專利名稱：：抗Aβ(20-42)球聚體的人源化抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及可用于例如診斷、治療和預(yù)防阿爾茨海默病和有關(guān)病癥的抗體。背景信息阿爾茨海默病(AD)是一種神經(jīng)變性疾病，具有如下特點(diǎn)進(jìn)行性喪失認(rèn)知能力和包含淀粉樣蛋白沉積物的特有的神經(jīng)病理學(xué)特征、神經(jīng)纖維纏結(jié)以及在腦的某些區(qū)域中神經(jīng)元丟失(參見Hardy和Selkoe(Science297,353(2002)；MattsonNature431,7004(2004)。淀粉樣蛋白沉積物的主成分是淀粉樣蛋白肽(A0)，具有42個(gè)氨基酸長度類型A0(1-42)是最主要的。具體而言，淀粉樣蛋白0(1-42)蛋白是一種具有42個(gè)氨基酸的多肽，其來源于淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)的蛋白酶解加工。除人變體之外，其還包括存在于非人生物(具體而言其他哺乳動(dòng)物，特別是大鼠)中的淀粉樣蛋白0(1-42)蛋白的同種型。該蛋白由于在水相環(huán)境中傾向于聚合，因此可以非常不同的分子形式存在。已證明不溶蛋白的沉積與癡呆病癥如阿爾茨海默病的發(fā)生或進(jìn)展的簡單相關(guān)是不可信的(Terry等，Ann.Neurol.30.572-580(1991)；Dickson等，Neurobiol.Aging16，285-298(1995))。與此相反，突觸和認(rèn)知感覺的喪失似乎與A0(1_42)的可溶形式更相關(guān)(Lue等，Am.J.Pathol.155，853-862(1999)；McLean等，Ann.Neurol.46，860-866(1999))。盡管在過去已出現(xiàn)抗A0(1-42)的多克隆和單克隆抗體，但沒有一種被證明產(chǎn)生期望的療效并且還沒有在動(dòng)物和/或人中引起嚴(yán)重的副作用。例如，由每周一次持續(xù)5個(gè)月接受針對(duì)N-端的抗-A0(1-42)抗體的非常老的APP23小鼠的臨床前研究引起的被動(dòng)免疫顯示了治療相關(guān)的副作用。具體而言，與鹽水處理的小鼠相比，這些小鼠顯示在微出血(microhaemorrhages)量和嚴(yán)重程度上的增加(Pfeifer等，Science2002298:1379)。還針對(duì)非常老(>24個(gè)月)的Tg2576和PDAPP小鼠描述了相似的出血增加(ffilcock等，JNeuroscience2003,233745-51；Racke等，JNeuroscience2005,25629-636)。種小鼠中，抗-A3(1-42)注射導(dǎo)致了明顯增加的微出血。因此，對(duì)于開發(fā)預(yù)防或減緩疾病進(jìn)展而不誘導(dǎo)針對(duì)人體的消極效應(yīng)和可能的致死效應(yīng)的生物制劑而言，存在著巨大的、未滿足的治療需求。鑒于一般人群漸增的壽命，并且隨著壽命的增加，每年診斷有阿爾茨海默病或相關(guān)病癥的患者數(shù)量也連帶增加，因此這樣的需求格外明顯。此外，這樣的抗體可供在經(jīng)歷阿爾茨海默病癥狀的患者(目前僅可通過尸體解剖來確診)中正確診斷阿爾茨海默病之用。此外，這樣的抗體可供闡明引起該使人虛弱的疾病的蛋白和其他生物因素的生物學(xué)特性之用。所有在本文中引用的專利和出版物以其全文在此并入作為參考。發(fā)明概述本發(fā)明涉及能結(jié)合存在于阿爾茨海默病患者腦中的可溶性寡聚體例如Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合蛋白，尤其是人源化抗體(如對(duì)于帶有野生型IgGl恒定區(qū)的人源化7C6抗體，那些在此可交換地稱為“人源化7C6”或“7C6hum7wt”的抗體，以及對(duì)于帶有突變的IgGl恒定區(qū)的人源化7C6抗體，那些在此稱為“7C6hum7mut”的抗體，和對(duì)于帶有野生型IgGl恒定區(qū)的人源化7C6抗體，那些在此可交換地稱為“人源化5F7”和“5F7hum8”的抗體，以及那些在此稱為“5F7hum8mut”的抗體)。應(yīng)當(dāng)指出本發(fā)明的抗體還可與除在此描述的Αβ球聚體以外的Αβ形式起反應(yīng)(即與之結(jié)合)。這些抗原可以是或可以不是寡聚化或球聚化的。因此，本發(fā)明的抗體結(jié)合的抗原包括任何包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式。這樣的Aβ形式包括截短和未截短的Aβ(X-Y)形式(具有在此定義的X和Y)，例如Aβ(20-42),Aβ(20-40),Aβ(12-42),Aβ(12-40),Aβ(1-42)禾口Aβ(1-40)形式，前提是所述形式包含球聚體表位。此外，本發(fā)明還提供了生產(chǎn)和使用這些結(jié)合蛋白或其部分的方法。具體而言，本發(fā)明包括包含結(jié)合淀粉樣蛋白-β(20-42)球聚體的抗原結(jié)合域的結(jié)合蛋白，所述抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)包含選自如下的氨基酸序列的CDRCDR-VH1.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQIDNO.:5)，其中父1是丁或S;父2是？或Y;X3是Y或A；X4是I或M；和父5是!1或SCDR-VH2.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQIDNO.6)，其中父1是]或S;X2是I；X3是G或H；X4是P或N；X5是G或R；X6是S或G；X7是G或T；X8是N或I；X9是T或F；X10是Y；X11是Y或L；X12是N或D；X13是E或S；X14是M或V；X15是F或K；X16是K或G；和X17是D或不存在CDR-VHS-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-XicTX11-X12-X13(SEQIDNO.:7)，其中X1是A或G；X2是K或R；X3是S;X4是A或N；X5是R或S；X6是A或Y；X7是A；X8是W或M；X9是F或D；Xltl是A或Y；和X11是Y或不存在CDR-VLl-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16(SEQIDN0.:8)，其中父丄是尺；X2是SX3是S或T；X4是Q；X5是S或T；X6是V或L；X7是V；X8是Q或H；X9是S或R；X10是N；X11^G；X12是N或D；X13是T；X14是Y；X15是N或L；禾口X16是ECDR-VI^X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEC)IDNO.:9)，其中X1是K；X2是V；X3是S；X4是N;X5是R；X6是F;和X7是S以及CDR-VL3.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQIDNO.10)，其中X1是F；X2是Q；X3是G；X4是S；XjH;X6是V；X7是P；乂8是卩或Y;和X9是T。該結(jié)合蛋白對(duì)淀粉樣蛋白β(20-42)球聚體具有較對(duì)至少一種選自如下的淀粉樣蛋白β肽或蛋白更大的結(jié)合親和力淀粉樣蛋白β(1-42)球聚體、淀粉樣蛋白β(12-42)球聚體、S-淀粉樣蛋白前體蛋白、淀粉樣蛋白β(1-40)單體、淀粉樣蛋白β(1-42)單體和淀粉樣蛋白β(1-42)原纖維。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種包含能結(jié)合Αβ(20-42)球聚體的抗原結(jié)合域的結(jié)合蛋白(如抗體)或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗原結(jié)合域包含至少一個(gè)包含選自如下的氨基酸序列的⑶R=SEQIDNO.1的殘基30-35(即TFYIH(SEQIDNO.11)；5F7VHCDR1)；SEQIDNO.1的殘基50-66(BPMIGPGSGNTYYNEMFKD(SEQIDNO.12)；5F7VHCDR2)；SEQIDN0.:1的殘基98-108(即AKSARAAWFAY(SEQIDN0.13)；5F7VHCDR3)；SEQIDNO.:2的殘基24-39(即RSSQSVVQSNGNTYLE(SEQIDN0.14)；5F7VLCDR1)；SEQIDNO.:2的殘基55-61(艮口KVSNRFS(SEQIDN0.15)；5F7VLCDR2)；SEQIDNO.:2的殘基94-102(即FQGSHVPPT(SEQIDNO.:15A)；5F7VLCDR3)；SEQIDNO.3的殘基31-35(即SYAMS(SEQIDNO.16)；7C6VHCDR1)；SEQIDNO.:3的殘基50-65(即SIHNRGTIFYLDSVKG(SEQIDNO.17)；7C6VHCDR2)；SEQIDNO.:3的殘基98-107(即GRSNSYAMDY(SEQIDNO.18)；7C6VHCDR3)；SEQIDN0.4的殘基24-39(即RSTQTLVHRNGDTYLE(SEQIDN0.19)；7C6VLCDR1)；SEQIDNO.:4的殘基55-61(即KVSNRFS(SEQIDN0.20)；7C6VLCDR2)；SEQIDNO.:4的殘基94-102(即FQGSHVPYT(SEQIDN0.21)；7C6VLCDR3)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含至少3個(gè)選自上述披露的序列的⑶R。更優(yōu)選地，該3個(gè)⑶R選自可變域⑶R組，所述可變域⑶R組選自表1<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白包含至少兩個(gè)可變域⑶R組。更優(yōu)選地，這兩個(gè)可變域CDR組選自VH5F7CDR組&VL5F7CDR組和VH7C6CDR組&VL7C6CDR組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白進(jìn)一步包含人接納體構(gòu)架。優(yōu)選地，人接納體構(gòu)架包含選自如下的氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQIDNO.22)；WRQAPGQGLEffMG(SEQIDNO.23)；RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQIDNO.24)；WGQGTLVTVSS(SEQIDN0.25)；DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(SEQIDN0.26)；WYLQKPGQSPQLLIY(SEQIDN0.27)；GVPDRFSSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC(SEQIDNO.28)；FGGGTKVEIKR(SEQIDNO.29)；EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQIDNO.30)；WVRQAPGKGLEffVS(SEQIDN0.31)；RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQIDNO.32)；WGQGTLVTVSS(SEQIDNO.33)；DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC(SEQIDNO.34)；WYLQKPGQSPQLLIY(SEQIDNO.35)；GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC(SEQIDNO.36)；andFGQGTKLEIKR(SEQIDNO.:37)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是能結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何包含能與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或更多個(gè)上述披露的CDR(參見下表5)。更優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含至少一個(gè)具有選自如下的氨基酸序列的可變域SEQIDN0.23,SEQIDN0.24,SEQIDNO.:25禾口SEQIDN0.:26。最優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含兩個(gè)選自上述披露的組的可變區(qū)。優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含人接納體構(gòu)架。更優(yōu)選地，人接納體構(gòu)架是任何一種上述披露的人接納體構(gòu)架。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是能結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何包含能與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分并入人接納體構(gòu)架的人抗體可變域中的一個(gè)或更多個(gè)上述披露的⑶R。優(yōu)選地，人抗體可變域是共有人可變域。更優(yōu)選地，人接納體構(gòu)架包含位于關(guān)鍵殘基處的至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，其中該關(guān)鍵殘基選自鄰接CDR的殘基；糖基化位點(diǎn)殘基；稀有殘基；能與Αβ(20-42)球聚體相互作用的殘基；能與CDR相互作用的殘基；規(guī)范殘基；在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基；游標(biāo)區(qū)中的殘基；和在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl與Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊區(qū)中的殘基。優(yōu)選地，人接納體構(gòu)架包含至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，其中該構(gòu)架的氨基酸序列是至少65%相同于所述人接納體構(gòu)架的序列并包含至少70個(gè)與所述人接納體構(gòu)架相同的氨基酸殘基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是能結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何包含能與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。應(yīng)當(dāng)再次指出本發(fā)明的抗體還可與除在此描述的Αβ球聚體以外的Αβ形式起反應(yīng)，即與之結(jié)合。這些抗原可以是或可以不是寡聚化或球聚化的。因此，本發(fā)明的抗體結(jié)合的抗原包括任何包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式。這樣的Αβ形式包括截短和未截短的Αβ(X-Y)形式(具有在此定義的X和Y)，例如Αβ(20-42),Aβ(20-40)、Aβ(12-42)、Αβ(12-40)、Αβ(1-42)和Αβ(1-40)形式，前提是這些形式包含球聚體表位。優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含一個(gè)或更多個(gè)上述披露的CDR。更優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含3個(gè)或更多個(gè)上述披露的CDR。最優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含6個(gè)上述披露的CDR。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含至少一個(gè)具有選自如下的氨基酸序列的可變域SEQIDNO.:1、SEQIDN0.:2、SEQIDNO.:3和SEQIDNO.:4。關(guān)于SEQIDNO.:1(5F7VL)，基于Kabat編號(hào)，氨基酸第1位可以是E或Q；第5位可以是V或K；第11位可以是V或L；第12位可以是K或V;第13位可以是K或R；第16位可以是A或T；第20位可以是V或M；第38位可以是R或K；第40位可以是A或R；第75位可以是T或S；第81位可以是E或Q；第83位可以是R或T；第87位可以是T或S；和第91位可以是Y或F。關(guān)于SEQIDN0.2(5F7VH)，基于Kabat編號(hào)，氨基酸第2位可以是I或V；第3位可以是V或L；第7位可以是S或T；第14位可以是T或S；第15位可以是P或L；第17位可以是E或D；第18位可以是P或Q；第45位可以是Q或K；和第83位可以是V或L。關(guān)于SEQIDNO.:3(7C6VH)，氨基酸第19位可以是R或K；第40位可以是A或T；第42位可以是G或A；第44位可以是G或R；第82A位可以是N或S；第84位可以是L或S；和第89位可以是V或I。關(guān)于SEQIDNO.:4(7C6VL)，基于Kabat編號(hào)，氨基酸第14位可以是T或R；第15位可以是P或L；第17位可以是E或D；第18位可以是P或Q；第45位可以是Q或K；和第83位可以是V或L。更優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含2個(gè)選自上述披露的組的可變域。最優(yōu)選地，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包含2個(gè)可變域，其中所述2個(gè)可變域具有選自由(SEQIDN0.l&SEQIDNO.:2)禾口(SEQIDNO.:3&SEQIDNO.4)組成的組的氨基酸序列。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白包含選自如下的重鏈免疫球蛋白恒定域人IgM恒定域、人IgGl恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域。更優(yōu)選地，結(jié)合蛋白包含SEQIDNO.38,SEQIDNO.:39、SEQIDNO.:40和SEQIDNO.:41。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白包含突變的重鏈免疫球蛋白恒定域，所述重鏈免疫球蛋白恒定域選自人IgM恒定域、人IgGl恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域。調(diào)節(jié)效應(yīng)子功能或抗體半衰期的重鏈恒定區(qū)的突變是本領(lǐng)域眾所周知的(Boris，加參考文獻(xiàn))。在一個(gè)還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白包含野生型或突變的重鏈免疫球蛋白恒定域和λ或κ輕鏈，所述重鏈免疫球蛋白恒定域選自人IgM恒定域、人IgGl恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域。在一個(gè)還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白包含野生型或突變的重鏈免疫球蛋白恒定域和κ輕鏈，所述重鏈免疫球蛋白恒定域選自人IgM恒定域、人IgGl恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域。本發(fā)明的結(jié)合蛋白能結(jié)合Αβ(20-42)球聚體，并且還可結(jié)合任何包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式。優(yōu)選地，結(jié)合蛋白能調(diào)節(jié)Αβ(20-42)球聚體的生物學(xué)功能。更優(yōu)選地，結(jié)合蛋白能中和Αβ(20-42)球聚體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白具有IXIO-6M-IXIO-12的對(duì)Aβ(20-42)球聚體的解離常數(shù)(KD)。優(yōu)選地，抗體以高親和力，例如以約1X10_7M的KD或更大的親和力，以約1X10_8M的Kd或更大的親和力，以約1X10_9M的Kd或更大的親和力，以約1XIO^0M的Kd或更大的親和力，或以約1X10_"M的Kd或更大的親和力結(jié)合Aβ(20-42)球聚體。優(yōu)選抗體對(duì)Aβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力較該抗體對(duì)Aβ(12-42)球聚體或Aβ(1-42)球聚體的結(jié)合親和力大至少2倍(如至少3倍或至少5倍)，優(yōu)選至少10倍(如至少20倍、至少30倍或至少50倍)，更優(yōu)選至少100倍(如至少200倍、至少300倍或至少500倍)，以及還更優(yōu)選至少1000倍(如至少2000倍、至少3000倍或至少5000倍)，還更優(yōu)選至少10，000倍(如至少20，000倍、至少30，000倍或至少50，000倍)，和最優(yōu)選至少100，000倍。此外，抗體對(duì)Αβ(20-42)球聚體的親和力應(yīng)當(dāng)大于其對(duì)Aβ(1-40)單體和Aβ(1-40)單體的親和力。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了一種，抗體構(gòu)建體，包含任一上述披露的結(jié)合蛋白和連接多肽或免疫球蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體選自免疫球蛋白分子、單克隆抗體、嵌合抗體、⑶R-嫁接抗體、人源化抗體、Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、二硫鍵連接的Fv、scFv、單域抗體、雙抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體、雙特異性抗體或雙可變域(DVD)結(jié)合分子。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體包含選自如下的重鏈免疫球蛋白恒定域人IgM恒定域、人IgGl恒定域、人IgG2恒定域、人IgG3恒定域、人IgG4恒定域、人IgE恒定域H人IgA恒定域。更優(yōu)選地，抗體構(gòu)建體包含(SEQIDN0.38和SEQIDN0.39)或(SEQIDN0.40和SEQIDNO.:41)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種抗體綴合物，包含上述披露的抗體構(gòu)建體和選自如下的劑免疫粘附分子、顯像劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，顯像劑選自放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記和生物素。更優(yōu)選地，顯像劑是選自如下的放射性標(biāo)記3H、14C、35S、9°Y、99TC、mIn、125I、mI、mLU、166H0和153Sm。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，治療或細(xì)胞毒性劑選自抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長因子、細(xì)胞因子、抗-血管發(fā)生劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)類、毒素和細(xì)胞凋亡劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體是糖基化的。優(yōu)選地，該糖基化是人糖基化模式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，上述披露的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物作為晶體存在。優(yōu)選地，該晶體為無載體藥物控釋晶體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)晶的結(jié)合蛋白、結(jié)晶的抗體構(gòu)建體或結(jié)晶的抗體綴合物具有較其可溶性對(duì)應(yīng)物更長的體內(nèi)半衰期。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，結(jié)晶的結(jié)合蛋白、結(jié)晶的抗體構(gòu)建體或結(jié)晶的抗體綴合物在結(jié)晶后保留生物活性。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及一種分離的編碼上述披露的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物的核酸分子。一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案提供了一種包含上述披露的分離的核酸的載體，其中所述載體選自pcDNA;pTT(Durocher等，NucleicAcidsResearch2002,Vol30，No.2)；pTT3(帶有附加的多克隆位點(diǎn)的ρΤΤ；pEFBOS(Mizushima,S.和Nagata,S.，(1990)NucleicAcidsResearchVol18，No.17)；pBV;pJV和pBJ。在另一個(gè)方面中，用上述披露的載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。更優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是大腸桿菌。在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。優(yōu)選地，真核細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞和真菌細(xì)胞。更優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括但不限于CHO和COS;或真菌細(xì)胞例如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)；或昆蟲細(xì)胞例如Sf9。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了一種生產(chǎn)結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的結(jié)合蛋白的方法，包括在足以產(chǎn)生結(jié)合Αβ(20-42)和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的結(jié)合蛋白的條件和時(shí)間下，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)任何一種上述披露的宿主細(xì)胞。另一個(gè)實(shí)施方案提供了一種根據(jù)上述披露的方法生產(chǎn)的結(jié)合蛋白和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式。一個(gè)實(shí)施方案提供了一種用于釋放如本文中所定義的結(jié)合蛋白的組合物，其中該組合物包含一種制劑，該制劑又包含如上披露的結(jié)晶的結(jié)合蛋白、結(jié)晶的抗體構(gòu)建體或結(jié)晶的抗體綴合物和組分；以及至少一種聚合物載體。優(yōu)選地，該聚合物載體是選自如下一種或更多種的聚合物聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(酯肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸乙醇酸共聚物)或PLGA、聚(b-羥基丁酸酯)、聚(己內(nèi)酯)、聚(二氧雜環(huán)己酮)；聚(乙二醇)、聚((羥丙基)甲基丙烯酰胺)、聚[(有機(jī))膦腈]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、馬來酸酐_烷基乙烯醚共聚物、pluronic多元醇、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、血纖蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、低聚糖、糖胺聚糖、硫酸多糖、它們的混合物和共聚物。優(yōu)選地，所述組分選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥丙基-環(huán)糊精，甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。另一個(gè)實(shí)施方案提供了一種治療哺乳動(dòng)物的方法，包括向哺乳動(dòng)物施用有效量的上述披露的組合物的步驟。本發(fā)明還包括一種包含上述披露的結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該藥物組合物包含至少一種用于治療其中活性是有害的病癥的附加治療劑。優(yōu)選地，該附加治療劑選自單克隆抗體(如TNF拮抗劑，例如Remicade和Humira)、TNF受體融合蛋白(如Enbrel)、多克隆抗體、單克隆抗體的片段、膽固醇酶抑制劑、部分NMDA受體阻斷劑、糖胺聚糖模擬物、γ分泌酶抑制劑或別構(gòu)調(diào)節(jié)劑、黃體生成素阻斷促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑、5-羥色胺5-HT1A受體拮抗劑、螯合劑、神經(jīng)元選擇性L-型鈣離子通道阻斷劑、免疫調(diào)節(jié)劑、淀粉樣蛋白原纖維形成抑制劑或淀粉樣蛋白沉積抑制劑、5-HTla受體拮抗劑、PDE4抑制劑、組胺激動(dòng)劑、高級(jí)聚糖化終產(chǎn)物受體蛋白，PARP刺激物、5-羥色胺6受體拮抗劑、5-HT4受體激動(dòng)劑、人類固醇、增強(qiáng)神經(jīng)元代謝的葡萄糖攝取刺激物、選擇性CBl拮抗劑、苯并二吖庚因受體部分激動(dòng)劑、淀粉樣蛋白β產(chǎn)生拮抗劑或抑制劑、淀粉樣蛋白β沉積抑制劑、NNRα_7部分拮抗劑、治療靶向PDE4、RNA翻譯抑制劑、毒蕈堿性激動(dòng)劑、神經(jīng)生長因子受體激動(dòng)劑、NGF受體激動(dòng)劑和基因治療調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種抑制Αβ(20-42)球聚體(或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式)活性的方法，包括將Αβ(20-42)球聚體(或其他包含與抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式)適當(dāng)?shù)嘏c上述披露的結(jié)合蛋白接觸，使得Αβ(20-42)球聚體(或其他淀粉樣蛋白β蛋白形式)活性被抑制。在一個(gè)相關(guān)的方面中，本發(fā)明提供了一種在患有其中Αβ(20-42)球聚體活性(或其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式活性)是有害的病癥的人個(gè)體中抑制人Aβ(20-42)球聚體(或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式)活性的方法，包括向人個(gè)體施用上述披露的結(jié)合蛋白，使得人個(gè)體中的Αβ(20-42)球聚體活性(或其他包含與抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式活性)被抑制從而實(shí)現(xiàn)治療。優(yōu)選地，該病癥選自淀粉樣變性，例如阿爾茨海默病或唐氏綜合征。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種在患有其中Αβ(20-42)球聚體(或其他包含與抗體起反應(yīng)的球聚體表位的有害的Aβ形式)是有害的病癥的患者的方法，包括在施用如上討論的第二藥劑之前、同時(shí)或之后施用任何一種上述披露的結(jié)合蛋白的步驟。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二藥劑選自小分子或生物藥劑例如上述所列的那些。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過至少一種選自如下的方式將上述披露的藥物組合物施用于個(gè)體腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、子宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、推注、陰道、直腸、含服、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。本發(fā)明的一個(gè)方面提供了針對(duì)至少一種本發(fā)明的Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式結(jié)合蛋白的至少一種Αβ(20-42)球聚體抗-獨(dú)特型抗體。該抗-獨(dú)特型抗體包括任何包含含有免疫球蛋白分子至少一部分的分子的蛋白或肽，所述免疫球蛋白分子至少一部分例如但不限于至少一個(gè)重鏈或輕鏈的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或重鏈或輕鏈的配體結(jié)合部分、重鏈或輕鏈可變區(qū)、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)、或它們能并入本發(fā)明的接合蛋白中的任何一種這些實(shí)體的任何部分。附圖簡述圖1(A)顯示了人源化抗體5F7的可變重鏈(即5F7VH(hum8))的核苷酸序列(SEQIDNO.:42)，和圖I(B)顯示了人源化抗體5F7的可變重鏈的氨基酸序列(SEQIDNO.:1)。圖I(C)顯示了人源化抗體5F7的可變輕鏈(S卩5F7VL(hum8))的核苷酸序列(SEQIDNO.43)，和圖I(D)顯示了該核苷酸序列編碼的氨基酸序(SEQIDNO.:2)。(在圖中所有⑶R區(qū)均是加下劃線的)。圖2(A)顯示了人源化抗體7C6的可變重鏈(即7C6VH(hum7))的核苷酸序列(SEQIDNO.:44)，和圖2(B)顯示了人源化抗體7C6的可變重鏈的氨基酸序列(SEQIDNO.:3)。圖2(0顯示了人源化抗體706的可變輕鏈(即706￥1^01111117))的核苷酸序列(SEQIDNO.45)，和圖2(D)顯示了該核苷酸序列編碼的氨基酸序列(SEQIDNO.:4)。(在圖中所有CDR區(qū)均是加下劃線的)圖3顯示了生物素化小鼠5F7與截短的20-42球聚體的結(jié)合。具體而言，該生物素化小鼠5F7抗體的結(jié)合受增加量的未標(biāo)記的小鼠5F7(“HYB”)或人源化抗體5F7(“HUM8)抑制。圖4顯示了生物素化小鼠7C6與截短的20-42球聚體的結(jié)合。該生物素化小鼠7C6抗體的結(jié)合受增加量的未標(biāo)記的小鼠抗體7C6(“HYB)和人源化抗體7C6hum7(“HUM7”)抑制。圖5(A)顯示了標(biāo)準(zhǔn)蛋白(分子標(biāo)記蛋白，泳道1)；Aβ(1-42)原纖維制備物；對(duì)照(泳道2)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb5F7hum8，20h，37°C，上清液(泳道3)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb5F7hum8，20h，37°C，沉淀(泳道4)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb7C6hum7mut，20h，37°C，上清液(泳道5)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb7C6hum7mut,20h,37°C，沉淀(泳道6)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb7C6hum7wt，20h，37°C，上清液(泳道7)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb7C6hum7wt，20h，37°C，沉淀(泳道8)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb6E10，20h，37°C，上清液(泳道9)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAb6E10，20h37°C，沉淀(泳道10)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAbIgG2a，20h，37°C，上清液(泳道11)；Aβ(1-42)原纖維制備物+mAbIgG2a，20h，37°C，沉淀(泳道12)的SDSPAGE；以及圖5(B)以總抗體的百分?jǐn)?shù)顯示了mAbs結(jié)合Aβ-原纖維的定量分析結(jié)果。圖6(A)顯示了不同的抗_Αβ抗體(6E10、5F7hum8、7C6hum7wt、7C6hum7mut)的特異性的斑點(diǎn)印跡分析。在此測(cè)試的單克隆抗體是通過用Aβ(20-42)球聚體自動(dòng)免疫小鼠、然后選擇融合的雜交瘤細(xì)胞、接著人源化獲得的(除市售小鼠單克隆抗體6E10，SignetNo9320以外)。將各種Αβ形式以連續(xù)稀釋物施加并與相應(yīng)的單克隆抗體溫育用于免疫反應(yīng)1.Αβ(1-42)單體，0.1%NH4OH2.Aβ(1-40)單體，0.1%NH4OH3.Aβ(1-42)單體，0.1%NaOH4.Aβ(1-40)單體，0.1%NaOH5.Aβ(1-42)球聚體6·Aβ(12-42)球聚體7·Aβ(20-42)球聚體8.Aβ(1-42)原纖維制備物9.sAPPα(Sigma)(第一斑點(diǎn)lpmol)圖6(B)顯示了當(dāng)使用光密度分析進(jìn)行定量評(píng)價(jià)獲得的結(jié)果。對(duì)于每種Αβ形式，只有相應(yīng)于最低抗原濃度的斑點(diǎn)得到評(píng)價(jià)，前提是其具有較在最終光學(xué)上清楚鑒定的Aβ(20-42)球聚體斑點(diǎn)的相對(duì)密度(閾值)大20%的相對(duì)密度。對(duì)每一斑點(diǎn)印跡獨(dú)立測(cè)定該閾值。該值指示對(duì)于給定的抗體在識(shí)別Aβ(20-42)球聚體和相應(yīng)的Αβ形式之間的關(guān)系。圖7顯示了5F7VH區(qū)氨基酸序列的比對(duì)。5F7VH、Hu5F7VH&&AMUCl-l，CI^njH4片段的氨基酸序列以單字母編碼顯示。在小鼠5F7VH序列中基于Kabat，E.A.，等(1991)的定義的CDR序列加下劃線。在該圖中接納體人VH片段中的CDR序列被省略。在Hu5F7VH序列中的單下劃線氨基酸被預(yù)測(cè)與CDR序列接觸，因此已被相應(yīng)的小鼠殘基所取代。HU5F7VH序列中的雙下劃線氨基酸已被改變?yōu)樵谙嗤薞H亞組中的共有氨基酸以消除潛在的免疫原性。圖8顯示了5F7VL區(qū)氨基酸序列的比對(duì)。5F7VL、Hu5F7VLW&ATR1.37，CI^PJK4片段的氨基酸序列以單字母編碼顯示。在小鼠5F7VL序列中基于Kabat，E.A.，等(1991)的定義的CDR序列加下劃線。在該圖中接納體人VL片段中的CDR序列被省略。在Hu5F7VL序列中的單下劃線氨基酸被預(yù)測(cè)與CDR序列接觸，因此已被相應(yīng)的小鼠殘基所取代。HU5F7VL序列中的雙下劃線氨基酸已被改變?yōu)樵谙嗤薞L亞組中的共有氨基酸以消除潛在的免疫原性。圖9顯示了不同的抗體與兩位阿爾茨海默病患者以及19月齡APP轉(zhuǎn)基因Tg2576小鼠和17月齡APP/Lo小鼠尸檢橫切片的結(jié)合。a)在0.7μg/ml濃度下Aβ實(shí)質(zhì)沉積物(淀粉質(zhì)斑塊；黑色箭頭)和血管淀粉樣蛋白沉積物(腦淀粉樣蛋白血管病，CAA;白色箭頭)的染色僅出現(xiàn)于6Ε10和4G8，而不出現(xiàn)于h7C6wt和h7C6mut；b)通過組織學(xué)圖像分析，在0.7μg/ml濃度下在阿爾茨海默病患者RZ16新皮質(zhì)中，通過抗體的Αβ斑塊染色定量分析。光密度值(0%=環(huán)境背景染色)計(jì)算自灰度值，以及對(duì)抗體之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)(AN0VA，F(xiàn)(3,59)=207.7;Ρ<0.0001；然后是在后Bonferroni氏t_檢驗(yàn))6E10和4G8不同于所有其他抗體(P<0.001)，同時(shí)h7C6wt和h7C6mut顯示根本沒有染色。c)通過組織學(xué)圖像分析，在0.7μg/ml濃度下在阿爾茨海默病患者RZ55新皮質(zhì)中，通過抗體的Αβ斑塊染色定量分析。光密度值(0%=環(huán)境背景染色)計(jì)算自灰度值，以及對(duì)抗體之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)(AN0VA，F(xiàn)(3,59)=182.6，P<0.0001；然后是在后Bonferroni氏t_檢驗(yàn))6E10和4G8不同于所有其他抗體(P<0.001)，同時(shí)h7C6wt和h7C6mut顯示根本沒有染色。d)通過組織學(xué)圖像分析，在幾種濃度下在人APPjsaaR基因小鼠品系(Tg2576)新皮質(zhì)中，通過抗體的Αβ斑塊染色定量分析。光密度值(0%=環(huán)境背景染色)計(jì)算自灰度值，以及在0.7μg/ml下對(duì)抗體之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)(AN0VA，F(xiàn)(3，59)=290.9，P<0.0001；然后是在后Bonferroni氏t-檢驗(yàn)):6E10和4G8不同于h7C6抗體(P<0.001),同時(shí)h7C6wt和h7C6mut顯示根本沒有染色。e)通過組織學(xué)圖像分析，在幾種濃度下在人APP倫敦轉(zhuǎn)基因小鼠品系(APP/Lo)新皮質(zhì)中，通過抗體的Αβ斑塊染色定量分析。光密度值(0%=環(huán)境背景染色)計(jì)算自灰度值，以及在0.7μg/ml下對(duì)抗體之間的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)mm,F(3，50)=145.6，P<0.0001；然后是在后Bonferroni氏t-檢驗(yàn)):6E10和4G8不同于h7C6抗體(P<0.001),同時(shí)h7C6wt和h7C6mut顯示根本沒有染色。發(fā)明詳述除非在此另有規(guī)定，關(guān)于本發(fā)明使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)當(dāng)具有為本領(lǐng)域技術(shù)人員所通常理解的含義。術(shù)語的含義和范圍應(yīng)當(dāng)是清楚的；然而，在任何潛在歧義的情況下，在此提供的定義優(yōu)先取代任何辭典或外來定義。此外，除非上下文另有需要，否則單數(shù)術(shù)語應(yīng)當(dāng)包括復(fù)數(shù)，以及復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)當(dāng)包括單數(shù)。在本申請(qǐng)中，除非另有說明，“或”的使用意味著“和/或”。此外，術(shù)語“包括(including)”以及其他形式例如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用是不受限的。同樣，除非另有明確說明，術(shù)語例如“元件”或“組件”包括包含一個(gè)單元的元件和組件以及包含多于一個(gè)亞單元的元件和組件。一般地，在本文所描述的組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)以及蛋白和核酸化學(xué)和雜交方面所使用的術(shù)語以及這些方面的技術(shù)是本領(lǐng)域公知且常用的。除非另有說明，一般根據(jù)本領(lǐng)域公知的以及如在本說明書全文中所引用和討論的各種一般和更具體的參考文獻(xiàn)中所描述的常規(guī)方法執(zhí)行本發(fā)明的方法和技術(shù)。如本領(lǐng)域中所通常進(jìn)行的或如本文中所描述的，根據(jù)廠商說明書執(zhí)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。在本文所描述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)方面所使用的術(shù)語以及這些方面的實(shí)驗(yàn)程序和技術(shù)是本領(lǐng)域公知且常用的。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送以及患者治療。具體而言，本發(fā)明提供了對(duì)于截短形式的Αβ球聚體具有高親和力的球聚體-特異性抗體。這些抗體不僅能區(qū)別對(duì)待其他形式的Aβ肽，特別是單體和原纖維，而且還能區(qū)別對(duì)待未截短形式的Aβ球聚體。因此，本發(fā)明涉及一種具有對(duì)Aβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于該抗體對(duì)Aβ(1-42)球聚體的結(jié)合親和力的抗體。進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及一種具有對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于該抗體對(duì)Αβ(12-42)球聚體的結(jié)合親和力的抗體。因此，根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及具有對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于該抗體對(duì)Aβ(1-42)球聚體和Aβ(12-42)球聚體的結(jié)合親和力的抗體。術(shù)語“Αβ(X-Y)”在此指包括X和Y的人淀粉狀β蛋白的從氨基酸第X位到氨基酸第Y位的氨基酸序列，特別是指從氨基酸序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAT(SEQIDNO.:64)(相應(yīng)于氨基酸第1位到第43位)的氨基酸第X位到氨基酸第Y位的氨基酸序列或任何一種其天然存在的變體，特別是那些具有至少一個(gè)選自如下突變:A2T、H6R、D7N、A21G(“佛蘭芒人”)、E22G(“北極地區(qū)人”)、E22Q(“荷蘭人”)、E22K(“意大利人”)、D23N(“艾奧瓦人”)、A42T和A42V的氨基酸序列，其中編號(hào)相對(duì)于包括第X位和第Y位或具有至多3個(gè)額外的氨基酸取代的序列的Aβ肽的起點(diǎn)，所述額外的氨基酸取代都不會(huì)阻止球聚體形成，優(yōu)選地在從氨基酸第12或第X位(無論哪個(gè)數(shù)字更大)至氨基酸第42或第Y位(無論哪個(gè)數(shù)字更小)的部分不具有額外的氨基酸取代，更優(yōu)選地在從氨基酸第20或第X位(無論哪個(gè)數(shù)字更大)至氨基酸第42或第Y位(無論哪個(gè)數(shù)字更小)的部分不具有額外的氨基酸取代，以及最優(yōu)選地在從氨基酸第20或第X位(無論哪個(gè)數(shù)字更大)至氨基酸第40或第Y位(無論哪個(gè)數(shù)字更小)的部分不具有額外的氨基酸取代，“額外的”氨基酸取代在此定義為任何未見于自然界中的規(guī)范序列的背離。更具體地說，術(shù)語“Αβ(1-42)”在此指包括1和42的人淀粉狀β蛋白的從氨基酸第1位到氨基酸第42位的氨基酸序列，特別是指氨基酸序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQIDNO.46)或任何一種其天然存在的變體，特別是那些具有至少一個(gè)選自A2T、H6R、D7N、A21G(“佛蘭芒人”)、E22G(“北極地區(qū)人”)、E22Q(“荷蘭人”)、E22K(“意大利人”)、D23N(“艾奧瓦人”)、A42T和A42V的突變的變體，其中編號(hào)相對(duì)于包括1和42或具有至多3個(gè)額外的氨基酸取代的序列的Αβ肽的起點(diǎn)，所述額外的氨基酸取代都不會(huì)阻止球聚體形成，優(yōu)選在從氨基酸第20位到氨基酸第42位的部分不具有額外的氨基酸取代。同樣地，術(shù)語“Αβ(1-40)”在此指包括1和40的人淀粉狀β蛋白的從氨基酸第1位到氨基酸第40位的氨基酸序列，特別是指氨基酸序列DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV(SEQIDNO.47)或任何一種其天然存在的變體，特別是那些具有至少一個(gè)選自A2T、H6R、D7N、A21G(“佛蘭芒人”)、E22G(“北極地區(qū)人”)、E22Q(“荷蘭人”)、E22K(“意大利人”)和D23N(“艾奧瓦人”)的突變的變體，其中編號(hào)相對(duì)于包括1和40或具有至多3個(gè)額外的氨基酸取代的序列的Αβ肽的起點(diǎn)，所述額外的氨基酸取代都不會(huì)阻止球聚體形成，優(yōu)選在從氨基酸第20位到氨基酸第40位的部分不具有額外的氨基酸取代。更具體地說，術(shù)語“Αβ(12-42)”在此指包括12和42的人淀粉狀β蛋白的從氨基酸第12位到氨基酸第42位的氨基酸序列，特別是氨基酸序列VHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQIDNO.:66)或任何一種其天然存在的變體，特別是那些具有至少一個(gè)選自A21G(“佛蘭芒人”)、E22G(“北極地區(qū)人”)、E22Q(“荷蘭人”)、E22K(“意大利人”)、D23N(“艾奧瓦人”)、A42T和A42V的突變的變體，其中編號(hào)相對(duì)于包括12和42或具有至多3個(gè)額外的氨基酸取代的序列的Αβ肽的起點(diǎn)，所述額外的氨基酸取代都不會(huì)阻止球聚體形成，優(yōu)選在從氨基酸第20位到氨基酸第42位的部分不具有額外的氨基酸取代。更具體地說，術(shù)語“Αβ(20-42)”在此指包括20和42的人淀粉狀β蛋白的從氨基酸第12位到氨基酸第42位的氨基酸序列，特別是氨基酸序列FAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQIDNO.:67)或任何一種其天然存在的變體，特別是那些具有至少一個(gè)選自A21G(“佛蘭芒人”)、E22G(“北極地區(qū)人”)、E22Q(“荷蘭人”)、E22K(“意大利人”)、D23N(“艾奧瓦人”)、A42T和A42V的突變的變體，其中編號(hào)相對(duì)于包括20和42或具有至多3個(gè)額外的氨基酸取代的序列的Αβ肽的起點(diǎn)，所述額外的氨基酸取代都不會(huì)阻止球聚體形成，優(yōu)選不具有任何額外的氨基酸取代。術(shù)語“Αβ(X-Y)球聚體”(Αβ(X-Y)球狀寡聚體)在此指具有均質(zhì)性及截然不同的物理特性的如上所定義的Αβ(X-Y)肽的可溶的、球狀的、非共價(jià)的締合物。根據(jù)一個(gè)方面，Αβ(X-Y)球聚體是通過與陰離子去污劑溫育可獲得的Aβ(X-Y)肽的穩(wěn)定的、非原纖維的、寡聚的集合。與單體和原纖維形成對(duì)比的是，這些球聚體具有規(guī)定的亞基裝配數(shù)的特征(例如，于在此并入作為參考的國際申請(qǐng)公開號(hào)WO2004/067561中所描述的，早期裝配形式，η=4-6，“寡聚體Α”，和晚期裝配形式，η=12-14，“寡聚體B”)。該球聚體具有三維球形結(jié)構(gòu)(“熔球(moltenglobule)”，參見Barghorn等，2005，JNeurochem,95,834-847)它們可進(jìn)一步具有一種或更多種如下特征-N-端氨基酸X-23為混棲蛋白酶(如嗜熱菌蛋白酶或內(nèi)切蛋白酶GluC)可切割產(chǎn)生截短形式的球聚體；-C-末端氨基酸24-Y不為混棲蛋白酶和抗體所可接近；-這些球聚體的截短形式維持所述球聚體的3-維核心結(jié)構(gòu)，在其球聚體構(gòu)象中的核心表位Aβ(20-Υ)具有更好的可接近性。根據(jù)本發(fā)明以及特別是為了評(píng)價(jià)本發(fā)明的抗體的結(jié)合親和力，術(shù)語“Αβ(X-Y)球聚體”在此特別是指通過如其全文在此并入作為參考的國際申請(qǐng)公開號(hào)WO2004/067561中所描述的方法可獲得的產(chǎn)物。所述方法包括解折疊天然、重組或合成的Aβ(X-Y)肽或其衍生物；將至少部分解折疊的Αβ(X-Y)肽或其衍生物暴露于去污劑，降低去污作用并持續(xù)溫育。為了解折疊肽，可讓氫鍵斷裂劑如六氟異丙醇(HFIP)作用于蛋白。當(dāng)作用溫度為約20-50°C，特別是約35-40°C時(shí)，幾分鐘的作用時(shí)間，例如約10-60分鐘就足夠了。之后在與含水緩沖液可混溶的適合的有機(jī)溶劑如二甲亞砜(DMSO)中，優(yōu)選以濃縮形式溶解蒸發(fā)殘留物至干燥，產(chǎn)生至少部分解折疊的肽或其衍生物的懸液，其可被接著使用。如果需要的話，原懸液可在低溫下例如在約-20°C下貯藏臨時(shí)的一段時(shí)間?；蛘?，所述肽或其衍生物可處于微酸性、優(yōu)選含水的溶液中，例如約IOmMHCl水溶液中。在約幾分鐘的溫育時(shí)間后，通過離心除去不溶性成分。在IOOOOg下離心幾分鐘是有利的。這些方法步驟優(yōu)選在室溫下，即在20-30°C的溫度下進(jìn)行。離心后獲得的上清液含有Αβ(X-Y)肽或其衍生物并可在低溫下例如在約-20°C下貯藏臨時(shí)的一段時(shí)間。以下暴露于去污劑中涉及所述肽或其衍生物的寡聚化以產(chǎn)生中間類型的寡聚體(在國際申請(qǐng)公開號(hào)WO2004/067561中稱為寡聚體A)。為了該目的，讓去污劑作用于至少部分解折疊的肽或其衍生物直至足夠的中間類型寡聚體產(chǎn)生。優(yōu)選施用離子型去污劑，特別是陰離子去污劑。根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，使用了式(I)的去污劑R-X，其中R基是具有6-20個(gè)以及優(yōu)選10-14個(gè)碳原子的無支鏈或支鏈烷基或具有6-20個(gè)以及優(yōu)選10-14個(gè)碳原子的無支鏈或支鏈烯基，以及X基是酸性基團(tuán)或其鹽，X優(yōu)選自-C00_M+、-SO3H+,以及特別是-0S03_M+，并且M+是氫陽離子或優(yōu)選自堿金屬、堿土金屬陽離子和銨陽離子的無機(jī)或有機(jī)陽離子。有利的是其中R是的去污劑無支鏈烷基、特別是烷基-1-基的式(I)的去污劑。特別優(yōu)選的是十二烷基硫酸鈉(SDS)。月桂酸和油酸也可有利地使用。去污劑月桂酰基肌氨酸(lauroylsarcosin)(也稱為肌氨酰NL-30或Gardol)的鈉鹽也是特別優(yōu)選的。去污劑的作用時(shí)間無論如何都具體取決于解折疊的肽或其衍生物寡聚化的程度。如果，根據(jù)解折疊步驟，已用氫鍵斷裂劑(即特別是用六氟異丙醇)預(yù)先處理了所述肽或其衍生物，則當(dāng)作用溫度為約20-50°C以及特別是約35-40°C時(shí)，作用時(shí)間在幾個(gè)小時(shí)的范圍內(nèi)，優(yōu)選約1-20個(gè)小時(shí)，特別是約2-10小時(shí)就足夠了。如果較少解折疊或基本上沒有解折疊的肽或其衍生物是起點(diǎn)，則相應(yīng)地更長的作用時(shí)間是權(quán)宜的。如果所述肽或其衍生物已進(jìn)行預(yù)處理，例如，根據(jù)上述作為HFIP處理的替代的操作或所述肽或其衍生物直接寡聚化，則當(dāng)作用溫度為約20-50°C以及特別是約35-40°C時(shí)，作用時(shí)間為約5_30小時(shí)以及特別是約10-20小時(shí)就足夠了。溫育后，通過離心除去不溶性成分是有利的。在IOOOOg下離心幾分鐘是合適的。取決于所使用的去污劑選擇去污劑濃度。如果使用SDS，則按重量計(jì)算濃度為0.01-1%，優(yōu)選0.05-0.5%，例如約0.2%被證明是合適的。如果使用月桂酸或油酸，稍高的濃度是合適的，例如按重量計(jì)算為0.05-2%，優(yōu)選0.1-0.5%，例如約0.5%。去污作用應(yīng)當(dāng)在大約生理學(xué)范圍的鹽濃度下進(jìn)行。因此，特別是50_500mM，優(yōu)選100-200mM以及尤其是約140mM的NaCl濃度是合適的。去污作用的隨后降低以及持續(xù)溫育涉及進(jìn)一步的寡聚化以產(chǎn)生本發(fā)明的Αβ(X-Y)球聚體(在國際申請(qǐng)公開號(hào)WO2004/067561中稱為寡聚體B)。由于獲得自上述步驟的組合物通常含有去污劑并且鹽濃度處于生理學(xué)范圍內(nèi)，因此方便降低去污作用以及優(yōu)選地也方便減少鹽濃度。這可通過減少去污劑和鹽濃度來實(shí)行，例如通過方便地用水或更低鹽濃度的緩沖液如Tris-HCl，pH7.3稀釋。已證實(shí)稀釋因子為約2-10，優(yōu)選為約3-8，以及特別是約4是合適的。還可通過添加能中和所述去污作用的物質(zhì)實(shí)現(xiàn)降低去污作用。這些物質(zhì)的例子包括能與去污劑絡(luò)合的物質(zhì)，如能在純化和抽提方法過程中穩(wěn)定細(xì)胞的物質(zhì)，例如特定的Ε0/Ρ0嵌段共聚物，特別是商標(biāo)名為Plun)nieF68的嵌段共聚物。處于特定臨界膠束濃度周圍或高于特定臨界膠束濃度的濃度范圍內(nèi)的烷氧基化以及特別是乙氧基化烷基酚如TritonX系列的乙氧基化叔辛基酚，特別是Tritonxioo、3-(3-膽酰胺丙基二甲氨基)-l-丙磺酸內(nèi)鹽(CHAPS)或烷氧基化以及特別是乙氧基化山梨糖醇酐脂肪酸酯如那些Tween系列的，特別是Tween20，可同等地使用。隨后，溫育溶液直至足夠的本發(fā)明的Aβ(X-Y)球聚體產(chǎn)生為止。當(dāng)在約20-50°C下以及特別是在約35-40°C下作用時(shí)，作用時(shí)間在幾個(gè)小時(shí)范圍內(nèi)，優(yōu)選約10-30小時(shí)以及特別是約15-25小時(shí)就足夠了。然后，可濃縮溶液并通過離心除去可能的殘留物。這里也一樣，在IOOOOg下離心幾分鐘被證實(shí)是合適的。離心后獲得的上清液含有在此所述的Aβ(X-Y)球聚體。本發(fā)明的Αβ(X-Y)球聚體可通過本身已知的方式最終回收，例如通過超濾、透析、沉淀或離心。進(jìn)一步優(yōu)選如果在變性條件下Αβ(X-Y)球聚體電泳分離如通過SDS-PAGE,則產(chǎn)生兩條帶(如對(duì)于Aβ(1-42)具有38/48kDa的表觀分子量)，以及特別優(yōu)選如果在分離前球聚體進(jìn)行戊二醛處理，則這兩條帶合并為一條帶。還優(yōu)選如果球聚體進(jìn)行大小排阻層析則分別產(chǎn)生單峰(如對(duì)于Αβ(1-42)球聚體相應(yīng)于大約IOOkDa的分子量，或?qū)τ谖於┙宦?lián)的Aβ(1-42)球聚體大約60kDa的分子量)。起始于Aβ(1-42)肽、Aβ(12-42)肽和Aβ(20-42)肽，所述方法特別適合于獲得Aβ(1-42)球聚體、Aβ(12-42)球聚體和Aβ(20-42)球聚體。在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，其中X選自數(shù)字2..24以及Y為如上所定義的Αβ(X-Y)球聚體是那些通過將Αβ(I-Y)球聚體截短至其中X選自數(shù)字2..24、優(yōu)選地X為20或12，以及Y為如上所定義的更短形式而可獲得的球聚體，其可通過用適當(dāng)?shù)牡鞍酌柑幚韥慝@得。例如，可通過對(duì)Αβ(1-42)球聚體進(jìn)行嗜熱菌蛋白酶蛋白水解獲得Αβ(20-42)球聚體，以及可通過對(duì)Αβ(1-42)球聚體進(jìn)行內(nèi)切蛋白酶GluC蛋白水解獲得Αβ(12-42)球聚體。當(dāng)達(dá)到期望的蛋白水解程度時(shí)，以通常所知的方式滅活蛋白酶。在本文業(yè)已描述的操作之后，分離所得到的球聚體，以及如果需要的話，通過進(jìn)一步的檢查和純化步驟進(jìn)行進(jìn)一步的處理。所述處理的詳細(xì)描述披露于國際申請(qǐng)公開號(hào)WO2004/067561中，其在此并入作為參考。為了本發(fā)明的目的，Αβ(1-42)球聚體具體而言是如以下本文實(shí)施例Ib中所描述的Aβ(1-42)球聚體；Aβ(20-42)球聚體具體而言是如以下本文實(shí)施例Ia中所描述的Aβ(20-42)球聚體，以及Aβ(12-42)球聚體具體而言是如以下本文實(shí)施例Ic中所描述的Aβ(12-42)球聚體。優(yōu)選地，球聚體顯示針對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的親和力。優(yōu)選地，球聚體同時(shí)也具有神經(jīng)元調(diào)節(jié)作用。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，球聚體由11-16個(gè)以及最優(yōu)選地由12-14個(gè)Αβ(X-Y)肽組成。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，術(shù)語“Αβ(X-Y)球聚體”在此指基本上由Αβ(X-Y)亞基組成的球聚體，其中優(yōu)選平均起來至少11/12的亞基為Αβ(X-Y)型，更優(yōu)選少于10%的球聚體包含任何非-Aβ(X-Y)肽，以及最優(yōu)選制備物中非-Aβ(X-Y)肽的含量低于檢出閾值。更具體地說，術(shù)語“Αβ(1-42)球聚體”在此指包含如上定義的Aβ(1-42)單元的球聚體；術(shù)語“Αβ(12-42)球聚體”在此指包含如上定義的Αβ(12-42)單元的球聚體；以及術(shù)語“Αβ(20-42)球聚體”在此指包含如上定義的Aβ(20-42)單元的球聚體。術(shù)語“交聯(lián)的Αβ(X-Y)球聚體”在此指通過交聯(lián)、優(yōu)選化學(xué)交聯(lián)、更優(yōu)選醛交聯(lián)、以及最優(yōu)選戊二醛交聯(lián)球聚體組成單位，可獲得自如上所描述的Aβ(X-Y)球聚體的分子。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，交聯(lián)的球聚體基本上為其中所述單位是至少部分通過共價(jià)鍵連接而非僅通過非共價(jià)相互作用結(jié)合的球聚體。為了本發(fā)明的目的，交聯(lián)的Αβ(1-42)球聚體具體而言是如本文實(shí)施例Id中所描述的交聯(lián)的Αβ(1-42)寡聚體。術(shù)語“Αβ(X-Y)球聚體衍生物”在此特別指通過共價(jià)連接利于檢測(cè)的基團(tuán)而被標(biāo)記的球聚體，所述基團(tuán)優(yōu)選熒光團(tuán)，如異硫氰酸熒光素、藻紅蛋白、維多利亞多管發(fā)光水母(AequoreaVictoria)熒光蛋白、網(wǎng)鯛屬(Dictyosoma)熒光蛋白或它們的任何組合或熒光活性衍生物；生色團(tuán)；化學(xué)發(fā)光體，如熒光素酶，優(yōu)選北美螢火蟲(Photinuspyralis)熒光素酶、費(fèi)氏弧菌(Vibriofischeri)熒光素酶或它們的任何組合或化學(xué)發(fā)光活性衍生物；酶活性基團(tuán)，如過氧化物酶，如辣根過氧化物酶或其任何酶活性衍生物；高電子密度基團(tuán)，如含重金屬的基團(tuán)，如含金的基團(tuán)；半抗原，如酚衍生的半抗原；強(qiáng)抗原結(jié)構(gòu)，如預(yù)計(jì)具有抗原性的肽序列，如通過Kolaskar和Tongaonkar的算法預(yù)計(jì)具有抗原性的肽序列；針對(duì)另一種分子的適體；螯合基團(tuán)，如六組氨酸基；天然或天然衍生的蛋白結(jié)構(gòu)介導(dǎo)的進(jìn)一步的特異性蛋白-蛋白相互作用，如fos/jim對(duì)成員；磁性基團(tuán)，如鐵磁性基團(tuán)；或放射性基團(tuán)，如包含1H、14C、32P、35S或125I或它們的任何組合的基團(tuán)；或指通過高親和力相互作用共價(jià)或非共價(jià)連接所標(biāo)簽的球聚體，優(yōu)選共價(jià)連接有利于失活、多價(jià)螯合、降解和/或沉淀的基團(tuán)，優(yōu)選用促進(jìn)體內(nèi)降解的基團(tuán)、更優(yōu)選用泛素進(jìn)行標(biāo)簽，在此如果該標(biāo)簽的寡聚體在體內(nèi)裝配則是特別優(yōu)選的；或指通過任何上述組合所修飾的球聚體。這樣的標(biāo)記和標(biāo)簽基團(tuán)及用于將它們連接在蛋白上的方法是本領(lǐng)域已知的。標(biāo)記和/或標(biāo)簽可在球聚化之前、期間或之后進(jìn)行。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，球聚體衍生物是通過標(biāo)記和/或標(biāo)簽反應(yīng)可獲得自球聚體的分子。相應(yīng)地，術(shù)語“Αβ(X-Y)單體衍生物”在此特別指如對(duì)球聚體所描述的被標(biāo)記或標(biāo)簽的Aβ單體。有利地，本發(fā)明的抗體以1XICT6M-IXICT12M的Kd結(jié)合Aβ(20-42)球聚體。優(yōu)選地，抗體以高親和力，例如以1XIO-7M的Kd或更大的親和力，如以3X10_8Μ的Kd或更大的親和力，以1X10_8Μ的Kd或更大的親和力，如以3X10_9Μ的Kd或更大的親和力，以1X10_9Μ的Kd或更大的親和力，如以3XΙΟ,Μ的Kd或更大的親和力，以IXΙΟ,Μ的Kd或更大的親和力，如以3Χ10_"Μ的Kd或更大的親和力，或以1Χ10_"Μ的Kd或更大的親和力結(jié)合Aβ(20-42)球聚體。術(shù)語“更大的親和力”在此指一種相互作用的程度，其中未結(jié)合的抗體和未結(jié)合的球聚體在一邊而抗體_球聚體復(fù)合物在另一邊之間的平衡是更有利于抗體_球聚體復(fù)合物。同樣地，術(shù)語“更小的親和力”在此指一種相互作用的程度，其中未結(jié)合的抗體和未結(jié)合的球聚體在一邊而抗體-球聚體復(fù)合物在另一邊之間的平衡是更有利于未結(jié)合的抗體和未結(jié)合的球聚體。術(shù)語“更大的親和力”與術(shù)語“更高的親和力”是同義的，以及術(shù)語“更小的親和力”與術(shù)語“更低的親和力”是同義的。根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及以1XIO-6M-IXIO-12M的Kd結(jié)合Aβ(20-42)球聚體，以ICT12M的Kd或更小的親和力結(jié)合Aβ(1-42)球聚體，對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于對(duì)Aβ(1-42)球聚體的結(jié)合親和力的抗體。優(yōu)選的是本發(fā)明的抗體對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力較該抗體對(duì)Aβ(1-42)球聚體的結(jié)合親和力大至少2倍，如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，如至少20倍、至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，如至少200倍、至少300倍或至少500倍，和還更優(yōu)選至少1000倍，如至少2000倍、至少3000倍或至少5000倍，還更優(yōu)選至少10000倍，如至少20000倍、至少30000倍或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及以具有ICT12M的Kd或更小的親和力結(jié)合Aβ(12-42)球聚體，對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于對(duì)Aβ(12-42)球聚體的結(jié)合親和力的抗體。還優(yōu)選的是本發(fā)明的抗體對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力較該抗體對(duì)Aβ(12-42)球聚體的結(jié)合親和力大至少2倍，如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，如至少20倍、至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，如至少200倍、至少300倍或至少500倍，和還更優(yōu)選至少1000倍，如至少2000倍、至少3000倍或至少5000倍，還更優(yōu)選至少10000倍，如至少20000倍、至少30000倍或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體結(jié)合至少一種如上定義的Αβ球聚體并對(duì)至少一種非球聚體形式的Αβ具有比較起來更小的親和力。較對(duì)至少一種Aβ球聚體，對(duì)至少一種非球聚體形式的Aβ具有相對(duì)更小的親和力的本發(fā)明的抗體包括較對(duì)Αβ(1-42)單體，對(duì)Αβ(20-42)球聚體具有更大結(jié)合親和力的抗體。此外，可選地或另外地優(yōu)選抗體對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于對(duì)Aβ(1-40)單體的結(jié)合親和力。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體針對(duì)Αβ(20-42)球聚體的親和力大于其針對(duì)Aβ(1-40)和Αβ(1-42)單體的親和力。術(shù)語“Αβ(X-Y)單體”在此指Αβ(X-Y)肽的分離形式，優(yōu)選地指一種基本上不卷入與其他Αβ肽的非共價(jià)相互作用的Αβ(X-Y)肽的形式。事實(shí)上，Αβ(X-Y)單體通常以水溶液形式提供。在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，單體水溶液含有0.05%-0.2%，更優(yōu)選約0.ΝΗ40Η。在本發(fā)明的另一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，單體水溶液含有0.05%-0.2%，更優(yōu)選約0.1%NaOH。當(dāng)使用時(shí)(例如用于測(cè)定本發(fā)明的抗體的結(jié)合親和力)，可以適當(dāng)?shù)姆绞椒奖愕叵♂屗鋈芤?。此外，通常有利的是在其沉淀?小時(shí)內(nèi)、特別是1小時(shí)內(nèi)以及尤其在30分鐘內(nèi)使用所述溶液。更具體地說，術(shù)語“Αβ(1-40)單體”在此指如本文中所描述的Aβ(1-40)單體制備物，以及術(shù)語“Αβ(1-42)單體”在此指如本文中所描述的Aβ(1-42)制備物。有利地，本發(fā)明的抗體以低親和力結(jié)合一種或更優(yōu)選地結(jié)合兩種單體，最優(yōu)選以1X10_8Μ的Kd或更小的親和力，如以3X10_8Μ的Kd或更小的親和力，以1X10_7Μ的Kd或更小的親和力，如以3X10_7Μ的Kd或更小的親和力，或以1X10_6Μ的Kd或更小的親和力，如以3XICT5M的Kd或更小的親和力，或以IXICT5M的Kd或更小的親和力結(jié)合。特別優(yōu)選的是本發(fā)明的抗體對(duì)Aβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力較該抗體對(duì)一種或更優(yōu)選地對(duì)兩種單體的結(jié)合親和力大至少2倍，如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，如至少20倍、至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，如至少200倍、至少300倍或至少500倍，以及還更優(yōu)選至少1000倍，如至少2000倍、至少3000倍或至少5000倍，還更優(yōu)選至少10000倍，如至少20000倍、至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。較對(duì)至少一種Αβ球聚體，對(duì)至少一種非球聚體形式的Aβ具有相對(duì)更小的親和力的本發(fā)明的抗體進(jìn)一步包括較對(duì)Αβ(1-42)原纖維，對(duì)Αβ(20-42)球聚體具有更大結(jié)合親和力的抗體。此外，可選地或另外地優(yōu)選抗體對(duì)Aβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于對(duì)Aβ(1-40)原纖維的結(jié)合親和力。術(shù)語“原纖維”在此指一種包含非共價(jià)締合的單個(gè)Αβ(X-Y)肽的裝配體的分子結(jié)構(gòu)，其在電子顯微鏡下顯示纖絲結(jié)構(gòu)，其結(jié)合剛果紅，在偏振光下顯示雙折射，并且其的χ-射線衍射圖譜為交叉_β結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，原纖維是一種通過包括如在0.IMHCl中，于去污劑不存在的情況下合適的Aβ肽的自身誘導(dǎo)的聚合聚集，所述聚集導(dǎo)致多于24個(gè)單體、優(yōu)選多于100個(gè)單體的聚集體形成的處理可獲得的分子結(jié)構(gòu)。該處理為本領(lǐng)域眾所周知。有利地，Αβ(X-Y)原纖維以水溶液形式得到使用。在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過將Aβ肽溶解于0.1%NH4OH中，用20mMNaH2PO4,140mMNaCl，pH7.4以14稀釋其，然后調(diào)PH至7.4，在37°C下溫育溶液20小時(shí)，接著在IOOOOg下離心10分鐘并重懸于20mMNaH2PO4,140mMNaCl，pH7.4中來制備原纖維水溶液。術(shù)語“Αβ(X-Y)原纖維”在此還指包含Αβ(X-Y)亞基的原纖維，其中優(yōu)選平均起來至少90%的亞基為Aβ(X-Y)型，更優(yōu)選至少98%的亞基為Aβ(X-Y)型，以及最優(yōu)選非-Αβ(X-Y)肽的含量低于檢出閾值。更具體地說，術(shù)語“Αβ(1-42)原纖維”在此指如實(shí)施例IV.2.8中所描述的Aβ(1-42)原纖維制備物。有利地，本發(fā)明的抗體以低親和力結(jié)合一種或更優(yōu)選地結(jié)合兩種原纖維，最優(yōu)選以1X10_8Μ的Kd或更小的親和力，如以3X10_8Μ的Kd或更小的親和力，以1X10_7Μ的Kd或更小的親和力，如以3X10_7Μ的Kd或更小的親和力，或以1X10_6Μ的Kd或更小的親和力，如以3XICT5M的Kd或更小的親和力，或以IXICT5M的Kd或更小的親和力結(jié)合。特別優(yōu)選的是本發(fā)明的抗體對(duì)Aβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力較該抗體對(duì)一種或更優(yōu)選地對(duì)兩種原纖維的結(jié)合親和力大至少2倍，如至少3倍或至少5倍，優(yōu)選至少10倍，如至少20倍、至少30倍或至少50倍，更優(yōu)選至少100倍，如至少200倍、至少300倍或至少500倍，以及還更優(yōu)選至少1000倍，如至少2000倍、至少3000倍或至少5000倍，還更優(yōu)選至少10000倍，如至少20000倍、至少30000或至少50000倍，以及最優(yōu)選至少100000倍。根據(jù)一個(gè)特定的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及具有對(duì)Αβ(20-42)球聚體的結(jié)合親和力大于其對(duì)Aβ(1-40)和Αβ(1-42)原纖維的結(jié)合親和力的抗體。根據(jù)一個(gè)特別具體的實(shí)施方案，本發(fā)明涉及較對(duì)至少一種Αβ球聚體、特別是Αβ(20-42)球聚體，對(duì)Αβ的單體和原纖維形式具有相對(duì)更小的親和力的抗體。這些抗體在下文中稱為球聚體特異性抗體。應(yīng)當(dāng)指出本發(fā)明的抗體還可與除在此描述的Αβ球聚體以外的Αβ形式起反應(yīng)，即與之結(jié)合。這些抗原可以是或可以不是寡聚化或球聚化的。因此，本發(fā)明的抗體結(jié)合的抗原包括任何包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式。這樣的Αβ形式包括截短和非截短的Aβ(X-Y)形式(具有如上定義的X和Y)，例如Aβ(20-42)、Aβ(20-40)、Aβ(12-42)、Αβ(12-40)、Αβ(1-42)和Αβ(1-40)形式，前提是所述形式包含球聚體表位?；氐饺嗽椿贵w7C6和5F7，與例如競爭抗體如m266和3D6相比，這些Aβ(20-42)球聚體-特異性抗體主要識(shí)別Aβ(20-42)球聚體形式并且不主要識(shí)別Aβ(1-40)單體、Aβ(1-42)單體、Αβ-原纖維或sAPP(即Αβ前體)的標(biāo)準(zhǔn)制備物。這樣的針對(duì)球聚體的特異性是重要的，因?yàn)橛们蚓垠w優(yōu)先抗體例如人源化7C6或人源化5F7特異性靶向Αβ的球聚體形式會(huì)1)避免靶向不溶性淀粉樣蛋白沉積物，因?yàn)榕c其結(jié)合可能是在用不溶性Αβ免疫接種過程中觀察到的炎性副作用的原因；2)不傷害被報(bào)道具有認(rèn)知生理功能的Aβ單體和APP(Plan等，J.ofNeuroscience23:5531-5535(2003)；和3)增加抗體的生物利用度，因?yàn)橥ㄟ^與不溶性沉積物廣泛結(jié)合，從而其不會(huì)被遮蔽或無法接近。本發(fā)明還包括編碼人源化抗體7C6或人源化5F7的可變輕鏈和重鏈的分離的核苷酸序列(或其片段)以及那些具有包含、相應(yīng)于、相同于、能雜交于或互補(bǔ)于這些編碼核苷酸序列，與這些編碼核苷酸序列具有至少約70%(如70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%或79%)，優(yōu)選至少約80%(如80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%或89%)，以及更優(yōu)選至少約90%(如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)同一性的序列的核苷酸序列(或其片段)。(關(guān)于同一性百分?jǐn)?shù)，處于70%和100%之間并包括70%和100%的所有整數(shù)(及其部分)都被認(rèn)為處于本發(fā)明的范圍中)。這樣的序列可源自于任何來源(如分離自天然來源、通過半合成途徑產(chǎn)生或從頭合成)。具體而言，這樣的序列可分離自或源自除實(shí)施例中所描述的來源以外的來源(如細(xì)菌、真菌、藻類、小鼠或人)。除上述核苷酸序列以外，本發(fā)明還包括人源化抗體7C6和人源化抗體5F7的可變輕鏈和重鏈的氨基酸序列(或這些氨基酸序列的片段)。此外，本發(fā)明還包括包含、相應(yīng)于、相同于或互補(bǔ)于本發(fā)明蛋白的氨基酸序列，與本發(fā)明蛋白的氨基酸序列具有至少約70%(如70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%或79%)，優(yōu)選至少約80%(如80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%或89%)，以及更優(yōu)選至少約90%同一性(如90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^；100%)的氨基酸序列(或其片段)。(同樣，關(guān)于同一性百分?jǐn)?shù)，處于70%和100%之間并包括70%和100%的所有整數(shù)(及其部分)(如在上述核苷酸序列同一性方面中所述的)都被認(rèn)為處于本發(fā)明的范圍中)。對(duì)本發(fā)明來說，核苷酸序列的“片段”定義為相應(yīng)于特定核苷酸序列的一個(gè)區(qū)域的大約至少6個(gè)，優(yōu)選至少約8個(gè)，更優(yōu)選至少約10個(gè)核苷酸，以及還更優(yōu)選至少約15個(gè)核苷酸的連續(xù)序列。術(shù)語“同一性”指在一個(gè)特定比較窗口或節(jié)段上，于逐個(gè)核苷酸基礎(chǔ)上的兩條序列的關(guān)聯(lián)性。因此，同一性定義為兩條DNA片段(或兩條氨基酸序列)的相同鏈(有義或反義)之間的一致性、對(duì)應(yīng)性或等價(jià)性的程度。通過在特定區(qū)域上比較兩條最佳比對(duì)序列，確定在兩條序列中都存在的相同堿基或氨基酸的位置的數(shù)目以便產(chǎn)生匹配位置的數(shù)目，將上述位置的數(shù)目除以正比較的片段中位置的總數(shù)目并將結(jié)果乘以100，從而計(jì)算出“序列同一性百分?jǐn)?shù)”?？赏ㄟ^如下實(shí)施序列的最佳比對(duì)Smith&Waterman,App1.Math.2482(1981)的算法，Needleman&Wunsch，J.Mol.Biol.48443(1970)的算法，Pearson&Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)85:2444(1988)的方法和執(zhí)行有關(guān)算法(如ClustalMacawPileup(http//cmRm.Stanford.edu/biochem218/1!Multiple,pdf;HiRRins等，CABIOS.5L151-153(1989))、FASTDB(Intelligenetics)、BLAST(NationalCenterforBiomedicalInformation；Altschulφ,NucleicAcidsResearch25:3389_3402(1997))、PILEUP(GeneticsComputerGroup,Madison,WI)或GAP、BESTFIT、FASTA禾口TFASTA(WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.O,GeneticsComputerGroup,Madison,WI)的計(jì)算機(jī)程序(參見美國專利號(hào)5，912，120)。對(duì)本發(fā)明來說，“互補(bǔ)性”定義為兩條DNA片段之間關(guān)聯(lián)性的程度。其通過測(cè)定在合適的條件下一條DNA片段的有義鏈與另一條DNA片段的反義鏈雜交以形成雙螺旋的能力而得以確定。“互補(bǔ)體”定義為基于經(jīng)典的堿基配對(duì)法則與給定序列配對(duì)的一條序列。例如，在一條核苷酸鏈中的序列A-G-T是“互補(bǔ)”于另一條鏈中的T-C-A的。在雙螺旋中，如果腺嘌呤出現(xiàn)在一條鏈中，則胸腺嘧啶就出現(xiàn)在另一條鏈中。類似地，如果鳥嘌呤出現(xiàn)在一條鏈中，則胞嘧啶就出現(xiàn)另一條鏈中。兩條DNA片段的核苷酸序列之間的關(guān)聯(lián)性越大，則在這兩條DNA片段的鏈之間形成雜種雙鏈體的能力就越強(qiáng)。兩條氨基酸序列之間的“相似性”定義為在兩條序列中存在一系列相同的以及保守的氨基酸殘基。兩條氨基酸序列之間的相似性水平越高，則這兩條需列的相應(yīng)性、一致性或等價(jià)性就越高。(兩條氨基酸序列之間的“同一性”定義為在兩條序列中存在一系列的精確相同或不變的氨基酸殘基)?！盎パa(bǔ)性”、“同一性”和“相似性”的定義是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的?！盀?.....編碼”指編碼多肽序列的核酸序列，其中所述多肽序列或其部分含有來自為所述核酸序列編碼的多肽的至少3個(gè)氨基酸，更有選至少8個(gè)氨基酸，以及還更有選至少15個(gè)氨基酸的氨基酸序列。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“生物活性”指球聚體的Αβ(20-42)區(qū)的所有內(nèi)在的生物學(xué)性質(zhì)。這樣的性質(zhì)包括例如結(jié)合在此描述的人源化7C6或人源化5F7抗體的能力。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“多肽”指氨基酸的任意聚合鏈。術(shù)語“肽”和“蛋白”與術(shù)語多肽可交換地使用，也指氨基酸的聚合鏈。術(shù)語“多肽”包括天然或人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽類似物。多肽可以是單體或聚合的。術(shù)語“分離的蛋白”或“分離的多肽”是一種根據(jù)其起源或來源與在其天然狀態(tài)中伴隨其的天然相關(guān)成分無關(guān)聯(lián)的；基本上不含有來自相同物種的其他蛋白；通過來自不同物種的細(xì)胞表達(dá)的；或不存在于自然界中的蛋白或多肽。因此，化學(xué)合成的或在不同于其天然起源的細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的多肽應(yīng)是與其天然相關(guān)成分相“分離的”。使用本領(lǐng)域公知的蛋白純化技術(shù)，通過分離還可使蛋白基本上不含有天然相關(guān)成分。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“回收”指例如使用本領(lǐng)域公知的蛋白純化技術(shù)，通過分離使化學(xué)物種如多肽基本上不含有天然相關(guān)成分的過程。當(dāng)在本文中使用時(shí)，關(guān)于抗體、蛋白或肽與另一化學(xué)物種的相互作用，術(shù)語“特異結(jié)合”或“特異性結(jié)合”意指取決于化學(xué)物種上特定結(jié)構(gòu)(如抗原決定簇或表位)存在的相互作用；例如抗體識(shí)別并結(jié)合特定蛋白結(jié)構(gòu)而非一般蛋白。如果抗體特異于表位“A”，則在包含標(biāo)記的“A”和抗體的反應(yīng)中含有表位A(或不含有，未標(biāo)記A)的分子會(huì)減少標(biāo)記的A與抗體結(jié)合的量。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“抗體”概括地指任何由四條多肽鏈——兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈或它們的任何功能性片段、突變體、變體或衍生物組成的免疫球蛋白(Ig)分子，其保留有Ig分子的必需表位結(jié)合特征。這樣的突變體、變體或衍生物抗體形式在本領(lǐng)域中是已知的。其的非限制的實(shí)施方案討論如下。在全長抗體中，每條重鏈由重鏈可變區(qū)(在此簡寫為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域CH1、CH2和CH3組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū)(在此簡寫為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)區(qū)CL組成。VH和VL區(qū)可進(jìn)一步再分成稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的高變區(qū)，稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的交替分布的更保守的區(qū)域。每一VH和VL區(qū)由以如下順序從氨基末端到羧基末端的排列的三個(gè)⑶R和四個(gè)FR組成FR1、⑶Rl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可以是任何型(如IgG,IgE,IgM,IgD,IgA禾口IgY)、類(如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡稱為“抗體部分”)指保留有與抗原(如Αβ(1-42)球聚體)特異性結(jié)合能力的抗體的一條或多條片段。已經(jīng)表明抗體的抗原結(jié)合功能可為全長抗體的一條或多條片段所執(zhí)行。這樣的抗體實(shí)例還可以是特異性結(jié)合兩個(gè)或更多個(gè)不同抗原的雙特異性、二重特異性或多特異性抗體。包含于術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”中的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，一種由VL、VH、CL和CHl區(qū)組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab')2片段，一種包含在鉸鏈區(qū)通過二硫橋鍵連接的兩條Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由VH和CHl區(qū)組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH區(qū)組成的Fv片段；(ν)dAb片段(Ward等，(1989)Nature341544-546,Winter等，國際申請(qǐng)公開號(hào)TO90/05144A1，在此并入作為參考)，其包含單個(gè)可變區(qū)；以及(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的兩個(gè)區(qū)，VL和VH，為分開的基因所編碼，但是使用重組技術(shù)通過合成接頭可將它們連接在一起，所述接頭能使它們作為其中VL和VH區(qū)配對(duì)形成單價(jià)分子的單條蛋白鏈而得以制備(被稱為單鏈Fv(ScFv)；參見如Bird等(1988)ScienceMZ423-426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879_5883)。在此這樣的單鏈抗體同樣包含在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”中。其他形式的單鏈抗體例如雙抗體也包括在其中。雙抗體是二價(jià)的、雙特異性抗體，其中VH和VL區(qū)在單條多肽鏈上表達(dá)，但使用的接頭太短以至于同一鏈上兩個(gè)區(qū)之間無法配對(duì)，從而迫使所述區(qū)與另一條鏈的互補(bǔ)區(qū)配對(duì)并產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(參見如Holliger，P.，等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448；Poljak,R.J.，等(1994)Structure2:1121-1123)。這樣的抗體結(jié)合部分是本令頁域已知的(Kontermann禾口Dubel編,AntibodyEngineering(2001)Springer-Verlag.NewYork.790pp.(ISBN3-540-41354-5))。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“抗體構(gòu)建體”指一種包含連接到連接多肽或免疫球蛋白恒定域的一個(gè)或更多個(gè)本發(fā)明的抗原結(jié)合部份的多肽。連接多肽包含通過肽鍵連接的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基并用于連接一個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合部分。這樣的連接多肽是本領(lǐng)域公知的(參見如Holliger，P.，等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448；Poljak,R.J.，等(1994)Structure^:1121_1123)。免疫球蛋白恒定域指重鏈或輕鏈恒定區(qū)。人IgG重鏈和輕鏈恒定區(qū)氨基酸序列是本領(lǐng)域已知的并示于表2中。表2人IGG重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>更進(jìn)一步，抗體或其抗原結(jié)合部分可以是由抗體或抗體部分與一個(gè)或更多個(gè)其他蛋白或肽共價(jià)或非共價(jià)締合形成的較大的免疫黏附分子的一部分。這樣的免疫黏附分子的實(shí)例包括使用鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)來制備四聚scFv分子(Kipriyanov，S.Μ.，等(1995)HumanAntibodiesandHybridomas6:93-101)以及使用半胱氨酸殘基、標(biāo)記肽和C-末端多組氨酸標(biāo)簽來制備二價(jià)和生物素化scFv分子(Kipriyan0V，S.M.，等(1994)Mol.Immimol.M=1047-1058)?？墒褂贸Ｒ?guī)技術(shù)例如分別用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化全抗體，由全抗體制備抗體部分例如Fab和F(ab')2片段。此外，可使用如本文中所描述的標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)獲得抗體、抗體部分和免疫黏附分子。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“分離的抗體”意指一種基本上不含有具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(如一種特異性結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的分離的抗體是基本上不含有特異性結(jié)合除Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式以外的抗原的抗體)。然而，特異性結(jié)合Aβ(20-42)球聚體的分離的抗體可具有與其他抗原的交叉反應(yīng)性，所述其他抗原例如來自其他物種的Αβ(20-42)球聚體分子。此外，分離的抗體可基本上不含有其他的細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)藥品和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“人抗體”意在包括具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可包括不為人種系免疫球蛋白序列所編碼的氨基酸殘基(如通過體外隨機(jī)或位點(diǎn)專一誘變或體內(nèi)體細(xì)胞突變所導(dǎo)入的突變)，例如在CDR中以及特別在CDR3中。然而，當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“人抗體”并不意在包括其中已被嫁接到人構(gòu)架序列上的來源于另一哺乳動(dòng)物物種例如小鼠的種系的CDR序列的抗體。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“重組人抗體”意在包括所有通過重組手段制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的人抗體，例如使用轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體(描述在下)，分離自重組的、組合的人抗體文庫的抗體(HoogenboomH.R.，(1997)TIBTech.15:62_70；AzzazyH.，和HighsmithW.E.，(2002)Clin.Biochem.35:425_445；GavilondoJ.V.，和LarrickJ.W.(2002)BioTechniques29128-145；HoogenboomH.,禾口ChamesP.(2000)ImmunologyToday21:371_378)，分離自轉(zhuǎn)入人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(如小鼠)的抗體(參見如Taylor,L.D.，等(1992)Nucl.AcidsRes.20:6287_6295；KeHermannS-A.,禾口GreenL.L.(2002)CurrentOpinioninBiotechnology13593-597；LittleΜ.等(2000)ImmunologyToday21364-370)或通過任何其他涉及人免疫球蛋白基因序列與其他DNA序列剪接的手段制備、表達(dá)、創(chuàng)建或分離的抗體。這樣的重組人抗體具有來源人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。然而，在某些實(shí)施方案中，這樣的重組人抗體受到體外誘變(或者，當(dāng)使用轉(zhuǎn)入人Ig序列的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，進(jìn)行體內(nèi)體細(xì)胞突變)，因此該重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列是當(dāng)來源于人種系VH和VL序列以及與之相關(guān)時(shí)，可以不天然存在于體內(nèi)人抗體種系庫中的序列。術(shù)語“嵌合抗體”指包含來自一種物種的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列以及來自另一物種的恒定區(qū)序列的抗體，例如具有連接人恒定區(qū)的鼠重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體。術(shù)語“⑶R嫁接抗體”指包含來自一種物種的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，但其中VH和/或VL的一個(gè)或更多個(gè)CDR區(qū)序列為另一物種的CDR序列所取代的抗體，例如具有其中一個(gè)或更多個(gè)鼠CDR(如CDR3)已為人CDR序列所取代的鼠重鏈和輕鏈可變區(qū)的抗體。術(shù)語“人源化抗體”指包含來自非人物種(如小鼠)的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，但其中至少一部分的VH和/或VL序列已被改變成更加“人樣的”，即更類似于人種系可變區(qū)序列的抗體。一種類型的人源化抗體是其中將人CDR序列導(dǎo)入非人VH和VL序列中替代相應(yīng)的非人CDR序列的CDR嫁接抗體。在本文中，術(shù)語“Kabat編號(hào)，，、"Kabat定義”和“Kabat標(biāo)記”是可交換使用的。這些本領(lǐng)域公知的術(shù)語指編號(hào)與抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈和輕鏈可變區(qū)中的其他氨基酸殘基相比更加可變(即高變)的氨基酸殘基的體系(Kabat等(1971)Arm.NYAcad,Sci..190382-391禾口Kabat，Ε·A.，等(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)。對(duì)于重鏈可變區(qū)，高變區(qū)CDRl從氨基酸第31位到第35位，CDR2從氨基酸第50位到第65位，CDR3從氨基酸第95位到第102位。對(duì)于輕鏈可變區(qū)，高變區(qū)⑶Rl從氨基酸第24位到第34位，CDR2從氨基酸第50位到第56位，⑶R3從氨基酸第89位到第97位。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“接納體”和“接納體抗體”指提供或編碼至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的一個(gè)或更多個(gè)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列的抗體或核酸序列。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語“接納體”指提供或編碼恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在又一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語“接納體”指提供或編碼一個(gè)或更多個(gè)構(gòu)架區(qū)和恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，術(shù)語“接納體”指提供或編碼至少80%、優(yōu)選至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的一個(gè)或更多個(gè)構(gòu)架區(qū)的氨基酸序列的人抗體氨基酸或核酸序列。根據(jù)該實(shí)施方案，接納體可含有至少1個(gè)、至少2個(gè)、至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5個(gè)或至少10個(gè)不存在于人抗體的一個(gè)或更多個(gè)特定位置上的氨基酸殘基。接納體構(gòu)架區(qū)和/或接納體恒定區(qū)可以是例如來源于或獲得自種系抗體基因、成熟抗體基因、功能性抗體(如本領(lǐng)域公知的抗體、開發(fā)中的抗體或市售抗體)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“CDR”指抗體可變序列內(nèi)的互補(bǔ)決定區(qū)。在重鏈和輕鏈可變區(qū)內(nèi)各自存在三個(gè)⑶R，對(duì)于每一可變區(qū)其稱為⑶R1、⑶R2和⑶R3。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“CDR組”指存在于能結(jié)合抗原的單個(gè)可變區(qū)中的一組三個(gè)CDR。根據(jù)不同的系統(tǒng)對(duì)這些⑶R的確切邊界已作不同的定義。Kabat描述的該系統(tǒng)(Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1987)和(1991))不僅提供了可適用于任何抗體可變區(qū)的明確的殘基編號(hào)系統(tǒng)，還提供了限定這三個(gè)⑶R的精確的殘基邊界。這些⑶R可稱為Kabat⑶Rs。Chothia和同事(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901_917(1987)和Chothia等，Nature342877-883(1989))發(fā)現(xiàn)Kabat⑶Rs中的某些子位置盡管在氨基酸序列水平上差異較大，但采用了幾乎相同的肽主鏈構(gòu)象。這些子位置被命名為L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分別指輕鏈和重鏈區(qū)。這些區(qū)可稱為Chothia⑶Rs，其具有與Kabat⑶Rs重疊的邊界。其他與KabatCDRs重疊的邊界定義的CDR已為Padlan(FASEBJ.9:133_139(1995))和MacCallumCJMolBiol262(5):732_45(1996))所描述。盡管如此，其他CDR邊界定義可以不必嚴(yán)格地遵照上述系統(tǒng)中的任何一種，但仍然是與Kabat⑶Rs重疊的，盡管根據(jù)預(yù)測(cè)或特定的殘基或殘基組或甚至整個(gè)CDR都不明顯影響抗原結(jié)合的實(shí)驗(yàn)結(jié)論它們可以更短或更長。用于本文中的方法可利用根據(jù)任何一種這些系統(tǒng)所定義的CDR，盡管優(yōu)選的實(shí)施方案利用了Kabat或Chothia定義的CDR。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“規(guī)范”殘基指規(guī)定了如Chothia等(J.Mol.Biol.196901-907(1987)；Chothia等，J.Mol.Biol.227799(1992)，兩者都在此并入作為參考)所定義的特定的規(guī)范CDR結(jié)構(gòu)的CDR中或構(gòu)架區(qū)中的殘基。根據(jù)Chothia等，許多抗體CDR的關(guān)鍵位置盡管在氨基酸序列水平上差異較大，但具有幾乎相同的肽主鏈構(gòu)象。每個(gè)規(guī)范結(jié)構(gòu)規(guī)定了主要是一組形成環(huán)的氨基酸殘基的連續(xù)區(qū)段的肽主鏈扭轉(zhuǎn)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“供體”和“供體抗體”指提供一個(gè)或更多個(gè)CDR的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，供體抗體是一種來自不同于構(gòu)架區(qū)所獲得自或來源于的抗體的物種的抗體。在人源化抗體的上下文中，術(shù)語“供體抗體”指提供一個(gè)或更多個(gè)CDR的非人抗體。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“構(gòu)架區(qū)”或“構(gòu)架區(qū)序列”指可變區(qū)減去CDR所剩下的序列。由于可使用不同系統(tǒng)確定CDR序列的確切定義，因此構(gòu)架區(qū)序列的含義可相應(yīng)地進(jìn)行不同的解釋。6個(gè)⑶R(輕鏈的⑶R-L1、-L2和-L3以及重鏈的⑶R-H1、_H2和-H3)還將輕鏈和重鏈每條鏈上的構(gòu)架區(qū)分成四個(gè)亞區(qū)(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中⑶Rl位于FRl和FR2之間，⑶R2位于FR2和FR3之間，以及⑶R3位于FR3和FR4之間。沒有規(guī)定特定的亞區(qū)為FR1、FR2、FR3或FR4，他人所提及的構(gòu)架區(qū)代表了天然存在的免疫球蛋白鏈的單個(gè)可變區(qū)中組合的FR'S。當(dāng)在本文中使用時(shí)，F(xiàn)R代表四個(gè)亞區(qū)中的一個(gè)，F(xiàn)Rs代表了構(gòu)成構(gòu)架區(qū)的四個(gè)亞區(qū)中的兩個(gè)或更多個(gè)。人重鏈和輕鏈接納體序列在本領(lǐng)域中是已知的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，人重鏈和輕鏈接納體序列選自下述序列表3:重鏈接納體序列<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“種系抗體基因”或“基因片段”指為沒有經(jīng)歷導(dǎo)致用于特定免疫球蛋白表達(dá)的基因重排及突變的成熟過程的非淋巴樣細(xì)胞所編碼的免疫球蛋白序列(參見如Shapiro等，Crit.Rev.Immunol.22(3)183-200(2002)；Marchalonis等，AdvExpMedBiol.484:13-30(2001))。本發(fā)明多個(gè)實(shí)施方案所提供的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)源于這樣的發(fā)現(xiàn)，即與成熟抗體基因相比，種系抗體基因更有可能在物種中保存?zhèn)€體基本的氨基酸序列結(jié)構(gòu)特征，因此當(dāng)在該物種中用作治療時(shí)較不可能被識(shí)別為來自外源的。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“關(guān)鍵”殘基指對(duì)抗體，特別是人源化抗體的結(jié)合特異性和/或親和力具有更大影響的可變區(qū)中的某些殘基。關(guān)鍵殘基包括但不限于如下的一種或更多種與CDR鄰接的殘基、潛在的糖基化位點(diǎn)(其可以是N-或0-糖基化位點(diǎn))、稀有殘基、能與抗原相互作用的殘基、能與CDR相互作用的殘基、規(guī)范殘基、在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基、游標(biāo)區(qū)中的殘基以及在Chothia定義的可變重鏈⑶Rl與Kabat定義的第一重鏈構(gòu)架區(qū)之間重疊的區(qū)中的殘基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“人源化抗體”是一種與目標(biāo)抗原免疫特異性結(jié)合并包含基本上具有人抗體的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)(FR)和基本上具有非人抗體的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的抗體或其變體、衍生物、類似物或片段。當(dāng)在本文中使用時(shí)，在CDR上下文中術(shù)語“基本上”指⑶R具有至少80%，優(yōu)選至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一于非人抗體CDR的氨基酸序列的氨基酸序列。人源化抗體包含基本上所有的至少一個(gè)，以及特別是兩個(gè)可變區(qū)(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有的CDR區(qū)都相應(yīng)于非人免疫球蛋白(即供體抗體)的那些CDR區(qū)以及所有的或基本上所有的構(gòu)架區(qū)都是人免疫球蛋白的那些構(gòu)架區(qū)共有序列。優(yōu)選地，人源化抗體還包含至少一部分的的免疫球蛋白恒定域(Fe)，通常為人免疫球蛋白的恒定區(qū)。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體含有輕鏈以及至少重鏈的可變區(qū)。抗體還可包括重鏈的CH1、鉸鏈、CH2、CH3和CH4區(qū)。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體僅含有人源化輕鏈。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體僅含有人源化重鏈。在具體的實(shí)施方案中，人源化抗體僅含有人源化輕鏈可變區(qū)和/或人源化重鏈。人源化抗體可選自任何類型的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同種型的免疫球蛋白，包括但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗體可包含來自多于一類或一種同種型的序列，以及可使用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)選擇具體的恒定區(qū)以優(yōu)化所需的效應(yīng)子功能。人源化抗體的構(gòu)架區(qū)和CDR區(qū)不需要準(zhǔn)確相應(yīng)于親本序列，如供體抗體CDR或共有構(gòu)架區(qū)可通過取代、插入和/或缺失至少一個(gè)氨基酸殘基得到誘變，使得在該位點(diǎn)的⑶R或構(gòu)架區(qū)殘基不與供體抗體或共有構(gòu)架區(qū)準(zhǔn)確相應(yīng)。然而，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，這樣的突變不應(yīng)當(dāng)是廣泛的。一般來說，至少80%，優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%以及最優(yōu)選至少95%的人源化抗體殘基應(yīng)當(dāng)相應(yīng)于親本FR和CDR序列的那些殘基。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“共有構(gòu)架區(qū)”指以共有免疫球蛋白序列存在的構(gòu)架區(qū)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“共有免疫球蛋白序列”指由相關(guān)的免疫球蛋白序列家族中最常見的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(參見如Winnaker，F(xiàn)romGenestoClones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany1987)。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每一個(gè)位置為在該家族中于該位置處最常見的氨基酸所占據(jù)。在兩個(gè)氨基酸以相同頻率占據(jù)的情況下，皆可包括在共有序列中。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“游標(biāo)”區(qū)指為Foote和Winter(1992，J.Mol.Biol.224487-499，其在此并入作為參考)所描述的一亞組的可調(diào)節(jié)⑶R結(jié)構(gòu)并調(diào)整使適于抗原的構(gòu)架區(qū)殘基。游標(biāo)區(qū)殘基構(gòu)成一支承CDR的層并可影響CDR結(jié)構(gòu)及抗體的親和力。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“中和”指當(dāng)結(jié)合蛋白特異性結(jié)合球聚體時(shí)，球聚體生物活性的中和。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白是一種其結(jié)合球聚體的Αβ(20-42)氨基酸區(qū)和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式，導(dǎo)致球聚體生物活性抑制的中和抗體。優(yōu)選地，中和結(jié)合蛋白結(jié)合球聚體的Αβ(20-42)氨基酸區(qū)和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式，并減少至少約20%、40%、60%、80%、85%或更多的球聚體生物活性?？赏ㄟ^測(cè)定一種或更多種本領(lǐng)域公知的球聚體生物活性指示劑，從而評(píng)價(jià)球聚體生物活性通過中和結(jié)合蛋白的抑制。術(shù)語“活性”包括諸如抗體對(duì)抗原的結(jié)合特異性/親和力的活性，例如抗-Αβ(20-42)抗體或針對(duì)任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的抗體結(jié)合Aβ(20-42)球聚體(和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式)和/或抗體的中和能力，例如結(jié)合Αβ(20-42)的抗-Αβ20-42)抗體抑制球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的生物活性。術(shù)語“表位”包括任何能與免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體特異性結(jié)合的多肽決定簇。在某些實(shí)施方案中，表位決定簇包括分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)例如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；蚧酋；?，以及在某些實(shí)施方案中，可具有特定的三維結(jié)構(gòu)特性和/或特定的荷電特性。表位是為抗體所結(jié)合的抗原的一個(gè)區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)抗體在蛋白和/或大分子的復(fù)雜混合物中優(yōu)先識(shí)別其靶抗原時(shí)，就說該抗體特異性結(jié)合抗原。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“表面等離振子共振”指一種供通過例如使用BIAcore系統(tǒng)(PharmaciaBiosensorAB,Uppsala,SwedenandPiscataway,NJ)檢測(cè)生物傳感器矩陣中蛋白濃度改變，從而分析實(shí)時(shí)生物特異性相互作用之用的光學(xué)現(xiàn)象。更進(jìn)一步的描述參見J0nsson,U.，等(1993)Ann.Biol.Clin.5119-26；Jonsson,U.，等(1991)Biotechniques11:620_627Johnsson，B.，等(1995)J.Mol.Recognit.8125-131；禾口Johnnson,B.，等(1991)Anal.Biochem.198:268_277。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“K。n”意指如本領(lǐng)域中所知的抗體與抗原締合形成抗體/抗原復(fù)合物的結(jié)合速率常數(shù)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“K。ff”意指如本領(lǐng)域中所知的抗體由抗體/抗原復(fù)合物上解離的解離速率常數(shù)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“K/’意指如本領(lǐng)域中所知的特定抗體_抗原相互作用的解離常數(shù)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“標(biāo)記的結(jié)合蛋白”指一種具有提供用于鑒定結(jié)合蛋白的摻入標(biāo)記的蛋白。優(yōu)選地，該標(biāo)記是可檢測(cè)的標(biāo)記，如摻入放射性同位素標(biāo)記的氨基酸或?qū)⒖赏ㄟ^標(biāo)記的抗生物素蛋白(如包含熒光標(biāo)記或可通過光學(xué)或比色方法檢測(cè)的酶活性的鏈霉抗生物素蛋白)檢測(cè)的生物素基部分連接于多肽。用于多肽的標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于如下放射性同位素或放射性核素(如3H、14C、35S、9°Y、99TC、mIn、125I、131I、mLU、166H0或153Sm)；熒光標(biāo)記(如FITC、若丹明、鑭系元素磷光體)；酶標(biāo)記(如辣根過氧化物酶、熒光素酶、堿性磷酸酶)；化學(xué)發(fā)光標(biāo)記；生物素基團(tuán)；為第二報(bào)道分子(如亮氨酸拉鏈對(duì)序列、針對(duì)第二抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標(biāo)簽)所識(shí)別的預(yù)定的多肽表位；以及磁性介質(zhì)例如釓螯合物。術(shù)語“抗體綴合物”指一種化學(xué)連接有第二化學(xué)部分如治療劑或細(xì)胞毒素劑的結(jié)合蛋白，例如抗體。術(shù)語“劑”在本文中用于指化合物、化合物混合物、生物大分子或由生物材料制備的提取物。優(yōu)選地，治療劑或細(xì)胞毒素劑包括但不限于百日咳毒素、紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴乙啶、依米丁、絲裂霉素、足葉乙甙、鬼白噻吩甙、長春新堿、長春花堿、秋水仙素、多柔比星、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、1-去氫睪留酮、糖皮質(zhì)激素類、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素以及它們的類似物或同系物。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“晶體”和“結(jié)晶”指以晶體形式存在的抗體或其抗原結(jié)合部分。晶體是一種類型的固體物態(tài)，不同于其他類型例如無定形固體或液晶態(tài)。晶體由原子、離子、分子(如蛋白例如抗體)或分子裝配體(如抗原/抗體復(fù)合物)的規(guī)則的、重復(fù)的、三維陣列組成。這些三維陣列根據(jù)本領(lǐng)域中公知的特定數(shù)學(xué)關(guān)系排列。晶體中重復(fù)的基本單位或結(jié)構(gòu)單元稱為不對(duì)稱單元。遵循給定的、定義明確的晶體學(xué)對(duì)稱性的排列中不對(duì)稱單元的重復(fù)規(guī)定了晶體的“單位晶胞”。在全三維空間中通過正則轉(zhuǎn)換的單位晶胞的重復(fù)規(guī)定了晶體°參見Giege,R.禾PDucruix,A.Barrett,CrystallizationofNucleicAcidsandProteins,aPracticalApproach,第2版·,pp.201-16,OxfordUniversityPress,NewYork,NewYork,(1999)。當(dāng)在本文中提及時(shí)，術(shù)語“多核苷酸”指兩個(gè)或更多個(gè)核苷酸(核糖核苷酸或脫氧核苷酸或任何一種類型的核苷酸的修飾形式)的多聚形式。該術(shù)語包括單鏈和雙鏈形式的DNA但優(yōu)選為雙鏈DNA。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“分離的多核苷酸”應(yīng)指根據(jù)其來源與該“分離的多核苷酸”所見于的自然界中所具有的全部或一部分的多核苷酸無關(guān)的；可操作地與在自然界中沒有連接的多核苷酸連接的；或不作為較大序列的一部分存在于自然界中的多核苷酸(如基因組、cDNA或合成來源的，或它們的某些組合)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“載體”意指一種能轉(zhuǎn)運(yùn)另一種其已連接的核酸的核酸分子。一種類型的載體是“質(zhì)粒”，其指其中可連接額外的DNA片段的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)。另一種類型的載體是病毒載體，其中額外的DNA片段可連接到病毒基因組中。某些載體能在它們所導(dǎo)入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(如具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和附加型哺乳動(dòng)物載體)。其他載體(如非附加型哺乳動(dòng)物載體)剛一導(dǎo)入宿主細(xì)胞中就可整合入宿主細(xì)胞的基因組中，從而與宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能指導(dǎo)其可操作連接的基因的表達(dá)。這樣的載體在本文中稱為“重組表達(dá)載體”(或簡稱為“表達(dá)載體”)。一般而言，在重組DNA技術(shù)中表達(dá)載體通常是以質(zhì)粒形式應(yīng)用。在本發(fā)明說明書中，“質(zhì)?！焙汀拜d體”可互換使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是載體的最常使用的形式。然而，本發(fā)明意在包括這樣的其他形式的表達(dá)載體例如病毒載體(如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)，其提供了相等的作用。術(shù)語“可操作地連接”指一種其中所描述的組分以容許它們以它們預(yù)期的方式起作用的關(guān)系存在的毗鄰關(guān)系?？刂菩蛄小翱刹僮鞯剡B接”編碼序列是以這樣一種方式即在相容于控制序列的條件下實(shí)現(xiàn)編碼序列的表達(dá)來連接的?！翱刹僮鞯剡B接的”序列包括鄰接目標(biāo)基因的表達(dá)控制序列和反式作用或在遠(yuǎn)處控制目標(biāo)基因的表達(dá)控制序列。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“表達(dá)控制序列”指為影響它們所連接的編碼序列表達(dá)和加工所必需的多核苷酸序列。表達(dá)控制序列包括適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄起點(diǎn)、終點(diǎn)、啟動(dòng)子和增強(qiáng)子序列；有效的RNA加工信號(hào)如剪接和多腺苷酸化信號(hào)；穩(wěn)定細(xì)胞質(zhì)mRNA的序列；增強(qiáng)翻譯效率的序列(即Kozak共有序列)；提高蛋白穩(wěn)定性的序列；以及當(dāng)需要時(shí)，增加蛋白分泌的序列。取決于宿主生物體上述控制序列的特性有所差異；在原核生物中，上述控制序列通常包括啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止序列；在真核生物中，上述控制序列通常包括啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄終止序列。術(shù)語“控制序列”意在包括其存在對(duì)表達(dá)和加工必不可少的元件，并還可包括其存在是有利的額外元件，例如前導(dǎo)序列和融合伴侶序列。如本文中所定義的，“轉(zhuǎn)化”指外源DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞的任何過程。使用本領(lǐng)域眾所周知的多種方法可在天然或人工條件下發(fā)生轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化可依賴于任何已知的用于將外源核酸序列插入原核或真核宿主細(xì)胞中的方法。該方法是基于要被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞進(jìn)行選擇的并且可包括但不限于病毒感染、電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染和粒子轟擊。這樣的“轉(zhuǎn)化的”細(xì)胞包括其中插入的DNA能作為自主復(fù)制質(zhì)?；蜃鳛樗拗魅旧w一部分復(fù)制的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。它們還包括持續(xù)有限的一段時(shí)間瞬時(shí)表達(dá)插入的DNA或RNA的細(xì)胞。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“重組宿主細(xì)胞”(或簡稱為“宿主細(xì)胞”)意指外源DNA已導(dǎo)入其中的細(xì)胞。應(yīng)當(dāng)明白上述術(shù)語不僅意指特定的受試細(xì)胞，還指這樣的細(xì)胞的后代。由于突變或環(huán)境影響某些修飾可在后代中發(fā)生，因此事實(shí)上這樣的后代可以不同于親本細(xì)胞，但仍包括在如本文中所使用的術(shù)語“宿主細(xì)胞”的范圍中。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞包括選自任何生命界的原核和真核細(xì)胞。優(yōu)選的真核細(xì)胞包括原生生物、真菌、植物和動(dòng)物細(xì)胞。最優(yōu)選的宿主細(xì)胞包括但不限于原核細(xì)胞系大腸桿菌；哺乳動(dòng)物細(xì)胞系CH0、HEK293和COS；昆蟲細(xì)胞系Sf9和真菌細(xì)胞釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可用于重組DNA、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)以及轉(zhuǎn)化(如電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)?？筛鶕?jù)廠商使用說明書或如本領(lǐng)域中所通常實(shí)行的或如本文中所描述的進(jìn)行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。前述技術(shù)和方法可通常根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法以及如各種常用的和在本發(fā)明說明書全文中所引證和討論的更具體的參考文獻(xiàn)所描述的來執(zhí)行。參見如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual(第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989))，其在此并入作為用于任何用途的參考文獻(xiàn)。如本領(lǐng)域所知的以及當(dāng)在本文中使用時(shí)，“轉(zhuǎn)基因生物”指具有含有轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞的生物體，其中導(dǎo)入生物體(或該生物體的祖先)中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)在該生物體中不天然表達(dá)的多肽?！稗D(zhuǎn)基因”是一種DNA構(gòu)建物，其穩(wěn)定且可操作地整合入轉(zhuǎn)基因生物體所發(fā)育自的細(xì)胞的基因組中，在轉(zhuǎn)基因生物體的一種或更多種細(xì)胞類型或組織中指導(dǎo)編碼基因產(chǎn)物的表達(dá)。術(shù)語“調(diào)節(jié)(regulate)”和“調(diào)制(modulate)”是可交換地使用的，以及當(dāng)在本文中使用時(shí)，指目標(biāo)分子活性(如Αβ(20-42)球聚體的生物活性)的變化或改變。調(diào)節(jié)可以是目標(biāo)分子的某種活性或功能在量值上的增加或減少。作例證的分子活性和功能包括但不限于結(jié)合特性、酶活性、細(xì)胞受體活化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。相應(yīng)地，當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”是一種能變化或改變目標(biāo)分子活性或功能(如Αβ(20-42)球聚體的生物活性)的化合物。例如，與該調(diào)節(jié)劑不存在的情況下所觀察到的活性或功能的量值相比，調(diào)節(jié)劑可導(dǎo)致分子某種活性或功能在量值上增加或減少。在某些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)劑是一種抑制劑，其減少了分子的至少一種活性或功能的量值。作例證的抑制劑包括但不限于蛋白、肽、抗體、肽抗體(P印tibodies)、碳水化合物或有機(jī)小分子。肽抗體描述于例如國際申請(qǐng)公開號(hào)WO01/83525中。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“激動(dòng)劑”指與該激動(dòng)劑不存在的情況下所觀察到的活性或功能的量值相比，當(dāng)與目標(biāo)分子接觸時(shí)導(dǎo)致該分子某種活性或功能在量值上增加的一種調(diào)節(jié)劑。具體的目標(biāo)激動(dòng)劑可包括但不限于Αβ(20-42)球聚體多肽或與Αβ(20-42)球聚體結(jié)合的多肽、核酸、碳水化合物或任何其他分子。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“拮抗劑”或“抑制劑”指與該拮抗劑不存在的情況下所觀察到的活性或功能的量值相比，當(dāng)與目標(biāo)分子接觸時(shí)導(dǎo)致該分子某種活性或功能在量值上減少的一種調(diào)節(jié)劑。具體的目標(biāo)拮抗劑包括那些阻斷或調(diào)節(jié)Aβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式的生物或免疫活性的拮抗劑。Aβ(20-42)球聚體的拮抗劑和抑制劑可包括但不限于結(jié)合Aβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的蛋白、核酸、碳水化合物或任何其他分子。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“有效量”指足以減少或改善病癥或其一種或更多種癥狀的嚴(yán)重程度和/或持續(xù)時(shí)間，阻止病癥進(jìn)展，導(dǎo)致病癥消退，阻止與病癥相關(guān)的一種或更多種癥狀復(fù)發(fā)、發(fā)展、發(fā)生或進(jìn)展，檢出病癥，或提高或改善另一治療(如預(yù)防劑或治療劑)的預(yù)防或治療效果的治療的量。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“樣品”以其最廣義使用。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“生物樣品”包括但不限于來自生物或前生物(formerlylivingthing)的任何量的物質(zhì)。這樣的生物包括但不限于人、小鼠、大鼠、猴、狗、兔和其他哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物的動(dòng)物。這樣的物質(zhì)包括但不限于血液、血清、尿、滑液、細(xì)胞、器官、組織(如腦)、骨髓、淋巴結(jié)、腦脊液和脾。I.結(jié)合AB(20-42)球聚體的抗體本發(fā)明的一個(gè)方面提供了以高親和力、慢解離速率和高中和容量結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Aβ形式的分離的鼠單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。本發(fā)明的第二方面提供了結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的嵌合抗體。本發(fā)明的第三方面提供了結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的CDR嫁接抗體或其抗原結(jié)合部分。本發(fā)明的第四方面提供了結(jié)合Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，抗體或其部分是分離的抗體。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體中和Αβ(20-42)球聚體和/或任何其他包含與本發(fā)明的抗體起反應(yīng)的球聚體表位的Αβ形式。制備抗-AB(20-42)球聚體抗體的方法本發(fā)明的抗體可通過多種本領(lǐng)域已知技術(shù)中的任何一種來制備。1.使用雜交瘤技術(shù)制備抗-AB(20-42)球聚體單克隆抗體可使用多種本領(lǐng)域已知技術(shù)制備單克隆抗體，包括使用雜交瘤、重組體以及噬菌體展示技術(shù)或它們的組合。例如，可使用雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體，所述雜交瘤技術(shù)包括那些本領(lǐng)域己知的禾口例如在Harlow等，Antibodies:ALaboratoryManual(ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版·1988)；Hammerling,等，in:MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas563-681(Elsevier,N.Y.，1981)(所述文獻(xiàn)以其全文并入作為參考)中教導(dǎo)的技術(shù)。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語“單克隆抗體”不限于通過雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體。術(shù)語“單克隆抗體”指一種來源于包括任何真核生物、原核生物或噬菌體克隆在內(nèi)的單一克隆而非來源于產(chǎn)生其的方法的抗體。使用雜交瘤技術(shù)用于產(chǎn)生和篩選特定抗體的方法是本領(lǐng)域慣用且熟知的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了產(chǎn)生單克隆抗體的方法以及通過該方法產(chǎn)生的抗體，包括培養(yǎng)分泌本發(fā)明抗體的雜交瘤細(xì)胞，其中優(yōu)選通過將分離自用本發(fā)明抗原免疫的小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，然后對(duì)融合產(chǎn)生的雜交瘤篩選分泌能結(jié)合本發(fā)明多肽的抗體的雜交瘤克隆，從而產(chǎn)生雜交瘤。簡言之，小鼠可用Aβ(20-42)球聚體抗原免疫。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗原與佐劑一起施用以刺激免疫應(yīng)答。這樣的佐劑包括完全或不完全弗氏佐劑、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激復(fù)合物)。這樣的佐劑可通過將多肽隔絕于局部沉淀物中，從而保護(hù)其免于快速分散，或它們可包含刺激宿主分泌對(duì)于巨噬細(xì)胞和免疫系統(tǒng)的其他組分是趨化因子的物質(zhì)。優(yōu)選地，如果正在施用多肽，免疫接種程序表將包括在幾周內(nèi)兩次或更多次施用多肽。在用Αβ(20-42)球聚體抗原免疫動(dòng)物后，抗體和/或抗體產(chǎn)生細(xì)胞可獲得自該動(dòng)物。通過放血或處死動(dòng)物由動(dòng)物獲得含抗-Aβ(20-42)球聚體抗體血清。由于該血清獲得自動(dòng)物，因此其可以使用，免疫球蛋白級(jí)分可獲得自血清，或抗-Αβ(20-42)球聚體抗體可純化自血清。以該方法獲得的血清或免疫球蛋白是多克隆的，因此具有非均質(zhì)系統(tǒng)特性。一旦檢測(cè)到免疫應(yīng)答，如在小鼠血清中檢測(cè)到特異性針對(duì)抗原Aβ(20-42)球聚體的抗體，則采集小鼠脾臟并分離脾細(xì)胞。然后通過公知技術(shù)將脾細(xì)胞融合至任何合適的骨髓瘤細(xì)胞，例如來自可獲得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ManassasVA)的細(xì)胞系SP20的細(xì)胞。選擇雜交瘤并通過有限稀釋進(jìn)行克隆。然后，針對(duì)分泌能結(jié)合Aβ(20-42)球聚體的抗體的細(xì)胞，通過本領(lǐng)域已知方法分析雜交瘤克隆?？赏ㄟ^用陽性雜交瘤克隆免疫小鼠產(chǎn)生通常含有高水平抗體的腹水。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可由經(jīng)免疫的動(dòng)物制備產(chǎn)生抗體的永生化雜交瘤。在免疫后，處死動(dòng)物并如本領(lǐng)域所公知的將脾B細(xì)胞融合至永生化骨髓瘤細(xì)胞。參見如Harlow和Lane，出處同上。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，骨髓瘤細(xì)胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌細(xì)胞系)。在融合和抗生素選擇后，使用Aβ(20-42)球聚體或其部分、或表達(dá)Αβ(20-42)球聚體的細(xì)胞篩選雜交瘤。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISA)或放射免疫測(cè)定(RIA)，優(yōu)選ELISA進(jìn)行最初的篩選。ELISA篩選的一個(gè)實(shí)例提供于國際申請(qǐng)公開號(hào)WO00/37504中，在此并入作為參考。對(duì)抗-Αβ(20-42)球聚體抗體產(chǎn)生雜交瘤進(jìn)行選擇、克隆以及為了所需特性進(jìn)行進(jìn)一步的篩選，所述所需特性包括加強(qiáng)的雜交瘤生長、高抗體產(chǎn)量以及如下所進(jìn)一步討論的所需的抗體特性。可在同系動(dòng)物中、在缺乏免疫系統(tǒng)的動(dòng)物如裸鼠中于體內(nèi)，或在細(xì)胞培養(yǎng)物中于體外培養(yǎng)并擴(kuò)增雜交瘤。選擇、克隆和擴(kuò)增雜交瘤的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，雜交瘤是如上所描述的小鼠雜交瘤。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，雜交瘤是在非人、非小鼠物種例如大鼠、綿羊、豬、山羊、?；蝰R中產(chǎn)生的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，雜交瘤是人雜交瘤，其中人無分泌功能骨髓瘤與表達(dá)抗_Αβ(20-42)球聚體抗體的人細(xì)胞融合。可通過已知技術(shù)產(chǎn)生識(shí)別特異性表位的抗體片段。例如，可通過使用酶例如木瓜蛋白酶(以產(chǎn)生Fab片段)或胃蛋白酶(以產(chǎn)生F(ab')2片段)蛋白酶解切割免疫球蛋白分子產(chǎn)生本發(fā)明的Fab和F(ab')2片段。F(ab')2片段包含可變區(qū)、輕鏈恒定區(qū)和重鏈的CHI區(qū)。2.使用SLAM制備抗-AB(20-42)球聚體單克隆抗體在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，使用如在美國專利號(hào)5，627，052、國際申請(qǐng)公開號(hào)WO92/02551和Babcock，J.S.等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843_7848中所描述的，在本領(lǐng)域中稱為選擇淋巴細(xì)胞抗體法(SLAM)的方法，由單個(gè)分離的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生重組抗體。在該方法中，使用抗原特異性溶血斑檢測(cè)篩選分泌目標(biāo)抗體的單個(gè)細(xì)胞，如來源于任何一種第1節(jié)中所描述的經(jīng)免疫動(dòng)物的淋巴細(xì)胞，其中使用接頭如生物素將抗原Αβ(20-42)球聚體、Αβ(20-42)球聚體的亞基或其片段與綿羊紅細(xì)胞偶聯(lián)，并用于鑒定分泌具有針對(duì)Αβ(20-42)球聚體特異性的抗體的單個(gè)細(xì)胞。在鑒定了目標(biāo)抗體分泌細(xì)胞后，通過逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR從細(xì)胞中拯救出重鏈和輕鏈可變區(qū)cDNAs，然后在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞如COS或CHO細(xì)胞中，于合適的免疫球蛋白恒定域(如人恒定區(qū))背景中可表達(dá)這些可變區(qū)。接著，來源于體內(nèi)選擇的淋巴細(xì)胞用擴(kuò)增的免疫球蛋白序列轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞可在體外經(jīng)歷進(jìn)一步的分析和選擇，例如通過淘選轉(zhuǎn)染細(xì)胞以分離表達(dá)針對(duì)Αβ(20-42)球聚體的抗體的細(xì)胞。擴(kuò)增的免疫球蛋白序列可進(jìn)一步在體外進(jìn)行操作，例如通過體外親和力成熟法，如在國際申請(qǐng)公開號(hào)WO97/29131和國際申請(qǐng)公開號(hào)WO00/56772中所描述的那些方法。3.使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備抗-AB(20-42)球聚體單克隆抗體在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，通過用Αβ(20-42)球聚體抗原免疫包含某些或全部人免疫球蛋白基因座的非人動(dòng)物產(chǎn)生抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，非人動(dòng)物是XEN0M0USE轉(zhuǎn)基因小鼠，一種包含人免疫球蛋白基因座大片段并且無法產(chǎn)生小鼠抗體的工程化的小鼠品系。參見如Green等NatureGenetics713-21(1994)和美國專利號(hào)5，916，771,5,939，598,5,985，615,5,998，209,6,075，181,6,091，001,6,114，598和6，130,364。還參見1991年7月25日公開的國際申請(qǐng)公開號(hào)W091/10741、1994年2月3日公開的WO94/02602、都于1996年10月31日公開的WO96/34096和WO96/33735、1998年4月23日公布的W098/16654、1998年6月11日公布的WO98/24893、1998年11月12日公布的WO98/50433、1999年9月10日公布的WO99/45031、1999年10月21日公布的WO99/53049、2000年2月24日公布的WO00/09560和2000年6月29日公布的WO00/037504。XEN0M0USE轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生成人樣人全人抗體譜并產(chǎn)生抗原特異的人Mabs。XEN0M0USE轉(zhuǎn)基因小鼠通過導(dǎo)入人重鏈基因座和χ輕鏈基因座的兆堿基大小的、種系構(gòu)型YAC片段，從而包含大約80%的人抗體譜。參見Mendez等，NatureGenetics15146-156(1997)，Green和JakobovitsJ.Exp.Med.188:483_495(1998)，其內(nèi)容在此并入作為參考。4.使用重組抗體文庫制備抗-AB(20-42)球聚體單克隆抗體體外方法也可用于制備本發(fā)明的抗體，其中篩選抗體文庫以鑒定具有期望結(jié)合特異性的抗體。用于這樣的重組抗體文庫篩選的方法是本領(lǐng)域公知的并包括在如下文獻(xiàn)中描述的方法例如Ladner等，美國專利號(hào)5，223，409；Kang等，國際申請(qǐng)公開號(hào)WO92/18619；Dower等，國際申請(qǐng)公開號(hào)WO91/17271；Winter等，國際申請(qǐng)公開號(hào)WO92/20791；Markland等，國際申請(qǐng)公開號(hào)WO92/15679；Breitling等，國際申請(qǐng)公開號(hào)WO93/01288；McCafferty等，PCT發(fā)明者A·R·斯特里賓格,B·拉科韋斯基,H·希倫,P·R·欣頓,P·凱勒,S·巴霍恩,U·埃伯特,V·M·胡安申請(qǐng)人:雅培制藥有限公司;艾博特股份有限兩合公司