專利名稱：：免疫調(diào)節(jié)肽的制作方法免疫調(diào)節(jié)肽IgG在介導(dǎo)抗病原體的保護和介導(dǎo)加速對組織、粘膜和皮膚表面補充免疫系統(tǒng)成分的過敏性和炎性響應(yīng)中起到關(guān)鍵作用。Junghans，Immunol.Res.16(1):29(1997)。然而，IgG還在各種自身免疫性疾病中起到關(guān)鍵作用。IgG的血清半衰期比其他血漿蛋白的血清半衰期更長。例如，IgG的血清半衰期在小鼠中是5至7天而在人類中是22至23天。Roopenian等，J.Immunol.170:3528(2003)；Junghans和Anderson，Proc.Natl.Acad.SciUSA935512(1996)。血清半衰期的延長至少部分上是由于新生的Fc受體，即FcRn，其與胞飲的IgG的Fc部分結(jié)合(在成人和新生兒二者中)以阻止其被溶酶體降解。之后胞飲的IgG循環(huán)回到細胞外區(qū)室。參見例如Jimghans禾口Anderson,Proc.Naal.Acad.SciUSA935512(1996),Roopenian等，J.Immunol.1703528(2003)。事實上，IgG的血清半衰期在不表達編碼β評和FcRn重鏈的基因的至少一部分的敲除小鼠模型中減少。參見W002/43658以及Junghans和Anderson，Proc.Natl.Acad.SciUSA935512(1996)。當IgG的濃度達到超過可獲得的FcRn的水平時，未結(jié)合的IgG不能避免降解機制并且由此具有較短的血清半衰期。參見例如Brambell等，Nature203:1352(1964)。類似地，當IgG與FcRn的結(jié)合被抑制時，IgG血清半衰期減少，由此阻止IgG循環(huán)。因此，抑制或拮抗IgG與FcRn的結(jié)合的劑可被用于調(diào)節(jié)、治療或預(yù)防由不適當表達的IgG抗體的存在所表征的病癥(例如，諸如自身免疫性和炎性疾病和病癥)。例如，已經(jīng)使用FcRn重鏈敲除小鼠系生產(chǎn)了能夠抑制FcRn與IgG的結(jié)合的抗體(W002/43658)。在另一個實例中，與FcRn復(fù)合體結(jié)合的肽已經(jīng)被鑒定。Kolonin等，Proc.Natl.Acad.SciUSA99(20)13055-60(2002)；美國專利第6，212，022號。進一步描述了這些肽、它們的合成和它們的用途的2007年2月16日提交的美國申請序列第11/676，148號和2006年2月17日提交的美國臨時申請第60/774，853號以及2006年6月23日提交的第60/805，634號的內(nèi)容通過引用全文并入本文。然而，同時需要調(diào)節(jié)、治療或預(yù)防由免疫反應(yīng)表征的病況、疾病和病癥的另外的劑。因此，公開了這樣的肽，其特異性結(jié)合FcRn并抑制IgGFc與FcRn結(jié)合，由此通過防止FcRn起到其保護IgG免受溶酶體降解的作用來防止IgG循環(huán)。在示例性的實施方案中，肽與FcRn結(jié)合并抑制IgG的IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞類與FcRn結(jié)合。本發(fā)明的肽可作為單體或可選擇地作為多聚體，例如諸如二聚體、三聚體或四聚體存在。在一些實施方案中，本發(fā)明的肽可以是更易受胞飲作用影響的，其使得肽的結(jié)合更迅速并且由此減少經(jīng)由腎的排出。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了含有治療有效量的本發(fā)明的一種或多種肽的藥物組合物。在其他實施方案中，本發(fā)明提供調(diào)節(jié)疾病狀況的方法，其包括將細胞與治療有效量的本發(fā)明的一種或多種肽的肽接觸。進一步的實施方案包括調(diào)節(jié)受治療者的血清中IgG水平的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的含有能夠與FcRn結(jié)合并抑制FcRn與IgG分子的Fc部分結(jié)合的本發(fā)明的一種或多種肽的組合物。在某些實施方案中，本發(fā)明的方法可被用于減少受治療者的血清中可溶的IgG的半衰期。在一些實施方案中，施用本發(fā)明的組合物的結(jié)果是與施用肽之前受治療者的血清中的IgG的半衰期相比受治療者的血清中的可溶的IgG的半衰期減少。在其他的實施方案中，本發(fā)明提供用于抑制人類IgG的Fc部分與FcRn結(jié)合以引起與治療前IgG的血清濃度相比IgG血清濃度的降低的方法。降低IgG血清濃度的方法包括對受治療者施用治療有效量的含有能夠抑制IgG分子的Fc部分與FcRn結(jié)合的本發(fā)明的一種或多種肽的組合物。在一些實施方案中，人類IgG的血清濃度的降低為至少5%，例如至少15%的降低或至少25%的人類IgG血清濃度上的降低。本發(fā)明的一些實施方案提供治療患有由IgG的增加的或不適當?shù)谋磉_所表征的疾病(例如自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫系統(tǒng)癌)的受治療者的方法，其包括對受治療者施用治療有效量的含有能夠防止FcRn與IgG分子的Fc部分結(jié)合的本發(fā)明的一種或多種肽的組合物。在一些實施方案中，本發(fā)明的方法可被用于預(yù)防、治療或調(diào)節(jié)對治療性蛋白或基因治療載體的免疫應(yīng)答。在其它的實施方案中，提供了檢測FcRn的方法，其包括將本文描述的肽用至少一種可檢測的標記物進行標記，所述可檢測的標記物選自例如放射性同位素、酶(例如催化產(chǎn)生可檢測的包括有顏色的、發(fā)光的或發(fā)熒光的產(chǎn)物的反應(yīng)的酶)、熒光團、發(fā)色團、化學(xué)發(fā)光的化合物、磁性顆粒、微球體、納米球、生物素、鏈霉親和素和地高辛。本發(fā)明的其他實施方案包括純化FcRn的方法，其包括將本文所描述的肽固定于固相支持體，將含有FcRn的溶液與固相支持體上的固定的肽接觸以及通過將所述溶液與所述固相支持體分離來純化FcRn。本發(fā)明的另外的實施方案、目的和優(yōu)點部分地展示于之后的說明書中，并且在某種程度上從說明書中是明顯的，或者可通過本發(fā)明的實行而學(xué)到。本發(fā)明的這些實施方案、目的和優(yōu)點可通過在所附的權(quán)利要求中特別指出的元素和組合的方式來實現(xiàn)并獲得。應(yīng)當理解的是，上述一般描述和下列詳細描述都僅僅是示例性和解釋性的，并且不限制所要求的本發(fā)明。附圖簡述圖1顯示如實施例12中所描述的示例性說明的N端醛肽單體的合成的概覽。圖2顯示作為示例性說明的實例的使用肽第270號經(jīng)由如實施例12中所描述的還原性烴基化來合成肽二聚體的概覽。圖3描述作為肽二聚體的合成的示例性說明的實例的通過使用含有肽和溴乙?；碾牡亩虼歼B接體來合成肽第100號。放置在肽序列上方的水平方括弧指示橋連的存在。圖4顯示作為肽二聚體的合成的示例性說明的實例的使用含有肽和溴乙酰化的肽的硫醇連接體來合成肽第122號。放置在肽序列上方的水平方括弧指示橋連的存在。圖5顯示使用含有連接體的二酸的肽二聚體的合成。作為示例性說明的實例顯示肽第283號的合成。放置在肽序列下方的水平方括弧指示橋連的存在。圖6顯示使用含有連接體的胺的肽二聚體的合成。作為示例性說明的實例顯示肽第280號的合成。放置在肽序列下方的水平方括弧指示橋連的存在。圖7顯示通過在4-20%Tris-Gly膠上對純化的肽第289號的SDS-PAGE分析所得的肽第289號的分子量。第1道含有分子量標志物。第2道含有未軛合的PEG3tlklla起始物質(zhì)。第3道含有粗反應(yīng)混合物。第4道含有純化的肽第289號。圖8顯示TG32B小鼠中靜脈內(nèi)注射肽第289號之后人類IgG分解代謝的動力學(xué)。圖9顯示肽第290、291、292和293號的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖10提供了使用4-20%Tris-Gly膠的通過還原性烴基化而合成的聚乙二醇化肽的SDS-PAGE分析。向所有道加樣10mg。第1道含有分子量標志物。第2道含有未軛合的PEG3tlklla起始物質(zhì)醛。第3道含有純化的肽第290號。第4道含有未軛合的PEG2tlklla起始物質(zhì)醛。第5道含有純化的肽第291號。第6道含有未軛合的PEG5klla起始物質(zhì)醛。第7道含有純化的肽第292號。圖11提供使用4-20%Tris-Gly膠的通過還原性烴基化合成的聚乙二醇化肽的SDS-PAGE分析。第1道含有分子量標志物。第2道含有純化的肽第292號。第3道含有純化的肽第291號。第4道含有純化的肽第290號。第5道含有純化的肽第293號。第6道含有純化的肽第295號。第7道含有純化的肽第296號。第8道含有分子量標志物。圖12顯示在t=Oh時500mg/kgIV劑量的人類IgG以及隨后在t=24小時時的5mg/kg或25mg/kg的肽第290號的靜脈注射之后TG32B小鼠中的人類IgG分解代謝的速率。將hlgG的濃度通過如實施例18中的ELISA進行確定，標準化至t=24h的水平并且與媒介物對照組比較。圖13顯示肽第295號的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖14顯示肽第296號的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖15顯示如實施例35中所描述的在t=Oh時500mg/kgIV劑量的人類IgG以及隨后在t=24小時時的25mg/kg的肽第290、291、293、295和296號的靜脈注射之后TG32B小鼠中的人類IgG分解代謝的速率。將hlgG的濃變通過如實施例18中的ELISA進行確定，標準化至t=24h的水平并且與媒介物對照組比較。圖16是使用如實施例4中描述的IgG競爭ELISA測定和實施例18的人類IgG分解代謝來比較不同的肽的體外和體內(nèi)活性的表格。圖17顯示具有支鏈PEG連接的抗FcRn肽的合成。圖18顯示肽第297號的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖19顯示肽第307、308和309號的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖20顯示使用2.5mg/kg皮下劑量的如實施例18中所描述的IgG分解代謝實驗中肽283、298、299、300、301的作用。I.定義如本文所用的，術(shù)語“氨基酸”，包括編碼和非編碼氨基酸。本文中標準的1和3字母縮寫被用于編碼的氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸)。非編碼氨基酸包括例如α-氨基酸、β-氨基酸、Y-氨基酸、δ-氨基酸和ω-氨基酸并且可以在任何手性原子處具有R或S手性。非編碼氨基酸包括編碼氨基酸的異構(gòu)體，例如諸如立體異構(gòu)體(包括例如D-氨基酸和別-氨基酸，例如諸如別-蘇氨酸和別-異亮氨酸)以及編碼氨基酸的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體(包括例如B-丙氨酸)。本文中小寫單字母編碼被用于表示具有D-手性的編碼氨基酸的立體異構(gòu)體(例如，a=D-丙氨酸，y=D-酪氨酸)。非編碼氨基酸還包括N-甲基化氨基酸。本文中常規(guī)的3字母縮寫被用于某些常見的非編碼氨基酸(例如，Aib=氨基異丁酸，Apa=5-氨基戊酸，Dab=1，3_二氨基丁酸，Dap=1,2-二氨基丙酸，Om=鳥氨酸，Pen=青霉胺，Sar=肌氨酸)。通常，當沒有特定構(gòu)型表示α-氨基酸時，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解氨基酸為L-氨基酸。然而，在特定的實施方案中，非編碼氨基酸也可以是外消旋的、非外消旋的和非對映體的混合物的形式。非編碼氨基酸是肽領(lǐng)域中熟知的并且包括例如N-乙酰絲氨酸、別-異亮氨酸、別_蘇氨酸、β“丙氨酸(3-氨基丙酸)、α-氨基己二酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、3-氨基-1-羧甲基戊內(nèi)酰胺、1-氨基環(huán)戊烷羧酸、6-氨基己酸、2-氨基庚二酸、7-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、氨甲基吡咯羧酸、8-氨基-3，6-二氧代-辛酸、氨基哌啶羧酸、氨基絲氨酸、氨基四氫吡喃-4-羧酸、吖丁啶羧酸、苯并噻唑基丙氨酸、丁基甘氨酸、肉毒堿、4-氯苯丙氨酸、瓜氨酸、環(huán)己基丙氨酸、環(huán)己基抑胃酶氨酸(cyclohexylstatine),2,4-二氨基丁酸、2，3_二氨基丙酸、二羥基苯丙氨酸、二甲基噻唑烷羧酸、4-脒基-苯丙氨酸、高精氨酸、高瓜氨酸、高半胱氨酸、高苯丙氨酸、高脯氨酸、高絲氨酸、4-胼基苯甲酸、4-羥基脯氨酸、異哌啶甲酸、甲醇基脯氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、鳥氨酸、對氨基苯甲酸、青霉胺、苯基甘氨酸、鄰-磷酸絲氨酸、哌啶基丙氨酸、哌啶基甘氨酸、吡咯烷基丙氨酸、肌氨酸、抑胃酶氨酸、四氫吡喃基甘氨酸、噻吩基丙氨酸、ε"N,N,N-三甲基賴氨酸。氨基酸的“類似物”是并非氨基酸但是在至少一個特性(例如大小、電荷、親水性、疏水性、極性、氫結(jié)合能力或剛性)方面類似于氨基酸的分子。例如，乳酸可以是氨基酸類似物。相似地，二肽的類似物是并非二肽但是在至少一個特性(例如大小、電荷、親水性、疏水性、極性、氫結(jié)合能力或剛性)方面類似于二肽的分子。進一步地，肽類似物是并非肽但是在至少一個特性(例如大小、電荷、親水性、疏水性、極性、氫結(jié)合能力或剛性)方面類似于肽的分子。在一些實施方案中，二肽類似物或肽類似物可以因為一個或多個肽連接通過本領(lǐng)域中熟知的方法被選自例如-CH2NH-、-CH2S-,-CH2-CH2-,-CH=CH-(順式和反式)、-C(O)CH2-、-CH(OH)CH2-或-CH2SO-的連接所取代而與二肽或肽不同。參見例如Fauchere,J.Adv.DrugRes.1529(1986)；Evans等，J.Med.Chem.301229(1987)。二肽類似物還包括例如β_轉(zhuǎn)角類似物。參見例如Friedinger，J.Med.Chem.465553-5566(2003)禾口Hanessian，Tetrahedron5312789-12854(1997)。二肽類似物的非限制性的實例包括例如β-丙氨酸、4-氨基丁酸、5-氨基丁酸、3_(氨甲基)苯甲酸、4-(氨甲基苯甲酸)、3-(氨基苯基)乙酸、4-(氨基苯基)乙酸以及<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(D，L-Friedinger氏內(nèi)酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(L，L-Friedinger氏內(nèi)酰胺)；-3⑶-氨基-2-氧代-1-哌啶-乙酸和3(R)_3_氨基_2_氧代哌啶-乙酸；-3(S)-氨基-2-氧代-1-氮雜$乙酸和3(R)_3_氨基_2_氧代氮雜革乙酸；-3(S)-氨基-2-氧代-1-吡咯烷乙酸和3(R)_3_氨基_2_氧代吡咯烷乙酸；以及-3-氨基-N-I-羧甲基-2，3,4,5_四氫_1Η_[1]-苯并氮雜革_2_酮。與給定序列“大致上相同的”氨基酸序列可以是與給定序列例如至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%相同的。大致上相同的序列可通過一個或多個氨基酸的平截、缺失、取代、添加或修飾，包括用一個或多個非編碼氨基酸(例如諸如D-氨基酸或N-甲基化的氨基酸)或氨基酸類似物代替一個或多個氨基酸而從給定的序列變化而來?？蛇x擇地，大致上相同的序列可僅通過保守的氨基酸取代而與給定的序列不同。保守的取代是這樣的取代，其中第一個氨基酸被接近第一個氨基酸的至少一個特性例如諸如大小、電荷、親水性、疏水性、極性、氫結(jié)合能力或剛性的第二個氨基酸代替。保守的取代涵蓋編碼和非編碼的氨基酸二者以及氨基酸類似物。例如，在一些實施方案中，丙氨酸可保守地被另一個疏水性氨基酸例如諸如甲硫氨酸、纈氨酸、亮氨酸或異亮氨酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在其他的實施方案中，丙氨酸可保守地被幾乎等電子排列的氨基酸例如諸如β-丙氨酸、乙基甘氨酸、α-氨基異丁酸或D-丙氨酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在一些實施方案中，半胱氨酸可保守地被其他含有硫醇的氨基酸例如諸如高半胱氨酸、D-半胱氨酸或青霉胺或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在其他的實施方案中，半胱氨酸可保守地被幾乎等電子排列的氨基酸諸如例如絲氨酸、蘇氨酸或2，3-二氨基丙酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在其他的實施方案中，苯丙氨酸可保守地被例如3-氟苯丙氨酸、4-甲基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、1-萘基丙氨酸和3，3-二苯基丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、五氟苯丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-硝基苯丙氨酸、2-吡咯烷基丙氨酸、3-哌啶基丙氨酸或4-哌啶基丙氨酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。作為另一個實例，組氨酸可保守地被堿性氨基酸例如諸如賴氨酸、鳥氨酸、2，4_二氨基丁酸、2，3_二氨基丙酸、精氨酸或脒基丙氨酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在其他的實施方案中，組氨酸可保守地被芳香族氨基酸例如諸如噻吩基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸或苯丙氨酸或上述提到的氨基酸中的任一個的類似物所取代。在還有其他的實施方案中，組氨酸可保守地被堿性的芳香族氨基酸例如諸如ι-甲基組氨酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-吡啶基丙氨酸、4-氨基苯丙氨酸、4-脒基苯丙氨酸、噻唑基丙氨酸和其類似物所取代。在某些實施方案中，保守的取代可以是用具有相似親水指數(shù)例如以諸如士0.5、士1或士2變化的值的第二個氨基酸代替第一個氨基酸。在其他的實施方案中，保守的取代可以是用具有相似親水值例如以諸如士0.5、士1或士2變化的值的第二個氨基酸代替第一個氨基酸。在一些實施方案中，可引入非保守的取代。非保守的取代可以是例如用中性氨基酸代替帶電荷的氨基酸的取代、用酸性氨基酸代替堿性氨基酸的取代、用非極性氨基酸代替極性氨基酸的取代、用疏水性氨基酸代替親水性氨基酸的取代、用空間上不相似的氨基酸或具有不同的氫鍵合能力的氨基酸代替氨基酸的取代?？稍谶m當?shù)臅r候進行非保守的取代。例如，本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠鑒定可被非保守取代而肽的生物活性(例如諸如體內(nèi)FcRn結(jié)合親和力或IgG濃度的降低)或結(jié)構(gòu)沒有顯著改變的肽的一個或多個氨基酸。參見，例如實施例7。II.用親水性聚合物衍生的肽通常，本公開提供用親水性聚合物衍生的肽。例如，實施例中公開的肽中的任一個可以是用親水性聚合物衍生的或可被修飾(例如，如下文所描述的)以使得它們可以是用親水性聚合物衍生的。當與本發(fā)明的肽連用時，術(shù)語“衍生的”是指含有親水性聚合物的氨基酸或肽或者氨基酸或肽的類似物。親水性聚合物可選自，例如聚乙二醇，包括例如單烴基聚乙二醇；聚丙二醇；多糖，例如諸如葡聚糖和纖維素、甲基纖維素、羥基纖維素、羥甲基纖維絲、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基烴基淀粉包括例如羥乙基淀粉；聚乙烯醇’聚(N-乙烯吡咯烷酮)和泊洛沙姆。在其他的實施方案中，親水性聚合物可選自，例如聚乙二醇共聚物，例如諸如聚乙二醇-聚丙二醇共聚物和聚乙二醇-聚(N-乙烯吡咯烷酮)共聚物。在一些實施方案中，親水性聚合物是非肽聚合物。在一些實施方案中，親水性聚合物是容易水化的。在一些實施方案中，親水性聚合物水化時具有大的流體動力學(xué)半徑。在示例性說明的實施方案中，親水性聚合物是聚乙二醇。在一些實施方案中，本發(fā)明的肽(單體或多聚體)的每個肽單體可含有一分子的親水性聚合物。在其他的實施方案中，本發(fā)明的肽的每個肽單體可含有多分子的親水性聚合物。例如，本文公開的抗FcRn肽的每個肽單體可具有1、2、3、4、5、6、7、8或1-4、1-8、2-3、2-4、2-6、3-6或2-6分子的親水性聚合物。在一些實施方案中，親水性聚合物可以是直鏈的。在其他實施方案中，親水性聚合物可以是支鏈的。支鏈的親水性聚合物可具有例如2、3、4、5、6、7或8條支鏈。在一些實施方案中，親水性聚合物可具有例如約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或60kDa的平均分子量或可具有在例如約10-60、10-40、10-30、20-30、20-40、20-50、30-60、15-25、25-35、35-45或45-55kDa范圍內(nèi)變化的平均分子量。在一些實施方案中，本文描述的衍生的肽相對于相應(yīng)的未衍生的肽表現(xiàn)出增強的藥學(xué)特性。例如，衍生的肽可在動物中具有延長的血清半衰期。在一些實施方案中，衍生的肽可具有比人類、小鼠、大鼠和食蟹猴中的任一種中相應(yīng)的未衍生的肽高至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、150、175、200或300%的血清半衰期。在其他的實施方案中，衍生的肽可具有比人類、小鼠、大鼠和食蟹猴中的任一種中相應(yīng)的未衍生的肽高至少2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100、200、500、1，000,5,000或10，000倍的血清半衰期。血清半衰期可使用適當抗體通過例如LC-MS或ELISA測定來確定。在某些實施方案中，衍生沒有導(dǎo)致效力上的顯著降低。例如，在一些實施方案中，衍生沒有導(dǎo)致例如結(jié)合親和力上的顯著降低。在其他的實施方案中，衍生沒有導(dǎo)致對IgG-FcRn相互作用的抑制活性上的顯著降低。例如，在一些實施方案中，衍生沒有導(dǎo)致如通過例如實施例4中所描述的IgG-肽競爭測定、Biacore或KinExA(動力排除測定)所測量的效力上的顯著降低，并且衍生的肽可具有相應(yīng)的未衍生的肽的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、75、80、85、90、95、97、98或的效力。在一些實施方案中，單體肽例如諸如肽第227、235和239號可被衍生或可被修飾(例如通過保守或非保守的取代)以使得它們可以被衍生。在其他的實施方案中，多聚體肽例如諸如肽第119、247、278、285、286、287號可被衍生或可被修飾以使得它們可以被衍生。本發(fā)明的衍生的肽可選自例如肽第290、291、292、293、294、295和296號。在示例性說明的實施方案中，衍生的抗FcRn的肽可以是肽第285號，其被實施例24、27_29和31中所描述的直鏈PEG鏈或?qū)嵤├?3-34中所描述的支鏈PEG鏈聚乙二醇化。在一些實施方案中，支鏈的PEG鏈可比直鏈PEG提供更有利的體外和體內(nèi)特性。在示例性說明的實施方案中，支鏈的聚乙二醇化的肽可以是肽第285號與20kDa兩條支鏈的PEG或兩條支鏈40kDa的PEG的還原性烴基化產(chǎn)物。衍生的肽可以是單體的或多聚體的(包括例如諸如二聚體、三聚體或四聚體的肽)。在多聚體肽的情況下，組成多聚體的單獨的肽單體中的每一個可與多聚體中任何其他的肽單體相同或不同。在一些實施方案中，肽多聚體可通過將單獨的肽單體與多價連接體反應(yīng)來合成。參見例如Rose,J.Am.Chem.Soc.116=30(1994)。例如，肽多聚體可通過將單獨的肽單體在樹脂上與多價連接體反應(yīng)來合成。在其他的實施方案中，肽多聚體可如例如Posnett等，J.Biol.Chem.263=1719(1988)中在肽序列合成前通過引入支鏈的連接體基團來合成。可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適合的連接體。通常，選擇不干擾與FcRn的結(jié)合的連接體。例如，連接體可以是例如實施例、美國專利第4，671，958,4,867，973、5，691，154,5,846，728,6,472，506,6,541，669,7,141，676,7,176，185和7，232，805號以及美國專利申請公開第2006/0228348號中所公開的連接體中的一種。通常，連接體可具有適當?shù)拈L度以便其避免多聚體的肽單體之間的空間位阻并且不干擾肽單體與FcRn的結(jié)合。在一些實施方案中，連接體可以是共價鍵。在其他的實施方案中，連接體可含有1-100、1-60、5-60、5-40、2-50、2-20、5-10或5-20個直鏈原子，其中連接體通過例如酯、酰胺、腙、肟、縮氨基脲、醚、硫醚、硫代磷酸、磷酸酯、硫酯和/或二硫鍵方式與肽單體連接。連接體中其余的直鏈原子優(yōu)選地選自由碳、氧、氮和硫組成的組，其中任一種原子可任選地包含在碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基環(huán)中。連接體中的直鏈碳原子可任選地由選自由鹵代、羥基、硝基、鹵代烴基、烴基、烴芳基、芳基、芳烴基、烴氧基、芳氧基、氨基、酰氨基、烴基氨基甲酰、芳基氨基甲酰、氨基烴基、烴氧基羰基、羧基、羥基烴基、烴磺?；?、芳烴磺酰基、烴基磺酰氨基、芳烴磺酰氨基、芳烴基磺酰氨基、烴基羰基、酸基、氰基和脲基組成的組的取代基所取代。連接體中的直鏈氮原子可任選地由酰基、磺酰基、烴基、烴芳基、芳基、芳烴基、烴氧羰基所取代。連接體中的直鏈硫原子可任選地被氧化。在某些實施方案中，連接體是可斷開的，如例如美國專利申請公開第2006/0228348號和美國專利第4，867，973,7,176，185,7,232，805號中所公開的。在一些實施方案中，衍生的肽可包括進一步的修飾，例如諸如糖基化、乙酰化、磷酸化或脂化。衍生的肽，在某些實施方案中，具有對FcRn的一定的親和性。例如，在一些實施方案中，肽-FcRn相互作用的Kd可在50fM至ImM的范圍內(nèi)。在其他實施方案中，Kd可在50fM至100yM、50fM至InM或IpM至InM的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，肽抑制IgG的Fc部分與FcRn的結(jié)合。例如，在某些實施方案中，肽能以例如50fM至100μM、50fM至1μΜ、IpM至IOOnM或IOpM至IOnM的IC50來抑制IgG的Fc部分與FcRn的結(jié)合。Α.示例性的衍生的肽在一些實施方案中，本公開提供下列示例性的衍生的肽。示例性實施方案1衍生的肽，其具有下列序列(I)A-X0-X1-X2-X3-X4-Gly-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-B,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>其中-A，如果存在，含有親水性聚合物或者是氫、?；虬被Ｗo基團；-B，如果存在，含有親水性聚合物或者是Q、氨基基團、羥基或羧基保護基團；-Q,如果存在，含有胺基團(其可以是中性的或帶正電的)，其中所述胺基團通過亞烴基基團連接于肽，其中所述亞烴基基團包括但不限于乙烯、正丙烯、正丁烯、正戊烯和正己烯；或通過亞烴基基團和亞烴氧基(alkyleneoxide)亞單元的組合連接于肽，其中亞烴氧基亞單元包括但不限于-(CH2-CH2-O)p-,其中ρ是1、2、3、4或5。Q的非限制性實例包括-CH2-CH2-NH2,-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2,-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2，-CH2-CH2-O-CH2-CH2-NH2,-(CH2-CH2-O)2-CH2-CH2-NH2，禾口-(CH2-CH2-O)3-CH2-CH2-NH2；-X0,如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物或是含2-15個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X1,如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物；-X2,如果存在，是氨基酸或其類似物；-X3是能夠與X1Q、X12或X13形成橋連的氨基酸或其類似物；-X4是任選地衍生的氨基酸或其類似物或是含2或4個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X6是堿性氨基酸或其類似物、芳香族氨基酸或其類似物或堿性芳香族氨基酸或其類似物；-X7是苯丙氨酸或其類似物；-X8和X9各自獨立地選自甘氨酸或其類似物、肌氨酸或其類似物、天冬氨酸或其類似物、D-氨基酸或其類似物和α-氨基異丁酸或其類似物，或者-X8,當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X10是氨基酸或其類似物，或者-X10,當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X11是酪氨酸或其類似物；-X12是任選地衍生的氨基酸或其類似物；-X13,如果存在，是氨基酸或其類似物；-X14,如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物或是含2-15個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-Y含有親水性聚合物；-Z是連接體，其連接每一個肽單體，通過-A；-B；-X0的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl存在；至X1的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl不存在；至X2的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl和X1都不存在；或至X3的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xo、X1和X2都不存在；或-X14的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14存在；至X13的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14不存在；或至X12的羧基末端或側(cè)鏈，如果X13和X14都不存在；-m是選自1、2和3的整數(shù)；并且-η是選自1、2和3的整數(shù)；其中-獨立地選擇每個Α、B、X。、X”X2、X3>X4>X6>X7>X8>X9>X10>Xn、X12、X13和X14；并且-肽的每個單體長度上在10至50個氨基酸的范圍內(nèi)。技術(shù)人員將理解的是，如果Z通過Xtl的側(cè)鏈與肽連接，那么A必然存在。相似地，如果Z連接至X14的側(cè)鏈，那么B必然存在。在一些實施方案中，A含有親水性聚合物。例如，A可含有親水性聚合物和將親水性聚合物與X0(或X1,如果X0不存在；或x2，如果X0和X1不存在；或x3，如果X0>X1和X2不存在)相連的連接體(例如諸如本文描述的任何連接體)。在其他實施方案中，A是氫、?；虬被Ｗo基團。在一些實施方案中，B含有親水性聚合物。例如，B可含有親水性聚合物和將親水性聚合物與X14(或X13,如果X14不存在；或X12,如果X13和X14不存在)相連的連接體(例如諸如本文描述的任何連接體，包括例如在圖18中找到的連接體)。在其他實施方案中，B是氨基基團、羥基基團或羧基保護基團。取決于環(huán)境，可電離的基團例如氨基基團或羧基基團的電荷可以是帶電荷的或中性的。示例性實施方案2實施方案1的肽，其具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中-X1是未衍生的氨基酸或其類似物；-X4是未衍生的氨基酸或其類似物或含2或4個氨基酸的未衍生的肽或其類似物；而且-X12是未衍生的氨基酸或其類似物。示例性實施方案3實施方案1的肽，其中Xtl不存在。示例性實施方案4實施方案1的肽，其中X1是精氨酸或其類似物。示例性實施方案5實施方案1的肽，其中X2是芳香族氨基酸或其類似物。示例性實施方案6實施方案5的肽，其中X2是苯丙氨酸或其類似物、酪氨酸或其類似物或者色氨酸或其類似物。示例性實施方案7實施方案6的肽，其中X2是苯丙氨酸或其類似物。示例性實施方案8實施方案1的肽，其中肽是未橋連的。示例性實施方案9實施方案1的肽，其中Χ1(1、Χ12或X13中的至少一個是能夠與X3形成橋連的氨基酸或其類似物。示例性實施方案10:實施方案9的肽，其中X3與^12或X13形成橋連。X3和‘、X12或X13之間的橋連可以是側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連或側(cè)鏈與羧基末端的橋連(例如在其中X13位于肽的羧基末端的實施方案中)。橋連可包括或可來自于一個或多個官能團例如諸如二硫化物(參見例如實施例7)、醚、硫醚、烯烴或酰胺(參見例如實施例10)的形成，在這些實例中橋連可被稱為例如二硫橋、醚橋、硫醚橋、烯烴橋或酰胺橋。示例性實施方案11實施方案10的肽，其中X3與X13形成橋連。示例性實施方案12實施方案11的肽，其中橋連是側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連。示例性實施方案13實施方案12的肽，其中側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連是二硫橋、醚橋、硫醚橋、烯烴橋或酰胺橋。示例性實施方案14實施方案13的肽，其中側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連是下列氨基酸之間的二硫橋-半胱氨酸和半胱氨酸；-半胱氨酸和高半胱氨酸；-半胱氨酸和青霉胺；-高半胱氨酸和高半胱氨酸；-高半胱氨酸和青霉胺；或-青霉胺和青霉胺。示例性實施方案15實施方案13的肽，其中側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連是下列氨基酸之間的酰胺橋_天冬氨酸和賴氨酸；_天冬氨酸和鳥氨酸；-天冬氨酸和2，4-二氨基丁酸；-天冬氨酸和2，3-二氨基丙酸；-谷氨酸和賴氨酸；-谷氨酸和鳥氨酸；-谷氨酸和2，4-二氨基丁酸；或-谷氨酸和2，3-二氨基丙酸。示例性實施方案16實施方案1的肽，其中肽含有至少一個半胱氨酸。示例性實施方案17實施方案1的肽，其中肽含有至少一個半胱氨酸類似物，其選自_高半胱氨酸；-D-半胱氨酸；和-青霉胺。示例性實施方案18實施方案1的肽，其中X4是蘇氨酸或其類似物。示例性實施方案19實施方案1的肽，其中X6是堿性氨基酸或其類似物，其選自-賴氨酸或其類似物；_鳥氨酸或其類似物；-2,4-二氨基丁酸或其類似物；-2，3-二氨基丙酸或其類似物；-精氨酸或其類似物；以及-脒基丙氨酸或其類似物。示例性實施方案20實施方案1的肽，其中X6是芳香族氨基酸或其類似物，其選自-酪氨酸或其類似物；-色氨酸或其類似物；以及-苯丙氨酸或其類似物。示例性實施方案21實施方案1的肽，其中X6是堿性芳香族氨基酸或其類似物，其選自_組氨酸或其類似物；-1-甲基組氨酸或其類似物；-2-吡啶基丙氨酸或其類似物；-3-吡啶基丙氨酸或其類似物；-4-吡啶基丙氨酸或其類似物；-4-氨基苯丙氨酸或其類似物；-4-脒基苯丙氨酸或其類似物；以及_噻唑基丙氨酸或其類似物。示例性實施方案22實施方案21的肽，其中X6是組氨酸或其類似物、3_吡啶基丙氨酸或其類似物、4-吡啶基丙氨酸或其類似物或者4-脒基苯丙氨酸或其類似物。示例性實施方案23實施方案22的肽，其中X6是4-脒基苯丙氨酸或其類似物。示例性實施方案24實施方案22的肽，其中X6是組氨酸或其類似物。示例性實施方案25實施方案1的肽，其中X7是苯丙氨酸。示例性實施方案26實施方案1的肽，其中X8和X9中的至少一個選自-甘氨酸；-D-氨基酸；-α-氨基異丁酸；以及-肌氨酸。示例性實施方案27實施方案1的肽，其中X8與X9合在一起時形成二肽類似物，其選自-β-丙氨酸；-4-氨基丁酸；-5-氨基戊酸；_3-(氨甲基)苯甲酸；_4-(氨甲基)苯甲酸；-3-(氨基苯基)乙酸；-4-(氨基苯基)乙酸；/^-Nilfi"'.(>HIHi-3-氨基-2-氧代-1-哌啶-乙酸；-3(R)-3-氨基-2-氧代哌啶-乙酸；-3OO-3-氨基_2_氧代-I-氮雜萆乙酸；-3(R)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷乙酸；以及-3-氨基-N-I-羧甲基-2，3,4,5_四氫_1Η_[1]-苯并氮雜罩_2_酮。示例性實施方案28實施方案1的肽，其中肽含有苯丙氨酸類似物，其選自-色氨酸；-酪氨酸；-2-氨基苯丙氨酸；-3-氨基苯丙氨酸；-4-氨基苯丙氨酸；-五氟苯丙氨酸；-2-吡啶基丙氨酸；-3-吡啶基丙氨酸；-4-硝基苯丙氨酸；-1-萘基丙氨酸；-高苯丙氨酸；-苯基甘氨酸；-2-甲基苯丙氨酸；-3-甲基苯丙氨酸；-4-甲基苯丙氨酸；-2-氯苯丙氨酸；-3-氯苯丙氨酸；-4-氯苯丙氨酸；-3，3-二苯基丙氨酸；-4,4'_聯(lián)苯丙氨酸；-4-叔-丁基苯丙氨酸；-環(huán)己基丙氨酸；-(4-氨基乙?；?苯丙氨酸；-L-I，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸；-D-β-甲基苯丙氨酸；以及-L-β-甲基苯丙氨酸。示例性實施方案29實施方案1的肽，其中肽含有至少一個酪氨酸類似物，其選自-苯丙氨酸；-4-氨基苯丙氨酸；-4-甲氧苯丙氨酸；-五氟苯丙氨酸；-2-吡啶基丙氨酸；-3-吡啶基丙氨酸；-4-吡啶基丙氨酸；-4-硝基苯丙氨酸；-2-硝基酪氨酸；以及-4-氟苯丙氨酸。示例性實施方案30實施方案1的肽，其中X9和Xltl合在一起時，形成二肽類似物，其選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>示例性實施方案31實施方案1的肽，其中肽含有至少一個組氨酸類似物，其選自-2，4-二氨基丁酸；-噻唑基丙氨酸；-2，3-二氨基丙酸；-脒基丙氨酸；-2-吡啶基丙氨酸；-3-吡啶基丙氨酸；-4-吡啶基丙氨酸；-噻吩基丙氨酸；-鳥氨酸；-賴氨酸；-精氨酸；-4-脒基苯丙氨酸；-1-甲基組氨酸；-3-甲基組氨酸；-1，3-二甲基組氨酸；-4-氨基苯丙氨酸；-2-吡咯烷基丙氨酸；-3-哌啶基丙氨酸；以及-4-哌啶基丙氨酸。示例性實施方案32實施方案1的肽，其中Xltl選自中性疏水性氨基酸和其類似物。在其他的實施方案中，Xltl是中性氨基酸或其類似物。在還有其他的實施方案中，Xiq是疏水性氨基酸或其類似物。在進一步的實施方案中，Xltl是N-甲基化疏水性氨基酸或其類似物。示例性實施方案33實施方案1的肽，其中X11是酪氨酸或其類似物。示例性實施方案34實施方案1的肽，其中X12是脯氨酸或其類似物。示例性實施方案35實施方案1的肽，其中X13是酪氨酸或其類似物。示例性實施方案36實施方案1的肽，其中X14不存在。示例性實施方案37實施方案1的肽，其中X15是氨基基團。示例性實施方案38實施方案1的肽，其中肽是式II、III和IV中的任一個的肽并且η是1。示例性實施方案39實施方案1的肽，其中肽是式II、III和IV中的任一個的肽并且η是2。示例性實施方案40實施方案1的肽，其中肽具有序列(V)A-X0-X1-Phe-X3-X4-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-X12-X13-X14-B,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>示例性實施方案41實施方案40的肽，其中\(zhòng)不存在。示例性實施方案42實施方案40的肽，其中X1J4和/或X12是衍生的氨基酸或其類似物。示例性實施方案43實施方案40的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>(X)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(XI)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>,或(XII)A-Xl-Phe-Pen-XirGly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-X12-CysX|-Phe-Pen-X4-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-X|2-C^s-B其中水平方括弧指示橋連的存在。技術(shù)人員將理解的是，在式XI中，當C端半胱氨酸殘基(X13)的側(cè)鏈與青霉胺(X3)形成橋連時，Z通過羧基末端連接每個肽單體。相似地，技術(shù)人員將理解的是，在式XII中，當C端半胱氨酸殘基(X13)的側(cè)鏈與青霉胺(X3)形成橋連時，Z通過羧基末端連接一個肽單體，并且Z通過X1的氨基末端或側(cè)鏈與其他肽單體連接。示例性實施方案44:實施方案1的肽，其中親水性聚合物選自聚乙二醇、聚丙二醇、葡聚糖；纖維素、甲基纖維素、羥基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基烴基淀粉、聚乙烯醇、聚(N-乙烯吡咯烷酮)、泊洛沙姆和聚乙二醇共聚物。示例性實施方案45實施方案44的肽，其中親水性聚合物是聚乙二醇(PEG)。示例性實施方案46實施方案45的肽，其中PEG是直鏈PEG。示例性實施方案47實施方案45的肽，其中PEG是支鏈PEG。示例性實施方案48實施方案45的肽，其中PEG具有10_60kDa范圍內(nèi)的平均分子量。示例性實施方案49實施方案45的肽，其中PEG具有10_40kDa范圍內(nèi)的平均分子量。示例性實施方案50實施方案45的肽，其中PEG具有約20kDa的分子量。示例性實施方案51實施方案45的肽，其中PEG具有約30kDa的分子量。示例性實施方案52實施方案1的肽，其中肽特異性結(jié)合人類FcRn。示例性實施方案53實施方案52的肽，其中肽對人類FcRn的親和力在50fM至ImM范圍內(nèi)。示例性實施方案54實施方案53的肽，其中肽對人類FcRn的親和力在500fM至ΙΟΟμΜ范圍內(nèi)。示例性實施方案55實施方案54的肽，其中肽對人類FcRn的親和力在5ρΜ至ΙμΜ范圍內(nèi)。示例性實施方案56實施方案52的肽，其中肽抑制人類FcRn與人類IgG的結(jié)合并且具有從50fM至ImM范圍內(nèi)的IC5tl。示例性實施方案57實施方案56的肽，其中肽具有從IpM至IOOnM范圍內(nèi)的IC5(1。示例性實施方案58實施方案56的肽，其中肽具有從IOpM至IOnM范圍內(nèi)的IC5(1。示例性實施方案59實施方案1的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>示例性實施方案60實施方案59的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>其中水平方括弧指示橋連的存在。示例性實施方案61實施方案60的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>示例性實施方案62實施方案59的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>示例性實施方案63實施方案1的肽，其中B是Q。示例性實施方案64實施方案63的肽，其中B是-(W)m-(CH2)n-NH2,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中W，如果存在，是-(CH2)p、-(CH2-CH2)p、-(CH2-O)p-或^并且m是1、2、3、4或5，n是1、2或3并且ρ是1、2、3、4、5。示例性實施方案65實施方案64的肽，其中X3與X13形成橋連。示例性實施方案66實施方案65的肽，其中橋連是側(cè)鏈與側(cè)鏈橋連。示例性實施方案67實施方案64的肽，其中X6是組氨酸或其類似物。示例性實施方案68實施方案64的肽，其中X8和X9中的至少一個選自-甘氨酸；-D-氨基酸；-α-氨基異丁酸；以及-肌氨酸。示例性實施方案69實施方案64的肽，其中X14不存在。示例性實施方案70實施方案64的肽，其中η是1。示例性實施方案71實施方案64的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>示例性實施方案72實施方案71的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>括弧指示橋連的存在。示例性實施方案73實施方案64的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>示例性實施方案74實施方案73的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>平方括弧指示橋連的存在。示例性實施方案75實施方案74的肽，其中肽具有序列，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>其中B是-(W)m_(CH2)r"NH2,其中W，如果存在，是_(CH2)p、-(CH2-CH2)p、-(CH2-O)rΗ_ιp-或"^""ai2O廣，并且其中m是1、2、3、4或5，r是1、2或3并且P是1、2、3、4、5。CH3JpB.衍生的肽的合成衍生的肽可根據(jù)本領(lǐng)域中已知的任何方法來制備。制備用聚乙二醇衍生的肽(“聚乙二醇化的”肽)的示例性方法在下文描述?？膳c本文描述的聚合物的任一種一起來使用這些方法。因此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，整個公開中任何使用術(shù)語“聚乙二醇化(pegylate)”、“聚乙二醇化(pegylation)”和“聚乙二醇化的(pegylated)”的時候，任何親水性聚合物可代替聚乙二醇而容易地被取代。(1)未聚乙二醇化肽的聚乙二醇化在一些實施方案中，本文描述的肽可被合成為相應(yīng)的未聚乙二醇化的肽并且隨后被聚乙二醇化。a.未聚乙二醇化肽的合成可按照實施例中展示的程序或通過其他已知的合成方法例如固相肽合成法來合成本發(fā)明的肽。參見例如Abelson等，編輯，MethodsinEnzymology(酶學(xué)方法)，第289卷Sollid-PhasePeptideSynthesis(固相肽合成)(1997)；Chan和White，編輯，F(xiàn)mocSolidPhasePeptideSynthesis:APracticalApproach(Fmoc固相妝合成實用方法)Oxford,UniversityPressInc.,NewYork(2000)；Benoiton,ChemistryofPeptideSynthesis(月太合成化學(xué))，CRC(2005)；Bodanszky,PrinciplesofPeptideSynthesis(月太合成法則)，第2版，Springer-Verlag,NewYork(1993)；Stewart和Young，SolidPhasePeptideSynthesis(固相肽合成)，第2版，PieroeChemicalCo.,Rockford,111.(1984)。全部由編碼氨基酸組成的本發(fā)明的肽可使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)在細胞中重組合成。參見例如Sambrook等，MolecularCloningALaboratoryManual(分子克隆實驗室手冊)，ColdSpringHarborLaboratory,N.Y.(1989)禾口Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology(最新分子生物學(xué)實驗方法匯編)，GreenePublishingAssociates和WileyInterscience,N.Y.(1989)?？蛇x擇地，可使用合成和重組方法的組合來合成本發(fā)明的肽。b.聚乙二醇化可根據(jù)本領(lǐng)域中已知的聚乙二醇化反應(yīng)中的任一種進行聚乙二醇化。制備聚乙二醇化的蛋白產(chǎn)物的方法通常包括(a)將多肽與含有第一活性基團(例如諸如活性酯、醛、胺、氨氧、胼、酰胼、othiol、馬來酰亞胺和α-鹵代?；绲獯阴；?的PEG在一定條件下進行反應(yīng)，借由所述條件，通常含有至少一個第二活性基團的本發(fā)明的肽與一個或多個PEG基團相連；以及(b)獲得反應(yīng)產(chǎn)物。反應(yīng)條件可選自聚乙二醇化領(lǐng)域中已知的那些或隨后開發(fā)的那些條件中的任一種。通常地，選擇不會降解本發(fā)明的抗FcRn肽的反應(yīng)條件(包括例如溫度、溶劑和pH)。在其中有待聚乙二醇化的肽含有不止一個可被聚乙二醇化的第二活性基團的實施方案中，可通過在聚乙二醇化反應(yīng)期間使用適當?shù)腜EG化學(xué)計量而將這些基團中的一些或全部聚乙二醇化。在含有兩個C-端胺的肽二聚體的示例性說明的實例中，取決于所使用的PEG化學(xué)計量，兩個胺都可被聚乙二醇化或僅一個胺可被聚乙二醇化。?；饔?。如本文所用的，?；饔妙A(yù)期非限制件地包括下列類型的本發(fā)明的肽和PEG之間的連接酰胺、氨基甲酸酯、氨基甲酸乙酯以及諸如此類。參見例如Chamow，BioconjugateChem.，5133-140(1994)。在第一個實例中，含有胺的肽(其中胺基團是例如側(cè)鏈胺基團或N-端胺基團)可選擇性地與具有活性酯基團的PEG試劑(包括例如PEG琥珀酰亞胺酯和PEG對硝基苯基酯如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightMEGC-30TS和SunbrightMENP-30T號)反應(yīng)以產(chǎn)生酰胺鍵?？蛇x擇地，肽可含有氨氧、胼或酰胼基團。在第二個實例中，肽羧酸基團(包括例如側(cè)鏈和C-端羧酸基團)可被各種試劑(包括例如1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺+EDC)活化?；罨碾闹罂膳c含有胺的PEG試劑(包括例如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightMEPA-30T號)偶聯(lián)。烴基化和還原件烴基化。肽-PEG軛合物可通過將胺(或氨氧、胼或酰胼)和醛進行反應(yīng)的烴基化來制備。在包括例如氨氧、胼或酰胼反應(yīng)的一些實施方案中，烴基化產(chǎn)物沒有被還原。在其他的實施方案中，肽-PEG軛合物可通過將胺(或氨氧、胼或酰胼)和醛在適當?shù)倪€原劑存在的條件下反應(yīng)或通過將胺(或氨氧、胼或酰胼)和醛反應(yīng)然后用適當?shù)倪€原劑還原以產(chǎn)生穩(wěn)定的碳-氮單鍵的還原性烴基化來制備，例如，如實施例12、14、16、27-29和31-34中所描述的。在第一個實例中，含有側(cè)鏈或自由N-端胺基團的肽可與含有醛基團的PEG偶聯(lián)。PEG醛是可商業(yè)獲得的(包括，例如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-300AL號)。另一種示例性PEG醛是水穩(wěn)定的聚乙二醇丙醛或其單C1-Cltl烴氧或芳氧衍生物。參見例如美國專利第5，252，714號。通常地，含有醛基團的PEG可具有單一的活性醛基團。在第二個實例中，含有羥基胺、胼或酰胼基團的肽可容易地與PEG醛反應(yīng)。(含有氨氧、胼或酰胼基團的肽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準方法來制備，例如實施例39中描述的那些)。在一些實施方案中，所得到的產(chǎn)物被還原。在其他的實施方案中，所得的產(chǎn)物沒有被還原。在第三個實例中，肽醛與含有胺的PEG試劑(例如諸如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第ΜΕΡΑ30T號)反應(yīng)。肽醛可容易地例如如本文實施例12中所描述的或通過引入含有醛的氨基酸來產(chǎn)生。硫代烴基化。含有游離的硫醇官能團(例如來自半胱氨酸氨基酸殘基)的肽可容易地與用親電子試劑例如諸如馬來酰亞胺(例如諸如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第ME-300MA號)或α-鹵代?；?包括含有碘代乙酰基的鹵代乙?；?官能化的PEG進行反應(yīng)以形成硫醚鍵?？蛇x擇地，含有親電子官能團(包括例如馬來酰亞胺，其可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準方法制備)的肽可與含有硫醇的PEG基團(例如諸如NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第ME-300SH號)反應(yīng)。適合的親電子官能團是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。其他軛合化學(xué)。有許多本領(lǐng)域技術(shù)人員可得的PEG連接方法并且被描述于例如EP0401384；Malikφ,Exp.HematoL,201028-1035(1992)；Francis,FocusonGrowthFactors,3(2):4_10(1992)；EP0154316；EP0401384；WO92/16221和WO95/34326中。對于PEG-肽軛合來說其他可能的方法包括例如疊氮化合物_炔化學(xué)的使用(例如，如J.Am.Chem.Soc.125=3192-3193(2003)中描述的)。在某些實施方案中，PEG硫酯可與具有N-端半胱氨酸殘基的肽反應(yīng)，例如如Dawson和Kent，Anna.Rev.Viochem.69=923(2000)中所描述的。(2)聚乙二醇化位點如下文所描述的，本文描述的抗FcRn肽可在肽的任何適合的位置被聚乙二醇化。在一些實施方案中，抗FcRn肽可在多個位置被聚乙二醇化。N-端。在N-端具有胺基團的肽可在N-端被聚乙二醇化，例如通過如上所述的任何適合的軛合方法。N-端活件基團的加成。在一㈣實施方案中，可將一個或多個活件基團加至本發(fā)明的抗FcRn肽的N-端。在一些實施方案中，活性基團將是氨基酸側(cè)鏈。例如，乙?；用钡馁嚢彼釟埢杀患又罭-端，產(chǎn)生可被聚乙二醇化的側(cè)鏈胺基團。在其他的實施方案中，通過將具有含有胺的側(cè)鏈的氨基酸加至N-端可引入多個聚乙二醇化位點。例如，賴氨酸殘基可被加至肽第285號的游離胺以產(chǎn)生用于聚乙二醇化的兩個可得的胺位點(賴氨酸α-和ε-氨基基團)。如圖18中所示例性說明的，含有賴氨酸的產(chǎn)物與適當?shù)鼗罨腜EG(例如，下文所描述的含醛PEG)的反應(yīng)可提供每個肽具有2個PEG部分的PEG-肽軛合物。N-端連接體?？捎煤欣鐚嵤├?2、13和15中所描述的活性基團的N-端連接體將單體的肽多聚化。例如，肽第100、119、120、121、160、199和200號具有含可以被聚乙二醇化的羧酸基團的N-端連接體而肽第285和286號具有含可被聚乙二醇化的胺基團的N-端連接體。C-端。在C-端具有羧酸基團的肽可在C-端被聚乙二醇化，例如通過如上所述的任何適合的軛合方法。在其他的實施方案中，肽可在含有胺的樹脂(例如諸如1，2_二氨基乙烷三苯甲基PS，N0Vabi0Chem產(chǎn)品目錄第01-64-0081號)上合成以產(chǎn)生C-端胺基團。C-端活性基團的加成。在一些實施方案中，可將用于聚乙二醇化的一個或多個活性基團加至本發(fā)明的抗FcRn肽的C-端。在一些實施方案中，活性基團將是氨基酸側(cè)鏈。例如，具有C-端酰胺基團的賴氨酸殘基可被加至C-端，產(chǎn)生可被聚乙二醇化的側(cè)鏈胺基團。在其他的實施方案中，通過將具有含胺的側(cè)鏈的氨基酸加至C-端可引入多個聚乙二醇化位點。例如，谷氨酸殘基可被加至C-端以產(chǎn)生用于聚乙二醇化的兩個可得的羧酸位點(谷氨酸α-和Y-羧基基團)。基于如實施例7中所描述的肽平截研究，將活性基團加至C-端預(yù)計大致上不會阻礙抗FcRn肽的活性。C-端連接體。可用含有例如實施例12中所描述的活性基團的C-端連接體將單體的肽多聚化。例如，肽第278號具有含有可以被聚乙二醇化的胺基團的C-端連接體。側(cè)鏈。在一些實施方案中，活性基團可被定位在例如氨基酸側(cè)鏈(包括例如，含有側(cè)鏈胺的氨基酸，諸如例如2，3-二氨基丙酸、2，4-二氨基丁酸、鳥氨酸和賴氨酸；含有側(cè)鏈羧酸的氨基酸，諸如例如天冬氨酸和谷氨酸；以及含有側(cè)鏈硫醇基團的氨基酸，諸如例如半胱氨酸和青霉胺)中。在某些實施方案中，本文描述的肽含有可被聚乙二醇化的氨基酸側(cè)鏈。在其他的實施方案中，適合的聚乙二醇化位點可通過用含有所期望的活性基團的氨基酸代替給定序列的一個或多個氨基酸來獲得。例如，因為實施例7中描述的肽丙氨酸掃描研究顯示肽第501號的精氨酸_2、蘇氨酸-5和脯氨酸-13殘基可被丙氨酸取代而沒有體外效力上的顯著損失，因此可能那些氨基酸中的1個、2個或所有也可被含有期望的活性基團的氨基酸所代替而沒有體外效力上的顯著損失。在一些實施方案中，肽第1號的精氨酸_2、蘇氨酸_5和脯氨酸-13殘基可被例如含有側(cè)鏈胺的氨基酸諸如例如2，3-二氨基丙酸、2，4-二氨基丁酸、鳥氨酸和賴氨酸；含有側(cè)鏈羧酸的氨基酸諸如例如天冬氨酸和谷氨酸；以及含有側(cè)鏈硫醇基團的氨基酸諸如例如半胱氨酸)所代替。在一些實施方案中，這種取代可產(chǎn)生與原始肽相比在體外效力上沒有損失的或具有通過例如如實施例4中所描述的IgG-肽競爭、Biacore或KinExA(動力排除測定)所測量的原始肽的體外效力的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、75、80、85、90、95、97、98或99%的肽。(3)聚乙二醇化結(jié)構(gòu)單元的引入在其他的實施方案中，本文描述的肽可通過引入含有PEG部分的氨基酸結(jié)構(gòu)單元來合成。C.肽軛合物在一些實施方案中，本發(fā)明的肽作為包括例如共價和非共價軛合物的軛合物而被提供，其包括肽和可以是例如蛋白、肽、小分子、聚合物或核酸的第二分子。在一些實施方案中，第二分子可賦予本文所描述的肽所期望的特性例如諸如延長的半衰期、穩(wěn)定性和/或增強的運輸。在一些實施方案中，如通過例如實施例4中所示的IgG競爭ELISA所測量的，第二分子可增強本發(fā)明的肽的效力。在一些實施方案中，如通過例如在食蟹猴中血清IgG水平的整體降低或通過對比獲得特定治療效果所需的施用軛合的肽的頻率所測量的，與未軛合的肽相比，第二分子可增強本發(fā)明的肽的效力。在進一步的實施方案中，例如，第二分子可產(chǎn)生肽對特定細胞、器官和/或組織的靶向。在一些實施方案中，軛合物可具有增強的阻斷IgG-FcRn的能力。在其他的實施方案中，軛合物可防止肽降解并因此增強肽的體內(nèi)效力。在一些實施方案中，軛合物可具有增加的循環(huán)半衰期。在進一步的實施方案中，這種軛合物在結(jié)合并中和其他分子上比本發(fā)明的肽更有效。在其他的實施方案中，軛合物可有助于純化。在一些實施方案中，本發(fā)明的軛合的肽的第二分子可以是IgG的Fc結(jié)構(gòu)域或其片段。IgG可以是例如人類IgG，例如人類IgGl、IgG2或IgG4。在一些實施方案中，IgG是變化的或突變的IgG，例如諸如Pro331SerFcy2變體、Leu235AlaFcy4變體、Leu234ValFcyl變體、Leu235AlaFcy1變體或Pro331SerFcy1變體。在一些實施方案中，第二分子可以是含有例如鉸鏈、CH2和/或CH3結(jié)構(gòu)域的IgG片段。在一些實施方案中，本發(fā)明的軛合的肽的第二分子可以是白蛋白、白蛋白片段或結(jié)合白蛋白的分子(例如諸如肽、蛋白和分子，其包括例如與白蛋白非共價結(jié)合的長的烴基鏈)。這種軛合物可具有較長的體內(nèi)半衰期并且因此可能需要較少的肽劑量以達到所期望的治療作用。參見例如Chuang等，Pharm.Res.19=569(2002)；美國專利第6，685，179號。具有蛋白、肽、小分子、聚合物或核酸的本發(fā)明的肽的軛合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的或本文描述的軛合化學(xué)中的任一種來制備。例如，在一些實施方案中，如例如Zobel等，Bioorg.Med.Chem.Lett.13:1513(2003)，可通過與白蛋白非共價結(jié)合的疏水性芳香族加帽試劑將肽加帽。在其他的實施方案中，如例如Kim等，Diabetes52:751(2003)，被硫醇活性基團修飾的肽可用于與游離的半胱氨酸殘基的共價軛合。在進一步的實施方案中，含有醛的本發(fā)明的肽可通過如例如Kinstler，Adv.DrugDel.Rev.54471(2002)中的還原性烴基化反應(yīng)而與第二分子反應(yīng)?？蛇x擇地，當?shù)诙肿邮蔷哂蠳-端半胱氨酸的蛋白或肽時，如例如Dawson和Kent，Anna.Rev.Biochem.69923(2000)中所描述，肽硫醚可與第二分子反應(yīng)以形成共價軛合物。在所有的氨基酸都是編碼氨基酸的某些實施方案中，肽_蛋白和肽-肽軛合物還可通過在適當?shù)乃拗骷毎斜磉_來制備。D.示例性肽軛合物示例性實施方案76含有實施方案1至75中的任一個的肽和第二分子的軛合物。示例性實施方案77實施方案76的軛合物，其中第二分子選自白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和免疫球蛋白的Fc部分。示例性實施方案78實施方案77的軛合物，其中第二分子是免疫球蛋白的Fc部分。示例性實施方案79實施方案78的軛合物，其中免疫球蛋白選自IgG1,IgG2,IgG3和IgG4。III.其它肽在一些實施方案中，本發(fā)明的肽沒有被衍生。這些肽的示例性的實施方案展示于下文。示例性實施方案A具有下列序列的肽(I)A-X0-X1-X2-X3-X4-Gly-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-B,(II)個「XQ-X]_乂2-乂3_又4_01乂10_又11-X113_乂14_BζρXQ-X]-X2~X3"X4~Gly-X^-X*7-Xg-X9"Xjο-X]]-X]2~X13~X14·Β1IJnA,(III)fA-XQ-Xj-X2"X3~X4-Gly-X5-X7-X3-X9"XIQ-X]I-XJ2-X]3~Xj4、1\ZA-Xq-Xι-X2-X3"X4-Gly-Xg-X-7-Xg-X9-X11-X12-X114IJnB戔(IV)？,1IlnIa,其中-Α,如果存在，是氫、酰基或氨基保護基團；-B，如果存在，含有Q或者是氨基基團、羥基基團或羧基保護基團；_Q，如果存在，是胺基團(其可以是中性的或帶正電的)，其中胺基團通過亞烴基基團連接于肽，其中亞烴基基團包括但不限于乙烯、正丙烯、正丁烯、正戊烯和正己烯；或通過亞烴基基團和亞烴氧基亞單元的組合連接于肽，其中亞烴氧基亞單元包括但不限于-(CH2-CH2-O)p-，其中ρ是1、2、3、4或5。Q的非限制性實例包括-CH2-CH2-NH2,-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2,-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-NH2，-CH2-CH2-O-CH2-CH2-NH2,-(CH2-CH2-O)2-CH2_CH2-NH2，禾口-(CH2-CH2-O)3-CH2-CH2_NH2；-X0,如果存在，是氨基酸或其類似物或是含2-15個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X1,如果存在，是氨基酸或其類似物；-X2,如果存在，是氨基酸或其類似物；-X3是能夠與X1(l、X12或X13形成橋連的氨基酸或其類似物；-X4是氨基酸或其類似物或是含2或4個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X6是堿性氨基酸或其類似物、芳香族氨基酸或其類似物或堿性芳香族氨基酸或其類似物；-X7是苯丙氨酸或其類似物；-X8和X9各自獨立地選自甘氨酸或其類似物、肌氨酸或其類似物、天冬氨酸或其類似物、D-氨基酸或其類似物和α-氨基異丁酸或其類似物，或者-X8,當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X10是氨基酸或其類似物，或者-X10,當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X11是酪氨酸或其類似物；-X12是氨基酸或其類似物；-X13,如果存在，是氨基酸或其類似物；-X14,如果存在，是氨基酸或其類似物或者是含2-15個氨基酸的肽或其類似物；-Z是連接體，其連接每一個肽單體，通過-A；-B；-X0的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl存在；至X1的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl不存在；至X2的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xtl和X1都不存在；或至X3的氨基末端或側(cè)鏈，如果Xo、X1和X2都不存在；或-X14的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14存在；至X13的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14不存在；或至X12的羧基末端或側(cè)鏈，如果X13和X14都不存在；-m是選自1、2和3的整數(shù)；并且-η是選自1、2和3的整數(shù)；其中-獨立地選擇每個A、B、X0,X”X2、X3>X4>X6>X7>X8>X9>X10>Xn>X12>X13和X14；并且-肽的每個單體長度上在從10至50個氨基酸的范圍內(nèi)。技術(shù)人員將理解的是，如果Z通過Xtl的側(cè)鏈與肽連接，那么A必然存在。相似地，如果Z連接至X14的側(cè)鏈，那么B必然存在。示例性實施方案B實施方案A的肽，其中B是Q。示例性實施方案C實施方案B的肽，其中B是-(W)m-(CH2)r-NH2，其中W，如果存在，rΗ_ι是-(CH2)p、-(CH2-CH2)p、-(CH2-O)p-或一_<:Η2σ一并且其中m是1、2、3、4或5，r是1、2Ich3JP,或3并且ρ是1、2、3、4、5。示例性實施方案D實施方案C的肽，其中X3與X13形成橋連。示例性實施方案E實施方案D的肽，其中橋連是側(cè)鏈與側(cè)鏈橋連。示例性實施方案F實施方案B的肽，其中X6是組氨酸或其類似物。示例性實施方案G實施方案B的肽，其中X8和X9中的至少一個選自-甘氨酸；-D-氨基酸；-α-氨基異丁酸；以及-肌氨酸。示例性實施方案H實施方案B的肽，其中X14不存在。示例性實施方案I實施方案B的肽，其中η是1。示例性實施方案J實施方案B的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>。示例性實施方案K實施方案J的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>示橋連的存在。示例性實施方案L實施方案B的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>示例性實施方案Μ:實施方案L的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>其中水平方括弧指示橋連的存在。示例性實施方案N實施方案M的肽，其中肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>其中B是-W-CH2-CH2-NH2，其中W，如果存在，是-(CH2)ρ、-(CH2-CH2)ρ、-(CH2-O)ρ-或"ttCHj°t"其中P是1、2、3、4、5。ICH3Jp,示例性實施方案O實施方案M的肽，其中W不存在。示例性實施方案P實施方案M的肽，其中W是-(CH2-CH2)_。示例性實施方案Q實施方案M的肽，其中W是-(CH2-CH2-O)p-并且ρ是1。示例性實施方案R實施方案M的肽，其中W是-(CH2-CH2-O)p-并且ρ是2。IV.用于篩選和發(fā)現(xiàn)結(jié)合FcRn并阻斷FcRn-IgG相互作用的肽的方法可使用噬菌體展示文庫鑒定與FcRn結(jié)合的肽。噬菌體展示文庫可如Smith和Petrenko,Chem.Rev.87391(1997)中所描述容易地產(chǎn)生?？蛇x擇地，噬菌體展示文庫可獲得自商業(yè)來源，例如諸如DyaxCorp.(Cambridge，MA)。取決于篩選的條件，可用各種不同的特性來鑒定噬菌體。為了鑒定與FcRn結(jié)合(并由此與IgG競爭FcRn結(jié)合)的肽，可以為與FcRn的結(jié)合并且通過與IgG的競爭來篩選噬菌體文庫。任選地，可通過將噬菌體文庫與一種或多種可選的受體孵育而從文庫中排除與可選的受體結(jié)合的肽。因此，結(jié)合可選的受體的噬菌體可從所期望的噬菌體庫中減除。通過將可與FcRn結(jié)合的噬菌體克隆的DNA測序，可鑒定能夠與FcRn結(jié)合并抑制IgG-FcRn結(jié)合的肽。鑒定結(jié)合FcRn的肽的其他方法的實例包括mRNA展示(Roberts和Szostak，Proc.Nat.Acad.SciUSA9412297(1997))，基于細胞的展示(Boder和Wittrup，Nat.Biotechnol.15553(1997))以及合成肽文庫(Lam，Nature35482(1991)；Houghten等，Nature354:84(1991))。V.用于測定與FcRn結(jié)合并阻斷IgG=FcRn相互作用的肽的方法許多方法可被用于評估肽或肽擬物結(jié)合FcRn并阻斷FcRn:IgG相互作用的能力。例如，表面等離子體共振(SRP)是本領(lǐng)域中熟知的評估結(jié)合事件的方法(BiacoreAB,Uppsala，瑞典)。使用這一方法，結(jié)合配偶體中的一種(FcRn或IgG)被固定在SI3R感應(yīng)芯片上并且同時其他的結(jié)合配偶體通過芯片，監(jiān)測所述芯片的所得的信號。在相同的實驗中，作為IgG和FcRn之間的相互作用的競爭劑的有待被評估的肽通過芯片。信號的任何下降可被解釋為肽阻礙FcRn和IgG之間相互作用的能力的量度。用于測定IgG=FcRn相互作用的可能的肽抑制劑的其他方法也是本領(lǐng)域中熟知的。一個這樣的方法是在96孔板中的IgG競爭測定。在這一實例測定中，96孔板上的可溶的人類FcRn被暴露于IgG和測試肽。殘留的結(jié)合的IgG，如由抗IgG抗體和標準ELISA可視化試劑所檢測的，提供了肽阻斷FcRn-IgG相互作用的能力的量度。肽阻斷IgG-FcRn結(jié)合的能力還可在用編碼人類FcRn的DNA轉(zhuǎn)染的細胞上進行以開發(fā)出能夠在它的細胞表面表達人類FcRn的細胞系。當IgG-FcRn結(jié)合的肽抑制劑與熒光標記的IgG分子競爭時，可應(yīng)用結(jié)合競爭測定?？墒褂美鐦藴实臒晒饣罨毎诌x器(FACS)來測量與細胞結(jié)合的殘留的IgG的水平。VI.免疫調(diào)節(jié)肽的制藥用途本發(fā)明的肽結(jié)合FcRn并且與沒有本發(fā)明的肽的情況下IgG的分解代謝相比，抑制IgG恒定區(qū)的Fc部分與FcRn的結(jié)合以產(chǎn)生增加的IgG分解代謝。在示例性的實施方案中，IgG恒定區(qū)來自IgGUIgG2、IgG3或IgG4亞類。Α.藥物組合物的制備本發(fā)明的肽可被用于治療其中升高的IgG的分解代謝是所期望的任何疾病或病況的藥物(藥物組合物)的制造。因此，本發(fā)明提供藥物組合物，其包括本發(fā)明的至少一種肽。這些組合物通常將包括藥學(xué)上可接受的運載體(carrier)或賦形劑。適合的藥物運載體的實例描述于E.W.Martin的Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓藥學(xué))中。賦形劑的實例可包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇和類似物。組合物還可含有PH緩沖試劑和潤濕劑或乳化劑?？膳渲票景l(fā)明的藥物組合物以通過任何合理的施用途徑施用于對其有需要的患者，所述施用途徑包括例如靜脈內(nèi)地、皮下地、肌肉內(nèi)地、口服地、舌下地、經(jīng)頰地、舌下地、經(jīng)鼻地、經(jīng)直腸地、經(jīng)陰道地或通過吸入。在一些實施方案中，肽可被埋入或連接至允許肽的緩慢釋放的生物聚合物固相支持體中。對于口服施用來說，藥物組合物可采用由常規(guī)方法制備的藥片或膠囊的形式。組合物還可被制備為液體，例如為糖漿或懸浮液。液體可包括懸浮劑(例如山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化的可食用的脂肪)、乳化劑(卵磷脂或阿拉伯樹膠)、非水媒介物(例如杏仁油、油酯、乙醇或分餾的蔬菜油)以及防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或者山梨酸)。制劑還可包括調(diào)味劑、染色劑和甜味劑?？蛇x擇地，組合物可以作為用水或另一種適合的媒介物構(gòu)成的干燥產(chǎn)物而存在。對于經(jīng)頰和舌下施用來說，組合物可采用根據(jù)常規(guī)流程的藥片或錠劑的形式。對于經(jīng)由吸入的施用來說，根據(jù)本發(fā)明使用的化合物以來自具有適當?shù)耐七M劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其他適合的氣體)的加壓包或噴霧器(例如在PBS中)的氣溶膠噴霧的形式被方便地遞送。在加壓的氣溶膠的情況下，可通過提供一個遞送測定的量的閥門來確定劑量單位?？膳渲圃谖肫骰虼等肫髦惺褂玫哪z囊和藥筒(例如明膠的)，其含有化合物和適當?shù)姆勰┗|(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。為了經(jīng)由推注的胃腸外的施用(包括例如靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)施用)可配制藥物組合物。用于注射的制劑可以以單位劑型存在，例如在具有添加的防腐劑的安瓿或多劑量容器中。組合物可采用油或水媒介物中的懸浮液、溶液或乳液這樣的形式并含有配制劑例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?？蛇x擇地，活性成分可以是粉末形式的以便用適當?shù)拿浇槲锢缰T如無熱原的水構(gòu)成。藥物組合物還可為直腸施用而配制為栓劑或保留灌腸劑，例如含有傳統(tǒng)栓劑基質(zhì)諸如可可脂或其他甘油酯。B.示例性藥物組合物示例性實施方案80—種藥物組合物，其含有治療有效量的實施方案1至75或A至R中的任一種的肽或治療有效量的實施方案76至79中的任一種的軛合物。示例性實施方案81實施方案80的組合物，其中治療有效量的肽與用肽治療之前的人類IgG的血清濃度相比能夠降低人類IgG的血清濃度。示例性實施方案82實施方案81的組合物，其中人類IgG血清濃度上的降低為至少5%。示例性實施方案83實施方案82的組合物，其中人類IgG血清濃度上的降低為至少15%。示例性實施方案84實施方案83的組合物，其中人類IgG血清濃度上的降低為至少25%。C.治療方法本發(fā)明的藥物組合物對治療其中增加的IgG分解代謝是所期望的任何疾病和病況是有用的。因此，本發(fā)明提供治療由不適當?shù)乇磉_的IgG抗體或IgG的不期望的量或水平所表征的疾病的方法，其包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呤┯弥委熡行Я康谋景l(fā)明的肽。在一些實施方案中，本發(fā)明提供通過用本發(fā)明的肽調(diào)節(jié)IgG的血清濃度來治療疾病的方法。術(shù)語“治療(treat)”、“治療(treatment)”和治療(treating)”是指(1)疾病或病況的嚴重度或持續(xù)時間上的減少，(2)與疾病或病況相關(guān)的一種或多種癥狀的消除而不必須治愈疾病或病況，或者(3)疾病或病況的預(yù)防。在某些實施方案中，本發(fā)明的方法可被用于治療、預(yù)防或調(diào)節(jié)自身免疫性疾病，其包括但不限于局限性脫發(fā)、強直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫阿狄森病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性淋巴細胞增生綜合征、自身免疫性血小板減少性紫癜、貝切特病、大皰性類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉_皰疹樣皮炎、慢性疲勞免疫功能紊亂綜合征、慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病、疤痕類天皰瘡、CREST綜合征、冷凝集素病、克羅恩病、德戈斯病、皮肌炎、幼年型皮肌炎、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷沉淀球蛋白血癥、纖維肌痛_纖維肌炎、格雷夫斯病、格林_巴利綜合征、橋本氏甲狀腺炎、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜、IgA腎病、胰島素依賴型糖尿病、幼年型關(guān)節(jié)炎、扁平苔癬、狼瘡、梅尼爾病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、天皰瘡(包括例如尋常天皰瘡)、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征、風(fēng)濕，性多肌痛、多發(fā)性肌炎和皮肌炎、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、銀屑病、雷諾現(xiàn)象、萊特爾綜合征、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉狀瘤病、硬皮病、斯耶格倫綜合征、強直人綜合征、大動脈炎、顳動脈炎/巨細胞動脈炎、移植排斥、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病。在一些實施方案中，自身免疫性疾病選自大皰性類天皰瘡、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、重癥肌無力(MG)、天皰瘡(包括例如尋常天皰瘡)和移植排斥。在某些實施方案中，含有本發(fā)明的肽的組合物可與類固醇組合用于免疫抑制。本發(fā)明的肽可被用于治療炎性病癥，包括但不限于哮喘，潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸綜合征，過敏(包括過敏性鼻炎/鼻竇炎、皮膚過敏(包括例如風(fēng)疹(即蕁麻疹)、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎)、食物過敏、藥物過敏、昆蟲過敏)，肥大細胞增生病，關(guān)節(jié)炎(包括骨性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和脊椎關(guān)節(jié)病)。在一些實施方案中，本發(fā)明提供治療具有基于炎癥病因的心血管疾病(例如動脈硬化)、移植排斥和/或移植物抗宿主病(GVHD)的方法。本發(fā)明的其他實施方案包括通過施用本發(fā)明的肽來治療癌的方法。本發(fā)明的方法可用于治療或幫助調(diào)節(jié)涉及IgG的過量產(chǎn)生的癌，例如漿細胞癌，其包括多發(fā)性骨髓瘤。經(jīng)常地，在需要施用治療性蛋白的疾病或病況中，受治療者將產(chǎn)生針對治療性蛋白的抗體，其反過來阻止治療性蛋白的可得的預(yù)期的治療目的。因此，本發(fā)明的蛋白可與治療性蛋白組合使用以通過減少IgG的水平來增強治療性蛋白的益處，其中IgG抗體是治療性蛋白的生物利用率降低的原因。因此，本發(fā)明的一些實施方案提供了調(diào)節(jié)、治療或預(yù)防由對凝固因子的免疫應(yīng)答所導(dǎo)致的病況、疾病或病癥的方法，其包括將細胞與治療有效量的本文公開的肽中的任一種接觸，其中凝固因子選自纖維蛋白原、凝血酶原、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII或馮維勒布蘭德因子。這一方法可被用于調(diào)節(jié)或治療或預(yù)防患有例如血友病A或血友病B的患者中對凝固因子的免疫應(yīng)答。在一些實施方案中，本發(fā)明的肽阻斷因子VIII抑制劑。在其他的實施方案中，本方法可被用于調(diào)節(jié)或治療或預(yù)防對例如患有單純紅細胞再生障礙(PRCA)的患者中治療性促紅細胞生成素的免疫應(yīng)答。本發(fā)明進一步提供了調(diào)節(jié)、治療或預(yù)防對溶酶體水解酶的免疫反應(yīng)的方法，溶酶體水解酶的缺乏導(dǎo)致溶酶體貯存紊亂，溶酶體水解酶例如諸如α“半乳糖苷酶Α、酸性神經(jīng)酰胺酶、酸性α-L-巖藻糖苷酶、酸性β_葡萄糖苷酶(葡糖腦苷脂酶)、酸性β“半乳糖苷酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、半乳糖腦苷脂酶、酸性α-甘露糖苷酶、酸性β-甘露糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶Α、Ν_乙酰半乳糖胺-6-硫酸鹽硫酸酯酶、酸性β-半乳糖苷酶、酸性鞘磷脂酶、酸性α“葡萄糖苷酶、β_己糖胺酶B、類肝素N-硫酸酯酶、α-N-乙酰葡糖胺糖苷酶、乙酰輔酶Aα-氨基葡萄糖苷、N-乙酰轉(zhuǎn)移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸鹽硫酸酯酶、α-N-乙?；肴樘前访?、唾液酸酶、β-葡萄糖醛酸苷酶和β-己糖胺酶Α。在其他的實施方案中，本發(fā)明的方法可被用于治療、預(yù)防或調(diào)節(jié)對基因治療載體的免疫反應(yīng)。對用于疾病或病況的基因治療的成功完成的障礙還包括對由轉(zhuǎn)基因編碼的治療性蛋白以及可能對用于遞送轉(zhuǎn)基因的載體有特異性的抗體的發(fā)展。因此，在一些實施方案中，本文描述的肽可與基因治療組合施用以通過減少IgG的水平增加編碼的治療性蛋白的益處。這些方法在其中IgG抗體是基因治療載體或編碼的治療性蛋白的生物利用率減少的原因的情況中尤其有用。基因治療載體可以是例如，病毒載體諸如腺病毒和腺伴隨病毒?？墒褂没虔煼▉碇委煹募膊“ǖ幌抻谀倚岳w維化病、血友病、PRCA、肌肉萎縮癥或溶酶體貯存疾病諸如例如高歇病和法布里病。在本發(fā)明的方法中，本文描述的組合物可經(jīng)由任何適合的途徑例如諸如靜脈內(nèi)地、皮下地、肌肉內(nèi)地、口服地、舌下地、經(jīng)頰地、舌下地、經(jīng)鼻地、經(jīng)直腸地、經(jīng)陰道地或通過吸入施用。通常地，本文描述的組合物的適當?shù)膭┝繉⑷Q于有待治療的疾病或病況，疾病或病況的嚴重度，受治療者包括受治療者的性別、年齡和體重，期望的結(jié)果和所用的施用的特定途徑而變化。例如，劑量可在從0.lyg/kg至lOO.OOOyg/kg體重的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，劑量可在1-10，000μg/kg的范圍內(nèi)。在其他的實施方案中，劑量范圍可以是10-1，000μg/kg。在又進一步的實施方案中，劑量范圍是100-500μg/kg。本發(fā)明的組合物可被連續(xù)地或以特定的時間間隔施用。體外測定可被用于確定施用的最佳的劑量范圍和/或時間方案。其他有效的劑量可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過建立劑量響應(yīng)曲線的常規(guī)試驗而容易地確定，例如增加或減少IgG水平所必需的本發(fā)明的肽的量可從體內(nèi)實驗計算。技術(shù)人員將容易地理解，劑量水平可隨特定化合物的功能、癥狀的嚴重度和受治療者對副作用的易感性而變化，并且對于給定化合物來說優(yōu)選的劑量是可由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過各種方法容易地確定的。例如，取決于所使用的特定的劑，本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用有關(guān)獲得所期望的作用所必需的量的隨時可得的信息來計算適當?shù)膭┝俊.治療實施方案的示例性方法示例性實施方案85治療由不適當表達的IgG抗體或過量的IgG所表征的疾病的方法，其包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呤┯脤嵤┓桨?0至84中任一個的組合物。示例性實施方案86實施方案85的方法，其中疾病是對治療性蛋白的免疫反應(yīng)，治療性蛋白選自促紅細胞生成素、其缺乏導(dǎo)致溶酶體貯存病癥的溶酶體水解酶和凝固因子。示例性實施方案87實施方案86的方法，其中溶酶體水解酶選自由α-半乳糖苷酶Α、酸性神經(jīng)酰胺酶、酸性α-L-巖藻糖苷酶、酸性β-葡萄糖苷酶(葡糖腦苷脂酶)、酸性β“半乳糖苷酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、半乳糖腦苷脂酶、酸性α-甘露糖苷酶、酸性β-甘露糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶Α、Ν_乙酰半乳糖胺-6-硫酸鹽硫酸酯酶、酸性β-半乳糖苷酶、酸性鞘磷脂酶、酸性α“葡萄糖苷酶、β_己糖胺酶B、類肝素N-硫酸酯酶、α-N-乙酰葡糖胺糖苷酶、乙酰輔酶Aα-氨基葡萄糖苷、N-乙酰轉(zhuǎn)移酶、N-乙酰葡糖胺-6-硫酸鹽硫酸酯酶、α-N-乙?；肴樘前访浮⑼僖核崦?、β-葡萄糖醛酸苷酶和β-己糖胺酶A所組成的組。示例性實施方案88實施方案86的方法，其中凝固因子選自纖維蛋白原、凝血酶原、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XI、因子XII、因子XIII或馮維勒布蘭德因子。示例性實施方案89實施方案85的方法，其中IgG對基因治療載體是特異性的。示例性實施方案90實施方案89的方法，其中疾病選自炎性疾病、自身免疫性疾病禾口癌。示例性實施方案91實施方案90的方法，其中自身免疫性疾病選自局限性脫發(fā)、強直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫阿狄森病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性淋巴細胞增生綜合征、自身免疫性血小板減少性紫癜、貝切特病、大皰性類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉-皰疹樣皮炎、慢性疲勞免疫功能紊亂綜合征、慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病、疤痕類天皰瘡、CREST綜合征、冷凝集素病、克羅恩病、德戈斯病、皮肌炎、幼年型皮肌炎、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷沉淀球蛋白血癥、纖維肌痛-纖維肌炎、格雷夫斯病、格林-巴利綜合征、橋本氏甲狀腺炎、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜、IgA腎病、胰島素依賴型糖尿病、幼年型關(guān)節(jié)炎、扁平苔癬、狼瘡、梅尼爾病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、天皰瘡、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多發(fā)性肌炎和皮肌炎、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、銀屑病、雷諾現(xiàn)象、萊特爾綜合征、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肉狀瘤病、硬皮病、斯耶格倫綜合征、強直人綜合征、大動脈炎、顳動脈炎/巨細胞動脈炎、移植排斥、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病。示例性實施方案92實施方案91的方法，其中自身免疫性疾病選自大皰性類天皰瘡、特發(fā)性血小板減少性紫癜、重癥肌無力、天皰瘡和移植排斥。示例性實施方案93實施方案92的方法，其中天皰瘡是尋常天皰瘡。示例性實施方案94實施方案91的方法，其中疾病是炎性疾病。示例性實施方案95實施方案94的方法，其中炎性疾病選自哮喘，潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸綜合征，過敏(包括過敏性鼻炎/鼻竇炎、皮膚過敏、食物過敏、藥物過敏、昆蟲過敏)，肥大細胞增生病，關(guān)節(jié)炎(包括骨性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和脊椎關(guān)節(jié)病)。示例性實施方案96實施方案95的方法，其中皮膚過敏選自風(fēng)疹、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎。VII.FcRn的體內(nèi)成像和檢測本發(fā)明的肽可被用于檢測FcRn的測定。在一些實施方案中，測定是檢測本發(fā)明的肽與FcRn的結(jié)合的結(jié)合測定。在一些實施方案中，F(xiàn)cRn可被固定并且可將本文描述的一種或多種肽通過固定的FcRn。在可選擇的實施方案中，一種或多種肽可被固定并且可將FcRn通過固定的肽。FcRn或本發(fā)明的肽可被可檢測地標記。適合的標記物包括放射性同位素，其包括但不限于64Ciu67Ciu9°Y、mIn、124I、125I、131I、137CS、186Re、211At、212Bi、213Bi、223Ra、241Am、244Cm和99mTc-MDP；具有可檢測的產(chǎn)物的酶(例如熒光素酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和類似物)；熒光團(包括例如熒光素(其可作為例如異硫氰酸熒光素被連接)、若丹明、藻紅蛋白、藻青蛋白、別藻青蛋白、鄰苯二醛和熒光胺)；通過金屬螯合基團例如EDTA與本發(fā)明的肽連接的發(fā)射熒光金屬，例如152Eu或其他的鑭系元素；化學(xué)發(fā)光化合物，例如魯米諾、異魯米諾、theromatic吖啶酯(theromaticacridiniumester)、吖啶鹽、咪唑和草酸酯(oxalateesteror)；以及生物發(fā)光化合物，例如熒光素或水母發(fā)光蛋白(綠色熒光蛋白)，特異性結(jié)合的分子例如磁性顆粒、微球體、納米球、冷光量子點納米晶體以及類似物?？蛇x擇地，特異性結(jié)合對可被用于檢測FcRn的測定，包括例如被可檢測地標記的并且可放大信號的第二階段抗體或試劑。例如，本發(fā)明的肽可與生物素軛合，并加入作為第二階段試劑的辣根過氧化物酶軛合的鏈霉親和素。地高辛和抗地高辛提供另一種適合的結(jié)合對。在其他的實施方案中，第二階段抗體可與和在過氧化物酶存在的情況下發(fā)生顏色改變的底物組合的酶例如過氧化物酶軛合。本發(fā)明的肽和FcRn之間的結(jié)合不存在或存在可通過不同的方法來測定，其包括分離的細胞的流式細胞術(shù)、顯微術(shù)、放射線照相術(shù)、熒光測定法、顯色檢測、磷光顯影、膠片上化學(xué)發(fā)光的檢測和閃爍記數(shù)。這種試劑和使用它們的方法是本領(lǐng)域中熟知的。對于體內(nèi)診斷應(yīng)用，可至少部分地由FcRn的表達所表征的特定的組織或者甚至特異性細胞疾病可通過施用足量的被標記的本發(fā)明的肽來成像。適用于體內(nèi)組織成像的各種各樣的金屬離子已經(jīng)被測試并被臨床使用。對于使用放射性同位素的成像來說，下列表征通常是所期望的(a)對患者的低放射劑量；(b)高光子產(chǎn)量，其允許有待在短時間段內(nèi)進行的核醫(yī)療程序；(c)被足量生產(chǎn)的能力；(d)可接受的花費；(e)對于施用來說簡單的制備；以及(f)之后不需要隔離患者。這些表征通常被轉(zhuǎn)化為下列(a)對最關(guān)鍵的器官的放射暴露小于5rad;(b)在注入后幾小時內(nèi)可獲得單獨的圖像；(c)放射性同位素不會通過粒子的發(fā)射而衰減；(d)同位素可以是容易檢測的；以及(e)半衰其月小于四天(Lamb禾口Kramer,"CommercialProductionofRadioisotopesforNuclearMedicine，(用于核醫(yī)療的放射性同位素的商業(yè)生產(chǎn))”在RadiotracersForMedicalApplications(醫(yī)學(xué)應(yīng)用的放射性示蹤劑)中，第1卷，Rayudu(編輯)，CRCPress,Inc.，BocaRaton,pp.17-62)。在一些實施方案中，金屬是锝-99m(99mTc)。因此，本發(fā)明提供用于獲得受治療者內(nèi)部區(qū)域圖像的方法，其包括向受治療者施用有效量的組合物并且記錄獲得自放射性金屬的衰減的閃爍圖像，所述組合物包括含有金屬的本發(fā)明的肽中的至少一種，其中所述金屬是放射性的。相似地，本發(fā)明提供用于增強受治療者內(nèi)部區(qū)域磁共振(MR)圖像的方法，其包括向受治療者施用有效量的組合物并且記錄受治療者內(nèi)部區(qū)域的MR成像，所述組合物包括含有金屬的本發(fā)明的肽中的至少一種，其中所述金屬是順磁的。在一些實施方案中，本文提供的其他方法包括增強受治療者內(nèi)部區(qū)域超聲圖像的方法，其包括對受治療者施用有效量的組合物并且記錄受治療者內(nèi)部區(qū)域的超聲圖像，所述組合物包括含有金屬的本發(fā)明的肽中的至少一種。通常，金屬可以是任何無毒的重金屬離子。在某些實施方案中，也提供了增強受治療者內(nèi)部區(qū)域X-射線圖像的方法，其包括對受治療者施用含有金屬的肽組合物并記錄受治療者內(nèi)部區(qū)域的X-射線圖像。通?？墒褂梅派湫缘摹o毒的重金屬離子。本發(fā)明的肽可被連接至螯合劑，例如諸如美國專利第5，326，856號中所描述的那些。肽-螯合劑復(fù)合物之后可被放射標記以產(chǎn)生用于診斷或治療涉及IgG水平的調(diào)節(jié)的疾病或病況的成像劑。本發(fā)明的肽還可被用于美國專利第5，449，761號中公開的用于產(chǎn)生成像或放射治療中使用的放射標記的肽的方法中。A.檢測FcRn的示例性方法示例性實施方案97檢測FcRn的方法，其包括用可檢測的標記物標記實施方案1至75中任一個的肽或?qū)嵤┓桨?6至79中任一個的軛合物，所述可檢測的標記物選自放射性同位素、具有可檢測的產(chǎn)物的酶、熒光團、化學(xué)發(fā)光化合物、磁性顆粒、微球體、納米球、生物素、鏈霉親和素和地高辛。示例性實施方案98實施方案97的方法，其中用可檢測的標記物標記的肽或軛合物包含于診斷試劑盒中。VIII.FcRn的純化本發(fā)明的肽也可被用來純化FcRn。在一些實施方案中，肽被共價連接至適合的層析基質(zhì)以形成有效的FcRn分離介質(zhì)。之后將含有FcRn的溶液通過層析基質(zhì)而產(chǎn)生FcRn與固定的結(jié)合配偶體的非共價結(jié)合。含有FcRn的溶液可來自生物樣品例如體液、組織或細胞樣品、細胞培養(yǎng)上清液。通過用適當?shù)娜芤簺_洗固定的肽=FcRn復(fù)合物以去除雜質(zhì)并且之后用適當?shù)南疵撘簭膶游龌|(zhì)釋放FcRn來純化FcRn?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的多種化學(xué)方法將本發(fā)明的肽連接至適當?shù)膶游龌|(zhì)。例如，本發(fā)明的肽可被連接至含有適當?shù)幕钚曰鶊F例如硫醇、胺、羧酸、醇、醛、烴基鹵化物、N-烴基馬來酰亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺酯、環(huán)氧化物、氨氧和酰胼的基質(zhì)。在其他的實施方案中，本發(fā)明的肽可被修飾以含有與適當?shù)膶游龌|(zhì)非共價結(jié)合的化學(xué)部分或肽序列。例如，可用生物素部分來修飾肽并且可將其與含有抗生物素蛋白的層析基質(zhì)非共價結(jié)合?？蛇x擇地，可用FcRn溶液孵育修飾的肽并且將所得的混合物通過適當?shù)膶游龌|(zhì)以分離FcRn肽復(fù)合物。用于親和純化的肽的類似用途的實例可在Kelley等，"DevelopmentandValidationofanAffinityChromatographyStepUsingaPeptideLigandforcGMPProductionofFactorVIII(使用肽配體的用于因子VIII的cGMP生產(chǎn)的親和層析步驟的開發(fā)和確認)”，BiotechnologyandBioengineering(生物技術(shù)和生物工程)，第87卷，第3期，WileyInterScience，2004，第400-412頁以及美國專利第6，197，526號中找到。A.純化FcRn的示例性方法示例性實施方案99純化FcRn的方法，其包括(a)將實施方案1至75或A至R中的任一個的肽或?qū)嵤┓桨?6至79中的任一個的軛合物固定至固相支持體，(b)將含有FcRn的溶液與固相支持體上的固定的肽或軛合物接觸；以及(c)通過將溶液與所述固相支持體分離來純化FcRn。實施例意為本發(fā)明的純示例性的并且因此不應(yīng)當被認為以任何方式限制本發(fā)明的實施例也描述和詳述了上文討論的本發(fā)明的方面和實施方案。實施例并不意為表示下文的實驗是所進行的所有或唯一的實驗。已經(jīng)做出努力以確保所使用的數(shù)字(例如，量、溫度等)的精確性，但是應(yīng)當考慮到一些實驗性誤差和偏差。除非以其他方式指出，份是重量份，分子量是重均分子量，溫度是攝氏度并且壓力是或近于大氣壓。實施例1.可溶的人類FcRn(ShFcRn)的表達如文獻中所描述的在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中使用谷氨酰胺合成酶表達系統(tǒng)克隆、表達并純化可溶的人類FcRncDNA。參見例如美國專利第5，623，053號。終止密碼子被放置在人類FcRn的蛋白序列中氨基酸位置274之后以便除去跨膜區(qū)。實施例2.用人類FcRn轉(zhuǎn)染HEK293細胞根據(jù)制造商建議的流程使用SuperFect轉(zhuǎn)染試劑(Qiagen，Valencia,CA)轉(zhuǎn)染人類胚胎腎(HEK)293細胞(ATCC，Manassas，VA)。起初將全長的FcRncDNA構(gòu)建體(Story等，J.Exp.Med.1802377-2381(1994)，Simister等，Eur.J.Immunol.261527-1531(1996))克隆至作為質(zhì)粒載體的pcDNA6(Invitrogen,Carlsbad,CA)中以便產(chǎn)生FcRn表達載體FcRnPCDNA6。起初將人類β2πιcDNA構(gòu)建體克隆至作為質(zhì)粒載體的pcDNA3(Invitrogen)中以產(chǎn)生人類β2m表達載體β2m:pcDNA3(Gussow等人，J.Immunol.139:3132_3138(1987))。轉(zhuǎn)染前一天，將HEK293細胞以每只100mm盤0.5-2.5XIO6個細胞接種并在cDMEM中于37°C和5%CO2孵育16小時。cDMEM的組合物含有1LDMEM(Invitrogen#l1995-065)；IOml的IMHEPES,pH7.55；IOmlMEM氨基酸溶液(Invitrogeniilll3O-O5I)；10mlMEM非必需氨基酸溶液(Invitrogen#l1140-050)；IOml的IOOmM丙酮酸鈉(Invitrogen#l1360-070)；IOml的青霉素鏈霉素液(InvitrOgen#15140-148)；IOml的L-谷氨酰胺溶液(Invitrogen#25030-081)；溶于55mMDulbecco磷酸鹽緩沖鹽水(DPBS)中的Iml的2-巰基乙醇溶液(Invitrogen#21985-023)；100ml熱滅活的胎牛血清(FBS)(Invitrogen)。在轉(zhuǎn)染當天，向290μL的DMEM(Invitrogen)加入5μg的FcRn:pCDNA6構(gòu)建體和5μg的β2mPCDNA3DNA。溶液被混合幾秒鐘之后離心。之后將60μL的SuperFect轉(zhuǎn)染試劑(Qiagen)加至DNA溶液并渦旋10秒鐘。DNA/SuperFect溶液于室溫孵育5至10分鐘，其間來自含有細胞的盤的培養(yǎng)基被吸走并且用4ml的PBS沖洗細胞一次。DNA/SuperFect孵育5至10分鐘后，向DNA/SuperFect溶液加入3ml完全生長培養(yǎng)基(cDMEM)；混合溶液并立即加至IOOmrn盤中的細胞。將細胞與DNA/SuperFect溶液于37°C和5%CO2孵育2至3小時。從細胞除去含有DNA/SuperFect溶液的培養(yǎng)基并且用PBS清洗細胞3次并且向細胞加入新鮮的cDMEM。孵育48小時后，通過免疫印跡分析來檢測培養(yǎng)基以確定FcRn/β2m復(fù)合物的瞬時表達是否已經(jīng)發(fā)生。此外，細胞以14的比例被傳代至含有作為抗生素的250yg/L遺傳霉素(Invitrogen)和5μg/L殺稻瘟素的cDMEM中以篩選殺稻瘟素抗性的穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子。抗生素選擇4周后，存活的細胞被以每孔1個細胞的密度接種至96孔組織培養(yǎng)板。最終篩選了12個克隆并且將每個延伸并通過免疫印跡分析來檢查FcRn和β2πι的表達。被鑒定為具有最高表達水平的表達FcRn和β2m的293之后被用于隨后的測定。實施例3.FcRn-IgG抑制劑的噬菌體文庫篩選通過篩選得到DyaxCorp.(Cambridge,ΜΑ)許可的絲狀噬菌體展示文庫來鑒定能夠抑制IgG的Fc部分與FcRn結(jié)合的肽。更特別地，文庫TN-9-IV、ΤΝ10-Χ、TN-Il-I和ΤΝ-12-Ι被組合用于篩選。每個文庫中含有的單獨的活的噬菌體的總數(shù)由如Dyax流程所描述的文庫在大腸桿菌中表達并以克隆的稀釋液鋪板時為每個文庫建立的轉(zhuǎn)化株的數(shù)目所反映。TN-9-IV、ΤΝ10-Χ、TN-Il-I和ΤΝ-12-Ι的轉(zhuǎn)化株的數(shù)目分別是3.2Χ109、2Χ109、2.7X109和1.4X109。在給定的體積中活的噬菌體的絕對數(shù)目可以以每單位體積空斑形成單位(pfu)來報道。A.噬菌體篩選中所用的緩沖液下列緩沖液被用于結(jié)合FcRn的肽的篩選。1.NZCYM肉湯10gNZ胺-A；5g氯化鈉；5g細菌培養(yǎng)用酵母提取物(Difco)；Ig酪蛋白氨基酸；Ig硫酸鎂無水粉末組分溶解在800ml水中，用IN氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH7.5并且之后用水加至總體積IL并且高壓蒸汽滅菌20分鐘。2.結(jié)合緩沖液(BB):PBS,pH6加上IOmMEDTA.C.NZCYM-T=NZCYM肉湯加上12.5yg/ml四環(huán)素。3.HBSS-E=Hank平衡鹽溶液(Invitrogen)加上IOmMEDTA(Invitrogen)。4.MinA鹽溶于IL水中的10.5gK2HPO4(磷酸氫二鉀)；4.5gKH2P04(磷酸二氫鉀)；1.Og(NH4)2S04(硫酸銨)和0.5g檸檬酸鈉。5.LB肉湯IOg細菌用胰蛋白胨；5g細菌用酵母提取物；IOg氯化鈉溶于IL水中并且高壓蒸汽滅菌20分鐘。6.CBSpH2:50mM檸檬酸鈉；150mM氯化鈉用HCl將緩沖液調(diào)至pH2并過濾滅菌。7.LB瓊脂30g細菌用胰蛋白胨；15g細菌用酵母提取物；30g氯化鈉溶于3L水中并且高壓蒸汽滅菌20分鐘。8.LB軟瓊脂20g細菌用胰蛋白胨；IOg細菌用酵母提取物；20g氯化鈉；14g細菌用瓊脂溶于2L水中，使用文火而不沸騰。9.TE緩沖液=IOmMTris,ImMEDTA，pH7。B.篩選流程第1輪根據(jù)它們的效價，集中了每個文庫的大約100個隨機文庫等價物，其意指將24μL的TN9-IV(1.3X10lcl-pfu/yL)、12.5yL的ΤΝ10_Χ(1·6X10lclpfu/μL)、225μL的TNll-I(1.2X109pfu//μL)和48.7μL的ΤΝ12-Ι(2·9X109pfu/μL)與189μLPBS、75μL的冰冷的17%聚乙二醇(PEG)(平均分子量:8000Da,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)以及75μL的3Μ氯化鈉混合并在冰上孵育30分鐘。將一只Τ75瓶的293克隆11細胞(實施例2)用HBSS-EWl3的比例分開。將細胞轉(zhuǎn)移至Iml的微量離心管，用冷的結(jié)合緩沖液沖洗一次并且除去上清液。將細胞與噬菌體于4°C在旋轉(zhuǎn)器上孵育1.5小時。孵育之后，將細胞用Iml的冰冷BB沖洗五次，每次之后以1400rpm離心2分鐘。通過加入66μM已經(jīng)被透析至BB中的人類IgG(Calbi0Chem，SanDiego，CA)來洗脫強結(jié)合的噬菌體。將噬菌體-IgG混合物與細胞于4°C孵育1小時。離心步驟之后(1400rpm旋轉(zhuǎn)2分鐘)，將細胞團首先用200μL的66μMIgG沖洗，離心(1400rpm旋轉(zhuǎn)2分鐘)并用100μ1IgG沖洗最后一次。將IgG沖洗液與IgG洗脫液混合為500μ1的終體積。將洗脫液中的噬菌體滴定并如下文所描述的來擴增。C.噬菌體滴定將噬菌體溶液以100倍的步驟稀釋。通常將2μ1的噬菌體溶液以連續(xù)的方式加至198μL的NZCYM肉湯以實現(xiàn)多達ICTki的稀釋。當XLlBlueMRF'大腸桿菌細胞正以對數(shù)期生長并且在A600(600nm處的UV吸收)處達到0.5的光學(xué)密度時，將稀釋的噬菌體加至XLlBlueMRF'大腸桿菌細胞的培養(yǎng)物中。將培養(yǎng)物于室溫孵育10分鐘。之后，將0.5ml的受感染細胞加至約55°C的3.5ml熔化的頂層瓊脂(LB肉湯和LB瓊脂的50/50混合物)并且涂在標準的瓊脂平板上并于37度孵育過夜。從含有30至300個斑的平板計算效價。對于以10_8的噬菌體稀釋鋪板的含有50個斑的平板，計算將如下進行50斑/500μL受感染細胞X感染期間的10倍稀釋XIO8的噬菌體稀釋=每μLlO8個形成斑的單位。當必需隨后的噬菌體ELISA和測序分析時，用高壓蒸汽滅菌的Pasteur移液管挖出含有噬菌體斑的單獨的瓊脂塊。將塊放在96孔無菌的圓底組織培養(yǎng)板(Greiner)中，向其加入每孔100μL的ΤΕ。于37°C從斑中洗提噬菌體2小時或于4°C過夜。D.噬菌體擴增將XLlBlueMRF'大腸桿菌細胞的培養(yǎng)物在NZCYM肉湯-T中生長，從1/100稀釋的飽和過夜培養(yǎng)物直到培養(yǎng)物達到A600處0.5的光學(xué)密度。通過以3500rpm離心15分鐘將細胞濃縮，之后重懸在MinA鹽中至初始體積的1/20。一輪篩選之后從細胞洗脫的噬菌體在MinA鹽中被稀釋至Iml的終體積并且被加至Iml的濃縮的細菌培養(yǎng)物中。于37°C水浴孵育15分鐘后，噬菌體-細胞混合物被加至2ml的2XNZCYM肉湯并涂在具有NZCYM加50μg/ml氨芐青霉素的大NUNC平板上直到干燥。將平板于37°C孵育14至18小時。在20ml的PBS存在的情況下，過夜形成的克隆被輕輕地用涂布棒刮下。含有細菌和噬菌體的PBS被收集在離心管中。在IOml的PBS存在的情況下，再次刮下留在平板上的細菌并收集。對平板使用最后IOml的PBS漂洗并將其與所有刮下的物質(zhì)集中在一起。通過離心(3500rpm，15分鐘)使細菌細胞成團并且將澄清的上清液傾倒在另一個離心管中，再次澄清并且最后再次傾倒。之后0.15mL體積的17%PEG+3MNaCl被加至上清液，其被混合并于4°C貯存過夜。通過離心(8500xg，30分鐘)收集沉淀的噬菌體，之后丟棄上清液。將噬菌體團重懸在小體積的PBS中，用短暫的旋轉(zhuǎn)將其澄清并且再次用0.15體積的17%PEG+3MNaCl沉淀。最終的噬菌體團被重懸在PBS中并在準備下一輪篩選中被滴定。E.第2輪擴增的噬菌體文庫被稀釋以便將僅僅10個隨機的文庫等價物稀釋成Iml的結(jié)合緩沖液。將T75瓶中未轉(zhuǎn)染的293細胞的三分之一用冷的結(jié)合緩沖液沖洗一次。通過將噬菌體與未轉(zhuǎn)染的細胞孵育15分鐘進行兩次扣除步驟，所述步驟被包括進來以便從文庫除去這樣的噬菌體，其表達能夠與不表達FcRn的細胞結(jié)合的肽?；厥丈锨逡?。之后將T75瓶中293克隆11細胞的三分之一用冷的結(jié)合緩沖液沖洗一次并與噬菌體于4°C在旋轉(zhuǎn)器中孵育1.5小時。將細胞用Iml的冷的結(jié)合緩沖液沖洗并離心(1400rpm旋轉(zhuǎn)2分鐘)五次并且通過將噬菌體_細胞-IgG混合物于4°C孵育1小時來用200μL的66μM人類IgG(用結(jié)合緩沖液透析的)洗脫強結(jié)合的噬菌體。離心(1400rpm旋轉(zhuǎn)2分鐘)后，收集上清液并且用200yL的66μΜIgG沖洗團塊沉淀，之后用100μL的66uMIgG沖洗。將洗脫液中的噬菌體滴定并且如下文標記了噬菌體滴定和噬菌體擴增的章節(jié)中所描述的來擴增。F.第3輪如上文對第2輪所描述的進行這一輪。在第3輪完成時，將洗脫液中的噬菌體滴定并使用噬菌體ELISA測定IgG-FcRn抑制劑。G.噬菌體ELISA進行下列步驟以通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)來鑒定編碼能夠結(jié)合FcRn的肽的噬菌體。首先，配制下列溶液緩沖液A:PBS+0.1%吐溫+0.5%BSA。緩中液BIOOmMMES,pH5.5+150mMNaCl+0.吐溫。緩沖液C:50mMMES,pH6.0+150mMNaCl+0.吐溫。將顯示了結(jié)合FcRn的能力的噬菌體的繁殖所用的XLlBlueMRF'大腸桿菌培養(yǎng)物從過夜培養(yǎng)物的1100的稀釋物培養(yǎng)至具有A600處0.5的光密度。之后，將如上所述制備的每個噬菌斑洗脫液10μ1加至96孔板的孔中的30μ1的XLlBlueMRF'大腸桿菌細胞上并于室溫孵育15分鐘。之后，將含有50μg/ml氨芐青霉素的130μ1的NZCYM肉湯加至每個孔并且將板于37°C孵育過夜。通過將其用每孔200μ1的緩沖液A漂洗并于4°C用溶于緩沖液A的lmg/ml的生物素化的可溶的人類FcRn(實施例4，章節(jié)A)包被過夜來制備包被鏈霉親和素的、BSA封閉的微量滴定板(Pierce)。除去含有FcRn的緩沖液并將板用緩沖液C漂洗兩次。之后向板的每個孔加入70μ1的緩沖液B，之后加入30μ1的含有噬菌體的細菌培養(yǎng)物。在室溫下1小時后，將板用200ul的緩沖液C沖洗五次。之后將含有110000稀釋的軛合HRP的抗M13的抗體(AmershamPharmacia)的100μ1的緩沖液C加至每個孔。將板于室溫孵育一小時。之后將板用緩沖液C沖洗9次，用1步的TMB(KPL)顯影，5-15分鐘之后用2Μ的硫酸終止并用SpectraMaxPlus平板讀數(shù)器(MolecularDevices)于450nm讀數(shù)。H.噬菌體DNA的PCR擴增溶于TE的從斑洗脫的噬菌體被擴增以便使用PCRCoreSystemII試劑盒依照制造商的說明書(Promega)測序。之后將5ml的洗脫的噬菌體加入含有200μM的每種dNTP、500nM的引物3PCRUP(5‘-CGGCGCAACTATCGGTATCAAGCTG-3‘)、500nM的引物3PCRDN(5‘-CATGTACCGTAACACTGAGTTTCGTC-3‘)、lxTaqDNA聚合酶緩沖液(10x:500mMKClUOOmMTris-HClpH9.0于25°C、1%TritonX_100、15mMMgCl2)禾口1.25個單位的TaqDNA聚合酶的反應(yīng)混合物。使反應(yīng)物在MJResearchPCT-200熱循環(huán)儀上經(jīng)歷下列程序在94°C下5分鐘；由在94°C下15秒、在55°C下30秒和在72°C下60秒所組成的30個循環(huán)；之后是在72°C下7分鐘。使用QiaQuickPCRPr印試劑盒(Qiagen)根據(jù)制造商的說明書將所得的產(chǎn)物純化，由A260處的吸光度進行定量并使用引物3SEQ-80(5‘-GATAAACCGATACAATTAAAGGCTCC-3‘)測序。3輪的篩選之后擴增的噬菌體的測序揭示了編碼全長人類FcRn和人類β_2微球蛋白1的氨基酸序列的DNA序列。這些“噬菌體匹配”被共同使用以鑒定由氨基酸序列G-H-F-G-G-X-Y所定義的共有肽序列。實施例4.肽-IgG競爭ELISA為了確定衍生自絲狀噬菌體展示文庫的篩選的本發(fā)明的肽是否也能夠阻斷IgG與FcRn的結(jié)合，設(shè)計并進行下列ELISA測定。A.ShFcRn的生物素化將溶于Tris緩沖液的可溶性人類FcRn(shFcRn)的溶液透析兩次，每次在2升pH8.0的PBS中3小時。通過在280nm處測量吸光度來確定回收的shFcRn的量。通過將吸光度讀數(shù)乘以shFcRn的消光系數(shù)來獲得shFcRn的濃度，消光系數(shù)為ε=85880Μ—1cnT1。通過用2倍摩爾過量的磺基-NHS-LC-生物素(Invitrogen，Carlsbad，CA)于4°C將透析的ShFcRn處理2小時來完成ShFcRn的生物素化。之后將shFcRn-磺基-NHS-LC-生物素反應(yīng)混合物在2L的冷PBS中透析兩次，之后進行另一次吸光度讀數(shù)以確定剩余蛋白的濃度。用0.疊氮化鈉將生物素化的ShFcRn貯存于4°C直到需要時。B.肽-IgG競爭ELISA測定將用BSA(Pierce，Rockford，IL)封閉的、ReactiBind中性鏈親和素涂布的96孔板用200μ1/孔的緩沖液Α(緩沖液A:PBSpH7.4(Gibco，14040)、0·5%的無IgG的BSA、0.05%吐溫-20)沖洗兩次。將孔用ΙΟΟμΙ/孔的溶于緩沖液A的lyg/ml的生物素化的ShFcRn涂布。將板密封并于37°C孵育2小時。之后將板用200μ1/孔的緩沖液B(緩沖液B:100mMMESpH6、150mMNaCl、0·5%的無IgG的BSA(JacksonImmunoResearch,WestGrove,PA)、0·05%吐溫-20)沖洗。之后加入50μ1/孔的溶于緩沖液B的6ηΜ人類IgG(Calbiochem,SanDiego,CA)以及50μ1/孔的各種肽競爭劑(于各種濃度)以使孔中IgG的終濃度為3ηΜ。為了使其混合，將板震動2分鐘，密封并于37°C孵育2小時。孵育后，將液體從板吸走并且加入溶于緩沖液B的100μg/孔的110000稀釋的軛合過氧化物酶的山羊抗人IgGF(ab')片段特異性的F(ab')2片段(JacksonImmunoResearch,WestGrove,PA)。蓋住板，于室溫孵育30分鐘并用200μ1/孔的冰冷緩沖液B沖洗4次。加入SureBlueTMB底物溶液(100μ1/孔，KPL，Gaithersburg，MD)并且使板于室溫孵育直到顯色，其歷時5至10分鐘。一旦顯色，加入100μ1/孔的TMB終止液(KPL，Gaithersburg，MD)并且于450nm處測量吸光度。將數(shù)據(jù)繪制為吸光度對肽濃度以獲得抑制濃度50%(IC50)的值。實施例5.肽-IgG競爭FACS測定除了使用實施例4中描述的ELISA方法確定來自絲狀噬菌體展示文庫的篩選的本發(fā)明的肽是否也能夠阻斷IgG與細胞上FcRn的結(jié)合之外，設(shè)計并進行下列熒光激活細胞分選(FACS)測定。A.用Alexa-Fluor-488標記Synagisi^·AMit^]IgGl(Synagis,Medlmmune,Gaithersburg,MD)MAlexaFluor488蛋白標記試劑盒(MolecularProbes/Invitrogen,Carlsbad,CA)根據(jù)制造商建議的流程來標記。簡言之，將50μ1的IM碳酸氫鈉pH9.0加至溶于PBS的500μ1的2mg/ml的IgG溶液。此蛋白溶液被加至AlexaFluor488琥珀酰亞胺酯(干粉)并于室溫孵育1小時。通過使用試劑盒組件柱(Bio-RadBioGelP-30精細尺寸排阻純化樹脂)的尺寸排阻層析法來純化蛋白。將樣品加載至柱上并用PBS洗脫。第一條顏色帶含有標記的蛋白。標記的程度是通過于280nm和494nm測量洗脫的IgG的吸光度來確定的。使用下列公式確定蛋白摩爾濃度蛋白濃度(M)=[A280-(A494X0.11)X稀釋因子]/203，000。此外，用于獲得每摩爾蛋白的染料的摩爾數(shù)的公式是=A494X稀釋因子/71，000X蛋白濃度(M)。通常，每摩爾的IgG結(jié)合4-7摩爾的Alexa-Fluor488。B.使用293克隆11細胞的IgG-肽競爭FACS測定在測定的準備中，將含有5μg/ml殺稻瘟素和250μg/mlG418(Gibco,Carlsbad,CA)的完全DMEM培養(yǎng)基(Gibco,Carlsbad,CA)中的HEK293克隆11細胞(實施例2)旋轉(zhuǎn)沉淀并以3XIO6細胞/ml的濃度重懸于緩沖液C(緩沖液C含有IOmMEDTA(Gibco)的Dulbecco氏PBS(Gibco，Carlsbad，CA))中。將細胞(0.1ml)用移液器移至96孔測定板的每個孔中并且使用SorvallRT7臺式離心機將板于2600RPM離心5分鐘。將上清液輕柔地倒出并且將板在紙巾上吸干。將以不同濃度溶于緩沖液C的肽競爭劑(90μ1)加至板并用多道移液器混合。10μ1的Alexa488標記的Synagis被加至板上的每個孔，以使Alexa488標記的Synagis的終濃度為ΙΟΟηΜ。將板裹在鋁箔中，放置在冰上一小時并且之后于2600rpm在SorvallRT7臺式離心機中離心5分鐘，之后用100μ1的緩沖液C沖洗一次并且進行第二次離心步驟。將細胞重懸在200μ1的緩沖液C中并且在BeckmanCoulterEPICSXL流式細胞儀上分析。實施例6.使用表面等離子共振(SPR)確定對肽的平衡結(jié)合常數(shù)(Kd)的方法進行下列步驟以通過胺偶聯(lián)反應(yīng)將可溶的人類或食蟹猴FcRn與CM5感應(yīng)芯片(BiacoreAB,Uppsala，瑞典)的葡聚糖表面交聯(lián)，其中所述胺偶聯(lián)反應(yīng)包括如Biacore(ΒΙΑ應(yīng)用手冊，AB版，第4.2節(jié)，BiacoreAB,Uppsala,Sweden)所建議的1_乙基-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)(BiacoreAB,Uppsala,瑞典)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)(BiacoreAB,Uppsala,瑞典)。將FcRn蛋白在50mM的pH4.5醋酸鈉(BiacoreAB，Uppsala，瑞典)中稀釋至10μg/ml至30μg/ml的濃度并且用來包被感應(yīng)芯片上的一個流動槽。用IM的pH8.5乙醇胺鹽酸鹽(BiacoreAB,Uppsala，瑞典)封閉FcRn流動槽上的殘余位點。用乙醇胺封閉對照流動槽以便扣除參考。對于單體肽的分析，將FcRn包被至4000-5000響應(yīng)單位(RU)的終密度。對于肽二聚體的分析，將FcRn包被至2000-2500RU的密度。使用BIACORE3000儀器(BiacoreABUppsala，瑞典)進行所有的SI3R測量。對于在pH6或pH7.4完成的測量，在50mM磷酸鹽、IOOmM氯化鈉、0.01%表面活性劑P20(BiacoreAB，Uppsala，瑞典)中進行實驗。A.用于確定單體肽的結(jié)合常數(shù)的代表性步驟將十份2倍稀釋的肽以20μ1/min的速率注入FcRn-CM5芯片2分鐘。用緩沖液將肽從芯片離解2.5分鐘。以30μ1/min的速率將HBS-P緩沖液(BiacoreAB,Uppsala,瑞典)注射30秒以便從芯片除去任何殘留的肽。產(chǎn)生感應(yīng)譜并用BiaEval軟件3.1版(BiacoreAB,Uppsala，瑞典)分析。將每次注射所觀察到的平衡態(tài)RU對濃度作圖。使用BiaEval軟件中包括的穩(wěn)定態(tài)親和力模型通過對圖的分析獲得平衡態(tài)Kd值。B.用于確定二聚體肽的結(jié)合常數(shù)的代表性步驟將十份2倍稀釋的肽以30μ1/min的速率注入FcRn-CM5芯片10分鐘。用緩沖液將肽從芯片離解10分鐘。以100μ1/min的速率將含有50mMTris-鹽酸、IOOmMNaCl,0.01%表面活性劑P20的溶液(pH9.0)注射兩次60秒以便從芯片除去任何殘留的肽。產(chǎn)生感應(yīng)譜并用BiaEval軟件3.1版(BiacoreAB,Uppsala，瑞典)分析。將每次注射所觀察到的平衡態(tài)RU對濃度作圖。使用BiaEval軟件中包括的穩(wěn)定態(tài)親和力模型通過對圖的分析獲得平衡態(tài)Kd值。實施例7.含有二硫鍵的單體肽的合成使用固相肽合成通過燒結(jié)的圓底燒瓶手動地或者通過AdvancedChemtech396-ω合成儀(AdvancedChemtech,Louisville,KY)進行單體肽的合成。使用標準的Fmoc/tBu流程(W.C.Chan和P.D.White，編輯，F(xiàn)mocSolidPhasePeptideSynthesis:APracticalApproach(Fmoc固相妝合成實用方法)Oxford,UniversityPressInc.，NewYork(2000)),與Rink酰胺樹月旨(Novabiochem，SanDiego,CA)或PAL-PEG-PS(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)組合以在裂解時產(chǎn)生C-端酰胺。偶聯(lián)試劑是2-(1Η-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3，-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)和N-羥基苯并三唑(HOBt)(Novabiochem,SanDiego,CA)。堿是二異丙基乙胺(DIEA)(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)而N，N-二甲基甲酰胺(DMF)是溶劑(EMScience，KansasCity,MO)。經(jīng)典的合成循環(huán)包括使用溶于DMF的20%哌啶的2X10分鐘的去保護步驟、使用HOBt/HBTU的2X30分鐘的氨基酸偶聯(lián)以及使用醋酸酐/HOBt的10分鐘的加帽步驟。通過用95%的三氟乙酸、2.5%的乙烷二硫醇、1.5%的三異丙基硅烷和的水處理2小時將肽從樹脂上切下并且用冰冷的醚沉淀、離心并用醚研磨三次。通過將肽在41的乙酸和水的混合物(EMScience,KansasCity,MO)中溶解至lmg/ml的濃度而將粗制的含有半胱氨酸的肽氧化為它們相應(yīng)的二硫化物。十摩爾當量的碘(溶于水的IM溶液，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)被加至溶液并且將反應(yīng)混合物于室溫混合一小時。通過逐漸加入IM硫代硫酸鈉(Sigma-Aldrich，St.Louis，M0)終止反應(yīng)直到獲得澄清的溶液。將反應(yīng)混合物在真空中濃縮并且之后用裝備了250mmX21.2mm的Phenomenex(TorrenceCA)C18柱的WatersPr印600反相HPLC系統(tǒng)(Millford，MA)純化。為HPLC純化步驟所選擇的洗脫液是梯度的含有0.(重量/體積)TFA的乙腈水溶液。將適當級分收集，集中并且冷凍干燥。通過與偶聯(lián)了電噴霧質(zhì)譜(MarinerES-MS)(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)的250mmX2mm柱(Phenomenex,Torrence,CA)組合的反相分析型HPLC確認了肽的身份和純度。表2提供了來自肽表達文庫篩選的原始噬菌體肽序列的列表，其中所述文庫被用于鑒定具有對人類FcRn的高親和力和阻斷IgG-FcRn相互作用的能力的肽。在表2和隨后的表中，第1欄含有肽標志符。第2欄含有肽的氨基酸序列。第3欄含有實施例4中概述的IgG競爭ELISA所確定的每種肽的IC5(I。第4和5欄分別含有通過實施例6中概述的Biacore分析在pH6和pH7.4所確定的每種肽的KD。表2.原始噬菌體肽序列<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>表3提供了肽第506號的平截的列表并顯示了平截對于這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)的影響。第1欄含有肽標志符。第2欄含有肽的氨基酸序列。第3欄含有實施例4中概述的IgG競爭ELISA所確定的每種肽的IC5(I。第4和5欄分別含有通過實施例6中概述的Biacore分析在pH6和pH7.4確定的每種肽的KD。表3.肽第506號的平截<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表4提供了衍生自肽第501號的肽和肽類似物的列表，其中單個的氨基酸已經(jīng)被丙氨酸取代(丙氨酸掃描)。表4顯示取代對這些肽與人類fcrn的結(jié)合參數(shù)的影響。表4.肽第501號的丙氨酸掃描<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表5提供衍生自肽第501號的肽和肽類似物的列表，其中已經(jīng)進行了用半胱氨酸類似物對半胱氨酸的取代。表5顯示取代對這些肽與人類fcrn的結(jié)合參數(shù)的影響。表δ.肽第501號的半胱氨酸類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>*“Pen”=L-青霉胺；“hC”=L-高半胱氨酸表6提供衍生自肽第501號和肽第32號的肽的列表，其中已經(jīng)進行N-甲基氨基酸對單個氨基酸的取代。表6顯示取代對這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)的影響。表6.肽第501號和肽第32號的N-甲基掃描<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>*“Pen”=L-青霉胺；Sar=肌氨酸(N-甲基甘氨酸)；“匪e”前綴代表N-甲基氨基酸表7提供衍生自肽第32號的肽類似物平截的列表。表7顯示平截對這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)的影響。表7.肽第32號的平截序列ICsoKdKdμΜ(ρΗ6)ρΗ7.4μΜμΜ肽第32號QRF-Pen-TGHFGGLYPCNGP2025L2肽第82號F-Pen-TGHFGGLYPC1.70.315肽第83號NHrF-Pen-TGHFGGLYPC3.10.29J2肽第99號RF-Pen-TGHFGGLYPC2.00.173.4肽第141號QRF-Pen-TGHFGpLYPC1.50.19肽第142號RF-Pen^TGHFGpLYPC1.50.14肽第143號F-Pen-TGHFGpLYPC1.7肽第44號RF-Pen-TGHFGpLYPCNGP1.5肽余145號_F-Pen-TGHFGpLYPCNGP_3J_*“pen”=L-青霉胺；表8提供衍生自肽第32號的肽和肽類似物的列表，其中在通常具有序列Gly-Gly-Leu之處已經(jīng)產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表8.在Gly-Gly-Leu處修飾的肽第32號的類似物序歹丨廣^κ^ζ~μΜ(ρΗ6)ρΗ7.4μΜμΜ狀第32號QRF-Pen-TGHF-QG1LYP-C-NGP2025Π肽第40號QRF-Pen-TGHF-QiE-LYPCNGP1.40.231.1肽第41號QRF-Pen-TGHF-Si-LYPCNGP8.10.838.8狀第42號QRF-Pen-TGHF-gJi-LYPCNGP12220肽第43號QRF-Pen-TGHF-Sd-LYPCNGP182.241肽第44善QKF-Pen-TGHF-&i-LYPCNGP131.7100肽第45號QRF-Pen-TGHF-fizi-LYPCNGP131.531肽第46號QRF-Pen-TGHF-Sz^LYPCNGP2.40.485.3肽第47號QRF-Pen-TGHF-iS-LYPCNGP3.10.584.9「nRflcn肽第48號QRF-Pen-TGHF-EdS-LYPCNGP50.7921LUOt3y」肽糴49"4QRF-Pen-TGHF-IdS-LYPCNGP4.10.31肽第50號QRF-Pen-TGHF-hze-LYPCNGP3.60.41肽糴514QRF-Pen-TGHF-Lfi-LYPCNGP9.42.6肽第52善QRF-Pen-TGHF-￡Q-LYPCNGP2.80.51肽余534ORP-Pen-TGHF-V-G-LYPCNGP3.20.32肽第54.QRF-Pen-TGHF-Aib1G-LYPCNGP175.2狀瘃744"QRF-Pen-TGHF-G^-LYPCNGP20.4812欣糴754ORP-Pen-TGHF-a-G-LYPCNGP4.50.494.5肽第148號QRF-Pen-TGHF-§:a-LYPCNGP4.50.45肽糴149號QRF-Pen-TGHF-S^LYPCNGP3.70.43肽余150號QRF-Pen-TGHF-￡E"LYPCNGP5.90.72肽桌丨51號QRF-Pen-TGHF-￡^-LYPCNGP4.30.41肽$152號_QRP-Pen-TGHF-B^-LYPCNGP_213.3_~~~肽第153號ORF-Pen-TGHF-f-G-NMeLeu-YPCNGPil024■肽第154號ORF-Pen-TGHF-a-G-NMeLeu-YPCNGP3.20.23肽第155號QRF-Pen-TGHF-￡Q^-YPCNGP3918.3肽費202號QRF-Pen-TGHF-E;￡-LYPCNGP>250>100肽第203γQRF-Pen-TGHF-tP-LYPCNGP223.8肽第號_QRF-Pen-TGHF-a^a-LYPCNGP_1.70.19_*"Pen"=L-青霉胺；"NMeLeu“=N-甲基亮氨酸；"Sar"=肌氨酸；‘‘Aib，，=氨基異丁酸表9提供衍生自肽第32號的肽和肽類似物的列表，其中在通常具有序列Arg-Phe-青霉胺之處已經(jīng)產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表9.在Arg-EM-青霉胺處修飾的肽第32號的類似物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>肽第32號QR-F-Pen-TGHFGGLYPCNGP2025L2肽第96號QR-f-Pen-TGHFGGLYPCNGP.4.8肽第97號QR-X-Pen-TGHFGGLYPCNGP2.40.31肽第98號_QR-W-Pen-TGHFGGLYPCNGP_JJ_029_*“Pen”=L-青霉胺；“匪eLeu”=N-甲基亮氨酸；“Sar”=肌氨酸；“Aib，，=氨基異丁酸表10提供衍生自肽第32號的肽和肽類似物的列表，其中已經(jīng)在通常具有序列青霉胺-Thr-Gly之處產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表10.在Pen-Ihx-Gly處修飾的肽第32號的類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>*“Pen”=L-青霉胺；“NMeAla”=N-甲基丙氨酸表11提供衍生自肽第187號的肽和肽類似物的列表，其中已經(jīng)在通常具有序列Phe-Gly-肌氨酸之處產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表11.在Phe-^l1-Sar處修飾的肽第187號的類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>*“Pen”=L-青霉胺；“Sar”=肌氨酸；“匪eLeu”=N-甲基亮氨酸表12提供衍生自肽第32號的肽和肽類似物的列表，其中已經(jīng)在通常具有序列His-Phe-Gly之處產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表12.在His-E^-Gly處修飾的肽第32號的類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>各種氨基酸和氨基酸類似物對酪氨酸的取代。表13.酪氨酸取代<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>*"Pen"=L-青霉胺；“Sar”=肌氨酸表15提供衍生自肽第32號的肽和肽類似物的列表，其在通常具有序列Gly-Leu之處將甘氨酸和亮氨酸一起取代為二肽擬物。表15.在Gly-Leu處修飾的肽第32號的擬肽類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>*"Pen，，=L-青霉胺實施例8.含有組氨酸類似物的肽的合成如實施例7中對于單體肽二硫化物的合成的描述來合成修飾的組氨酸類似物(表16)，例外的是下列修飾的組氨酸類似物。通過將含有與肽第99號類似的完全保護的肽的樹脂在無水甲基碘中懸浮15小時來合成肽第259號。用二氯甲烷沖洗樹脂并如上所述將肽從樹脂切下、氧化并通過HPLC純化以產(chǎn)生單甲基化組氨酸肽，即肽第259號。通過將含有與肽第99號類似的完全保護的肽的樹脂在無水甲基碘中懸浮72小時來合成肽第260號。用二氯甲烷沖洗樹脂并如上所述將肽從樹脂切下、氧化并通過HPLC純化以產(chǎn)生二甲基化組氨酸肽，即肽第260號。通過將含有與肽第248號類似的完全保護的肽的樹脂于氮氣下在二氯甲烷中懸浮來合成肽第269號。向懸浮液加入十摩爾當量的2，4，6-三叔丁基吡啶(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)，之后加入五摩爾當量的甲基-三氟甲烷-磺酸鹽(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)。振蕩下使反應(yīng)進行4小時并用二氯甲烷首先漂洗，之后用二甲基甲酰胺漂洗并且最后再次用二氯甲烷漂洗。如上所述將肽從樹脂切下、氧化并通過HPLC純化以產(chǎn)生N-甲基-噻唑肽，即肽第269號。通過用溶于含有33%乙醇、10%乙腈、10%N，N-二甲基甲酰胺的pH7.5的IOOmM磷酸鈉緩沖溶液中的30當量的硫酸銅、30當量的抗壞血酸和10當量的疊氮化鈉處理所述肽，即肽第261號，來合成肽第271號。使反應(yīng)進行2小時并且如上所述通過HPLC純化混合物以產(chǎn)生含有1，2，3-三唑側(cè)鏈的肽，即肽第271號。表16提供了與相同肽或肽類似物相比組氨酸被單個氨基酸或氨基酸類似物所取代的各種肽和肽類似物的列表。還提供了取代對這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)的影響。表16.組氨酸取代<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>實施例9.含有Gly-Gly的擬肽類似物的肽的合成所有的Gly-Gly氨基酸擬物(表17)都作為它們的Fmoc-氨基保護的氨基酸被結(jié)合并且除非另外指出，是商業(yè)上可得的(Chem-Impex，W00dDale，IL)。根據(jù)Freidinger等，J.Org.Chem.47104-109(1982)描述的流程，通過將3(R)-3-氨基-2-氧代-1-哌啶-乙酸的N-Fmoc衍生物結(jié)合至肽第227號以合成含有3(R)-3-氨基-2-氧代-1-哌啶-乙酸的肽。根據(jù)Freidinger等，J.Org.Chem.47104-109(1982)描述的流程，通過將3(R)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷乙酸的N-Fmoc衍生物結(jié)合至肽第214號以合成含有3(R)-3-氨基-2-氧代-1-吡咯烷乙酸的肽。根據(jù)Subasinghe等，J.Med.Chem.36=2356-2361(1993)描述的流程，通過將5，5-環(huán)二肽擬物結(jié)合至肽第197號或肽第198號以合成含有5，5-二環(huán)二肽擬物的肽，例外的是使用所有的D-氨基酸。根據(jù)Etzkom等，J.Am.Chem.Soc.11610412(1994)描述的流程，通過將6，5-二環(huán)二肽擬物結(jié)合至肽第204號以合成含有6，5-二環(huán)二肽擬物的肽，例外的是使用所有的D-氨基酸。根據(jù)Freidinger等，J.Org.Chem.47104-109(1982)描述的流程，通過將(D，L)-Freidinger氏內(nèi)酰胺結(jié)合至肽第216號以合成含有(D，D-Freidinger氏內(nèi)酰胺的肽，例外的是使用L-甲硫氨酸替代D-甲硫氨酸。表17提供衍生自肽第501號的肽和肽類似物的列表，其中已經(jīng)在通常具有兩個相鄰的甘氨酸(Gly-Gly)之處產(chǎn)生用各種氨基酸和氨基酸類似物的取代。表17.Gly-Gly處修飾的肽第501號類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>*“β-Ala”=β-丙氨酸；“Apa”=5_氨基戊酸表18提供衍生自肽第99號的肽和肽類似物的列表，其在通常具有序列Gly-Gly之處將兩個甘氨酸一起取代為擬肽類似物。表18.Gly-Gly處修飾的肽第99號的擬肽類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage61</formula>實施例10.經(jīng)由內(nèi)酰胺橋環(huán)化的肽的合成通過上文實施例7中概述的固相肽合成來合成內(nèi)酰胺環(huán)化的肽(表19)，例外的是下列氨基酸被用作各半胱氨酸的取代物Fm0C-Lys(Aloe)-OH、Fmoc-Orn(Aloc)-OH,Fmoc-Dab(Aloe)-OH禾口Fmoc—Dap(Aloe)-0H、Fmoc_Glu(Oj；希丙基)-OH禾口Fmoc-Asp(0j；希丙基)-OH(Bachem，Torrance，CA)。在樹脂上產(chǎn)生完全保護的肽的過程完成后，將樹脂在二氯甲烷中溶脹，用氮氣吹掃并且用0.1摩爾當量的四_(三苯基膦)鈀(0)(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)和30摩爾當量的苯硅烷(Sigma-Aldrich，St.Louis,M0)處理并且使反應(yīng)進行三小時。首先用二氯甲烷沖洗樹脂，之后用DMF沖洗并且最后用溶于DMF的1%(體積/體積)三乙胺和(重量/體積)二乙基二硫代氨基甲酸溶液沖洗另外五次。使用DMF的另外的清洗步驟之后用六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧-三吡咯烷基磷(PyBOP)(Novabiochem,SanDiegoCA)和DIEA處理樹脂16小時。如上文實施例7中所描述將肽從樹脂切下并純化。表19提供含有氨基酸取代的本發(fā)明各種肽的列表，所述氨基酸取代是半胱氨酸殘基對允許各個肽經(jīng)由內(nèi)酰胺橋環(huán)化的氨基酸和氨基酸類似物的取代。還提供了取代對這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)的影響。表19.內(nèi)酰胺環(huán)化的肽<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>*下劃線的氨基酸的側(cè)鏈之間有酰胺鍵；Dab=1,3-二氨基丁酸；Dap=1，2_二氨基丙酸；Orn=鳥氨酸實施例11.直鏈肽類似物的合成如上文實施例7中所述合成未橋連的(“直鏈的”)肽類似物，例外的是如表20和21中所示形成二硫化物的氨基酸被取代。表20提供肽第501號衍生的本發(fā)明的直鏈肽和肽類似物的列表。表20還提供這些肽與人類FcRn的結(jié)合參數(shù)。表20.肽笫501號的直鏈類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>*“Sar，，=肌氨酸；“匪eLeu”=N-甲基亮氨酸表21提供肽第236號衍生的肽和肽類似物的列表，其中各種擬肽類似物已經(jīng)在通常具有甘氨酸-肌氨酸序列(Gly-Sar)之處被取代。表21.具有Gly-Gly擬肽的肽第236號的直鏈類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>*“Sar”=肌氨酸；"NMeLeu”=N-甲基亮氨酸實施例12.經(jīng)由還原性烴基化的肽二聚體的合成通過肽醛和肽氨基(N)或羧基(C)端的胺的還原性烴基化來產(chǎn)生肽二聚體(表22)。如上文實施例7中對單體肽二硫化物的合成所述來合成肽N-端胺。也如上文實施例7中對單體肽二硫化物的合成所述來合成肽C-端胺，例外的是1，2-乙二胺樹脂(Novabiochem，SanDiego,CA)被用于合成步驟中。從而，從樹脂切下而產(chǎn)生C-端乙胺。通過將N-端氨基酸的未保護的胺與5當量的琥珀酸酐(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)在溶于DMF的DIEA存在的條件下反應(yīng)2小時來合成肽N-端醛(圖1)。隨后與2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷甲胺(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)在PyBOP和DIEA存在的條件下反應(yīng)2小時產(chǎn)生保護的二醇樹脂。之后將粗制肽從樹脂切下，之后如上文實施例7中對單體肽二硫化物合成所述進行半胱氨酸氧化和純化，以產(chǎn)生肽二醇。將二醇溶于33%乙酸之后加入2當量的高碘酸鈉(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)并使反應(yīng)進行5分鐘。將反應(yīng)混合物用20當量(對二醇而言)的乙二醇(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)淬火，并且十分鐘后，將粗制反應(yīng)混合物用水稀釋3倍并在C18S印-Pak柱(WatersCorp.，Milford,ΜΑ)上用含有0.1%TFA的逐漸升高的梯度的乙腈水溶液純化。如實施例7中所述將肽醛冷凍干燥并在液相層析(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)之后經(jīng)受質(zhì)譜(MarinerES-MS)分析。如上文實施例7中對單體肽二硫化物的合成所述來合成肽C-端胺，例外的是Fmoc-I-氨基-2，3-丙二醇-2'-氯三苯甲基樹脂(Novabiochem，SanDiego，CA)被用來代替Rink酰胺樹脂。因此，所得的肽樹脂含有掩蔽的C-端二醇。如上文對N-端醛所述，當從樹脂切下時，二醇被氧化為醛。為合成內(nèi)酰胺環(huán)化的肽例如肽第275號，根據(jù)上文實施例10所描述的方法合成肽單體，其中所述實施例10顯示通過借以在從樹脂切下之前在樹脂上進行Asp-Lys環(huán)化的內(nèi)酰胺橋環(huán)化的肽的合成。通過將一當量的肽醛與以40mg/ml的濃度溶于含有2%乙酸的DMF的一當量的含有胺的肽反應(yīng)來合成肽二聚體(圖2)。60分鐘之后，加入2當量的氰基硼氫化鈉(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)并使反應(yīng)振蕩1小時。將反應(yīng)混合物用水稀釋10倍并如實施例7中所述通過HPLC純化并在液相層析(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)之后通過質(zhì)譜(MarinerES-MS)分析。表22提供了通過還原性烴基化合成的本發(fā)明的二聚體肽的列表。在表22和之后的表中，第1欄含有肽標志符。第2欄含有肽的氨基酸序列。第3欄含有通過實施例4中概述的IgG競爭ELISA所確定的每種肽的IC5(I。第4和5欄分別含有通過實施例6中概述的Biacore分析于pH6和pH7.4所確定的每種肽的KD。第6欄含有通過實施例5中概述的競爭性IgG結(jié)合FACS分析所確定的每種肽的IC5(I。表22.通過還原性烴基化合成的二聚體和三聚體<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>*X=3(r)_3-氨基-1-羧甲基-戊內(nèi)酰胺；肽序列上方或下方的水平方括弧指示橋連的存在實施例13.通過硫醇連接體和溴乙?；碾暮铣呻亩垠w還通過將溴乙?；碾呐c硫醇連接體反應(yīng)來合成肽二聚體(表23)。通過將受保護的肽樹脂的游離的α-氨基基團與溶于DMF的4當量的溴乙酰溴(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)和8當量的DIEA(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)反應(yīng)來合成溴乙酰化的肽(圖3)。1小時后，如上文實施例7中所述，用DMF沖洗樹脂，之后用DCM沖洗并且從樹脂上切下。在使用雙硫醇連接體將內(nèi)酰胺環(huán)化的肽實施二聚化的情況下，在溴乙酰化步驟之前進行在樹脂上環(huán)化的步驟。在使用雙硫醇連接體將含有二硫化物的肽實施二聚化的情況下，如上文實施例7中所述在切下之后進行碘氧化步驟。通過將NH2-Gly-2-氯三苯甲基樹脂(Novabiochem，SanDiego,CA)與2當量的N，N-雙(N’-Fmoc-3-氨基丙基)甘氨酸半硫酸鉀(Chem-Impex，WoodDale,IL)在溶于DMF的2當量的PyBOP(Novabiochem,SanDiego,CA)和DIEA存在的情況下反應(yīng)18小時來合成雙硫醇連接體(圖3)。用溶于DMF的20%的哌啶的兩個10分鐘的處理來除去Fmoc保護基團。對于一些連接體化合物來說，β-丙氨酸還作為間隔單元而被并入。如上文用PyBOP禾口DIEA將Fmoc-β-Ala-OH(Novabiochem)偶聯(lián)至樹脂。在用溶于DMF的20%的哌啶除去Fmoc保護基團后，并入另一個β-丙氨酸間隔單元或者通過將自由的N-端胺樹脂與2當量的N-琥珀亞酰胺基-S-乙酰硫代丙酸酯(SATP；Pierce,Rockford,IL)和4當量的DIEA反應(yīng)18小時來將雙硫醇連接體并入。隨后，通過將0.05mmo1的肽樹脂與含有Iml的DMF和0.4ml的緩沖液A(緩沖液A:1M鹽酸羥胺(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)、40mM磷酸鈉pH7.5、50mMEDTA(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO))的脫氣的溶液反應(yīng)18小時來完成S-乙?；Ｗo基團的去除。將樹脂用DMF沖洗，之后用DCM沖洗，并用溶于具有2%的三異丙基硅烷的DCM中的50%的TFA溶液從樹脂切下。如上文實施例7中所述加工并純化粗制的連接體。使用雙硫醇連接體通過將一當量的純化的雙硫醇連接體與溶于具有10%水和50%IOOmM磷酸鈉(pH7.5)的DMF的二當量的溴乙酰化的N-端肽反應(yīng)而產(chǎn)生肽二聚體(圖3)。18小時之后，如上文實施例7中所述通過反相HPLC柱純化粗制的反應(yīng)混合物。通過將溴乙?；碾呐c用SATP衍生的肽反應(yīng)來合成肽第122號(圖4)。簡單地說，將具有游離的N-端胺的粗制肽樹脂與溶于DMF的2當量的SATP反應(yīng)2小時。如上文所述將S-乙酰基保護基團除去，之后如上文所述從樹脂切下并隨后純化。表23提供了通過硫醇連接體合成的本發(fā)明的二聚體肽的列表。表23.使用硫醇連接體合成的二聚體<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage70</formula>*Pen=青霉胺；Sar=肌氨酸；ρ=D-脯氨酸；匪eLeu=N-甲基亮氨酸；肽序列上方或下方的水平方括弧指示橋連的存在實施例14.經(jīng)由還原性烴基化的肽三聚體的合成肽第247號通過肽醛和肽氨基N-端胺的還原性烴基化來產(chǎn)生肽三聚體(表22)。如上文實施例7中對于單體肽二硫化物的合成所述來合成肽N-端胺，例外的是用雙官能的胺連接體例如雙氨基丙基甘氨酸(BAPG;用作雙-Fmoc-BAPG，其購買自Sigma-Aldrich,St.Louis,M0)將N-端加帽，之后偶聯(lián)肌氨酸。如實施例12中所述來合成肽N-端醛(圖1)。通過將二當量的肽醛與以40mg/ml的濃度溶于含有2%乙酸的DMF中的一當量的含有胺的肽反應(yīng)來合成肽三聚體(如圖2)。60分鐘后，加入4當量的氰基硼氫化鈉(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)并且將反應(yīng)振蕩1小時。將反應(yīng)混合物用水稀釋10倍并如實施例7中所述通過HPLC純化并在液相層析(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)之后通過質(zhì)譜(MarinerES-MS)分析。實施例15.使用二酸和胺連接體合成肽二聚體通過將樹脂上的兩個肽單體的N-端與雙官能的酸連接體反應(yīng)或通過進行樹脂上含有雙官能的胺連接體的肽的合成，從而連接樹脂上兩個肽單體的C-端來產(chǎn)生連接酰胺的肽二聚體(表24)。如上文實施例7中對于單體肽二硫化物的合成所述來合成N-端連接的肽二聚體，例外的是在將肽從樹脂切下之前，用雙官能酸連接體將兩個肽單體的N-端連接。例如，通過將含有類似于肽第235號的肽序列的具有未保護的N-端的肽樹脂與0.5當量的琥珀酸(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)在1當量的PyBOP和2當量的DIEA存在的條件下反應(yīng)來合成肽第283號。這產(chǎn)生樹脂上經(jīng)由它們的N-端通過酰胺鍵共價連接的相鄰的肽。如實施例7中所述將所得到的肽二聚體從樹脂切下并且純化，例外的是HPLC純化之前肽二硫化物沒有被氧化。將純化的還原的肽在含有20%DMSO的IOmM的磷酸鈉(pH7.5)中溶解至大約0.lmg/mL并且于室溫混合3天。這一氧化步驟使得在二聚體的一個肽單體中而不是在二聚體的兩個單體之間形成二硫鍵。將反應(yīng)混合物用水稀釋至0.05mg/mL的肽濃度并且在C18S印-Pak柱(WatersCorp.，Milford，ΜΑ)上用含有0.1%TFA的逐漸升高的梯度的乙腈水溶液進行純化。如實施例7中所述將肽二聚體冷凍干燥并在液相層析(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)之后經(jīng)受質(zhì)譜(MarinerES-MS)分析。(參見圖5)。在肽第283號的實例中，通過用胰蛋白酶將肽消化30分鐘，之后通過LCMS分析所得的肽來確認二硫化物連接模式。已經(jīng)知道胰蛋白酶在精氨酸和賴氨酸殘基之后切割，并且在精氨酸_苯丙氨酸鍵之處切割肽第283號。肽第283號的LCMS的主要產(chǎn)物是NH2-[Phe_Phe-Pen-Thr-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-Pro-Cys]-CONH2(二硫化物)(LCMS:M+H=1355.6Da)，其表示肽第283號的二硫鍵是在每個含13個氨基酸的肽單體中于分子內(nèi)形成的。如肽第283號一樣合成肽第201號，例外的是肽序列類似于肽第32號，所用的二酸連接體是乙二醇_雙(琥珀酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯)(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)并且沒有將PyBOP用于偶聯(lián)反應(yīng)。如肽第283號一樣合成肽第279號，例外的是所用的二酸連接體是雙-dPEG6_N-羥基琥珀酰亞胺酯(QuantaBiodesignsLtd.)并且沒有將PyBOP用于偶聯(lián)反應(yīng)。如肽第283號一樣合成肽第281號，例外的是用大大過量的琥珀酸酐(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)處理肽樹脂，其導(dǎo)致樹脂上所有的肽含有琥珀酸酯加帽的N-端。將該樹脂用0.5當量的N，N，_二甲基乙基-烯二胺(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)在1當量的PyBOP和2當量的DIEA存在的條件下處理。如對肽第283號一樣進行隨后的切下、純化和氧化步驟。如肽第283號一樣合成肽第282號，例外的是所用的二酸連接體是N-甲基-亞氨二乙酸(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)。如肽第283號一樣合成肽第284號，例外的是所用的二酸連接體是3，3_二甲基戊二酸(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)。如肽第283號一樣合成肽第285號，例外的是所用的二酸連接體是Boc-Asp(OH)-OH(Novabiochem，SanDiego,CA)。如肽第283號一樣合成肽第286號，例外的是所用的二酸連接體是Boc-Glu(OH)-OH(Novabiochem,SanDiego,CA)。如上文實施例7中對于單體肽二硫化物的合成所述來合成C-端連接的肽二聚體，例外的是在肽合成前將雙官能胺連接體偶聯(lián)至樹脂。這產(chǎn)生具有通過酰胺鍵共價連接的它們的C-端的肽二聚體。例如，通過首先將Lys(Fmoc)-OH(Novabiochem，SanDiego,CA)偶聯(lián)至樹脂，之后將氨基酸偶聯(lián)以產(chǎn)生與肽第235號類似的序列來合成肽第280號。這產(chǎn)生兩個肽鏈的共價連接，如將它們在樹脂上合成一樣。如上文對N-端連接的二聚體所述將所得的肽二聚體從樹脂切下、純化并氧化(參見圖6)。如同肽第280號一樣合成肽第287號，例外的是甘氨酸殘基(Gly)被插入到肽第235號序列和分支的賴氨酸連接體之間。如同肽第280號一樣合成肽第288號，例外的是兩個甘氨酸殘基(Gly-Gly)被插入到肽第235號序列和分支的賴氨酸連接體之間。表24提供含有酰胺鍵的本發(fā)明的二聚體肽的列表。表24.具有酰胺連接體的二聚體<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>*Pen=青霉胺；Sar=肌氨酸；NMeLeu=N-甲基亮氨酸實施例16.經(jīng)由還原性烴基化的肽-Fc融合物的合成如實施例12所述合成肽N-端醛肽第252號、肽第229號和肽第232號(表25)。使用相同的流程產(chǎn)生所有三個肽-Fc融合物將CysFc(具有N-端半胱氨酸的Fc結(jié)構(gòu)域)和4.5當量的肽醛于冰上在80mM醋酸鈉(pH5.5)中孵育1小時。加入氰基硼氫化鈉至20mM的終濃度并且將反應(yīng)于4°C孵育16小時。通過SDS-PAGE分析反應(yīng)混合物以確保主要由單個肽向Fc-蛋白加成。將蛋白混合物用PBS透析兩次并且測定其體外阻斷活性(表25)。在肽第252-Fc的實例中，還將肽在TG32B小鼠IgG分解代謝模型中評估。CysFc的生產(chǎn)可如美國專利申請公開第US2005/0027109號中所述進行，其中CysFc的生產(chǎn)的公開內(nèi)容通過引用并入本文。表25提供使用CysFc和醛-肽合成的本發(fā)明的肽-Fc融合物蛋白的列表。表25.肽-Fc融合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage75</formula>*Pen=青霉胺；Sar=肌氨酸；NMeLeu=N-甲基亮氨酸實施例17.轉(zhuǎn)基因小鼠從BarHarbor,ME的Jackson實驗室的Roopenian博士之處獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。通過經(jīng)由同源重組的外源多核苷酸序列的插入將內(nèi)源小鼠FcRn和β2m基因失活并且通過轉(zhuǎn)基因用人類FcRn和人類β2πι基因代替(muFcRn(-/-)、mu02m(-/-)、+huFcRn、+hu02m)。這些小鼠也被稱作品系名TG32B。實施例18.TG32B小鼠中使用5mg/kg和10mg/kg肽第270號對人類IgG分解代謝的影響在t=O小時(T。)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24、48、72、96和120小時，用5mg/kg或10mg/kg的肽第270號對小鼠靜脈內(nèi)注射。在每個時間點用含有15mM醋酸鈉(pH5)的媒介物PBS進行對照注射。在所有時間點以及在168小時于注射前采集血液樣品。制備血清并貯存于-20°C直到進行ELISA。IgGFc結(jié)構(gòu)域特異性ELISA被用來在每個時間點測定血清中人類IgG的水平。簡言之，將30μ1的10μg/ml的山羊抗人IgG(Pierce,Rockford,IL)貯存液用6ml的0.05M碳酸氫鈉(pH9.6)(Sigma-Aldrich，St.Louis,M0)稀釋。用50μ1/孔的這一溶液涂布96孔板并于37°C孵育1小時。除去涂布液并用PBST(含有0.05%吐溫-20的磷酸鹽緩沖鹽水)沖洗一次。之后加入溶于PBS的200μ1/孔的2%的牛血清白蛋白(BSA)貯存液并且將板于37°C孵育1小時。用PBST將孔沖洗三次并通過進行從50ng/ml的hlgGl開始的2.5倍的稀釋一式三份生成標準曲線。之后將100μ1的標準或樣品溶液加至孔中并且將板于37°C孵育1小時。再進行三次PBST沖洗，之后加入100μ1的溶于含有2%BSA的PBS的山羊抗人IgG[Fe]-HRP軛合物(Pierce,Rockford，IL)的110，000稀釋液。將板于37°C孵育1小時，之后用PBST沖洗并向每個孔加入100μ1的TMB單組份底物(BioFX，OwingsMills,MD)。5分鐘后通過向每個孔加入100μ1的0.25Μ硫酸以終止顯色。于450nm測量每個孔的UV吸光度并且將標準曲線用來獲得實驗的血清IgG濃度對時間的圖。實施例19.TG32B小鼠中肽第231號、肽第274號和肽第252_Fc號對人類IgG分解代謝的影響在t=0小時(T。)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24、48和72小時，用lmg/kg的肽第231號、lmg/kg的肽第274號或20mg/kg的肽第252號-Fc對小鼠靜脈內(nèi)注射。在每個時間點用15mM醋酸鈉(pH5)進行對照注射，并將其作為所有注射的媒介物。在所有時間點以及在30、96和144小時于注射前采集血液樣品。制備血清并貯存于-20°C直到進行ELISA。如上文實施例18中所述來確定每個時間點的血清中人類IgG的濃度。實施例20.食蟹猴中肽第270號對人類IgG分解代謝以及內(nèi)源IgG、IgM和白蛋白的影響在0小時用5mg/kg的生物素化的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)的靜脈內(nèi)劑量對具有4.8kg平均重量的三只成年食蟹猴靜脈內(nèi)注射。在24、48、72和96小時，用10mg/kg的肽第270號或等體積的媒介物(30mM醋酸鈉，pH5)以lml/min的速率對動物靜脈內(nèi)注射。在120小時，用10mg/kg的肽第270號的第五劑處理動物C06215。在所有注射前以及120、168、192和244小時和30天時采集血液樣品。制備血漿并貯存于_20°C直到進行ELISA。使用鏈霉親和素-Fc特異性ELISA檢測生物素-hlgG示蹤劑。將涂布了鏈霉親和素的板(Pierce,Rockford,IL，產(chǎn)品目錄#15121)用PBST(磷酸鹽緩沖鹽水+0.05%吐溫-20)沖洗三次。血清樣品和標準品用PBSB(PBS+2%BSA)稀釋。用1.56ng/ml至200ng/ml的范圍建立標準曲線。每孔加入稀釋的樣品(100μ1)或標準品并且于室溫孵育兩小時。之后將孔用PBST(300μ1/孔)沖洗三次。將山羊抗人Fc-HRP(Pierce，Rockford，IL，產(chǎn)品目錄#31416)用PBSB以125，000稀釋并且加入100μ1/孔并將板于室溫孵育30分鐘。將板用PBST(300μ1/孔)沖洗三次并用100μ1/孔的BioFx超敏TMB底物(BioFX,OwingMills,MD)于室溫顯色大約五分鐘。反應(yīng)的進行通過加入100μ1/孔的0.25Μ硫酸來終止并且以450nm的波長測量每孔的吸光度。使用下列ELISA流程檢測內(nèi)源食蟹猴IgG。首先，將兔抗猴IgG在涂布緩沖液(涂布緩沖液=1個碳酸鹽-碳酸氫鹽膠囊，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO產(chǎn)品目錄#C-3041，溶于IOOmL水)中稀釋至2μβ/πι1。接下來，用100μ1/孔的2μg/ml兔抗猴IgG(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)涂布96孔板(Costar/Corning)并于37°C孵育一小時。將板用PBST(含有0.05%吐溫-20的PBS)沖洗四次并且用200μ1/孔的PBSB(溶于PBS的1%BSA；從溶于PBS的10%BSA貯存液稀釋；KPL)于37°C封閉一小時。將板用PBST再沖洗四次。將血清樣品和標準品用PBSB稀釋。用2000ng/ml至1.9ng/ml范圍的猴IgG(AntibodiesIncorporated,Davis,CA)建立標準曲線。之后將100μ1/孔的每種樣品于37°C孵育一小時。將板用PBST清洗三次，加入100μ1/孔的溶于PBSB的兔抗猴IgG-HRP(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)的130，000稀釋液并于37°C孵育一小時。將板用PBST沖洗三次并用100μ1/孔的SureBlueTMB底物(KPL，Gaithersburg，MD)于室溫顯色大約五分鐘。使用100μ1/孔的TMP終止液(KPL，Gaithersburg，MD)來終止顯色反應(yīng)并且于450nm的波長測量每孔的吸光度。使用下列ELISA流程檢測內(nèi)源食蟹猴血清白蛋白。首先，將兔抗猴血清白蛋白在涂布緩沖液(涂布緩沖液=1個碳酸鹽_碳酸氫鹽膠囊，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO產(chǎn)品目錄#C-3041，溶于IOOmL水)中稀釋至5yg/ml。接下來，用100μ1/孔的5μg/ml兔抗猴血清白蛋白(Nordiclmmunology，荷蘭，產(chǎn)品目錄#肌厘011/^113)涂布96孔板(Costar/Coming)并于37°C孵育一小時。將板用PBST(含有0.05%吐溫-20的PBS)沖洗四次并且用300μ1/孔的溶于PBS的5%的魚明膠(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO產(chǎn)品目錄#6_7765)貯存液于37°C封閉一小時。將板用PBST再沖洗四次。將血清樣品和標準品用PBSB稀釋。用200ng/ml至0.39ng/ml范圍的猴血清白蛋白(NordicImmunology，荷蘭，產(chǎn)品目錄#臨11八讓批#6082)建立標準曲線。之后將100μ1/孔的每種樣品于37°C孵育一小時。將板用PBST沖洗六次。加入100μ1/孔的溶于PBSB的山羊抗人白蛋白-HRP軛合物(Sigma-Aldrich，St.Louis，M0)的130，000稀釋液并于37°C孵育一小時。將板用PBST沖洗六次并用100μ1/孔的SureBlueTMB底物(KPL，Gaithersburg,MD)于室溫顯色大約五分鐘。使用100μ1/孔的TMP終止液(KPL，Gaithersburg，MD)來終止顯色反應(yīng)并且于450nm的波長測量每孔的吸光度。使用下列ELISA流程檢測內(nèi)源食蟹猴IgM。首先，將山羊抗猴IgM抗體在涂布緩沖液(涂布緩沖液=1個碳酸鹽_碳酸氫鹽膠囊，Sigma-Aldrich,St.Louis,MO產(chǎn)品目錄#C-3041，溶于IOOmL水)中稀釋至5μg/ml。接下來，用100μ1/孔的5μg/ml山羊抗猴IgM(KPL,Gaithersburg,MD，產(chǎn)品目錄#071-11-031)涂布96孔板(Costar/Coming)并于37°C孵育一小時。將板用PBST(具有0.05%吐溫-20的PBS)沖洗四次并且用200μ1/孔的PBSB(溶于PBS的BSA；從溶于PBS的10%BSA貯存液稀釋；KPL)于37°C封閉一小時。將板用PBST再沖洗四次。將血清樣品和標準品用PBSB稀釋。用2000ng/ml至15.6ng/ml范圍的猴IgM(AlphaDiagnosticInternational,SanAntonio，TX，產(chǎn)品目錄#2001301)建立標準曲線。之后將100μ1/孔的每種樣品于37°C孵育一小時。將板用PBST沖洗四次。加入100μ1/孔的溶于PBSB的山羊抗猴IgM-HRP軛合物(RDI,Concord,MA,cat#617103007)的110，000稀釋液并于37°C孵育一小時。將板用PBST沖洗四次并用100μ1/孔的SureBlueTMB底物(KPL，Gaithersburg,MD)于室溫顯色大約五分鐘。使用100μ1/孔的TMP終止液(KPL，Gaithersburg，MD)來終止顯色反應(yīng)并且于450nm的波長測量每孔的吸光度。實施例21.TG32B小鼠中使用不同的給藥方案的肽第270號對人類IgG分解代謝的影響在t=0小時(T0)用5mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在t=24小時用5mg/kg的肽第270號(第一組)；在t=24和72小時用5mg/kg的肽第270號(第二組)；并在t=24、48、72、96小時用2.5mg/kg的肽第270號(第三組)對四只小鼠的組進行靜脈內(nèi)注射。在每個時間點用具有15mM醋酸鈉(pH5)的載體PBS使用另外一組小鼠進行對照注射。在所有時間點以及在168小時于注射前采集血液樣品。制備血漿并貯存于-20°C直到進行如實施例18中的ELISA。實施例22.另外的TG32B小鼠實驗在TG32B小鼠中用肽第270號進行另外的實驗。使用如實施例18中描述的相同的實驗設(shè)計，發(fā)現(xiàn)使用皮下(SC)和腹膜內(nèi)(IP)途徑施用肽第270號對加速IgG分解代謝的速率有效。發(fā)現(xiàn)肽第270號的皮下(SC)和腹膜內(nèi)(IP)注射之后在24小時開始的五次5mg/kg的日劑量的肽第270號將IgG的半衰期減少至56小時。這些半衰期顯著小于表現(xiàn)出80至100小時的IgG半衰期的典型的對照組。此外，與對照組相比，使用肽第270號后168小時，hlgG的濃度被減少56%(SC)和66%(IP)。也在TG32B小鼠中用實施例18中描述的實驗流程測試了肽第230號。靜脈內(nèi)注射人類IgG后二十四小時，5mg/kg的肽第230號的每日靜脈內(nèi)(IV)注射被施用總共五天。與92小時的對照組半衰期相比，hlgG的半衰期減少至39小時。此外，與對照組相比，168小時后hlgG的濃度被減少76%。還在兩個被設(shè)計為用來評估與三次肽的每日劑量相比單次肽劑量的作用的實驗中檢測肽第230號。使用實施例18中描述的實驗流程，靜脈內(nèi)注射人類IgG后24小時，用5mg/kg肽第230號的單次靜脈內(nèi)劑量處理一個動物組，而第二個動物組接受5mg/kg肽第230號的三次連續(xù)的靜脈內(nèi)每日劑量。120小時后，單次劑量的肽第230號將小鼠中的hlgG濃度減少41%。在接受三次每日劑量的肽第230號的小鼠的組中，120小時后hlgG的濃度減少61%。實施例23.TG32B小鼠中肽第283號對人類IgG分解代謝的影響在t=0小時(T。)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24、48、72和96小時，用0.5、1、2.5、5或10mg/kg的肽第283號對小鼠靜脈內(nèi)注射。在每個時間點用15mM醋酸鈉(pH5)進行對照注射并將其作為所有注射的媒介物。在所有時間點、120小時和168小時以及30天時于注射前采集血液樣品。制備血漿并貯存于_20°C直到進行ELISA。如上文實施例18中所述來確定每個時間點的血清中人類IgG的濃度。實施例24.聚乙二醇化的肽第289號的合成將肽第285號溶解于IOnMpH7.4的緩沖液中并用一當量的PEG3tlklla-琥珀酰亞胺酯(NOFCorp.(Japan)產(chǎn)品目錄第SunbrightMEGC-30TS號)處理18小時。將粗制的反應(yīng)混合物如實施例7中所述在C4柱(Jupiter，Phenomenex)上純化、冷凍干燥并用陽離子交換層析(Fractopr印S03產(chǎn)品目錄第1.17972號，EMDChemicalsInc,Gibbstown,NJ)再次純化，由此將肽結(jié)合至IOmM醋酸鈉(pH5)中的樹脂上，將樹脂用IOmM醋酸鈉(pH5)沖洗并且將肽用溶于IOmM醋酸鈉(pH5)的IOOmM氯化鈉洗脫。將肽溶液對醋酸透析并冷凍干燥。分析純化的肽，其通過SDS-PAGE在50kDa處顯示肽染色帶并且通過HPLC證明沒有剩余的游離肽。(圖7)表26.肽第289號，即肽第285號的聚乙二醇化的類似物<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>實施例25.TG32B小鼠中肽第289號對人類IgG分解代謝的影響在t=O小時(T0)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24小時，用25mg/kg的肽第289號對小鼠靜脈內(nèi)注射。在24、48、72、96、120和168小時采集血液樣品。制備血清并貯存于_20°C直到進行ELISA。如實施例18所述來確定每個時間點血清中人類IgG的濃度。結(jié)果示于圖8中。實施例26.食蟹猴中肽第283號對hlgG分解代謝和內(nèi)源IgG、IgM和白蛋白濃度的影響將十八只食蟹猴分為每三只動物一組的六組并且在t=-3天時用5mg/kg生物素化的人類IgG(MPBiomedical)處理。于t=O時開始，依照下列給藥方案用肽第283號處理動物四周l)lmg/kg，3x/周，靜脈內(nèi)；2)lmg/kg，lx/周，皮下；3)lmg/kg，3x/周，皮下；4)5mg/kg，3x/周，靜脈內(nèi)；5)5mg/kg，lx/周，皮下；6)5mg/kg，3x/周，皮下。注意組4的最后的肽劑量是在第16天。在第-3天、-15分鐘、1天、2天、3天、4天、5天、7天、9天、11天、14天、16天、18天、21天、23天、25天、28天、30天、32天、35天、42天、49天、77天采集血清樣品。如實施例20中所述來確定生物素化的人類IgG、內(nèi)源IgG和白蛋白的濃度。實施例27.使用還原性烴基化的30kDa聚乙二醇化的肽第290號的合成將肽第285號和1.25當量的直鏈30kDaPEG-醛(NOFCorp.(Japan)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-300-AL號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后如實施例7中所述將其在反相C4柱(Jupiter，Phenomenex)上純化以除去游離肽并且冷凍干燥。之后如實施例24中所述將所述物質(zhì)通過陽離子交換層析進行純化以除去游離的PEG。如實施例24中的透析后，通過SDS-PAGE分析肽溶液，其顯示50kDa的帶，并且通過反相HPLC證明沒有剩余的游離肽。參見圖9、10和11。實施例28.使用還原性烴基化的20kDa聚乙二醇化的肽第291號的合成將肽第285號和1.25當量的直鏈20kDaPEG-醛(NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-200-AL號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后如實施例7中所述將其在反相C4柱(Jupiter，Phenomenex)上純化以除去游離肽并且冷凍干燥。之后將所述物質(zhì)如實施例24中所述通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。將含有100-300mM醋酸鈉的合并的洗脫組分通過C18Sep-Pak(WatersCorp,MilfordΜΑ)以除去醋酸鹽，之后從1%的醋酸冷凍干燥。通過SDS-PAGE分析所述肽，其顯示35kDa的帶，并且通過反相HPLC證明沒有剩余的游離肽。參見圖9、10和11。實施例29.使用還原性烴基化的5kDa聚乙二醇化的肽第292號的合成將肽第285號和1.25當量的直鏈5kDaPEG-醛(NOFCorp.(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-50-AL號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后如實施例7中所述將其在反相C4柱(Jupiter，Phenomenex)上純化以除去游離肽并且冷凍干燥。之后將所述物質(zhì)如實施例24中所述通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。將含有100-3001111醋酸鈉的合并的洗脫組分通過(185印^^1^(^{6『8Corp，MilfordMA)以除去醋酸鹽，之后從1%的醋酸冷凍干燥。通過SDS-PAGE分析所述肽，其顯示SkDa的帶，并且通過反相HPLC證明沒有剩余的游離肽。參見圖9、10和11。實施例30.TG32B小鼠中肽第290號對人類IgG分解代謝的影響在t=O小時(T0)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24小時，用5mg/kg或25mg/kg的肽第290號對小鼠靜脈內(nèi)注射。在24、48、72、96、120和168小時采集血液樣品。制備血漿并貯存于_20°C直到進行ELISA。如實施例18所述來確定每個時間點血清中人類IgG的濃度(圖12)。實施例31.使用還原性烴基化的40kDa聚乙二醇化的肽第293號的合成將肽第285號和1.25當量的直鏈40kDaPEG-醛(DowPharma,產(chǎn)品目錄#008-005)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后透析通過IOkDa截留的膜至IOmM醋酸鈉(pH5)中。之后將所述物質(zhì)如實施例24中所述通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。透析至1%醋酸中后，通過SDS-PAGE分析肽溶液，其顯示65kDa的帶(圖11)，并且通過反相HPLC(TSK苯基1000A柱)證明沒有剩余的游離肽。實施例32.使用還原性烴基化的IOkDa聚乙二醇化的肽第294號的合成將肽第285號和1.25當量的直鏈IOkDaPEG-醛(NOFCorp,日本，SunbrightME-100-AL)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后如實施例7中所述將其在反相C4柱(Jupiter，Phenomenex)上純化以除去游離肽并且之后將液體冷凍干燥。如實施例24中所述將所述物質(zhì)通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。將含有100-3001111醋酸鈉的合并的洗脫組分通過(185印^^1^(13{6『8Corp，MilfordΜΑ)以除去醋酸鹽，之后從1%醋酸冷凍干燥。通過SDS-PAGE分析所述肽以確認軛合反應(yīng)是成功的，并且通過反相HPLC證明終產(chǎn)物中沒有剩余的游離肽。實施例33.20kDa2_臂聚乙二醇化的肽第295號的合成將肽第285號和1.25當量的20kDa支鏈PEG-醛(NOFCorp,(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightGL3-200AL020U號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)，并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后透析通過IOkDa截留的膜至IOmM醋酸鈉(pH5)中。之后如實施例24中所述將所述物質(zhì)通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。透析至醋酸中后，通過SDS-PAGE分析肽溶液，其顯示44kDa的帶(圖12)，并且通過反相HPLC(TSK苯基1000A柱)證明沒有剩余的游離肽。肽第295號的結(jié)構(gòu)示于圖13中。實施例34.40kDa2_臂聚乙二醇化的肽第296號的合成將肽第285號和1.25當量的40kDa支鏈PEG-醛(NOFCorp,(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightGL3-400AL2號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后透析通過IOkDa截留的膜至IOmM醋酸鈉(pH5)中。之后如實施例24中所述將所述物質(zhì)通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。透析至醋酸中后，通過SDS-PAGE分析肽溶液，其顯示75kDa的帶(圖12)，并且通過反相HPLC(TSK苯基1000A柱)證明沒有剩余的游離肽。肽第296號的結(jié)構(gòu)示于圖14中。實施例35.TG32B小鼠中肽第290、292、291、296、295和293號對人類IgG分解代謝的影響在t=0小時(T。)用500mg/kg的人類IgG(MPBiomedicals,Irvine,CA)對成年TG32B小鼠靜脈內(nèi)注射。在24小時，用25mg/kg的聚乙二醇化的肽對小鼠靜脈內(nèi)注射。于24、48、72、96、120和168小時采集血液樣品。制備血漿并貯存于_20°C直到進行ELISA。如上面實施例18所述來確定每個時間點血清中人類IgG的濃度。結(jié)果示于圖15中。實施例36.聚乙二醇化的肽的體外活性使用如實施例4中所述的IgG競爭ELISA測定來測定各種聚乙二醇化的肽的體外活性。結(jié)果示于圖16中。實施例37.具有支鏈PEG連接的抗FcRn肽的合成雙胺連接體，例如賴氨酸，可與肽第285號的游離胺偶聯(lián)以產(chǎn)生兩個用于聚乙二醇化的可得的胺位點。這種化合物與直鏈PEG(例如醛-PEG)的反應(yīng)可獲得支鏈的PEG-肽軛合物，例如圖17中所示的軛合物。實施例38.使用還原性烴基化的30kDa聚乙二醇化的肽第297號的合成如實施例15中所述合成具有C-端乙胺連接體的肽第297號(參見圖18)，例外的是所述肽是在1，2-乙二胺三苯甲基樹脂(Novabiochem，產(chǎn)品目錄#01-64-0081)上合成的。將肽第297號和0.75當量的直鏈30kDaPEG-醛(NOFCorp,(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-300-AL號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后透析通過IOkDa截留的膜至IOmM醋酸鈉(pH5)中。之后如實施例24中所述將所述物質(zhì)通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。透析至醋酸中之后，通過反相HPLC(TSK苯基IOOOA柱)分析肽溶液，其證明沒有剩余的游離肽。將含有100-300mM醋酸鈉的合并的洗脫組分透析至1%醋酸并冷凍干燥。如實施例4中所述的IgG競爭ELISA測定來評估肽第297號的活性。該測定的結(jié)果示于圖19中。實施例39.使用二酸和胺連接體的另外的肽二聚體的合成如實施例15中所述來合成另外的酰胺連接的肽二聚體(表27)，除了下列肽第298號是在1，2_乙二胺三苯甲基樹脂(Novabiochem，產(chǎn)品目錄#01-64-0081)上合成的；肽第299號是在1，4-丁二胺三苯甲基樹脂(Novabiochem，產(chǎn)品目錄#01-64-0082)上合成的；肽第300號是在鄰雙(2-氨乙基)乙二醇三苯甲基樹脂(Novabiochem產(chǎn)品目錄#01-64-0235)上合成的；并且肽第301號是在雙_(2-氨乙基)-醚三苯甲基樹脂(Novabiochem產(chǎn)品目錄#01-64-0141)上合成的。表27.肽第298、299、300、301號<image>imageseeoriginaldocumentpage82</image><table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>如實施例18中所述在t=Oh時500mg/kg靜脈內(nèi)劑量的人類IgG，以及之后在t=24h、48h、72h和96h時2.5mg/kg的肽第299,300和301號的皮下注射之后，TG32B小鼠中人類IgG分解代謝的速率示于圖20中。如實施例18由ELISA來確定hlgG的濃度，其被標準化至t=24h的水平并與媒介物對照組比較。實施例40.使用還原性烴基化的30kDa聚乙二醇化的肽第307、308和309號的合成聚乙二醇化的肽第307、308和309號的肽部分分別是肽第304、305和306號。如實施例15中肽第283號一樣合成肽第304、305和306號，例外的是在304中用Lys代替了Arg2，在305中用Lys代替了Thr4并且在306中用Lys代替了Prol2。這為每個二聚體肽提供兩個Lys殘基。進行聚乙二醇化以在每個二聚體肽產(chǎn)生一個PEG部分。將肽第304、305或306號和2當量的30kDa直鏈PEG-醛(NOFCorp,(日本)產(chǎn)品目錄第SunbrightME-300-AL號)以10mg/mL的PEG濃度溶解于IOOmM醋酸鈉(pH5.5)并且于4°C孵育30分鐘。加入氰基硼氫化鈉以使其終濃度為20mM。將反應(yīng)于4°C振蕩18小時，之后對IOmM醋酸鈉(pH5)透析以除去游離肽。之后如實施例24中所述將透析的反應(yīng)物通過陽離子交換層析純化以除去游離的PEG。將純化的物質(zhì)對醋酸透析并冷凍干燥。這些肽的結(jié)構(gòu)示于圖19中。之后如實施例4和18中所述來檢測這些肽的體外和體內(nèi)活性(圖16)。實施例41:30kDa聚乙二醇化的肽303的合成如上文所述在樹脂上合成肽第302號，例外的是在二聚化反應(yīng)中使用Fmoc-Asp(OH)-OH而非使用Boc-Asp(OH)-OH0在樹脂上的肽與Fmoc-Asp(OH)-OH反應(yīng)以生成樹脂上的二聚體之后，將樹脂用20%哌啶/DMF處理(2XlOmin)，用DMF沖洗并且用溶于DMF的4當量的雙Boc-氨氧乙酸、4當量的PyBOP和8當量的DIEA處理并混合1小時。將肽從樹脂上切下并如實施例15中所述將其氧化以產(chǎn)生肽第302號。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage83</formula>肽第302號將肽第302號用溶于含有0.1%(體積/體積)TFA的水的1.1當量的30kDaPEG-醛(NOFCorp.，日本，產(chǎn)品目錄#SunbrightME-300-AL)處理。將反應(yīng)混合物孵育30分鐘并如實施例24—樣純化以產(chǎn)生肽第303號。如實施例4和18中所述檢測此肽的體外和體內(nèi)活性并且將結(jié)果提供于圖16中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>肽第303號按照本說明書中所引用的文獻的教導(dǎo)來最徹底地理解本說明書。本說明書中的實施方案提供本發(fā)明的實施方案的示例性說明并且不應(yīng)被理解為限制本發(fā)明的范圍。技術(shù)人員容易認可本發(fā)明包括許多其他的實施方案。此公開內(nèi)容中引用的所有出版物和專利通過引用全文并入。如果通過引用所并入的材料與本說明書矛盾或不一致，本說明書將撤換任何這種材料。本文任何文獻的引用都并非承認這些文獻是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。除非以其他方式說明，本說明書包括權(quán)利要求中使用的表示成分的量、反應(yīng)條件等等的所有數(shù)字將被理解為在所有情況下都由術(shù)語“約”來修飾。因此，除非以其他方式相反地說明，數(shù)字參數(shù)是近似值并且可根據(jù)本發(fā)明所尋求獲得的期望特性而變化。至少，并且在不嘗試限制等同于權(quán)利要求的范圍的原則的應(yīng)用的情況下，每個數(shù)字參數(shù)應(yīng)按照有效數(shù)位的數(shù)字和通常的舍入方式來理解。除非以其他方式說明，在一系列元素之前的術(shù)語“至少”將被理解為是指該系列中的每一個元素。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認可或僅使用常規(guī)實驗就能夠確定本文描述的本發(fā)明的特定實施方案的許多等價的實施方案。這些等價的實施方案旨在被下列權(quán)利要求所包括。權(quán)利要求一種肽，其具有序列(I)A-X0-X1-X2-X3-X4-Gly-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-B，其中-A，如果存在，含有親水性聚合物或者是氫、?；虬被Ｗo基團；-B，如果存在，含有親水性聚合物或者是氨基基團、羥基基團或羧基保護基團；-X0，如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物或者是含2-15個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X1，如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物；-X2，如果存在，是氨基酸或其類似物；-X3是能夠與X10、X12或X13形成橋連的氨基酸或其類似物；-X4是任選地衍生的氨基酸或其類似物或者是含2或4個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-X6是堿性氨基酸或其類似物、芳香族氨基酸或其類似物或者堿性芳香族氨基酸或其類似物；-X7是苯丙氨酸或其類似物；-X8和X9各自獨立地選自甘氨酸或其類似物、肌氨酸或其類似物、天冬氨酸或其類似物、D-氨基酸或其類似物和α-氨基異丁酸或其類似物，或者-X8，當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X10是氨基酸或其類似物，或者-X10，當與X9合在一起時，形成二肽類似物；-X11是酪氨酸或其類似物；-X12是任選地衍生的氨基酸或其類似物；-X13，如果存在，是氨基酸或其類似物；-X14，如果存在，是任選地衍生的氨基酸或其類似物或者是含2-15個氨基酸的任選地衍生的肽或其類似物；-Y含有親水性聚合物；-Z是連接體，其連接每一個肽單體，通過-A；-B；-X0的氨基末端或側(cè)鏈，如果X0存在；至X1的氨基末端或側(cè)鏈，如果X0不存在；至X2的氨基末端或側(cè)鏈，如果X0和X1都不存在；或至X3的氨基末端或側(cè)鏈，如果X0、X1和X2都不存在；或-X14的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14存在；至X13的羧基末端或側(cè)鏈，如果X14不存在；或至X12的羧基末端或側(cè)鏈，如果X13和X14都不存在；-m是選自1、2和3的整數(shù)；并且-n是選自1、2和3的整數(shù)；其中-獨立地選擇每個A、B、X0、X1、X2、X3、X4、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13和X14；并且-肽的每個單體長度上在10至50個氨基酸的范圍內(nèi)。FPA00001014004200011.tif2.如權(quán)利要求1所述的肽，其具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中-X1是未衍生的氨基酸或其類似物；-X4是未衍生的氨基酸或其類似物或者含2或4個氨基酸的未衍生的肽或其類似物；以及-X12是未衍生的氨基酸或其類似物。3.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽是未橋連的。4.如權(quán)利要求1所述的肽，其中X3與X13形成橋連。5.如權(quán)利要求4所述的肽，其中所述橋連是側(cè)鏈與側(cè)鏈的橋連。6.如權(quán)利要求1所述的肽，其中X6是組氨酸或其類似物。7.如權(quán)利要求1所述的肽，其中X8和X9中至少一個選自-甘氨酸；-D-氨基酸；-α-氨基異丁酸；以及-肌氨酸。8.如權(quán)利要求1所述的肽，其中X14不存在。9.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽是式II、III和IV中任一個的肽并且η是1。10.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽是式II、III和IV中任一個的肽并且η是2。11.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽具有序列(V)A-X0-X1-Phe-X3-X4-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-X12-X13-X14-B,(VI<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>12.如權(quán)利要求11所述的肽，其中所述肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中水平方括弧指示橋連的存在。13.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述親水性聚合物選自聚乙二醇、聚丙二醇、葡聚糖、纖維素、甲基纖維素、羥基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥基烴基淀粉、聚乙烯醇、聚(N-乙烯吡咯烷酮)、泊洛沙姆和聚乙二醇共聚物。14.如權(quán)利要求13所述的肽，其中所述親水性聚合物是聚乙二醇(PEG)。15.如權(quán)利要求14所述的肽，其中所述PEG是直鏈PEG。16.如權(quán)利要求14所述的肽，其中所述PEG是支鏈PEG。17.如權(quán)利要求14所述的肽，其中所述PEG具有10-60kDa范圍內(nèi)的平均分子量。18.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽與人類FcRn特異性結(jié)合。19.如權(quán)利要求18所述的肽，其中所述肽對人類FcRn的親和力在50fM至ImM的范圍內(nèi)。20.如權(quán)利要求18所述的肽，其中所述肽抑制人類FcRn與人類IgG的結(jié)合并且具有50fM至ImM的范圍內(nèi)的IC50021.如權(quán)利要求1所述的肽，其中所述肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>22.如權(quán)利要求21所述的肽，其中所述肽具有序列^Xo-Arg-Phe-Pen-Thr-Gly-His-Phe-Gly-Sar-NMeLeu-Tyr-Pro-Cys-B<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中水平方括弧指示橋連的存在。23.如權(quán)利要求22所述的肽，其中所述肽具有序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>24.一種軛合物，其含有如權(quán)利要求1至23中任一項所述的肽和第二分子。25.一種藥物組合物，其含有治療有效量的如權(quán)利要求1至23中任一項所述的肽或治療有效量的如權(quán)利要求46所述的軛合物。26.一種用于治療由不適當?shù)乇磉_的IgG抗體或過量的IgG所表征的疾病的方法，其包括向?qū)ζ溆行枰幕颊呤┯萌鐧?quán)利要求47所述的組合物。27.一種檢測FcRn的方法，其包括用可檢測的標記物標記如權(quán)利要求1至23中任一項所述的肽或如權(quán)利要求24所述的軛合物，所述可檢測的標記物選自放射性同位素、具有可檢測的產(chǎn)物的酶、熒光團、化學(xué)發(fā)光化合物、磁性顆粒、微球體、納米球、生物素、鏈霉親和素和地高辛。28.一種純化FcRn的方法，其包括(a)將如權(quán)利要求1至23中任一項所述的肽或如權(quán)利要求24所述的軛合物固定至固相支持體，(b)將含有FcRn的溶液與固相支持體上的固定的肽或軛合物接觸；以及(c)通過將所述溶液與所述固相支持體分離來純化FcRn.全文摘要本發(fā)明涉及用親水性聚合物衍生的肽，其在一些實施方案中與人類FcRn結(jié)合并抑制IgG的Fc部分與FcRn結(jié)合，由此調(diào)節(jié)血清IgG水平。在一些實施方案中，所公開的組合物和方法可被用于例如治療自身免疫性疾病和炎性病癥。在進一步的實施方案中，本發(fā)明還涉及使用和制備本發(fā)明的肽的方法。文檔編號C07K14/435GK101815723SQ200880101801公開日2010年8月25日申請日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2007年8月9日發(fā)明者亞當·R·梅佐,凱文·A·麥克唐奈申請人:森托尼克斯制藥有限公司