)物中產(chǎn)生了兩個(gè)探針。使用ZC21798(5，CGGCGTGGTGGTCTTGCTCTT3，；SEQIDNO:8)和ZC21808(5，TCCCGTCCCCCGCCCCAGGTC3，；SEQIDNO:31辨為引物制備第一個(gè)^4h^^l購自Amersham(ArlingtonHeights,IL)的Multiprime標(biāo)記試劑盒，根據(jù)廠商的說明對該探針進(jìn)#^性標(biāo)記。^fMNucTrappush柱(Stratagene，LaJolla，CA)純化該探針。，ExpressHyb(Clontech)溶液作為RNA印跡的預(yù)雜交和雜交溶液。在65t!下雜交過夜。在雜^^^1含有0.1%SDS和SSC的下a液洗滌印跡，每:^30分鐘在室溫下用2xSSC洗滌兩次，在50X:下用(UxSSC洗滌三次，在55X:下用0,lxSSC洗滌一次，以及在65X:下用O.lxSSOH次。結(jié)絲明IL"17RC基因在曱M、腎上腺、前列#肝臟組織中有很強(qiáng)的表達(dá)，在心臟、小腸、胃和氣管組織中表ii^弱。與此不同的是，在腦部、胎盤、肺部、骨骼肌、腎臟、膝腺、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、夕卜周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中沒有表iiil幾乎沒有表達(dá)。實(shí)施例2PCR溯，j^jnRNA在細(xì)胞系;feUi的分布從自培養(yǎng)的靜息細(xì)胞系和經(jīng)刺激的細(xì)胞系中純化總RNA，并才M^廠商的說明使用Qiagen(Valencia，CA)的RNeasy試劑盒，或者使用酸-苯酚純化方法(ChomczynskiandSacchi,AnalyticalBiochemistry,162:156-9，1987)純化。AgilentBioanalyzer測定一份樣本來評估RNA的質(zhì)量。如果RNA,著降解，則不能被用于隨后的第一鏈cDNA的制備。通iW—份RNA進(jìn)行PCR測定來評估是否存在污染的基因組DNA，所迷PCR的引物為zc41011(5，CTCTCCATCCTTATCTTTCATCAAC3，；SEQIDNO:32)和zc41012(5，CTCTCTGCTGGCTAAACAAAACAC3，；SEQIDNO:33)，該引物擴(kuò)增基因間的基因lJLDNA的iNi點(diǎn)。用于測定污染的基因MDNA的PCR條件如下2.5nl的10x緩沖液和0.5jdAdvantage2cDNA聚合酶混合物(BDBiosciencesClontech，PaloAlto，CA)、2ul的2.5mMdNTP混合物(AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity,CA)、2.5pl的10xRediload(Invitrogen，Carlsbad,CA)和0.5nl的20fiMzc41011和zc41012，^f^織為25fil。循環(huán)^^:如下941C20秒，(94X:20秒W0X:i分20秒)的40個(gè)循環(huán)和72X:7分鐘的一個(gè)循環(huán)。取每種AJI的產(chǎn)物各10jil進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，并檢測^Ji是否存在來自污染的基因^LDNA的PCR產(chǎn)物。如^X^到污染的基因桑JLDNA,則銅無DNA試劑(Ambion，Inc，Austin,TX)4艮據(jù)廠商的說明對總RNA進(jìn)行DNA酶降解，然后再如上所ii^4豫測。只有看起來不含有污染的基因IJLDNA的RNA才可以用于隨后的第一^^cDNA的制備。將20將來自82種人類細(xì)胞系的總RNA用水溶至98ji1，然后分為兩份49ji1的等份，^-份含有10嗎總RNA，然后將它們置于兩勤6孔PCR^L上。向每一等份中加入用于第一鏈cDNA合成的試劑(InvitrogenFirstStrandcDNASyndesisSystem,Carlsbad,CA):20nl的25mMMgCI2、10ul的10xRT緩沖液、I(HU的O.IMDTT、2jil的^dT、2ul的RNAseOut。然后向來自^—細(xì)胞系的一個(gè)等份中加A2^ll的Superscriptn反轉(zhuǎn)^，向相應(yīng)的細(xì)胞系等份中加A2fd的H20作為無反轉(zhuǎn)錄酶的陰性對照。將所有的樣M下述條降孵育25X:i0^，42匸50辨，70t;i5糾。將樣本分置于深孑L^中并用H20稀釋至1.7ml。Multipette(Saigan)^^手分多次向96孔PCR板的^""孔中分裝16.5nl的等^^樣，產(chǎn)生多個(gè)細(xì)胞系一次性PCR板，然后密封該板^^存于-20lC。這些板中的^孑lyR4^自大約100ng總RNA的第一^cDNA。將82種細(xì)胞系*于兩個(gè)板上，稱為陣列針18A和糾18B。使用多重PCR測定法在一系列的^Ji評估;tUi的第^^cDNA的質(zhì)量，PCR中使用的引物為針對兩個(gè)表達(dá)廣泛但是豐度106中等的基因CLTC(網(wǎng)M白)和TFRC(^^蛋白受體C)的引物。將網(wǎng)*白引物zc42901(5，CTCATATTGCTCAACTGTGTGAAAAG3，；SEQIDNO:34)和zc42902(5，TAGAAGCCACCTGAACACAAATCTG3，;SEQIDNO:35)，以及TFRC引物zc42599(5，ATCTTGCGTTGTATGTTGAAAATCAATT3，;SEQIDNO:36)和zc42600(5，TTCTCCACCAGGTAAACAAGTCTAC3，;SEQIDNO:37)各0.5nl，與下列試劑混合2.5jd的1(^緩沖液和0.5^1的Advantage2cDNA聚^S^^(BDBiosciencesClontech,PaloAlto,CA)、2jilW2.5mMdNTP混合物(AppliedBiosystems,，F(xiàn)osterCity，CA)和2.5fU的10xRediload(Invitrogen，Carlsbad,CA)，然后加入到陣列弁118A和陣列針18B的#-孔中。循環(huán)參lt如下94*€20秒，(94^C20^t+67X:80秒)的35個(gè)循環(huán)，以及72匸7分鐘的一個(gè)循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10nl進(jìn)行瓊脂糖凝&電泳，并通過^M對每種細(xì)胞系的+RT孔的每種特異性基因的穩(wěn)定PCR產(chǎn)物的存在進(jìn)樹分。通過PCR分析IH7RC的人類第一鏈cDNA板上的mRNA的表達(dá)，所述PCR使用的正義寡聚引物為ZC42756(5，ctetecaggcccaagtegtgctet3，；SEQIDNO:38)、反義寡聚引物為ZC42757(5，ttgtectgggggcctegtgtetcc3，；SEQIDNO:39)，^-樣本的PCR^條泮為2.5nl的10x緩沖液和0,5nl的Advantage2cDNA聚^H;^^(BDBiosciencesClontech,PaloAlto，CA)、2—2.5mMdNTP^^^(AppliedBiosystems)、2.5jil的10xRedaoad(Invitrogen，Carlsbad,CA)和0.5jd的20nM正義和反義引物。循環(huán)M如下94*C2^t，(94"Cl^j1+66匸30秒+72^1分30秒)的35個(gè)循環(huán)，以及721C7分鐘的一個(gè)循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10nl進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，絲過aM^tlL"17RC的陽'fci4達(dá)和陰錄組樹分。IL-17RCmRNA在^f^廣泛的組織和細(xì)胞類型的多種細(xì)胞系中都有廣泛的表達(dá)。特別地，IH7RC在非T細(xì)^卜周血細(xì)胞系(包括單核細(xì)胞、B-細(xì)齡髓系細(xì)胞)中有持續(xù)的表達(dá)。而且，BU17RCmRNA在來源于^J統(tǒng)的細(xì)胞系中也有確信的表達(dá)。表達(dá)IL-17RC的其他細(xì)胞系為陣列上存在的全部5種大腸細(xì)胞系。實(shí)施例34MRTPCR測^jnRNA在小鼠細(xì)胞系;^Lh的分布從自培養(yǎng)的60種靜息細(xì)胞系和經(jīng)刺激的細(xì)胞系中純化總RNA，并##廠商的說明使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy試劑盒，或者佳月酸-^S^純化方法(Chomczynski和Sacchi，AnalyticalBiochemistiy，162:156-9，1987)，或4吏用Trizol試劑的方法(Invitrogen，Carlsbad,CA)純H將來自各細(xì)胞系的5ng總RNA分置于深孔96孑UUi,向每孔中加入125fd的3MNaOAc和100nl的沉淀染^KPelletPaint)(Novagen，Madison，WI)，然后用H20將IH^P、調(diào)至1.25ml。使用Multipette(Saigan)^手分多次向96孔PCR^！的每一孔中分裝25jil的RNA混合物的等^^樣，然后再向每孔中加入75jil乙醇，產(chǎn)生多個(gè)細(xì)胞系一次性RTPCR板，然后密封該板##存于-2(^。首先將Qiagen(Valencia，CA)96孔離心機(jī)上以6000RPM離心10^K以進(jìn)行RTPCR篩選。將板倒扣在吸水紙上以除去上清液。用100nl的70。/oEtOH洗滌RNA沉淀，再以6000RPM離心5分鐘。再次除去上清液，并將^X干直至剩余的乙醇完全揮發(fā)。然后將RNA沉淀重懸于15jU的H20中。通過RTPCR來評估IL"17RCmRNA在小鼠細(xì)胞系RNA板上的表達(dá)，所述RTPCR中使用的引物為zc38910(5，acgaagcccaggtaccagaaagag3，；SEQIDNO:40)和zc38679(5，aaaagcgccgcagccaagagtagg3，；SEQIDNO:41)，每個(gè)樣本的RTPCR條件同使用PlatinumTaq試劑盒(Invitrogeii，Carlsbad,CA)的SuperscriptOne^StepPCR。循環(huán)M為48"C30分鐘的一個(gè)循環(huán)，94C2分鐘，然后是(941C15秒+551C30秒+72X:1分30秒)的35個(gè)循環(huán)，然后是72匸7分紳的一個(gè)循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10nl進(jìn)行瓊脂糖:^電泳，并通過^^tlH7RC的陽'l!^Ji^陰'MJii^flSf分。鼠類IL-17RCmRNA在一些小鼠細(xì)胞系中表達(dá)，特別是_在來源于骨髓的細(xì)胞系(包括成骨細(xì)胞系、脂肪細(xì)胞系和前脂肪細(xì)胞系)中表達(dá)。此外，小鼠IL"17RCmRNA在來自內(nèi)分泌系統(tǒng)的一些樣本中表達(dá)，例如在il^間質(zhì)細(xì)胞系、胰島細(xì)胞系和下丘腦細(xì)胞系、唾^細(xì)胞系和睪丸細(xì)胞系的樣本中^Jio實(shí)施例4;kJ^桿菌中產(chǎn)生的pIH7F的重折疊和純化A)包含體分離和pIL-17F的提取在批M酵物或m^養(yǎng)物中誘導(dǎo)菱白質(zhì)的表達(dá)，在誘導(dǎo)后將;tM桿菌培養(yǎng)肉湯置于l升的瓶中，使用Sorvall浮桶式轉(zhuǎn)頭離心機(jī)以3000RPM離心。使用含200mMNaCl和5mMEDTA的50mMTris^沖^(pH8.0)洗滌細(xì)胞^ti定以除去所有的肉湯污染物，直至上清清為止。然后將細(xì)胞沉淀懸浮于冰冷的^J^緩沖液(50mMTrispH8.0;5mMEDTA;200mMNaCl;10。/o蔗糖(w/v);5mMDTT;5mM苯甲脒)中，使其在600nm處的光密度為10"20光密度單位。然后將該懸液在水冷務(wù)降下用APV2000實(shí)驗(yàn)室勻漿器以8500-9000psi勻^3次，產(chǎn)生破碎的細(xì)胞，物。在4X:下，以20000xG離心細(xì)胞，物l小時(shí)，以回收不可溶的部^(包^9。將20000xG離心所得的包^^5Cit稱重后重懸于洗滌緩沖^(50mMTrispH8，含有200mMNaCl、5mMEDTA、5mMDTT、5mM苯曱脒)中，每亳克包含體^J^10ml洗滌緩沖液。通過^^OMNI國際通用轉(zhuǎn)子定子狄動(dòng)器(internationalrotorstatorgenerator)i^行勻漿得到均勻的^lt系。然后將該懸液在41C下以2,0xG離心30分鐘。重復(fù)洗滌3-5次直至上清^"清為止。將經(jīng)過洗滌的最終^tJ定溶解于含7M鹽酸胍的40mMTris緩沖液(pH8，含有0.11\1皿酸鈉和0.02]\1連四^^鈉)中。在4X:下緩慢攪拌過夜，進(jìn)行提取和魏^)^反應(yīng)。將所得的粉紅色溶絲4t:下以35000xG離心l小時(shí)，然后取澄清的含有可溶性pIL-17r的上清液以0.45nmit^。B)pIL"17F的重折疊過程將溶解的M酸解的pIL^7F逐滴加入冰冷的重折疊緩沖液中稀釋以進(jìn)行重折疊，所述重折疊緩沖液含有55mMMES、10.56mMNaCl、0.44mMKCl、0.055%PEG(3400K)、l.lmMEDTA、20%甘油、0.5M鹽^、0.75M的精氨酸以及比例為l:l的谷胱甘狀的氧^ii原對(lmMGSH:lmMGSSG)。用HCl將重折疊緩沖液的pH調(diào)節(jié)至6.5,并加入pEL"17F至終濃度為100ng/ml。在稀釋后，將混<^在冷室中緩慢攪拌72小時(shí)。C)產(chǎn)物回#純化使用實(shí)驗(yàn)室M^的TFF系統(tǒng)和10kDa截留膜，將重折疊的pIL"17F,10倍。然后使用0.4錄米的膜過濾，通妙入乙酸將pH調(diào)節(jié)至5.1。然后使用經(jīng)it50mMpH5.1的乙酸緩沖液平衡的PharmaciaSPFastFlow柱，通過陽離子交換色譜捕獲經(jīng)pH調(diào)節(jié)的物質(zhì)。通過將pIH7F用5倍體積的平im沖液以流速為19011/小時(shí)在線(1111^)稀#^行上柱。上述稀釋降低了離子強(qiáng)度，使得目標(biāo)蛋白與M可以有,結(jié)合。在上樣完^，用平m沖液將柱洗滌至基線吸收。然后用^0.41\1~3(:1的50111]\1乙酸緩沖^(1)115.1)洗滌柱，然后再用^0.4M-1.5MNaCl的50mM乙酸緩沖^(pH5.1)以5CV的梯度艦結(jié)合的蛋白。通i^t、^^分的SDSPAGE分析表明，用約lMNaCl、皿的蛋白質(zhì)中有大約85%為二聚體?；靆^有pIL"17F的級分，并在Amicon攪拌池中用10kDa截留超濾膜濃縮所述級分，制備的級^后通過分子篩色謙進(jìn)行純化并更換緩沖液。D)W篩緩沖^Jl換和制劑配制將濃縮的陽離子混合物(體積為CV的3-4o/。)以30cm/小時(shí)的流速注射到PharmaciaSuperdex75分子篩柱上，所i^已用含有109mMNaCl的50mM磷酸鈉緩沖^(pH7.2)平衡。將含有所述產(chǎn)物的對稱、3W^用含有109mMNaCl的50mM磷酸鈉緩沖液(pH7.2)稀釋至濃度為1mg/ml。^將pIH7F以0.2fimii^、除菌，分成等份并儲(chǔ)存于"8or;下。最終的加工產(chǎn)量為20%。實(shí)施例5哺乳動(dòng)物可溶性IL-17RC表姚建體的構(gòu)建<M編碼IL-17RC多肽(SEQIDNO:43)的DNA片段(SEQIDNO:42)、編碼mFcl(SEQIDNO:44)的DNA片紗表達(dá)載體pZMP20，通過重疊PCR和同源重組構(gòu)建了含有人類IL-17RC[L21-K451-mFcl(小鼠BALB/cji2aFc)的表幼建體。通itPCR擴(kuò)增產(chǎn)生上述片段。編碼IL-17RCL21-K451的PCR片段包括5，端的與pZMP20載體序列的優(yōu)化的組織纖溶酶原激活物前原分泌前導(dǎo)序列編碼區(qū)域重疊的部分、編碼[L21-K4511的IL-17RCI^卜結(jié)構(gòu)域，以及3，端的與mFcl編碼區(qū)域重疊的部分。PCR擴(kuò)增反應(yīng)使用了5，寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SEQIDNO:461、3，絲苷酸[TGTGGGCCCTCTGGGCTCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:47和一個(gè)在之前產(chǎn)生作為模板的IH7RC的DNA克隆。編碼mFcl的PCR片段包fe，端的與IH7RC序列重疊的部分、mFcl編碼區(qū)域以W端的與pZMP20載體的^M^t炎病毒內(nèi)核糖體iiA^位點(diǎn)區(qū)域重疊的部分。擴(kuò)增反應(yīng)使用了5，寡核苷酸[GACAAATACATCCACAAGGAGCCCAGAGGGCCCACA;SEQIDNO:48、3，寡核苷酸和一個(gè)在之前產(chǎn)生作為模fel的mFcl的DNA克隆。PCR擴(kuò)增MM如下94^;5*的一個(gè)循環(huán)，(94t:i^4中+55lC2^t十72t:3^t)的35個(gè)循環(huán)，以及72X:iO分鐘的一個(gè)循環(huán)。將PCRIl應(yīng)產(chǎn)物混合物用iy。的瓊脂糖^M進(jìn)行分離，并^^QIAquick皿GelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)v^^Ji4^取與預(yù)期大小相符的DNA片段。通過重疊PCR將兩個(gè)PCR片^^接在-"^。兩個(gè)片段的^J&提取物各取大約ljd，通過PCR擴(kuò)增反應(yīng)連接，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)中使用了5，寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SEQIDNO:46和3，寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTTACCCGGAGTCCGGGA;SEQIDNO:49。^J^的PCR糾如下94X^5分紳的一個(gè)循環(huán)，(94X:i^K55匸2^^+72lC3^l0的35個(gè)循環(huán)，以及72X:i0分沖的一個(gè)循環(huán)。將PCR^應(yīng)產(chǎn)物混合物用l。/o的瓊脂糖^^進(jìn)行分離，并使用QIAquick很GelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.2870攀:^Ji提取與插入物大小相符的DNA片段。質(zhì)粒pZMP20為一種哺乳動(dòng)物表達(dá)栽體，該栽體中含有一個(gè)表達(dá)盒、來自^M^t炎病毒的內(nèi)核糖^iiAiL件、^EJ^膜結(jié)構(gòu)域的C端截短的CD8^卜結(jié)構(gòu)域、大腸桿菌復(fù)制起泉、哺乳動(dòng)物可篩選標(biāo)^4達(dá)^N^包^SV40啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和復(fù)制起泉，DHFR基因和SV40終止子);以及在釀酒酵母中進(jìn)行篩選和復(fù)制所需的URA3和CEN-ARS序列，所i^達(dá)盒中具有下逸亭列MPSV啟動(dòng)子、用于在酵母重組之前進(jìn)行線性化的Bgin位點(diǎn)、otPA信號肽序列。在將質(zhì)粒pZMP20與^J&提取的IL-17RC[L21-K451I-mFcl的PCR片^^酵母中進(jìn)行同源重組之前，^J^Bgin消化該質(zhì)粒。將100fd的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與10fil的IU7RC[L21-K451-mFcl插入物DNA和100ng的經(jīng)Bgln消化的pZMP20栽糾目混合，然后將該^^轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿:j沐中。對酵母/DNA^^進(jìn)行電^t,4^1的電源(BioRadLaboratories,Hercules，CA)設(shè)置為0,75kV(5kV/cm)、Qoohm和25jiF。向杯中加入600jil的1.2M山梨醇，然后分別將100nl和300nl等^^樣的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并在30匸下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊;^Ji的Ura+酵母轉(zhuǎn)^f沐重懸于lmlH20中，短暫離心以沉淀酵母細(xì)胞。細(xì)胞沉淀重懸于0.5ml的裂解緩沖液(2o/oTritonX-IOO、1%SDS、100mMNaCl、lOmMTris、pH8.0、lmMEDTA)中。向裝有250nl經(jīng)酸洗滌的玻璃珠和300nl苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500nl裂解;^^，凝渦振蕩3^K在Eppendorf離心機(jī)上以最大4^t離心5^K取300^11^目##至新管中，加入600jil乙醇以沉itDNA，然后以最大#^離心30*。倒出上清液并用lml的70。/o乙醇洗滌J5^定。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30jil含lmMEDTA的IOmMTris(pH8.0)中。使用5jd酵母DNA制品和50nl;^桿菌細(xì)Jlfeii行電擊感受態(tài);^桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2,0kV、25jiF和400ohm對細(xì)Ji&^行電Jl^t。在電穿孑L^，加入lmlSOC(2。/。Bacto預(yù)胰蛋白胨(D股o，Detroit,MI)、0.5%酵母提取物(Dtfco)、lOmMNaCl、2.5mMKCl、10mMMgCl2、10mMMgSO4和20mM葡萄糖)，然后分別^50nl和200nl等^^洋的細(xì)自于兩^LBAMP板(LB肉湯(Le皿ox)、1.8。/。Bacto預(yù)瓊脂(Dtfco)、100mg/L^千青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DNA克隆的插入物進(jìn)行序列分析并選擇含有正確序列的一個(gè)克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA)，,廠商的說明進(jìn)行;k^MM粒DNA的分離。實(shí)施例6表達(dá)IL"17RC-CEE、IL"17RC-CHIS和IL-17RC-CFLAG的哺乳動(dòng)物可溶性IL-17RC表ii^j建體的構(gòu)建使用編碼IL-17RC[L21-K451]的DNA片段(SEQIDNO:42)和表達(dá)載體pZMP20,通itPCR和同源重組構(gòu)建了含有人類IH7RC[L21-K451和C末端標(biāo)簽的表i^J建體，所述C末端標(biāo)簽為Glu-Glu(CEE)標(biāo)簽、六組氨酸(CfflS)絲或FLAG(CFLAG)絲。編碼IL-17RCCEE的PCR片段包括5，端的與pZMP20載體序列的優(yōu)化的組織纖溶酶原激活物前原分泌前導(dǎo)序列編碼區(qū)域重疊的部分、編碼[L21-K451的IL"17RCJ!^卜結(jié)構(gòu)域，Glu-Glu標(biāo)^^序列(GluGluTyrMetProMetGlu;SEQIDNO:53),以W端的與pZMP20載體的^M^t炎病毒內(nèi)核糖^A^位點(diǎn)區(qū)域重疊的部分。PCR擴(kuò)增反應(yīng)使用了5，寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SEQIDNO:46、3，寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTCCATGGGCATGTATTCTTCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:50和一個(gè)在之前產(chǎn)生作為;^的IH7RC的DNA^隆。PCR擴(kuò)增^jL^Hf如下94"C5^t的一個(gè)循環(huán)，(94X:i^K55lC2^11+72"3^|0的35個(gè)循環(huán)，以及72ni0分紳的一個(gè)循環(huán)。將PCR^產(chǎn)物混合物用1%的瓊脂糖皿進(jìn)行分離，并使用QIAquickmGelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)從^MJi提取與預(yù)期大小相符的DNA片段。在將質(zhì)粒pZMP20與ai^提取的IL47RCCEE的PCR片fefc酵母中進(jìn)行重組之前,^J^Bgln消化該質(zhì)粒。將IOOjil的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與lOfil后將該:^^#^多至0.2011電穿孔杯中。對酵母/DNA^^進(jìn)行電脈沖，朋的電源(BioRadLaboratories,Hercules,CA)的i殳置為0.75kV(5kV/cm)、ooohm和25jiF。向杯中加入600^11的1.2]\1山梨醇，然后分別將100nl和300nl等^^的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并在30X:下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊^Ui的Ura+酵母轉(zhuǎn)^fg重懸于lmlH20中，短暫離心以沉淀酵母細(xì)胞。細(xì)J3&;冗淀重懸于0.5ml的狄緩沖^(2o/oTritonX-IOO、1%SDS、100mMNaCl、10mMTris、pH8.0、lmMEDTA)中。向裝有250jil經(jīng)酸洗滌的玻璃3^300jil苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500jil裂解混合物，旋渦振蕩3分鐘，在Eppendorf離心機(jī)上以最大^it離心5分鐘。和OOnl斜目絲至一憤管中，加入600pl乙醇以沉^DNA，然后以最大餘i復(fù)離心30分鐘。倒出上清液并用1ml的70%乙醇洗滌^5D定。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30fil含lmMEDTA的10mMTris(pH8,0)中。佳J^5jil酵母DNA制品和50nl;^桿菌細(xì)胞ii行電擊感受態(tài)^桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2.0kV、25jiF和400ohm對細(xì)胞ii行電脈沖。在電穿孑L^,加入lmlSOC(2。/oBacto麗胰蛋白胨(Difco，Detroit,MI)、0.5%酵^:提取物(Dtfco)、10mMNaCl、2.5mMKCl、10mMMgC12、10mMMgSO4和20mM葡萄糖)，然后分別^50nl和200nl等^#的細(xì)胞鋪于兩塊丄8AMP板(LB肉湯(Lennox)、1.8。/oBacto頂瓊脂(Dtfco)、100mg/LH節(jié)青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DNA克隆的插入物進(jìn)行序列分析并選擇含有正確序列的一個(gè)克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA),，廠商的說明進(jìn)行;t^t粒DNA的分離。使用與上述過斜目同的過程制備帶有C末端組氨酸標(biāo)簽(組成為GlySerGlyGIyHisHisHisHisHisHis(IL"17RCCfflS;SEQIDNO:51))或C末端113FLAG標(biāo)簽(組成為GlySerAspTyrLysAspAspAspAspLys(IL"17RCCFLAG;SEQIDNO:52))的IL-17RC。為制4^這些構(gòu)^t體，3，絲苷酸不再使用SEQIDNO:50，而是使用3，寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:54來產(chǎn)生IH7RCCHIS，或使用3，寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:55]來產(chǎn)生IL"17RCCFLAG。實(shí)施例7表達(dá)IL畫17RC國mFcl融^^白和IL-17RC-CEE、IL-17RC國CfflS和IH7RC隱CFLAGC末端標(biāo)記的蛋白的可溶性IL-17RC受體表，建體的轉(zhuǎn)染和表達(dá)將三個(gè)系列的每種可溶性IU7RC融合表幼建體或具有標(biāo)簽的可溶性H^17RC表^建^^^200ng分別用2(KMMi的PvuI在37X:下消4。小時(shí)，用異丙醇沉淀并在1.5mL的Microfuge管中離心。棄去上清液得到J5^定，將^^定用1mL的70。/c乙醇洗滌并在室溫下放置5分鐘。用Microfiige離心機(jī)將管以14000RPM離心10分鐘，棄去上清液得到沉淀。然后在無菌環(huán)境下將沉淀重懸于750ji1的CHO細(xì)胞組織培養(yǎng)基中，在60X:下培養(yǎng)30分鐘，然后冷卻至室溫。三個(gè)管中每管離心得到大約5xl()6個(gè)CHO細(xì)胞，然后將細(xì)胞用DNA培養(yǎng)U^液重懸。將DNA/細(xì)胞)^^置于0.4cm內(nèi)徑(gap)的杯中，^^I下列^lt進(jìn)行電穿孔950jiF、高電容、300V。取出杯中物質(zhì)，》齡，并用CHO細(xì)JJ^i且織培養(yǎng)基稀釋至25mL，置于125mL^阮中。然后#^￡于振蕩器上的培養(yǎng)箱中，以120RPM在37匸、6%0:02糾下培養(yǎng)。通it^增量加入甲氨喋"^(MTX)J^OOnM，然后至ljiM，以對CHO細(xì)Jffei^行營養(yǎng)篩選。通過蛋白質(zhì)印跡確認(rèn)融M白或具有標(biāo)各的蛋白的4Ji，然后將CHO細(xì)^^擴(kuò)大培養(yǎng)并Jim^于蛋白純化。實(shí)施例8可綠IH7RC的表達(dá)^JUIL-17RC一Tbx的DNA片段和表M體pZMP40，通過同源重組構(gòu)建含有IL-17RC-Tbx-C(Fc9)(SEQH)NO:64)的表達(dá)質(zhì)粒。使用引物zc44531和zc44545通itPCR擴(kuò)增產(chǎn)生所述片段。PCR片to-17RC—Tbx含有部分IH7RCJ^卜結(jié)構(gòu)域編碼區(qū)域，4U之前產(chǎn)生的IL-17RC克隆作為^fe制備所述區(qū)域。所述片段包括5，端的與pZMP40栽體序列的otPA編碼區(qū)域重疊的部分、IL"17RC區(qū)與SEQIDNO:2的^J^酸^J^21至451)、連接物序列、^lSI^割位點(diǎn)，以及3，端的與pZMP40載體的Fc9編碼區(qū)重疊的部分。所用PCR擴(kuò)增MM如下94X:5分鐘的一個(gè)循環(huán)，(94匸l^t+55"C2^Ht+72X:3^H0的35個(gè)循環(huán)，以及721C10分紳的一個(gè)循環(huán)。將PCR^應(yīng)產(chǎn)物混合物用l。/。的瓊脂糖^J&ii行分離，^Ht^QIAquickGelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)^^Ui提取與插入物大小相符的條帶。質(zhì)粒pZMP40為一種哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，該栽體中含有一個(gè)表達(dá)盒、來自^MA^炎病毒的內(nèi)核糖^^位點(diǎn)(IRES)元件和^^膜結(jié)構(gòu)域的C端截短的CD8胞外結(jié)構(gòu)域、；U^桿菌復(fù)制起泉、哺乳動(dòng)物可篩選標(biāo)i2^達(dá)單位(包括SV40啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和復(fù)制起彔，DHFR基因和SV40終止子);以及在釀酒酵母中進(jìn)行篩選和復(fù)制所需的URA3和CEN-ARS序列，所i^4達(dá)盒具有MPSV啟動(dòng)子、用于插入編碼序列的多個(gè)限制性SI^位點(diǎn)、otPA信號JI^列和Fc9序列。該質(zhì)粒A^lpZMP21質(zhì)粒(美國專利公^No.US2003/0232414Al;保藏于美國典型培*保藏中心，保藏號為ATCC#PTA-5266)構(gòu)建的。在將質(zhì)粒pZMP40與PCR片段進(jìn)行酵母中的同源重組之前，佳月BglII切割該質(zhì)粒。將100jil的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與10fil的插入物DNA(SEQIDNO:66)和100ng經(jīng)切割的pZMP40載體獨(dú)立^目混合，然后將該^^轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿孔杯中。對酵母/DNA混合物進(jìn)行電脈沖，使用的電源(BioRadLaboratories,Hercules，CA)的設(shè)置為0.75kV(5kV/cm)、Qoohm和25fiF。向杯中加入600fil的1.2M山梨醇，然后分別將100jil和300nl等^r樣的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并婦0t:下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊板上的Ura+酵母轉(zhuǎn)4沐重懸于1mlH20中，短暫離心以i5Ci定酵母細(xì)胞。將細(xì)胞^C^定重懸于0.5ml的^J^緩沖液(2。/。TritonX誦IOO、1%SDS、100mMNaCl、10mMTris、pH8.0、1mMEDTA)中。向裝有250nl經(jīng)酸洗滌的玻璃珠和300fil苯酚-氯仿的Eppendorf管中加A500nl絲;;^^,旋渦振蕩3^4中，在Eppendorf離心機(jī)上以最大轉(zhuǎn)速離心5分紳。^300fil7M目轉(zhuǎn)移至新管中，加入600nl乙醇(EtOH)以沉^DNA,然后以最大餘逸離心30分沖。倒出上清液并用lml的70。/。乙醇洗滌沉淀。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30jil的TE中。橫月5jd酵母DNA制品和50jil;tM桿菌細(xì)胞進(jìn)行電擊感受態(tài);^桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2.0kV、25jiF和400ohm對細(xì)lfeii行電脈沖。在電穿孑L4^，加入lmlSOC(2o/oBacto^^胰蛋白胨(Difco，Detroit,MI)、0.5%酵^^提取物(D股o)、10mMNaCl、2.5mMKCl、10mMMgC12、10mMMgSO4和20mM葡萄糖)，然后分別^50jil和200^il等^^洋的細(xì)l^甫于兩^LBAMP板(LB肉湯(Le皿ox)、1.8%BactoT^^t(Difco)、100mg/L^節(jié)青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DNA克隆的插入物進(jìn)行序列分析,并JJt于每個(gè)構(gòu)建體選#^含有正確序列的一個(gè)克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA)，4緣廠商的說明進(jìn)行;kJIL^粒DNA的分離。將三個(gè)系列的IH7RC[L21-K451LTbxj:(Fc9)構(gòu)建^^200ng分別用200iNi的PvuI在37t:下消^3小時(shí)，用n，A;;^定并在1.5mL的Mcrofuge管中離心。棄去上清液得到沉淀，將^Cit用1mL的70。/0乙醇洗'M在室溫下;^5分沖。在Microfuge離心機(jī)上將管以14000RPM離心10分鐘，棄去上清液得到沉淀。然后在無菌環(huán)境下將沉淀重懸于750pl的PF-CHO培養(yǎng)基中，在60r下培養(yǎng)30^t，然后^HP至室溫。三個(gè)管中M離心得到大約5xl(^個(gè)APFDXBll細(xì)胞，然后將細(xì)胞用DNA培養(yǎng)M液重懸。將DNA/細(xì)胞》'^^置于0.4cm內(nèi)徑的杯中，^J^下列^l!t進(jìn)行電穿孑L:950jiF、高電鉢300V。取出杯中物質(zhì)，；給，并用PF-CHO培養(yǎng)基稀釋至25mL,置于125mL^fe中。然后將^fe置于振蕩器上的培養(yǎng)箱中，以120RPM婦7t:、6。/。C02條件下培養(yǎng)。通iti^增量加入曱^^喋^^(MTX)至200nM，然后至lnMMTX，以對細(xì)胞系進(jìn)行營養(yǎng)篩選。通過蛋白質(zhì)印跡確iA4達(dá)，然后將細(xì)胞系擴(kuò)大培養(yǎng)并進(jìn)行蛋白純化。實(shí)施例9從CHO細(xì)胞純化可溶性IH7RC^J^Pellicon-n切線流過濾系統(tǒng)，通過兩個(gè)Biomax0.1m230kD^"量截留膜盒(Millipore，Bedford,MA)，將來源于表達(dá)IL"17RC-TbX-Fc9(SEQIDNO:64)的CHO細(xì)胞的M培養(yǎng)基濃縮大約l晤。用水乙酸將濃縮后的培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)到5.5,0.2jim過濾除菌，然后通過批色^(batehchromatography)上樣到蛋白Gsepharosefastflow^"月旨柱上(Pharmacia，Piscataway，NJ)上，4"C下過夜。在調(diào)節(jié)好pH的^培養(yǎng)基上樣之前，該蛋白G樹脂柱應(yīng)先用5^柱^R(大約150ml)的平衡緩沖液(25mM乙酸鈉、150mMNaCl，pH5.5)進(jìn)4tM平衡。經(jīng)it^慮且調(diào)節(jié)^pH的M培養(yǎng)基與樹脂的比例為33:l(v/v)。在室溫糾下(大約21"C)進(jìn)^f沐色歉理。將姊的經(jīng)過pH調(diào)節(jié)和0.22nm過濾的M培養(yǎng)基倒在一個(gè)空的5,5x20.5cm的玻璃柱(BioRad，Hercules，CA)上并利用重力壓緊。將柱用10倍柱體積(大約300ml)的平l^沖液(25mM乙酸鈉、150mMNaCl，pH5,5)洗滌。然后用100mM甘氨酸，pH2.7的溶液對結(jié)合的蛋白i^ftpH'^Jt。收^9.01111級分并立即用1.0ml的2,0MTris，pH8.0溶M行中和。通過SDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色對所收集的級分進(jìn)行分析。將含有IU7RC-Tbx-Fc9的級分混合，并使用5kD分子量截留Biomax^旋轉(zhuǎn)濃縮器(M皿pore，Bedford,MA)，##廠商的說明將混合的級分濃縮大約6#"。在41C下，^J^7kD襯量截留MSlide"A-Lyzer(Pierce，Rockford，IL)，將,的;^^級分用lx磷^L緩沖鹽溶^(pH7.3)(Sigma，St.Louis，MO)廣:i^it:析。將所得的含有IL-17RC-TbX-Fc9的lx磷酸鹽緩沖鹽溶液(pH73)經(jīng)過0.22jim過濾除菌，然后分裝并，于-80"C。實(shí)施例10IL"17A和IL"17F與人類IL^7RC的結(jié)合A)生物素化細(xì)胞因子與轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合用編碼人類IH7受^KSEQIDNO:21)、人類IH7RC(SEQIDNO:2)或編碼上述兩種受體的表達(dá)載M染幼倉鼠腎(BHK)細(xì)胞，以評估它們結(jié)^^生物素^A類IU7A和人類IL-17F的能力。使用乙二胺四乙酸鈉^細(xì)胞、計(jì)數(shù)并在染色培養(yǎng)基(SM)中稀釋至l()7細(xì)J!fe/nA所述染色培養(yǎng)勤SM)為加入了lmg/ml牛血清清蛋白(BSA)、10mM11印68和0.1%疊氮鈉(\￥)的朋880用不同濃度的生物素^A類IL-17A(SEQIDNO:14)和人類IL"17F(SEQH)NO:16)在水上與細(xì)胞-"^培養(yǎng)30分紳。婦0^^后，使用SM洗去過量的細(xì)胞因子，并用1:100稀釋度的鏈親和素綴合的藻紅蛋白(SA-PE)，在水上與細(xì)胞T"^培養(yǎng)30分鐘。洗去過量的SA-PE，使用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞。由細(xì)胞因子染色的平均熒光強(qiáng)度計(jì)算細(xì)胞因子結(jié)合的量。我們由上述分析發(fā)現(xiàn)，人類IH7A以相似的程度與人類IL-17R和IL-17RC兩者結(jié)合。人類BL-17F與H^17RC結(jié)合的程度與IL-17A相似，與DL"17R結(jié)合的程度可;^測但是^i^于IL-17A。B)生物素化細(xì)胞因子與人類外周jfiLJ^核細(xì)胞的結(jié)合117人類外周jk^核細(xì)胞(PBMC)通過^^糖密度梯度離心從全血中制備。將PBMC以107細(xì)1&/1111的密度與lng/ml的生物素化IL-17A或IH7F以及針對特定細(xì)JI^面蛋白的熒光染料綴合的M-"^培養(yǎng)，所述:^^l設(shè)計(jì)用于區(qū)分不同的白細(xì)胞<語系。這些標(biāo)記物包^CD4、CD8、CD19、CDllb、CD56和CD16。洗去過量的抗體和細(xì)胞因子，如上所itit過與SA-PE-^培養(yǎng)^^測特異性的細(xì)胞因子結(jié)合。使用流式細(xì)胞術(shù)分析樣本，我們由上述分析發(fā)現(xiàn)，人類IL-17A幾乎與所檢測的所有的PBMC類群都有結(jié)合，但是人類IL-17F不能以可檢測的程度結(jié)^W細(xì)胞類群。C)生物素化人類IL-17A和IH7F與未標(biāo)記的細(xì)胞因子的特異性結(jié)合的抑制如上所述iik^ii^^^^研究，不同的只是在結(jié)合反應(yīng)中包括了過量的未才射己的人類IL-17A和IH7F。在針對BHK細(xì)胞的研究中，未標(biāo)記細(xì)胞因子的量在一定濃度范圍內(nèi)變化，我們發(fā)5(l^入未標(biāo)記的IL-17A可以與n^l7A和IL-17F竟?fàn)幮缘亟Y(jié)合EL-17RC和IL-17R。然而，未標(biāo)記的IL"17F可以與IH7A和IL"17F竟?fàn)幮越Y(jié)合IL-17RC，但是不能有效地與IL-17A和IL-17F竟?fàn)幮越Y(jié)合IL"17R。這說明IL-17A和IL-17F浙5r以與IL-17RC特異性結(jié)合，而且由于它們可以相互竟?fàn)幗Y(jié)合，因此說明它們的結(jié)合位點(diǎn)相同或者相重疊。jH^卜，IL"17f結(jié)合IH7R的竟?fàn)幠芰Ρ菼L"17A要弱，這說明這兩種細(xì)胞因子也是結(jié)合IL-17R的相似區(qū)域，但;IJH7F結(jié)合IH7R的親和力要比IL"17F結(jié)合IL-17RC的親和力弱得多。D)生物素化人類IH7A和IL-17F與可溶性n^l7RC和IL-17R的特異性結(jié)合的抑制如上所述Akii行結(jié)合研究，不同的只是在結(jié)合反應(yīng)中包括了可溶形式的IL-17RC或IL-17R。這些可溶性受體為來源于每種受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人類IgGl恒定(Fc)區(qū)相融合的融合蛋白。我們發(fā)現(xiàn)，可溶性IH7RC可抑制人類IH7A和IH7F兩者與IH7R和IH7RC轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合。然而，可溶性IH7R抑制IL"17A與任一種受體的結(jié)合，但并不能有效地阻斷IL"17F與IH7RC的結(jié)合，這一結(jié)果與IH7F對IL^17R的結(jié)合力較弱的事實(shí)相一致。實(shí)施例llih7a和il"17f與il"17rc的結(jié)合AMM冷配體(ColdLigand辦制結(jié)合用ML國17RC(SEQIDNO:2)和IH7R(SEQIDNO:21)轉(zhuǎn)細(xì)HK細(xì)胞，然后以40，000細(xì)J^/孔的密度將細(xì)l&^24孑Ul(Costar3527)上培養(yǎng)兩^進(jìn)#^測定。分別向各孔中加入10ng/ml的通過碘珠(iodobead)法被放射性標(biāo)記的IH7A(SEQIDNO:14)和H7F(SEQIDNO:16)，以;SJf^P、至250nI/孔的結(jié)合緩沖液(RPMI1640培養(yǎng)基(JRH51502-500M)和10mg/ml牛血清清蛋白(Gibcol5260-037)),實(shí)驗(yàn)i殳三個(gè)平4沐。以10條過量的摩爾量加入冷竟?fàn)幬铩"測的竟?fàn)幬锇↖H7A、H^17B、IL"17C、IL-17D、IH7E、IH7F和I1^21。^!L^水上培養(yǎng)1小時(shí)，然后用PBS(Invitrogen20012-027)洗滌兩次，用高鹽溶液(l,5MNaCl、50mMHEPES，pH7.4)洗^-"次。用500fd的0.8MNaOH在室溫下提取孑L30^H7，并通過yi十?dāng)?shù)器(PackardCobranA5005)測量每^^的計(jì)數(shù)。結(jié)果表明，IOO倍摩爾量的冷IH7A和IH7F可以使usi標(biāo)記的IL"17A與BHKMH7RC的結(jié)合降低大約7倍，而IL"17B、C、D、E和IL"21對結(jié)合沒有影響。10(H^摩爾量的冷IL-17A可以使i勺才斜己的IL-17A與BHKIL-17R的結(jié)合減少大約4倍，而IL"17B、C、D、E、F和IL"21對結(jié)合沒有影響。100#摩爾量的冷IL-17A和IL-17F可以使U4標(biāo)記的IL-17F與BHKML-17RC的結(jié)合分別降低大約4#5倍，而IL-17B、C、D、E和IL"21對結(jié)合沒有影響。B)使用可溶性受體抑制結(jié)合如上部分所iiii行hzytorl4(SEQEDNO:2)和IL-17R(SEQIDNO:21)轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合研究，不同的是使用100倍過量摩爾量的可溶性ML-17RCxl/Fc9(實(shí)施例8)和可溶性IH7R/Fc(獲自R&D;Ref.177-IR)^替冷配^^^ft^:爭結(jié)合。細(xì)胞的洗滌、^W^十?dāng)?shù)步驟如上部分所述。可溶性ML-17RC/Fc可抑制u5l標(biāo)記的IL-17F與BHKhlbl7RC的結(jié)合，其IC50約為10倍過量的摩爾量(三次"^的平均值)?？扇苄詇lH7RC/Fc可抑1251才射己的IH7A與相同細(xì)胞系的結(jié)合，其平均IC50約為2(HI"過量的摩爾量，可溶性IL-17R/Fc可抑制^I標(biāo)記的IU7A，其平均IC50約為2(HI"過量的摩爾量。如上文中所述將轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞鋪于24孔板中。加入放射性標(biāo)記的IL"17A和IL-17F，將初始濃^JiHnM的iW性椒己的IL-17A和IL-17F用結(jié)合緩沖液以l:3的比例梯度稀鄉(xiāng)份至濃度為1.83pM,每孔^積為250nl，詔三個(gè)平行樣。然后分別在每個(gè)稀釋度的樣本中點(diǎn)加入10瞻過量摩爾量的冷配體。細(xì)胞的洗滌、提^i十?dāng)?shù)步驟如上文所述。通it^^-稀^JL的非竟?fàn)帬顟B(tài)的計(jì)數(shù)減去100倍過量時(shí)的計(jì)數(shù)，可#^分鐘的特異性結(jié)合計(jì)數(shù)相對于加入的放射性標(biāo)記配體的濃度作圖。將上腿過標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)作圖，以產(chǎn)生針對絲性標(biāo)記配體和轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的^種組合的旨結(jié)合曲線。^J顯示了由上述4^P三組實(shí)^i十，出的親和力值。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table>單位點(diǎn)結(jié)合曲線擬合與IL"17A和IL-17F與IL-17R結(jié)合的特征最為接近。雙位點(diǎn)結(jié)合曲線擬合與IL-17A和IH7F與hlL-17RC結(jié)合的特征最為接近。高親和力結(jié)#點(diǎn)為上表所示的值。低親和力結(jié)*點(diǎn)具有的親和力極低，并M三個(gè)實(shí)驗(yàn)中還有所不同。實(shí)施例12鼠類Nih3t3細(xì)胞對人類IL"17A和IL-17F的應(yīng)答A)細(xì)l&4甫板和kzl42腺病4^告物感染。將來源于小鼠成纖維細(xì)胞(由ATCC記載)Nih3t3的Nih3t3細(xì)胞以5000細(xì)勿孔的密度鋪于細(xì)l&^^包被的白色固體96孑L^Ji(Cat.#3917.Costar)，佳月含有谷氨S^和添加了丙酮^ik的DMEM/10。/oFBS^板，并在37"C、5%C02的M下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基并且用含有^IL,和添加了丙酮酸鹽的DMEM/P/。FBS培養(yǎng)基制備感染復(fù)數(shù)為5000顆粒/細(xì)胞的Kzl42腺病毒顆粒，并婦71C、5ynC02的M下培養(yǎng)過夜。B)螢光素酶測定，以測量kzl42腺病毒報(bào)告物感染的nih3t3細(xì)胞中IL-17A和F的激活作用。在與腺病4^粒報(bào)告物培養(yǎng)過夜后，用iti^清培養(yǎng)^(添加有0.28。/。BSA)準(zhǔn)備人類IL-17A和IL-17F配體的處理物。移去腺病4^^培養(yǎng)基，并加入合適劑量的配體，設(shè)三個(gè)平行樣。然后繼續(xù)在37匸和5%0)2條件下繼續(xù)培#4小時(shí)，之后移去培養(yǎng)基并使細(xì)胞裂解15分鐘，使用螢光素酶測定系統(tǒng)和試劑(Cat.#el531Promega.Madison，WI.)以及微量板發(fā)光計(jì)測量平均熒光強(qiáng)度(MFI)。檢測濃度范圍為(U-1000iig/ml的人類IL-17A和IL-17F的活性，得出兩種配體的EC5(HlL約為50iig/ml。上述數(shù)據(jù)表明nih3t3細(xì)胞攜帶有上述配體的受體，并且IL-17A和IL-17F可激活NF-KB/Ap"l轉(zhuǎn)錄因子。實(shí)施例13鼠類Nih3t3細(xì)giilH7RA和IL-17RC兩者對nih3t3RNA進(jìn)行的RTPCR分析表明，這些細(xì)胞均為IH7RA和IL-17RC陽性，這與這些細(xì)自人類IL-17A和IL"17F介導(dǎo)作用有Nr-KB/Ap^1應(yīng)答相一致，所iiA類IL-17A和IL"17F介導(dǎo)作用是通itJi述一種或兩種受體介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。RTPCR^的A^it程A)鼠類IL-17RC的PCR使用標(biāo)準(zhǔn)方法從分離自nih30細(xì)胞的總RNA制備第一鏈cDNA。使用hotstar聚合Sl(Qiageii，Valencia,CA)^廠商的說明進(jìn)行PCR，，的正義引物為zc38910,5，ACGAAGCCCAGGTACCAGAAAGAG3，(SEQIDNO:56),反義引物為zc38679，5，AAAAGCGCCGCAGCCAAGAGTAGG3，(SEQIDNO:57)，進(jìn)4f35個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增。瓊脂糖^電泳顯示出預(yù)期的850bp大小的單個(gè)明顯擴(kuò)增子。B)鼠類IL-17RA的PCR使用標(biāo)準(zhǔn)方法從分離自nih3t3細(xì)胞的總RNA制備第一鏈cDNA。使用hotstar聚^Sl(Qiagen，Valencia,CA討娥廠商的說明進(jìn)行PCR,，的正義引物為zc38520，5，CGTAAGCGGTGGCGGTTTTC3，(SEQIDNO:58)，^JL引物為zc38521，5，TGGGCAGGGCACAGTCACAG3，(SEQIDNO:59)，進(jìn)4t35個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增。瓊脂糖皿電泳顯示出預(yù)期的498bp大小的單個(gè)明顯擴(kuò)增子。實(shí)施例14表iiapl/nfkb轉(zhuǎn)錄因子的穩(wěn)定的Nih3(3測"^jL隆的制備^^含有新霉素可篩選標(biāo)記的kz142apl/nfkb^艮告物構(gòu)建g定轉(zhuǎn)染如上所述的鼠類nih3t3細(xì)胞系。以克隆密度將新霉素抗性的轉(zhuǎn)染混*鋪板?？寺…h(huán)分離克隆，并^^人類BL-17A配體作為誘導(dǎo)物通過荄光素酶測定篩選克隆。選擇具有最高平均熒光強(qiáng)度(MFI)(通itAp-l/NF-KB螢光素酶)和最低背景信號的克隆。篩選出了一個(gè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系并將其命名為nih3t3/kz142.8。實(shí)施例15使用可溶法IL-17RC和IL-17RA/FC嵌^^抑制鼠類Nih3t3細(xì)胞中的人類IL-17A和IL-17F的激活作用在螢光素酶測定中，使用可溶形式的IL"17RC或IL"17RA作為Ap-l/NF-KB元件^CA類IL-17A和IL-17F激活的拮抗劑。這些可溶li受體狄源于每種受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人類IgGl恒定(Fc)區(qū)相融合的融^白?？扇?1^A類IL-17RFC融^^白是商購的(重^aA類IL-17R/FC嵌^^,目錄號177-IR-100，R&DSystems,Inc.,Minneapolis,Mn.)。如上所^k^建可溶)^A類IL"17RCFC嵌合物(IH7RCsR/FC9)。我們發(fā)現(xiàn)過量的IH7RCsR/FC9和人類IL-17RsR/FC嵌合物抑制人類IL"17A和IL"17F兩者介導(dǎo)的鼠類11111313/1€2142.8測試細(xì)胞系中的Ap-1/NF-KB激活的EC50水平。IL-17RCsR/FC9蛋白顯示出最高的拮抗BL-17F激活的效力，IL-17RsR/FC嵌*顯示出最高的拮抗IL-17A激活的效力。實(shí)施例16在哮喘的鼠類模型中IL-17FmRNAJi調(diào)使用小鼠的致^氣ii^激模型來測量IH7FmRNA水平。通it^第0天和第7天對各組小鼠(8至10周齡)腹膜內(nèi)注射含10照重組屋塵螨(dermatophagoidespteronyssinus)變應(yīng)原l(DerPl)(Indoorbiotechnologies,Cardiff,UK)的500/。ImjectAlmn(Pierce)，使得動(dòng)iN^t敏。在七A^，朋含20^克DerPl的50nlPBS對小鼠進(jìn)行連續(xù)三天(第14、15和16天)的刺激。該組為4只小鼠。陰'I^t照組為5只小鼠(佳月磷酸緩沖鹽溶^(PBS)致敏，PBS刺激)。還有3只小IUlJ^DerPl致敏和用PBS刺激的組。在用變應(yīng)原或?qū)φ瘴锎蘜48小時(shí)，收集整個(gè)肺組織并分離總RNA。使用來自每一受試者的相同量的總RNA來制備第""^cDNA。使用Qiagenhotstar聚合酶(Qiagen，Valencia,CA)根據(jù)廠商的說明進(jìn)行IL"17F的PCR。IL-17F的PCR進(jìn)4亍35個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，4吏用的正義引物為zc46098，5，ACTTGCCATTCTGAGGGAGGTAGC3，(SEQIDNO:60)，的^^JL引物為46099，5，CACAGGTGCAGCCAACTTTTAGGA3，(SEQIDNO:61)。為了確i^所有受試者中^^t量都是均一的，使用與IL-17F擴(kuò)增中相同的每種模板的量進(jìn)行P肌動(dòng)蛋白的PCR。P肌動(dòng)蛋白的PCR包括25個(gè)PCR循環(huán)，偵月的正義引物為zc44779，5，GTGGGCCGCTCTAGGCACCA3，(SEQIDNO:62)，使用的反義引物為zcc44776，5，CGGTTGGCCTTAGGGTTCAGGGGGG3,(SEQIDNO:63)。來自DerPl致^JJ)erpl刺激(津喘刺激)的處理組中的全部4只小鼠均表現(xiàn)出明顯的IL-17F擴(kuò)增。與此不同的是，陰'I^照組中^f5W^到微弱的IU7r擴(kuò)增，所述陰性對照包括^^Jj)erPl致^/PBS刺M理組的全部3個(gè)受^r和代^PBS致^/PBS刺、,3^且的全部5個(gè)受試者。對于哞喘刺激受試者而言，P肌動(dòng)蛋白擴(kuò)增的強(qiáng)度至少與陰'I^J"照相同，&明陰'l!^t照中IL-17F擴(kuò)增微弱不是因?yàn)閊1的問題。實(shí)施例17COS細(xì)絲染和分泌捕獲A)Cos細(xì)M染和分泌捕獲測^E示，IL^17RCsR/Fc9和II^17F為受衛(wèi)配體對^^1分泌捕獲測定將人類IL"17RC(SEQIDNO:2)與人類IU7F(SEQIDNO:16)^目匹配。佳月可溶性IH7RCsR/Fc9融合蛋白(實(shí)施例8)作為分泌測定中的結(jié)^H^劑。^P^有人類IL-17B、C、D、E和F的cDNA并帶有SV40復(fù)制起泉的表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至COS細(xì)胞中。使用下文所述的分泌捕獲測定分析IL-17RCsR/Fc9與轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞的結(jié)合。仫J呢察到IL-17RCsR/Fc9與人類IL-17F的陽性結(jié)合。上i^果證實(shí)了人類IH7RC和IL-17F為受^SC/^對的這B)COS細(xì)胞的轉(zhuǎn)染按下述步驟進(jìn)行COS細(xì)胞的轉(zhuǎn)染將3fil混合的DNA和5nl的Lipofectamine&92nl無血清DMEM培養(yǎng)J^500mlDMEM中^5mg丙酮酸鈉、146mgL畫谷氨itfe、5mg^4^蛋白、2.5mg胰島素、lng琳5mgj^球蛋白)中混合，在室溫下培養(yǎng)30分鐘，然后再加入400nl的^iL清DMEM培養(yǎng)基。將500nl的上述^^加入到每孑L4煮有1.5xl05個(gè)COS細(xì)胞的12孑li且織培養(yǎng)板上，在37"C下培養(yǎng)5小時(shí)。加X500nl的20。/oFBSDMEM培養(yǎng)1^500mlDMEM中含100mlFBS、55mg丙酮酸鈉和146mgL^^tj^^)并培養(yǎng)過夜。C)分泌捕獲測定按下述步驟進(jìn)行分泌捕獲測定用PBS洗去細(xì)胞上的培養(yǎng)基，然后用含1.8。/。曱醛的PBS固定細(xì)胞15分鐘。然后將細(xì)胞用TNT(0.1MTris-HCL、0.15M狂(:1和0.05%1界6611-20，溶于H20)洗滌，用^0.1。/oTriton-X的PBS透化15分鐘，再次用TNT洗滌。用TNB(O.lMTris-HCL、0.15M3<:1和0.5%封閉試劑(NENRenaissanceTSA-Direct試劑盒)，溶于H20)封閉細(xì)胞1小時(shí)，并再用TNT洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞與lng/ml的人類IL47RCxlsR/FC9可溶性受體融合蛋白-"^培養(yǎng)1小時(shí)，然后用TNT洗滌細(xì)胞。再將細(xì)胞與1:200稀釋度的山羊抗人類Ig-HRP(Fc特異性的)抗體^^培養(yǎng)l小時(shí)。然后再次用TNT洗滌細(xì)胞。將熒光素酪胺(fluoresceintyramide)試劑以l:50稀釋于稀^^沖^(NEN試劑盒)中并與細(xì)胞~-^培#4"6分鐘，再用TNT洗滌，從而檢測陽性結(jié)合。將細(xì)胞用TNT以l:5稀釋并保存于VectashieldMounting培養(yǎng)基(VectorLabsBiirlingame，CA)中。^J^FITC濾光片在熒;5LE微鏡下觀察細(xì)胞。實(shí)施例18鼠類抗人類IL"17RC單克隆抗體的制備A.用于制備抗H^17RC抗體的免疫1.可溶組畫17RC-muFc使用25-50ng的可溶性人類IH7RC-muFc蛋白(實(shí)施例23)與Ribi佐劑(Sigma)以l:l(v:v)混合，以隔周免疫方案對六周齡至十二周齡的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠進(jìn)行JM內(nèi)注射免疫。在第三次免g七至十天，取眶后血的血樣并收集血清，用中和測定(例如，如本文所述)評估其抑制EL"17或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IH7RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)J^未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所g對小鼠進(jìn)行免疫、^jk#^Ht直至中和效價(jià)達(dá)到平臺(tái)為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小鼠血管內(nèi)注射含25-50ng可溶性IL-17RC-Fc蛋白的PBS。三A^，^il些小鼠的脾臟和淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如〗吏用小鼠骨髓瘤(3-乂63-~8.653.3.12.11)細(xì)1^^4^^1合的細(xì)胞系，^H狄M域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etaL，JImmunoL123:1548-50，1979;和Lane，RD.JImmunolMethods81:223-8，1985)。IL-17RC-CEE、IL-17RC-CfflS、IL國17RC-CFLAG使用25-50將的可溶性人類IL"17RC-CEE、IL-17RC-CHIS或IL-17RC-CFLAG與Ribi佐劑(Sigma)以l:l(v:v)混合，以隔周免妙案對六周齡至十二周齡的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠進(jìn)行蒯度內(nèi)注射免疫。在第三次免疫后七至十天，提取眶后血的血樣并收集血清，用中和測定(例如，如本文所述)評估其柙制IH7或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IH7RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)I^未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所iitoH、鼠進(jìn)行免疫、^Ufa^MHf估，直至中和效價(jià)ii^J平臺(tái)為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小鼠血管內(nèi)注射含25-50照可溶性IH7RC即IL國17RC-CEE、zcytor-CHIS或IL"17RC-CFLAG抗原蛋白的PBS。三^,取這些小鼠的脾J3i^淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)Jte，本領(lǐng)J^t合的細(xì)胞系，^H^W域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etal.，JImmunol.123:1548-50，1979;和Lane，RD.JImmunolMe也ods81:223-8，1985)。3.表達(dá)H7RC的P815轉(zhuǎn)染體對六周齡至十周齡的雌性DBA/2小鼠進(jìn)行艦內(nèi)注射免疫，注射lxl()S轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)氣例如？815/11^171:細(xì)1&(例如注射0.51111，細(xì)胞密度為2xl05細(xì)^/ml)。注射前應(yīng)使細(xì)胞維持于指lti長期。為用于注射，收集細(xì)胞并用PBS洗滌三次，然后以2xl()S細(xì)胞/ml的密度重懸于PBS中。在這一模型中，小鼠會(huì)在2-3周內(nèi)U腹水瘤，如果沒有產(chǎn)生針對轉(zhuǎn)染的^^的免C^答，小鼠將在冬6周內(nèi)死亡。在三周內(nèi)，對于腹部沒有明顯肺JI^(腹水的標(biāo)志)的小鼠按照上述方法以2-3周的間隔再次免疫。在第二次免疫后七至十天，取眶后血的jfi^并收集血清，用中和測定(例如，如本文所述)評估其抑制IL-17或II^17F與IL-17或IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IL"17RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所^對小鼠進(jìn)行免疫、|ufa#^H古，直至中和效價(jià)達(dá)到平臺(tái)為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小IUM內(nèi)注射lxl()S轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)胞。四天后，恥逸些小鼠的l^^r淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髄瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)胞或其他本領(lǐng)域適合的細(xì)胞系，并使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見KearneyJ.F.etal.，見上文;和La股凡D.見上文)。另一種代替對轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)J3&ii行免疫的方法包括以每2-3周的頻率腹膜內(nèi)注射1-5乂106經(jīng)輻照的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在這種方法中，動(dòng)物不^^jt并死于J^水答，從第:次免疫后開始^#進(jìn)行監(jiān)測:一;中和效價(jià)達(dá)到最高水平，則;具有最高效價(jià)的小鼠]內(nèi)注射5乂106經(jīng)輻照的細(xì)胞，進(jìn)#^融合，四A^，^it些小鼠的脾J3i^淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜^t的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髄瘤(？3-乂63-^8.653.3.12.11)細(xì)絲^^^￡合的細(xì)胞系，^Ht^I本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見KeameyJ.F.etaL，見上文;和Lane凡D.見上文)。B.篩選雜交瘤融合體以獲得結(jié)合IL-17RC并抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的抗體在融合后8"10天，對雜交瘤上清液進(jìn)行三種不同的原代篩選。對于第一種測定，使用HRP-綴合的山羊抗小鼠K^^^^^^(secondstepreagent),通過ELISA方法，檢測上清液中抗體與結(jié)合在板上的可溶性人類IL畫17RC(IL-17RC-muFc、IL畫17RC國CEE、IL-17RC國CfflS或n^l7RC-CFLAG)蛋白結(jié)合的能力，以識別結(jié)合的小鼠M。為證實(shí)IL-17RC融^"白的IH7RC部分的特異性，就與相同的鼠類Fc區(qū)域(mG2a)、EE序列、HIS序列或FLAG序列融合的非相關(guān)蛋白，對初始測定中呈陽性的上清液進(jìn)fr^H古。這些上清液中與IL-17RC-融^^白結(jié)^a是不與含有muFc或^f&蛋白的非相關(guān)融^"白序列結(jié)合的抗/^皮認(rèn)為是特異性針對IH7RC的抗體。對于第二種測定，通過ELISA對所有雜交瘤上清液中的^Mfp進(jìn)行測定，評估它們抑制生物素4匕人類IL-17或生物素化^AjllL"17F與結(jié)合^Ui的IL"17RC-muFc或IL"17RC-融合蛋白結(jié)合的能力。繼續(xù)檢測所有上清液——無論它們在ELISA測定中是否能抑制h7或IL17F與IH7RC的結(jié)合——以測試它們抑制IL-17或IL-17F與IL"17RC轉(zhuǎn)染的BaC細(xì)胞或BHK細(xì)胞或正常人類支氣管上皮細(xì)胞的結(jié)合能力，所述上清液中含有特異性針對IH7RC的抗體。繼續(xù)通過FACS分沖/Hf估所有在IL"17和/或lH7r抑制測定中呈中和陽性的上清液，以評估它們對IH7RC轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)J!&^BHK細(xì)胞以M未轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)Jf^BHK細(xì)胞的染色能力。設(shè)計(jì)這一分析的目的是證實(shí)對IL-17或EL"17F與IL"17RC的結(jié)合的抑制作用確實(shí)是由特異性結(jié)合il-17rc受體的抗體產(chǎn)生的。jHJ卜，由于facs分析中佳州抗IgG抗體作為二抗，因此特異性的FACS陽性結(jié)a明該中和抗似艮可食^于IgG類抗體。通iih述手段識別了一個(gè)原始孑L(masterwell),該孑Ljfe^合ELISA測定中可結(jié)合IL-17RC、在基于ELISA的抑制測定中可抑制IH7或IL-17F與IL-17RC的結(jié)合、可分別阻斷IL-17和II^17F與IL^17RC轉(zhuǎn)染Baf3細(xì)J^BHK細(xì)胞的相互作用，并JL^使用抗小鼠IgG二抗的IU7RC轉(zhuǎn)染的BaG或BHK細(xì)胞染色測定中呈強(qiáng)陽性。第三種分析中使用了表達(dá)H^17RC并可響應(yīng)于IL^17F處理而被誘導(dǎo)分泌IL-8或IL-6的原代人類支氣管上皮細(xì)胞。測定了特異性單克隆抗體抑制IL"17或IL-17F刺激這些細(xì)胞產(chǎn)生H^8或n^6的能力。如本文所逸地測定了對EH7或IL-17F應(yīng)答而產(chǎn)生的IL-8和IL"6?；蛘?，可以佳月單克隆,；抗IL"17RC介導(dǎo)的對IL-17或IL-17F誘導(dǎo)NIH3T3細(xì)MM含有IL-17RC的細(xì)胞產(chǎn)生愛光素酶的抑制作用測定，來代替上述生物活性中和測定的一種或與上述生物活性中和測定的一種一^f吏用。在NIH3T3細(xì)胞中的NF-kb介導(dǎo)的螢光素酶測定在本文中^Mf所描述。C)產(chǎn)生抗IL-17RC特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞的克隆使用標(biāo)準(zhǔn)的低密度稀釋(通常少于l細(xì)胞/孔)方法來克隆產(chǎn)生特異性抗IL-17RCmAb的雜^Jt細(xì)胞系，所述特異性抗IH7RCmAb可交叉中和IL"17和H^17F與適當(dāng)轉(zhuǎn)染的BaF3細(xì)MBHK細(xì)胞的結(jié)合。在鋪M約5-7天，通過ELISA篩選克隆，例如可以利用結(jié)合有人類BL-17RC-muFc的板，然后再如上所ii^itELISA對含有muFc的非相關(guān)融^"白進(jìn)行陽性孔再測試。篩選其上清液能結(jié)合IL-17RC-muFc^是不結(jié)合含有muFc的非相關(guān)融^^白的克隆，并通過重復(fù)進(jìn)行中和測定以及FACS分析進(jìn)一步確認(rèn)特異性M活性。將所有篩選出的IH7RC抗體陽性克隆至少克隆兩次以確M品系純度(clonality)，并評估絲產(chǎn)生的穩(wěn)定性。繼續(xù)如上所iiiikii行;L^克紗篩選，直JJL1^至少95。/。的所得克隆都能夠中和抗IL"17RC私沐的生產(chǎn)。D)被抗IL-17RCmAb識別的分子的生物化學(xué)表征通過標(biāo)準(zhǔn)的免疫沉淀技術(shù)以;SJSDS-PAGE分析或蛋白質(zhì)印跡方法，以生物化學(xué)手段確認(rèn)被推定的抗IH7RCmAb識別的耙分子IL"17RC確實(shí)是IL-17RC，在上述分析中均使用了來自于IH7RC轉(zhuǎn)染的和未轉(zhuǎn)染的BaB細(xì)胞或BHK細(xì)胞的可溶性膜制品。jHW卜，^^1表^IL-17RC的未轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的可溶性膜制品，以顯示mAb可識別天然受體鏈以及轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。或者，測試mAb與可溶性IL-17RC-muFc^白進(jìn)行特異性免疫i^定或進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡的能力。實(shí)施例19^A類IL-17RC轉(zhuǎn)染的P815細(xì)胞注射小鼠，并使用來源于該小鼠的血清中和人類IL"17RC使用基于細(xì)胞的中和測定，將來自^v類IL-17RC轉(zhuǎn)染的活P815細(xì)胞(實(shí)施例17)注射的小鼠的血清進(jìn)行系列稀釋，稀釋后的濃>^1%、0.5%、0.25%、0.13%、0.06%、0.03%、0.02%和0%。將測定;^L37。C、5。/oC02糾下培養(yǎng)4天，然后以20jil/孑L^AAlamarBlue(Accumed,Chicago,IL)試劑。將效'J定^L再在37。C、5"/oC02條件下培養(yǎng)16小時(shí)。結(jié)果顯示，來自四只動(dòng)物的血清可通過人類IH7RC中和人類IL-17和人類IL"17F的信號傳導(dǎo)。上述的結(jié)果提供了進(jìn)一步的iSL^明，例如通it^發(fā)明的抗IH7RC中和性單克隆抗體，通過結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IH7或IL^7F活性(單獨(dú)M共同地)，可以有^U4阻斷IL"17RC，這樣可有利地I^f氐體內(nèi)IL"17和IL-17F的作用(單獨(dú)地或共同地)，并可以減輕由IL-17和/或IL-17F誘導(dǎo)的炎癥，例如，在例如下述的疾病中觀^^到的炎癥銀屑病、IBD、結(jié)腸炎、慢性阻塞'J^病、嚢性纖維化病，或者頭他由IL-17和/或IL-17r誘導(dǎo)的炎性疾病，包括IBD、關(guān)節(jié)炎、哮喘、銀屑病關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、炎性M病和特應(yīng)性皮炎。實(shí)施例20^A類IL-17RC單克隆M的藥物代謝動(dòng)力學(xué)將待測的單克隆抗^^A類IL47RCmAb分裝為例如3x3mL的等分試樣，濃^大約1mg/mL(通it280nM處的UV吸收測定)^^存于"80。C直至4M。載體為lxPBS(50mMNaPO4、109mMNaCl)，pH7.3。在用前將mAb在室溫下融化，并將,1和2分別用于100照的IV和SC劑量組。將"^#3的一半用1XPBS以1:2稀釋以用于50ng的SC劑量組，將^#3的另一半用1XPBS以1:10#^釋以用于10ng的SC劑量組。雌性SCID小鼠(11=96)獲自CharlesRiverLabs。在收到動(dòng)物后確{人其#^狀況，并^E飼^(每籠中3只動(dòng)物)。開始研究時(shí)，小鼠達(dá)到12周齡，平均體重為大約22g。A)給藥方案將雌性SCID小鼠隨機(jī)分為四個(gè)劑量組(^'J量組n-24)(^8)。第1組通#尾靜脈IV注射約93nl給予^AJIlL^7RCmAb，第2、3和4組通it^頸背SC注射約93nl給予^AJIlL"17RCmAb。B)樣本采集128在紐前將小鼠用！U^或異絲充分麻醉。在各時(shí)間點(diǎn)(除168小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)"卜)通過心臟穿刺采集血洋，在168小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)通過眼部iUiiMK同一只動(dòng)物在504小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)通過心臟穿刺再次ifciL)。將血樣收集于血清分離管中并妙15^t使M結(jié)。然后將樣本以14000rpm離心3分沖。在離心后，將樣本分為125-150nL的等份分^^標(biāo)記好的eppendorf管中，并立即儲(chǔ)存于-80。C直至^^斤時(shí)。勤<table>tableseeoriginaldocumentpage129</column></row><table>*在168小時(shí)和504小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)佳月相同的動(dòng)物。C)通itELISA對血清中^A類II^17RCmAb的濃度進(jìn)行定量在藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中佳月酶^Ut疫吸附測定(ELISA)，以定量分析來自給予過抗IL-17RCmAb的動(dòng)物的小1>清樣本。這一測定的設(shè)計(jì)利用了市售的4和TMB比色檢測。對用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋度進(jìn)行了改變，以改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分的清晰度。使用泉變范圍為100ng/mL至0.231ng/mL的二倍稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以對小IA清樣^Ui行定量測定。^QC樣本用10。/。的SCID小!>、>^#釋100倍、100(H^和10000倍，并##標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行回復(fù)計(jì)算。D)藥物4^t^力學(xué)^^斤將血清濃度對時(shí)間的數(shù)據(jù)下載至WinNonlinProfessional4.0軟件(Pharsight，Inc.;Cary，NC)中以進(jìn)行藥物代g力學(xué)分析。^^1無房室分析，基于^-時(shí)間點(diǎn)的平均數(shù)據(jù)確定藥物代謝動(dòng)力學(xué)WL實(shí)施例21200880017391.0用基于細(xì)胞的中和測定，將純化的小鼠^A類IL-17RC單克隆^ii行連續(xù)#^^^加入，例:M^釋后的濃y^lOng/ml、5ng/ml、2.5fig/ml、1.25ng/ml、625ng/ml、313ng/ml、56ng/ml和78ng/ml。將測定;M^37。C、5。/。C02^Hf下培#4天，然后以20nlAJL^AAlamarBlue(Accumed，Chicago,IL)試劑。將測定板再在37。C、5。/。C02條件下培養(yǎng)16小時(shí)。這一測定的結(jié)果可以證明，純化的^A類IL"17RC單克隆抗體可通itA類IL-17RC中和人類IL-17和人類IL-17F的信號傳導(dǎo)。對于高效私體而言，在以約10ng/ml的濃度使用時(shí)，M可以完全中和由人類IL"17或人類IL"17F誘導(dǎo)的增殖，而JL^較低濃度時(shí)增殖的抑制以劑量依賴性方式下降。以上述濃JL對同種型匹配的陰'J^J"照小鼠mAb進(jìn)行了測試，期的一樣沒有產(chǎn)生對^~"種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的增殖的抑制。上述結(jié)果可以ii一步證實(shí)，針對IL-17RC的單克隆抗體在低濃度時(shí)就確實(shí)可以拮抗促炎性配體IL-17和IL"17F的活性。實(shí)施例22IL-17A誘導(dǎo)IFN"7^TNr-a^A類外周jki^核細(xì)胞中水平的升高通過聚蔗糖密度梯度離心純^A類外周血單核細(xì)胞(PBMC)，并在37。C下將它們單純用培養(yǎng)基培養(yǎng)、或與50ng/ml抗人類CD3抗體一起培養(yǎng)或與50ng/mt^A類CD3^/^加上l卩g/ml^A^類CD28^的組^^-"^培養(yǎng)。建立了用于上述每種培養(yǎng)條件的復(fù)制培^并且在培養(yǎng)物中加入細(xì)胞因子、加AJ5ng/ml/v類IL-17A或加A25iig/ml^類IL"17F的^K在培養(yǎng)24小時(shí)后，收集每種培養(yǎng)物的上清液，并使用B-DBioscience，s人類Thl/Th2細(xì)胞計(jì)數(shù)^l陣列(CBA)測定細(xì)胞因子含量。我們發(fā)現(xiàn)培^可被抗CD3抗體或抗CD3抗體+抗CD28抗體刺激，并且添加IH7A的培養(yǎng)物與不加入細(xì)胞因子或加yNJL-17F的培#相比，IFN—TNT"a的水平顯著提高(每種提高3-5倍)。^M^入抗CD3抗體刺激的培#^沒有顯示出細(xì)胞因子水平的明顯改變。jH^卜，《吏用CBA測定發(fā)現(xiàn)，加AJL-17A并未誘導(dǎo)^fe細(xì)胞因子(包括IL-2、IL-4、IL"5和IL"10)水平明顯改變。上^^明IL-17A而非IL"17F能夠增加抗CD3^il抗CD3抗體+抗。028#刺激的？8]\1(:培養(yǎng)物中1^\—1^-0[的產(chǎn)生。實(shí)施例23鼠類代月HmlL-17RA-Fc^小鼠J^^誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)^型中降低疾病的發(fā)病率并g疾病進(jìn)程A)小HM^誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎a:iA)^型關(guān)節(jié)炎的CIA模型是一種用于評價(jià)藥物(例如本文所述的IL"17RC和H7RA/RC蛋白對治療人類關(guān)節(jié)炎的潛在療效的合it^^p的模型。在CIA模型中，發(fā)現(xiàn)與未患關(guān)節(jié)炎的小鼠其淋巴結(jié)核足爪內(nèi)的水平相比，關(guān)節(jié)炎小鼠的受影響胭淋巴結(jié)和足爪內(nèi)的鼠類IL"17A和IL"17F的inRNA水平顯^h高(升高了10-2(HI";p<0.001)，i^ii一步說明這一模型可用作IL"17A和n^l7F有影響的疾病模型。由于mlL-17RA-Fc能夠中和鼠類IU7A和IL-17F，這與人類IL"17RC或IL-17RA/RC能夠結(jié)合人類IL-17A和IL-17F的特征相類似，因此mlL-17RA-Fc蛋白是本文所述的IL47RC和IL-17RA/RC蛋白的合適的代用物。在這些研究中使用八至十周齡的雄性DBA/lJ小鼠(JacksonLabs,每只約25-30克)。在第-21天，在動(dòng)物尾部皮內(nèi)注射100jil用弗氏完全佐劑配制的lmg/ml雞II型膠原(由Chondrex，Redmond,WA生產(chǎn))，三周后(第0天)#次進(jìn)行相同的注射，所不同的是這一次使用弗氏不完4^劑配制.在第二^M^、注射后動(dòng)物開始表現(xiàn)出關(guān)節(jié)炎癥狀，大多數(shù)動(dòng)物在l-2周內(nèi)發(fā)生炎癥。每只足爪的疾病的程度按下述方式評估使用測徑器測量足;i^f度，并對每只足爪進(jìn)行臨床評^(0-3):0=正常、0.5=足^1炎、1=^>^1爪炎癥、2-中^t爪炎癥、3=重^A爪炎癥，詳見下文。B)監(jiān)測疾病這一模型中疾病的發(fā)病率通常為95-100%，也^JU^M40只動(dòng)物的研究中，通常有0-2只動(dòng)物沒有^jL(通過6周的觀察后確定)。注意到在炎癥開始時(shí)，通常會(huì)出現(xiàn)短期程度各異的低等MA爪炎^^足尖炎癥的現(xiàn)象。因此，在發(fā)生明顯的持續(xù)的足/MtJi^^前，并不i人為動(dòng)物確實(shí)具有疾病。每W所有動(dòng)物進(jìn)行觀察，并通ii^"每只足;Mi行定性臨床評分來評估它們足爪的疾病狀態(tài)。每天^^其臨床疾病狀態(tài)對每只動(dòng)物的4只足;M^t^分。為確定臨廟if"分，可將足爪分為3個(gè)區(qū)域足尖、足;f^身(前足(ma肌s)或后足(pes))和腕關(guān)節(jié)或踝關(guān)節(jié)。觀察相對于上述區(qū)域的炎癥范圍和嚴(yán)重程度，包括X!^只足尖的腫脹；趾曱撕絲足狄紅；注意^fi-足爪中水胂或發(fā)紅的任何表見；注意自或骨的良好解剖學(xué)分界的^T缺失；評估腕關(guān)節(jié)或踝關(guān)節(jié)的,水腫或發(fā)紅；以及注意炎癥是否向上延伸到附近的腿部。1、2或3的131足爪評分首先U于嚴(yán)重程度的總體印象，其:^A基于炎癥涉及了多少區(qū)域。臨>^評分的標(biāo)準(zhǔn)示于下文。C)臨床評分0=正常0.5=炎癥涉及一個(gè)或多個(gè)足尖，但是只有足尖發(fā)炎1=涉M爪(l個(gè)區(qū)域)的輕度炎癥，并可能包括一個(gè)或多個(gè)足尖2=足爪中度炎癥，并可包括一^分足尖和/或J^/踝關(guān)節(jié)(2個(gè)區(qū)域)3=足爪、腕/踝關(guān)節(jié)和部分或全部足尖重度炎癥(3個(gè)區(qū)域)Mii^當(dāng)足爪炎癥的定性評分為l分或更高時(shí)，^C確定確實(shí)患有疾病。一JS^認(rèn)患有疾病，則記錄當(dāng)天的日期并將期旨定為該動(dòng)物"確實(shí)患有疾病"的第一天，同時(shí)開始治療。^^PBS或不同劑量的mlL-17RA-Fc(150將；75照；25照或IO照)治療小鼠，將所述mlH7RA-Fc用PBS稀釋至所需濃度并通iti.p.給藥，每兩天給藥一次，共給藥5次。在實(shí)驗(yàn)全程中采集血液以監(jiān)測抗J&^抗體的血清水平以;SJ^疫球蛋白和細(xì)胞因子的血清水平。在最后一次(第5次)治療后的48小時(shí)(此時(shí)約為疾病發(fā)病后第ll天)處死動(dòng)物。采集血液以取得血清，并將所有的足爪收集到10。/oNBF用于組織學(xué)研究。收集血清并凍存于"80。C用于免疫球蛋白和細(xì)胞因子測定。經(jīng)m!L-17RA-Fc治療的小鼠各組的平均足爪評分示于下^9。勤.經(jīng)m!L47RA-Fc治療的CIA模型小鼠各組的平均足爪評分<table>tableseeoriginaldocumentpage132</column></row><table>注第l天為治療開始的第一天；每兩天通itip.注射給予治療。數(shù)據(jù)表示為平均值+SEM。*與PBS治療的組的平均足爪評分有J^性差異(p<0.05)。經(jīng)iimlH7RA-Fc治療的小鼠與用PBS治療的小Ii目比，在臨床評分的嚴(yán)重程^Ji^在劑量^l性的顯著下降。使用IOjigmlL-17RAFc治療的小IA現(xiàn)出^^性最低的療效(即在10天的治療中僅有3只小IL^現(xiàn)出^^療效)。當(dāng)使用重復(fù)性量JLANOVA進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，佳月10和25照m!H7RAFc治療的小鼠與PBS治療組相比，隨時(shí)間的趨勢有顯著差異(p<0.05);使用75或150照mlL-17RAFc治療的小鼠與PBS治療纟^目比，隨時(shí)間的趨勢有M著的差異(p<0.001)。^J^mlL"17RA-Fc治療的小lLii^現(xiàn)出劑量,性的患病足;Mt量的減少，患病動(dòng)物與未患病的預(yù)^(prebled)動(dòng)物相比較，在^C^束時(shí)測量的所有血清細(xì)胞因子(IL-ip、-6、-10、-12、-15、17、IP-IO、GM-CSF、TNF>a、MIP-la、MCP、KC和RANTES)的血清水平均升高。^^ImlL-17RA-Fc治療后，細(xì)胞因子IL-ip、-6、-10、-lS和MIP-la的血清水平比PBS治療組低。在使用150照mlL-17RA-Fc治療的動(dòng)物中觀察到上述1^#^>^大也^^著。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測量發(fā)現(xiàn)mlL-17RA-Fc的血清水平呈劑量依賴性的升高。組織學(xué)分析證實(shí)，在關(guān)節(jié)炎癥和關(guān)節(jié)損害方面M現(xiàn)出劑量依賴性的降低，使用75jigmlL"17RA-Fc治療的小鼠組表現(xiàn)出顯著性降低，p<0.01;使用150將mlL-17RA-Fc治療的小鼠^E^L出最大的療效(p<0.001)。通過對血清進(jìn)行ELISA分析發(fā)現(xiàn)，所有患病的動(dòng)物的抗^f、抗體的水平均比預(yù)取血的動(dòng)物高。在各治療組之間未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。總而言之，上述結(jié)果表明，本文所述的人類IL-17RC和IL"17RA/RC蛋白的鼠類^J^！物(例:WiIL-17RA-Fc)能夠,與這一合適的關(guān)節(jié)炎^t型相關(guān)的炎癥以及降低疾病發(fā)病率并緩解疾病進(jìn)程，因此表明人類IL47RC和IH7RA/RC蛋白具有治療A^類關(guān)節(jié)炎的效力。實(shí)施例24IL"17RC在表iiapl/nfkb轉(zhuǎn)錄因子的鼠類測定細(xì)胞系Nih3t3/kzl42.8中的穩(wěn)定狄達(dá)^Jl含有人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)和甲氨喋呤抗'錄因(二氯葉酸還原酶，011111)的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染鼠類11*313/1142.8測定細(xì)胞系，使用市售的試劑盒(Mirus，Madison，WI.Cat.弁MIR218)并^廠商的說明進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞置于添加有l(wèi)jiMmtx的生"^"養(yǎng)基中培養(yǎng)，以針對含有人類IL-17RCxl轉(zhuǎn)基因的表達(dá)栽#^^行篩選。在篩i^得到人類IH7RCxl轉(zhuǎn)染混合物，并將其命名為nih3t3/kzl42.8/hcytorl4xl。AVf^lnih3t3/kzl42.8測定細(xì)胞系進(jìn)行螢光素酶測定由于11也3/1142.8具有穩(wěn)定的1142報(bào)告物，因此無需佳月腺病毒感染來加AJ1—報(bào)告物。這樣就簡化了愛光素酶的測定步驟，M的測定步驟如下將111113(3/1142.8細(xì)胞以5000細(xì)勿孔的密>1鋪于細(xì)1&^輛包被的白色固體96孔板上(Cat#3917.Costar),使用含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸鹽的DMEM/l(T/oFBS鋪板，婦7。C、5。/。C02的條件下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基，更換為含有谷氨酰胺和添加了丙酮酸鹽的DMEM/1。/。FBS培養(yǎng)基，并在37。C、5。/。C02的糾下培養(yǎng)過夜。2.螢光素酶測定，以測量H^17A和F對穩(wěn)定的kzl42報(bào)告物的激活在用DMEM/P/。FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜后，用無血清培養(yǎng)基(添加有0.28%BSA)稀釋人類IL-17A和IL-17F配體。在加入配^#釋液后將細(xì)胞在37。。和5%0)2糾下培#4小時(shí)，然后移去培養(yǎng)基^H吏細(xì)胞,15辨，<^螢光素酶測定系統(tǒng)和試劑(Cat翻1531Promega.Madison，WL)和微量^JUB十測量平均熒光強(qiáng)度(MFI)。檢測濃度范圍為0.1-1000ng/ml的兩種配體的活性。nih3t3/kzl42.8/hcytorl4xl轉(zhuǎn)染混合物表現(xiàn)出的對于鼠類IL-17A配體的活性與母細(xì)胞系相似(實(shí)施例14)。然而，cytorl4xl轉(zhuǎn)染體^^^J(L出增高的對于人類IL-17A和F處理的應(yīng)答性，甚至即使在上述配體濃度^f^20飛克時(shí)也有上述作用。mlL-17A的信號傳導(dǎo)與母細(xì)胞系(實(shí)施例14)^目似這一事實(shí)表明，表iiA類IL-17RC的細(xì)胞并沒有常見的非特異性問題，而且鼠類IL-17A很可能是通過內(nèi)源性鼠類nih3t3細(xì)胞的IU7R或IL"17RC受^f^^行信號傳導(dǎo)的。因此，人類IL-17A和IL-17F在如此低的配體濃度下導(dǎo)效JVIFI提高的這一事實(shí)可食汰明，細(xì)!^j"于那些配料有特異性的高應(yīng)答性，這是通過狄達(dá)的人類IL-17RC受體介導(dǎo)的。這一結(jié)果具有重要的臨#生物學(xué)方面的意義和應(yīng)用。例如，生理環(huán)境可能導(dǎo)ftlH7RC受體局部上調(diào)，而這^^吏得該區(qū)域?qū)τ贗L-17A和IH7F有高應(yīng)答性，從而導(dǎo)致在配體濃度非常低時(shí)產(chǎn)生生物激活，該配體濃度比沒有IL-17RCit4達(dá)時(shí)所推測的配體濃度低得多。因此，僅需要極低的可溶性受體水平就足以拮抗上述假設(shè)的較低的配體濃度，這種極低的可溶性受體水平比本領(lǐng)域技#員以前認(rèn)為的或>^人的水平^##多。實(shí)施例25IL-17F和IL-17A活性的拮抗劑降低炎性腸病(IBD)^型的疾病發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有IBD的患者的培養(yǎng)的腸組織所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的水平要高于與來自^Xt照者的組織。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于IL畫1P、IL~4、IL"5、IL-6、IL~8、IL畫12、IL-13、IL~15、H7A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN個(gè)MIP家絲員、MCP-1、G"和GM-CSF等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與IBD例如克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC0目關(guān)的癥狀和病理。上述途徑和組分則可導(dǎo)致在體內(nèi)，膽到的組織和細(xì)1^員傷/破壞。因此，這一模型可^^以IBD的炎性介質(zhì)升高的特征。而且，絲在上述炎'^且分的糾下培養(yǎng)來自^fc^t照者或來自人類腸上皮細(xì)胞(IEC)細(xì)胞系的腸組織時(shí)，可以X!^炎性途徑的信號傳導(dǎo)以^Si且織和細(xì)胞損傷的跡象?？赡茉隗w內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的離^JEC模型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷腸組織活^再切片的^^對照者或IBD患者身上，或從死后的尸體組織中采集人類腸組織并使用改進(jìn)的Alexakisetal(Gut53:85-90;2004)的方法對采集的組織進(jìn)行處理。在無菌M下^^大量的PBS小心地清潔樣本，然后使用完全組織培養(yǎng)^(加入抗生素以抑制細(xì)菌it^長)培養(yǎng)組織碎片。對來自相同的組織碎片^^的樣本分別用下述物質(zhì)處理栽體(PBS);重纟^aA類(rh)IL-17A;rWH7F;或rhlH7A+rhlL-17F。此外，還對上述樣^^分別佳月或不佳月IH7A或IL^7F的拮抗劑進(jìn)行處理，所述拮抗劑為單一拮抗劑或聯(lián)合拮抗劑(例如可溶I4IL"17RC)。同樣按照這一實(shí)驗(yàn)過^行人類IEC細(xì)胞系的研究，只是^^財(cái)?shù)募?xì)胞偸液直接進(jìn)行細(xì)M代。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平。來自IBD患者的樣^iW^1rH7A和/或F處理的樣本與^Mt理的^J^J"照組織樣^目比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子水平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如EL^17RC的可溶性受體和抗IL-17RCM，包括本發(fā)明的抗人類IL"17RC單克I^中和^9^^降欣了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們食沐效治療人類IBD。實(shí)施例26疾病進(jìn)程多發(fā)'l!i^化(MS)是一種被認(rèn)為由多種因素介導(dǎo)的復(fù)雜的疾病，所述因素包括存在淋巴細(xì)J^單核細(xì)胞的炎'峻潤和整個(gè)CNS的脫髓鞘作用。小贈(zèng)細(xì)胞是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的巨噬細(xì),細(xì)胞，它在損傷或感染Bt^L活。135小膠質(zhì)細(xì)J^各種CNS疾病包括MS中起重要作用，并可^！于研究疾病的發(fā)生、^L^和治療機(jī)制(NagaietaLNeurobiolDis8:1057-1068;2001;OlsonetaLJNeurosciMethods128:33-43;2003)。因此，可以佳J^永生4^A^類小J^細(xì)胞系和/或已有的人類星形膠質(zhì)細(xì)胞系來研究炎性介質(zhì)對這些細(xì)胞類型的一些作用以及它們的中和能力。炎性介質(zhì)(包括但不限于IHp、ILAIL"8、IL~12、IL-13、IL~15、IL畫17A和F、IH8、IL"23、TNFw、IFN個(gè)MIP家:^員、RANTES、IP-IO、MCP-1、G"和GM-CSF等等)可通過它們激活炎'J^it徑和下'^t^細(xì)胞的作用iMp重與MS^目關(guān)的癥狀和病理。為評估IL"17A和IL-17F的促炎作用和IH7F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和抗體)中和或減輕這些作用的能力，分別用下述一種物質(zhì)處理培養(yǎng)的贈(zèng)細(xì)胞載體；rML國17A;rhlL-17F;rhlH7A+rML國17F。此外，上述培養(yǎng)細(xì)胞^^J或不^IL"17A或IL"17F的拮抗劑進(jìn)行處理，所述拮抗劑為單一拮抗劑或聯(lián)合拮抗劑(例如可溶性IL-17RC)。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收^Ji清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平和/或表達(dá)。存在rML"17A和/或IH7F的培養(yǎng)物與僅用栽體處理的培養(yǎng)物相比，炎性細(xì)胞因子和趨化因子的水平升高。加AIL-17F和/或IL^7A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL"17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和^^)^^降f氐了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類MS^目關(guān)的炎性癥狀。實(shí)施例27IL"17F和IL47A活性的拮抗劑!^f^風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和骨關(guān)節(jié)炎(OA)^型的疾病發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有RA和OA的患者的人類滑液培:^(包括滑液巨嗟細(xì)胞、滑液成纖維細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞)和外植物所產(chǎn)生的炎性^^質(zhì)的水平要高于與來自*^照者的培#^/外植物。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于制瘤素M、IL-ip、n^6、11^8、IL"12、IL-15、11^17A和F、IL>18、IL-23、TNF畫a、IFN個(gè)IP國10、RANTES、RANKL、MIP家:^員、MCP-1、G-和GM-CSF、一氧化氮等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與RA和OA相關(guān)的癥狀和病理。這些途徑和組分則可導(dǎo)致炎性浸潤、軟骨和基質(zhì)丟失/破壞、骨丟失以及前列腺素和環(huán)氧化酶的上調(diào)。因此，這一模型可在體外或離體實(shí)驗(yàn)中^^以RA和OA的破壞性炎性特征。而且，^在上述一些炎'J^且^(例如制瘤素M、TNF-a、IL-ip、IL"6、IL-17A和F、IL-15等等)的糾下培養(yǎng)來自Afe)"照者的夕卜植物和滑液培輛時(shí)，可以，膽炎性途徑的信號傳導(dǎo)?？墒硉^體內(nèi)對人類RA有效的療法也應(yīng)該育誠過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的體外或離僻^^型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷關(guān)節(jié)置換的^J^照者或RA或OA患者身上，或v^L后的尸體組織中采集人類滑液外植物，并使用改進(jìn)的WooleyandTetlow(ArthritisRes2:65-70;2000)^vanHof等(Rheumatology39:1004-1008;2000)的方法對夕卜植物進(jìn)行處理。還研究了滑M纖維細(xì)胞、滑液巨噬細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)物。對復(fù)制樣本分別用下述一種物質(zhì)處理載體(PBS);重纟^aA類(rh)IL-17A;rWL"17F;或rWL"17A+rWL-17F，還有一些樣本中含有了制瘤素M、TNF-a、IL"ip、IL-6、IL-17A、IL-17F和IL-15的不同組合。此外，還對上述樣本分別佳月或不佳月IL-17A和/或nrl7F活性的拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IH7RC抗體，包括本發(fā)明的抗人類IL-17RC單克隆和中和:^9進(jìn)行處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平。來自RA或OA患者的樣^U吏用rMI^17A和/或F處理(單獨(dú)處理或與其他炎性細(xì)胞因子""^t理)的樣本中，與^M:理的A^t照夕卜植物或iMt理的細(xì)j^^^相比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子水平升高。加AJL-17F和/或IH7A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IH7RC抗體，包括本發(fā)明的抗人類IL-17RC單克缺中和^^)顯著斷氐了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類RA和OA。實(shí)施例28IL"17A和IL-17F的功能性應(yīng)答^J^人類IL"17RCxl(SEQIDNO:l)和小鼠IL-17RCxl(SEQIDNO:25)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NIH-3T3/KZ142細(xì)胞。如上所述，佳月IL-17A、IL"17F、鼠類IL"17F和合itiW照對每種細(xì)胞系進(jìn)行劑量應(yīng)答處理，處理7憤和15憤。當(dāng)4賴IL^17RCxl(SEQIDNO:l)轉(zhuǎn)染時(shí)，IH7A和IL-17F對磷酸化lKB"a和p38MAPK轉(zhuǎn)錄因子產(chǎn)生劑量，性應(yīng)答,這t時(shí)照細(xì)胞系中固有信號傳導(dǎo)高大約30%。當(dāng)使用鼠類IL"17RCxl(SEQIDNO:25)轉(zhuǎn)染時(shí)，IL-17A和IL"17F不能使信號傳導(dǎo)增強(qiáng)。鼠類IL"17F不能^A類或鼠類IL"17RCxl的信號傳導(dǎo)增強(qiáng).137實(shí)施例29鼠類疾病模型中IL-17A、IL-17F、IL-17RA和n^l7RC的表達(dá)^J1針對IL-17A、IL隱17F、IL-17R和IL畫17RC表達(dá)的已知技術(shù)，分析了四種疾病(哮喘、DSS結(jié)腸炎、特應(yīng)性皮炎和實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦絲炎)的鼠類模型。在哞喘模型中，n^l7A和IH7F在患病和未患病小鼠的肺、脾臟、肺引流淋巴結(jié)和肺浸潤細(xì)胞中的表達(dá)均低到了不能檢測的水平。發(fā)現(xiàn)IU7RC信使RNA員中的表達(dá)比在脾I^N沐巴結(jié)中高，但該表ii7JC平并不受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17R在脾Ji^p肺引流淋巴結(jié)中的表達(dá)比^^中高，但該表ii^C平也不受疾病的調(diào)節(jié)。與哞喘模型不同，在DSS結(jié)腸炎模型中，患病小鼠的近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸中IL-17A和IL-17F的水平均上調(diào)，^正常小鼠中并沒有這種上調(diào)。在腸系膜淋巴結(jié)中這兩種細(xì)胞因子均未明顯上調(diào)。jH^卜，i^mil兩種細(xì)胞因子在急性的DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎環(huán)境中上調(diào)，而在慢性的DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎中則沒有上調(diào)。發(fā)現(xiàn)IL-17R在腸系膜淋巴結(jié)中的表達(dá)比在近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸中的表達(dá)高，但該表#平并不受疾病的調(diào)節(jié)。相反地，IL-17RC在近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸組織中的表達(dá)比在腸系膜淋巴結(jié)中的表達(dá)高。IL-17RC的表ii^平也不受疾病的調(diào)節(jié)。在特應(yīng)性皮炎中，不能檢測到IH7AmRNA。發(fā)jmi7F在^L和^J^引流淋巴結(jié)中表達(dá)，但L;l表ii^平似乎并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17RmRNA在^J統(tǒng)引流淋巴結(jié)中的表達(dá)比在^J統(tǒng)中高，但該表ii^平并不受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17RC在^J^中的表達(dá)比在M可1^姚巴結(jié)中高，但該表#平也不受疾病的調(diào)節(jié)。在實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦械炎模型中，患病小鼠的糾中IL"17A和n^l7F的水平似乎均上調(diào)，^a使泉小鼠中并沒有這種上調(diào)。IL-17F在淋巴結(jié)中的表達(dá)比在，中高，但是淋巴結(jié)中的表ii^平并不受疾病的調(diào)節(jié)。然而，在這些組織中總體的表^C平都是非常低的。IH7R^淋巴結(jié)組織中的表達(dá)比在腦和M中高。未測"^JL-17RC。簡而言之，在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎棘中和實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦糾炎模型中，IL-17A和IL"17F的表達(dá)似乎受疾病的調(diào)節(jié)，但是在哞喘或特應(yīng)性皮炎中IL-17A和IL-17F的表達(dá)并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)。H7R和IL-17RC的表達(dá)并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)，但^JL"17R似乎M巴樣組織中表逸艮高，而IL-17RC似乎在非淋巴樣組織中表達(dá)較高。實(shí)施例30IL-17RCAIL-17A和IL"17F二者的激活作用的介質(zhì)^^l含有人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)和甲氨喋呤抗性基因(二氫葉酸還原酶，DHFR)的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染鼠類nih3t3/kzl42.8測定細(xì)胞系a類似地，還使用人類IL-17RA(SEQIDNO:21)轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系。使用市售的試劑盒(Mirus，Madison，WI.Cat.弁MIR218)并根據(jù)廠商的說明進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞置于添加有l(wèi)jtMmtx的生"^養(yǎng)基中培養(yǎng)，以針對含有表，建體的表ii^^ii行篩選。在篩選后得到轉(zhuǎn)染混合物，并將其命名為nih3t3/kzl42.8/hcytorl4Xl和nih3t3/kzl42.8/IL-17R。A)使用基于1101313/1€2142.8的細(xì)胞系進(jìn)行螢光素酶測定由于基于111113/1142.8的細(xì)胞系具有穩(wěn)定的31/11&1^艮告物(1142),因此無需使用腺病毒感染^入這一報(bào)告物。這樣就簡化了螢光素酶的測定步驟，M的測定步^^u下1.細(xì)戯板將細(xì)胞以S000細(xì)胞/孔的密度鋪于細(xì)胞培養(yǎng)物包被的白色固體96孔板上(Cat.#3917.Costar)，^f^I含有^^SU^添加了丙酮^L的DMEM/10。/oFBS鋪板，在37。C、5。/。C02的M下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基，更換為含有^^iUfe和添加了丙酮酸鹽的DMEM/l。/。FBS培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)物在37°C、5%0)2的糾下培養(yǎng)過夜。2.螢光素酶測定，以測量H^17A和F對穩(wěn)定的kzl42^艮告物的激活在用DMEM/1。/。FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜后，用無血清培養(yǎng)基(添加有0.28%BSA)稀釋人類IL"17A和IL-17F配體。在加入配^#釋液后將細(xì)胞在37"€和5%<:02糾下培#4小時(shí)，移去培養(yǎng)基^H吏細(xì)胞狄15^t,^^螢光素酶測定系統(tǒng)和試劑(Cat紐1531Promega.Madison，WL)和^:量;feJUt計(jì)測量平均熒光強(qiáng)度(MFI)。枱"測濃度范圍為O.l-lOOng/ml的兩種配體的活性。下文所述的EC50為至少4次實(shí)驗(yàn)的平均值。nih3t3/kzl42.8/hcytorl4xl轉(zhuǎn)染混合物表現(xiàn)出的對于鼠類IH7A配體的活性與母細(xì)胞系相似，其EC50約為4ng/ml(實(shí)施例14)。hcytorl4xl重組細(xì)胞系中mlL"17A的信號傳導(dǎo)與母細(xì)胞系(實(shí)施例14)^目似這一事實(shí)表明，鼠類IH7A很可能是通過內(nèi)源性鼠類nih3t3細(xì)胞的IL-17RA或IL"17RC受^i行信號傳導(dǎo)的，而且并不通ithcytorl4Xl激活細(xì)胞。然而，h!L-17RCXl的轉(zhuǎn)染混^對于人類rH7A的處3^現(xiàn)出更高的應(yīng)答l"生，平均4次實(shí)驗(yàn)的EC50為0.41ng/ml，而母細(xì)胞系為2.8ng/ml(重組細(xì)胞系中的￡。50增強(qiáng)6.8倍)。而且，ML-17RCX1重組細(xì)胞系對于人類IL"17F^現(xiàn)出更高的應(yīng)答性，其EC鄰為0.61ng/ml,而母細(xì)胞系為10ng/ml(重組細(xì)胞系中的EC50增強(qiáng)17倍)。ML-17RCX1細(xì)胞系中ML^17A和F的效力增加與人類IL-17RCXl為人類IL-17A和IL-17F二者的高親和力受^it一事實(shí)相一致。相反地，WL^17RA重組細(xì)胞系^tUL-17A有高敏感性，其EC50為0.6ng/ml，而母細(xì)胞系為2.8ng/ml。hEL-17RA重組細(xì)胞系對于UL-17F的EC50沒有增強(qiáng)，重組細(xì)胞系的IL"17FEC50為12.4ng/ml，而母細(xì)胞系為8,9ng/ml。這一結(jié)果很有意義，因?yàn)樗貏e地表明了ML-17RCX1是ML-17A和hlH7F二者的激活作用的介質(zhì)，而JLi^明hlL"17RA僅介導(dǎo)hEH7A激活的信號傳導(dǎo)，但不介導(dǎo)ML-17F激活的信號傳導(dǎo)。實(shí)施例31IL-17A和IL-17F的靜脈內(nèi)給藥本實(shí)施例使用BALB/c小鼠測定了鼠類或人類IL-17A或IL-17F的靜脈內(nèi)送遞在不同時(shí)間點(diǎn)對于全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)和血清細(xì)胞因子/趨化因子的影響。I.V.給予l陶的mlL-r7A可導(dǎo)致在給藥后1-2小時(shí)循環(huán)系統(tǒng)中的嗜中性粒細(xì)胞增加約2倍(通過CBC測定)、血清中KC和MCP-l增加約10倍(通itLuminex測定)；給予5ng的WL-17A^^Jl^到了對于上述趨化因子的相似的影響。在用l照mlL-17A、5fighlL"17A或5照hlL"17F處S^2小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)，小鼠體內(nèi)血，細(xì)胞水平也有明顯的增加，其中給予lngmlL-17A時(shí)表現(xiàn)出的增加程JL^高。I.V.給予鼠類和人類IL"17F在1小時(shí)和2小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)導(dǎo)致血清IH5明顯增加(通itLuminex測定)，血清KC和MCP-1在上勤目同的時(shí)間點(diǎn)有少量增加。實(shí)施例32靜脈內(nèi)給予的BL-17A和IL"17F的中和為用Lp,給予的可溶Ii受^(針對鼠類g己條予mlL-17RA-Fc;針對人類配體給予可溶feiA類n^l7RC)中和靜脈內(nèi)給予的IH7A和IL-17F所介導(dǎo)的細(xì)胞因子和趨化因子的增加，通過i.p.注射給予雌性BALBZc小鼠PBS、100將mlL-17RA-FciU00嗎可溶fciA類IL"17RC,在三小時(shí)后通iiC靜脈注射下列物質(zhì)PBS;2將的mlL-17A或mlL47F或2ng的mlL-17A+mlL-17F(對于接受mlH7RA-Fc的小鼠)；或2照的ML"17A、MH7F或2魄的ML"17A十WL-17F140(對于接受可溶I4A類IL-17RC的小鼠)。在配條藥后l小時(shí)采集血清，分析少數(shù)血清細(xì)胞因子和趨化因子。通過Lp.給予鼠類可溶性受體進(jìn)行預(yù)處理的小鼠與用PBS+鼠類IL-17A處理的小！^目比，由鼠類IL"17A介導(dǎo)的IL47A和KC(CXCL1)的血清濃度的增加量顯著下1%(降欣約2至2.2倍；P<0.05)。經(jīng)也p.注射人類IL"17RC-Fc處理的小鼠表現(xiàn)出由人類IL-17F介導(dǎo)的IL"15血清濃度的增加量的^^下斷^f氐約2倍；p<0.05);由IL-17A介導(dǎo)的KC濃度的增加量的顯著下降(降低約30。/o;p<0.05);由人類IL-17A+IL-17F介導(dǎo)的KC濃度的增加量的^^下斷降低約25。/o;p<0.05);以及由人類IL"17F或IH7A+IL-17F介導(dǎo)的IU5濃度的增加量的顯著下斷降低約2倍；p<0.05)。實(shí)施例33可溶性IL-17RC和IL"17RC/IL"17RA多肽的基于板的蛋白結(jié)合測定按照下述步^ii行捕敘IA:用lng/ml的山羊抗AjgG抗體包toLISA板，并在4。C下培養(yǎng)過夜。洗:^并用200nl/孔的l。/。BSA在室溫下封閉板l小時(shí)。洗滌，然后向^Ji^入可溶性受體t/f^A1586F，A1587F)或IL"17RCxl(A1034F)的系列稀釋液(100ng/ml直至0.10fig/ml),在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，以10:1(EL-17A)或6:1(IL-17F)的比例加入生物素標(biāo)記的配體，并在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入0.5ng/mL的鏈親^^-^^itlL化物酶，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入TMB底物^4^t。通it^入終止溶^f止AjL(注除非特別指明，否則上it^斤有試劑的體積均為50nI/孔)。陽性結(jié)果是指較高的OlMi，通常應(yīng)高于0.5。結(jié)果顯示，在這一測定中，構(gòu)建體1342(SEQIDNO:74)不與IL-17A結(jié)合，與IL-17F微弱結(jié)合。構(gòu)建體1341(SEQIDNO:72)與IL-17A和EL-17F二者^t很強(qiáng)的結(jié)合。IH7RCxl與IL-17A和IL"17F結(jié)合。按照下述步ltii行中和EIA:用lng/ml的可溶性受^KA1034F)包掩l并在4。C下培養(yǎng)過夜。洗械并用200nl/孔的l。/。BSA在室溫下封閉板l小時(shí)。在封閉的同時(shí)，在另一塊^Ji將相同^M、的可溶性受體變^(A1586F，A1587F)的系列稀釋液(50ng/ml直至0.05jig/ml)與生物素標(biāo)記的配體以10:1(IL"17A)或6:1(H^17F)的比例培養(yǎng)，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌封閉好的板，然后向封閉好的5^gUb^入受^-配體復(fù)合物，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入0.5jig/mL的鏈親和素-辣^itlL化物酶，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入TMB底物反應(yīng)7分鐘。通it^入終止溶液終止^(注除非特別指明，否則上述所有試劑的體積均為50fil/孔)。陽性結(jié)果是指較低的OlMt，通常應(yīng)低于0.5。結(jié)^E示，構(gòu)建體1342(SEQIDNO:74)^弱地中和IH7A與IL-17RCxl的結(jié)合，但肯M艮強(qiáng)地中和IL-17F與IL-17RCxl的結(jié)合。構(gòu)建體1341(SEQIDNO:72)微弱地中和BL-17A與IL-17RCxl的結(jié)合以及微弱地中和IL-17F與IL-17RCxl的結(jié)合。中和表明變體蛋白與生物素化配糾目結(jié)合。實(shí)施例34FACS結(jié)合測定方法為評估本發(fā)明的可溶性IH7RC和IL"17RC/IL-17RA多肽與配體EH7A和IH7F結(jié)合的能力，應(yīng)用了基于流式細(xì)胞術(shù)的竟?fàn)幗Y(jié)合測定。在存在配體IL-17A或IL-17F的條件下培養(yǎng)經(jīng)4^:IL-17RCx4^定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞系，偵月靶向結(jié)合配體的可溶性受體可以枱側(cè)和相對定量檢測結(jié)合在細(xì)胞表面(因此未被可溶性受體結(jié)合)的配體。對配體生物素化使得可以佳月鏈親和素綴合的熒光團(tuán)作為二4^ii行FACS^測。1^可溶性受體的滴定，細(xì)胞結(jié)合配體的減少可通過細(xì)胞的平均熒光的減少來記錄。在染色培養(yǎng)_^(11888+1%884+0.1%疊氮鈉+10mMHEPES)中將ljig/ml的各種生物素化配體分別與滴定量的可溶性受體預(yù)先混合，使其^^積為100ji1,在室溫下培養(yǎng)15分鐘。通過下述步驟處理經(jīng)4^JL-17RCx4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞系以用于配體染色用乙二胺四乙酸鈉(Invitrogencat.l5040-066)重懸細(xì)胞，平衡至2乂105細(xì)1&/10(^1，沉淀細(xì)胞并重懸于配M溶性受體的預(yù)混合物中。將染色的細(xì)胞在4'C下培養(yǎng)30分幹，用染色培養(yǎng)基洗滌l次，然后用1:100的鏈親襯-PE(BDPharmingencat.554061)進(jìn)行染色。將細(xì)絲4'C下i^i^養(yǎng)30誠，用染色培養(yǎng)基洗滌2次，并重懸于l:l的染色培養(yǎng)絲Cytofix(BDBioscience554655)的混合物中。佳月BDLSRII流式細(xì)Jffc^或類似的儀器進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析。圖5顯示的是一^際準(zhǔn)圖。該圖是^J^Prizm軟件程序產(chǎn)生的。Y軸的數(shù)值^4標(biāo)準(zhǔn)化的MFI值(該標(biāo)準(zhǔn)化是^f5l有配體時(shí)的MFI設(shè)為100%,沒有g(shù)e/f^沒有可、溶性受體的對照孔的MFI設(shè)為0%)，并由jHl4示配體與細(xì)胞結(jié)合的百分比。該軟件可針對每條曲線計(jì)算IC50。實(shí)施例35生物素化人類IL-17A和IL-17F與可溶I4IL"17RC/IL^17RA多肽的特異性結(jié)合的抑制使用本文所述的結(jié)合測定法來測定可溶性H7RC和IL-17RCH7RA多肽與IL-17A和EL"17F結(jié)合的能力。如上所iDlk^^^合研究，只是在結(jié)合反應(yīng)中增加了另外的可溶性多肽，例如SEQH)NO:157和158。這些可溶性多肽抑制人類IH7A和IL-17F二者與IL47RC轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合，^制程度與可溶hiA類IL-17RCxlFc融M白(SEQD)NO:64)^目同。其余的可溶性多肽包^SEQIDNO:157和158的可溶法多肽，它們都包括在下勤0中。表10*<table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table>*基于細(xì)胞的竟?fàn)幗Y(jié)合IC50(ng/pL);構(gòu)建體的排序是按照對每種S己體的IC50,vM^強(qiáng)的結(jié)a至最弱的結(jié)^^。實(shí)施例36IL"17RC和IL"17RC/IL-17RA可溶性多肽對IL-17A和IL"17F的結(jié)合親和力按照下述步驟，^"測BL-17RCxl、IU7RA和可溶性IL^7RC/IL"17RA可溶性多肽(SEQIDNO:157和158)對IU7A和IL-17F二者的結(jié)合親和力用pH5,0的乙酸鈉將山羊^AjgG"Fc特異性抗體(Jackson#109-005-008)稀釋至50^ig/ml，并固定在CM5Biacore芯片上。在^-"系列濃度的每種配體^/v以觀察結(jié)合和解離之前，按照理論上的結(jié)合最大值來優(yōu)化捕獲受體的實(shí)驗(yàn)方案。測試了可溶性受體和IL-17RC/IL"17RA多肽與一系列濃度的每種配體的結(jié)合。在各輪之間通過2x30秒的注射pH1.75的甘氨酸使表面再生。使用BiacoreEvaluation軟件評估數(shù)據(jù)以確定動(dòng)力學(xué)數(shù)值，并示于下^J1。表11*人類H7RCxl對人類IL-17A的親和力ka(l/!V1s)kd(l/s)1.05E+064.90E-04469E-101.24E+064.38E-043.52E-1005-20059.020.4248.860.32405-20057.220.3787.570.54904-2006人類IL-17RCxl對人類IL"17F的親和力ka(l闊kd(l/s)9.91E+054.31E-044.35E-101.11E+063.84E-043.46E-10可'溶性IL"17RaiL^17RA多^W人類IL-17A的親和力ka,s)kd(l/!s)1.42E+066.22E-054.39E-1120.50.4602.61E+069.95E-053.82E-1J18.30.888可溶性IL"17RC/IL"17RA多M人類IL-17F的親和力04-2006kd(^《",f^.吣麟浙，戲,1.82E+062.61E-041.43E-102.49E+063.15E-041.26E-10人類IL-17RA對人類IL-17A的親和力3.70E+058.65E-052.34E-102.89E+058.57E-052.96F.-I0人類IH7RA對人類IL"17F的親和力ka(1/Ms)Jid(1/s)*二1^^v:KmafxlKV^"2.09E+045.56E-042.66E-0820.30.0712.55E+044.40E-041.72E-089.90.076*顯示了平^數(shù)和^速率常數(shù)，這些值都^器的限度范圍內(nèi)。Chi2指的是結(jié)合曲線^f估擬合曲線之間的殘差的平方和。該^t^^近0，則說明數(shù)據(jù)的置信M高。顯示的這些數(shù)據(jù)置信度桐艮高。10.211.20.4950.54406-2006'織鎰卦腐，繊膨29.50.24935.10.197■IL-17RC的結(jié)合。特別地，人類IL-17RC對人類IL-17A和人類IL"17F絲出相似的結(jié)合親和力，解離平衡常數(shù)(KD)約為400皮摩(pM)?？扇苄訧L-17RC/IL-17RA多M合人類IL^17A的親和力(KD約為40pM)比其結(jié)合人類IL-17F的親和力(KD約為140pM)略高。人類EL-17RA對于人類IL-17A和人類IL-17F的gi體結(jié)合親和力差異最大，它對人類IL-17A的KD約為300pM而對人類IL-17F的KD約為30納摩(nM),相差了100倍之多。實(shí)施例37重纟^EA類IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8和IL"17RCx4/NIH3T3/KZ142.8^L告物測定細(xì)胞系的產(chǎn)生系，即人類H7RA(SEQIDNO:21)或IH7RCx4(SEQIDNO:166)的重組體。這可通iW含有每種上^DNA的表^建^^染上述細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)。所*達(dá)載體利用了pzmpll，它含有二氬葉酸ii^酶基因。因此，^JU添加有l(wèi)nM曱氨喋呤的生長培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)染體以產(chǎn)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染;^^。得到的測定細(xì)胞系被稱為hlL"17RA/NIH3T3/KZ142.8和hlL-17RCX4/NIH3T3/KZ142.8。實(shí)施例38可溶性IL"17RC/IL-17RA多肽拮^/v類IL47A對重^A類IL"17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活^J^下述步驟測定可溶性IH7RC/IL-RA可溶性多JI^SEQIDNO:157和158)對人類IL-17A激活重組ML"17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的竟?fàn)幮Яτ糜诎补馑孛笢y定的細(xì)胞鋪板和制備與本文所述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)胞給予一系列2倍劑量的可溶fci受^(設(shè)三個(gè)平行樣)，所述可溶法受體的體積為l倍#^"濃^終濃度的2倍，包括上i^斤述可溶性多肽即IH7RA和IH7RC起始濃度為2ng/ml(將^a入百e^后成為lfig/ml的終濃度)。然后再加入1^^M、的lng/ml的IL"17A，這一濃度也是終狄0.5ng/ml的2倍，在受^配體^^在—^M為0.5ng/ml的終濃度。對接受了0.5ng/ml的IU7A而未接受受體的三^HH亍樣的系列測定激活的最大值。對只接受了既不^S己體也不含可溶性受體的測"^養(yǎng)基的三個(gè)平行樣的系列測定激活的J^值。數(shù)據(jù)分析顯示，上述可溶性多肽抑制IL-17A激活上述細(xì)胞系的IC5(KiL為7ng/ml?？扇苄訧L-17RA或IH7RC即使在最高劑量(ljig/ml)時(shí)，也不能足夠有效地拮抗0.5ng/ml的hlL-17A對該細(xì)胞系的激活。實(shí)施例39可溶性IL-17RC/IL-17RA多絲^A類IL^17F對重纟i/v類IL隱17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活^Jl下述步驟測定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶l!i多楓SEQIDNO:157和158)對人類IL"17F激活重組ML"17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞(如上所述)的竟?fàn)幮Яτ糜谖灩馑孛笢y定的細(xì)Jf&^板和制備與本i^斤述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)*予一系列2倍劑量可溶性受^K設(shè)三^HNt^),所述可溶性受體的體積為l^f^積，濃^7終濃度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始濃度為4ng/ml(將在加入配體后成為2ng/ml的終濃度)。然后再加入1倍體積的40ng/ml的IL"17F，這一i^JL也是終刻UOng/ml的2倍，在受^>配體^^在""^就成為20ng/ml的終濃度。對接受20ng/ml的IL"17F而無未接受受體的三個(gè)平4亍樣的系列測定激活的最大值。對接受既不含酉沐也不含可溶性受體的測試培養(yǎng)基的三個(gè)平行樣的系列測定激活的基線值。數(shù)據(jù)分析顯示，IL-17RC/IL"r7RA可溶性多肽抑制IU7F激活上述細(xì)胞系的IC50值為0.48jig/ml?？扇苄訧L-17RA或IL"17RC即使在最高劑量(2ng/ml)時(shí)，也不足以表現(xiàn)出對20ng/ml的n^l7F對該細(xì)胞系的激活的^r拮抗作用。實(shí)施例40可溶性IL-17RC/IL-17RA多J3fc^^A^類IH7F對重纟JLA類IL"17RCx4/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活^^下述步驟測定可溶性IH7RC/IL"RA可溶性多J3i(SEQIDNO:157和158)對IL-17F激活重組hlH7RCX4/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞(如上所述)的竟?fàn)幮Яτ糜谖灩馑孛笢y定的細(xì)Jf&4甫5^制備與本文所述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)*予5#系列劑量的可溶昧受^K設(shè)三個(gè)平行樣)，所述可溶性受體的體積為l倍體積，濃度為終濃度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL"17RA和IU7RC起始濃度為4ng/ml。然后再加入1倍體積的2ng/ml的IL"17F批次A1275F,這一濃度也是終濃度lng/ml的2倍，在受^_配體^^在一為lng/ml的終濃度。對接受lng/ml的IL-17F而未接受受體的三個(gè)平行洋的系列測定激活的最大值。對接受既不含S己體也不含可溶性受體的測"^養(yǎng)基的三個(gè)平行樣的系列測定激活的M值。數(shù)據(jù)分析顯示，IL"17RCH7RA可溶l!i多狀抑制IL-17F激活上述細(xì)胞系的lC50值為0.8fig/ml。可溶性IL-17RC的IC50為6fig/ml，而IL-17RA在^劑量時(shí)都沒有拮抗作用。實(shí)施例41可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽中和人類IL47A和IL-17F二^^導(dǎo)G"CSF、11^6和IL"8的活性^Jl人類IL-17A或^^I人類IL-17F處SA類小氣ilJi皮細(xì)胞(SAEC)，在48小時(shí)后收集上清液。對這些上清液的測定顯示出G"CSF、IL"6和IL-8的劑量^!性"^導(dǎo)，結(jié)果示于下表12。表1248小時(shí)后上清液中誘導(dǎo)產(chǎn)生的增加倍數(shù)IL"6IL"8處SSAEC的物質(zhì)人組-17A:50ng/ml2613810ng/ml241462ng/ml14830.4ng/ml1383人類IL47F:250ng/ml1511450ng/ml108310ng/ml8822ng/ml452對于用10ng/mlA類IL"17A或50ng/ml/w類IL"17F處理的SAEC，還使用了0.01-10fig/ml劑量的可溶性IL"17RC/IL-17RA多Jlk(SEQEDNO:157和158)進(jìn)行處理(^AJ'J細(xì)^前先將配體和可溶性多JlM^7°C下一^^養(yǎng)30^#),在48小時(shí)后收集上清液。如下勤3所示，所iiJi清液中的G"CSF、IL"6和IL^8的^J:下降，表明可溶性IL"17RC/IL-17RA多肽能夠有放地中和人類IH7A和人類IL-17F誘導(dǎo)這些細(xì)胞因子的活性。應(yīng)該注意的是，不能測定IL"6中和的IC50值，因?yàn)樵谒鶞y試的可溶性IL"17RC/IL-17RA多肽的最低劑量(0.0lMg/inl)時(shí)，中和才下降到最大值的大約50%)。<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>實(shí)施例42可溶性IL"17RC和n^l7RC/IL-17RA多肚對人類多發(fā)'l^ttt^本的效力多發(fā)'I^^化(MS)是一種被認(rèn)為由多種因素介導(dǎo)的復(fù)雜的疾病，所述因素包括存在淋巴細(xì)J^單核細(xì)胞的炎性浸潤和整個(gè)CNS的脫髓鞘作用。小膠質(zhì)細(xì)胞是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的巨噬細(xì)J^細(xì)胞，它在損傷或感染Bm^:活。小膠質(zhì)細(xì)J^神經(jīng)細(xì)JW在各種CNS疾病包括MS中起重要作用，并可被用于研究疾病的發(fā)生、發(fā)Jl和治療機(jī)制(NagaietaL，NeurobiolDis8:1057-1068;2001;Olsonetal"JNeurosdMethods128:33-43;2003;GiulianietaL，JNeuroimmunol165:83-91;2005)。因此，可以使用原代神經(jīng)細(xì)l&^養(yǎng)物、永生^A類小M細(xì)胞系和/或已有的人類星形M細(xì)胞系,究炎性介質(zhì)對這些細(xì)胞類型的一些作用以及它們的中和能力。炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-ip、IL隱6、IL-8、IL-12、IL隱13、U5、IL畫17A和F、H8、BL~23、TNF國a、IFN個(gè)MIP家絲員、RANTES、IP-IO、MCP-1、G"和GM-CSF等等)可通過它們激活炎性途徑和下游^細(xì)胞的作用^Ma重MS^目關(guān)的癥狀和病理。為評估IL"17A和IH7F對上述細(xì)胞類型的促炎作用和本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶htlH7RC/IL-17RA多J&(SEQIDNO:158)中和或減^il些作用的能力，分別用下述一種物質(zhì)處理培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)JI^U^t細(xì)胞:載體；rWL-17A;rML-17f;rML~17a+rhIL-17f0jH^卜，還對上述培養(yǎng)細(xì)胞分別佳月或不佳月本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL"17RC/IL"17RA多JI^SEQIDNO:158)進(jìn)4亍處理。在不同系列的培養(yǎng)物中，在不存在外源性IH7A或IL"17-F的條降下，將分離自人類受^^的被抗CD3M激活的循環(huán)系統(tǒng)T細(xì)l&^yV^培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)#自細(xì)胞中，藉jHl^供研究激活的T細(xì)lW這些細(xì)胞類型的破壞作用的共培養(yǎng)方法。對T細(xì)胞分別使用或不使用本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多4^SEQIDNO:158)進(jìn)行處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平和/或表達(dá)，還分析細(xì)胞的存活水平。用rML-17A和/或IU7r處理的細(xì)胞與但月載體處理的細(xì)l^目比，炎性細(xì)胞因子和趨化因子的水平和神經(jīng)細(xì)胞的死亡率升高。加入本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL"17RGH17RA多肽(SEQIDNO:158)顯著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)并提高了神經(jīng)細(xì)胞的存活水平c綜上所述，由于這些離體實(shí)發(fā)汪實(shí)了本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)能夠減輕與人類MS的病3^目關(guān)的破壞作用和炎性作用，因此可預(yù)期^^I這類可溶性多Jlfci^力'臺(tái)療能夠有M減輕與人類MS^目關(guān)的炎性癥狀、神經(jīng)細(xì)胞死亡和/或脫髓鞘作用。實(shí)施例43可溶性IL-17RC和IL"17RC/IH7RA多肽對人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")和骨關(guān)節(jié)炎("OA"辦本的效力這些模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有RA和OA的患者的人類滑液培:fM^(包括滑液巨噬細(xì)胞、滑液成纖維細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞)和外植物所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的水平要高于與來自^^t照者的培^^/外植物，這可^it^卜基質(zhì)組^(例如骨和軟骨等)的降解，而這種降解正是上述疾病的標(biāo)志。此外還設(shè)計(jì)了下文所述的共培#^型，以顯示RA/OA滑液和/或激活的T細(xì)胞中存在的炎性介質(zhì)還可能導(dǎo)致P重的炎癥和M降解。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于制瘤素M、IL"ip、IL"6、11^8、IL-12、IL-15、IL-17A和F、IH8、IL-23、TNFw、IFN"y、IP國IO、RANTES、RANKL、MIP家絲員、MCP-1、MMP國9、G"和GM-CSF、一氧化氮等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與RA和OA相關(guān)的癥狀和病理。這些途徑和組分可導(dǎo)致炎性浸潤、軟骨和基質(zhì)丟失/破壞、骨丟失以;5Li^金屬蛋白酶、前列腺素和環(huán)氧化酶的上調(diào)。因此，這一模型可在體外或離體實(shí)驗(yàn)中^^以RA和OA的破壞性炎性特征。而且，絲在上必卜源加入的炎性組^(例如制瘤素M、TNF-a、IL-ip、IL~6、IL-17A和F、IL-15等等)的^ft下，或在存在來自RA患者的滑液(應(yīng)含有內(nèi)源性炎，^且分)的M下，培養(yǎng)來自^fcfej"照者的夕卜植物和滑液培^^時(shí)可以，膽炎'I^降幹Jtit徑的信號傳導(dǎo)?？捎齮^體內(nèi)對人類RA有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的體外或離體模型中起作用。在上述;^型中，從經(jīng)歷關(guān)節(jié)置換的^Xt照者或RA或OA患者身上，或從死后的尸體組織中采IIA類滑:^卜植物，，并H"M^U近的WooleyandTetlow(ArthritisRes2:65-70;2000)^Kan'tHo傳(Rheumatology39:1004-1008;2000)的方法對外植物進(jìn)行處理。還研究了滑液成纖維細(xì)胞、滑液巨噬細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的培頻。對復(fù)制樣本分別用下述一種物質(zhì)處理載錄BS);重組人類(rh)IH7A;rML-17F;或rhlL-17A+rhlL-17F，還有一些樣本中含有制瘤素M、TNF-a、IL-ip、114、IL~17A、EL-17F和IL-15的不同組合。還的樣本。jlt^卜，i^tlii^有樣^分別使用或不佳月本發(fā)明的可溶性多、:例如可溶性IL-17RC多M可溶性IL47RC/n^l7RA多Ji!t(SEQIDNO:158)進(jìn)行處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)和軟骨/骨/基質(zhì)生物才射己(包括上述的那些)的水平。來自RA或OA患者的樣M^^RA/OA滑液、激活的T細(xì)胞、rhlL-17A和/或rhlL-17F處理(單獨(dú)處理或與其他炎性細(xì)胞因子-"^t理)的樣本中，與iMt理的^^照夕卜植物或未處理的細(xì)|^#^相比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子和軟骨/骨/M降陣性生物標(biāo)記的水平升高。加A^發(fā)明的可溶性多^^l^f氐了炎性介質(zhì)和軟骨/骨/M降解性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類RA和OA。實(shí)施例44通it^占膜活^^,測定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL"17RA多JM"人類炎録病("IBD，，辦本的效力這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有IBD的患者的培養(yǎng)的腸組織所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的水平要高于與來自^fct對照者的組織。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于IL畫ip、IL-4、11^5、IL-6、IL~8、IH2、IL-13、IH5、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNT-a、IFN個(gè)MIP家絲員、MCP-1、G"和GM-CSF等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與IBD例如克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)^目關(guān)的癥狀和病理。上iiit:徑和組分可導(dǎo)致在體內(nèi)XSLS到的組織和細(xì)胞損傷/破壞。因此，這一模型可^^IBD的炎性介質(zhì)升高的特征。而且，絲在上述炎'j^且分的糾下培養(yǎng)來自^ft照者或來自人類腸上皮細(xì)胞(IEC)細(xì)胞系的腸組織時(shí)，可以觀察炎'tiit徑的信號傳導(dǎo)以及組織和細(xì)胞損傷的跡象?？赡茉隗w內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的離^IEC模型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷腸組織活#再切片的A^t照者或IBD患者身上，或從死后的尸體組織中采集人類腸組織，并使用改進(jìn)的Alexakis等(Gut53:85-卯，2004)的方法對組織進(jìn)行處理。在無菌條降下^^J大量的PBS小心地清潔樣本，然后使用完全組織培養(yǎng)^(加入抗生素以抑制細(xì)菌it^l長辟養(yǎng)組織碎片。對來自相同的組織碎片';s^的樣本分別用下述一種物質(zhì)處理載體(PBS);重纟^aA類(rh)IL-17A;rML~17F;或rML-17A+rML-17F。此外，可溶性IL-17RC/IL"17RA多Jli(SEQIDNO:158)進(jìn)行處理。同樣按照i^一實(shí)驗(yàn)過^ii行人類IEC細(xì)胞系的研究，只是^^5W的細(xì)胞偸液進(jìn)行細(xì)胞傳代。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平。來自IBD患者的樣4^/f^rML"17A和/或F處理的樣^4iMt理的^i^照組織樣^目比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子水平升高。加A^發(fā)明的可溶性多M著l^f氐了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們負(fù)沐效治療人類IBD。^9f究的另一方面可包括對來自接受有效治療的IBD患者、目前未接受治行比較。實(shí)施例45通itJi;^障功能測定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL"17RA多肽對人類IBD^本的效力維持上皮屏障的完整性是保持胃腸道健康的一個(gè)關(guān)鍵因素。實(shí)騶證據(jù)表明，腸上皮屏障的滲漏可能會(huì)導(dǎo)ItIBD的發(fā)生。位于腸固有層中的免疫細(xì)l&it以維持免^^督并有助于維持上M障的完塾性。然而，長時(shí)間的或失調(diào)的免疫介導(dǎo)的炎癥可能導(dǎo)致上>^障細(xì)胞完塾性和功能的缺陷。設(shè)計(jì)了下述^f究以測量T細(xì)胞產(chǎn)生的IL"17A和/或n^l7F對于上狄障完塾性的直接影響。在本實(shí)施例中，^J^上皮細(xì)胞系例如Caco^2細(xì)J^半iiJ^Ji分化，并在;。通過;估"上皮電P":財(cái)層對染料擴(kuò)散的抗性，隨時(shí)"f司監(jiān)'^上皮^J^單層的完塾性。在共培絲中細(xì)絲層的跨上皮電阻的l^f錄明在共培輛中的T細(xì)J!^單核細(xì)胞的活性誘導(dǎo)了細(xì)J3&^層的破壞?？梢証^H17A和IL-17F的抑制劑，例如本發(fā)明的可溶性多肽、例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/II^17RA多肽(SEQD)NO:158)，來測定H7A和IL"17F對上皮細(xì)胞單層的破壞的相對作用，并^"測IL-17A和IL-17F的抑制劑是否能夠有^^維持上M障的完塾性。如果這類分子能夠防止激活的T細(xì)胞誘導(dǎo)的上皮細(xì)J^層的破壞，則說明本發(fā)明的可溶性IL"17RC和IL"17RC/IL"17RA多肽可有艦用于A^類IBD的治療。還可以使用來自IBD患者的原代上皮細(xì)胞形成的細(xì)胞單層來產(chǎn)生共培養(yǎng)系統(tǒng)，以測定這些細(xì)胞與來源于M個(gè)體的上皮細(xì)j^目比是否對于IL-17A和IH7Fit^^:感。如果是這樣，那么這些數(shù)據(jù)3lt4明抑制IL-17A和IL-17F是一種治療IBD的適當(dāng)策略。實(shí)施例46IL-17A和IH7r對來自正常樣^^人類IBD樣本的固有層T細(xì)l^單核細(xì)lfe/巨噬細(xì)胞的效力失調(diào)的或持續(xù)的免疫介導(dǎo)的炎癥可能通過組織損傷或永久地偏向不適當(dāng)?shù)幕蜓娱L的免疫應(yīng)答的方式加重與IBD相關(guān)的癥狀和病理學(xué)。這一模型可以測^:17A和IU7F可食^在于腸組織緊靠的環(huán)境性細(xì)胞因子環(huán)境中?？赡茉隗w內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-1P、IL國4、IL"5、11^6、IL~8、IL~12、IH3、IL-15、IL"17A和F、H8、IL-23、TNF"0t、IFN個(gè)MIP家絲員、MCP國1、G"和GM-CSF等等)的產(chǎn)生和/或存在，而在上述的離體模型中起作用。在該^l^型中，通過下述步a活檢樣本中分離T細(xì)胞和單核細(xì)J^巨噬細(xì)胞在HBSS中小心地使用剪子仔細(xì)剪碎活檢樣本，用^^酶和^Ht酶II處理并在搖^Ji于37。C培養(yǎng)l小時(shí)。用尼龍篩過濾細(xì)胞懸液以除去細(xì)IW片和細(xì)胞團(tuán)，并用HBSS洗滌多次?？梢証^直接細(xì)胞M或M消^/富集方法分離T細(xì)胞和巨喧細(xì)胞/單核細(xì)胞。將分離的細(xì)胞與IL-17A和IL-17F—起培養(yǎng)。這可誘導(dǎo)T細(xì)妙單核細(xì)勿巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性介質(zhì)或使得后續(xù)的T細(xì)胞應(yīng)答偏向?yàn)楦叽傺讘?yīng)答?？梢詫碜訧BD患者和來自正常個(gè)體的細(xì)胞產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的類型進(jìn)行比較，并可肯汰明M在IH7A和IL-17F的務(wù)降下來自IBD患者的T細(xì)胞和單核細(xì)勿巨噬細(xì)胞會(huì)具有更強(qiáng)的促炎性特征。加入本發(fā)明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL"17RC/IL-17RA多At(SEQIDNO:158))可以中和IH7A和IL"17F誘導(dǎo)的下游炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，it^明這類可溶性IL-17RC和IL"17RC/IL-17RA多肽可有M治療患有IBD的患者。實(shí)施例47可溶性IL-17RC和IH7RC/IL-17RA多JlW腸易激綜合征("IBS")的效力CNS定向的發(fā)病^L制該模型主要研究IBS的原始CNS定向發(fā)病機(jī)制，該^^型^^應(yīng)^'J激^^導(dǎo)IBS的癥狀特征。新生幼崽的心3S^土^^應(yīng)^:;^型模擬了一些與IBS患者相關(guān)的臨床特征，包括內(nèi)臟痛覺過敏、腹瀉和應(yīng)激過敏。在幼崽出生后4-18天，每天將它們與母親分隔180M可導(dǎo)致母方行為的改變，并M減少舔^/理4^f亍為的時(shí)間。對于新生幼崽的應(yīng)激導(dǎo)致CNS的永久性改變，并導(dǎo)致應(yīng)^t^l"導(dǎo)的內(nèi)li^軀體痛覺敏感，I^生變化。在這些動(dòng)物中結(jié)腸運(yùn)動(dòng)功肯^t于應(yīng)激的應(yīng)答增強(qiáng)，初步的數(shù)據(jù)顯示有結(jié)腸ilit:性增加的跡l^(Mayeretal.，2002)。^本發(fā)明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL"17RA多肽(SEQIDNO:158))進(jìn)行治療，并隨后對結(jié)腸運(yùn)動(dòng)功能、上皮ifit:性和對應(yīng)激的應(yīng)答進(jìn)行分析，可以測定對這種IBS動(dòng)物模型的有效性。在用上述抑制劑治療后癥M病率的降低可表明IBS療法的潛vW效性。實(shí)施例48可溶性IL"17RC和IL"17RC/IH7RA多肽對腸易激綜合4iE("IBS，，)的效力應(yīng)激的原始腸定向"^導(dǎo)物該模型主要研究應(yīng)激(即腸道炎癥，感染或物理應(yīng)激)的原始腸定向誘導(dǎo)物。動(dòng)物研究表明，程度較低的炎癥或免疫激活可能是腸的運(yùn)動(dòng)性和/或傳入功能和上皮功育汰生改變的J^(MayeretaL，2002)。在該模型中，每^Jtit^"新生動(dòng)物(8-21日齡)結(jié)腸內(nèi)注射芥子油產(chǎn)生每天的結(jié)腸刺激。芥子油是一種神153經(jīng)刺激物，已表明通it^腸內(nèi)給予芥子油可誘導(dǎo)內(nèi)臟痛覺過敏。這一模型^^以了IBS的關(guān)^^征，包括內(nèi)臟痛覺過^朝M更習(xí)慣改變。動(dòng)物i^4現(xiàn)出腹瀉或便秘，這也;iJBS患者的關(guān)鍵特征(Mayeretal.，2002;KimbaIIetal.，2005)?？蒳l-17rc/ih7ra多^(IeQidNO:l幼))，:測定與該模型相關(guān)的i^^艮的變化。在^^本發(fā)明的抑制劑治療后，內(nèi)臟痛覺過敏的發(fā)病率^^度的降低以皿道運(yùn)動(dòng)性的變化可表明這些分子用于治療ibs的潛^f效性。實(shí)施例49設(shè)計(jì)用于生產(chǎn)可溶性IH7A和IH7F拮抗劑的可放;tM^的蛋白生產(chǎn)工藝在設(shè)計(jì)主要用于開發(fā)可溶形式的il-17rc的可放大規(guī)漠的蛋白生產(chǎn)工藝的策略時(shí)，在識別可在^fr培養(yǎng)基中產(chǎn)生高水平蛋白濃度的表達(dá)系統(tǒng)時(shí)it^了許多困難。蛋白質(zhì)印跡分析表明M^"蛋白在細(xì)胞中i^累積，蛋白分泌的水平降低。在發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的可溶性多肽的過程中，我們設(shè)計(jì)和制備了七十多種不同的表ii^J建體并測試了它們在BHK細(xì)胞、CHO細(xì)J^HEK293細(xì)胞中的表達(dá)。有些表，建體在一種以上的宿主細(xì)胞系中進(jìn)行了測試。所測試的可溶性IL-17RC表達(dá)盒的變體包括1)^種信號序列，例如:a)天然；b)otPA;c)小IJ^^^l蛋白重^:可變區(qū)；d)人類生長激素；e)小鼠IH7RA。2)兩種不同的天然存在的剪接變體(IL-17RCxl，SEQIDNO:2;和IL^17RCx4，SEQIDNO:166)。3)在IL"17RC胞夕卜結(jié)構(gòu)域(ECD)和Fc部分之間增加連接物序列，例如a)沒有連接物；b)—種基于GlyGlyGlySer的9氨基酸連接物；和c)一種基于GlyGlyGlySer的20^J^酸連接物。4)帶His標(biāo)洛的單體形式。5)^J^端和^^端Fc融妙白。6)去除N-連接的糖連g點(diǎn)。7)用Gln置^Asn的^J^換。8)IL-17RA和IH7RC的雜合融^"白所有的可溶除IL"17RC變體表ii^I建體都通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至孤K293細(xì)胞中進(jìn)行了蛋白表達(dá)的儉測。4捐了蛋白質(zhì)印跡分析ilb^測分泌至4H^培養(yǎng)基中的蛋白，并與通it^集細(xì)胞，物測定的細(xì)胞中保留的蛋白的量進(jìn)行比較。大多數(shù)構(gòu)建體表達(dá)的分泌至條件培養(yǎng)基中的蛋白都幾乎不能用蛋白質(zhì)印跡方法檢出。jrt^卜，細(xì)胞瞎物樣本中的信號比糾培養(yǎng)基樣本中的信號強(qiáng)，狄明蛋白不能被有皿分泌。使用那些在M培養(yǎng)基中產(chǎn)生最強(qiáng)信號的表i^J建體來轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系。測量來自穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系的蛋白效價(jià)，并且如果可能ii^基于細(xì)胞的竟?fàn)幗Y(jié)合測定中分析了純化蛋白與IL-17A和IL-17F的結(jié)合。下表顯示了用最高表達(dá)的構(gòu)建^^染穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系所得到的蛋白表ii^果。當(dāng)^蛋白濃度的測量值低于儉測水平時(shí)，就##白效^^表示為<0.5mg/mLo下表中包括IL-17RC和IL-17RC/RA蛋白表ii^建體的命名號、所含有的外顯子簡述、來自轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系的蛋白效價(jià)和與IL-17A和IH7r的結(jié)合能力。此處未包括表14中所包括的變體的全序列。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage155</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage156</column></row><table>實(shí)施例50IL-17RA/RC-Fc5的^Jj^端序列的測定蛋白表達(dá)^^I含有編碼II^17RA/RCFc5的DNA(;SEOIDNO:157，編碼SEQIDNO:158的絲醋列)的表錄條染CHODXB-11細(xì)胞。從*化培養(yǎng)基的回收物中通過蛋白A親和層析和尺寸排阻色譜純化IL-17RA/RC-Fc5蛋白。N-端g^列分析^J^)購自AppliedBiosystems^司的試劑i^fr標(biāo)準(zhǔn)的自動(dòng)N-端多肽測序(Edman降解)。使用Model494蛋白質(zhì)測序系統(tǒng)(AppliedBiosystems，Inc.,FosterCity，CA)進(jìn)行N-端序列分析。使用Seq股ncePro^白質(zhì)序列分析軟件2.0版(八？口116<1Biosystems)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。樣本制備過程包括將100先學(xué)爾(pmol)的樣本上樣至預(yù)循環(huán)濾器上。IL-17RA/RC-Fc辨^K樣本編號A1672F、A1774F和A1776F)的N-端序列分析獲得了起泉為L33(亮^^酸)的序列。實(shí)施例51使用鼠類代月物分子即可溶性鼠類IL"17RA-Fc治療噁哇酮結(jié)腸炎對雌性C57BL/10小鼠(約20g)進(jìn)行了如下所述的噁哇酮結(jié)腸炎研究。在第-5天，通過皮下注射噁哇酮(3%溶于100°/0乙醇)對小鼠致敏，然后，在第0天，通過，內(nèi)給藥溶于50%乙醇的1.25%噁哇酮進(jìn)行藥物^_。小鼠在lt^的2-3A^會(huì)發(fā)生急性結(jié)腸炎。通常在第2天將它們處死并收^lia織。進(jìn)行了兩項(xiàng)獨(dú)立的噁喳酮結(jié)腸炎研究，以確定可溶性鼠類(m)IL"17RA-Fc是否能夠有效治療小鼠的噁哇酮誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，這一動(dòng)物^^型是^^A類潰瘍性結(jié)腸炎的模型。由于mlL-17RA-Fc可以中和鼠類IL-17A和IL-17F，這一特征與人類IL"17RC和IL"17RA/RC能夠結(jié)合人類IH7A和IL-17F的特;^目類似，因此mlL"17RA-Fc蛋白是本文所述的IL-17RC和EH7RA/RC蛋白的合適的代用物。第一項(xiàng)研究的結(jié)a明，^^mlU7RA-Fc進(jìn)行治療與用PBS進(jìn)行治療相比，噁喳酮結(jié)腸炎的小鼠疾病指#^^(包括體重下降、便^MWC^)^(p<0.05)下降了約2倍。治療方案為對噁喳酮結(jié)腸炎模型動(dòng)物每Aip.給藥lOO照，從第-6天或第-l天給藥至第l天。與使用PBS進(jìn)行治療的噁唑酮結(jié)腸炎小鼠相比，佳月mlL-17RA-Fc治療的小Iiai^4現(xiàn)出更低的組織學(xué)評:^更輕微的結(jié)腸炎誘導(dǎo)的結(jié)腸變短癥狀。在第二項(xiàng)研究中，對這一模型的小鼠每天用PBS或mlL-17RA-Fc(100照，1.p.)治療，治療從第4天持續(xù)至第1天，并^^合適的噁唑酮-載體對照(*予乙醇)。oH^卜，^9f究中還包括在藥物^l7^j^M腸炎恢復(fù)的各組小鼠，以評估m(xù)lL-17RA-Fc對這一模型的這一階^A否有效果。結(jié)果表明，在經(jīng)it^第-6天至第l天每日給予可溶性鼠類IL-17RA-Fcl治療后，這一模型的疾病指樹分顯著(p<0.05)下降了約3倍。在患有噁唑酮結(jié)腸炎的小鼠組中，使用mlH7RA-Fcl治療的小鼠與使月PBS治療的小IU目比，在第2天出現(xiàn)可JU員傷的發(fā)生率降低，經(jīng)mlL"17RA-Fcl治療的小鼠的損傷發(fā)生率為37.50/0，而4WIpbs治療的小鼠的損傷發(fā)生率為75。a。j)^卜，與佳月pbs進(jìn)行治療的噁喳酮結(jié)腸炎小！^目比，使用mlL-17RA-Fc治療的小鼠Mi^J見出改善的組織學(xué)評#更輕鄉(xiāng)<0.05)的結(jié)腸炎誘導(dǎo)的結(jié)腸變短癥狀。在7天')^ia中，所有小鼠在此時(shí)間點(diǎn)都已恢復(fù)，因此沒有，J^到差異。在結(jié)腸培M(在第2A^小鼠獲得的結(jié)腸小塊，于37'C培養(yǎng)24小時(shí))中，經(jīng)過噁唑酮處理的小鼠的所有評估的炎性細(xì)胞因子/趨化因子的水平均比裁/^(乙醇)組小鼠高。在患有噁喳酮結(jié)腸炎的小鼠中，經(jīng)mlL-17RA-Fc治療的小鼠與經(jīng)PBS治療的小鼠相比，IH7A、IL-17F、TNF-a、IHp、IL-4、IL~12、GM-CSF和IFNi在結(jié)腸中的產(chǎn)生量均有所下降。結(jié)腸中的IL"17A和IL-17F的濃度彼此顯著相關(guān)(R=0.93;p<0.000001)。IL-17a和dl-17f的濃度與下列因子的水平顯著相關(guān)TNF-a(R=0.91和0,95;p<0.0000001)、IL-ip(R均為0.64;p<0.01)、IFN^(R=0.71和0.72;p〈0.01)和IL-6(R均為0,57;p<0.05)。疾病指才辯分與下列因子在結(jié)腸中的產(chǎn)生l:相關(guān)IL-17A(R=0.70;p<0.01)、IL17F(R=0.72;p<0.01)、TNF-a(R=0.76;p<0.001)、IL^4(R=0.59;p<0.05)、IL-ip(R=0.50;p<0.05)和IFN"y(R=0.52;p<0.05)?？偠灾琟^本iL^斤述的人類IL-17RC和IH7RA/RC蛋白的代用物(例如mlL-17RA-Fc)的治療可以,結(jié)腸炎疾病癥狀，減少炎性細(xì)胞因子在結(jié)腸中的產(chǎn)生并改善病理學(xué)。這些結(jié)果表明使用本文所述的人類IL"17-RC或EU17RA/RC蛋白能夠有皿治療A^類IBD。實(shí)施例52小鼠IL-17Fit4ii^鼠類疾病模型中的影響^^J^^如本文所述的方法(見上文部分K)，^^基因小鼠的制4^)產(chǎn)生i^基因小鼠，該轉(zhuǎn)基因小鼠^itiL細(xì)胞特異性啟動(dòng)子(EuLck^動(dòng)子)的控制下it4達(dá)IL-17F基因。IL-17F轉(zhuǎn)基因小鼠的血清中n^l7A與IL-17F的比值與人類相似內(nèi)部開發(fā)的基于Luminex的測定手段，發(fā)現(xiàn)在EuLck啟動(dòng)子的控制下過表達(dá)鼠類IL-17F的小鼠與野生型小鼠相比IL"17F的血清水平顯著升高，該轉(zhuǎn)基因小鼠IL^17F的血清水平約為2ng/mL,而野生型小鼠的血清中檢測不到IL"17F。在轉(zhuǎn)基因小H血清中H^17A的水平約為IH7F的十分之一(約0.2ng/mL)。因此，在轉(zhuǎn)基因小鼠血清中IH7A與IL-17F的比例約為1:10。在野生型小鼠的血清中，IL-17A僅為可檢出的水平(約0.1ng/mL)。這種IL-17F的血清水平^高于(如10倍)IL-17A的現(xiàn)象也通常見于患有自身免疫性疾病的人類，因此說明IL-17F轉(zhuǎn)基因小鼠可用于^A類疾病(例如多發(fā)"l!i^化和關(guān)節(jié)炎)的小！^型中研究IL-17F的作用。實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦械炎(EAE)的研究^A類多發(fā)，l!^t化的小鼠模型特別是在鼠類實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦械炎(EAE)的小IL^型中進(jìn)行了兩項(xiàng)獨(dú)立的研究，以評估IL-17F狄達(dá)的影響。C57BL/6背景的EuLckIH7F轉(zhuǎn)基因小鼠作為研究動(dòng)物，同窩出生的雄昧C57BL/6野生型小IUW作對照，每只小鼠約2(K22g，使用MOG35-55/Ribi(第一項(xiàng)研究)或MOG35-55/CFA(第二項(xiàng)研究)佐劑在第0U疫各小鼠，然后在第2天通itiv.注射百日咳毒素。每日對小鼠稱重并記錄其疾病臨床癥狀(例如尾部和肢體麻痹)的評分。上述兩項(xiàng)研究的結(jié)果都表明，IH7F轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠相比，疾病的發(fā)病和嚴(yán)重程度都有顯著(p<0.05)增加。在第一項(xiàng)研究中，轉(zhuǎn)基因小鼠的發(fā)病高峰比野生型更早，平均的疾病嚴(yán)重程度評分也比野生型高36%。在第二項(xiàng)研究中，IU7F轉(zhuǎn)基因小鼠的疾病嚴(yán)重程度評分比同窩出生的野生型對照小鼠高50^70%。J^/^秀導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎fCIA)^f究在人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的小鼠模型特別是在鼠類膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)的模型中進(jìn)行了兩項(xiàng)獨(dú)立的研究，以評估IU7Fii^達(dá)的影響。C57BL/6背景的EuLckIL-17F轉(zhuǎn)基因小鼠作為研究動(dòng)物，同窩出生的雄性C57BL/6野生型小鼠^I作對照，每只小鼠約23-28g,使用雞II型^^、/CFA通iiC部注射免疫各小鼠，三周后再用雞II型J!L^/IFA進(jìn)行免疫。每日記錄小鼠的疾病臨床癥狀(即足;fJt脹)評分。以上研究的結(jié)果均表明，IL-17F轉(zhuǎn)基因小鼠與同窩出生的野生型對照小IU目比，疾病的發(fā)病和嚴(yán)重程度辦顯著(p<0.05)增加(約2.5^3^)。實(shí)施鄉(xiāng)鼠類IL-17RA-Fc、人類IL-17RC-Fc和人類IH7RA/RC-Fc的藥代動(dòng)力學(xué)對于不同的可溶性IL-17受體(包括人類可溶性IL-17RC和IL-17RA/RC受體及其鼠類代用物mlL-17RA-Fc)進(jìn)行了三項(xiàng)獨(dú)立的研究。在上述研究中佳月獲自CharlesRiver實(shí)驗(yàn)室的雌性C57BL/6小鼠。在獲得動(dòng)物時(shí)對其進(jìn)行了M檢查，并將其^^且飼#(每籠5只)。當(dāng)動(dòng)物&ijl0-12周齡，平均體重^'J約20g時(shí)，開始研究。A)劑量方案在上述三項(xiàng)研究的各項(xiàng)研究中，將小鼠隨機(jī)分為以下M旨定的劑量組(每一劑量組的n-24),并分別通過專門的途條藥^^脈內(nèi)(".)、M內(nèi)(i.p.)或皮下(s.c.，頸背處)。對^-組的小鼠^^照上述指定的給藥途,予100pL的合適的蛋白質(zhì)。B)樣本采集在各不同時(shí)間點(diǎn)(從0.25小時(shí)^336小時(shí))采集小1>#，在^jfc前，使用氟烷或異B將小鼠完全^"。在所有的時(shí)間點(diǎn)均通過心臟穿刺進(jìn)4亍^。將血液收集^清分離管中，靜置15^^使絲固。然后將樣本以14，000rpm離心3分鐘。離心后將樣本等分為125^150jiL的等分試樣并裝于帶有標(biāo)簽的印pendorf管中立即置于"80。C儲(chǔ)存，直至分析之前，C)結(jié)果鼠類IL-17RA-Fc藥代動(dòng)力學(xué)研究".給藥的半衰期為61h;Lp.給藥的半衰期為70h;".給藥的半衰期為6911。Lp,給藥的生物利用度為100。/。；s.c.給藥的生物利用度為67%。對于Lv.、Lp.和s.G途徑的給藥，分布#^分別為6.7、8.7和10.3mL。數(shù)據(jù)采集的最晚時(shí)間點(diǎn)為給藥后120h;在這一時(shí)間點(diǎn)之前(結(jié)果總結(jié)于下表)。人類IL-17RC-Fc藥代動(dòng)力學(xué)研究1義給藥的半衰期為72h;Lp.給藥的半衰期為64h;&<;.給藥的半衰期為5411。&.和^.給藥的生物利用度均為100%。對于i.v.、ip.和s.c.途徑的給藥，分布#^、分別為2.7、2.4和2,2mLo人類IL-17RA/RC-Fc(變體1454)藥代動(dòng)力學(xué)研究".給藥的半衰期為46h;*.給藥的半衰期為49h;8工.給藥的半衰期為52h。Lp.給藥的生物利用度為100%;s,c給藥的生物利用度為69"/。。對于i.v.、Lp.和s.c.途徑的給藥，分布體積分別為1.7、2.2和3.5mL。實(shí)施例54鼠類代用^"mlL"17RA-Fc用于治療移植物抗宿主疾病(GVHD)的療效移植物抗宿主疾病(GVHD)是一種發(fā)生于干細(xì)胞或骨髓移^Lil輸jMl輸入血組分之后的并發(fā)癥，最常見于免疫功能受損的患者。GVHD最常發(fā)生于^^移植之后，但是有時(shí)也以較>^^率發(fā)生于同系移#自*植之后。GVHD可發(fā)生于接受了來自如下儉沐的血液的有免疫活性的患者，所述儉本為純合的HLA單倍體型，而所述患者的該單^^型是條^的。這種病癥的病因是由于移植物中含有的免疫活性^^林巴細(xì)胞的植入，該淋巴細(xì)1&^#^被宿主的抗原激活并導(dǎo)致增殖。于是這種抵抗感染的細(xì)胞就會(huì)攻擊宿主體內(nèi)的組織。GVHD通常分為急性和慢性，急性GVHD是指在移^100天以內(nèi)發(fā)作的疾病，慢性GVHD是在移植后100天以后發(fā)作的疾病。通常該疾病所涉及的組織包括肝臟、胃腸#皮膚；可食^jl嚴(yán)重的炎癥。當(dāng)^和受體的HLA"R^的匹酉&^t^H氐、,^",大和患者^",大時(shí)，GVHD的發(fā)病率就越高。根據(jù)上述以及其他因素，估計(jì)該病的發(fā)病率為20%至70%。然而，可能仍有很多GCHD病例未被診斷出和未被^U逸。急性GVHD的癥狀包括發(fā)滲，由于膽紅素濃度升高而導(dǎo)致的皮趺和眼發(fā)黃，以M瀉。急性GVHD分為1至4級，4級絲嚴(yán)重的。慢性GVHD可以從頭紐或v^急性GVHD絲而來。慢性GVHD的癥狀比急性GVHD的癥狀范圍更廣，并且與各種自身免疫疾病的癥^目似。某些癥狀包^N艮癥、口千、發(fā)疹、^:和口腔潰瘍、關(guān)節(jié)攣縮(關(guān)節(jié)難以運(yùn)動(dòng))、肝liiL液的檢測結(jié)果異常、肺部僵硬(呼吸困難)、眼炎、吞咽困難、肌肉無力或口腔中長白膜。GVHD的其他癥狀包括組織損傷(包括腸道、皮膚、肝臟，在嚴(yán)重的病例中還涉M和腎)以及由于循環(huán)系統(tǒng)中炎性細(xì)胞因子水平升高而導(dǎo)致的類似敗血癥的癥狀("細(xì)胞因子KJ^")。在一些嚴(yán)重的病例中，GVHD可能^Jt命性的。GVHD的一線治療包括類固醇(例如甲;^龍(me也ylprediiisolone))療法。使用類固醇和環(huán)孢菌素A治療慢性GVHD。類固醇類藥物免疫抑制的副作用包括增加了感染和繼發(fā)性惡化的幾率，這可能^Jt命的。目前4吏用的療法還干擾被移植餅細(xì)胞的移植物抗腫瘤活性。鑒于上述嚴(yán)重的副作用，需要選棒1±更高的治療藥物。預(yù)期本文所迷的IL"17RC和IL-17RA/RC蛋白能夠有皿治療GVHD和/或用于移植。已報(bào)it^移植物排斥的患者和動(dòng)物模型的血清和尿中IL47A(并且最可能的是IL-17F)的水平升高。因此，使用可溶性的人類IL-17RC或IH7RA/RC蛋白中和IL-17A和n^l7F可能能使GVHD和/或器官移植具有更好的結(jié)果。在急性GVHD的小鼠模型中評估了人類IL-17RC和IL"17RA/RC蛋白的鼠類代用物(mlH7RA-Fc)的效果(Durieetal.，J.Clin.Invest.94:1333-1338，1994)。處死親代小鼠(C57BL/6;n-12)并收集其脾臟。使用兩片載玻片將混合的脾臟研碎以解離脾細(xì)胞。向脾細(xì)胞懸液中加入^J^緩沖液以除去血細(xì)胞。使用RPMI1640(10%FBS辟養(yǎng)基洗滌細(xì)胞并重懸于合適量的PBS中，使細(xì)胞濃度為3xl08細(xì)JI&/ml。將受體小鼠(C57BL/6xDBA/2Fl)分為兩組，分別朋PBS或mlH7RA-Fc治療。通ii^膜內(nèi)注射(每次注射150照)進(jìn)行鼠類IH7RA-Fc的治療，從第-l天開始每兩天注射一次，直至第15天。在第0天，將8xl(f個(gè)來自B6小鼠的供體脾臟淋巴細(xì)胞靜脈內(nèi)注射至受體小鼠(C57BL/6xDBA/2Fl(BDF1);每組11=10彿內(nèi)。每周三_測小鼠體重的變化(^|_該;^型中疾病惡化的最重要的指征)以及^^T垂死的指征。處死體重比初始體重降>[^20%以上的小鼠。務(wù)他的小鼠在細(xì)，植后12-18^Jt死，并收集脾J^血液。針對T細(xì)^B細(xì)胞標(biāo)志物(包括MHCI類標(biāo)志物H2b和H2d)對^F臟染色，以，JJ^/受體細(xì)胞的比例(急性GVHD脾細(xì)胞多為糾細(xì)胞)。收集血清，通itELISA測量IgGl、IgG2a和IgE的血清水平，以及使用市售的試劑盒(LuminexCorporation,Austin,TX)測量細(xì)胞因子和趨化因子的水平。兩項(xiàng)獨(dú)立研究的結(jié)果顯示了動(dòng)物模型與急性GVHD發(fā)病的相關(guān)性。在PBS對照中宿主(BDFl)脾細(xì)J3&it量減少，^KC57BL/6)的Treg細(xì)胞的數(shù)量也減少。在接受治療的動(dòng)物中，mlL-17RA-Fc的治療使得宿JJ陴細(xì)胞、CD4+T細(xì)J!fe^Treg細(xì)胞的數(shù)量得以維持。治療未阻止^(C57BL/6)常MX:D4+T細(xì)胞的激活或擴(kuò)散。所有組的動(dòng)物均具有相似數(shù)量的#^常規(guī)01>4+T細(xì)胞，并且GITR(糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體家族相關(guān)基因)被#^常規(guī)004+T細(xì)胞上調(diào)。在兩項(xiàng)研究中，經(jīng)itlL-17RA-Fc治療的組體重下降不很嚴(yán)重，而JLg兩項(xiàng)研究中，該體重下降比PBS對照^i^著(p<0.05)降低(第二項(xiàng)研究，見圖6)。IL-17RA-Fc治療未阻止基于脾臟:體重比的脾腫大，但是在第二項(xiàng)研究中顯示，與PBS處SM^目比，治療能夠減少疾病引起的脾細(xì)J^lt量的增加(數(shù)量方面^2倍；p<0.01)。在第一項(xiàng)研究中，經(jīng)itmlL-17RA-Fc治療的小鼠與經(jīng)PBS治療的對照小IU目比，IL-10的血清濃JL^增高(增高約2倍；p<0.05)(IL"10被認(rèn)為是一種主要的抗炎細(xì)胞因子)。在第二項(xiàng)研究中，經(jīng)itmlL"17RA-Fc治療的小鼠的TNF-a和IFN^的血清濃yl^降低。在兩項(xiàng)研究中，使用mBL-17RA-Fc的治療均導(dǎo)致宿i^立細(xì)胞的百分比^^斷氐(I^f氐約2.5^;p<0.001)。綜上所述，本文所述的IL"17RC和IL-17RA/RC蛋白的鼠類代用物(mlL-17RA-Fc)對于GVHD的鼠類模型具有治療效果。上i^a明，使用本文所述的人類IL-17RC和IL-17RA/RC蛋白能夠有皿治療GVHD和移植物排斥。實(shí)施例55在293F細(xì)胞中表達(dá)IL"17A-CH6/IL-17F-CEE異二聚體通過在酵母中的同源重組，在pZMP45栽體中分別構(gòu)建了編碼IL-17A-CH6(核普酸序列和^J^酸序列分別示于SEQIDNO:186和187)和IH7F-CEE(核苷酸序列和M酸序列分別示于SEQIDNO:188和189)的兩種表ii^粒。^^先前產(chǎn)生的含有IH7A的質(zhì)粒作為模板，使用正向引物zc57312以產(chǎn)生與pZMP45的5，重疊區(qū)域，佳月反向引物zc48893以產(chǎn)生絲氨酸-甘氨酸連接物、6x組氨酸標(biāo)v^和與pZMP45的3，重疊區(qū)域，通itPCR方法生^JL"17A-CH6片段。使用先前產(chǎn)生的含有IL-17F的質(zhì)粒作為模板，使用正向引物k57314以產(chǎn)生與pZMP45的5，重疊區(qū)域，使用反向引物zc58978以產(chǎn)生絲氨酸-甘氨酸連接物、EE標(biāo)蕃(EEYMPME;SEQIDNO:190)和與pZMP45的3，重疊區(qū)域，通過PCR^法生成IL-17F-CEE片段。4捐PlatinumPCRSuperMixHighFidelity試劑盒(Invitrogen，Cat.弁12532-016)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR^fH^下94。C，2min的一個(gè)循環(huán)；(94°C,30秒—55°C,30秒—68°C，45秒)x30個(gè)循環(huán)；然后^#在4。C。然后在l。/。瓊脂糖^^和lxTAE中對PCR^:^^進(jìn)行電泳。切下正確條帶^HMQiagen公司的:^純化試劑盒進(jìn)行純化(Qiagen，Cat.#28704)opZMP45質(zhì)粒是一種哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，它具有的表達(dá)盒中含有CMV啟動(dòng)子、內(nèi)^A、用于插入編碼序列的多個(gè)限制性S^J位點(diǎn)、otPA信號肽序列、SV40終止子、大腸桿菌復(fù)制起存、、以^于在釀酒酵母(51mw^從)中篩選和復(fù)制的URA3和CEN-ARS序列。將100nL的電感受態(tài)釀酒酵母(S.cerevisiae)細(xì)胞與10nl的上述純化的DNA相混合，再混入100ng的經(jīng)丑g/II酶切的pZMP45質(zhì)粒，將上述混*轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿孑L杯中。對上述酵母-DNA的混合物進(jìn)^(K75kV(5kV/cm)、ooohms和25fiF的電脈沖。向每個(gè)杯子中加入lml的L2M山梨醇，然后將所述薜母置于URA-DS盤中于30。C下培養(yǎng)。約72小時(shí)后，從一個(gè)盤的Ura+酵母轉(zhuǎn)4沐中取出約50jtL的堆積酵母細(xì)胞，重懸于100jiL^J^緩沖液(2n/。TritonX-IOO、1%SDS、100mMNaCl、lOmMTris、pH8.0、lmMEDTA)、100jiL的Qiagen微量制備試劑盒(Qiagen，Valencia,CA，產(chǎn)品目錄號訟7104)中的QiagenP1緩沖^p20U的酵母，酶(Zymolyase)(ZymoResearch,Orange,CA，產(chǎn)品目錄號射OOl)中。將上述^^置于37。C培養(yǎng)30^h然后加入試劑P2并進(jìn)^Qiagen微量制備試劑盒中所述的其余流程。使用4(HiLEB試劑'WtDNA。在0.211電穿《沐中，使用2nL酵母DNA轉(zhuǎn)化15pL的電感受態(tài):^桿菌細(xì)胞(DH12S，Invitrogen，Carlsbad,CA)。對細(xì)l&ii行1.75kV、25jiF和400ohm的電脈沖。在電穿孑L^后，向杯子中加入lmlSOC(2%BactoTryptone(Difco，Detroit,MI)、0.5。/o酵母提取物(Difco)、10mMNaCl、2.5mMKC1、lOmMMgCl2、10mMMgSO4、20mM葡萄糖)。將該溶^3E于兩處BAMP^Lh(LB肉湯培養(yǎng)^(Leimox)、1.8%BactoAgar(Difco)、100mg/L^千青霉素)，其中一^A200nL^化體，另一:fe^入100nL轉(zhuǎn)^^。從轉(zhuǎn)化^Ui^^各單菌落，通過測序識別出一個(gè)含有IL"17A-CH6的正確表ii^I建體的菌落和一個(gè)含有IL-17F-CEE的正確表,建體的菌落。佳月Invitrogen大量制備試劑盒(Invitrogeii，Carlsbad,CA產(chǎn)品目錄號#457009)，根據(jù)廠商的說明書進(jìn)行;t^漠的質(zhì)粒DNA分離。轉(zhuǎn)染至293F細(xì)胞為了測試IL-17A-CH6"IL-17F-CEE異二聚體的表達(dá)，使用Lipofectomine2000試劑盒(Invitrogen，Carlsbad,CA，產(chǎn)品目錄號針1668-019)和OptiMEM培養(yǎng)基(Invitrogen，Carlsbad，CA，產(chǎn)品目錄號紛1985^070)對293F細(xì)JJfci^f亍瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，然后在12《USL上生長。由于已經(jīng)測得IL-17A比IL-17F蛋白表達(dá)量要少，因此在轉(zhuǎn)染中使用的DNA比例為3^IL"17A-CH6比1份IL"17F-CEE。在轉(zhuǎn)染中使用2ng的質(zhì)粒DNA和lxl()6細(xì)胞。在96小時(shí)后收獲培養(yǎng)基并準(zhǔn)備進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡測定。寸捐Invitrogen公司的試劑和方法進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡測定，佳月抗^6x組氨酸抗體(R&DSystems,Minneapolis,MN，產(chǎn)品目錄號弁MAB050H)作為檢測IL-17A-CH6的枱r測抗體，使用自制的小鼠mAb作為抬鍘IL"17F-CEE的檢測抗體，^^JacksonHRP-山羊抗小鼠IgG(H+L)(產(chǎn)品目錄號#115-035^003)+BD31111.111-抗小鼠每02&(1119-15)(產(chǎn)品目錄號然53391)作為4。觀察到明顯的表達(dá)，因此證明實(shí)現(xiàn)了;U^轉(zhuǎn)染并由此能夠獲取蛋白。實(shí)施例56從CHODXB11細(xì)皿養(yǎng)表達(dá)產(chǎn)物中純4^"^A類IL-17A:IL-17F異二聚體在WAVE設(shè)備中培^CHODXBll細(xì)Jlfciyf細(xì)J^^稱，并由該細(xì)胞中的單鏈構(gòu)建體表達(dá)產(chǎn)生重纟^A類BL-17A:IL"17F異二聚體蛋白(zcyto40f2v.2)。所,建體含有人類IL"17A的序列和H^17F的序列(構(gòu)建體1789;C-His#^)，其中所述IL-17A的序列的N端和IH7F的序列的C端通過一個(gè)(G4S)3連接物相連接。在C端加上一個(gè)His標(biāo)簽以便于有^^捕獲產(chǎn)物。收獲大約IOL的^H戰(zhàn)養(yǎng)基，使用0.2jim濾器過濾除菌。在^NHt下加入乙酸以將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至pH5.0。在此pH值下會(huì)出現(xiàn)明顯的沉淀過程，使用0.8至0.2nm的兩相濾器(Pa11Corporation)對上述調(diào)節(jié):J^pH的培養(yǎng)基再次進(jìn)行itJ慮。陽離子交換色譜然后將上述調(diào)節(jié)好的培養(yǎng)基以10ml/min的ii;UL樣至配備有AKTATM探索者色射臺(tái)(GEHea他care)的預(yù)平衡的陽離子交換柱(16mlii床體積；2cm直徑(SPFastFlowresin，GEHeatthcare))上。平l^沖^pH5.0，0.02M乙酸和O.lMNaCl。當(dāng)上樣完成時(shí)，使用2(H條柱^P、的平M沖^t柱子進(jìn)行洗滌，由jtb^得280nm處的UV的穩(wěn)^J^。然后以20ml/辨的j;M/艦結(jié)合的蛋白，的級分裕ml/份收集，洗脫液共2(H^柱^"其梯JL^7從平l^沖紅^y^沖液0.02M乙酸、1.0MNaCl、pH5.0。通itSDS-PAGE和考馬斯染色和蛋白質(zhì)印i^r法對級^4i行分析。在梯度洗脫中得到兩個(gè)洗脫峰，其中第一^H^^^要的，，爭，在該峰中觀察到一條38kDa的明顯條帶。主峰#^1結(jié)構(gòu)域包^#20-48級分在內(nèi)表現(xiàn)出抗His標(biāo)、簽染色，將在蛋白質(zhì)印跡分析中可被染色的4^P寬度均^^在""^，以用于下一步研究。IMAC色^(金屬#^親和歩驟)#5mLHisTrapIMAC柱(GEHea他care)用20倍柱棘的^0.5MNaCl、50mM磷酸的鈉鹽、25mM咪哇、pH7.5的緩沖液進(jìn)行平衡。向上述144ml的陽離子交換色鐠的^^中加AA量的固體咪哇，以使得其中咪喳的濃度達(dá)到25mM。再加入0.51\1磷酸二氬鈉和0.5]\1磷酸氳二鈉的等摩爾';^^液，以使得其中磷酸根緩沖液的濃度達(dá)到20mM，此時(shí)再用2NNaOH將溶液的pH調(diào)至7.5。將調(diào)節(jié)好的陽離子交換色譜^^準(zhǔn)備上樣至HisTrapIMAC柱。上樣流速為4ml/min。當(dāng)上樣完成時(shí)，使用4(H^柱體積的平衡緩沖液洗滌IMAC柱，然后用^0.4MNaCl、400mM咪喳、pH7.5的緩沖液進(jìn)行、艦步驟。在更換為洗m沖液后不久，lt^上皿下一個(gè)明顯的峰。;^^上述物質(zhì)并絲至3ml以用于最終的尺寸排阻色谞步驟中的^^.尺寸排阻色譜歩驟將來自EMAC步驟的濃縮物注入預(yù)平衡的Superdex200(GEHea他care;16/60;120ml)SEC柱上，i鏈為1.5ml/min，流動(dòng)相為35mM磷酸鈉緩沖液、109mMNaCl、pH7.3。級分收集為1.5ml/份。在較早的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)一些水平較低的,物質(zhì)，然后在0.7倍柱、的時(shí)候出現(xiàn)一個(gè)非常對稱的洗現(xiàn)的物質(zhì)。將級分^給用于;備k高純度的產(chǎn)物，并排i^"些含有產(chǎn)物"共洗脫的不想要的污染物的級分。純化的單MA類II^17A:II^17F異二聚體的分析對重組的單鏈人類IL-17A:IL^7F異二聚體進(jìn)行如下分析先是SDS隱PAGE(10%BisTris，Invitrogen，Carlsbad，CA)以朋0.P/?？捡R斯R250對蛋白進(jìn)行染色，然后絲^^酸纖維素J^Ji,^^抗-His-HRP進(jìn)行免疫染色。^^1InvitrogenNovex，sXcellII^M"純化蛋白進(jìn)行電泳，然后在室溫下，在含有25mMTris^、200mM甘氨酸和20。/o甲醇的緩沖液中，以600mA電轉(zhuǎn)移45辨，絲白絲J^酸纖維素膜(0.2mm;Invitrogen，Carlsbad，CA)上。然后^^含10%脫脂奶粉、50mMTris、150mMNaCl、5mMEDTA、0.05%Ig印al(TBS)的緩沖液在室溫下封閉濾膜15分沖?？焖俚叵礈煜跛崂w維素膜，加入偶聯(lián)有HRP的特異性^(1:2500)。在溫和振蕩的M下在4。C培養(yǎng)蛋白印跡物過夜。培R后，將印跡物在TBS中洗滌三次，每次15介幹，然后在水中快速洗滌。然后使用市售的化學(xué)^A物試劑(RocheLumiLight)使印跡物顯色，并使用Lumi-Imager，sLumiAnalyst3.0軟件(BoehringerMannheimGmbH，Germany)捕獲信號。非還原性考馬斯染色分析發(fā)現(xiàn)二聚體產(chǎn)物以雙條帶形式存在，其中下方的帶為主^帶。對i^^性和非還原性產(chǎn)物進(jìn)行的SDS-PAGE和考馬斯染色分析發(fā)現(xiàn)，聚體多狀鏈的表觀電泳遷移度的位置上出現(xiàn)了強(qiáng)度不成比例的雙條帶。雙條帶中上方的條帶為觀察到的主要條帶。還原性SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示，較低^^*#類的量很少，幾乎可被忽略。取100pmol的產(chǎn)物進(jìn)行了N端序列分析。結(jié)果表明單:^N端回收的可重復(fù)性產(chǎn)量為57.9pmol,N端的絲為G24，這是人類IL-17A^列的起泉。絲^l且成分析的結(jié)^ii了上itS^^且成。分析性尺寸排阻色語表明產(chǎn)物的純度大于99%。實(shí)施例57通it^面等離子共^^iacore)測量IH7RA/RC-Fc5與IL"17A/F異二聚體的結(jié)合親和力進(jìn)行本研究的目的是評估IL"17RA/RC-Fc5(變體1454)與IL-17A/F雙鏈異二聚體的結(jié)合親和力。親和力測定通過表面等離子共振，測量了IH7RA/RC-Fc5與IL"17A/F異二聚^f4^^原的相互作用的動(dòng)力學(xué)ii^常數(shù)、平M合常數(shù)和平衡醉離常數(shù)。結(jié)^1常數(shù)(ka(M-V")狄映:^^-受體復(fù)絲形^^的數(shù)值。解離i^常數(shù)(kd(s、)是反映該復(fù)^穩(wěn)定性的數(shù)值。平衡結(jié)合親和力通常^L^示為平,離常lt(KD(M))或平衡結(jié)合常數(shù)(Ka(M1))。KD是用解離速度常數(shù)除以結(jié)合速度常數(shù)(kd/ka辨到的，而KA^結(jié)^^常數(shù)除以解離i^JL常數(shù)(ka/kd)得到的。具i4JL常數(shù)。因此，測量ka和kd，以及Ka或Kd，可以有助于唯一,述受秦抗原相互作用的親和力。材粉方法進(jìn)行下述試驗(yàn)以測量純化的IH7RA/RC-Fc5受體與重組人類IL-17A/F異二聚體的結(jié)合親和力。在BiacoreT100胃系統(tǒng)(GEHeal也care，Piscataway，NJ)上進(jìn)行結(jié)合動(dòng)力學(xué)和親和力研究。佳月BiacoreT10()m控制軟件，vl.l.l編程以^^J"BiacoreT100頂系統(tǒng)進(jìn)行操作。由于IH7RA/RC-Fc5受體^^有人類Fc結(jié)構(gòu)域，因此在研究中使用山羊抗AJgGFcv/(JacksonImmunoResearch，WestGrove，PAyft為捕獲M。^^0.4MEDC[N-乙基-N，-(3-二乙^tJ^丙基)^1二亞胺和0.1MNHS(N-幾^t珀跣亞胺)的^^，將捕獲^MW固定^^CM4傳感器芯片上，使其密度達(dá)到約4000RU。在固定化^^后，使用1M乙醇胺封閉流通池上的剩余活性位點(diǎn)。CM4芯片上的一個(gè)流通池捕獲的IL-17RA/RC-Fc5受體的近似強(qiáng)度為90-100RU。以10fiL/分沖的流速ii行受體與固定^f汰面的捕獲過程。Biacorei殳備能夠測量傳感器芯片表面上結(jié)合的蛋白的質(zhì)量，并由此確定^分析循環(huán)中捕獲到的可溶性受體的量。為了進(jìn)行H7A/F異二聚體(如上文實(shí)施例55所述的IL^17A-CH6/IL-17F-CEE雙鏈異二聚體)的結(jié)合研究，將抗原按照l:3的比例進(jìn)4亍系列稀釋，獲得濃度為3311]\1至0.01511]\1的一系列稀釋液，將所述稀#"液注射至傳感器芯片表面，以使其能夠與傳感器芯片上捕獲的IH7RA/RC-FC5受^^Li特異性結(jié)合。每種濃度的IL"17A/F抗原稀釋液重復(fù)注射兩次，結(jié)合時(shí)間7分鐘，解離時(shí)間15分沖。以30nL/分沖的流速進(jìn)行動(dòng)力學(xué)結(jié)合研究。所有的結(jié)合試驗(yàn)均在25。C下進(jìn);f亍，所使用的緩沖液均為含IOmMHEPES、150mMNaCl、3mMEDTA、0.05。/o表面活性劑P20(GEHealthcare,Piscataway，NJ)、1mg/mL牛血清白蛋白(ProliantBiologicals，Boone，IA)、pH7.4的緩沖液。在^—分析循5^間，使用20mM鹽酸洗滌流通池以再a面。這一洗滌步驟的目的是從固定化的抗體表面洗去捕獲的IL"17RA/RC-Fc5受體，以使得下一樣本中的受體可以再次結(jié)合。BiacoreT100Evaluation軟件(l.l.l版)整理數(shù)據(jù)。將所得的測量值數(shù)據(jù)減去參比流通池的測量值和空白注射的^y實(shí)際測量值。評估了絲穩(wěn)定性，以保絲整個(gè)各次注射過程中再生步驟均提供了一致的表面結(jié)合能力。重復(fù)注射兩:^A為了檢查可重復(fù)性。IH7A/F異二聚體具有IL-17RA/RC-Fc5受體的兩個(gè)可能的結(jié)^H呂(IL-17A和IH7F)。如果該異二聚體中僅有一^分與受體結(jié)合，那么使用簡單的l:l結(jié)合模型應(yīng)該是合適的，并JL^合曲線應(yīng)符合這一模型。然而，如果該異二聚體中的IH7A部^IH7F部分均與受體結(jié)合，那么使用二條合模型應(yīng)該是合適的，并JL^合曲線應(yīng)符合這一模型。所述結(jié)合曲線總體上符合l:l模型和二價(jià)分析物結(jié)合模型。結(jié)果表征了IH7RA/RC-Fc5受體與人類IH7A/F異二聚體抗原的結(jié)合親和力。測量了結(jié)^^常數(shù)(1%(]\1^-1))和解離^常數(shù)(1^(8-1))。雖然所得的結(jié)合曲線不符合l:l結(jié)合模型，但是所得數(shù)據(jù)符合二價(jià)分析物模型。這一結(jié)果與IL-17A/F異二聚體中的兩^NP^(IU7A和IH7F)均與受體結(jié)合的預(yù)計(jì)相符。二價(jià)分析物結(jié)合模型測量兩個(gè)ka值(k^和ka2)和kd值(kdi和kd2)。第一系列的數(shù)值(k^和k(U辦述了相互作用的-"^動(dòng)力學(xué)。所^il的這些樣本的親和力來自于上述數(shù)值，并凈il4示為KiH和KM。第二系列的數(shù)值(ka2和kd2)表示的是相互作用的總體親合力，并J^^L有M。所測得的結(jié)合動(dòng)力學(xué)為k^為5E405(]VrV1)，1^1為2￡-03(8-1),由此計(jì)算出的KDi為4E-9(M)[KA工為2E+8(]Vr1)。這些數(shù)值與對IL-17A/A和IL-17F/F同二聚體測量得到的結(jié)勤目近。表15:IL-17A/F異二聚體的結(jié)合親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage168</column></row><table>實(shí)施例58IL-17A/F異二聚體活'I4^其與IH7RA/RC-Fc5的中和^JI使用IL-17A/F異二聚體構(gòu)建體(單鏈或雙鏈的zcyto40f2v.和單鏈的zcyto40f2)測試了活'l!iA其與IH7RA/RC-Fc5的中和反應(yīng)。IL-17RC活性測定^J^iLKZ17財(cái)艮告物構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的NIH-3T3細(xì)胞，以便通過熒光素酶報(bào)告物測定檢測由NTKB介導(dǎo)的IL-17A和IH7F信號。在這一測定中，兩種異二聚,建體都表現(xiàn)出劑量，性反應(yīng)，其中雙^J建體的EC5(H直為15.19nM，單鏈構(gòu)建體的EC5(H直為20.59nM。IL-17A和IH7F同二聚體^^J見出劑量依賴性a，其￡€5條分別為2.026禮和17.31亂還使用基于NIH-3T3/KZ170熒光素酶才艮告物細(xì)胞的中和測定測試了IL-17A/F異二聚體構(gòu)建體。使用固定濃度的配體滴定了可溶性受體IL-17RA/RC-Fc5(變體1454)，并在報(bào)告物生物測定對其進(jìn)行了測試。兩種異二聚,建體均可被可溶性受體IL-17RA/RC-Fc5中和，并呈現(xiàn)劑量，性反應(yīng)，其中雙鏈構(gòu)建體的IC50值為3.169nM，單鏈構(gòu)建體的IC50值為13.34nM。IL-17A和EL-17F同二聚體^JJ(L出劑量絲性反應(yīng)，其IC50值分別為0.1673nM*0.8735nM。M文的描述可以認(rèn)識到，雖然本文出于說明的目的描述了本發(fā)明的*實(shí)施方案，但是在不偏離本發(fā)明,和范圍的前提下可以進(jìn)行各種改變。在本文中所引用的所有出版物、專利和專利申請的4r^內(nèi)^l通ii^因的方式納入本文，并用于所有目的。權(quán)利要求1.一種分離的多肽，包括與SEQIDNO158的32-458氨基酸殘基具有至少90％或至少95％的序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽能夠結(jié)合IL-17A和/或IL-17F。2.權(quán)利要求1的分離的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO:183的1-426絲酸錄。3.權(quán)利要求2的分離的多肽，其中所述多肽包括免疫球蛋白部分。4.權(quán)利要求3的分離的多肽，其中所述免疫球蛋白部分為免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。5.權(quán)利要求4的分離的多肽，其中所述多肽包括SEQIDNO:183的1-657或1-658氨基酸殘基。6.權(quán)利要求2的分離的多肽，其中所述多肽還包括分泌信號序列。7.權(quán)利要求l的分離的多肽，還包括免疫球蛋白部分。8.權(quán)利要求7的分離的多肽，其中所述免疫球蛋白部分為免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)。9.權(quán)利要求7的分離的多肽，其中所述多肽包括與SEQIDNO:158的32-6卯氨基酸^具有至少90%或至少95%的序列同一性的a^f列。10.權(quán)利要求7的分離的多肽，其中所述免疫球蛋白部分包括SEQIDNO:158的459-689或459-6卯氨基酸殘基。11.權(quán)利要求7的分離的多肽，其中所述免疫球蛋白部分包括SEQIDNO:175的1-232絲酸絲。12.權(quán)利要求l的分離的多肽，其中所述多Jlidi包括聚乙二醇化。13.編碼權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的多肽的分離的核酸分子。14.一種表達(dá)載體，包括有效連接的下列元件a)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子；b)編碼權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的多肽的DNA區(qū)段；以及c)轉(zhuǎn)錄終止子。15.—種含有權(quán)利要求14的表達(dá)栽體的培養(yǎng)的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞表達(dá)由所述DNA區(qū)段編碼的多肽。16.—種生產(chǎn)多肽的方法，包括培養(yǎng)已被導(dǎo)入權(quán)利要求14的表達(dá)載體的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞表達(dá)由所述DNA區(qū)段編碼的多肽；以及回^達(dá)的多肽。17.—種組合物，包括權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的分離的多肽；和可藥用的載體。18.—種治療受試者的炎性疾病的方法，所述方法包括將有效量的權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的多*予患有炎性疾病的受試者。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病選自銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、萊姆病關(guān)節(jié)炎、m菌細(xì)胞壁(scw)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、腸易激綜合征(IBS)、憩室病、胰腺炎、I型糖尿病(IDDM)、格雷夫斯病、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、免疫介導(dǎo)的腎臟疾病、多發(fā)性硬化(MS)、系統(tǒng)性硬化癥、硬皮病、腎病綜冶^征、JUl癥、系統(tǒng)性紅斑狼癡(SLE)、重癥肌無力、腎小g化、膜性神經(jīng)病變、腎動(dòng)M化、腎小球腎炎、淀粉樣病變、卡斯?fàn)柭喜　⑵⒛[大、移植排斥反應(yīng)、移植物抗宿主疾病(GVHD)、動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)毒素血癥、中毒性休克綜合征、膿辜性休克、多器官功能衰竭、炎性肺損傷、哞喘、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嚢性纖維化、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、氣道高反應(yīng)性、慢性支氣管炎、濕疹、由腹膜炎癥導(dǎo)致的腹腔內(nèi)粘連和/或膿腫、狼疾性腎炎、中風(fēng)、牙齦il/牙周炎、單純皰滲性角膜基質(zhì)炎、骨質(zhì)疏松癥、神經(jīng)炎、再狹窄和川崎病o20.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病為慢性炎性疾病。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述慢性炎性疾病選自炎性腸病(IBD)、關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎和4H屑病。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述炎性腸病選自潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。23.權(quán)利要求21的方法，其中所述關(guān)節(jié)炎選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎。24.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病為急性炎性疾病。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述急性性炎性疾病選自內(nèi)毒素血癥、敗血癥和中毒性休克綜合征。26.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病為自身免疫性疾病。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述自身免疫性疾病選自I型糖尿病(IDDM)、多發(fā)性硬化(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘙(SLE)、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病(IBD)和腸易激綜合征(IBS)。28.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病為慢性炎性氣道疾病。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述慢性炎性氣道疾病選自哮喘、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嚢性纖維化、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、氣道高^^應(yīng)性和慢性支氣管炎。30.權(quán)利要求18的方法，其中所述炎性疾病選自移植排斥反應(yīng)和移植物抗宿主疾病(GVHD)。全文摘要公開了IL-17A和IL-17F的拮抗劑。所述拮抗劑基于可溶性IL-17RA和IL-17RC融合蛋白，所述融合蛋白包括含有IL-17RC和IL-17RA(“IL-17RC/IL-17RA”)二者的部分的雜合可溶性受體。這類拮抗劑可用于阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性。還公開了使用這類拮抗劑治療疾病特別是至少部分地由IL-17A和/或IL-17F介導(dǎo)的炎性疾病的方法。文檔編號C07K14/435GK101679497SQ200880017391公開日2010年3月24日申請日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2007年3月26日發(fā)明者M(jìn)·W·里克森,S·D·萊文,Z·高申請人:津莫吉尼蒂克斯公司

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該技術(shù)已申請專利。僅供學(xué)習(xí)研究，如用于商業(yè)用途，請聯(lián)系技術(shù)所有人。
技術(shù)研發(fā)人員：Ｓ.Ｄ.萊文;Ｍ.Ｗ.里克森;Ｚ.高
技術(shù)所有人：津莫吉尼蒂克斯公司
我是此專利的發(fā)明人

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