專利名稱：用a-b-c-d-衍生的肽和它們的治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療性肽的領(lǐng)域，S卩，用A-B-C-D-衍生的新的延長肽和它們的治療用 途。本發(fā)明特別關(guān)注的治療性肽的實例是高血糖素樣肽-I(GLP-I)和exendin-4，以及其類 似物。
背景技術(shù)：
許多不同的方法已經(jīng)用于修飾治療性肽例如GLP-I和exendin-4結(jié)構(gòu)，以提供 體內(nèi)的更長的作用持續(xù)時間。例如，WO 2006/097538、WO 2006/097536、WO 2006/037810、 W02006005667, W02005/027978、WO 98/08871 和 US 2001/0011071 描述了各種 GLP-1 類似 物和其衍生物。許多糖尿病患者，特別是2型糖尿病部分的患者易于產(chǎn)生所謂的“針頭恐懼”，即， 自己注射的相當(dāng)?shù)膿?dān)憂。在2型糖尿病部分中，大多數(shù)患者用口服的降血糖試劑治療，由于 GLP-I化合物預(yù)計是這些患者將要施用的可注射的藥物產(chǎn)品，注射的擔(dān)憂可能成為臨床上 非常有前景的化合物的廣泛應(yīng)用的嚴(yán)重障礙。因而，需要開發(fā)新的化合物，其可以低于每天 一次地，例如，每兩天或三天一次、優(yōu)選的每周一次地施用，而保持了可接受的臨床概況，或 任選地通過非侵入性的施用例如肺部的、鼻部的、舌下的、口腔的或口服施用來施用。本發(fā)明的一個目的是提供長期作用的，即，具有如上所述的施用方式的肽衍生物， 例如GLP-I、exendin-4或其類似物的衍生物。本發(fā)明的另一個目的是提供具有高效價(受體親和力)的肽衍生物，例如GLP-1、 exendin-4或其類似物的衍生物，以降低使用的治療劑量用于每周s. c.給藥一次，或作為 選擇用于非侵入性的遞送。進一步的目的是提供GLP-I或其類似物的衍生物，當(dāng)比較存在極低濃度的人白蛋 白的情況下的親和力與存在更高濃度的人白蛋白的情況下的親和力時，其對GLP-I受體的 親和力僅被部分地降低。結(jié)合親和力方面的改變優(yōu)選地是低的。本發(fā)明的另一個目的是提供肽衍生物，例如具有高白蛋白結(jié)合親和力的GLP-I或 其類似物的衍生物，其保護所述肽免于蛋白水解降解并降低所述肽的腎臟清除。效價，特別是在存在低和高白蛋白濃度的情況下對GLP-I受體的結(jié)合親和力的比 值，半衰期，和對白蛋白的結(jié)合親和力，是實現(xiàn)具有每周施用一次的潛力，長期作用、穩(wěn)定和 當(dāng)然地治療活性的肽衍生物例如GLP-I衍生物的總體目標(biāo)的潛在相關(guān)的性質(zhì)。本發(fā)明的肽衍生物優(yōu)選地是化學(xué)上、物理上和酶學(xué)上穩(wěn)定的。發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含肽的肽衍生物，其中至少一個氨基酸殘基是用A-B-C-D-衍生的， 其中A-是 其中R是低級的線性或支鏈烷基，例如異丁基，ρ選自由10、11、12、13和14構(gòu)成 的組，d選自由0、1、2、3、4和5構(gòu)成的組，和-B-選自以下構(gòu)成的組
其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，y選自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和 ？
12構(gòu)成的組，或者A是
其中η選自由14、15、16、17、18和19構(gòu)成的組，B選自以下構(gòu)成的組 其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，和-C-選自以下構(gòu)成的組 其中b和e各自獨立地選自由O、1和2構(gòu)成的組，c和f各自獨立地選自由O、1和 2構(gòu)成的組，條件是當(dāng)c是O時b是1或2，或當(dāng)c是1或2時b是0，和當(dāng)f是0時6是1 或2，或當(dāng)f是1或2時e是0，和
-D-附著到所述氨基酸殘基上，并且是接頭、代表鍵、或沒有。本發(fā)明還涉及這些肽衍生物的組合物和用途。發(fā)明的描述
定義和特定的實施方式在本說明書中，以下術(shù)語具有所指明的含義在此使用的術(shù)語“多肽”和“肽”是指 由通過肽鍵連接的至少五個組成氨基酸組成的化合物。組成氨基酸可以來自由遺傳密碼編 碼的氨基酸的組，它們可以是不由遺傳密碼編碼的天然氨基酸，以及合成氨基酸。不由遺 傳密碼編碼的天然氨基酸有例如Y-羧基谷氨酸、鳥氨酸、磷酸絲氨酸、D-丙氨酸和D-谷 氨酰胺。合成的氨基酸包括通過化學(xué)合成制造的氨基酸，即，由遺傳密碼編碼的氨基酸的 D-同分異構(gòu)體，例如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib ( α -氨基異丁酸)、Abu ( α -氨基丁酸)、 Tle (叔-丁基甘氨酸)、β -丙氨酸、3-氨基甲基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸。22種成蛋白(proteogenic)氨基酸是丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱 氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、羥脯氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲 硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸。因而，非成蛋白氨基酸(其也可以稱為非天然氨基酸)是可以經(jīng)由肽鍵摻入到肽 中、但是不是成蛋白氨基酸的部分。實例有Y-羧基谷氨酸、鳥氨酸、磷酸絲氨酸，D-氨基 酸，例如D-丙氨酸和D-谷氨酰胺，合成的非成蛋白氨基酸包括通過化學(xué)合成制造的氨基 酸，即，由遺傳密碼編碼的氨基酸的D-同分異構(gòu)體，例如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib ( α -氨 基異丁酸)、Abu( α -氨基丁酸)、Tle (叔丁基甘氨酸)、3_氨甲基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、 脫-氨基-組氨酸(縮寫去氨基His，可選擇的名稱咪唑并丙酸，縮寫Impr)，氨基酸的β 類似物，例如β-丙氨酸等等，D-組氨酸、2-氨基-組氨酸、β-羥基-組氨酸、高組氨酸、 Na-乙?；?組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、α , α-二甲基-谷氨酸、 m-CF3-苯丙氨酸(縮寫m-CF3-Phe) ,α, α-二氨基丙酸(縮寫Dap)、2_萘基-蘇氨酸(縮 寫2-萘基-Thr或-T)、3_吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸、(1_氨基環(huán) 丙基)羧酸、(1-氨基環(huán)丁基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(ι-氨 基環(huán)庚基)羧酸或(1-氨基環(huán)辛基)羧酸。術(shù)語ε -氨基-Lys (或ε -Lys)意圖表明，賴氨酸殘基經(jīng)由它的ε氨基基團、而非 經(jīng)由(作為通常的情況)它的α氨基基團結(jié)合到肽例如GLP-I (7-37)肽或其類似物(參 見，例如，實施例53的化合物)。在此關(guān)于多肽使用的術(shù)語“類似物”是指修飾的肽，其中肽的一個或更多個氨基酸 殘基被其他氨基酸殘基替代，和/或其中一個或更多個氨基酸殘基從肽上刪除，和/或其 中一種或更多種氨基酸殘基被添加到所述肽中。氨基酸殘基的這種添加或刪除可以在肽的 N-末端和/或在肽的C-末端發(fā)生。一種簡單的系統(tǒng)常常用于描述類似物例如，[Arg34] GLP-I (7-37) Lys是指 GLP-I (7-37)類似物，其中位置34處的天然存在的賴氨酸被精氨酸替代，以及其中賴氨酸 添加到末端氨基酸殘基，即添加到Gly37。旋光異構(gòu)體沒有聲明的所有氨基酸被理解為是指L-同分異構(gòu)體。在本發(fā)明的肽衍生物的特定的實施方式中，接頭D是沒有的，意味著肽僅用 A-B-C-衍生。
在另一個特定的實施方式中，接頭D被包括，并且包含至少5、8、10、19、20、29、41
或至少60個非氫原子。在更進一步特定的實施方式中，所述接頭的30-50 % (例如，34、38、40、41或 42%)的非氫原子由N或0原子組成。功能性質(zhì)本發(fā)明的許多肽衍生物已經(jīng)如實驗部分所描述的被合成并測試。本發(fā)明的肽衍生物具有幾種有利的和有益的性質(zhì)，如在下文、參考實施例所解釋 的。在第一個方面，本發(fā)明的肽衍生物具有延長的作用概況，這使得它潛在地適合于 比每日一次更低頻率地施用、優(yōu)選的具有每周一次、或甚至更低頻率地施用的潛力。作用的 概況可以用實驗動物例如小鼠或豬在藥物動力學(xué)實驗中評估。適合的實驗在本申請的實施 例73(迷你豬)和實施例77(小鼠)中找到。如在迷你豬實施例73中描述的，(i)肽衍生物可以s. C.或i. v.，優(yōu)選地s. C.施 用；(ii)豬優(yōu)選的是Gdttingen迷你豬，優(yōu)選的約5個月大和體重8-iokg ;(iii)動物在施 用之前優(yōu)選地禁食，優(yōu)選地如所描述的禁食；(iv)注射優(yōu)選地如所指出的進行；(ν)測試的 動物的數(shù)量優(yōu)選地如所指出的；(Vi)劑量優(yōu)選地是如所指出的；和/或(Vii)還優(yōu)選地如 這個實施例中所指出的采集、收集和分析血液樣品。藥物動力學(xué)實驗如在實施例73中的，產(chǎn)生了所討論的化合物對照時間的血漿濃 度分布圖，在其基礎(chǔ)上可以測定半衰期T1/2。在第一個特定的實施方式中，肽例如GLP-1、本發(fā)明的衍生物在迷你豬中s. c.施 用之后的半衰期是超過18小時，優(yōu)選的超過24小時，更優(yōu)選的超過28小時，再更優(yōu)選的超 過30小時，最優(yōu)選的超過32小時。在第二個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在迷你豬中s. C.施用之后的半 衰期是超過32小時，優(yōu)選的超過34小時，更優(yōu)選的超過36小時，再更優(yōu)選的超過38小時， 最優(yōu)選的超過40小時。在第三個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在迷你豬中s. c.施用之后的半 衰期是超過45小時，優(yōu)選的超過50小時，更優(yōu)選的超過55小時，再更優(yōu)選的超過60小時， 最優(yōu)選的超過65小時。在第四個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在迷你豬中s. C.施用之后的半 衰期是超過45小時，優(yōu)選的超過50小時，更優(yōu)選的超過55小時，再更優(yōu)選的超過60小時， 最優(yōu)選的超過65小時。在第五個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在迷你豬中s. C.施用之后的半 衰期是超過70小時，優(yōu)選的超過75小時，更優(yōu)選的超過80小時，再更優(yōu)選的超過85小時， 最優(yōu)選的超過90小時。在第六個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在迷你豬中s. C.施用之后的半 衰期是超過92小時，優(yōu)選的超過94小時，更優(yōu)選的超過96小時，再更優(yōu)選的超過98小時， 最優(yōu)選的超過100小時。因此，本發(fā)明的肽衍生物的示范性的半衰期時間(以小時標(biāo)明的時間，h)，在 s. c.施用的迷你豬中測定的，是20-100,30-100,40-100,50-100,60-100,70-100,80-100或90-100 (小時)。 本發(fā)明的肽衍生物例如GLP-I衍生物的半衰期還可以在db/db小鼠中的劑量_反 應(yīng)研究中測定，例如，如實施例77所描述的。如這個實施例中所描述的(i)小鼠優(yōu)選地來 自Taconic ;(ii) 10-12周齡；(iii)對標(biāo)準(zhǔn)飼料例如Altromin 1324和自來水的自由取用； (iv)保持在24dgC ； (ν)馴化一周；(vi)根據(jù)匹配平均血糖值分配到7個組中(優(yōu)選的η = 6) ； (vii)如實施例中描述的接受處理；(viii)如所描述的給藥；(ix)根據(jù)所描述的方案 評估血糖，優(yōu)選的如所描述的分析；和/或(χ)根據(jù)血糖vs.時間測定，優(yōu)選的如實施例中 描述的測定半衰期。在第一個特定的實施方式中，肽衍生物例如本發(fā)明的GLP-I衍生物在db/db小鼠 中s. c.施用施用之后的半衰期是超過10小時，優(yōu)選的超過11小時，更優(yōu)選的超過12小時， 再更優(yōu)選的超過13小時，最優(yōu)選的超過14小時。在第二個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在db/db小鼠中s. C.施用之后的 半衰期是超過15小時，優(yōu)選的超過16小時，更優(yōu)選的超過17小時，再更優(yōu)選的超過18小 時，最優(yōu)選的超過19小時。在第三個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在db/db小鼠中s. C.施用之后的 半衰期是超過20小時，優(yōu)選的超過21小時，更優(yōu)選的超過22小時，再更優(yōu)選的超過23小 時，最優(yōu)選的超過24小時。在第四個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在db/db小鼠中s. C.施用之后的 半衰期是超過25小時，優(yōu)選的超過26小時，更優(yōu)選的超過27小時，再更優(yōu)選的超過28小 時，最優(yōu)選的超過29小時。在第五個特定的實施方式中，本發(fā)明的肽衍生物在db/db小鼠中s. C.施用之后的 半衰期是超過30小時，優(yōu)選的超過31小時，更優(yōu)選的超過32小時，再更優(yōu)選的超過33小 時，最優(yōu)選的超過34小時。因而，本發(fā)明的肽衍生物的示范性的半衰期時間(按小時標(biāo)明的時間，h)，在 s. c.施用的 db/db 小鼠中分析的，是5-35、10-35、15-35、20-35 或 25-35 (小時)。在第二個方面，本發(fā)明的肽衍生物具有可接受的、優(yōu)選的高效價(在它的受體 上)。促胰島素試劑例如本發(fā)明的GLP-I衍生物的效價通過從如實施例74描述的劑量反應(yīng) 曲線計算EC5tl值來確定。在此使用的術(shù)語“促胰島素試劑”是指作為人類GLP-I受體的激動劑的衍生物， 艮口，刺激含有人類GLP-I受體的適合的介質(zhì)中cAMP形成的衍生物(下文公開了一種這樣的 介質(zhì))。在特定的實施方式中，(i)使用表達克隆的人類GLP-I受體的嬰兒倉鼠腎臟(BHK) 細胞，優(yōu)選的 BHK-467-12A，更優(yōu)選的 BHK-467-12A(tk-tsl3) ； (ii)細胞在添加了 100IU/ mL青霉素、100μ g/mL鏈霉素(1 % Pen/Str印)、5%胎牛血清(FCS)和0. 5mg/mL遺傳霉素 G-418(Life Technologies)的DMEM培養(yǎng)基中，優(yōu)選的在5% C02下生長；(iii)細胞，優(yōu)選 的在大約80%匯合時，在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中洗滌兩次；(iv)細胞用乙二胺四乙酸的 四鈉鹽，例如Versene的水溶液收獲；(ν)質(zhì)膜通過勻質(zhì)化、優(yōu)選的在緩沖液1中從細胞制 備；(iv)例如，在48，OOOXg在4°C 15分鐘，離心勻漿物；和/或(vii)團粒在緩沖液2中 勻質(zhì)化來懸?。徊襟E(vi)和(viii)優(yōu)選的重復(fù)，例如更多一次或兩次。
功能性受體分析可以如實施例74中描述的通過測量環(huán)化AMP (cAMP)作為對促胰 島素試劑的刺激的反應(yīng)來進行。形成的cAMP優(yōu)選的通過AlphaScreen cAMP Kit(Perkin Elmer Life Sciences)來定量。孵育可以在總體積50 μ 1的緩沖液3 (50mM Tris-HCI, 5mMHEPESU0mM MgCl2, pH 7.4)和具有以下添加物的半?yún)^(qū)域96孔微量滴定板中進行l(wèi)mM ATPU μ M GTP、0. 5mM 3_ 異丁基 甲基黃嘌呤(IBMX)、0· 01 % Tween_20、0· 1% BSA,6y g 膜制品、15 μ g/mL接受體珠子、與6nM生物素基-cAMP預(yù)孵育的20 μ g/mL供體珠子。測試激 動劑活性的衍生物優(yōu)選的在緩沖液3中溶解和稀釋。GTP對每個實驗新鮮地制備。平板在室 溫下在暗處緩慢攪動孵育三小時，隨后在Fusion 儀器(Perkin Elmer Life Sciences)中 計數(shù)。對單獨的衍生物標(biāo)繪濃度_反應(yīng)曲線，利用Prism，優(yōu)選的版本4. 0或5. 0 (GraphPad, Carlsbad, CA)的四參數(shù)邏輯模型估計EC5tl值。在第一個特定的實施方式中，如利用cAMP分析測定的，本發(fā)明的GLP-I衍生物具 有的效價(按nM的EC5tl)低于4. 00、優(yōu)選的低于3. 50、更優(yōu)選的低于3. 00、再更優(yōu)選的低 于2. 50和最優(yōu)選的低于2. 00 (nM)。在第二個特定的實施方式中，如利用cAMP分析測定的，本發(fā)明的GLP-I衍生物具 有的效價(按nM的EC5tl)低于1.80、優(yōu)選的低于1.60、更優(yōu)選的低于1.40、再更優(yōu)選的低 于1. 20和最優(yōu)選的低于1. 00 (nM)。 在第三個特定的實施方式中，如利用cAMP分析測定的，本發(fā)明的GLP-I衍生物具 有的效價(按nM的EC5tl)低于0. 80、優(yōu)選的低于0. 60、更優(yōu)選的低于0. 40、再更優(yōu)選的低 于0. 20和最優(yōu)選的低于0. 10 (nM)。在第四個特定的實施方式中，如利用cAMP分析測定的，本發(fā)明的GLP-I衍生物具 有的效價(按nM的EC5tl)低于0. 090、優(yōu)選的低于0. 080、更優(yōu)選的低于0. 070、再更優(yōu)選的 低于0. 060和最優(yōu)選的低于0. 050 (nM)。在第五個特定的實施方式中，如利用cAMP分析測定的，本發(fā)明的GLP-I衍生物具 有的效價(按nM的EC5tl)低于0. 040、優(yōu)選的低于0. 030、更優(yōu)選的低于0. 020和最優(yōu)選的 低于 0. 010 (nM)。因而，本發(fā)明的GLP-I衍生物的示范性的效價范圍(按照nM的EC5tl，如使用 cAMP 分析測定的)是 0. 010-2. 00，0. 010-1. 80，0. 010-1. 60，0. 010-1. 40，0. 010-1. 20， 0. 010-1. 00,0. 010-0. 80,0. 010-0. 60,0. 010-0. 40,0. 010—0. 30,0. 010—0. 20,0. 010—0. 10， 和 0. 010-0. 90(nM)，優(yōu)選的 0. 010-0. 40，0. 010-0. 30，0. 010-0. 20，0. 010-0. 10，和 0. 010-0. 90 (nM)。在第六個特定的實施方式中，本發(fā)明的GLP-I衍生物可以同時結(jié)合白蛋白和 GLP-I受體。例如，本發(fā)明的GLP-I衍生物可以在存在2%白蛋白的情況下以低于ΙΟΟηΜ、優(yōu) 選的低于30nM的親和力結(jié)合GLP-I受體。在第三個方面，本發(fā)明的GLP-I衍生物具有對GLP-I受體的親和力，當(dāng)比較在存在 極低濃度(例如0. 005%到0.2%)的人白蛋白的情況下的親和力與存在2%人白蛋白的情 況下的親和力時(高/低)，所述親和力僅部分地降低。在這些條件下結(jié)合親和力的改變優(yōu) 選低于100倍，更優(yōu)選的低于50倍，再更優(yōu)選的低于30倍，最優(yōu)選的低于10倍。在人白蛋 白的高濃度和低濃度下受體的結(jié)合親和力可以如實施例75中描述的測定。在第一個特定的實施方式中，本發(fā)明的GLP-I衍生物具有的[(IC5tlAiM)高HSA]/[(IC5tlAiM)超低HSA]的比例低于500、優(yōu)選的低于400、更優(yōu)選的低于300、再更優(yōu)選的低于 200、最優(yōu)選的低于100。在第二個特定的實施方式中，本發(fā)明的GLP-I衍生物具有的[(IC5tlAiM)高HSA]/ [(IC5tlAiM)超低HSA]的比例低于90、優(yōu)選的低于80、更優(yōu)選的低于70、再更優(yōu)選的低于69、 最優(yōu)選的低于50。在第三個特定的實施方式中，本發(fā)明的GLP-I衍生物具有的[(IC5tlAiM)高HSA]/ [(IC5tlAiM)超低HSA]的比值低于40、優(yōu)選的低于35、更優(yōu)選的低于30、再更優(yōu)選的低于25、 最優(yōu)選的低于20。在第四個特定的實施方式中，本發(fā)明的GLP-I衍生物具有的[(IC5tlAiM)高HSA]/ [(IC5tlAiM)超低HSA]的比值低于15、優(yōu)選的低于10、更優(yōu)選的低于8、再更優(yōu)選的低于5、 最優(yōu)選的低于4。因此，[(IC5Q/nM)高HSA] / [ (IC5Q/nM)超低HSA]的比值的示范性的范圍是2-500、 2-300、2-100、2-50、2-30、2-20和2_10。在第四個方面，本發(fā)明的肽衍生物具有高白蛋白結(jié) 合親和力。白蛋白是指人血清白蛋白(HSA)，親和 力可以如實施例76中描述的測定。GLP-I衍生物對人血清白蛋白(HSA)的親和力可以通過競爭性閃爍親近分析 (SPA)來測量，優(yōu)選的通過(i)孵育鏈霉抗生物素蛋白-SPA珠子(例如GE Healthcare RPNQ0009)與生物素化的HSA，例如5小時；(ii)用緩沖液洗滌所述珠子；(iii)優(yōu)選的在含 有 IOOmM HepesUOOmM NaClUOmM MgS04、0. 025% Tween_20、pH 7. 4 的緩沖液中，將所述混 合的珠子與125I標(biāo)記的?；腉LP-I類似物，例如N- ε 26_[2_(2_{2_[2_(2_{2_[ (S)_4_羧 基-4-(17-羧基-十七烷?；被?丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠從讓8，1251-171~19，八印34]61^-1(7-37)或 N- ε 37-[2- (2-[2- ((S) ~4~ ((S) ~4~ ( 12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰氨基]十二烷?；被?-4-羧基 丁酰氨基)-4-羧基丁酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠[Aib8，125I-Tyrl9，Glu22，Arg26， 34，Lys37]GLP-I (7-37)-NH2混合；(iv)將所述混合物轉(zhuǎn)移到閃爍計數(shù)器例如PerkinElmer 0ptiplate-96 6005290的反應(yīng)孔中(100 μ 1每孔)，利用在優(yōu)選的相同緩沖液中的、GLP-I 衍生物的適合的稀釋度系列的合適體積例如100 μ 1 ； (ν)在適合的孵育時間例如20小時后 離心所述平板，優(yōu)選的柔和搖動，更優(yōu)選的在室溫下；(vi)在例如TopCoimter上對平板計 數(shù)；和/或(vii)作為GLP-I衍生物濃度的函數(shù)標(biāo)繪結(jié)合的cpm。競爭曲線的EC5tl值優(yōu)選 地用作衍生物對HSA的親和力的度量。HSA結(jié)合親和力還可以表示為表觀Kd(離解平衡常 數(shù)的Kd)。在第一個特定的實施方式中，白蛋白結(jié)合親和力(即，如使用實施例76的分析測 量的，競爭曲線的EC5tl值(按照nM))低于3000、優(yōu)選的低于2500、更優(yōu)選的低于2000、再 更優(yōu)選的低于800和最優(yōu)選的低于600 (nM)。在第二個特定的實施方式中，白蛋白結(jié)合親和力(即，如使用實施例76的分析測 量的，競爭曲線的EC5tl值(按照nM))低于500、優(yōu)選的低于400、更優(yōu)選的低于300、再更優(yōu) 選的低于200和最優(yōu)選的低于100 (nM)。因此，本發(fā)明的GLP-I衍生物的白蛋白結(jié)合親和力的示范性的范圍(按照 nM 的 EC5tl)是1-3000，1-2500，1-2000，100-2000，200-2000，400-1500，600-1500，和 800-1500(nM)。
其他定義和特定的實施方式可以根據(jù)本發(fā)明的衍生的其他肽的實例是具有低于lOOkDa、低于50kDa或低于 lOkDa的摩爾重量的治療性肽?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明的衍生的其他肽的實例是Exendine 4、人生長激素、人類胰島 素、凝血因子包括因子VII、因子VIII、因子IX、因子X、因子XIII、甲狀旁腺激素、uman 促濾泡激素、血小板衍生生長因子(PDGF)、轉(zhuǎn)化生長因子a (TGF-a)、轉(zhuǎn)化生長因子 3 (TGF-日)、表皮生長因子(EGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、生長調(diào)節(jié)素例如胰島素生 長因子I (IGF-I)、胰島素生長因子n (ire-n)、促紅細胞生成素(EP0)、促血小板生成素 (TP0)或血管生成素、干擾素、尿激酶原、尿激酶、組織纖溶酶原激活物(t-PA)、纖溶酶原激 活物抑制物1、纖溶酶原激活物抑制物2、von ffillebrandt因子、細胞因子、例如白細胞介 素，如白細胞介素(IL) UIL-lRa, IL-2, IL-4，IL-5，IL-6，IL-9，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15， IL-16，IL-17，IL-18，IL-20或IL-21、集落刺激因子(CFS)例如GM-CSF、干細胞因子、腫瘤 壞死因子例如TNF-a、淋巴細胞毒素- a、淋巴細胞毒素、⑶40L、或⑶30L、蛋白酶抑制 物例如抑酶肽、酶，例如過氧化物歧化酶、天冬酰胺酶、精氨酸酶、精氨酸脫氨酶、腺苷脫氨 酶、核糖核酸酶、過氧化氫酶、尿酸酶、膽紅素氧化酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性磷酸酶、 3 -glucoronidase、嘌呤核苷磷酸化酶或巴曲酶(batroxobin)、鴉片樣物質(zhì)，例如內(nèi)啡肽、 腦啡肽或非天然的鴉片樣物質(zhì)、激素或神經(jīng)肽，例如降鈣素、高血糖素、促胃液素、促腎上腺 皮質(zhì)激素(ACTH)、膽囊收縮素、促黃體生成激素、促性腺激素釋放激素、絨毛膜促性腺激素、 促皮質(zhì)素釋放因子、加壓素、縮宮素、抗利尿激素、促甲狀腺激素、促甲狀腺激素釋放激素、 松弛素、催乳素、肽YY、Y2受體激動劑、Y4受體激動劑、混合的Y2/Y4受體激動劑、神經(jīng)肽Y、 胰腺多肽、瘦素(leptin)、CART(可卡因和安非他明調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)、CART相關(guān)肽、脂滴包 被蛋白(perilipin)、促尿鈉排泄肽、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮素、胰泌素、胰淀素(amylin)、血 管活性腸肽(VIP)、垂體腺苷酸環(huán)化酶活化多肽(PACAP)、鈴蟾素、鈴蟾素樣肽、胸腺素、肝 素結(jié)合蛋白、可溶的⑶4、下丘腦釋放因子、melanotonins和其類似物、hematide和其類似 物。在此使用的術(shù)語“下游的每個氨基酸殘基”是指相對于特定的氨基酸，位置朝向 C-末端的每個氨基酸。例如，Lys34、Gly35和Arg36和Gly37是GLP-1 (7-37)中Val33的 下游的每個氨基酸殘基。在本發(fā)明的一個方面，根據(jù)本發(fā)明的的衍生物的C-末端可以以酸或酰胺結(jié)尾。在 優(yōu)選的方面，本發(fā)明的衍生物的C-末端是酰胺。在另一個優(yōu)選的方面，本發(fā)明的衍生物的 C-末端是酸。在本發(fā)明的實施方式中，最多17個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多 15個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多10個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方 式中，最多8個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多7個氨基酸被修飾。在本發(fā)明 的實施方式中，最多6個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多5個氨基酸被修飾。 在本發(fā)明的實施方式中，最多4個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多3個氨基酸 被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，最多2個氨基酸被修飾。在本發(fā)明的實施方式中，1個氨 基酸被修飾。在此相關(guān)于肽使用的術(shù)語“衍生物”是指化學(xué)修飾的肽或其類似物，其中至少一個取代基在未修飾的肽或其類似物中不存在，即，被共價修飾的肽。典型的修飾物是酰胺、碳 水化物、烷基基團、?；鶊F、酯，等等。根據(jù)本發(fā)明的GLP-1 (7-37)的類似物的衍生物的實 例是N- e 37 {2- [2- (2_ {2_ [2_ ((R) -3-羧基3- {[1_ (19-羧基十九烷酰基)哌啶_4_羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨基 his7，glu22，arg26，arg34，lys37]GLP-1 (7-37)酰胺其中在位置37的天然存在的Gly被賴 氨酸取代，所述賴氨酸在N- ￡ 37用{2- [2- (2- {2- [2- ((R) -3-羧基3- {[1_ (19-羧基十九烷 酰基)哌啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧 基}乙?；?結(jié)構(gòu)1)衍生化 結(jié)構(gòu) 1
和其中在位置7的天然存在的組氨酸被去氨基His取代，在位置22的天然存在的 甘氨酸被谷氨酸取代，在位置26和34的賴氨酸被精氨酸取代。在此使用的術(shù)語“GLP-1 肽”是指 GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO 1)或其 GLP-1 (7-37) 類似物。在本發(fā)明的一個方面，GLP-1肽選自以下構(gòu)成的組[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1 (7-37)酰胺，[去氨基 His7, Arg34]GLP-1-(7-37), [Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37] GLP-1-(7-37)酰胺，[去氨基 His7，Glu22 Arg26, Arg 34，Phe (m-CF3) 28] GLP-1- (7-37)酰胺，[去氨基 His7，Glu22, Arg26, Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys,[去氨基 His7，Glu22, Arg26, Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys,[去氨基 His7，Arg26，Arg34，]GLP_1_ (7-37)-Lys,[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)酰胺，[去氨基His7，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)酰胺，[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)，[去氨基 His7, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)，[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Glu30, Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)，[Aib8，Lys20，Arg26，Glu30，Thr(0-苯甲基)33，]GLP-1-(7-37)酰胺，[Aib8, Glu22, Arg26, Lys30]GLP-1-(7-37), [Aib8, Glu22, Arg26, Lys 31] GLP-1-(7-37)，[八讓8，1^820，4印26，2-萘基丙氨酸28，611130，]61^-1(7-37)酰胺，[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, ]GLP-1-(7-37)-Lys,[Aib8, Lys20, Arg 26，2_ 萘基丙氨酸 12，Glu30，]GLP_l-(7_37)酰胺，[Aib8, Glu22, Arg26, Lys31, Arg34]GLP-1-(7-37)，[Aib8, Arg34]GLP-1-(7-37),
[Aib8, Arg34]GLP-l-(7-37)-酰胺，[Aib8, Lysl8, Arg26, Arg34]GLP-l (7-37)，[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP_l-(7_37)酰胺，[Aib8, Lys 26]GLP_1 (7-37)酰胺， [Aib8, Arg34]GLP-l-(7-34),[Aib8, Arg34]GLP-l-(7-35),[Aib8, Lys33, Arg34]GLP_l-(7_34)，[Aib8, Arg34]GLP-l-(7-36)酰胺，[Aib8, Lys26, Arg34]GLP_l-(7_36)酰胺，[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-l-(7-37) Lys,[Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-l-(7-37)酰胺，[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP_l-(7_37)酰胺，[去氨基 His7，Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP_l-(7_37)酰胺，[去氨基His7，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-l-(7-37)酰胺，Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-l-(7-37) Lys,[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-l-((7_37)Lys，和[Aib8, Arg26, Arg34]GLP_l-(7_37)。在本發(fā)明的一個方面，GLP-1肽是 Argl8，Leu20, Gln34，Lys33 (N ￡ - ( Y -氨 基丁酰基(N a -十六烷?；?))Exendin-4-(7-45)-酰胺或 Arg33，Leu20, Gln34, Lysl8(Ne -(y-氨基丁酰基(Na -十六烷?；?))Exendin-4-(7-45)-酰胺。在此相關(guān)于肽使用的術(shù)語“衍生物”是指化學(xué)修飾的肽或其類似物，其中至少一個 取代基在未修飾的肽或其類似物中不存在，即，被共價修飾的肽。典型的修飾是酰胺、碳水 化物、烷基基團、?；鶊F、酯，等等。肽例如GLP-1肽中的任何氨基酸位置可以被衍生化。在本發(fā)明的一個方面，被衍 生化的氨基酸殘基包含氨基基團。在一個方面，衍生化的氨基酸殘基包含氨基基團。在進 一步的方面，衍生化的氨基酸殘基包含側(cè)鏈中的伯氨基基團。在進一步的方面，衍生化的氨 基酸殘基是賴氨酸。在本發(fā)明的一個方面，衍生化的氨基酸殘基是半胱氨酸。在本發(fā)明的 一個方面，一個氨基酸殘基被衍生化。在本發(fā)明的再進一步的方面中，根據(jù)本發(fā)明的衍生物 僅在一個位置衍生化，例如，僅一個氨基酸殘基被衍生化。包含氨基基團的氨基酸殘基的實例有賴氨酸、鳥氨酸、￡ -N-烷基化的賴氨酸，例 如e -N甲基賴氨酸、0-氨基乙基絲氨酸、0-氨基丙基絲氨酸或在側(cè)鏈中含有伯或仲氨基基 團的更長的0-烷基化的絲氨酸。在本發(fā)明的進一步的方面，衍生化的氨基酸殘基包含側(cè)鏈 中的伯氨基基團。包含伯氨基團的氨基酸殘基的實例是賴氨酸、鳥氨酸、0-氨基乙基絲氨 酸、0-氨基丙基絲氨酸、或在側(cè)鏈中含有伯氨基團的更長的0-烷基化的絲氨酸。在一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的的GLP-1肽的衍生物是促胰島素試劑。在此使用的術(shù)語“促胰島素試劑”是指一種衍生物，其是人類GLP-1受體的激動 劑，即，刺激含有人類GLP-1受體的適合的介質(zhì)中cAMP的形成的衍生物(一種這樣的介質(zhì) 在下文公開)。促胰島素試劑的效價通過如下描述的從劑量反應(yīng)曲線計算EC5(i值來確定。表達克隆的人類GLP-1受體的嬰兒倉鼠腎臟(BHK)細胞(BHK-467-12A)在DMEM培養(yǎng)基中重新生長，所述培養(yǎng)基添加了 100IU/mL青霉素、lOOyg/ml鏈霉素、5%胎牛血清 和0. 5mg/mL遺傳霉素G_418(Life Technologies)。細胞在磷酸鹽緩沖鹽水中洗滌兩次，用 Versene 收獲。質(zhì)膜通過在緩沖液 1 (20mM HEPES-Na、lOmMEDTA，pH 7. 4)中用 Ultraturrax 勻質(zhì)化來從細胞中制備。勻漿物在48，000Xg在4°C離心15分鐘。團粒通過在緩沖液 2(20mMHEPES-Na、0. ImM EDTA、pH7. 4)中均質(zhì)化來懸浮，然后在 48，000 X g 在 4°C離心 15 分 鐘。洗滌操作再一次重復(fù)。最終的團粒在緩沖液2中懸浮，立即使用用于分析，或在-80°C 保存。功能性受體分析通過測量作為對促胰島素試劑刺激的反應(yīng)的環(huán)化AMP (cAMP)來 進行。形成的 cAMP 通過 AlphaScreen cAMP 試劑盒(Perkin Elmer Life Sciences)來 定量。孵育可以在總體積50ii 1的緩沖液3(50mM Tris_HCI、5mM HEPESUOmM MgCl2、pH 7. 4)和具有以下添加物的半?yún)^(qū)域96孔微量滴定板中進行l(wèi)mM ATPU U M GTP、0. 5mM 3-異 丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、0. 01%Tween-20,0. BSA、6 y g 膜制品、15 y g/mL 接受體珠 子、與6nM生物素基-cAMP預(yù)孵育的20 u g/mL供體珠子。測試激動劑活性的衍生物在緩沖 液3中溶解和稀釋。GTP對每個實驗新鮮地制備。平板在室溫下在暗處緩慢攪動孵育三小 時，隨后在Fusion 儀器(Perkin Elmer LifeSciences)中計數(shù)。對單獨的衍生物標(biāo)繪濃 度_反應(yīng)曲線，利用Prism，版本4. 0 (GraphPad, Carlsbad, CA)的四參數(shù)邏輯模型估計EC5(1 值。在此對于多肽使用的術(shù)語“DDP-IV保護的”是指一種多肽，其已經(jīng)被化學(xué)地修飾以 使得所述衍生物對血漿肽酶二肽基氨肽酶-4(DPP-IV)有抗性。血漿中的DPP-IV已知涉及 幾種肽激素，例如GLP-l、GLP-2、Exendin-4等等的降解。因而，進行了相當(dāng)大的努力來開發(fā) 對DPP-IV介導(dǎo)的水解敏感的多肽的類似物和衍生物，以降低通過DPP-IV的降解速度。在本發(fā)明的一個方面，GLP-1肽是DPPIV保護的GLP-1肽。在本發(fā)明的一個方面，相對于利拉魯肽(liraglutide)的穩(wěn)定性，所述GLP-1肽是 對DPP-IV降解被穩(wěn)定化的。在一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的衍生物是DPP-IV保護的衍生物，與利拉魯肽相 比其對于DPP-IV是更有抗性的。肽對二肽基氨肽酶IV的降解的抗性通過以下降解分析來測定肽的等分量(5nmol)在37°C在100 y L 0. 1M三乙胺-HC1緩沖液pH 7. 4中與相當(dāng) 于5mU酶活性的1 y L純化的二肽基氨肽酶IV孵育10-180分鐘。通過添加5 y L的10% 三氟乙酸終止酶反應(yīng)，分離肽降解產(chǎn)物并利用HPLC分析來定量。進行這種分析的一種方法 是混合物施加到Vydac C18 widepore (30nm孔，5 ii m顆粒)250X4. 6mm柱上，以lml/分 鐘的流速用0. 三氟乙酸中線性階式梯度的乙腈洗脫(0%乙腈3分鐘，0-24%乙腈17分 鐘，24-48% 乙腈 1 分鐘)，根據(jù) Siege 1 et al.，Regul.P印t. 1999 ；79 :93_102and Mentlein et al. Eur. J. Biochem. 1993 ；214 :829_35。肽和它們的降解產(chǎn)物可以通過它們在220nm處 (肽鍵)或280nm處(芳香族氨基酸)的吸光度來監(jiān)測，和通過相對于標(biāo)準(zhǔn)物來積分它們的 峰面積來定量。肽被二肽基氨肽酶IV的水解的速率以引起低于10%的肽被水解的孵育時 間來估計。做為選擇，肽對二肽基氨肽酶IV的降解的抗性可以通過以下降解分析來測定
肽的等分量(4nmol)在存在或缺乏1.6%人血清白蛋白的情況下，在37°C在40 y L的0. 085M Tris-HCl緩沖液pH 8. 0中與10. 9mU的純化的二肽基氨肽酶IV孵育22小時。 在0、4和22小時之后，采集10 μ 1的樣品，通過與100 μ 1的三氟乙酸混合來終止反 應(yīng)。分離肽降解產(chǎn)物，使用HPLC分析來定量。進行這種分析的一種方法是混合物施加到 Agilent Zorbax 300SB-C18 (5 μ m 顆粒)150 X 2. Imm 柱上，以 0. 5ml/分鐘的流速用具有 0. 07% TFA的從0. 三氟乙酸到100%乙腈的線性梯度在30分鐘內(nèi)洗脫。肽和它們的降 解產(chǎn)物通過它們在214nm處的吸光度來監(jiān)測，通過積分它們的峰面積來定量。肽對二肽基 氨肽酶IV的穩(wěn)定性作為完整肽的峰面積相對于完整肽與裂解后缺少兩個氨基末端氨基酸 的降解產(chǎn)物的峰面積的總和來測定。在此使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指適合于正常的藥物應(yīng)用，S卩，在患者中不
產(chǎn)生嚴(yán)重的有害事件，等等。在此使用的術(shù)語“賦形劑”是指通常被添加到藥物組合物中的化合物，例如，緩沖 齊U、張度試劑、防腐劑，等等。在此使用的術(shù)語“有效數(shù)量”是指與沒有治療相比對于患者的治療足以有效的劑量。在此使用的術(shù)語“藥物組合物”是指一種產(chǎn)物，其包含根據(jù)本發(fā)明的活性衍生物以 及藥物賦形劑，例如緩沖劑、防腐劑和任選地張度修飾劑和/或穩(wěn)定劑。因而，藥物組合物 在本領(lǐng)域中也稱為藥物制劑。在此使用的術(shù)語“疾病的治療”是指發(fā)生了疾病、狀況或病癥的患者的管理和照 料。治療的目的是對抗疾病、狀況或病癥。治療包括施用根據(jù)本發(fā)明的活性衍生物來消除 或控制疾病、狀況或病癥，以及減輕與疾病、狀況或病癥相關(guān)的癥狀或并發(fā)癥。在另一個方面，本發(fā)明涉及可以同時結(jié)合白蛋白和GLP-I受體的GLP-I肽的衍生 物。在另一個方面，本發(fā)明涉及在存在2%白蛋白的情況下以低于ΙΟΟηΜ、優(yōu)選的低于 30nM的親和力結(jié)合GLP-I受體的GLP-I肽的衍生物。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，當(dāng)比較存在極低濃度(例如 0.005%到0.2% )的人白蛋白的情況下的親和力和存在2%人白蛋白的情況下的親和力 時，其對GLP-I受體的親和力僅部分地降低。在這些條件下結(jié)合親和力的改變低于50倍、 優(yōu)選的低于30倍，更優(yōu)選的低于10倍。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其對于exendin-4通常所見的化學(xué) 降解、特別是氧化和脫酰胺作用是穩(wěn)定的。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其具有對受體的高效價。對于具有 低于IOOnM的白蛋白結(jié)合親和力的非常強的白蛋白結(jié)合類似物，在cAMP分析中，GLP-I效 價是好于3微摩爾，優(yōu)選的效價是好于1微摩爾。對于具有低于500nM的白蛋白結(jié)合親和力的非常強的白蛋白結(jié)合衍生物，在cAMP 分析中，GLP-I效價是好于1微摩爾，優(yōu)選的效價是好于0. 2微摩爾。在另一個方面，本發(fā)明涉及具有高白蛋白結(jié)合親和力的GLP-I肽的衍生物。本發(fā) 明的衍生物具有低于1微摩爾的白蛋白結(jié)合親和力。更優(yōu)選的，本發(fā)明的衍生物具有低于 500nM、再更優(yōu)選的低于200nM或甚至低于IOOnM的白蛋白結(jié)合親和力。白蛋白結(jié)合親和力可以利用以下的分析來測量
白蛋白結(jié)合分析GLP-I衍生物對人血清白蛋白(HSA)的親和力通過競爭性閃爍親近分析(SPA)來 測量。鏈霉抗生物素蛋白-SPA珠子(GE HealthcareRPNQ0009)與生物素化的HSA孵育5小 時。珠子用緩沖液洗滌來除去未結(jié)合的HSA。在含有IOOmM HepesUOOmM NaCl、IOmMMgSO4、 0. 025% Tween-20, pH 7. 4的緩沖液中，將所述珠子與125I標(biāo)記的?；腉LP-I類似物，例 如N- ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基_4-(17_羧基-十七烷酰基氨基)丁酰氨 基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠]Aib8，125I-Tyrl9，Arg34] GLP-I (7-37)或 N- ε 37- [2- (2- [2- ((S) -4- ((S) -4-(12- [4- (16- (1Η-四唑 ~5~ 基)十六烷 ?；被酋；?丁酰氨基]十二烷?；被?-4-羧基丁酰氨基)-4-羧基丁酰氨基)乙氧 基]乙氧基)乙?；鵠[Aib8,125I-Tyrl9, Glu22, Arg26,34, Lys37]GLP _l (7-37)-NH2 混合。 混合物吸移到 Perkin Elmer Optiplate-96 6005290 (100 μ 1 每孔)的反應(yīng)孔中，ΙΟΟμΙ 的 要測量的GLP-I衍生物的稀釋系列添加到相同的緩沖液中。在室溫下溫和搖動20小時后， 平板被離心，在TopCoimter上計數(shù)。作為GLP-I衍生物濃度的函數(shù)標(biāo)繪結(jié)合的cpm，競爭曲 線的EC5tl值用作衍生物對HSA的親和力的度量。在另一個方面，本發(fā)明涉及具有高親和力結(jié)合分離的GLP-IR受體的N-末端細胞 外結(jié)構(gòu)域(nGLP-lR)的GLP-I肽衍生物。所述親和力通過置換125I-EXendin-4(9_39)結(jié)合 nGLP-lR的能力來測量。在該分析中，Exendin-4以5nM的IC5tl值結(jié)合nGLP-lR，GLP-I (7-37) 以1120nM的IC5tl值結(jié)合nGLP-lR，利拉魯肽以IOOOnM的IC5tl值結(jié)合nGLP-lR。在一個方 面，本發(fā)明的衍生物以比利拉魯肽更低的IC5tl值結(jié)合nGLP-lR。更優(yōu)選的，本發(fā)明的衍生物 以低于IOOnM的IC5tl值結(jié)合nGLP-lR，再更優(yōu)選的低于ΙΟηΜ、或甚至低于5nM。與nGLP-lR的結(jié)合通過以下的分析測量如早先描述的制備蛋白質(zhì) nGLP-IR(Runge et al 2007)，生物素化，在鏈霉抗生物素蛋白包被的SPA珠子上固定。在 0. IM NaHC03中的nGLPIR利用75 μ gBNHS (Sigma H1759)生物素化為Img蛋白質(zhì)。生物素 化的nGLPIR隨后相對于PBS來透析。所有試劑和衍生物在具有0. 05% v/v Tween20的PBS 中稀釋。結(jié)合分析在200 μ 1的最終體積中在96孔OptiPlates (PerkinElmer 6005290)中 進行。每個反應(yīng)孔含有2mg的鏈霉抗生物素蛋白包被的SPA珠子(PerkinElmer RPNQ007)、 0. Ipmol 生物素化的 nGLPIR、50pCi125I-Exendin (9-39)和終濃度從 IOOOnM 到 0. 064nM 的測 試肽。平板在RT在搖動器上孵育3小時。SPA顆粒通過在1500rpm離心10分鐘來旋轉(zhuǎn)沉 降，平板在 TopCount-NXT(PerkinElmer)中計數(shù)。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，相對于利拉魯肽，其在嚙齒動物中 和在非嚙齒動物模型中具有實質(zhì)上改善的末端半衰期。在本發(fā)明的一個方面，相對于利拉魯肽，在嚙齒動物或在非嚙齒動物模型中的終 末半衰期被改善至至少3倍。在本發(fā)明的另一個方面，相對于利拉魯肽，在非嚙齒動物模型中的終末半衰期被 改善至至少6倍。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其在i. v.施用給大鼠后具有至少 10小時的體內(nèi)半衰期。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其在s. c.施用給迷你豬后具有至 少50小時的體內(nèi)半衰期，優(yōu)選的，在s. c.施用給迷你豬后具有至少80小時的體內(nèi)半衰期。
在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其可以配制為適合于肺部施用的顆粒。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其在中性pH值下，最優(yōu)選的在6-8 的范圍內(nèi)是化學(xué)上和物理上穩(wěn)定的。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其有很少的或沒有聚集的傾向。在 一個方面，當(dāng)在硫黃素分析中測試時，相對于利拉魯肽，聚集傾向被顯著地改善了。在另一個方面，本發(fā)明涉及GLP-I肽的衍生物，其適合于肺部遞送。這 可以是關(guān)于 對肺部制劑有用的物理或化學(xué)方面。做為選擇，衍生物對于氣道和肺中酶的降解是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的實施方式中，實現(xiàn)了上述特征的組合。在此使用的術(shù)語“白蛋白結(jié)合部分”是指與人血清白蛋白非共價地結(jié)合的殘基。附 著于治療性多肽的白蛋白結(jié)合殘基一般具有低于1微摩爾的白蛋白結(jié)合親和力，優(yōu)選的低 于500nM、再更優(yōu)選的低于200nM或甚至低于ΙΟΟηΜ。在含有4-40個碳原子、具有末端酸性基團的線性和分支親脂(lipohophillic)部 分中，許多白蛋白結(jié)合殘基是已知的。在此使用的術(shù)語“親水的接頭”是指將肽和白蛋白結(jié)合殘基與化學(xué)部分分隔的間 隔區(qū)，所述化學(xué)部分包含至少5個非氫原子，其中它們的30-50%是N或0。在以下的式子中，來自附著的基團的末端鍵被認為是附著鍵，并且除非聲明了，不 以亞甲基基團結(jié)束。組合物和藥物用途本發(fā)明的另一個目的是提供包含以0. lmg/ml到25mg/ml的濃度存在的根據(jù)本發(fā) 明的衍生物的藥物制劑，并且其中所述制劑具有3. 0到9. 0的pH值。制劑可以進一步包含 緩沖系統(tǒng)、防腐劑、張度試劑、螯合劑、穩(wěn)定劑和表面活性劑。在本發(fā)明的一個實施方式中，所述藥物制劑是水性制劑，即包含水的制劑。這樣的 制劑一般是溶液或懸浮液。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述藥物制劑是水溶液。術(shù)語“水性制劑”被定義為包含至少50% w/w水的制劑。同樣地，術(shù)語“水性溶液” 被定義為包含至少50% w/w水的溶液，術(shù)語“水性懸浮液”被定義為包含至少50% w/w水 的懸浮液。在另一個實施方式中，所述藥物制劑是凍干的制劑，在使用前醫(yī)師或患者向其中 添加溶劑和/或稀釋劑。在另一個實施方式中，所述藥物制劑是不需要任何在先的溶解隨時可使用的干燥 的制劑(例如，凍干的或噴霧干燥的)。在進一步的方面，本發(fā)明涉及藥物制劑，包含根據(jù)本發(fā)明的衍生物和緩沖劑的水 溶液，其中所述衍生物以0. lmg/ml或更高的濃度存在，并且其中所述制劑具有約3. 0到約 9.0的pH值。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑的pH值是從約7. 0到約9. 5。在本發(fā)明的另 一個實施方式中，制劑的PH值是從約3.0到約7.0。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑 的PH值是從約5. 0到約7. 5。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑的pH值是從約7. 5到約 9.0。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑的pH值是從約7.5到約8.5。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑的PH值是從約6. O到約7. 5。在本發(fā)明的另一個實施方式中，制劑的pH 值是從約6. O到約7. O。在另一個實施方式中，藥物制劑是8. O到8. 5。在本發(fā)明的實施方式中，每個施用的劑量含有0. Olmg-IOmg的活性衍生物。在一 個實施方式中，施用的劑量含有超過0. 05mg的活性衍生物。在一個實施方式中，施用的劑 量含有超過0. Img的活性衍生物。在一個實施方式中，施用的劑量含有達到IOmg的活性衍 生物。在一個實施方式中，施用的劑量含有達到9mg的活性衍生物。在一個實施方式中，施 用的劑量含有達到8mg的活性衍生物。在一個實施方式中，施用的劑量含有達到7mg的活 性衍生物。在一個實施方式中，施用的劑量含有達到6mg的活性衍生物。在一個實施方式 中，施用的劑量含有達到5mg的活性衍生物。在一個實施方式中，施用的劑量含有從0. 2mg 到5mg的活性衍生物。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述緩沖劑選自由乙酸鈉、碳酸鈉、檸 檬酸鹽、 雙甘氨肽、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥甲 基)_氨基甲烷、N-二 [羥乙基]甘氨酸、N-三(羥甲基)甲基甘氨酸、蘋果酸、琥珀酸鹽、 順丁烯二酸、延胡索酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物構(gòu)成的組。這些特定緩沖劑的每一個 構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方式。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含藥學(xué)上可接受的防腐劑。 在本發(fā)明的進一步的實施方式中，防腐劑選自由苯酚、ο-甲酚、m-甲酚、ρ-甲酚、對羥基苯 甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、對羥基苯甲酸丁酯、2-苯乙醇、苯甲醇、氯丁醇 和thiomerosal、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲(imidurea)、chlorohexidine、脫氫醋酸鈉、氯 甲酚、對羥基苯甲酸乙酯、芐索氯銨、chlorphenesine (3p-氯苯氧基丙烷_1，2- 二醇)或其 混合物構(gòu)成的組。在一個實施方式中，所述防腐劑是苯酚或m-甲酚。在本發(fā)明的進一步的 實施方式中，所述防腐劑以0. lmg/ml到20mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進一步的實施方 式中，所述防腐劑以0. lmg/ml到5mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所 述防腐劑以5mg/ml到10mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述防腐劑 以10mg/ml到20mg/ml的濃度存在。這些特定防腐劑的每一個構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實 施方式。防腐劑在藥物組合物中的使用是技術(shù)人員公知的。為了方便起見，參考Remington The Science and Practice ofPharmacy，19th edition，1995。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含等滲試劑。在本發(fā)明的進 一步的實施方式中，等滲試劑選自由鹽(例如，氯化鈉)、糖或糖醇、氨基酸(例如，L-甘氨 酸、L-組氨酸、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸)、糖醇(例如甘油醇 (甘油)、1，2_丙二醇(丙二醇)、1，3_丙二醇、1，3_ 丁二醇)聚乙二醇(例如PEG400)或其 混合物構(gòu)成的組。在一個實施方式中，所述等滲試劑是丙二醇?？梢允褂萌魏翁穷悾鐔?糖、二糖或多糖，或水溶性的葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、 乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、茁霉多糖、糊精、環(huán)糊精、alfa和beta HPCD、可溶性淀粉、羥乙 基淀粉和羧甲基纖維素-Na。在一個實施方式中，糖添加劑是蔗糖。糖醇被定義為具有至少 一個-OH基團的C4-C8烴類，包括，例如，甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、衛(wèi)矛醇、木糖醇和 阿拉伯醇。在一個實施方式中，糖醇添加劑是甘露醇。上述的糖類或糖醇可以單獨地或組 合地使用。對于使用的數(shù)量沒有固定的限制，只要糖類或糖醇可溶于液體制品中，并且不會 不利地影響利用本發(fā)明的方法實現(xiàn)的穩(wěn)定效果。在一個實施方式中，糖類或糖醇濃度在約lmg/ml和約150mg/ml之間。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述等滲試劑以lmg/ml到 50mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述等滲試劑以lmg/ml到7mg/ml 的濃度存在。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述等滲試劑以5mg/ml到7mg/ml的濃度 存在。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述等滲試劑以8mg/ml到24mg/ml的濃度存在。 在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述等滲試劑以25mg/ml到50mg/ml的濃度存在。這些 特定等滲試劑的每一個構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方式。在藥物組合物中等滲試劑的 使用是技術(shù)人員公知的。為了方便起見，參考Remington :The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, 1995。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含螯合劑。在本發(fā)明的進一 步的實施方式中，所述螯合劑選自乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸和天冬氨酸的鹽和其混合 物。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，螯合劑以0. lmg/ml到5mg/ml的濃度存在。在本發(fā) 明的進一步的實施方式中，螯合劑以0. lmg/ml到2mg/ml的濃度存在。在本發(fā)明的進一步 的實施方式中，螯合劑以2mg/ml到5mg/ml的濃度存在。這些特定螯合劑的每一個構(gòu)成了 本發(fā)明的可選擇的實施方式。螯合劑在藥物組合物中的使用是技術(shù)人員公知的。為了方便 起見，參考 Remington :The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition，1995。 在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑在藥物 組合物中的使用是技術(shù)人員公知的。為了方便起見，參考Remington :The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995。更特別地，本發(fā)明的組合物是穩(wěn)定的液體藥物組合物，它的治療活性成分包括多 肽，所述多肽在液體藥物制劑的保存期間可能展現(xiàn)聚集物形成?！熬奂镄纬伞笔侵敢鸸丫垠w形成的多肽分子之間的物理相互作用，其可以是仍 然可溶的，或是從溶液沉淀的大的可見的聚集物?！霸诒４嫫陂g”意指液體藥物組合物或制 劑一旦被制備，不立即施用給受試者。然而，在制備之后，它被包裝用于保存，處于液態(tài)、冷 凍狀態(tài)、或干燥的形式，用于以后重構(gòu)成液態(tài)或適合于施用給受試者的其他形式?！案稍锏?形式”意指液體藥物組合物或制劑被干燥，通過冷凍干燥(即，凍干；參見，例如，Williams and Polli (1984) J. ParenteralSci. Technol. 38 :48_59)、噴霧干燥(參見 Masters (1991) in Spray-DryingHandbook(5th ed ；Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), pp.491-676 ；Broadhead et al. (1992)Drug Devel. Ind. Pharm. 18 1169-1206 ；and Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11 12-20)或風(fēng)干(Carpenterand Crowe (1988) Cryobiology 25 :459_470 ；and Roser (1991)Biopharm. 4 :47_53)。在液體藥物組合物的保 存期間多肽的聚集物形成可能不利地影響多肽的生物學(xué)活性，引起藥物組合物的治療效力 的損失。此外，聚集物形成可以引起其他問題，例如，當(dāng)含有多肽的藥物組合物利用輸注系 統(tǒng)來施用時，管道、膜或泵的阻塞。本發(fā)明的藥物組合物可以進一步包含足以降低組合物的保存期間多肽的聚集物 形成的、一定數(shù)量的氨基酸堿?！鞍被釅A”是指氨基酸或氨基酸的組合，其中任何給定的 氨基酸以它的游離堿形式或以它的鹽形式存在。當(dāng)使用氨基酸的組合時，所有的氨基酸可 以以它們的游離堿形式存在，所有的可以以它們的鹽形式存在，或某一些以它們的游離堿 形式存在而其他的以它們的鹽形式存在。在一個實施方式中，在制備本發(fā)明的組合物中使 用的氨基酸是帶有帶電側(cè)鏈的那些，例如精氨酸、賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(例如，甲硫氨酸、組氨酸、咪唑、精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸和其 混合物)的任何立體異構(gòu)體(即，L、D或其混合物)或這些立體異構(gòu)體的組合，可以在本發(fā) 明的藥物組合物中存在，只要特定的氨基酸以它的游離堿形式或它的鹽形式存在。在一個 實施方式中，使用L-立體異構(gòu)體。本發(fā)明的組合物還可以用這些氨基酸的類似物來配制。 “氨基酸類似物”是指天然存在的氨基酸的衍生物，其帶來在本發(fā)明的液體藥物組合物的保 存期間降低多肽的聚集物形成的期望的效果。適合的精氨酸類似物包括，例如，氨基胍、鳥 氨酸和N-單乙基L-精氨酸，適合的甲硫氨酸類似物包括乙硫氨酸和buthionine，適合的半 胱氨酸類似物包括S-甲基-L半胱氨酸。對于其他氨基酸，氨基酸類似物以它們的游離堿 形式或它們的鹽形式摻入到組合物中。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，氨基酸或氨基酸 類似物以一定濃度使用，所述濃度足以防止或延緩蛋白質(zhì)的聚集。
在本發(fā)明的進一步的實施方式中，甲硫氨酸(或其他含硫的氨基酸或氨基酸類似 物)可以添加來抑制甲硫氨酸殘基向甲硫氨酸亞砜的氧化，當(dāng)作為治療試劑的肽是包含對 這樣的氧化敏感的至少一個甲硫氨酸殘基的多肽時?！耙种啤笔侵鸽S著時間的過去甲硫氨酸 氧化的物質(zhì)的最小的積累。抑制甲硫氨酸氧化引起多肽在它的適當(dāng)?shù)姆肿有问降母嗟拇?留?？梢允褂眉琢虬彼岬娜魏瘟Ⅲw異構(gòu)體(L或D)或其組合。添加的數(shù)量應(yīng)當(dāng)是足夠抑制 甲硫氨酸殘基的氧化的數(shù)量，從而甲硫氨酸亞砜的數(shù)量對于管理機構(gòu)是可接受的。一般地， 這意味著組合物包含不超過約10%到約30%的甲硫氨酸亞砜。一般地，這可以通過添加甲 硫氨酸、從而添加的甲硫氨酸與甲硫氨酸殘基的比例從約1 1到約1000 1，例如10 1 到約100 1，來實現(xiàn)。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含選自高分子量聚合物或低 分子化合物的組的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，穩(wěn)定劑選自聚乙二醇(例如，PEG 3350)、聚乙 烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基/氧化纖維素或其衍生物(例如，HPC、HPC-SL、HPC-L和 HPMC)、環(huán)糊精、包含硫的物質(zhì)如單硫代甘油、巰基乙酸和2-甲基硫乙醇和不同的鹽(例如， 氯化鈉)。這些特定穩(wěn)定劑的每一個構(gòu)成了本發(fā)明的可選擇的實施方式。所述藥物組合物還可以包含另外的穩(wěn)定劑，其進一步增強其中的治療活性多肽的 穩(wěn)定性。本發(fā)明特別感興趣的穩(wěn)定劑包括，但不限于，甲硫氨酸和EDTA，其保護多肽對抗甲 硫氨酸氧化，以及非離子表面活性劑，其保護多肽對抗與凍融或機械剪切相關(guān)的聚集。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含表面活性劑。在本發(fā)明的 另一個實施方式中，所述藥物組合物包含兩種不同的表面活性劑。在此使用的術(shù)語“表面活 性劑”是指包含水溶性的(親水性的)部分、頭部和脂溶性的(親油性的)區(qū)段的任何分子 或離子。表面活性劑優(yōu)選地在接觸面積累，其中親水性部分朝向水(親水性的相)親油性 部分朝向油或疏水的相(即，玻璃、空氣、油，等等)。表面活性劑開始形成膠束的濃度被稱 為臨界膠束濃度或CMC。此外，表面活性劑降低了液體的表面張力。表面活性劑也稱為兩親 化合物。術(shù)語“洗滌劑”是一般用于表面活性劑的異名。陰離子表面活性劑可以選自下組鵝去氧膽酸、鵝去氧膽酸鈉鹽、膽酸、去氫膽酸、 去氧膽酸、去氧膽酸甲酯、毛地黃皂苷、毛地黃毒苷配基、N, N-二甲基十二烷基胺N-氧化 物、多庫酯鈉、甘氨鵝去氧膽酸鈉、甘氨膽酸水合物、甘氨脫氧膽酸一水合物、甘氨脫氧膽酸鈉鹽、甘氨脫氧膽酸鈉鹽、甘氨石膽酸3-硫酸二鈉鹽、甘氨石膽酸乙酯、N-十二烷?；“?酸鈉鹽、N-十二烷?；“彼徕c鹽、N-十二烷?；“彼?、N-十二烷酰基肌氨酸、十二烷基 硫酸鋰、LugolU-辛烷磺酸鈉鹽、1-辛烷磺酸鈉鹽、1- 丁烷磺酸鈉、1-癸烷磺酸鈉、1-十二 烷基磺酸鈉、1-庚烷磺酸鈉、1-庚烷磺酸鈉、1-壬烷磺酸鈉、1-丙烷磺酸鈉一水合物、2-溴 乙烷磺酸鈉、膽酸鈉水合物、?；蚓d羊膽汁、膽酸鈉水合物、絡(luò)膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、十二烷 基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、己烷磺酸鈉、辛基硫酸鈉、戊烷磺酸鈉、牛磺膽酸鈉、牛磺鵝脫 氧明酸鈉鹽、?；侨パ跄懰徕c鹽一水合物、?；鞘懰?-硫酸鹽二鈉鹽、牛熊去氧膽酸鈉 鹽、Trizma 十二烷基硫酸鹽、DSS(多庫酯鈉、CAS登記號[577-11-7])、多庫酯鈣，CAS登 記號[128-49-4])、多庫酯鉀，CAS登記號[7491-09-0])、SDS(十二烷基硫酸鈉或月桂烷基 硫酸鈉)、十二烷基磷酸膽堿(F0S-膽堿-12)、癸基磷酸膽堿(F0S-膽堿-10)、壬基磷酸膽 堿(F0S-膽堿-9)、二棕櫚酰磷脂酸、辛酸鈉和/或熊去氧膽酸。陽離子表面活性劑可以選自下組烷基三甲基溴化銨、苯扎氯銨、苯扎氯銨、芐基 二甲基十六烷基氯化銨、芐基二甲基十四烷基氯化銨、芐基三甲基四氯碘酸銨、二甲基雙 十八烷基溴化銨、十二烷基乙基二甲基溴化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基溴 化銨、乙基十六烷基二甲基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨、聚氧 乙烯(IO)-N-動物脂-1，3-二氨基丙烷 、通佐溴胺(Thonzoniumbromide)和/或三甲基 (十四烷基)溴化銨。非離子表面活性劑可以選自下組BigCHAP、二(聚乙二醇二 [咪唑基羰基])、 嵌段共聚物，如聚氧化乙烯/聚氧化丙烯嵌段共聚物，例如泊洛沙姆(poloxamer)、泊洛 沙姆 188 和泊洛沙姆 407、Brij 35，Brij 56，Brij 72，Brij 76，Brij 92V, Brij 97，Brij 58P,
Cremophor EL，十乙二醇單十二烷基醚、N-癸酰基N-甲基葡糖胺、η-十二烷酰基-N-甲基 葡糖酰胺、烷基-多聚葡糖苷、乙氧基化蓖麻油、七乙二醇單癸基醚、七乙二醇單十二烷基 醚、七乙二醇單十四烷基醚、六乙二醇單十二烷基醚、六乙二醇單十六烷基醚、六乙二醇單 十八烷基醚、六乙二醇單十四烷基醚、Igepal CA-630、Igepal CA-630、甲基-6-0-(N-庚基 氨基甲?；?-beta-D-吡喃葡萄糖苷、九乙二醇單十二烷基醚、N-壬?；鵢N_甲基葡糖胺、 N-壬?；?N-甲基葡糖胺、八乙二醇單癸基醚、八乙二醇單十二烷基醚、八乙二醇單十六烷 基醚、八乙二醇單十八烷基醚、八乙二醇單十四烷基醚、辛基-β -D-吡喃葡萄糖苷、五乙二 醇單癸基醚、五乙二醇單十二烷基醚、五乙二醇單十六烷基醚、五乙二醇單己基醚、五乙二 醇單十八烷基醚、五乙二醇單辛基醚、聚乙二醇二環(huán)氧甘油醚、聚乙二醇醚W-1、聚氧乙烯 10十三烷基醚、聚氧乙烯100硬脂酸鹽、聚氧乙烯20異十六烷基醚、聚氧乙烯20油基醚、 聚氧乙烯40硬脂酸鹽、聚氧乙烯50硬脂酸鹽、聚氧乙烯8硬脂酸鹽、聚氧乙烯二(咪唑基 羰基)、聚氧乙烯25丙二醇硬脂酸鹽、來自皂樹屬樹皮的皂角苷、Span 20，Span 40，Span 60，Span 65，Span 80，Span 85，Tergitol, Type 15-S-12，Tergitol, Type 15-S-30， Tergitol,Type 15_S_5, Tergitol,Type 15_S_7, Tergitol, Type 15_S_9,Tergitol,Type NP-10,Tergitol,Type NP-4,Tergitol,Type NP-40,Tergitol,Type NP-7,Tergitol,Type NP-9，十四烷基-β -D-麥芽糖苷、四乙二醇單癸基醚、四乙二醇單十二烷基醚、四乙二醇單 十四烷基醚、三乙二醇單癸基醚、三乙二醇單十二烷基醚、三乙二醇單十六烷基醚、三乙二 醇單辛基醚、三乙二醇單十四燒基醚、Triton CF-21，Triton CF-32，Triton DF-12，Triton DF-16,Triton GR-5M,Triton QS-15,Triton QS-44,Triton X-100,Triton X-102,TritonX-15, Triton X—151，Triton X—200，Triton X—207，Triton X—100，Triton 14，Triton X-165 溶液，Triton X-305 溶液，Triton X-405，Triton X-45, Triton X-705-70, TWEEN 20，TWEEN 40, TWEEN 60, TWEEN 6, TWEEN 65，TWEEN 80，TWEEN 81, TWEEN 85，
Tyloxapol，鞘磷脂(鞘磷脂)和鞘糖脂(神經(jīng)酰胺、神經(jīng)節(jié)苷脂)、磷脂和/或n_十一烷基 β-D-吡喃葡萄糖苷。兩性離子表面活性劑可以選自下組CHAPS、CHAPS0、3_(癸基二甲基銨)丙烷磺 酸內(nèi)鹽、3-(十二烷基二甲基銨)丙烷磺酸內(nèi)鹽、3-(十二烷基二甲基銨)丙烷磺酸內(nèi)鹽、 3-(N，N-二甲基肉豆蔻基銨)丙烷磺酸鹽、3-(N，N-二甲基十八烷基銨)丙烷磺酸鹽、3-(N， N-二甲基辛基銨)丙烷磺酸內(nèi)鹽、3-(N，N-二甲基棕櫚基銨)丙烷磺酸鹽、N-烷基N，N-二 甲基銨-1-丙烷磺酸鹽、3-cholamido-l-丙基二甲基銨丙烷磺酸鹽、十二烷基磷酸膽 堿、十四烷?；苎字Ｄ憠A、兩性試劑3-12 (N-十二烷基-N，N- 二甲基-3-銨基-1-丙 烷磺酸鹽)、兩性試劑3-10 (3-(癸基二甲基銨)丙烷磺酸內(nèi)鹽)、兩性試劑3-08 (3-(辛基 二甲基銨)丙烷磺酸鹽)、甘油磷脂(卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰絲氨酸 )、甘油糖脂(吡喃半 乳糖苷)、溶血磷脂酰基和磷脂酰膽堿的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物 例如，溶血磷脂酰膽堿的十二烷?；褪耐轷；苌?、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、和極性首 基的修飾物，也就是膽堿、乙醇胺、磷脂酸、絲氨酸、蘇氨酸、甘油、肌醇、溶血磷脂酰絲氨酸 和溶血磷脂酰蘇氨酸、酰肉堿和衍生物、賴氨酸、精氨酸或組氨酸的Nbrta?；难苌?，或 賴氨酸或精氨酸的側(cè)鏈?；难苌?，包含賴氨酸、精氨酸或組氨酸與中性或酸性氨基酸 的任何組合的二肽的Nbrta?；难苌?，包含中性氨基酸和兩個帶電氨基酸的任何組合的 三肽的Nbrta?；难苌?，或所述表面活性劑可以選自咪唑啉衍生物、長鏈脂肪酸和其鹽 C6-C12 (例如油酸和辛酸)、N-十六烷基-N，N- 二甲基-3-銨基-1-丙烷磺酸鹽、陰離子的 (烷基_芳基-磺酸鹽)單價的表面活性劑、棕櫚酰溶血磷脂?；?L-絲氨酸、溶血磷脂(例 如，乙醇胺、膽堿、絲氨酸或蘇氨酸的1-酰基-sn-甘油基-3-磷酸酯)或其混合物的組。在此使用的術(shù)語“烷基_多聚葡糖苷”涉及直鏈或分支的C5_2(|-烷基、-鏈烯基 或-炔基鏈，其被一個或更多個糖苷部分，例如麥芽糖苷、糖等等取代。這些烷基-多聚葡糖 苷的實施方式包括(6_18烷基多聚葡糖苷。這些烷基多聚葡糖苷的特定的實施方式包括偶數(shù) 的碳鏈，例如C6、C8、C1(1、C12、C14、C16、C18和C2tl烷基鏈。糖苷部分的特定實施方式包括吡喃糖 苷、吡喃葡萄糖苷、麥芽糖苷、麥芽三糖苷和蔗糖。在本發(fā)明的實施方式中，低于6個糖苷部 分附著到所述烷基基團。在本發(fā)明的實施方式中，低于5個糖苷部分附著到所述烷基基團。 在本發(fā)明的實施方式中，低于4個糖苷部分附著到所述烷基基團。在本發(fā)明的實施方式中， 低于3個糖苷部分附著到所述烷基基團。在本發(fā)明的實施方式中，低于2個糖苷部分附著 到所述烷基基團。烷基-多聚葡糖苷的具體實施方式
有烷基糖苷，例如η-癸基β-D-吡喃 葡萄糖苷、癸基β-D-吡喃麥芽糖苷、十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷、η-十二烷基β-D-麥 芽糖苷、η-十二烷基β-D-麥芽糖苷、η-十二烷基β-D-麥芽糖苷、十四烷基β-D-吡喃葡 萄糖苷、癸基β-D-麥芽糖苷、十六烷基β-D-麥芽糖苷、癸烷基β-D-麥芽三糖苷、十二烷 基β-D-麥芽三糖苷、十四烷基β-D-麥芽三糖苷、十六烷基β-D-麥芽三糖苷、η-十二烷 基_蔗糖、η-癸基-蔗糖、蔗糖單癸酸酯、蔗糖單月桂酸酯、蔗糖單豆蔻酸酯和蔗糖單棕櫚 酸酯。表面活性劑在藥物組合物中的使用是技術(shù)人員公知的。為了方便起見，參考Remington :The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，所述制劑進一步包含蛋白酶抑制物，例如 EDTA(乙二胺四乙酸)和鹽酸苯甲脒，但是其他商業(yè)上可獲得的蛋白酶抑制物也可以使用。 蛋白酶抑制物的使用在包含蛋白酶的酶原的藥物組合物中是特別有用的，以抑制自催化。
可能的是，其他成分可以存在于本發(fā)明的肽藥物制劑中。這些其他成分可以包 括潤濕劑、乳化劑、抗氧化劑、填充劑、張度修飾劑、螯合劑、金屬離子、油質(zhì)運載體、蛋白質(zhì) (例如，人血清白蛋白、明膠或蛋白質(zhì))和兩性離子(例如，氨基酸，如甜菜堿、牛磺酸、精氨 酸、甘氨酸、賴氨酸和組氨酸)。當(dāng)然，這些其他成分不應(yīng)不利地影響本發(fā)明的藥物制劑的總 體穩(wěn)定性。含有根據(jù)本發(fā)明的衍生物的藥物組合物可以在幾個位點施用給需要這樣的治療 的患者，例如，在局部的位點，例如，皮膚和粘膜位點，在繞過吸收的位點，例如，在動脈、靜 脈、心臟中施用，以及在涉及吸收的位點，例如，在皮膚、皮膚下、肌肉中或腹部內(nèi)施用。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的施用可以通過幾種施用途徑，例如，舌的、舌下的、口 腔的、口中的、口服、胃腸內(nèi)的、鼻部的、肺部的，例如，通過細支氣管和肺泡或其組合、表皮 的、真皮的、經(jīng)皮的、陰道的、直腸的、眼的，例如通過結(jié)膜、輸尿管的和胃腸外的途徑施用給 需要這樣的治療的患者。本發(fā)明的組合物可以在幾種劑型中施用，例如，作為溶液、懸浮液、乳劑、微乳劑、 多重乳劑、泡沫、油膏劑、糊劑、硬膏劑、軟膏劑、片劑、糖衣片劑、口香糖、沖洗劑、膠囊劑、 例如，硬明膠膠囊和軟明膠膠囊、栓劑、直腸膠囊劑、滴劑、凝膠、噴霧劑、粉劑、氣霧劑、吸入 齊U、滴眼劑、眼用軟膏、眼用沖洗劑、陰道的陰道栓劑、陰道的環(huán)、陰道的軟膏劑、注射溶液、 原位轉(zhuǎn)化溶液，例如，原位凝膠、原位凝固、原位沉淀、原位結(jié)晶，輸注溶液和植入劑。本發(fā)明的組合物可以例如，通過共價的、疏水的和靜電相互作用，進一步化合于或 附著于藥物載體、藥物遞送系統(tǒng)和先進的藥物遞送系統(tǒng)，以進一步增強本發(fā)明的衍生物的 穩(wěn)定性、提高生物利用率、提高溶解度、降低副作用、實現(xiàn)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的時間治療， 和提高患者的順應(yīng)性，或其任何組合。載體、藥物遞送系統(tǒng)和先進的藥物遞送系統(tǒng)的實例包 括但不限于，聚合物，例如纖維素和衍生物，多糖，例如葡聚糖和衍生物，淀粉和衍生物、聚 (乙烯醇)、丙烯酸酯和異丁烯酸酯聚合物、聚乳酸和聚乙醇酸和其嵌段共聚物、聚乙二醇、 載體蛋白，例如白蛋白，凝膠，例如，熱凝膠化系統(tǒng)，例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的嵌段共聚 物，膠束、脂質(zhì)體、微球體、納米顆粒、液晶和其分散體、L2相和其分散體、脂質(zhì)-水系統(tǒng)中相 特性領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，聚合的膠束、多重乳液、自乳化的、自微乳化的、環(huán)糊精和其衍生 物以及樹枝狀高分子(dendrimers)。本發(fā)明的組合物在固體、半固體、粉劑和溶液的制劑中是有用的，用于本發(fā)明的衍 生物的肺部施用的，利用，例如，計量的劑量吸入器、干粉吸入器和噴霧器，這都是本領(lǐng)域技 術(shù)人員公知的設(shè)備。本發(fā)明的組合物在控制的、持續(xù)的、延長的、延遲的和緩慢釋放的藥物遞送系統(tǒng)的 制劑中是特別有用的。更具體地，而不是受限的，組合物在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的胃腸外的 控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)(兩種系統(tǒng)都引起施用數(shù)量的多倍降低)的制劑中是有用的。再 更優(yōu)選的是皮下施用的控制釋放和持續(xù)釋放系統(tǒng)。不限制本發(fā)明的范圍，有用的控制釋放 系統(tǒng)和組合物的實例有水凝膠、油質(zhì)凝膠、液晶、聚合的膠束、微球體、納米顆粒。
產(chǎn)生對本發(fā)明的組合物有用的控制釋放系統(tǒng)的方法包括但不限于，結(jié)晶、凝縮、 共同結(jié)晶、沉淀、共同沉淀、乳化、分散、高壓勻質(zhì)化、包囊、噴霧干燥、微膠囊包裹、凝聚、 相分離、溶劑蒸發(fā)來產(chǎn)生微球體、擠壓和超臨界流體過程。一般參考藥物控制釋放手冊 (Handbook of Pharmaceutical Controlled Release)(ffise,D. L. ,ed. Marcel Dekker,New York,2000)禾口Drug and the PharmaceuticalSciences vol. 99 Protein Formulation and Delivery(MacNally, E. J. , ed. Marcel Dekker, New York,2000)。胃腸外施用可以通過憑借注射器，任選地筆樣注射器的皮下的、肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi) 的或靜脈內(nèi)注射來進行。做為選擇，胃腸外施用可以通過輸注泵進行。進一步的選擇是一 種組合物，其可以是溶液或懸浮液或粉劑，用于以鼻部或肺部液體或粉劑噴霧的形式施用 本發(fā)明的衍生物。作為更進一步的選擇，含有本發(fā)明的衍生物的藥物組合物也可以適應(yīng)于 經(jīng)皮的施用，例如，通過無針頭的注射或來自貼片，任選地離子透入貼片，或穿粘膜的，例如 口腔的施用。本發(fā)明的衍生物可以使用適合于肺部藥物遞送的任何已知類型的設(shè)備、經(jīng)由肺部 的途徑在載體如溶液、懸浮液或干粉中施用。這些的實例包括但不限于，用于肺部藥物遞 送的三種一般類型的氣霧劑發(fā)生器，可以包括噴射或超聲噴霧器、計量給藥吸入器，或干粉 吸人器(參照 Yu J, Chien Yff. Pulmonary drug delivery :Physiologic andmechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14 (4) (1997)395—453)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的測試方法，顆粒的空氣動力學(xué)直徑(da)被定義為單位密度(lg/cm3)的 參考標(biāo)準(zhǔn)球狀顆粒的幾何當(dāng)量直徑。在最簡單的情況下，對于球狀顆粒，da作為密度比的 平方根的函數(shù)與分度圓直徑(reference diameter) (d)相關(guān)，如以下描述的對非球形顆粒進行這種關(guān)系式的修改(參照Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug deliveryusing large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84 (2) (1998) 379—385)。術(shù)語 “MMAD” 禾口 “MMEAD” 是本領(lǐng)域 中很好地描述的禾口公知的(參照 Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R and represents ameasure of the median value of an aerodynamic particle size distribution. Recent advances in pulmonary drug delivery using large,porous inhaledparticles. J Appl Physiol 84 (2) (1998) 379-385)。質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑(MMAD)和質(zhì)量中值 有效空氣動力學(xué)直徑(MMEAD)相互可換地使用，是統(tǒng)計學(xué)參數(shù)，獨立于實際的形狀、大小 或密度，經(jīng)驗性地描述了與氣溶膠粒子在肺部沉積的潛力相關(guān)的氣溶膠粒子的大小(參 照 Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances inpulmonary drug delivery using large,porous inhaled particles. J ApplPhysiol 84(2)(1998) 379—385)。MMAD通 常從用沖擊器進行的測量來計算，沖擊器是測量顆粒在空氣中的慣性行為的儀器。在進一步的實施方式中，所述制劑可以通過任何已知的氣溶膠化技術(shù)例如，霧化， 來氣溶膠化，來實現(xiàn)低于10 μ m、更優(yōu)選的1-5 μ m之間、最優(yōu)選的1_3μπι之間的氣溶膠 粒子的MMAD。優(yōu)選的顆粒大小是基于用于藥物向深部肺遞送的最有效大小，在深部肺中 蛋白質(zhì)被最佳地吸收(參照 Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer A, Recentadvances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998)379-385)。包含本發(fā)明的衍生物的肺制劑的深部肺沉積任選地可以通過利用吸入技術(shù)的修改方法來進一步優(yōu)化，例如，但不限于緩慢吸入流動(例如，30L/分鐘)、屏氣和動作的定 時(timing of actuatation)。術(shù)語“穩(wěn)定化的制劑”是指具有提高的物理穩(wěn)定性、提高的化學(xué)穩(wěn)定性或提高的物 理和化學(xué)穩(wěn)定性的制劑。在此使用的術(shù)語蛋白質(zhì)制劑“物理穩(wěn)定性”是指，作為蛋白質(zhì)暴露于熱-機械應(yīng)力 和/或與導(dǎo)致不穩(wěn)定的界面和表面，例如疏水表面和界面相互作用的結(jié)果，蛋白質(zhì)形成生 物學(xué)無活性的和/或不溶的蛋白質(zhì)聚集物的傾向。水性蛋白質(zhì)制劑的物理穩(wěn)定性通過在將 填充在適合的容器(例如，藥筒或管形瓶)中的制劑在不同溫度下暴露于機械/物理應(yīng)力 (例如，攪動)各種時間之后目視檢查和/或濁度測定的方式來評估。制劑的目視檢查在黑 暗背景的精確聚焦光線中進行。制劑的混濁度通過按照例如0到3的渾濁程度的目測評分 排列來表征(沒有顯示混濁的制劑相應(yīng)于目測評分0，在日光下顯示了可見的渾濁的制劑 相應(yīng)于目測評分3)。當(dāng)制劑在日光下顯示了可見混濁時，制劑被分類為對蛋白質(zhì)聚集是物 理不穩(wěn)定的。做為選擇，制劑的混濁度可以通過技術(shù)人員公知的簡單的濁度測定來評估。水 性蛋白質(zhì)制劑的物理穩(wěn)定性也可以通過使用蛋白質(zhì)構(gòu)象狀態(tài)的光譜學(xué)試劑或探針來評估。 探針優(yōu)選地是小分子，其優(yōu)先地結(jié)合蛋白質(zhì)的非天然構(gòu)象異構(gòu)體。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的小分子光 譜學(xué)探針的一個實例是硫黃素T。硫黃素T是廣泛用于淀粉樣纖絲的檢測的熒光染料。在 存在纖絲的情況下，可能其他蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)也一樣，當(dāng)與纖絲蛋白質(zhì)形式結(jié)合時，硫黃素T產(chǎn) 生在約450nm處新的激發(fā)最大值和在 約482nm處增強的發(fā)射。未結(jié)合的硫黃素T在該波長 下是基本上沒有熒光的。其他小分子可以用作蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)從天然到非天然狀態(tài)改變的探針。例如，優(yōu)先地 結(jié)合蛋白質(zhì)的暴露的疏水塊的疏水塊”探針。疏水塊一般包埋在天然狀態(tài)的蛋白質(zhì)的三級 結(jié)構(gòu)內(nèi)，但是當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)開始解折疊或變性時被暴露。這些小分子光譜學(xué)探針的實例有芳香 族的疏水性染料，例如，蒽(antrhacene)、吖啶、菲咯啉，等等。其他的光譜學(xué)探針有氨基酸 金屬絡(luò)合物，例如，疏水性氨基酸例如苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸和纈氨酸等等 的鈷金屬絡(luò)合物。在此使用的術(shù)語蛋白質(zhì)制劑的“化學(xué)穩(wěn)定性”是指在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)方面的化學(xué)的共 價改變，其導(dǎo)致與天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相比具有潛在更低的生物學(xué)效價和/或潛在提高的免疫 原性性質(zhì)的化學(xué)降解產(chǎn)物的形成。各種化學(xué)降解產(chǎn)物可以取決于天然蛋白質(zhì)的類型和性 質(zhì)、蛋白質(zhì)暴露的環(huán)境而形成?；瘜W(xué)降解的消除極其可能不能完全避免，化學(xué)降解產(chǎn)物的 提高的數(shù)量常常在蛋白質(zhì)制劑的保存和使用期間見到，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。大多 數(shù)蛋白質(zhì)易于脫酰胺作用，其中谷氨酰胺?；蛱於０孵埢械膫?cè)鏈酰胺基被水解形 成游離的羧酸。其他降解途徑涉及高分子量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的形成，其中兩種或更多種蛋白質(zhì)分 子通過轉(zhuǎn)酰胺基作用和/或二硫化物相互作用共價地相互結(jié)合，導(dǎo)致共價結(jié)合的二聚體、 寡聚體和聚合物降解產(chǎn)物的形成(Stability of ProteinPharmaceuticals，Ahern. Τ. J. & Manning Μ. C.，Plenum Press, New Yorkl992)。氧化(例如甲硫氨酸殘基的氧化)可以作 為化學(xué)降解的另一個變體被提及。蛋白質(zhì)制劑的化學(xué)穩(wěn)定性可以通過在暴露于不同的環(huán)境 條件之后的各個時點測量化學(xué)降解產(chǎn)物的數(shù)量來評估(降解產(chǎn)物的形成常?？梢酝ㄟ^例 如提高溫度來加速)。每種單獨的降解產(chǎn)物的數(shù)量常常通過取決于分子大小和/或電荷使 用各種層析技術(shù)(例如，SEC-HPLC和/或RP-HPLC)分離降解產(chǎn)物來測定。
因此，如上文闡述的，“穩(wěn)定化的制劑”是指具有提高的物理穩(wěn)定性、提高的化學(xué)穩(wěn) 定性或提高的物理和化學(xué)穩(wěn)定性的制劑。一般地，制劑必需在使用和保存(遵照建議的使 用和保存條件)期間是穩(wěn)定的直到達到期滿日期。在本發(fā)明的一個實施方式中，包含本發(fā)明的衍生物的藥物制劑對于超過6周的使 用和超過3年的保存是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的另一個實施方式中，包含本發(fā)明的衍生物的藥物制劑對于超過4周的 使用和超過3年的保存是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的進一步的實施方式中，包含本發(fā)明的衍生物的藥物制劑對于超過4周 的使用和超過兩年的保存是穩(wěn)定的。在本發(fā)明的再進一步的實施方式中，包含本發(fā)明的衍生物的藥物制劑對于超過2 周的使用和超過兩年的保存是穩(wěn)定的。在另一個方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的衍生物用于藥物的制備的用途。 在一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的衍生物被用于制備用于高血糖、2型糖尿病、損 害的葡萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、 心肌梗塞、中風(fēng)、冠心病和其他心血管病癥、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的治療或預(yù) 防的藥物。在另一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的衍生物被用于制備用于延緩或防止2型糖尿 病中的疾病發(fā)展的藥物。在另一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的衍生物被用于制備用于降低食物攝取、降低 β-細胞細胞凋亡、提高β-細胞功能和β-細胞群集和/或用于恢復(fù)對β-細胞的葡萄糖 敏感性的藥物。在本發(fā)明的一個方面，提供了提高患者中肽，例如GLP-I肽的作用時間的方法，特 征在于所述肽例如GLP-I (7-37)肽是用在此公開的A-B-C-D-衍生化的。在本發(fā)明的一個方面，提供了提高患者中肽，例如GLP-I肽的作用時間到超過約 40小時的方法，特征在于所述肽例如GLP-I (7-37)肽是用在此公開的A-B-C-D-衍生的。在本發(fā)明的一個方面，提供了包含根據(jù)本發(fā)明的衍生物和藥學(xué)上可接受的賦形劑 的藥物組合物。在本發(fā)明的一個方面，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物適合于胃腸外施用。在本發(fā)明的進一步的方面，提供了根據(jù)本發(fā)明的衍生物用于藥物的制備的用途。在本發(fā)明的又進一步的方面，提供了根據(jù)本發(fā)明的衍生物用于制備用于高血糖、2 型糖尿病、損害的葡萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動 脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍 的治療或預(yù)防的藥物的用途。在本發(fā)明的又進一步的方面，提供了根據(jù)本發(fā)明的衍生物用于制備用于延緩或防 止2型糖尿病中的疾病發(fā)展的藥物的用途。使用根據(jù)本發(fā)明的衍生物的治療還可以與第二種或更多種藥理學(xué)活性物質(zhì)組合， 所述藥理學(xué)活性物質(zhì)例如，選自抗糖尿病試劑、抗肥胖試劑、食欲調(diào)節(jié)試劑、抗高血壓試劑、 用于來自或與糖尿病相關(guān)的并發(fā)癥的治療和/或預(yù)防的試劑，和用于來自或與肥胖相關(guān) 的并發(fā)癥和病癥的治療和/或預(yù)防的試劑。這些藥理學(xué)活性物質(zhì)的實例有胰島素、磺脲類、雙胍、氯茴苯酸(meglitinides)、葡糖苷酶抑制物、高血糖素拮抗劑、DPP-IV(二肽基肽 酶-IV)抑制物、涉及葡糖異生作用和/或糖原分解的刺激的肝臟酶的抑制物、葡萄糖攝取 調(diào)節(jié)物、修飾脂質(zhì)代謝的化合物，如抗高血脂試劑如HMG CoA抑制物(statins)、抑胃多肽 (GIP類似物)、降低食物攝取的化合物、RXR激動劑和作用于β-細胞的ATP依賴性鉀通 道的試劑；消膽胺、考來替泊、氯貝丁酯、吉非貝齊、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普羅布 考、右旋甲狀腺素、那格列奈(Neteglinide)、瑞格列奈(r印aglinide) ；β-阻斷劑，例如阿 普洛爾、阿替洛爾、噻嗎洛爾、吲哚洛爾、萘心安和美托洛爾、ACE (血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶)抑 制物，例如貝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、alatriopril、喹那普利和 雷米普利，鈣離子通道阻斷劑，例如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地 爾硫卓和維拉帕米和α -阻斷劑，例如，多沙唑嗪、烏拉地爾、哌唑嗪和特拉唑嗪；CART(可 卡因安非他明調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物)激動劑、NPY (神經(jīng)肽Y)拮抗劑、PYY激動劑、Υ2受體激動 齊IJ、Υ4受體激動劑、混合的Υ2/Υ4受體激動劑、MC4(黑皮質(zhì)素4)激動劑、orexin拮抗劑、 TNF(腫瘤壞死因子)激動劑、CRF(促腎上腺皮質(zhì)素釋放因子)激動劑、CRF BP(促腎上腺皮 質(zhì)素釋放因子結(jié)合蛋白)拮抗劑、皿0(01~^11激動劑、0 3激動劑、胃泌酸調(diào)節(jié)素和類似物、 MSH(促黑素細胞激素)激動劑、MCH(黑色素細胞-濃縮激素)拮抗劑、CKK (膽囊收縮素) 激動劑、血清素重新攝取抑制物、血清素和去甲腎上腺素重新攝取抑制物、混合的血清素和 產(chǎn)去甲腎上腺素的化合物、5HT(血清素)激動劑、鈴蟾肽激動劑、神經(jīng)節(jié)肽(galanin)拮抗 齊IJ、生長激素、生長激素釋放化合物、TRH (促甲狀腺激素釋放激素 )激動劑、UCP 2或3(解 偶聯(lián)蛋白質(zhì)2或3)調(diào)節(jié)物、瘦素激動劑、DA激動劑(溴隱亭(bromocriptin)、doprexin)、 脂酶/淀粉酶抑制劑、RXR (類視黃醇X受體)調(diào)節(jié)物、TR β激動劑；組胺Η3拮抗劑、抑胃 多肽激動劑或拮抗劑(GIP類似物)、促胃液素和促胃液素類似物。根據(jù)本發(fā)明的衍生物的治療還可以與手術(shù)組合，所述手術(shù)影響葡萄糖水平和/或 脂質(zhì)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，例如胃囊?guī)g(shù)或胃旁流。要理解的是，根據(jù)本發(fā)明的衍生物與一種或更多種上述化合物以及任選地一種或 更多種進一步藥理學(xué)活性物質(zhì)的任何適合的組合被認為處于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。制造肽和其類似物的方法取決于序列，本發(fā)明的類似物可以通過一種方法產(chǎn)生，所述方法包括培養(yǎng)含有編 碼多肽的DNA序列、并且能在允許所述多肽表達的條件下在適合的營養(yǎng)培養(yǎng)基中表達所述 多肽的宿主細胞，之后從培養(yǎng)物回收產(chǎn)生的肽。用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基可以是適合于生長宿主細胞的任何常規(guī)的培養(yǎng)基，例如， 含有合適的添加物的最小或復(fù)合培養(yǎng)基。適合的培養(yǎng)基可以從商業(yè)的供應(yīng)商獲得，或可以 根據(jù)公開的配方來制備(例如，在美國典型培養(yǎng)物保藏所的目錄中)。細胞產(chǎn)生的肽然后 可以通過常規(guī)步驟從培養(yǎng)基中回收，包括通過離心或過濾從培養(yǎng)基分離宿主細胞，通過鹽， 例如硫酸銨來沉淀上清液或濾液的蛋白質(zhì)成分，取決于所討論的肽，通過各種層析步驟，例 如，離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析等等純化。編碼治療多肽的DNA序列可以適當(dāng)?shù)厥腔蚪M或cDNA來源的，例如，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技 術(shù)通過制備基因組或cDNA庫，以及通過使用合成的寡核苷酸探針雜交來篩選編碼多肽的 全部或部分的 DNA 序列(參見，例如 Sambrook，J，F(xiàn)ritsch，EF and Maniatis,Τ,Molecular Cloning :ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York,1989)。編碼多肽的DNA序列還可以通過已建立的標(biāo)準(zhǔn)方法來合成地制備，例如，Beaucage and Caruthers，Tetrahedron Letters 22 (1981)，1859-1869 所描述的亞磷酰胺方法，或 描述于 Matthes et a 1.，EMBOJournal 3 (1984)，801-805 的方法。DNA 序列還可以通過利 用特異性引物的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來制備，例如在US 4，683，202或Saiki et al. , Science 239(1988)，487-491 中描述的。DNA序列還可以插入任何載體中，所述載體可以方便地經(jīng)歷重組DNA操作，載體的選擇常常將取決于要導(dǎo)入它的宿主細胞。因而，載體可以是自主復(fù)制載體，即，其作為染色 體外的實體存在的載體，其復(fù)制與染色體復(fù)制無關(guān)，例如，質(zhì)粒。做為選擇，載體可以是一種 載體，當(dāng)被導(dǎo)入宿主細胞中時，其整合到宿主細胞基因組中并且與它所整合入的染色體一 起被復(fù)制。載體優(yōu)選地是表達載體，其中編碼肽的DNA序列可操作連接到DNA的轉(zhuǎn)錄所需的 其他片段，例如啟動子。啟動子可以是任何DNA序列，其顯示了在所選的宿主細胞中的轉(zhuǎn)錄 活性，可以來自編碼與宿主細胞同源或異源的蛋白質(zhì)的基因。用于指導(dǎo)編碼本發(fā)明的肽的 DNA在多種的宿主細胞中轉(zhuǎn)錄的適合的啟動子的實例是本領(lǐng)域公知的，例如，參考Sambrook et al.,上文。如有必要，編碼肽的DNA序列還可以可操作地連接到適合的終止子、多腺苷酸化 信號、轉(zhuǎn)錄增強子序列和翻譯增強子序列。本發(fā)明的重組載體可以進一步包含允許載體在 所討論的宿主細胞中復(fù)制的DNA序列。載體還可以包含可選擇標(biāo)記物，例如，其產(chǎn)物補足了宿主細胞中的缺陷，或賦予對 藥物例如氨芐西林、卡那霉素、四環(huán)素、氯霉素、新霉素、勻霉素或甲氨蝶呤的抗性的基因。為了指導(dǎo)本發(fā)明的親本肽進入宿主細胞的分泌途徑，分泌信號序列(也稱為前導(dǎo) 序列、前原序列或前序列)可以在重組載體中提供。分泌信號序列與編碼肽的DNA序列按 照正確的閱讀框連接。分泌信號序列通常位于編碼肽的DNA序列的5'。分泌信號序列可 以是通常與肽相連的那些，或可以是來自編碼其他分泌蛋白質(zhì)的基因。用于分別連接編碼當(dāng)前的肽的DNA序列、啟動子和任選地終止子和/或分泌信號 序列、以及將它們插入到含有復(fù)制必需的信息的適合的載體中的步驟，是本領(lǐng)域的技術(shù)人 員公知的(參見，例如，Sambrooket al.，上文)。向其中導(dǎo)入DNA序列或重組載體的宿主細胞可以是能夠產(chǎn)生當(dāng)前的肽的任何細 胞，包括細菌、酵母、真菌和高等真核細胞。本領(lǐng)域中公知的和使用的適合的宿主細胞的實 例有，無限制地，大腸桿菌、釀酒酵母或哺乳動物BHK或CHO細胞系。根據(jù)本發(fā)明的實施方式1. 一種包含肽的肽衍生物，其中至少一個氨基酸殘基用A-B-C-D衍生化其中A-是 其中ρ選自由10、11、12、13和14構(gòu)成的組，d選自由0、1、2、3、4和5構(gòu)成的組， 禾口-B-選自以下構(gòu)成的組 其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，y選自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 構(gòu)成的組，或A 是 其中η選自由14、15、16、17、18和19構(gòu)成的組，B選自以下構(gòu)成的組 其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，和-C-選自以下構(gòu)成的組
，
其中b和e各自獨立地選自由0、1和2構(gòu)成的組，c和f各自獨立地選自由0、1和 2構(gòu)成的組，條件是當(dāng)c是0時b是1或2，或當(dāng)c是1或2時b是0，和當(dāng)f是0時6是1 或2，或當(dāng)f是1或2時e是0，和-D-附著到所述氨基酸殘基以及是接頭。2.根據(jù)實施方式1的衍生物，其中所述肽是選自GLP-I (7-37)和GLP-I (7-37)的類似物的GLP-I肽，其中，在所述肽中，至少一個氨基酸殘基用A-B-C-D-衍生化。3.根據(jù)實施方式1-2的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基包含氨基基團。4.根據(jù)實施方式1-4的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基是賴氨酸。5.根據(jù)實施方式1-4的任一項的衍生物，其中D選自以下構(gòu)成的組 (優(yōu)選這些結(jié)構(gòu)的第1、3、4、5和6個，S卩，排除第2個)，其中k選自由0、1、2、3、4、 5、11和27構(gòu)成的組，m選自由0、1、2、3、4、5和6構(gòu)成的組，D在用*描繪的末端附著到氨
基酸殘基。6.根據(jù)實施方式1-5的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(I)的氨基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa2
1 θ—X&&30_L U—X&&33_ 一 一 Xa3<4o 一 一 一 一 一 一式(I)(SEQ ID No 2)其中 Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、N α _乙酰-組氨酸、α _氟甲基_組氨酸、α -甲基-組氨酸、3_吡啶基丙氨 酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸； Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa20 是 Leu、Met 或 Lys,優(yōu)選的 Leu 或 Met ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg，優(yōu)選的 Ala、Glu 或 Arg ；Xaa33 Mi Val Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Asn 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg、Gly 或 Lys ；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa38是Lys、Ser、酰胺或是沒有的.Xaa39是Ser、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa40是Gly、酰胺或是沒有的；Xaa41是Ala、酰胺或是沒有的；Xaa42是Pro、酰胺或是沒有的；
Xaa43是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa44是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa45是Ser、酰胺或是沒有的；Xaa46是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa
38 Λ Χ3^39、似 。、乂船41、Λ 乂船43、乂船44、或是沒有白勺，
則下游的每個氨基酸殘基也是沒有的。7.根據(jù)實施方式1-5的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(II)的氨基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-X aa23~A 1 a~A 1 a-Xaa26-G 1 u_Phe_ 11 e-Xaa30-Trp-Leu-Va 1 -Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38式(II)(SEQ ID No 3)其中 Xaa7是L_組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨 酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa3tl 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg，優(yōu)選的 Ala、Glu 或 Arg ；Xaa34 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Lys ；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu 或 Lys ；
Xaa38是Lys、酰胺或是沒有的。8.根據(jù)實施方式1-5的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(III)的 氨基酸序列，其是在位置18、23、34、36、37或38衍生化的Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu -Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27-Phe-I Ie-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-X式(III)(SEQ ID No 6)其中Xaa7-Xaa8是L-組氨酸-Aib、去氨基-組氨酸-丙氨酸或去氨基-組氨酸-Aib ；Xaa9是Glu或Glu衍生物，例如α，α 二甲基-Glu ；Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Arg 或沒有的；Xaa33 是 Val 或 Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Asn 或 Arg ；
Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Ly s，Xaa37 是 Gly、Aib 或沒有的Xaa38 是 Lys、Glu 或沒有的Xaa39是酰胺或是沒有的； 條件是如果Xaa37是沒有的則Xaa38也是沒有的。9.根據(jù)實施方式1-5的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽包含式(IV)的氨基酸 序列，其是在位置18、23、34、36、37或38用白蛋白結(jié)合殘基衍生化的Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln -Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-I le-Xaa30_Trp-Leu-Xaa33_Xaa34_Xaa35_Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39式(IV)(SEQ ID No 7)其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨 酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys、Arg 或沒有，優(yōu)選的 Ala、Glu 或 Arg ；Xaa33 Mi Val Lys ；Xaa34 是 Lys > Glu 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Ly s，Xaa37 是 Gly、Aib 或沒有，Xaa38是Lys或沒有，和Xaa39是酰胺或是沒有的。10.根據(jù)實施方式1-9的任一項的衍生物，其中Xaa38是沒有的。11.根據(jù)實施方式1-10的任一項的衍生物，其中Xaa37和Xaa38都是沒有的。12.根據(jù)實施方式1-11的任一項的衍生物，其中Xaa7是去氨基_組氨酸。13.根據(jù)實施方式1-12的任一項的衍生物，其中Xaa8是六讓。14. 一種包含根據(jù)實施方式1-13的任一項的衍生物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的 藥物組合物。15.根據(jù)實施方式1-13的任一項的衍生物，其用于高血糖、2型糖尿病、損害的葡 萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗 塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的治療或預(yù)防。人類GLP-I (7-37)的氨基酸序列作為SEQ ID NO :1被包括在序列表中，SEQ ID N0:2-3和6-7是用于根據(jù)本發(fā)明的衍生物的GLP-l(7-37)類似物的實例。在序列表中， GLP-I (7-37)和其類似物的計數(shù)從氨基酸殘基no. 1開始。因而，例如，SEQ ID NO 1的位置1相當(dāng)于GLP-I (7-37)的位置7 (His)，SEQ ID NO :1的位置16相當(dāng)于GLP-1 (7-37)的位置 22 (Gly)，SEQ ID NO=I的位置20相當(dāng)于GLP-I (7-37)的位置26 (Lys)，對于其他位置和其 他序列也是這樣。因而，本發(fā)明還，例如，在上述實施方式6中，提供了肽衍生物，其中GLP-I (7-37) 類似物包含式(I)的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)其中Xaa7 (SEQ ID NO 2的位置no. 1)是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨 基_組氨酸、β _羥基-組氨酸、高組氨酸、N α _乙酰-組氨酸、α _氟甲基_組氨酸、α _甲 基_組氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8(SEQ ID NO :2 中的位置 no. 2)是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨 基環(huán)丙基)羧酸、(1-氨基環(huán)丁基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、 (1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨基環(huán)辛基)羧酸；
Xaa16 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 10)是 Val 或 Leu ；Xaa18 (SEQ ID NO :2 中的位置 no. 12)是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 (SEQ ID NO :2 中的位置 no. 13)是 Tyr 或 Gln ；Xaa20 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 14)是 Leu、Met 或 Lys ；Xaa22 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 16)是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 17)是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 19)是 Ala 或 Val ；Xaa26 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 20)是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa27 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 21)是 Glu 或 Leu ；Xaa30 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 24)是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 (SEQ ID NO :2 中的位置 no. 27)是 Val 或 Lys ；Xaa34 (SEQ ID NO :2 中的位置 no. 28)是 Lys、Glu、Asn 或 Arg ；Xaa35 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 29)是 Gly 或 Aib ；
Xaa36 (SEQ ID NO :2 中的位置 no. 30)是 Arg, Gly 或 Lys ；Xaa37 (SEQ ID NO 2 中的位置 no. 31)是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa38 (SEQ ID NO 2中的位置no. 32)是Lys、Ser、酰胺或是沒有的。Xaa39 (SEQ ID NO 2中的位置no. 33)是Ser、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa40 (SEQ ID NO 2中的位置no. 34)是Gly、酰胺或是沒有的；Xaa41 (SEQ ID NO 2中的位置no. 35)是Ala、酰胺或是沒有的；Xaa42 (SEQ ID NO 2中的位置no. 36)是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa43 (SEQ ID NO 2中的位置no. 37)是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa44 (SEQ ID NO 2中的位置no. 38)是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa45 (SEQ ID NO 2中的位置no. 39)是Ser、酰胺或是沒有的；Xaa46 (SEQ ID NO 2中的位置no. 40)是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa 38、Xaa39、Xaa40、Xaa41、Xaa42、Xaa43、Xaa44、Xaa45 或 Xa&46(分力U 為 SEQ ID NO :2中的位置no. 32到40)是沒有的，則每個下游的氨基酸殘基也是沒有的。本發(fā)明另外提供了相應(yīng)于根據(jù)本發(fā)明的任何權(quán)利要求和特定實施方式的其他衍 生物、方法和其用途以及具有其內(nèi)容物的藥物組合物，其中相應(yīng)的位置編號修改是如上所解釋的進行的，在上文對實施方式6的衍生物顯示了。例如，在優(yōu)先權(quán)申請的權(quán)利要求 7-13 (上述實施方式7-13)中，其涉及其中GLP-I類似物包含式(II、III和IV)的氨基酸 序列(分別為SEQ ID N0:3、6和7)的本發(fā)明的特定衍生物，位置編號可以如上文解釋的修 改來指相應(yīng)的SEQ ID NO而代替所述式子。本發(fā)明的其他實施方式是8a. 一種GLP-I衍生物，其包含式(I)的氨基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa2 2_X&&23_Al￡l_X￡l￡l25_Xa￡l26_Xa￡l27_Phe_11 θ—X&&30_T^P-LeU-X&&33_
_Xclclgg _Χ&&40 _Χ&&41_^ ￡13-42 _^ ￡13-43 _^ ￡13-44 _^ ￡13-45 _^ ￡13-46式(I)(SEQ ID No 2)其中
Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組 氨酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、2 (3H-咪 唑-4-基)乙?；?、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa20 是 Leu、Met 或 Lys ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 是 Val、Thr (0_ 苯甲基)或 Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Gin、Asn 或 Arg ；Xaa35 是 Gly、Aib 或沒有的；Xaa36 是 Ala、Gly、Lys 或沒有的；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、ε -氨基-Lys、酰胺或是沒有的；Xaa38是Lys、Ser、酰胺或是沒有的；Xaa39是Ser、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa40是Gly、酰胺或是沒有的；Xaa41是Ala、酰胺或是沒有的；Xaa42是Pro、酰胺或是沒有的；
Xaa43是Pro、酰胺或是沒有的；
Xaa44是Pro、酰胺或是沒有的；
Xaa45是Ser、酰胺或是沒有的；Xaa46是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa
38 Λ Χ3^39、似 。、乂船41、Λ 乂船43、乂船44、或是沒有白勺，
則每個下游的氨基酸殘基也是沒有的。9a. 一種GLP-1衍生物，其包含式(II)的氨基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-X aa23~A 1 a~A 1 a-Xaa26-G 1 u_Phe_ 11 e-Xaa30-Trp-Leu-Va 1 -Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38式(II)(SEQ ID No 3)其中Xaa7是L_組氨酸、D_組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、α -氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、2 (3Η-咪唑-4-基) 乙酰基、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；
Xaa34 是 Lys、Glu、Gln 或 Arg ；Xaa35 是 Gly、Aib 或沒有；Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys 或 ε -氨基-Lys ；
Xaa38是Lys、酰胺或是沒有的。IOa.優(yōu)選的根據(jù)實施方式8a_9a的任一項的GLP-1衍生物，其中所述GLP-1類似 物包含式(III)的氨基酸序列，其是在位置18、23、26、30、31、34、36、37或38衍生化的Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu -Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27-Phe-I Ie-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-X式(III)(SEQ ID No 6)其中Xaa7-Xaa8是2 (3H-咪唑_4_基)乙酰-丙氨酸、L-組氨酸-Aib、去氨基-組氨 酸_丙氨酸或去氨基_組氨酸-Aib ；Xaa9是Glu或Glu衍生物，例如，α，α 二甲基-Glu ；Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；
Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys、Arg 或沒有；Xaa33 是 Val、Thr (0_ 苯甲基)或 Lys ；Xaa34 是 Lys> Glu、Gin、Asn 或 Arg ；
Xaa35 是 Gly、Aib 或沒有；Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Aib、Pro、ε -氨基-Lys 或沒有；Xaa38 是 Lys、Glu 或沒有的；Xaa39是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa37是沒有的則Xaa38也是沒有的。Ila. 一種GLP-1衍生物，其包含式(IV)的氨基酸序列，其是在位置18、23、26、30、 31、34、36、37或38用白蛋白結(jié)合殘基衍生化的Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln -Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-I le-Xaa30_Trp-Leu-Xaa33_Xaa34_Xaa35_Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39式(IV)(SEQ ID No 7)其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、Na-乙酰-組氨酸、α -氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、2 (3Η-咪唑-4-基) 乙?；?、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 Mi Val Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Gln 或 Arg ；Xaa35 是 Gly、Aib 或沒有；Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Aib、Pro、ε -氨基-Lys 或沒有；Xaa38是Lys或沒有；和Xaa39是酰胺或是沒有的。12a.根據(jù)實施方式8a_lla的任一項的衍生物，其中Xaa38是沒有的。13a.根據(jù)實施方式8a_12a的任一項的衍生物，其中Xaa37和Xaa38都是沒有的。14a.根據(jù)實施方式8a_13a的任一項的衍生物，其中Xaa7是去氨基-組氨酸。15a.根據(jù)實施方式8a_14a的任一項的衍生物，其中Xaa8是Aib。16a. GLP-1衍生物，其選自以下的N- ε 37 {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基十九烷酰基)哌啶 _4_ 羰
基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨基 His7, Glu22, Arg26, Ar34, Ls37JGLP-I (7-37)酰胺；N- ε 20- {2_ [2~ (2~ {2~ [2~ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib2， Leu14, Lys20, Gln28, Ser (0-苯甲基)39] exendin-4 (1-39)酰胺；N- ε 26 {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨 基 His7，Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 37 {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (⑶ _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基十 九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；Ν-ε 23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷酰基氨基)哌啶 _4_ 基 羰基氨基]-3-(羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰 基][Aib8, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 基羰基 氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠[去 氨基 His7，Glu22 Arg26, Arg 34, Phe (m-CF3) 28]GLP-I- (7-37)酰胺；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-1- (7-37) -Lys (2- {2-[2- (2- {2-[2- ((S) -4-羧基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙 氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基)；N- ε 2(1 ({2- [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, Glu30, Thr (0-苯甲基)33，]GLP-I-(7-37)酰胺；Ν-ε 30 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Lys30]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 31 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Lys 31]GLP-I-(7-37)；N- ε 2(1 ({2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, 2-萘基丙氨酸 28，Glu30, ] GLP-I (7-37)酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, ]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁酰氨基)乙氧基)乙氧基]乙酰氨 基)乙氧基]乙氧基)乙酰基]酰胺；N- ε 2(1 ({2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Ar26, 2-萘基丙氨酸 12，Glu30, ] GLP-I-(7-37)酰胺；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-1- (7-37) Lys [2- (2-[2- (2-[2- (2- ((S)-4-[l-[19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁酰氨基)乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；Ν-ε 31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)_3-羧基-3-{[l-(19-羧基-十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8, Glu22, Arg26, Lys31, Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 26-[⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷 羰基}氨基)丁酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；Ν-ε 26-{4-[(S)-4-羧基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己 烷羰基}氨基)丁酰氨基]丁?；鶀 [Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_({反式 _4-[(19_ 羧基十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；
N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷酰基 氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)-酰胺；N- ε 18- {2_ (2_ (2_ (2_ [2_ (2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({4_ [ (19-羧基十九烷?；被? 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基)乙氧基]乙?；?乙氧基)乙氧基)乙 ?；鶀 [Aib8，Lys 18，Arg26, Arg34] GLP-I (7-37)；N- ε 20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[反式 _4_([19-羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己烷羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧 基)乙酰基][去氨基 His1, Lys20, Ser (0_ 苯甲基)33，Ser (0-苯甲基)39] exendin (1-39)；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-( [19-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]-3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧 基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[去氨基 His7，Glu22，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({4_ [(反式-19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[去氨基 His7, Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙酰基][去氨基圯87，611122，六『826，六『834，1^837]61^-1-(7-37)；[去氨基 Hi s7，Glu22，Arg26，Arg34] GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- {2- [2- (2- {2- [4-羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙 氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-酰胺；[去氨基His7，Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基) 乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；N- ε 26[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({4-[(19-羧基十九烷?；被?甲 基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰 基[Aib8，Lys 26] GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 26 [2_ (2_[2_ (2_[2_ (2_ (⑶ _2_[反式 _4_ ((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲基) 環(huán)己基羰基氨基]-4-羧基丁酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基) 乙?；鵠[Aib8，Lys26] GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[去氨基見87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷酰基 氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；鵠[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Glu30, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(lH-四 唑-5-基)-十六烷?；被酋；?丁酰氨基]-丁?；被鶀 丁?；被?丁酰氨基]乙 氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4-((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰氨基]十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁酰氨基] 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨基]己?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]丁?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4-((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠-十二烷?；被鶀 丁?；被?丁酰基 氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4-((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Arg34]GLP-I-(7-36)酰胺；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys33，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺；N- ε 26-[2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基-4_((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；?基]十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Lys26，Arg34]GLP-I-(7-36) 酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34] GLP+(7-37) Lys [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧 基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；?基]十二烷酰基氨基} “ 丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠酰胺；N-ε 20-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I-(7-37) 酰胺；N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(lH-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺；N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4-((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37) 酰胺；N-ε 37-[[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4_((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37] GLP-I-(7-37) Lys [2-(2-{2-[4-羧 基-4-(4-羧基-4-{4-[4-(16-1H-四唑-5-基-十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠丁酰 基氨基} 丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠；[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I- ((7-37) Lys (2- (2- (3- (2- (2- (2- (2- (2 -(2- (2- (2- (2- (2- (2- (2- [4- (S)-羧基 ~4~ (4- (S)-羧基 ~4~ (4- {4- [ 16-(四唑-5-基)十六烷?；被酋；鵠丁?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被?丁酰基氨基]；乙氧基)乙氧 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙 氧基)丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基)肽；N- α 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷酰基 氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙酰基][去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34，ε -Lys37]GLP-I-(7-37)；N-α 8-[2-(4-咪唑基)乙?；鵠N-ε 37_[2_ (2_ {2_[2_ (2_ {2_[ (S) _4_ 羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(8-37)；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁酰基氨基)乙氧基]乙氧基} 乙?；?肽；[去氨基 His7，Glu22, Arg26，34]-GLP-1 (7-37)-Lys_[2-(2_ {2_[2_ (2_ {2_[4_ 羧 基-4-({4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠肽；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-I (7-37)-Lys ((S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?丁酰基)肽；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys-(2-(2-{2-[(S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；?肽；[去氨基 His7，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧基} 乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?肽；Ν-ε 37-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((5)-4-羧基-4-{[1-(19_羧基十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基} 丁酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[去氨基 His7，Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 37-((S)_4-羧基-4-{[l_(19-羧基-十九烷?；?_哌啶-4-羰基]-氨 基}-丁?；?[去氨基見87，4印26，々印34，Lys37]GLP-I-(7-37)；[去氨基His7，Glu22，Arg26，34] -GLP-1 (7-37) -Lys- ((S) _4_羧基-4- {[1_ (19-羧 基_十九烷?；?_哌啶-4-羰基]-氨基}_ 丁酰基)肽；N-ε 26-[2-(2-{2-[(R)-4-羧基 _4-((R)_4-羧基-4-{12-[4-(16_1Η-四 唑-5-基-十六烷酰基氨磺?；? 丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠_[Aib8，Arg34] GLP-I (7-37)；N-ε 37-{2-[2-(2-{(S)-4-[(S)-4-(12-{4-[16-(2-叔-丁 基-2H-四 唑-5-基)-十六烷?；被酋；鵠丁酰基氨基}十二烷?；被?-4-羧基丁酰基氨 基]-4-羧基丁?；被鶀乙氧基)乙氧基]乙?；鶀[去氨基見87，611122^印26^印34， Lys37]GLP-I(7-37)；
N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基} 乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)；[ImPr7, Arg26'34, Glu22]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- [2- ((S) -4- ((S) -4- (12-[4- (16-IH-四唑-5-基十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基)-4-羧基丁?；?基)-4-羧基丁?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠-酰胺；Ν-ε 36-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4-((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧 基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Gln34] GLP-I-(7-37)；
Ν-ε 26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4_((9-羧基十九烷酰基氨基]甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧 基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Gln34] GLP-I-(7-37)；Ν-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4_((9-羧基十九烷酰基氨基]甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧 基)乙?；鵠[Aib8，22，35，Lysl8，Arg26，34]GLP-l-(7-37)；禾口Ν-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4_((9-羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧 基)乙酰基][Aib8, Lysl8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37).根據(jù)本發(fā)明的其他實施方式1. 一種包含肽的肽衍生物，其中至少一個氨基酸殘基用A-B-C-D衍生化其中A-是
OI-N-nA其中ρ選自由10、11、12、13和14構(gòu)成的組，d選自由0、1、2、3、4和5構(gòu)成的組， 禾口-B-選自以下構(gòu)成的組 其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，y選自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 構(gòu)成的組，或A 是 其中η選自由14、15、16、17、18和19構(gòu)成的組，B選自以下構(gòu)成的組 其中χ選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，和-C-選自由以下構(gòu)成的組 其中b和e各自獨立地選自由O、1和2構(gòu)成的組，c和f各自獨立地選自由O、1和 2構(gòu)成的組，條件是當(dāng)c是O時b是1或2，或當(dāng)c是1或2時b是0，和當(dāng)f是0時6是1 或2，或當(dāng)f是1或2時e是0，和-D-附著到所述氨基酸殘基以及是接頭。2.根據(jù)實施方式1的衍生物，其中所述肽是選自GLP-I (7-37)和GLP-I (7_37)的 類似物的GLP-I肽，其中，在所述肽中，至少一個氨基酸殘基用A-B-C-D-衍生化。3.根據(jù)實施方式1-2的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基包含氨基基團。4.根據(jù)實施方式1-3的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基包含側(cè)鏈 中的伯氨基基團。
5.根據(jù)實施方式1-4的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基是賴氨酸。
6.根據(jù)實施方式1-5的任一項的衍生物，其中僅一個氨基酸殘基被衍生化。7.根據(jù)實施方式1-6的任一項的衍生物，其中A-是 8.根據(jù)實施方式1-7的任一項的衍生物，其中η選自由15和17構(gòu)成的組，更優(yōu)選 的是17。9.根據(jù)實施方式1-6的任一項的衍生物，其中A-是 10.根據(jù)實施方式1-6和9的任一項的衍生物，其中ρ選自由12、13和14構(gòu)成的 組，更優(yōu)選的是13。11.根據(jù)實施方式1-6和9-10的任一項的衍生物，其中d選自由0、1、2、3和4構(gòu) 成的組，更優(yōu)選的0、1和2，最優(yōu)選的1。12.根據(jù)實施方式1-6和9-11的任一項的衍生物，其中d選自由0、1和2構(gòu)成的 組，P選自由12、13或14構(gòu)成的組，更優(yōu)選的，d選自由1禾Π 2構(gòu)成的組，P選自由13和14 構(gòu)成的組，最優(yōu)選的d是1和ρ是13。13.根據(jù)實施方式1-12的任一項的衍生物，其中_B_是14.根據(jù)實施方式1-12的任一項的衍生物，其中_B_是15.根據(jù)實施方式1-12的任一項的衍生物，其中_B_是 16.根據(jù)實施方式1-12的任一項的衍生物，其中-B-是 17.根據(jù)實施方式1-12和16的任一項的衍生物，其中χ選自由0、1和2構(gòu)成的 組，更優(yōu)選的X選自由0和1構(gòu)成的組，最優(yōu)選的X是1。18.根據(jù)實施方式1-6和9-12的任一項的衍生物，其中是 19.根據(jù)實施方式1-6和9-13的任一項的衍生物，其中y選自由2、3、4、5、6、7、8、 9和10構(gòu)成的組，更優(yōu)選的y選自由2、3、4、5、6、7和8構(gòu)成的組。20.根據(jù)實施方式1-19的任一項的衍生物，其中_C_是 21.根據(jù)實施方式20的衍生物，其中c選自由0和1構(gòu)成的組，b選自由1和2構(gòu) 成的組，更優(yōu)選的b是1和c是0。22.任何實施方式1-19的任一項的衍生物，其中_C_是 23.根據(jù)實施方式22的衍生物，其中f選自由0和1構(gòu)成的組，e選自由1和2構(gòu) 成的組，更優(yōu)選的e是1和f是0。24.根據(jù)實施方式1-19的任一項的衍生物，其中_C_是 25.根據(jù)實施方式1-24的任一項的衍生物，其中D選自以下構(gòu)成的組 其中k選自由0、1、2、3、4、5、11和27構(gòu)成的組，m選自由0、1、2、3、4、5和6構(gòu)成 的組，D在用*描繪的末端附著到氨基酸殘基。26.根據(jù)實施方式1-25的任一項的衍生物，其中_D_是 27.根據(jù)實施方式25-26的任一項的衍生物，其中k選自由1、2、3、11和27構(gòu)成的 組，更優(yōu)選的k是1。28.根據(jù)實施方式25-27的任一項的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的 組，更優(yōu)選的m選自由0、1和2構(gòu)成的組。29.根據(jù)實施方式29的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，更優(yōu)選的m 選自由0、1和2構(gòu)成的組。30.根據(jù)實施方式1-25的任一項的衍生物，其中_D_是 31.根據(jù)實施方式31的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，更優(yōu)選的m 選自由0、1和2構(gòu)成的組。32.根據(jù)實施方式1-25的任一項的衍生物，其中_D_是 33.根據(jù)實施方式33的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，更優(yōu)選的m 選自由0、1和2構(gòu)成的組。34.根據(jù)實施方式1-25的任一項的衍生物，其中_D_是 35.根據(jù)實施方式35的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，更優(yōu)選的m 選自由0、1和2構(gòu)成的組。36.根據(jù)實施方式1-25的任一項的衍生物，其中_D_是
37.根據(jù)實施方式37的衍生物，其中m選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，更優(yōu)選的m 選自由0、1和2構(gòu)成的組。38.根據(jù)實施方式1-38的任一項的衍生物，其中A-B_C_D-選擇和組合自 39.根據(jù)實施方式1-38的任一項的衍生物，其中A-B_C_D-選擇和組合自 40.根據(jù)實施方式1-40的任一項的衍生物，其中A-B_C_D-選自以下構(gòu)成的組 41.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(I)的氨 基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa2 2-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-I Ie-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 -Xaa39^aa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46式(I)(SEQ ID No 2)其中
Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、N α _乙酰-組氨酸、α _氟甲基_組氨酸、α -甲基-組氨酸、3_吡啶基丙氨 酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ； Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa20 是 Leu、Met 或 Lys ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 是 Val 或 Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Asn 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg、Gly 或 Lys ；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa38是Lys、Ser、酰胺或是沒有的。Xaa39是Ser、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa40是Gly、酰胺或是沒有的；Xaa41是Ala、酰胺或是沒有的；Xaa42是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa43是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa44是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa45是Ser、酰胺或是沒有的；Xaa46是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa
38 Λ Χ3^39、似 。、乂船41、Λ 乂船43、乂船44、或是沒有白勺，
則每個下游的氨基酸殘基也是沒有的。42.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(II)的
氨基酸序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-X aa23~A 1 a~A 1 a-Xaa26-G 1 u_Phe_ 11 e-Xaa30-Trp-Leu-Va 1 -Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38式(II)(SEQ ID No 3)其中Xaa7是L_組氨酸、D_組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨酸、高組氨酸、Na-乙酰基-組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙 氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa22 是 Gly、Glu 或 Aib ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ；
Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa34 是 Lys、Glu 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Lys ；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu 或 Lys ；Xaa38是Lys、酰胺或是沒有的。43.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是GLP_1 (A-B)，其 中A是從1到7的整數(shù)，B是從38到45的整數(shù)，以及任選地具有一個或更多個取代，其中 GLP-I肽是經(jīng)由親水性的間隔區(qū)對C-末端氨基酸殘基衍生化的，任選地還對其他氨基酸殘 基衍生化。44.上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽選自GLP-I (7-35)、 GLP-I (7-36)、GLP-I (7-36)-酰胺、GLP—1 (7-37)、GLP-I (7-38)、GLP-I (7-39)、GLP-I (7-40) 和GLP-I (7-41)，和任選地具有一個或更多個取代。45.根據(jù)實施方式1-45的任一項的衍生物，其是GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 1)的 衍生物。46.根據(jù)實施方式1-45的任一項的衍生物，其是GLP-1 (7-37) (SEQID NO 1)的類 似物的衍生物。47.根據(jù)實施方式47的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含與GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 1)相比被取代、添加或刪除的不超過十五個氨基酸殘基。48.根據(jù)實施方式47的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含與GLP-I (7-37) (SEQID NO 1)相比被取代、添加或刪除的不超過十個氨基酸殘基。49.根據(jù)實施方式47的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含與GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 1)相比被取代、添加或刪除的不超過六個氨基酸殘基。50.根據(jù)實施方式47的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含與GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 1)相比被取代、添加或刪除的不超過四個氨基酸殘基。51.根據(jù)實施方式51的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含不由遺傳密碼編碼的 不超過4個氨基酸殘基。52.根據(jù)實施方式47的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含與GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 1)相比被取代、添加或刪除的不超過3個氨基酸殘基。53.根據(jù)實施方式53的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含不由遺傳密碼編碼的不超過3個氨基酸殘基。54.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽包含僅一個被衍生 化的賴氨酸殘基。55.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是DPPIV保護的 GLP-I 肽。56.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是DPPIV穩(wěn)定化的。57.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽包含位置8中的Aib殘基。58.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽的位置7的氨基酸 殘基選自由D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2-氨基-組氨酸、β -羥基-組氨酸、高組氨酸、 Na-乙?；?組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶 基丙氨酸和4-吡啶基丙氨酸構(gòu)成的組。59.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽選自以下構(gòu)成的組Arg34GLP-I (7-37)，Lys38Arg26l34GLP-I (7-38)，Lys38Arg26l34GLP-I (7-38) -0H, Lys36Arg26,34GLP-I (7-36) ， Aib 8,22,35GLP-I (7-37) ， Aib8,35GLP-I (7-37) ， Aib8' 22GLP-I (7-37) ， Aib8,22,35Arg26,34Lys38GLP-I (7-38) ， Aib8'35Arg26'34Lys38GLP-l (7-38)， Aib8'22Arg26'34Lys38GLP-l (7-38)，Aib8'22'35Arg26'34Lys38GLP-l (7-38)，Aib8-35Arg26' 34Lys38GLP-I (7-38)，Aib8l22l35Arg26Lys38GLP-I (7-38)，Aib8l35Arg26Lys38GLP-I (7-38)，Aib8' 22Arg26Lys38GLP-I (7-38)，Aib8l22l35Arg34Lys38GLP-I (7-38)，Aib8l35Arg34Lys38GLP-I (7-38)， Aib8l22Arg34Lys38GLP-I (7-38) ， Aib8l22l35Ala37Lys38GLP-I (7-38) ， Aib8' 35Ala37Lys38GLP-I (7-38)，Aib8l22Ala37Lys38GLP-I (7-38), Aib8'22’35Lys37GLP_l (7—37)，Aib8' 35Lys37GLP-I (7-37)和 Aib8’22Lys37GLP_l (7-38)。60.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是eXendin-4(SEQ ID NO 4)。61.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是ZP-10，S卩，HGEGT FTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-酰胺(SEQID NO 5)。62.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX，其中 X = P 或 Y，或其片段或類似物。63.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽是Argl8、Leu20、 Gln34、Lys33 (Νε-(γ -氨基 丁?；?Να-十六烷?；?))Exendin-4- (7-45)-酰 胺或 Arg33、Leu20、Gln34、Lysl8 (N ε - ( γ -氨基 丁?；?N α -十六烷?；?)) Exendin-4- (7-45)-酰胺。64.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(III)的 氨基酸序列，其中在位置18、23、34、36、37或38中被衍生化Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu -Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27-Phe-I Ie-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-X式(III)(SEQ ID No 6)其中
Xaa7-Xaa8是L-組氨酸-Aib、去氨基-組氨酸-丙氨酸或去氨基-組氨酸-Aib ；Xaa9是Glu或Glu衍生物，例如α，α 二甲基-Glu ；
Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；
Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa3tl 是 Ala、Glu、Lys、Arg 或沒有；Xaa33 Mi Val Lys ；Xaa34 是 Lys、Glu、Asn 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Lys，Xaa37 是 Gly、Aib 或沒有Xaa38 是 Lys、Glu 或沒有Xaa39是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa37是沒有的則Xaa38也是沒有的。65.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽包含式(IV)的氨基 酸序列，其是在位置18、23、34、36、37或38用白蛋白結(jié)合殘基衍生化的Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln -Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-I le-Xaa30_Trp-Leu-Xaa33_Xaa34_Xaa35_Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39式(IV)(SEQ ID No 7)其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨 酸、高組氨酸、Na-乙?；?組氨酸、α-氟甲基-組氨酸、α-甲基-組氨酸、3-吡啶基丙 氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；Xaa8 是 Ala、Gly、Val、Leu、lie、Lys、Aib、(1_ 氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_ 氨基環(huán)丁 基)羧酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(1-氨 基環(huán)辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 是 Val 或 Lys ；Xaa34 是 Lys > Glu 或 Arg ；Xaa35 是 Gly 或 Aib ；Xaa36 是 Arg 或 Lys，Xaa37 是 Gly、Aib 或沒有，Xaa38是Lys或沒有，和Xaa39是酰胺或是沒有的。66.根據(jù)上述實施方式65-66的任一項的衍生物，其中Xaa38是沒有的。
67.根據(jù)上述實施方式65-67的任一項的衍生物，其中Xaa37和Xaa38都是沒有的。68.根據(jù)上述實施方式65-68的任一項的衍生物，其中與GLP-I (7-37)相比2個氨 基酸被取代。69.根據(jù)上述實施方式65-68的任一項的衍生物，其中與GLP-I (7-37)相 比3個氨 基酸被取代。70.根據(jù)上述實施方式65-68的任一項的衍生物，其中與GLP-I (7_37)相比4個氨 基酸被取代。71.根據(jù)上述實施方式65-68的任一項的衍生物，其中與GLP-I (7-37)相比5個氨 基酸被取代。72.根據(jù)上述實施方式65-68的任一項的衍生物，其中與GLP-I (7_37)相比6個氨 基酸被取代。73.根據(jù)上述實施方式65-73的任一項的衍生物，其中Xaa7是去氨基-組氨酸。74.根據(jù)上述實施方式65-74的任一項的衍生物，其中Xaa8是Aib。75.根據(jù)上述實施方式的任一項的衍生物，其選自以下構(gòu)成的組Ν-ε 37 {2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨 基 His7，Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 20-{2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基-3-{[1_(19-羧基十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基[Aib2, Leul4, Lys20, Gln28, Ser (0-苯甲基)39] exendin-4 (1-39)酰胺；Ν-ε 26 {2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷酰基)哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨 基 His7，Arg34]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 37 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基[Aib8， Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；Ν-ε 23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷?；被?哌啶 _4_ 基 羰基氨基]-3-(羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰 基][Aib8, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷酰基)哌啶 _4_ 基羰基 氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰基][， 去氨基 His7，Glu22 Arg26, Arg 34, Phe (m-CF3) 28]GLP-I- (7-37)酰胺；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) -Lys (2- {2-[2- (2- {2-[2- ((S) -4-羧基-4-[[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙 氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?；N- ε 20 ({2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基-3-{[1-(17_ 羧基十七烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8, Lys20, Arg26, Glu30, Thr (0-苯甲基)33，]GLP-I-(7-37)酰胺；Ν-ε 30 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Lys30]GLP-I-(7-37)；Ν-ε 31 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基[Aib8， Glu22, Arg26, Lys 31]GLP-I-(7-37)；N- ε 20 ({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-羧基-3-{[1_(17-羧基十七烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8，Lys20，Arg26，2-萘基丙氨酸 28，Glu30, ]GLP-I (7-37)酰胺；[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34, ] GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- [2- (2- [2- (2- ((S) -4- [ 1-[ 19-羧基十九烷酰基]哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；?氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基]酰胺；N- ε 20 ({2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基-3-{[1-(17_ 羧基十七烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8，Lys20，Arg 26，2-萘基丙氨酸 12，Glu30，]GLP-1_(7_37)酰胺；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-1- (7-37) Lys [2- (2-[2- (2-[2- (2- ((S)-4-[l-[19-羧基十九烷酰基]哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基] 乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；Ν-ε 31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)_3-羧基-3-{[l-(19-羧基-十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8, Glu22, Arg26, Lys31, Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 26-[⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷 羰基}氨基)丁酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N- ε 26- {4_ [⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己 烷羰基}氨基)丁?；被鵠丁?；鶀[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 18- {2_ (2_ (2_ (2_ [2_ (2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({4_ [ (19-羧基十九烷?；被? 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基)乙氧基]乙?；?乙氧基)乙氧基)乙 ?；鶀 [Aib8，Lys 18，Arg26, Arg34] GLP-I (7-37)；N-ε 20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-(⑶-4-[反式-4-([19-羧基十九烷酰基氨基]甲 基)環(huán)己基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧 基)乙酰基][去氨基 Hisl，Lys20，Ser(0-苯甲基)33，Ser(0-苯甲基)33]exendin(l-39)；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I-( 7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-( [19-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]-3-羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧 基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；
N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Glu22，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({4_ [(反式-19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)酰胺； N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基見87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34]GLP-1- (7-37) Lys [2- (2- {2-[2- (2- {2-[4-羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基-十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基]-酰胺；[去氨基 Hi s7，Arg26，Arg34, ] GLP-I- (7-37) Lys [2_ (2_ [2_ (2- [2- (2- ((R) -3-[反 式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基) 乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；N- ε 26 [2~ (2~ {2_ [2~ (2~ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({4_ [ (19-羧基-十九烷酰基氨基) 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧 基)乙?；鵞Aib8, Lys 26]GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 26 [2_ (2_[2_ (2_[2_ (2_ (⑶ _2_[反式 _4_ ((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲基) 環(huán)己基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基) 乙酰基][Aib8，Lys26] GLP-I (7-37)酰胺； N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基見87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][去氨基 His7，Glu22，Arg26，Glu30，Arg34，Lys37]GLP-l-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)-十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]-丁?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；
N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]丁?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基)丁?；被鵠-十二烷酰基氨基} 丁酰基氨基)丁酰基 氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35)；
N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己酰基氨基} 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Arg34]GLP-I-(7-36)酰胺；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys33，Arg34] GLP-I-(7-34)；N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺；N- ε 26-[2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基-4_((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨 基]十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys26，Arg34]GLP-I-(7-36) 酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34] GLP+(7-37) Lys [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧 基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨 基]十二烷?；被鶀 “ 丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠酰胺；N-ε 20-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I-(7-37)酰胺；N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺；N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37) 酰胺；N-ε 37-[[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4_((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37] GLP-I-(7-37) Lys [2-(2-{2-[4 -羧 基-4-(4-羧基-4-{4-[4-(16-1H-四唑-5-基-十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠丁酰 基氨基} 丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基]；和[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I- ((7-37) Lys (2- (2- (3- (2- (2- (2- (2-(2- (2- (2- (2- (2- (2- (2- (2- [4- (S)-羧基 ~4~ (4- (S)-羧基 ~4~ (4- {4- [16-(四唑 _5_ 基) 十六烷酰基氨磺?；鵠丁?；被鶀丁?；被?丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)丙?；被?乙氧基)乙氧基)肽。76. 一種提高GLP-I肽在患者中的作用時間的方法，特征在于GLP-I (7-37)肽或其 類似物用在前述實施方式的任一項中公開的A-B-C-D-衍生化了。77. 一種提高GLP-I肽在患者中的作用時間到超過約40小時的方法，特征在于 GLP-I (7-37)肽或其類似物用在前述實施方式的任一項中公開的A-B-C-D-衍生化了。78. 一種包含根據(jù)實施方式1-76的任一項的衍生物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的 藥物組合物。79.根據(jù)實施方式1-76的藥物組合物，其適合于胃腸外施用。80.根據(jù)實施方式1-76的任一項的衍生物用于藥物的制備的用途。81.根據(jù)實施方式1-76的任一項的衍生物用于制備用于高血糖、2型糖尿病、損害 的葡萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心 肌梗塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的治療或預(yù)防 的藥物的用途。82.根據(jù)實施方式1-76的任一項的衍生物用于制備用于延緩或防止2型糖尿病中 的疾病發(fā)展的藥物的用途。83.根據(jù)實施方式1-76的任一項的衍生物用于制備用于降低食物攝取、降低 β-細胞細胞凋亡、提高β-細胞功能和β-細胞群集和/或恢復(fù)對β-細胞的葡萄糖敏感 性的藥物的用途。84.根據(jù)權(quán)利要求1-76的任一項的衍生物，其用于高血糖、2型糖尿病、損害的葡 萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗 塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的治療或預(yù)防。
在此引用的所有的參考文獻，包括公開物、專利申請和專利通過引用合并在此，到 達如同每個參考文獻被單獨地和特別地指明通過引用合并、以及在此完全地闡述的程度。所有標(biāo)題和副標(biāo)題在此僅為了方便而使用，無論如何不應(yīng)看作是限制本發(fā)明。上文描述的元素的所有其可能的變體的任何組合被本發(fā)明涵蓋，除非在此另有陳 述或明顯與上下文抵觸。如用于描述本發(fā)明的上下文中術(shù)語“一”和“該”和類似對象的使用被認為是覆蓋 了單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非在此另有陳述或與上下文明顯抵觸。此處的數(shù)值范圍的敘述僅僅意圖充當(dāng)單獨指落入該范圍的每個獨立的值的簡便 方法，除非在此另有陳述，每個獨立的值被合并到說明書中，如同它是在此單獨地敘述的。 除非另有說明，在此提供的所有確切數(shù)值表示相應(yīng)的近似值(例如，對于特定因素或度量 來說提供的所有的確切示范性數(shù)值被認為還提供了相應(yīng)的大略的度量，在合適時由“約”來 修飾)。此處描述的所有方法按照任何適合的順序進行，除非在此另有陳述或與上下文明 顯抵 觸。在此提供的任何和所有實例、或示范性的措辭(如，“例如”)的使用，僅僅意圖更 好地說明本發(fā)明，不構(gòu)成對本發(fā)明的范圍的限制，除非另有陳述。在說明書中的用語不應(yīng)被 看作表示任何元素對于本發(fā)明的實踐是必需的，除非也明確地聲明了。此處專利文件的引用和合并僅是為了方便而進行的，不反映這些專利文件的有效 性、可專利性和/或可實施性的任何評論。對于單個元素或復(fù)數(shù)個元素使用術(shù)語如〃包含〃、“具有〃、“包括〃或〃含 有"的本發(fā)明的任何方面或?qū)嵤┓绞降脑诖说拿枋?，是意圖提供對"由……組成"、“基 本上由……組成"或"基本上包含"所述特定單個元素或復(fù)數(shù)個元素的本發(fā)明的類似方 面或?qū)嵤┓绞降闹С?，除非另有說明或與上下文明顯地抵觸(例如，在此描述的制劑包含 特定元素應(yīng)當(dāng)被理解為還描述了制劑由該元素組成，除非另有說明或與上下文明顯地抵 觸)。本發(fā)明以適用的法律所允許的最大的程度包括在此呈現(xiàn)的方面或權(quán)利要求中引 述的主題的所有修改體和等價物。在以下代表性的方法和實施例中進一步說明本發(fā)明，然而，無論如何其不意味著 限制本發(fā)明的范圍。在上述描述和以下實施例中公開的特征可以單獨地或以其任何組合地是用于以 其各種形式實現(xiàn)本發(fā)明的材料。
實施例使用的縮寫r. t 室溫DIPEA 二異丙基乙胺H2O 水CH3CN 乙腈DMF NN 二甲基甲酰胺
HBTU 2-(1Η-苯并三唑-1-基-)-l，l，3，3甲基脲鐺六氟磷酸鹽
Fmoc 9H-芴_9_基甲氧羰基Boc 叔丁氧基羰基OtBu 叔丁基酯tBu 叔丁基Trt 三苯甲基Pmc 2，2，5，7，8_五甲基-色滿_6_磺?；鵇de 1_ (4，4_ 二甲基_2，6_ 二氧代環(huán)亞己基)乙基ivDde 1_(4，4_ 二甲基_2，6_ 二氧代環(huán)亞己基)_3_甲基丁基Mtt 4-甲基三苯甲基Mmt 4-甲氧基三苯甲基DCM 二氯甲烷TIS 三異丙基硅烷)TFA 三氟乙酸Et2O 二乙醚NMP 1-甲基-吡咯烷-2-酮DIPEA 二異丙基乙胺HOAt I-羥基-7-氮雜苯并三唑HOBt 1-羥基苯并三唑DIC 二異丙基碳二亞胺DBU 1，8_ 二氮雜環(huán)-[5，4，0] ^烯 _7MW 分子量A 樹脂結(jié)合的肽的合成SPPS 方法 A保護的肽基樹脂根據(jù)Fmoc策略利用廠家提供的FastMoc UV方案以0. 25mmol 或1.Ommol規(guī)模在Applied Biosystems 433肽合成儀上合成，所述方案采用了 冊1^(2-(1!1-苯并三唑-1-基-)-1，1，3，3四甲基脲鐺六氟磷酸鹽)或HATU (0-(7-氮雜苯 并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲鐺六氟磷酸鹽)介導(dǎo)的NMP (N-甲基吡咯烷酮)中的偶 聯(lián)，以及Fmoc保護基團的脫保護的UV監(jiān)測。用于肽酰胺合成的起始樹脂是Rink-酰胺樹 月旨，Wang或氯三苯甲基樹脂用于具有羧基C-末端的肽。使用的保護的氨基酸衍生物是在 適合于ABI433A合成儀的預(yù)先稱重的柱體上提供的標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc-氨基酸(由，例如Anaspec 或Novabiochem提供)，除了非天然氨基酸例如Fmoc-Aib-OH (Fmoc-氨基異丁酸)之外。N 末端氨基酸是在α氨基基團Boc保護的(例如，Boc-His (Boc) OH用于在N-末端具有His 的肽)。在位置26的賴氨酸的ε氨基基團用附丨、馳丨、0如、丨州(16或80(3保護，取決于白 蛋白結(jié)合部分和間隔區(qū)的附著的途徑。在某些情況下肽的合成可以通過使用在二肽酰胺 鍵上用可以在酸性條件下被裂解的基團，例如但不限于2-Fmoc-氧-4-甲氧苯甲基或2，4， 6-三甲氧基苯甲基保護的二肽來改進。在肽中存在絲氨酸或蘇氨酸的情況下，可以使用偽 脯氨酸二肽(參見，例如Novobiochem 2002/2003或新版本的目錄，或W. R. Sampson (1999)， J. Pep. Sci. 5，403。
SPPS 方法 B 肽合成的一種可選擇的方法(方法B)是在基于微波的Liberty肽合成儀(CEM Corp.，North Carolina)上通過Fmoc化學(xué)作用。樹脂是具有0. 24mmol/g的載荷的Tentagel S RAM。偶聯(lián)化學(xué)作用是NMP中的DIC/HOAt，利用NMP中0. 3M的氨基酸溶液和8_10倍的 摩爾過量。偶聯(lián)條件是在高達70°C 5分鐘。脫保護在高達70°C下利用在NMP中的5%哌 啶。當(dāng)賴氨酸側(cè)鏈的化學(xué)修飾是期望的時，賴氨酸作為Lys(Mtt)來摻入。Mtt基團通過將 樹脂懸浮在純凈的六氟異丙醇20分鐘，隨后用DCM和NMP洗滌來除去。賴氨酸的化學(xué)修飾 通過人工合成或通過在Liberty上一個或更多個自動化步驟然后人工偶聯(lián)來進行。肽合成 的另一種方法是通過利用HBTU偶聯(lián)的在ABI433上的Fmoc化學(xué)作用。在合成之后，樹脂用 DCM洗滌并干燥，通過TFA/TIS/水(92. 5/5/2. 5)處理2小時，然后用二乙醚沉淀來從樹脂 上裂解肽。肽在30%乙酸或類似的溶劑中重新溶解，在C18柱上利用乙腈/TFA通過標(biāo)準(zhǔn)的 RP-HPLC來純化。肽的身份通過MALDI-MS確認。SPPS 方法 C
保護的肽基樹脂利用制造商提供的方案根據(jù)Fmoc策略在Advanced ChemTech合 成儀(APEX 348)上合成，0. 25mmol規(guī)模，其采用匪？⑴-甲基吡咯烷酮)中DIC (二環(huán)己基碳 二亞胺)和HOBtd-羥基苯并三唑)介導(dǎo)的偶聯(lián)。用于肽酰胺合成的起始樹脂是Rink-酰 胺樹脂，Wang或氯三苯甲基樹脂用于具有羧基C-末端的肽。使用的保護的氨基酸衍生物 是標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc-氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem提供)。N末端氨基酸是在α氨 基基團Boc保護的(例如，Boc-His (Boc) OH用于在N-末端具有His的肽)。在位置26的 賴氨酸的ε氨基基團用Mtt、Mmt、Dde、iVDde或Boc保護，取決于白蛋白結(jié)合部分和間隔區(qū) 的附著的途徑。肽的合成在某些情況下可以通過使用二肽來改進，例如，來自Novabiochem 的偽脯氨酸，F(xiàn)moc-Ser (tbu) -ΨSer (Me, Me)-0H，參見，例如，Novobiochem 2002/2003 或更 新版本的目錄，或 W. R. Sampson (1999)，J. Pep. Sci. 5，403。除去ivDde或Dde保護的過程樹脂(0. 25mmol)置于人工搖動器/過濾裝置中，用N-甲基吡咯烷酮中的2%胼處 理(20ml，2X 12分鐘)來除去Dde或ivDde基團，用N-甲基吡咯烷酮洗滌(4X 20ml)。除去Mtt或Mmt-保護的過程樹脂(0. 25mmol)置于人工搖動器/過濾裝置中，用DCM中的2% TFA和2_3% TIS 處理(20ml，5-10分鐘重復(fù)6-12次)來除去Mtt或Mmt基團，用DCM (2 X 20ml)、DCM中的 10% MeOH 禾Π 5% DIPEA(2X 20ml)和 N-甲基吡咯烷酮(4X 20ml)洗滌。除去Mtt保護的可選擇的過程樹脂置于注射器中，用六氟異丙醇處理2 X 10分鐘來除去Mtt基團。樹脂然后如 上所述用DCM和NMP洗滌。用于側(cè)鏈向賴氨酸殘基的附著的過程白蛋白結(jié)合殘基(式I的B-U-側(cè)鏈)可以通過利用標(biāo)準(zhǔn)的酰化試劑例如但不限 于DIC、H0Bt/DIC、H0At/DIC或HBTU?；綐渲Y(jié)合的肽、或在溶液中?；轿幢Ｗo的肽來 附著到肽上。附著到樹脂結(jié)合的肽途徑I
活化的(活性酯或?qū)ΨQ的酸酐)白蛋白結(jié)合殘基(式(I)的A-B-側(cè)鏈)，例如十八 烷基二酸單_(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(Ebashiet al. EP511600，相對于樹脂結(jié)合 的肽4摩爾當(dāng)量)溶于NMP(25mL)中，添加到樹脂在室溫下?lián)u動過夜。過濾反應(yīng)混合物，樹 脂用NMP、二氯甲烷、2-丙醇、甲醇和二乙醚廣泛地洗滌。途徑II白蛋白結(jié)合殘基(式I的A-(B)-側(cè)鏈)溶于N-甲基吡咯烷酮/二氯甲烷(1 1， IOml)中。添加活化試劑例如羥基苯并三唑(HOBt)(相對于樹脂4摩爾當(dāng)量)和二異丙基 碳二亞胺(相對于樹脂4摩爾當(dāng)量)，攪動溶液15分鐘。溶液添加到樹脂中，添加二異丙 基乙胺(相對于樹脂4摩爾當(dāng)量)。樹脂在室溫下?lián)u動2到24小時。樹脂用N-甲基吡咯 烷酮(2 X 20ml)、N-甲基吡咯烷酮/ 二氯甲烷(1 1) (2 X 20ml)和二氯甲烷(2 X 20ml)洗 滌。途徑III活化的(活性酯或?qū)ΨQ的酸酐)白蛋白結(jié)合殘基(式I的A-B側(cè)鏈)例如十八烷 基二酸單-(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(Ebashi et al. EP511600，相對于肽1-1. 5摩 爾當(dāng)量)溶于有機溶劑例如乙腈、THF、DMF、DMSO或水/有機溶劑的混合物中(l_2mL)，與 10摩爾當(dāng)量的DIPEA—起添加到肽在水中(10-20mL)的溶液中。對于白蛋白結(jié)合殘基上的 保護基團，例如叔丁基來說，反應(yīng)混合物被凍干0/N，并且分離的粗肽此后脫保護_在叔_ 丁 基基團的情況下肽溶于三氟乙酸、水和三異丙基硅烷(90 5 5)的混合物中。在30分 鐘后，混合物在真空中蒸發(fā)，最后的肽通過制備型HPLC純化。除去Fmoc保護的過程樹脂(0. 25mmol)置于人工搖動器的濾瓶中，用N-甲基吡 咯烷酮/ 二氯甲烷(1 1)處理(2 X 20ml)和用N-甲基吡咯烷酮(IX 20ml)，N-甲基吡咯 烷酮中20%哌啶的溶液(3X20ml，各10分鐘)處理。樹脂用N-甲基吡咯烷酮(2X20ml)、 N-甲基吡咯烷酮/ 二氯甲烷(1 1) (2 X 20ml)和二氯甲烷(2 X 20ml)洗滌。肽裂解下樹脂的操作通過與三氟乙酸、水和三異丙基硅烷(95 2. 5 2. 5到92 4 4)的混合物 在室溫下攪動180分鐘，從樹脂上裂解肽。過濾裂解混合物，濾液通過氮氣流濃縮成油。粗 肽用45mL 二乙醚從這種油中沉淀，用45mL 二乙醚洗滌1到3次。純化粗肽通過半制備胡HPLC在裝填了 5 μ或7 μ C-18硅的20_ X 250mm柱上 純化。取決于肽，使用一個或兩個純化系統(tǒng)。TFA:在干燥之后，粗肽溶于5ml 50%乙酸H2O中，用H2O稀釋到20ml，注射到柱上， 其然后用0. TFA中40-60% CH3CN的梯度IOml/分鐘在40°C在50分鐘期間洗脫。收集 含有肽的級分。純化的肽在用水稀釋洗脫物之后凍干。硫酸銨柱用0. 05M(NH4)2SO4中的40% CH3CN平衡，其用濃縮的H2SO4調(diào)節(jié)到pH 2.5。在干燥之后，粗肽溶于5ml 50%乙酸H2O中，用H2O稀釋到20ml，注射到柱上，其然后 用 0. 05M(NH4)2SO4^pH 2. 5 中 40% -60% CH3CN 的梯度 IOml/ 分鐘在 40°C在 50 分鐘期間洗 脫。采集含有肽的級分，用3倍體積的H2O稀釋，通過用0. 1 % TFA平衡的S印-Pak C18 柱(Waters part. # 51910)。然后用含有70% CH3CN的0. TFA洗脫，純化的肽通過在用 水稀釋洗脫物之后的凍干法來分離。獲得的最終產(chǎn)物通過分析性RP-HPLC (滯留時間)和通過LCMS來表征。
RP-HPLC分析可以使用214nm處的UV檢測、以及例如，Vydac218TP54 4. 6mmX 250mm 5 μ C-18 硅柱(The S印arations Group, Hesperia, USA)和在 42°C在例如 lml/分鐘洗脫來進行。最常使用以下具體條件的一種方法03_A1_1 HPLC (方法03_A1_1)利用裝備有Waters 996 二極管陣列檢測器的Waters 2690 系統(tǒng)進行RP分析。UV檢測在在42°C以lml/分鐘洗脫的218TP54 4. 6mmX 250mm 5 μ C-18 硅柱(The SeperationsGroup,Hesperia)上，在 214、254、276 和 301nm 處采集。柱用 10% 的0. 5M硫酸銨平衡，其用4M硫酸調(diào)節(jié)到pH 2. 5。在注射之后，樣品通過在相同的水性緩沖 液中0%到60%乙腈的梯度在50分鐘期間洗脫。方法03_B1_2HPLC (方法03_B1_2)利用裝備有Waters 996 二極管陣列檢測器的Waters 2690系統(tǒng)進行RP分析。UV檢測在在42 °C以0. 5ml/分鐘洗脫的Zorbax 300SB C-18(4, 5X150mm,5y )上，在214、254、276和301nm處采集。柱用TFA在水中的水溶液 (0. 1% )平衡。在注射之后，樣品通過在TFA在水中的水溶液(0. )中0%到60%乙腈 (+0. 1% TFA)的梯度在50分鐘內(nèi)洗脫。方法02_B1_1HPLC(方法02_B1_1)利用裝備有Waters 2487雙波帶檢測器的Alliance Waters 2695 系統(tǒng)進行 RP 分析。214nm 和 254nm 處的 UV 檢測利用 Vydac 218TP53，C18，300人，5um， 3. 2mmX 250mm柱，42°C來采集。以0. 50ml/分鐘的流速，用水中0-60%乙腈、95-35%水和 5%三氟乙酸(1. 0% )的線性梯度在50分鐘內(nèi)洗脫。方法01_B4_2HPLC (方法01_B4_2)利用裝備有Waters 996 二極管陣列檢測器的Waters 600S 系統(tǒng)進行 RP 分析。214nm、254nm 處的 UV 檢測使用 Symmetry300 C18、5um、3. 9mmX 150mm, 42°C采集。用水中5-95%乙腈、90-0%水和5%三氟乙酸(1.0%)的線性梯度以1.0分鐘 /分鐘的流速在15分鐘內(nèi)洗脫。方法02_B4_4HPLC(方法02_B4_4)利用裝備有Waters 2487雙波帶檢測器的Alliance Waters 2695 系統(tǒng)進行 RP 分析。214nm、254nm 處的 UV 檢測使用 Symmetry300 C18、5um、 3.9謹(jǐn)\150謹(jǐn)，421采集。用水中5-95%乙腈、90-0%水和5%三氟乙酸(1.0%)的線性梯 度以1. 0分鐘/分鐘的流速在15分鐘內(nèi)洗脫。方法02_B6_1HPLC(方法02_B6_1)利用裝備有Waters 2487雙波帶檢測器的Alliance Waters 2695 系統(tǒng)進行 RP 分析。214nm 和 254nm 處的 UV 檢測利用 Vydac 218TP53，C18，300人,5um， 3. 2mmX 250mm柱，42°C來采集。以0. 50ml/分鐘的流速，用水中0_90 %乙腈、95_5 %水和 5%三氟乙酸(1. 0% )的線性梯度在50分鐘內(nèi)洗脫。方法03_B6_1HPLC (方法03_B1_1)利用裝備有Waters 996 二極管陣列檢測器的Waters 2690 系統(tǒng)進行 RP 分析。UV 檢測在 218TP54 4. 6mmX250mm 5μ018 硅柱(The Seperations Group, Hesperia)上，在214、254、276和301nm處采集，其在42°C以lml/分鐘洗脫。柱用水中TFA的水溶液(0. )中5%乙腈(+0. TFA)來平衡。在注射之后，樣品通過在TFA 在水中的水溶液(0. )中0%到90%乙腈(+0. 1% TFA)的梯度在50分鐘內(nèi)洗脫。做為選擇，可以如上述進行制備梯度洗脫，其中化合物洗脫的乙腈的百分比是標(biāo) 注的。通過MALDI鑒定身份。使用以下設(shè)備LCMS ^h d3 Sciex API 100 Single quadropole M if ft、Perkin ElmerSeries 200Quard泵、Perkin Elmer Series 200 自動進樣器、AppliedBiosystems 785A UV檢測器、 Sedex 75蒸發(fā)光散射檢測器組成的裝備上進行。儀器控制和數(shù)據(jù)獲取通過在Windows 2000計算機上的SciexSample控制軟件進 行。HPLC泵連接到含有以下的兩個洗脫液貯備池 A 水中0. 05%三氟乙酸B 乙腈中0.05%三氟乙酸分析在室溫下通過在柱上注射合適數(shù)量的樣品(優(yōu)選的20 μ L)來進行，所述柱用 乙腈梯度來洗脫。使用的HPLC條件、檢測器設(shè)置和質(zhì)譜儀設(shè)置在下表中給出。柱Waters Xterra MS C—18 X 3mm id 5ym梯度以1. 5ml/分鐘在7. 5分鐘期間5% -90%乙腈線性檢測210nm(來自DAD的模擬輸出)ELS (來自ELS的模擬輸出)，40°CMS電離作用方式API-ES做為選擇，LCMS在由 Hewlett Packard 系列 1100 G1312A BinPump、Hewlett Packard 系列 IlOOColumn compartment、Hewlett Packard 系列 1100 G1315A DAD 二極管 陣列檢測器、Hewlett Packard系列1100MSD和Sedere 75蒸發(fā)光散射檢測器組成的、由HP Chemstation軟件控制的裝備上進行。HPLC泵連接到含有以下的兩個洗脫液貯備池A 水中的 IOmM NH4OHB :90% 乙腈中的 IOmM NH4OH分析在23°C下通過在柱上注射合適數(shù)量的樣品(優(yōu)選的20μ L)來進行，所述柱用 A和B的梯度來洗脫。使用的HPLC條件、檢測器設(shè)置和質(zhì)譜儀設(shè)置在下表中給出。柱 Waters Xterra MS C—18 X 3mm id 5ym梯度以1. 5ml/分鐘在6. 5分鐘期間5% -100%乙腈檢測210nm(來自DAD的模擬輸出)ELS (來自ELS的模擬輸出)MS 電離作用方式 API-ES。掃描 IOO-IOOOamu 步進 0. IamuMALDI-MS 肽的分子量利用基質(zhì)輔助的激光解吸飛行時間質(zhì)譜法(MALDI-MS)來測定，記錄 在Microflex (Bruker)上。使用α -氰-4-羥基-肉桂酸的基質(zhì)。分析HPLC條件(方法I)
用0. 1 % TFA/H20 平衡柱(Xterra TM MS C18, 5um, 4, 6 X 150mm 柱，P7N 186 000490)，在 25 分鐘期間通過 0 % CH3CN/0. 1 % TFA/H20 到 60 % CH3CN/0. 1 % TFA/H20 的梯 度、隨后在5分鐘期間從60 %到100 %的梯度洗脫。在本發(fā)明的實例中，命名和結(jié)構(gòu)圖是指對天然的氨基酸使用單字母符號，例如，H是L-組氨酸、A是L-丙氨酸，等等。氨 基酸的三字母縮寫也可以使用，例如His是L-組氨酸、Ala是L-丙氨酸，等等。對于非天 然的氨基酸，使用三字母縮寫，例如，Aib是氨基異丁酸。氨基酸的位置可以用氨基酸符號 之后的上標(biāo)數(shù)字來表示，例如Lys37或Lys37。N-末端氨基基團可以表示為NH2或H。C-末 端羧基基團可以表示為-OH或-C00H。C-末端酰胺基標(biāo)記為-NH2。子結(jié)構(gòu) 都是指HiS-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe。賴氨酸的ε氨基基團可以用希臘符號ε或拼寫的“印silon”來描述。以下實施例中的結(jié)構(gòu)在一些情況下是組合了氨基異丁酸的三字母縮寫Aib的天 然氨基酸的單字母符號的組合。在某些情況下，一些氨基酸以展開的完整結(jié)構(gòu)顯示。因而 被衍生化的賴氨酸可以顯示為實施例1中的展開的完整結(jié)構(gòu)，其中在位置38的賴氨酸是展 開的。在實施例1中，位置37中的精氨酸和位置38中展開的賴氨酸之間的氮(具有標(biāo)出 的H)因而是連接兩個氨基酸的肽鍵的氮。根據(jù)上文的過程，以下衍生物作為本發(fā)明的非限制性實例被制備實施例1N- ε 37 {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基十九烷酰基)哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨基His7，Glu22, Arg26, Arg34, Lys37JGLP-I (7-37)酰胺 制備方法AHPLC 方法 B6RT = 35，49minLCMS :m/z = 1096，2 (M+3H)3+計算的MW = 4380,0
實施例2N- ε 20- {2_ [2~ (2~ {2~ [2~ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib2，Leu14,Lys20, Gln28, Ser (0_ 苯甲基)39J exendin-4 (1-39)酰胺 制備方法ΑHPLC 方法 Β6 RT = 37. 63minLCMS :m/z = 1705. 9 (M+3H)3+計算的MW = 5113. 9實施例3 N-ε 26 {2- [2~ (2~ {2~ [2~ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基[去氨 基 His7，Arg34]GLP-I-(7-37) 制備方法AHPLC 方法 B6 RT = 36，45minLCMS :m/z = 1404. 3 (M+3H)3+計算的MW = 4209. 8實施例4N- ε 37 {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (⑶ _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認的結(jié)構(gòu)計算的MW = 4409. 1實施例5Ν-ε 23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷?；被?哌啶 _4_ 基 羰基氨基]-3-(羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰 基][Aib8, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37) 制備方法AHPLC 方法 02_B6_4 RT = 9. 32minLCMS :m/z = (M+3H) 3+1413. 8計算的MW = 4238. 8實施例6Ν-ε 37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-羧基十七烷酰基)哌啶 _4_ 基羰基 氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠[去 氨基 His7，Glu22 Arg26, Arg34, Phe (m-CF3) 28]GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法Α
HPLC 方法 01_B6_2 RT = 11. 92minLCMS :m/z = 1474. 8 (M+3H)3+
計算的MW = 4420. 0實施例7[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) -Lys (2- {2-[2- (2- {2-[2- ((S) -4-羧基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁酰基氨基)乙氧基]乙 氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基) 制備方法B類似于方法A制備肽，只是使用CEM Liberty肽合成儀，從fmoc-Lys (mtt) -wang 樹脂開始。N-末端胺是用Boc基團保護的。利用六氟-2-丙醇從賴氨酸除去Mtt，側(cè)鏈?zhǔn)?用fmoc-化學(xué)作用在CEMLiberty肽合成儀上制備。HPLC 方法 03_B6_1 RT = 35. 50minLCMS :m/z = 1114. 0 (M+4H)4+計算的(M)= 4452. 1實施例8 N- ε 2(1 ({2- [2~ (2~ {2~ [2~ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, Glu30, Thr (0-苯甲基)33，]GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法AHPLC 方法 B6 RT = 32. 49minLCMS :m/z = 1459. O (M+3H)3+計算的MW = 4375. O實施例9
Ν-ε 30 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Lys30]GLP-I-(7-37) 制備方法肽在來自Advanced Chemtech的Apex396上制備，最終產(chǎn)物通過分析性 HPLC 禾口 MALDI-MS 來表征。HPLC (方法I)參見上文的描述RT = 27, 6minMALDI-MS 4367. 9實施例10Ν-ε 31 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8， Glu22, Arg26, Lys 31]GLP-I-(7-37)
H-H-NsJ-E GTFTSDVSSYLEEQAAREF I A-Nx^f]-L VKGR
H3CxCH3H ο制備方法肽在來自Advanced Chemtech的Apex396上制備，最終產(chǎn)物通過分析性 HPLC 禾口 MALDI-MS 來表征。HPLC (方法A)參見上文的描述RT = 28, 4minMALDI-MS 4252. 5實施例11N- ε 20 ({2- [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基)[Aib8， Lys20, Arg26, 2-萘基丙氨酸 28，Glu30] GLP-I (7-37)酰胺 制備方法-A[1016]HPLC 方法 B6:RT = 32. 31minLCMS :m/z = 1445. 0 (M+3H)3+計算的MW = 4332. 9實施例12 [Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, ]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2-[2- (2-[2- (2-((S) -4-[1-[ 19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙?；?氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺 [1022] 制備方法AHPLC 方法 02_B4_4 RT = 9. 73minLCMS :m/z = (M/3)+l = 1494. 9 禾口 (M/4)+l = 1120. 9 ； (SciexlOOAPI)計算的MW = 4480.1實施例13N- ε 2(1 ({2- [2_ (2_ {2_ [2_ ((R) _3_ 羧基 _3_ {[ 1_ (17-羧基十七烷酰基)哌啶 _4_ 羰 基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, 2-萘基丙氨酸 12，Glu30, ] GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法AHPLC 方法 B6:RT = 30. 70minLCMS :m/z = 1084. 0 (M+4H)4+計算的MW = 4332. 9實施例14[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2-[2- (2-[2- (2- ((S)-4-[l-[19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁酰基氨基)乙氧基)乙氧基] 乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺[1038] 制備方法A，和實施例72HPLC 方法 02_B6_4 RT = 9. 95minLCMS :m/z = 1484. (M+3H)3+計算的MW = 4451. 1實施例15Ν-ε 31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)_3-羧基-3-{[l-(19-羧基-十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8, Glu22, Arg26, Lys31, Arg34]GLP-I-(7-37) 制備方法B，和實施例72肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4280. 9實施例16N- ε 26-[⑶-4-羧基_4_({反式_4_[ (19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]環(huán)己烷 羰基}氨基)丁?；鵠[Aib8, Arg34]GLP-I-(7-37) 制備方法Β，和實施例72肽在69%乙腈下洗脫。[1056]通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 3990. 6實施例17N- ε 26- {4_ [⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己 烷羰基}氨基)丁?；被鵠丁酰基} [Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37) 制備方法B肽在70%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4075. 7實施例18N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37) 制備方法B，和實施例72肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4135. 8實施例19N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)-酰胺 制備方法B，和實施例72肽在70%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4279. 9實施例20N- ε 18- {2_ (2_ (2_ (2_ [2_ (2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({4_ [ (19-羧基十九烷酰基氨基) 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基)乙氧基]乙酰基)乙氧基)乙氧基)乙 ?；鶀 [Aib8, Lys 18，Arg26, Arg34]GLP-I (7-37) 制備方法肽在來自Advanced Chemtech的Apex396上制備，最終產(chǎn)物通過分析性 HPLC 和 MALDI-MS 來表征。HPLC (方法 B6)RT = 34. IminLCMS :m/z = XX (M+4H)4+ 1088計算的MW = 4350.0實施例21N- ε 20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[反式 _4-([19_ 羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙 氧基)乙?；鵠[去氨基 His1, Lys20, Ser (0-苯甲基)33，Ser (0-苯甲基)39] exendin (1-39) 制備方法AHPLC 方法 B6:RT = 39. 22minLCMS :m/z = 1736. 9 (M+3H)3+計算的MW = 5207. 0實施例22[1096][Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-( [19-羧基十九烷酰基氨基]甲基)環(huán)己基羰基氨基]-3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧 基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰基]酰胺 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4494. 2實施例23N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法B肽在67%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4451. 1實施例24N-ε 37- [2~ (2~ {2_ [2~ (2~ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4422. 1實施例25N-ε 37- [2~ (2~ {2_ [2~ (2~ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({4_ [(反式-19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基 His7, Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4350. 0實施例26N- ε 37- [2~ (2~ {2_ [2~ (2~ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][去氨基圯87，611122，六『826，六『834，1^837]61^-1-(7-37) 制備方法B[1127]肽在69%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4423. 1實施例27[去氨基 His7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- {2-[2- (2- {2-[4-羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基-十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-酰胺 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4479. 1實施例28[去氨基His7，Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反 式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基) 乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺 制備方法:AHPLC 方法 B6:RT = 35. 25minLCMS :m/z = 1469. O (M+3H)3+計算的MW = 4407. 1實施例29N- ε 26 [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({4_ [ (19-羧基-十九烷?；被? 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧 基)乙酰基[Aib8, Lys 26]GLP-I (7-37)酰胺[1147] 制備方法方法CHPLC 方法 01_Β4_2 RT = 11. 26minLCMS :m/z = XX (M+4H) 4+1071計算的MW = 4279. 9實施例30N- ε 26 [2_ (2_[2_ (2_[2_ (2_ ((S) _2_[反式 _4_ ((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲基) 環(huán)己基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基) 乙?；鵠[Aib8，Lys26] GLP-I (7-37)酰胺 制備方法方法CHPLC 方法 01_Β4_2 RT = 11. IlminLCMS :m/z = XX (M+4H) 4+1103計算的MW = 4409. 1實施例31N- ε 37- [2~ (2~ {2_ [2~ (2~ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基見87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37) 制備方法B肽在71%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4351. O實施例32N- ε 37- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Glu30, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37) 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4481. 1實施例33N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)-十六烷?；被酋；?丁?；被鵠-丁?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37) 肽在62%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4341. 9實施例34 [1182]N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37) N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠己酰基氨基} 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37) 實施例36N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{4-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠丁?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Arg34]GLP-I-(7-34)[1196] 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4071. 6實施例37N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠-十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34) 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4183. 8實施例38N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨基]己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Arg34]GLP-I-(7-34) 制備方法B肽在67%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4099. 7實施例39N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35) 制備方法B肽在70%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4240. 9實施例40N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]己?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35) 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4156. 7實施例41N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠己酰基氨基} 丁?；被?丁酰基氨基] 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4311. 9實施例42N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶ _4_ 羧基-4-{6-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀 丁?；被?丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34]GLP-l-(7-35) 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4128. 7實施例43N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys33，Arg34] GLP-I-(7-34) 制備方法Β肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4113. 7實施例44N-ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4-((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺 制備方法B肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4396. 1實施例45N- ε 26-[2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基-4_((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Lys26，Arg34] GLP-I-(7-36) 酰胺 制備方法B肽在65%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 5121. 9實施例46[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34] GLP-卜(7-37) Lys [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧 基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨 基]十二烷?；被鶀 “ 丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠酰胺 制備方法B肽在65%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4681. 4實施例47N-ε 20-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I-(7-37) 酰胺 制備方法B肽在62%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4638. 3實施例48N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺 制備方法B肽在69%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4624. 3實施例49N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37) 酰胺 制備方法B肽在65%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4595. 3實施例50N-ε 37-[[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4_((S)_4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^37]61^-1-(7-37)酰胺 制備方法Β肽在66%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4523. 2實施例51[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37] GLP-I-(7-37) Lys [2-(2-{2-[4-羧 基-4-(4-羧基-4-{4-[4-(16-1H-四唑-5-基-十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨基]丁酰 基氨基}丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠 制備方法方法Α，只是使用8-10倍摩爾過量的氨基酸、DIC和H0At/H0Bt(l 1) 在來自Advanced Chemtech的Apex396上制備肽，Mtt基團用六氟異丙醇脫保護。硫胺接頭 的附著在兩個步驟中實現(xiàn)；利用DIC和H0At/H0Bt(l 1)，4-氨磺酰丁酸(3倍過量)首先 偶聯(lián)樹脂。然后，在NMP中與羰基二咪唑混合的16-(1H-四唑-5-基)十六酸(3倍過量) 添加到樹脂中，隨后添加DBU。HPLC 方法 B6:RT = 29. 8minLCMS :m/z = 1161. 2 (M+4H)4+計算的MW = 4640. 2實施例52[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I- ((7-37) Lys (2- (2- (3- (2- (2- (2- (2-(2- (2- (2- (2- (2- (2- (2- (2- [4- (S)-羧基 ~4~ (4- (S)-羧基 ~4~ (4- {4- [16-(四唑 _5_ 基)
十六烷酰基氨磺?；鵠丁?；被鶀丁?；被?丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)丙?；被?乙氧基)乙氧基)肽 制備方法肽在來自Advanced Chemtech的Apex396上制備，硫代酰胺接頭的附著 在兩個步驟中實現(xiàn)。利用DIC和H0At/H0Bt(l 1)，4-氨磺酰丁酸首先偶聯(lián)樹脂。然后， 在NMP中與羰基二咪唑混合的16-(1H-四唑-5-基)十六酸添加到樹脂中，隨后添加DBU。 其他的是與實施例小節(jié)開始處描述的相同的方案。[1311]HPLC (方法 B6)RT = 30minLCMS :m/z = XX (M+4H)4+ 1274計算的(M+H)+= 5096實施例53N- α 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [⑶ _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；鵠[去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34，ε -Lys37]GLP-I-(7-37) 制備方法Β，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 02_Β6_1 RT = 37. 05min LCMS :m/z = 1106. 3 (M+4H)4+計算的(M)= 4423. 1實施例54N-α 8-[2-(4-咪唑基)乙酰基]N-ε 37-[2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(8-37) 制備方法B肽在68%乙腈下洗脫。通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4409. 1實施例55[1331][去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁酰基氨基)乙氧基]乙氧基} 乙?；?肽 制備方法Β，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_Β6_1 RT = 35. 58minLCMS :m/z = 1077. 8 (M+4H)4+計算的(M)= 4306. 9實施例56[去氨基 His7，Glu22, Arg26，34]-GLP-1 (7-37)-Lys_[2-(2_ {2_[2_ (2_ {2_[4_ 羧 基-4-({4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基]肽 制備方法B，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 02_B6_1 RT = 34. 40minLCMS :m/z = 1120. 8 (M+4H)4+計算的(M)= 4480. 1實施例57[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-I (7-37)-Lys ((S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?丁酰基)肽[1348] 制備方法B，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_B6_1 RT = 35. 14minLCMS :m/z = (M+4H)4+計算的(M)= 4436. 0實施例58[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys-(2-(2-{2-[(S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；?肽 制備方法B，按照如實施例7所描述的類似方式。HPLC 方法 03_B6_1 RT = 34. 92minLCMS :m/z = 1146. 3 (M+4H)4+計算的(M)= 4581. 2實施例59[去氨基 His7，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧基} 乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?肽 制備方法B，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_B6_1 RT = 35. 39minLCMS :m/z = 1095. 8 (M+4H)4+計算的(M)= 4380. 0實施例60 制備方法Β，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_Α1_1 RT = 35. 73minLCMS :m/z = 1081. 3 (M+4H)4+計算的(M)= 4323. 0實施例61Ν-ε 37-((S)_4-羧基-4-{[l-(19-羧基-十九烷酰基)_哌啶-4-羰基]-氨 基}_ 丁?；?[去氨基 His7，Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37) 制備方法B，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_B6_1 RT = 36. 28minLCMS :m/z = 1009. 5 (M+4H)4+計算的(M)= 4032. 6實施例62[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34] -GLP-1 (7-37) -Lys- ((S) _4_羧基 ~4~ {[1_ (19-羧
基_十九烷酰基)_哌啶-4-羰基]-氨基}_ 丁?；?肽 制備方法Β，按照如實施例7所描述的類似的方式。HPLC 方法 03_Β6_1 RT = 36. 06minLCMS :m/z = 1041. O (M+4H)4+計算的(M)= 4161. 8實施例63N-ε 26-[2-(2-{2-[(R)-4-羧基 _4-((R)_4-羧基-4-{12-[4-(16_1Η-四 唑-5-基-十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]_[Aib8，Arg34] GLP-I (7-37) 制備方法Β肽在70%乙腈下洗脫通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4454. 1實施例64N- ε 37-{2-[2-(2-{(S)-4-[(S)-4-(12-{4-[16-(2-叔-丁 基 _2H_ 四 唑-5-基)-十六烷酰基氨磺?；鵠丁?；被鶀十二烷?；被?-4-羧基丁?；?基]-4-羧基丁酰基氨基}乙氧基)乙氧基]乙?；鶀[去氨基見87，611122^印26^印34， Lys37]GLP-I(7-37) 制備方法B肽在74%乙腈下洗脫通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4652. 4實施例65N-ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶_4_ 羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四 唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁酰基氨 基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37) 制備方法B肽在65%乙腈下洗脫。[1413]通過MALDI-MS確認結(jié)構(gòu)計算的MW = 4524. 2實施例66N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基十九烷?；?氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基} 乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37) 制備類似于SPPS方法B。HPLC 方法 02_B6_1 RT = 33. 58minLCMS :m/z = 1114(M+4H)4+計算的(M)= 4451. 1實施例67[ImPr7, Arg26'34, Glu22]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- [2- ((S) -4- ((S) -4- (12-[4- (16-IH-四唑-5-基十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被?-4-羧基丁酰基氨 基)-4-羧基丁?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠-酰胺
hPn 制備方法Α肽在61%乙腈下洗脫結(jié)構(gòu)通過LC-MS確認計算的MW :(Μ/3)+1 = 1550. 8 和(M/4)+l = 1163. 1 ； (SciexlOOAPI)發(fā)現(xiàn)的MW :(Μ/3)+1 = 1551. 9 禾口 (M/4)+l = 1164. 3 ； (SciexlOOAPI)實施例68Ν-ε 36-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4-((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧 基)乙?；鵠[Aib8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37) 制備方法AHPLC (方法 B6)RT = 36. 8minMS-TOF :m/z = 4468計算的(M+H)+= 4469實施例69Ν-ε 26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4_((9-羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧 基)乙酰基][Aib8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37) 制備方法ΑHPLC (方法 Β4)RT = 11. 4minLCMS :m/z = 1433 (M+3H)3+計算的(M+H)+= 4296. 9實施例70Ν-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4-((9_ 羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧 基)乙酰基][Aib8，22，35，Lysl8, Arg26, 34]GLP-I-(7-37) 制備方法AHPLC (方法 B4)[1452]RT = 11. OminLCMS :m/z = 1459 (M+3H)3+計算的(M+H)+= 4378. 1實施例71Ν-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)_3-[反式-4_((9-羧基十九烷?；被鵠甲 基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧 基)乙?；鵠[Aib8, Lysl8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37) 制備方法AHPLC (方法 B4)RT = 11. 4minMS-TOF :m/z = 4338計算的(M+H)+= 4338基于微波的Liberty 肽合成儀(CEM Corp.，North Carolina) A-B-C-D-衍生化的 Lys GLP-I類似物的0. 125mMol合成。實施例72 肽酰胺的合成一般注意事項。用于肽酰胺合成的起始樹脂是Rink-酰胺樹脂，Wang或氯三苯甲 基樹脂用于具有羧基C-末端的肽。實施例19 中 N- ε 26-[2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4-[(19_ 羧 基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；?基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]衍生化的合成步驟1在肽序列完成后，從Lys的ε氨基基團上除去mtt保護，F(xiàn)MOC 8_氨基_3，6_ 二氧 雜辛酸/HOAT在NMP (2. 5mL)中的0. 3M溶液添加到樹脂，隨后添加NMP中DIC的0. 75M溶 液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。步驟2步驟1中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出，用 NMP(7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70_75度加熱3分鐘，隨后用NMP 洗滌(4 X 7ml)。FMOC 8-氨基_3，6_ 二氧雜辛酸/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹 月旨，隨后添加NMP中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗 滌(4 X 7ml)。步驟3步驟2中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出， 用NMP (7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70-75度加熱3分鐘，隨后用NMP 洗滌(4 X 7ml)。FMOC-Glu-OTBU/HOAT在NMP中的0· 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添加NMP中 DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。 [1475]步驟4步驟3中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出， 用NMP (7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70-75度加熱3分鐘，隨后用 NMP 洗滌(4 X 7ml)。FMOC-氨甲環(huán)酸/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添加NMP 中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。步驟5步驟4中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出， 用NMP (7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70-75度加熱3分鐘，隨后用 NMP 洗滌(4 X 7ml)。二十烷二酸單叔丁酯和HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添加 NMP中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。步驟6叔丁酯保護的除去和從樹脂上裂解步驟5中獲得的樹脂用DCM洗滌(4X 7ml)并干燥。干燥的樹脂從Liberty上取 下，用TFA/TIS水(92.5/5/2.5)處理2h，從樹脂上裂解肽并除去叔丁基酯保護基團。濾出 樹脂，肽用二乙醚沉淀，通過離心分離。肽在30%乙酸或備選的溶劑混合物中再溶解，利用 所描述的方法之一純化。實施例14 中[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1_[ 19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰 基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠 衍生化的合成步驟7在肽序列完成之后，從Lys的ε氨基基團除去mtt保護，如步驟1_3描述的修飾 樹脂。樹脂用NMP中5%哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出，用NMP (7ml)洗滌， 隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70-75度加熱3分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。FMOC-六氫異煙酸/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添加NMP 中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。步驟8步驟7中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出， 用NMP(7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70_75度加熱3分鐘，隨后用 NMP 洗滌(4 X 7ml)。二十烷二酸單叔-丁酯/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添 加NMP中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml), 隨后是如步驟6中描述的裂解操作。實施例 15 中 N- ε 31- (2- {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ ((S) _3_ 羧基 _3_ {[1_ (19-羧基-十九
烷?；?哌啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?衍生化的合成步驟9步驟2中獲得的樹脂用NMP中5 %哌啶(7ml)進行Fmoc脫保護，加熱30秒，導(dǎo)出， 用NMP (7ml)洗滌，隨后添加另外的NMP中的5%哌啶(7ml)，70-75度加熱3分鐘，隨后用 NMP 洗滌(4 X 7ml)。FMOC-Asp-OTBU/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到樹脂，隨后添加NMP中 DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP洗滌(4X 7ml)。步驟10 步驟9中獲得的樹脂之后進行步驟7附著FMOC六氫異煙酸，之后進行步驟8附著 二十烷二酸單叔丁酯，最后通過如步驟6中描述的脫保護來合成。實施例18 中 N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧 基-十九烷酰基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；?氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]衍生化的合成步驟11N- ε 26- [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基 _4_ ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷酰 基氨基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠衍生化在步驟1-3-4-5和6后獲得。實施例16中N- ε 26-[⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷酰基氨基) 甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；鵠衍生化的合成步驟12在Mtt脫保護之后，F(xiàn)MOC-Glu-OTBU/HOAT在NMP中的0. 3M溶液(2. 5ml)添加到 樹脂，隨后添加NMP中DIC的0. 75M溶液(Iml)。反應(yīng)加熱到70-75度5分鐘，隨后用NMP 洗滌(4 X 7ml)，隨后是步驟4-5和6。步驟13對于所描述的白蛋白結(jié)合物的A部分的附著，可以使用步驟8中的操作，用合適的 A作為酸來替換二十烷二酸單叔丁酯。步驟14對于所描述的白蛋白結(jié)合物的B部分的附著，可以使用步驟7中的操作，用合適的 B作為酸來替換FMOC-六氫異煙酸。步驟15對于所描述的白蛋白結(jié)合物的C部分的附著，可以使用步驟9中的操作，用合適的 C作為酸來替換FM0C-Asp-0TBU。步驟16對于所描述的白蛋白結(jié)合物的D部分的附著，可以使用步驟1中的操作，用合適的 D作為酸來替換FMOC 8-氨基-3，6- 二氧雜辛酸。生物學(xué)發(fā)現(xiàn)在i. v.或s. c.施用后GLP-I衍生物的延長本發(fā)明的許多GLP-I衍生物的延長可以通過使用如下所述的方法在向健康豬sc 施用之后監(jiān)視其血漿濃度來確定。為了比較，也可以跟蹤sc.施用之后GLP-I (7-37)在血 漿中的濃度。本發(fā)明的其他GLP-I衍生物的延長可以以同樣的方法測定。[1513]實施例73 迷你豬中的藥物動力學(xué)測試許多本發(fā)明的GLP-I 衍生物(實施例 1，2，5，7，9，10，14，16，17，18，19，20，23，24， 25，26，27，28，31，33，34，35，49，50，52，59，和63的化合物)經(jīng)歷迷你豬中的藥物動力學(xué)測
試。利拉魯肽被包括在測試中用于比較的目的。 一般地，測試物質(zhì)溶于適合于皮下或靜脈內(nèi)施用的載體中。在當(dāng)前的研究中，皮下 地施用測試物質(zhì)。每個動物接受2nmol/kg體重的劑量，調(diào)整濃度從而給藥體積是大約1ml， 使用以下載體具有0. 05% w/v Tween 80的50mM磷酸鹽緩沖液(pH大約8)。在來自EllegaardGijttingen Minipigs ApS 的雄性Gdttingen迷你豬中進行研
究。在動物進入研究前容許的馴化期是大約6-10天。在馴化期的開始，迷你豬約5月齡， 體重范圍7-10kg。研究在室溫設(shè)置在21_23°C、相對濕度彡50%的適合的動物房中進行。房間被照 亮，給出12小時光線和12小時黑暗的周期。光線是從06. 00到18. OOh0動物置于有稻草作為床的圍欄中，每個圍欄中六只一起。在研究期間動物自由攝取民用質(zhì)量的飲用水，但是在給藥前一天的大約下午4點 開始禁食，直到給藥后約12小時。動物在到達時和在給藥當(dāng)天稱重。動物接受單次皮下注射。在頸部的右側(cè)、離耳朵約5-7cm、離頸部中間約7-9cm處 給予皮下注射。用針頭上的止動器給予注射，容許0. 5cm針頭引入。每個測試物質(zhì)一般給予三只動物，但在某些情況下給予兩只或更多只動物。從每只動物獲得采用12-16個采樣點的全血漿濃度_時間分布。根據(jù)以下時間表 采集血液樣品在靜脈內(nèi)施用之后(在本研究中不適用)給藥前(0)、注射后0. 17 (10 分鐘)、0. 5，1，2，4，6，8，12，24，48，72，96，和 120 小 時。在某些情況下，還有注射后168小時和240小時。皮下施用之后給藥前(0)、注射后0. 5，1，2，4，6，8，12，24，48，72，96，和 120 小時。在每個采樣時間，從每個動物抽取l_2ml血液。血液樣品采自頸靜脈。在某些情 況下，還有注射后168小時和240小時。血液樣品采集到含有緩沖液的試管中，用于穩(wěn)定化以免GLP-I衍生物的酶促降 解。適合的緩沖液的實例是EDTA(二 -鈉)0· 18M ；抑酶肽15000KIE/ml、Val-Pyr 0. 30mM 和pH值調(diào)節(jié)到7. 4，或直接采集到EDTA測試管中(即，Sarstedt Micro試管1. 3mL K3E)。 血液樣品在離心前優(yōu)選地在冰上保持最大20分鐘。利用離心分離血漿(例如，在4°C, 10分鐘，1500G)，立即轉(zhuǎn)移到Micronic試管。 約200 μ 1血漿轉(zhuǎn)移到每個Micronic試管。血漿保存在_20°C直到被分析。利用適合的分 析來分析血漿樣品GLP-I衍生物的含量，例如，免疫分析，例如，ELISA、RIA、RRA或LCMS分 析，如下文所述。對于LCMS分析，血漿樣品通過在LTQ-Orbitrap質(zhì)譜儀(ThermoFisher Scientiifc, Bremen)上通過LC-MS分析，Accela HPLC泵和自動進樣器連接到其上(都來 自ThermoFisher)。質(zhì)譜儀裝備有電噴界面，其以正電離作用方式運作。在選定的離子監(jiān)測方式下，用5Da的窗口和30000的分辨率進行分析。對于定量，以5ppm的準(zhǔn)確度提取五 個最強烈的同位素峰。在Jupiter Proteo柱(4 μ) 90A (50 X 2. Omm ID)上進行梯度洗脫。 移動相由乙腈中的A.O. 甲酸和B.O. 甲酸組成，流動速度是0.3ml/分鐘。血漿樣品 用有機溶劑沉淀。對于血漿標(biāo)準(zhǔn)物的構(gòu)建，將化合物摻入血漿中，如樣品一樣處理血漿標(biāo)準(zhǔn) 物。如標(biāo)準(zhǔn)物一樣制備質(zhì)量對照，具有20%的接受指標(biāo)。通過例如藥物動力學(xué)分析來分析血漿濃度_時間分布。適合的分析工具的實例是 利用 WinNonlin Professional 5. O (Pharsight Inc.，MountainView, CA, USA)的(NCA)。 使用來自每個動物的個體血漿濃度_時間分布進行NCA，計算終末半衰期(T1/2)。除了兩個化合物之外，所有測試的本發(fā) 明的GLP-I衍生物具有在迷你豬中皮下施 用后19-101小時范圍內(nèi)的半衰期。除了三種化合物之外，所有測試的本發(fā)明的GLP-I衍生 物具有在迷你豬中皮下施用后29-101小時范圍內(nèi)的半衰期。比較性化合物利拉魯肽的半 衰期是18小時。本發(fā)明的選擇的衍生物可以在丹麥長白豬中測試GLP-I衍牛物在豬中的藥物動力學(xué)測試豬(50%杜洛克豬、25%約克夏豬、25%丹麥長白豬，約40kg)在實驗開始時禁食。 對每只豬，施用處于50 μ M等滲溶液(5mM磷酸鹽、pH7. 4，0. 02 %Tween _20 (Merck)、 45mg/ml甘露醇(無熱原的，Novo Nordi sk)中的0. 5nmol測試衍生物每公斤體重。從頸靜脈 中的導(dǎo)管抽取血液樣品。5ml的血液樣品注入含有175 μ 1以下溶液的鋼化玻璃瓶中0. 18Μ EDTA、15000KIE/ml 抑酶肽(NovoNordisk)和 0. 30mM纈氨酸-Pyrrolidide (Novo Nordisk)， PH 7.4。在30分鐘內(nèi)，樣品在5-6000*g離心10分鐘。溫度保持在4°C。上清液吸移到不 同的玻璃瓶中，保持在負20°C待用。肽的血漿濃度利用不同單克隆或多克隆抗體在夾心ELISA中、或通過RIA來測定。 抗體的選擇取決于GLP-I衍生物。取決于所選擇的特定GLP-I衍生物，達到血漿中的峰值 濃度的時間在大范圍內(nèi)變動。96孔微滴定板中夾心ELISA的一般分析方案包被緩沖液(PBS)磷酸鹽緩沖鹽水，pH7. 2洗滌-緩沖液(PBS-wash) 磷酸鹽緩沖鹽水，0. 05% v/v Tween 20，ρΗ 7. 2分析-緩沖液(BSA-buffer)磷酸鹽緩沖鹽水，10g/l牛血清白蛋白(Fluka 05477) ,0. 05% v/v Tween 20，ρΗ7.2鏈霉抗生物素蛋白_緩沖液磷酸鹽緩沖鹽水，0. 5Μ NaCl,0. 05% ν/νTween 20, ρΗ 7. 2標(biāo)準(zhǔn)物血漿-基質(zhì)中單獨的衍生物A-TNP無義抗體AMDEX鏈霉抗生物素-辣根過氧化酶(Amersham RPN4401V)TMB-底物3，3，，5，5，四甲基聯(lián)苯胺(< 0.02% )，過氧化氫[1553]如下進行分析(體積/反應(yīng)孔)1.)用100 μ 1 PBS-緩沖液中5 μ g/ml的捕獲抗體包被 孵育 o/n，4°C參 5x PBS-wash 在最少30分鐘內(nèi)用最后的洗滌封閉 然后清空平板2.) 20 μ 1 樣品 + 在具有 10 μ g/ml A-TNP 的 100 μ 1 BSA-緩沖液中 lg/ml 的生物 素化的檢測抗體 室溫，在搖動器上孵育2h □ 5x PBS-wash，然后清空平板3. ) 100 μ 1的鏈霉抗生物素蛋白_緩沖液中的AMDEX 1 8000 室溫，在搖動器上孵育45-60分鐘· 5x PBS-wash，然后清空平板4. ) 100 μ 1 TMB-底物 在搖動器上在室溫下孵育χ分鐘 用 100 μ 1 4Μ H3PO4 終止反應(yīng)讀取450nm處的吸光度，620nm的作為參考樣品中的的濃度從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。RIA的一般分析方案DB-緩沖液80mM磷酸鹽緩沖液、0. 人血清白蛋白、IOmMEDTA，0. 6mM 硫柳汞，pH 7. 5FAM-緩沖液40mM磷酸鹽緩沖液、0. 人血清白蛋白、0. 6mM硫柳汞，pH 7.5活性炭 40mM磷酸鹽緩沖液、0. 6mM硫柳汞，16. 7%牛血漿、15g/l活性碳、pH 7. 5 (使用前在4°C混合懸浮液至少1小時)標(biāo)準(zhǔn)物血漿-基質(zhì)中單獨的衍生物分析在minisorp試管12X75mm(體積/試管)中如下進行 混合-在4°C孵育30分鐘-在3000rpm離心30分鐘-在將上清液轉(zhuǎn)移到新試管 中之后立即地用塞子封閉，在Y計數(shù)器上計數(shù)1分鐘。樣品中的的濃度從單獨的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算。GLP-1放射受體分析(RRA)所述方法是利用LEADseeker成像顆粒的放射測量的-配體結(jié)合分析。分析由以 下組成含有GLP-1受體的膜片段、未標(biāo)記的GLP-1類似物、用1251標(biāo)記的人類GLP-1、以及 用麥胚凝集素(WGA)包被的PS LEADseeker顆粒。冷的和1251標(biāo)記的GLP-1將競爭與受體 的結(jié)合。當(dāng)添加LEADseeker顆粒時，它們將經(jīng)由WGA殘基結(jié)合膜片段上的碳水化物殘基。 1251分子與LEADseeker顆粒之間的接近引起來自顆粒的光發(fā)射。LEADseeker將成像發(fā)射 光，它將與樣品中存在的GLP-1類似物的數(shù)量逆相關(guān)。試劑&材料動物血漿的預(yù)處理動物血漿在56°C熱處理4小時，在10. OOOrpm離心10分鐘。 以后，添加Val-Pyr(lOiiM)和抑酶肽(500KIE/ml)，保存在< _18°C待用。GLP-1類似物校準(zhǔn)物GLP_1類似物摻入熱處理過的血漿中，產(chǎn)生從約1 P M到lpM 的稀釋度系列。GLP-1RRA 分析緩沖液25mM Na-HEPES(pH = 7. 5)、2. 5mMCaCl2、ImM MgCl2、50mM NaCl、0. 卵清蛋白、0. 003% tween 20,0. 005% bacitracin,0. 05% NaN3。GLP-1受體懸浮液GLP_1受體膜片段從穩(wěn)定地表達人類胰腺GLP_1受體的嬰兒倉 鼠腎臟(BHK)細胞純化。保存在<-80°C待用。WGA偶聯(lián)的聚苯乙烯LEADseeker成像珠子(RPNQ0260，Amersham)珠子用 GLP-1RRA分析緩沖液重構(gòu)到13. 3mg/ml的濃度。然后添加GLP-1受體膜懸浮液，使用之前 翻滾冷孵育(2-8°C )至少1小時。[125I]-GLP-l(7-36)酰胺(Novo Nordisk A/S)。保存在<_18°C待用。乙醇 99. 9% vol (De Dansk Spritfabrikker A/S)保存在< _18°C待用。Multiscreen Solvinert 0. 45um 疏水性 PTFE 平板(MSRPN0450，Millipore Corp.)聚丙烯平板(cat. no. 650201，Greiner Bio-One)
116[1594]白色聚苯乙烯 384 孔平板(cat. no. 781075，Greiner Bio-One)設(shè)備 [1596]水平板混合器具有標(biāo)準(zhǔn)的搖擺_桶微量滴定板轉(zhuǎn)子部件的離心機UltraVap-Drydown 樣品濃縮機(Porvair)LEADseeker 多形式成像系統(tǒng)(Amersham)分析過程樣品制備在化學(xué)可比較的接受者平板(S卩，聚丙烯平板)上固定Multiscreen Solvinert濾板來采集濾液。添加150 u L冰冷的乙醇99. 9%到Multiscreen Solvinert濾板的空反應(yīng)孔 中，隨后添加50 yl的校準(zhǔn)物或血漿樣品。將保存蓋置于濾板上。在水平板混合器上在18_22°C孵育15分鐘。將帶有蓋子的組裝的濾器和接受平板置于標(biāo)準(zhǔn)搖擺桶微量滴定板轉(zhuǎn)子部件中。然 后在1500rpm在接受平板的空反應(yīng)孔中采集濾液2分鐘。通過使用UltraVap和加熱的(40°C )N2干燥濾液持續(xù)時間15分鐘。通過向每個 反應(yīng)孔添加100 Pi GLP-1RRA分析緩沖液重構(gòu)干燥的材料。在水平混合器上孵育5分鐘。GLP-1放射受體分析使用以下吸移方案和白色聚苯乙烯384孔平板 35u L GLP-1 RRA 分析緩沖液 SiiL重構(gòu)的濾液。
10uL[125I]-GLP-1(7-36)酰胺.儲備溶液在使用前在GLP-1 RRA分析緩沖液 中稀釋至20. OOOcpm/孔。 預(yù)包被到WGA-聚苯乙烯LEADseeker成像珠子(0. 2mg/孔)的15 ii L GLP-1受 體膜片段( 0.5i!g/孔)封閉平板，在18_22°C孵育過夜通過使用LEADseeker 多形式成像系統(tǒng)檢測每個反應(yīng)孔的光發(fā)射持續(xù)10分鐘。實施例74 表達克隆的人類GLP-1受體的細胞系中cAMP形成的刺激許多本發(fā)明的GLP-1衍生物(實施例1-28、31-37和39-71)的效價如下所述來測 定，即，在含有人類GLP-1受體的介質(zhì)中環(huán)化AMP(cAMP)的形成的刺激。為了比較，還測定 了利拉魯肽的效價。來自表達人類GLP-1受體的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系BHK467-12A(tk-tsl3)的純化的質(zhì) 膜用所討論的GLP-1衍生物刺激，cAMP生產(chǎn)的效價使用來自Perkin Elmer Life Sciences 的AlphaScreenTM cAMP分析試劑盒測定。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系在NN A/S，Denmark制備，選擇高表達克隆用于篩選。細胞在 DMEM,5% FCS、1 % Pen/Strep (青霉素/鏈霉素)和0. 5mg/ml的選擇標(biāo)記物G418中在5% C02下生長。在近似80%匯合的細胞用PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌兩次，用VerSene(乙二胺 四乙酸的四鈉鹽的水溶液)收獲，在lOOOrpm離心5分鐘，除去上清液。其他步驟全部在冰
117上進行。細胞團通過 Ultrathurax 在 10mL 緩沖液 1 (20mM Na-HEPES、10mM EDTA、pH = 7. 4) 勻化20-30秒，在20. OOOrpm離心15分鐘，團粒重懸浮在10ml緩沖液2 (20mM Na-HEPES、 0. ImM EDTA、pH = 7. 4)中。懸浮液勻化20-30秒，在20. OOOrpm離心15分鐘。緩沖液2
中的懸浮，均質(zhì)化和離心重復(fù)一次，膜重懸浮在緩沖液2中，準(zhǔn)備用于進一步分析或保存 在-80 °C。功能性受體分析通過由AlphaScreen技術(shù)測量肽誘導(dǎo)的cAMP生產(chǎn)來進行。 AlphaScreen技術(shù)的基本原理是內(nèi)源的cAMP和外源添加的生物素-cAMP之間的競爭。cAMP 的捕獲通過利用與接受體珠子綴合的特異性抗體來實現(xiàn)。形成的cAMP在AlphaFusion微 量培養(yǎng)板分析儀上計數(shù)和測量。利用Graph-Pad Prisme軟件(版本5)計算EC5(1值。除了六種化合物之外，發(fā)現(xiàn)所有測試的本發(fā)明的GLP-1衍生物具有低于4. 00的效 價(EC50)。實施例75 在高和低白蛋白下對GLP-1受體的親和力GLP-1肽對人類GLP-1受體的結(jié)合親和力通過它從受體上替換125I_GLP_1的方式 來測量。為了測試肽與白蛋白的結(jié)合，用低濃度的白蛋白(0.005%，相應(yīng)于追蹤物中它的 余量)以及用高濃度的白蛋白(添加2.0%)進行分析。在結(jié)合親和力、IC5(I方面的變動是所討論的肽與白蛋白結(jié)合的指示，從而是所討論 的肽在動物模型中潛在延長的藥物動力學(xué)分布的預(yù)測。條件物種(體外)倉鼠生物學(xué)終點受體結(jié)合分析方法SPA受體:GLP_1受體細胞系:BHKtk-tsl3膜純化細胞(近似地80%匯合)在PBS中洗滌兩次，收獲(PBS+EDTA或Versene)，之后它 們通過在lOOOrpm離心5分鐘來分離。細胞/細胞團必需在隨后的步驟中盡可能保持在冰 上。細胞團在適合的數(shù)量的緩沖液1 (取決于細胞的數(shù)量，但例如，10ml)中用Ultrathurrax 勻化20-30秒。組織勻漿在20000rpm離心15分鐘。團粒在10mL緩沖液2中重懸浮(勻 化的)并重新離心。這個步驟再次重復(fù)。產(chǎn)生的團粒重懸浮在緩沖液2中，測定蛋白質(zhì)濃 度。膜保存在-80°C。緩沖液1 :20mM Na-HEPES+lOmM EDTA, pH 7. 4緩沖液2 :20mM Na-HEPES+0. ImM EDTA, pH 7. 4結(jié)合分析SPA 測試化合物/肽、膜、SPA-顆粒和[1251]在分析緩沖液中稀釋。25 iU (微升)的 測試化合物/肽添加到Optiplate中。添加HSA( “高白蛋白”實驗)或緩沖液(“低白蛋 白”實驗)(50iU)。添加5-10iig蛋白質(zhì)/樣品(50iU)相應(yīng)于0. 1-0. 2mg蛋白質(zhì)/ml (優(yōu) 選地對每種膜制品優(yōu)化的)。添加SPA-顆粒(麥胚凝集素SPA珠子)RPNQ 0001) 0. 5mg/反應(yīng)孔(50u 1)0開始用[I25]-GLP-1(終濃度0. 05nM，相應(yīng)于49. 880DPM，25iil)孵育。平板 用PlateSealer密封。在30°C孵育120分鐘，同時搖動。離心平板(1500rpm, 10分鐘)，在 Topcounter 中計數(shù)。分析緩沖液50mMHEPES5mM EGTA5mM MgCl20. 005% Tween 20pH 7. 4HSA 是 SIGMA A1653。作為從受體替換50%的125I-GLP_1時的濃度從曲線讀取IC5(1值，確定[(IC5Q/nM) 高HSA]/[(IC5(1/nM)超低HSA]的比值。二十一種測試的GLP-1衍生物具有低于10的比值， 十二種在10-30的范圍內(nèi)，十二種在30-50的范圍內(nèi)，十四種在50-100的范圍內(nèi)。實施例76 白蛋白結(jié)合親和力許多本發(fā)明的GLP-1衍生物(實施例1-2、4_16、22-28、31和33-71)對人血清白 蛋白(HSA)的親和力通過如以下描述的競爭閃爍親近分析(SPA)來測量。鏈霉抗生物素蛋白-SPA珠子(GE Healthcare RPNQ0009)與生物素化的HSA孵 育5小時。珠子用緩沖液洗滌來除去未結(jié)合的HSA。珠子與1251標(biāo)記的?；腉LP-1類似 物(N-e 37-[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-(lH-四唑 _5_ 基)十六烷?；被酋?基)丁?；被鵠十二烷?；被?-4-羧基丁?；被?-4-羧基丁?；被?乙氧基] 乙氧基)乙?；鵠[Aib8,125I-Tyrl9, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-1 (7-37) -NH2)在含有 lOOmM HepesUOOmM NaClUOmM MgS04、0. 025% Tween-20、pH 7. 4 的緩沖液中混合?；旌?物吸移到 Perkin Elmer 0ptiplate-966005290 (100 u 1 每孔)的反應(yīng)孔中，100 ii 1 的要測 量的GLP-1衍生物的稀釋系列添加到相同的緩沖液中。在室溫下溫和搖動20小時后，平板 被離心，在TopCoimter上計數(shù)。作為GLP-1衍生物濃度的函數(shù)標(biāo)繪結(jié)合的cpm，競爭曲線的 EC50值用作衍生物對HSA的親和力的度量。各種本發(fā)明的GLP-1衍生物的白蛋白結(jié)合親和力(EC5(1，按nM)如以下的表中所示。表1 白蛋白結(jié)合親和力 從表1可見的是，幾種本發(fā)明的GLP-1衍生物具有高白蛋白結(jié)合親和力，相應(yīng)于低 于2000nM的EC5Q(EC5Q越低，白蛋白結(jié)合親和力越高)。[1653]實施例77 :db/db小鼠中的劑量_反應(yīng)研究許多本發(fā)明的GLP-1 衍生物(實施例 1,7,14,16,22,23,24,26,27,28. 31,33,46, 47，48，49，50，53，和59的化合物)如下文描述的在肥胖的糖尿病性的小鼠模型(db/db小 鼠)中的劑量-反應(yīng)研究中測試。五十只10-12 周齡的 db/db 小鼠(Taconic，Denmark)根據(jù) NovoNordisk 的標(biāo)準(zhǔn) 的動物福利規(guī)則圈養(yǎng)，自由攝取標(biāo)準(zhǔn)食物(例如，Altromin 1324，Brogaarden, Gentofte， Denmark)和自來水，保持在24°C。在1周的馴化之后，評估基礎(chǔ)血糖兩次。根據(jù)平均血糖 值，選擇42只小鼠用于進一步的實驗，分配到具有匹配的血糖水平的7個組中(n = 6)。小 鼠在3-6天持續(xù)時間的實驗中使用達4次，之后它們被安樂死。接受治療的七個組如下1:載體、s. c2 :GLP-1 衍生物，0. 3nmol/kg, s. c.3 GLP-1 衍生物，lnmol/kg, s. c.4 GLP-1 衍生物，3nmol/kg, s. c.5 GLP-1 衍生物，lOnmol/kg, s. c.6 GLP-1 衍生物，30nmol/kg, s. c.7 GLP-1 衍生物，lOOnmol/kg, s. c.載體50mM磷酸鹽，0. 05% tween 80，pH 8。GLP-1衍生物溶于載體中，例如，到 0. 05,0. 17,0. 5、1. 7、5和17nmol/ml的濃度，重量50g的小鼠每只s. c.施用300微升(6ml/ kg)。在給藥的當(dāng)天，所討論的化合物在大約上午9點給藥(0時)。在_l/2h (上午8點 30)評估血糖，之后對小鼠稱重。在給藥的當(dāng)天評估血糖幾次，通常在1、3和6小時(上午 10點、上午12點和下午3點)。在接下來幾天，在給藥后24、48、72和96小時(即，在第2、3、4、5天的上午9點)
評估血糖，隨后稱重。在某些研究中，在給藥后120h (第6天)進一步評估血糖和體重。小鼠在數(shù)字秤上獨立地稱重。用于血糖測量的樣品從有意識的小鼠的尾部尖端毛細血管獲得。10iU血液 采集到肝素化的毛細血管中，轉(zhuǎn)移到500 ill葡萄糖緩沖液(EBI0緩沖溶液，Eppendorf, Germany)中。葡萄糖濃度使用葡萄糖氧化酶方法測量(葡萄糖分析儀Biosen 5040，EKF Diagnostic, GmbH, Barleben, Germany)。樣品保持在室溫達lh直到分析時。如果分析必 需被推遲，樣品保持在4°C最多24小時。根據(jù)以下數(shù)學(xué)模型計算半衰期(T1/2)假定(1)化合物從血漿中的消失是單指數(shù)的；(2)對血糖的影響(deltaBG)可以通過標(biāo)準(zhǔn)的S形劑量反應(yīng)曲線來描述；(3)吸收和分布的前6個小時被忽視，僅擬合葡萄糖從底部向基線(最小到0)的 返回。然后葡萄糖反應(yīng)(Y)(例如deltaBG)可以由以下方程式描述Y =底部 + (頂部-底部)/ (1+ 劑量 *exp (-ln2*t/Tl/2) /ED50)，其中變量 ED50 和
120T1/2如下定義ED50是對BG產(chǎn)生半最大效果的劑量(按nmol/kg)。T1/2是半衰期(按小時)；以下是全局常數(shù)頂部(在回到基線葡萄糖后的反應(yīng))和底部(在最大葡萄糖下落的反應(yīng))；以下 是每個數(shù)據(jù)集(每個劑量)的常數(shù)劑量(施用的劑量(按nmol/kg))。所有數(shù)據(jù)集同時地擬合。測試的所有化合物具有在12-35小時的范圍內(nèi)的半衰期(T1/2)。
權(quán)利要求
一種包含肽的肽衍生物，其中至少一個氨基酸殘基用A-B-C-D-衍生化其中A-是其中R是低級的線性或支鏈烷基，p選自由10、11、12、13和14構(gòu)成的組，d選自由0、1、2、3、4和5構(gòu)成的組，和-B-選自以下構(gòu)成的組其中x選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，y選自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12構(gòu)成的組，或A是其中n選自由14、15、16、17、18和19構(gòu)成的組，B選自以下構(gòu)成的組其中x選自由0、1、2、3和4構(gòu)成的組，和-C-選自以下構(gòu)成的組其中b和e各自獨立地選自由0、1和2構(gòu)成的組，c和f各自獨立地選自由0、1和2構(gòu)成的組，條件是當(dāng)c是0時b是1或2，或當(dāng)c是1或2時b是0，和當(dāng)f是0時e是1或2，或當(dāng)f是1或2時e是0，知-D-附著到所述氨基酸殘基上，并且是接頭、代表鍵、或沒有。FPA00001122832100011.tif,FPA00001122832100012.tif,FPA00001122832100013.tif,FPA00001122832100021.tif,FPA00001122832100022.tif
2，或當(dāng)f是1或2時e是0，知-D-附著到所述氨基酸殘基上，并且是接頭、代表鍵、或沒有。2.根據(jù)權(quán)利要求1的衍生物，其中至少一個氨基酸殘基用A-B-C-衍生化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2的任一項的衍生物，其中所述肽是選自GLP-I(7-37)和 GLP-I (7-37)的類似物的GLP-I肽，其中，在所述肽中，至少一個氨基酸殘基用A-B-C-或 A-B-C-D-衍生化。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基包含氨基基團。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項的衍生物，其中所述衍生化的氨基酸殘基是賴氨酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1和3-5的任一項的衍生物，其中所述接頭包含至少5個非氫原子，其 30-50%是 N 或 O。
7.根據(jù)權(quán)利要求1和3-6的任一項的衍生物，其中D選自以下構(gòu)成的組 其中k選自由0、1、2、3、4、5、11和27構(gòu)成的組，m選自由0、1、2、3、4、5和6構(gòu)成的組，D在用*描繪的末端附著到氨基酸殘基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(I)的氨基酸 序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xa ￡l23_Al￡l_X￡l￡l25_Xa￡l26_Xa￡l27_Phe_11 θ—Χ&&βθ_T^P-L U—Χ&&β3_已39 __X&&41_^ ￡13-42 _^ ￡13-43 _^ ￡13-44 _^ ￡13-45 _^ ￡13-46式(I) (SEQ ID No 2)其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨酸、高 組氨酸、N α -乙?；?組氨酸、α -氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、2 (3Η_咪唑_4_基) 乙?；?、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；父&&8是41&、617、￥&1、1^11、116、1^8、八讓、(1_氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_氨基環(huán)丁基)羧 酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(ι-氨基環(huán) 辛基)羧酸；Xaa16 是 Val 或 Leu ； Xaa18 是 Ser λ Lys 或 Arg ； Xaa19 是 Tyr 或 Gln ； Xaa20 是 Leuλ Met 或 Lys ； 是 Gly、Glu 或 Aib ； Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ； Xaa25 是 Ala 或 Val ； Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ； Xaa27 是 Glu 或 Leu ； Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ； Xaa33 是 Val、Thr (O-苯甲基)或 Lys ； Xaa34 是 Lys> Glu、Gin、Asn 或 Arg ； Xaa35 是617、Aib 或沒有； Xaa36 是 Ala、Gly、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys, ε -氨基-Lys、酰胺或是沒有的；Xaa38是Lys、Ser、酰胺或是沒有的；Xaa39是Ser、Lys、酰胺或是沒有的；Xaa40是Gly、酰胺或是沒有的；Xaa41是Ala、酰胺或是沒有的；Xaa42是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa43是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa44是Pro、酰胺或是沒有的；Xaa45是Ser、酰胺或是沒有的；Xaa46是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa8、Xaa39 λ Xaa40^ Xaa41 λ Xaa42 λ Xaa^3、Xaa44^ Xaa45 Xaa46 i、HfitJ，JSlI-^r 個下游的氨基酸殘基也是沒有的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(II)的氨基酸 序列Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-A1 a~A 1 a-Xaa26-G 1 u_Phe_ 11 e-Xaa30-Trp-Leu-Va 1 -Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 式(II) (SEQ ID No 3) 其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨酸、高 組氨酸、Να_乙?；?組氨酸、α -氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、2(3Η_咪唑_4_基) 乙?；?、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；父&&8是41&、617、￥&1、1^11、116、1^8、八讓、(1_氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_氨基環(huán)丁基)羧 酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(ι-氨基環(huán) 辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser λ Lys 或 Arg ； 是 Gly、Glu 或 Aib ； Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ； Xaa26 是 Lys、Glu 或 Arg ； Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ； Xaa34 是 Lys> Glu、Gln 或 Arg ； Xaa35 是617、Aib 或沒有； Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Ala、Glu、Pro、Lys 或 ε -氨基-Lys ； Xaa38是Lys、酰胺或是沒有的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一項的衍生物，其中所述GLP-I類似物包含式(III)的氨基 酸序列，其是在位置18、23、26、30、31、34、36、37或38衍生化的Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaal6-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30_Trp-Leu-Xaa33_Xaa34_Xaa35_Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39 式(III) (SEQ ID No 6) 其中Xaa7-Xaa8是2 (3H-咪唑_4_基)乙酰-丙氨酸、L-組氨酸-Aib、去氨基-組氨酸-丙 氨酸或去氨基_組氨酸-Aib ；Xaa9是Glu或Glu衍生物，例如，α , α 二甲基-Glu;Xaa16 是 Val 或 Leu ；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa19 是 Tyr 或 Gln ；Xaa23 是 Gin、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa25 是 Ala 或 Val ；Xaa27 是 Glu 或 Leu ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys> Arg 或沒有；Xaa33 是 Val、Thr (O-苯甲基)或 Lys ；Xaa34 是 Lys> Glu、Gin、Asn 或 Arg ；Xaa35 是 Gly、Aib 或沒有；Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37Is Gly, Aib, Pro, ε -氨基-Lys,或沒有；Xaa38 是 Lys、Glu 或沒有；Xaa39是酰胺或是沒有的；條件是如果Xaa37是沒有的則Xaa38也是沒有的。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-7的任一項的衍生物，其中所述GLP-I肽包含式(IV)的氨基酸序 列，其是在位置18、23、26、30、31、34、36、37或38用白蛋白結(jié)合殘基衍生化的Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaal8-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala - Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-Xaa30_Trp-Leu-Xaa33_Xaa34_Xaa35_Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39 式(IV) (SEQ ID No 7) 其中Xaa7是L-組氨酸、D-組氨酸、去氨基-組氨酸、2_氨基-組氨酸、β -羥基-組氨酸、高 組氨酸、Να_乙?；?組氨酸、α -氟甲基-組氨酸、α -甲基-組氨酸、2(3Η_咪唑_4_基) 乙?；?、3-吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸；父&&8是41&、617、￥&1、1^11、116、1^8、八讓、(1_氨基環(huán)丙基)羧酸、(1_氨基環(huán)丁基)羧 酸、(1-氨基環(huán)戊基)羧酸、(1-氨基環(huán)己基)羧酸、(1-氨基環(huán)庚基)羧酸，或(ι-氨基環(huán) 辛基)羧酸；Xaa18 是 Ser、Lys 或 Arg ；Xaa30 是 Ala、Glu、Lys 或 Arg ；Xaa33 是 Val 或 Lys ；Xaa34 是 Lys> Glu、Gln 或 Arg ；Xaa35 是617、Aib 或沒有；Xaa36 是 Arg、Lys 或沒有；Xaa37 是 Gly、Aib、Pro、ε -氨基-Lys 或沒有；Xaa38是Lys或沒有；和Xaa39是酰胺或是沒有的。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11的任一項的衍生物，其中Xaa38是沒有的。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12的任一項的衍生物，其中Xaa37和Xaa38都是沒有的。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13的任一項的衍生物，其中Xaa7是去氨基-組氨酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14的任一項的衍生物，其中Xaa8是Aib。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15的任一項的衍生物，其選自以下N- ε 37 {2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34, Lys37JGLP-I (7-37)酰胺；N- ε 20- {2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷酰基)哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib2，Leu14， Lys20, Gln28, Ser (O-苯甲基)39J exendin-4 (1-39)酰胺；N- ε 26 {2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；鵞去氨基 His7, Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 37 {2- [2- (2_ {2_ [2_ (⑶-3-羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷酰基)哌啶_4_羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8，Glu22， Arg26, Arg34, Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 23- [2- (2- [2_ (2_ [2_ (2- ((R) -3- [ 1- (17-羧基十七烷?；被?哌啶_4_基羰基 氨基]-3-(羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠 [Aib8，Arg26，Arg34] GLP-I-(7-37)；N-￡37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[l-(17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 基羰基氨 基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠[去 氨基 His7，Glu22 Arg26, Arg34, Phe (m-CF3) 28]GLP-I-(7-37) 酰胺；[去氨基 His7，Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) -Lys (2- {2-[2- (2- {2-[2- ((S) -4-羧基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧 基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?；N- ε 2° ({2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, Glu30, Thr (O-苯甲基)33，]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 30 {2- [2- (2_ {2_ [2_ (⑶-3-羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基[Aib8，Glu22， Arg26, Lys30]GLP-I-(7-37)；N-ε 31 {2- [2- (2_ {2_ [2_ (⑶-3-羧基-3- {[1_ (19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；鵞Aib8，Glu22， Arg26, Lys 31] GLP-I-(7-37)；N- ε 2° ({2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?[Aib8， Lys20, Arg26, 2-萘基丙氨酸 28，Glu30] GLP-I (7-37)酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34, ]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-羧基十九烷?；鵠哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；?基)乙氧基]乙氧基)乙酰基]酰胺；N- ε 2° ({2- [2- (2- {2- [2_ ((R) _3_ 羧基-3- {[1_ (17-羧基十七烷?；?哌啶 _4_ 羰基] 氨基}丙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基)[Aib8， Lys20, Arg26, 2-萘基丙氨酸 12，Glu30] GLP-I-(7-37)酰胺；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2-[2- (2-[2- (2- ((S) -4-[1 -[19-羧基十九烷酰基]哌啶-4-羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰 基氨基)乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺；N- ε 31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-羧基-3-{[1-(19_ 羧基-十九烷?；?哌 啶-4-羰基]氨基}丙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰 基)[Aib8, Glu22, Arg26, Lys31, Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 26- [ (S) -4-羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基} 氨基)丁酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N- ε 26- {4- [ (S) ~4~羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰 基}氨基)丁?；被鵠丁?；鶀 [Aib8, Arg34]GLP-I-(7-37)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [⑶_4_羧基_4_ ({反式_4_ [ (19-羧基-十九烷?；被?甲基] 環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) -4-羧基 _4_ ({反式-4- [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)-酰胺；Ν-ε 18-{2-(2-(2-(2-[2-(2-[(S)-4-羧基-4-({4-[(19-羧基十九烷?；被?甲 基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基)乙氧基]乙?；?乙氧基)乙氧基)乙酰 基} [Aib8, Lysl8, Arg26, Arg34]GLP-I (7-37)；N-e2°-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[反式-4-([19-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán) 己基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基) 乙?；鵠[去氨基 His1, Lys20, Ser (O-苯甲基)33，Ser (O-苯甲基)39] exendin (1-39)；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-([19-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]-3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基] 乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙?；鵠酰胺； N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) ~4~ 羧基-4- ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26, Arg34, Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) ~4~ 羧基-4- ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙 氧基)乙酰基][去氨基 His7，Glu22，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) ~4~ 羧基 ~4~ ({4-[(反式-19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙酰基][去氨基 His7, Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) ~4~ 羧基-4- ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙酰基][去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；[去氨基 His7, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-羧 基-4-({反式-4-[(19-羧基-十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠 乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基]-酰胺；[去氨 S His7, Arg26, Arg34] GLP-I-(7-37) Lys [2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反 式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙酰基氨基)乙氧基) 乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰基]酰胺；N- ε 26 [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) -4-羧基 _4_ ({4- [ (19-羧基-十九烷?；被?甲 基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基) 乙?；鵞Aib8，Lys 26] GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 26 [2- (2- [2_ (2_ [2_ (2- ((S) -2-[反式-4- ((9-羧基十九烷酰基氨基]甲基)環(huán)己 基羰基氨基]-4-羧基丁?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙 ?；鵠[Aib8，Lys26] GLP-I (7-37)酰胺；N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) ~4~ 羧基-4- ({反式 _4_ [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙酰基][去氨基見87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；N- ε 37- [2- (2- {2_ [2_ (2_ {2- [ (S) -4-羧基 _4_ ({反式-4- [ (19-羧基-十九烷?；?基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[去氨基 His7，Glu22，Arg26，Glu30，Arg34，Lys37]GLP-l-(7-37)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)_4-羧基-4-{4-[4-(16-(1H-四 唑-5-基)-十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠-丁酰基氨基} 丁?；被?丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34]GLP-l-(7-37)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {6- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-37)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {4- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠丁?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基-4- ((S) ~4~ 羧基-4- {12- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠_十二烷酰基氨基} 丁?；被?丁酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {6- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]己?；被鶀丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-34)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基}丁?；被?丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {6- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己酰基氨基}丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35)；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {6- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷酰基氨磺?；?丁酰基氨基]己?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺；N- ε 26- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ((S) ~4~ 羧基-4- {6- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠己酰基氨基}丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Arg34] GLP-I-(7-35)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基}丁?；被?丁酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys33, Arg34]GLP-I-(7-34)；N- ε 26-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀丁?；被?丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][Aib8，Arg34] GLP-I-(7-36)酰胺；N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧 基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷?；被酋；?丁酰基氨基] 十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Lys26，Arg34] GLP-I-(7-36) 酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Arg34]GLP-I- (7-37) Lys [2- (2- {2-[ (S) -4-羧基-4- ((S) -4-羧 基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺?；?丁?；被鵠十二烷?；?基} “丁?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠酰胺；N- ε 20-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8, Lys20, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I-(7-37)酰胺；N- ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1H-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀丁酰基氨基)丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26, Arg34, Lys37] GLP-I-(7-37)酰胺； N- ε 37- [2- (2- {2_ [ (S) ~4~ 羧基-4- ((S) ~4~ 羧基-4- {12- [4- (16- (1Η-四唑-5-基) 十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]十二烷?；被鶀丁?；被?丁酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)酰胺；N- ε 37-[[2-(2-{2-[(S)-4-羧基 _4_(⑶-4-羧基-4-{12-[4-(16_(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基}丁?；被?丁?；被鵠乙氧 基}乙氧基)乙酰基][去氨基 His7，Arg26，Arg34，Lys37]GLP-I-(7-37)酰胺；[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I-(7-37)Lys[2-(2-{2-[4-羧基-4-(4-羧 基-4-{4-[4-(16-1Η-四唑-5-基-十六烷?；被酋；?丁酰基氨基]丁酰基氨基} 丁 ?；被?丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠；[Aib8, Glu22, Arg26, Glu30, Pro37]GLP-I- ((7-37) Lys (2- (2- (3- (2- (2- (2- (2- (2- (2-(2- (2- (2- (2- (2- (2- [4- (S)-羧基-4- (4- (S)-羧基-4- (4- {4- [ 16-(四唑-5-基)十六烷酰 基氨磺?；鵠丁酰基氨基} 丁?；被?丁?；被?丁酰基氨基]；乙氧基)乙氧基)乙 氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 丙?；被?乙氧基)乙氧基)肽；N-a37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷酰基氨 基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[去氨基 His7，Glu22，Arg26，Arg34，ε -Lys37]GLP-I-(7-37)；N- α 8- [2- (4-咪唑基)乙?；鵠N- ε 37- [2~ (2_ {2_ [2~ (2_ {2_ [ (S) ~4~ 羧基 _4_ ({反 式-4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧 基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基][Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(8-37)； [去氨基 His7, Glu22, Arg26,34]-GLP-I(7-37)-Lys-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧基} 乙酰基)肽；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-羧基-4-({4-[(19-羧基十九烷?；被?甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基} 乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠肽；[去氨基 His7，Glu22，Arg26，34]-GLP-I (7-37)-Lys ( (S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[l-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙酰基氨基)丁?；?肽；[去氨基 His7, Glu22, Arg26,34]-GLP-I(7-37)-Lys-(2-(2-{2-[(S)-4-羧 基-4-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶_4_羰基]氨基} 丁酰 基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基)肽；[去氨基 His7，Arg26，34]-GLP-l(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-羧 基-4-{[1-(19-羧基十九烷?；?哌啶-4-羰基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧基} 乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?肽；N- ε 37- (2- {2- [2_ (2_ {2_ [2- ((S) -4-羧基 _4_ {[ 1- (19-羧基十九烷?；?哌啶 _4_ 羰 基]氨基} 丁?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基)[去 氨基 His7, Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)；N- ε 37-(⑶-4-羧基-4- {[1_ (19-羧基-十九烷?；?-哌啶_4_羰基]-氨基} - 丁 ?；?[去氨基 His7，Arg26, Arg34, Lys37]GLP-I-(7-37)；[去氨基 His7，Glu22, Arg26, 34] -GLP-I (7-37) -Lys- ((S) -4-羧基-4- {[1- (19-羧 基_十九烷?；?“哌啶-4-羰基]-氨基} _ 丁酰基)肽；N- ε 26-[2-(2-{2-[(R)-4-羧基-4-((R)-4-羧基-4-{12-[4-(16-1H-四 唑-5-基-十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被鶀 丁酰基氨基)丁?；?基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]_[Aib8，Arg34] GLP-I (7-37)；N- ε 37-{2-[2-(2-{(S)-4-[(S)-4-(12-{4-[16-(2-叔丁基-2Η-四唑 _5_ 基)-十六 烷?；被酋；鵠丁?；被鶀十二烷?；被?-4-羧基丁?；被鵠-4-羧基丁?；?基}乙氧基)乙氧基]乙酰基}[去氨基圯87，611122，六印26，六印34，1^837]61^-1(7-37)； N- ε 37-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-{12-[4-(16-(1Η-四唑 _5_ 基) 十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷酰基氨基}丁?；被?丁酰基氨基]乙氧 基}乙氧基)乙?；鵠[去氨基圯87，六印26，六印34，1^837]61^-1-(7-37)；^￡37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(幻-4-羧基-4-({反式-4-[(19-羧基十九烷酰基氨 基)甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙 氧基)乙?；鵠[Aib8，Glu22，Arg26，Arg34，Lys37] GLP-I-(7-37)；[ImPr7, Arg26'34, Glu22] GLP-I- (7-37) Lys [2- (2-[2- ((S) -4- ((S) -4- (12- [4- (16—1H -四唑-5-基十六烷?；被酋；?丁?；被鵠十二烷?；被?-4-羧基丁酰基氨 基)-4-羧基丁?；被?乙氧基]乙氧基)乙酰基]-酰胺；N-ε 36-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙 酰基][Aib8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37)；N-ε 26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán)己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙 ?；鵠[Aib8, Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37)；N-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反式-4-((9-羧基十九烷酰基氨基]甲基)環(huán) 己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙?；被?乙氧基]乙氧基)乙 酰基][Aib8，22，35，Lys 18, Arg26, 34] GLP-I- (7-37)；禾口N-ε 18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[反式-4-((9-羧基十九烷?；被鵠甲基)環(huán) 己基羰基氨基]3-羧基丙?；被?乙氧基)乙氧基]乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基)乙 ?；鵠[Aib8, Lys 18，Glu22, Gln34]GLP-I-(7-37)。
17.一種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1-16的任一項的衍生物或其藥學(xué)上可接受的 鹽、酰胺、烷基或酯，以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。
18.用作藥物的根據(jù)權(quán)利要求1-16的任一項的衍生物，或根據(jù)權(quán)利要求17的藥物組合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-16的任一項的衍生物，或根據(jù)權(quán)利要求17的藥物組合物，其用于 高血糖、2型糖尿病、損害的葡萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認 知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不 良和胃潰瘍的治療或預(yù)防。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-16的任一項的衍生物，或根據(jù)權(quán)利要求17的藥物組合物在制造用 于治療或預(yù)防高血糖、2型糖尿病、損害的葡萄糖耐受、1型糖尿病、肥胖、高血壓、綜合征X、 血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜 合征、消化不良和胃潰瘍的藥物中的用途。
21.一種通過施用藥學(xué)上活性數(shù)量的根據(jù)權(quán)利要求1-16的任一項的衍生物或根據(jù)權(quán) 利要求17的藥物組合物來治療或預(yù)防高血糖、2型糖尿病、損害的葡萄糖耐受、1型糖尿病、 肥胖、高血壓、綜合征X、血脂異常、認知障礙、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血 管病癥、中風(fēng)、炎性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及延長的肽衍生物，例如高血糖素樣肽-1(GLP-1)、exendin-4和其類似物，以及其治療用途。本發(fā)明的肽衍生物包含其中至少一個氨基酸殘基用A-B-C-或A-B-C-D-衍生化的肽。這些化合物在2型糖尿病和相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防中是有用的。所述化合物是強力的，具有在存在高/低白蛋白濃度的情況下對GLP-1受體的結(jié)合親和力的低比值，具有長半衰期，并具有與白蛋白結(jié)合的高親和力，所有這些對于實現(xiàn)具有每周一次施用的潛力的長效、穩(wěn)定和活性的GLP-1衍生物的總體目標(biāo)是潛在相關(guān)的。
文檔編號C07K14/605GK101842109SQ200880114377
公開日2010年9月22日 申請日期2008年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月5日
發(fā)明者H·索格森, J·劉, J·斯佩茨勒, L·沙弗, P·W·加里貝, S·倫奇, S·奧斯特加爾德, T·克魯斯 申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司