專利名稱：制備基于功能兩親分子或者大分子的納米顆粒的方法和其用途的制作方法
制備基于功能兩親分子或者大分子的納米顆粒的方法和其
用途本發(fā)明涉及制備基于功能兩親分子或者大分子的納米顆粒的方法和其用于治療 劑(特別地抗腫瘤劑)的運(yùn)送或者載體化(vectorisation)的用途。在抗腫瘤劑中，順鉬為廣泛使用的抗腫瘤劑，特別地用于治療實(shí)體瘤。然而，由于 其毒性以及出現(xiàn)獲得抗藥性，它的使用受到限制。為了克服這些缺點(diǎn)，現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)提出不同配制劑例如專利US5178876描述了 用于在脂質(zhì)體中封裝的疏水絡(luò)合物形式的鉬衍生物。專利US 6001817描述了包含順鉬的組合物和包含至少一種核苷或者脫氧核苷的 載體(vecteur)的組合物。專利US 7908160涉及與配體連接的順鉬衍生物，其活性根據(jù)與配體的結(jié)合是可 逆的。申請(qǐng)WO 01/32139描述了在親脂性納米顆粒中封裝的順鉬的組合物，所述納米顆 粒通過(guò)重復(fù)的加熱和凍結(jié)周期、基于帶負(fù)電荷的天然脂類(特別地二油基磷脂酰絲氨酸) 獲得。在該申請(qǐng)中指出，在水中順鉬形成具有比不帶電荷的物種更高的溶解度的帶正電荷 的聚集體，這可以使它們與帶負(fù)電荷的類脂膜相互作用和使順鉬聚集體周圍的類指膜的重 新組織。然而，仍然需要解決與治療劑(特別地抗腫瘤劑)的載體化有關(guān)的問(wèn)題。特別地，尋求一種方法，該方法可以將治療劑(特別地順鉬和/或它的衍生物)以 具有高活性地快速地運(yùn)送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)部，同時(shí)保護(hù)健康細(xì)胞，即降低神經(jīng)毒性、腎毒性、 聽(tīng)覺(jué)毒性、消化毒性等等，同時(shí)限制對(duì)這種治療劑的抗藥性出現(xiàn)的現(xiàn)象。還設(shè)法提供在足夠的時(shí)間中具有足夠穩(wěn)定性的載體以避免過(guò)早釋放治療劑和與 在生物培養(yǎng)基中游離治療劑的存在有關(guān)的缺點(diǎn)，特別地在活性損失和毒性方面?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用由功能兩親分子(compos6amphiphile fonctionnel)或者大分 子形成的納米顆粒可以獲得治療劑的有效并且快速的細(xì)胞內(nèi)遞送并且顯示出改善的穩(wěn)定 性性能，特別地在37°C時(shí)，這可以獲得所述治療劑隨著時(shí)間延長(zhǎng)的載體化。“治療劑”表示例如用于(M或者D病狀的預(yù)防或治療或者生物功能的恢復(fù) 的天然或者合成的分子，特別地在動(dòng)物中，包括人類，或者在孤立的細(xì)胞上，除了核酸或者 其碎片外。這種分子可以例如選自藥物的活性成分，特別地選自抗腫瘤劑，如-鉬絡(luò)合物，其中特別地可以提到順鉬、卡鉬、奧沙利鉬(oxaliplatine)、奈達(dá)鉬、 洛鉬(Iobaplatine)等等。或者-能夠與鉬絡(luò)合物連接的釕，或者-不含鉬的基于釕II和/或III、鈦的無(wú)機(jī)絡(luò)合物，例如二氯化二茂鈦，或者鎵，例如 鎵鹽，如硝酸鎵、氯化鎵、KP46，或者-鐵的衍生物，如ferrocenium鹽、包含鐵的核苷類似物、包含基于的吡啶基-五齒 配體(ligands pyridyl-pentadentate)的鐵(II )絡(luò)合物，或者
-鈷的衍生物，如六羰基_二鈷絡(luò)合物，炔-鈷絡(luò)合物，包含氮芥配體的Co (III)絡(luò) 合物，或者-金的衍生物，如Auranofin、金(I )、( III)和(III)絡(luò)合物、硫代葡糖金等等。有利地，由式(I )的功能兩親分子或者大分子形成的納米顆粒用于封裝這些化 合物并且確保它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的遞送的用途可以限制對(duì)這些化合物的抗藥性的現(xiàn)象。鉬的絡(luò)合物，特別地順鉬，是用于本發(fā)明目的的優(yōu)選治療劑?；卺慖I和/或III的無(wú)機(jī)絡(luò)合物可以是例如被取名為NAMI-A、RAPTA-C, KP1019 的絡(luò)合物。這種不含鉬的絡(luò)合物描述在Ott I.和GustR.的Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 2007,340,117-126 ；Reedijk J. ,CurrOpin Chem Biol. ,1999,3,236-40 ；Haimei Chen 等，J.Am· Chem. Soc. ,2003,125,173-186 中。包含鐵的核苷類似物描述在Schlawe D.等，Angew. Chem. Int. Ed.，2004， 1731-1734)。根據(jù)第一方面，本發(fā)明因此涉及用于封裝治療劑，優(yōu)選地抗腫瘤劑的方法，其包括 這樣的步驟，該步驟在于a)制備至少一種式(I )的功能兩親化合物 其中-X表示氧或者硫原子或者亞甲基，-B表示嘌呤堿或者嘧啶堿，如尿嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、次黃嘌 呤或者它們的衍生物，或者非天然的單或者雙環(huán)的雜環(huán)堿，其每個(gè)環(huán)包含4-7個(gè)鏈節(jié)，其任 選地被取代；-L1和L2，相同或者不同的，表示氫、氧羰基-O-C (0) _、硫代氨基甲酸酯基 團(tuán)-0-C(S)-NH-、碳酸酯基團(tuán)-0-C(0)-0-、氨基甲酸酯基團(tuán)-0-C(0)-NH-、氧原子、磷酸酯基 團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳基未被取代或者被直鏈或支鏈的， 飽和或者不飽和的C2-C3tl烴鏈取代。或者，L1和L2 —起形成下式的縮醛基(goupement cetal) 或者L1或者L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳 基未被取代或者被直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基鏈取代；
-R1和R2，相同的或者不同的，表示-飽和或者部分不飽和的直鏈或支鏈的C2-C3tl，優(yōu)選地C6-C25,特別地C8-C25烴鏈， 其任選地完全地或者部分地氟化，其未被取代或在鏈端的碳上被氟原子或者被芐基酯或醚 或者萘基酯或醚取代，或者- 二?；?，其中每個(gè)酰基鏈?zhǔn)荂2-C3tl鏈，或者-甘油二酯(diaCylglyC6rol)、鞘氨醇或者神經(jīng)酰胺基團(tuán)，或者-當(dāng)L1或L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基時(shí)，R1和R2 不存在；-R3 表示-羥基、氨基、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)、磷脂酰膽堿基團(tuán)，0-烷基磷脂酰膽堿基 團(tuán)、硫代磷酸酯基團(tuán)、磷鐺、NH2-R4, NHR4R5或NR4R5R6其中R4、R5和R6,相同的或者不同的，表 示氫原子或者直鏈或支鏈的C1-C5烷基鏈或者羥烷基鏈，或者-直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基鏈，其任選地被羥基取代，或者-環(huán)糊精殘基，或者-殘基 其中V 表示-0-、-S-或-NH-鍵，R7 表示 H 或 CH3,和 η = 1-500，或-(CH2)n-V-R8 基團(tuán)，其中 R8 表示 C2-C3tl 烷基，和 η = 1-500，或-包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，其未被取代或者被以下基團(tuán)取代=C2-C3tl烷基或 (CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)，其中m = 1-6和ρ = 0-10和R9表示包含5_7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮 醛基團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè)直鏈或支鏈WC2-C3tl烷基或者被留醇?xì)埢〈?，或?R3通過(guò)共價(jià)鍵與另一相同或者不同的式(I )化合物的另一相同或者不同的取 代基R3連接，以形成呈二聚物形式的式(I )化合物，禾口-治療劑，優(yōu)選地抗腫瘤劑的混合物，b)使所述混合物經(jīng)受重復(fù)的加熱和凍結(jié)周期，以便獲得包含所述治療劑的納米顆 粒，和c)回收如此獲得的包含所述治療劑的納米顆粒。有利地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，構(gòu)成式(I )化合物的分子和/或大分子結(jié)構(gòu)可以與治療劑 形成穩(wěn)定的納米顆粒，所述式(I )化合物包含至少一種由取代基B表示的治療劑的配體 (核苷堿基(nuclSobase)、核苷、修飾核苷、核苷酸、低聚核苷酸、雜環(huán)等等)并具有兩親特 征，這是由于存在至少一個(gè)親水部分(磷酸酯(鹽)、羧酸酯(鹽)等等)和至少一個(gè)疏水 部分(單股(monocatSnaire)、雙股(bicatSnaires)的疏水片段和由生物起源的合成單體 產(chǎn)生的極性部分等等)。通過(guò)將式(I )化合物的兩親性質(zhì)，治療劑的配體和在治療劑在這些化合物中的
9存在和這些化合物之間的可能的靜電相互作用組合，如此獲得的納米顆粒具有可以使被封 裝的活性成分(特別為抗腫瘤劑)快速有效的細(xì)胞內(nèi)遞送。不希望將本發(fā)明與一種理論結(jié)合，可以假定式(I )化合物的分子間相互作用導(dǎo) 致納米顆粒的在表面上的內(nèi)聚力的增加，其表現(xiàn)為在使用條件下隨著時(shí)間更大的穩(wěn)定性。有利地，所述納米顆粒還具有適合于它們作為治療劑的載體的用途的壽命。在上面式(I )中，η有利地為1-500，優(yōu)選地1_100，特別地1_50，尤其特別地 1-10?！爸辨溁蛘咧ф湹腃1-C5烷基”表示例如甲基、乙基、丙基、異-丙基、正丁基、異-丁 基、叔丁基，優(yōu)選甲基或者乙基。同樣，在上面式(I )中，嘌呤或者嘧啶堿，或者非天然的雜環(huán)堿可以被至少一個(gè) 取代基取代，該取代基選自例如商素、氨基、羧基、羰基、羰氨基、羥基、疊氮基、氰基、烷基、 環(huán)烷基、全氟烷基、烷氧基(例如，甲氧基)、氧羰基、乙烯基、乙炔基、丙炔基、?；鹊??！胺翘烊坏碾s環(huán)堿”表示不同于尿嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或者次 黃嘌呤的堿，其在自然界中不存在?！鞍?-4個(gè)氮原子的雜芳基”表示單環(huán)的或者雙環(huán)的、芳族或者部分不飽和的包 含5-12個(gè)原子的碳環(huán)基團(tuán)，其被1-4個(gè)氮原子間隔，特別地為吡唑、三唑、四唑或者咪唑基。為了制備式(I )化合物，可以參考申請(qǐng)WO 2005/116043，其描述了獲得這類化合 物的不同路徑(特別地參看第8-17頁(yè)和實(shí)施例).根據(jù)本發(fā)明的方法可以包括在以下通常條件下進(jìn)行實(shí)施的步驟-使式(I)化合物溶于有機(jī)溶劑中以形成類脂混合物，然后在提取后，進(jìn)行蒸發(fā) 以形成膜；-平行地，將期望量的治療劑，優(yōu)選地抗腫瘤劑溶于蒸餾水中；-類脂膜在治療劑(優(yōu)選地抗腫瘤劑)的溶液中進(jìn)行再水合。通過(guò)超聲處理和加 熱獲得透明溶液；-使溶液快速冷卻，例如通過(guò)浸入液氮中。該加熱/冷卻周期優(yōu)選地進(jìn)行1-10次， 特別地5-10次，尤其10次。使獲得的溶液離心。分離上清液。在多次離心之后，干燥沉淀物。有機(jī)溶劑可以選自例如在本領(lǐng)域中通常的有機(jī)溶劑，如氯仿、醇，如甲醇或者乙醇寸寸。進(jìn)行加熱，優(yōu)選地加熱至大約20°C -80°C的溫度，并冷卻至大約_190°C (液氮)至 O0C (冰)的溫度。適當(dāng)?shù)募訜?冷卻周期可以例如是45°C (對(duì)于加熱)和是-78°c (對(duì) 于冷卻)。優(yōu)選地，治療劑選自鉬絡(luò)合物(順鉬、卡鉬等等)，順鉬是特別優(yōu)選的，或者能夠 與鉬絡(luò)合物連接的釕，或者上述基于釕II或者III、鈦、鎵、鈷、鐵或者金的不含鉬的無(wú)機(jī)絡(luò)合 物。式(I )化合物/治療劑的摩爾比R可以為例如0. 01-50，特別地R = 0. 2。獲得的納米顆?？梢匀芜x地經(jīng)聚碳酸酯過(guò)濾器被擠出，該過(guò)濾器具有例如大約 100或者200納米的孔隙直徑。由此獲得固體納米顆粒，其由被一個(gè)或多個(gè)由如上面所定義的式(I )官能性兩
10親化合物構(gòu)成的類脂層包圍的富含治療劑(活性成分)的核心構(gòu)成，有或者沒(méi)有共-類脂 (co-lipide)。所述由被一個(gè)或多個(gè)由如上面所定義的式(I )官能兩親化合物構(gòu)成的類脂層 (有或者沒(méi)有共-類脂)圍繞的富含治療劑(優(yōu)選地抗腫瘤劑，特別地鉬絡(luò)合物)的核心構(gòu) 成的固體納米顆粒形成本發(fā)明的隨后目的。在多層包裹的情況下，全部類脂層由相同的類脂構(gòu)成(式(I )化合物，有或者沒(méi) 有共-類脂)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，作為式(I )化合物的補(bǔ)充，在類脂混合物中還將使用至 少一種共-類脂?！肮?類脂”表示與式(I )化合物組合使用的化合物，其參與納米顆粒的一個(gè)或 多個(gè)類脂層的結(jié)構(gòu)的建立。優(yōu)選地，將使用兩性離子性共_類脂。所述共-類脂可以例如選自二油基磷脂酰膽堿(DOPC)或者二油基磷脂酰絲氨酸 磷脂酰膽堿(DOUPC)，與式(I )化合物組合以形成納米顆粒的一個(gè)或多個(gè)類脂層。當(dāng)這些化合物與式(I )化合物的混合使用時(shí)，它們可以起共-類脂的作用?；?者，它們可以被包括在式(I )中，如二油基磷脂酰絲氨酸磷脂酰膽堿(DOUPC)。在這種情 況下，它們將或者起式(I )化合物的作用，或者與另一式(I )化合物組合而起共-類脂 的作用。根據(jù)本方法的優(yōu)選方面，所述類脂混合物僅僅包含至少一種式(I )化合物并且 不包含共類脂。優(yōu)選地，治療劑將在水相中以大約0. Ing/mL-lOmg/mL的濃度進(jìn)行使用，以使得活 性成分在細(xì)胞內(nèi)的遞送是重要的。優(yōu)選的式(I )化合物為其中X表示氧的那些。式(I )化合物，其中B表示胸腺嘧啶或者腺嘌呤，也是優(yōu)選的化合物。在用于本發(fā)明目的的特別有利的式(I )化合物中，可以提到式(I )化合物，其 中-X和B如上面所定義；-L1表示磷酸酯基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基或者二?；?，其中每個(gè)?；?zhǔn)?C2-C3tl鏈，和R3是羥基；或者-L1和L2表示氧原子，R1和R2表示氫和R3表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，其被 C2-C30烷基取代，或-L1表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基和R3是羥基， 或-L1表示羥基，L2表示氫和R3是被C2-C3tl烷基鏈取代的三唑基，該烷基鏈任選地被 羥基取代，或者R3是基團(tuán)或_ (CH2) H-V-R8基團(tuán)，其中V表示-O-或-NH-和R8表示C2-C3tl烷 基，或-L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m = 1-6和ρ = 0-10和R9表示包含5-7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮醛基團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè) 直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基或者被留醇?xì)埢〈?，或?br> -L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m =1-6和ρ = 0-10通過(guò)共價(jià)鍵連接至另一相同的式(I )化合物的另一相同取代基R3,以 形成二聚物形式的式(I )化合物，或者-L1表示磷酸酯基，L2表示氫R1表示二?；?，其中每個(gè)二?；?zhǔn)荂2-C3tl鏈，和 R3是羥基，其是新型化合物。式(I )化合物，其中取代基L1或者取代基R3包括或者由未被取代的或者取代的 三唑基構(gòu)成，也是對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的方法的目的優(yōu)選的新型化合物。上述化合物是構(gòu)成本發(fā)明目的的新型化合物，以及包括這些化合物的和治療劑的 納米顆粒，治療劑特別地為抗腫瘤劑，特別為鉬絡(luò)合物(如，例如順鉬，卡鉬，奧沙利鉬，奈 達(dá)鉬，洛鉬)，或能夠與鉬絡(luò)合物連接的釕，還或者上述基于釕、鈦、鎵、鈷、鐵或者金的不含 鉬的無(wú)機(jī)絡(luò)合物。順鉬是用于本發(fā)明目的優(yōu)選的抗腫瘤劑。式(I )化合物可以包含具有抗腫瘤活性的嘌呤或者嘧啶堿的衍生物，例如 aracytosine (AraC)，5_氟尿嘧啶(5-FU)，碘苷(IdU) ,2'-脫氧-2‘-亞甲基胞嘧啶核苷 (DMDC)或者5-氯代-6-疊氮基-5，6- 二氫-2 ‘-脫氧尿苷。本發(fā)明的目的還是能夠通過(guò)如上所述的方法獲得的納米顆粒的用途，用于治療 劑，特別為抗腫瘤劑的運(yùn)送或者載體化。特別地，本發(fā)明涉及能夠通過(guò)如上所述的方法獲得的納米顆粒的用途，用于治療 劑，特別為抗腫瘤劑的細(xì)胞內(nèi)遞送。本發(fā)明還涉及能夠通過(guò)上述方法獲得的納米顆粒的用途，用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明還涉及能夠通過(guò)上述方法獲得的納米顆粒，用于治療腫瘤疾病，特別為癌 癥，如卵巢癌、睪丸癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、肺癌、或者腺肉瘤等等。通過(guò)以下實(shí)施例非限制性地舉例說(shuō)明本發(fā)明。所有來(lái)源于化學(xué)產(chǎn)品供應(yīng)商(Aldrich, Alfa Aesar和Avanti PolarLipid)的 起始產(chǎn)物不進(jìn)行隨后純化而進(jìn)行使用。溶劑不進(jìn)行附加的蒸餾而進(jìn)行使用。合成的化合 物使用標(biāo)準(zhǔn)的光譜分析法如RMN 1H(在300. 13MHz)，RMN 13C (在75. 46MHz)和RMN 31P (在 121.49MHz)和質(zhì)譜學(xué)進(jìn)行表征(特征)。在RMN中的化學(xué)位移(δ)用ppm表示并且相對(duì)于 TMS。在RMN 1H中的偶合常數(shù)J用Hz表示。Merck RP_18F254s板用于薄層層析法(CCM)。 SEPHADEX LH-20 (25-100 μ m) 二氧化硅用于通過(guò)定量色譜分離法的純化。以下取名為"制備"的實(shí)施例描述用于制備式(I )化合物的合成中間體的制 備。式(I )化合物的制備然后描述在取名為“實(shí)施例”的合成實(shí)施例中。制備15’-對(duì)甲苯磺酰基胸苷 將在無(wú)水吡啶中0. IM溶液形式的2g胸苷(8. 26毫摩爾)引入到在無(wú)水氮?dú)夥障?的雙頸燒瓶中。然后將溶液冷卻至0°c并且分小部分地加入3. 935g對(duì)甲苯磺酰氯(2.5當(dāng) 量，20. 6毫摩爾)。使反應(yīng)介質(zhì)返回到環(huán)境溫度，然后攪拌10小時(shí)。然后通過(guò)加入IOmL甲 醇停止該反應(yīng)，維持?jǐn)嚢?0分鐘。向混合物加入50mL CH2Cl2，然后依次用20mL 5% NaHCO3 溶液、20mL NaCl飽和溶液和20mL 5% NaHCO3溶液洗滌。在減壓下去除該溶劑。純凈的期 望化合物通過(guò)在甲醇中的重結(jié)晶而獲得。Rf 0. 47 (AcOEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為75%。RMN1H(300, 13MHz,DMS0 d6) δ 1，77 (s，3H，CH3)，δ 2，11 (m，2H，CH2)，δ 2, 42(s,3H, CH3)，δ 3，52(t，j = 6Hz，4H，CH2)，δ 4，18(m，lH，CH)，δ 4，25 (m，3H，CH，CH2)，δ 5, 42 (s, 1H, OH)，δ 6，15 (t, j = 6Hz, H, CH)，δ 7，38 (s, 1H, CH)，δ 7，46 (s, 1Η, CH)，δ 7，49 (s, 1Η, CH)， δ 7，78(s，1Η，CH)，δ 7，81 (s，1H，CH)，δ 11, 28 (s, 1Η, NH).RMN 13C(75, 47MHz, DMSO d6) : δ 12，5 (CH3)，δ 21, 6 (CH3) , δ 38，9 (CH2)， δ 70，4 (CH2)，δ 70，6 (CH)，δ 83，7 (CH)，δ 84，5 (CH)，δ 110, 3(C) , δ 128，1 (CH ar), δ 130, 6(2CH ar) , δ 132, 6 (C ar) , δ 136，4 (C ar) , δ 145, 6(C) , δ 150, 8 (C = 0)， δ 164，I(C = O).高解析度MS [Μ+Η] + 397. 1制備22，-脫氧-5，-甲苯磺?；佘諏⒃跓o(wú)水吡啶中0. IM溶液形式的2g 2’-脫氧腺苷(8毫摩爾)引入到在無(wú)水氮?dú)?氛下的雙頸燒瓶中。然后將溶液冷卻至0°C并且按小部分地加入3. 793g對(duì)甲苯磺酰氯(2. 5 當(dāng)量，20毫摩爾)。使反應(yīng)介質(zhì)返回到環(huán)境溫度，然后攪拌10小時(shí)。然后通過(guò)加入IOmL甲 醇停止該反應(yīng)，維持?jǐn)嚢?0分鐘。向混合物加入50mL CH2Cl2，然后依次用20mL 5% NaHCO3 溶液、20mL NaCl飽和溶液和20mL 5% NaHCO3溶液。在減壓下去除該溶劑。純凈的期望化 合物通過(guò)在甲醇中的重結(jié)晶而獲得。由此分離出2. Ig白色產(chǎn)物。Rf 0. 37 (AcOEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為63%。
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制備35’疊氮基_5’ _脫氧胸苷 將在DMF中的0. IM溶液形式的如在制備1中描述的2g 5’ -對(duì)甲苯磺?；剀?(5毫摩爾)引入到在無(wú)水氮?dú)夥障碌难b備有冷凝器的雙頸燒瓶中。加入1.3g疊氮化鈉(4 當(dāng)量，20毫摩爾)。然后攪拌該溶液并且在110°C加熱10小時(shí)。將該混合物冷卻至環(huán)境溫 度。將50mL CH2Cl2加入到混合物中，然后依次用兩次15mL水然后用15mL NaCl飽和水溶 液洗滌。有機(jī)相在硫酸鈉上進(jìn)行干燥然后在減壓下去除溶劑。純凈的期望化合物通過(guò)在甲 醇中的重結(jié)晶而獲得。如此獲得0.8g白色固體。Rf 0. 47 (AcOEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為60%。MS[M+H]+ 268. 1制備45，_疊氮基-5，，2，_ 二脫氧腺苷 將在DMF中的0. IM溶液形式的如在制備2中描述的2g 2’ -脫氧-5’ -對(duì)甲苯磺 ?；佘?5毫摩爾)引入到在無(wú)水氮?dú)夥障碌难b備有冷凝器的雙頸燒瓶中。加入1.3g疊 氮化鈉(4當(dāng)量，20毫摩爾)。然后攪拌該溶液并且在110°C加熱10小時(shí)。將該混合物冷卻 至環(huán)境溫度。將50mL CH2Cl2加入到混合物中，然后依次用兩次15mL水然后用15mL NaCl 飽和水溶液洗滌。有機(jī)相在硫酸鈉上進(jìn)行干燥然后在減壓下去除溶劑。純凈的期望的化合 物通過(guò)在甲醇中的重結(jié)晶而獲得。如此獲得0.8g白色固體。
Rf 0. 37 (AcOEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為60%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量277. 1161，測(cè)定質(zhì)量277. 1157制備5I-炔丙氧基十八烷 將在DMF中的0. 5M溶液形式的673mg的丙炔醇(12毫摩爾)引入到在無(wú)水氮?dú)夥障碌母蓛舾稍锏臒恐?。然后將該溶液冷卻至0°C并且按小份地加入180毫克氫化鈉 (0.625當(dāng)量，7. 5毫摩爾)。使該反應(yīng)介質(zhì)返回到環(huán)境溫度。加入2克1-溴-十八烷(0.5 當(dāng)量，6毫摩爾)。維持?jǐn)嚢?小時(shí)。然后通過(guò)加入IOmL甲醇停止該反應(yīng)并且維持?jǐn)嚢?0 分鐘。將50mL CH2Cl2加入到混合物中，然后依次用兩次20mL和20mL的NaCl飽和溶液洗 滌。然后有機(jī)相在Na2SO4I干燥，在減壓下去除溶劑。在色譜柱(己烷)上分離后獲得純 的期望化合物。由此分離出1. 2g白色產(chǎn)物。Rf:0. 82(己烷)產(chǎn)率為65%。RMN1H (300，13MHz，CDCl3) δ 0, 90 (t, j = 6Hz，3H，CH3) , δ 1, 28(s,30H, CH2), δ 1，61 (m, 2Η, CH2)，δ 2，43 (t, j = 3Hz, 1Η, CH)，δ 3，53 (t, j = 6Ηζ,2Η, CH2)，δ 4，15 (d, j =3Ηζ，2Η，CH2).RMN13C (75, 47MHz, CDCl3) :RMN 13C (75，47MHz, CDCl3) δ 14，2 (CH2)，δ 22，7 (CH2)， δ 26, 1 (CH2) , δ 29, 4 (CH2) , δ 29，5 (CH2)，δ 29，6 (CH2)，δ 32, O(CH2) , δ 58，0 (CH2)， δ 70，4 (CH2)，δ 74，1 (CH)，δ 80，1 (C) ·制備61，12-炔丙氧基十二烷12-炔丙氧基十二烷-1-醇將在DMF中的0.5Μ溶液形式的Ig十二烷-1，12-二醇(5毫摩爾)引入到在無(wú)水 氮?dú)夥障碌母蓛舾稍餆恐小Ｊ乖摲磻?yīng)介質(zhì)返回到0°c。按小部分地加入360毫克hydrure d’ hydr0g6ne(3當(dāng)量，15毫摩爾)。使該反應(yīng)介質(zhì)返回到環(huán)境溫度。加入1. 49克溴丙炔 (2. 5當(dāng)量，12. 5毫摩爾)。維持?jǐn)嚢?小時(shí)。然后通過(guò)加入IOmL甲醇停止該反應(yīng)，維持?jǐn)?拌30分鐘。將50mL CH2Cl2加入到混合物中，然后依次用兩次20mL和20mL的NaCl飽和 溶液洗滌。然后有機(jī)相在Na2SO4I干燥，在減壓下去除溶劑。然后在色譜柱(Hex/ActEth 9/1)上分離獲得的產(chǎn)物。分離兩種產(chǎn)物，即370毫克對(duì)應(yīng)于1，12-炔丙氧基十二烷的棕色 油和430毫克對(duì)應(yīng)于12-炔丙氧基十二烷-1-醇的褐色固體。1，12-炔丙氧基十二烷 Rf 0. 53 (己烷 /AcOtEt 9/1)產(chǎn)率為27%。RMNiHOOO, 13MHz,CDCl3) δ 1, 31 (m, 16Η, CH2), δ 1, 61 (m, 4Η, CH2), δ 2, 43 (t, j = 3Hz，lH，CH)，δ 3，52(t，j = 6Hz，4H，CH2)，δ 4，15 (d，j = 3Hz，4H，CH2) · RMN13C (75，47MHz，CDCl3) δ 26, 1 (CH2)，δ 29，4 (CH2)，δ 29，5 (CH2)，δ 29，6 (CH2)， δ 58，0 (CH2)，δ 70，3 (CH2)，δ 74，1 (CH)，δ 80，1 (C).12"炔丙氧基十二烷-1-醇 Rf :0. 10 (己烷 /AcOtEt 9/1)產(chǎn)率為36%。RMN1H(300, 13MHz, CDCl3) δ 1，32 (m, 16H, CH2)，δ 1，59(m，4H，CH2)，δ 2，43 (t, j =3Hz,2H, CH)，δ 3，52 (t, j = 6Ηζ,2Η, CH2)，δ 3，65 (t, j = 6Ηζ,2Η, CH2)，δ 4，15 (d, j = 3Ηζ，2Η，CH2).RMN13C (75，47MHz，CDCl3) : δ 25，8 (CH2)，δ 26，0 (CH2)，δ 29，4 (2CH2)， δ 29, 5(2CH2) , δ 29，6 (CH2)，δ 32，7 (CH2)，δ 57，9 (CH2)，δ 62，7 (CH2)，δ 70, 2 (CH2), δ 74，2 (CH)，δ 79，9 (C) ·制備7ο-炔丙基膽甾醇 將在DMF中的0. 5Μ溶液形式的500mg的膽甾醇(1. 3毫摩爾)引入到在無(wú)水氮 氣氛下的干凈干燥的燒瓶中。然后將該溶液冷卻至0°c和按小部分加入47毫克的氫化鈉 (1.5當(dāng)量，2毫摩爾)。使該反應(yīng)介質(zhì)返回到環(huán)境溫度。加入238毫克溴丙炔(1.5當(dāng)量，2 毫摩爾)。維持?jǐn)嚢?小時(shí)。然后通過(guò)加入IOmL甲醇停止該反應(yīng)并且維持?jǐn)嚢?0分鐘。 將50mL的CH2Cl2加入到該混合物中，然后它依次用兩次20mL和20mL的NaCl飽和溶液進(jìn) 行洗滌。然后有機(jī)相在Na2SO4I干燥，在減壓下去除溶劑。在色譜柱(己烷/AcOEt 8/2) 上純化后獲得期望化合物。由此分離出215毫克白色產(chǎn)物。Rf 0. 83 (己烷 /AcOEt 8/2)產(chǎn)率為39%。實(shí)施例1胸苷3，-(1，2_ 二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸酯)(di cl4dT) 在氮?dú)庀?，?，-0-(4.4，_ 二甲氧基三苯甲基)-2，_脫氧胸苷，3，-[(2_氰基-乙 基)-N, N- 二異丙基)]亞磷酰胺(0. 500g, 1當(dāng)量，0. 67毫摩爾)，1，2- 二肉豆蔻?；鵢sn-丙 三醇(0. 447g，1.3當(dāng)量，0. 87毫摩爾)和在乙腈中的0. 45M四唑溶液(2mL，1. 3當(dāng)量，0. 87毫摩爾)溶于4mL無(wú)水乙睛中。在環(huán)境溫度下磁力攪拌該反應(yīng)介質(zhì)24小時(shí)。然后通過(guò)加 入43mL在THF/Pyr/H20中0. 02M 二碘溶液氧化該混合物。在環(huán)境溫度下12小時(shí)后，在真 空下蒸發(fā)掉溶劑。將殘留物溶于8mL 二氯甲烷中。然后，在5小時(shí)內(nèi)將0.2mL的1，5_ 二氮 雜雙環(huán)[5. 4. 0]十一碳-7-烯(DBU) (1. 3當(dāng)量，0. 87毫摩爾)加入到反應(yīng)介質(zhì)中。該反應(yīng) 介質(zhì)用0. IN的HCl溶液然后用Na2S2OJg和溶液洗滌。有機(jī)相在真空下進(jìn)行濃縮。在通過(guò) 使用洗脫梯度(MeOH/DCM 9 1直至1 1)的快速色譜分離法(381mg)純化后，獲得化合 物。產(chǎn)率為69%。Rf 0. 34(DCM/Me0H 9 1)RMN IH(300MHz, CDC13) δ en ppm 0，84(t，6H，J = 6，92Hz，2 * CH3)，l，21(m， 40H，20 * CH2)，1，42(dd，4H，Jl = 8，45Hz，J2 = 15，68Hz，2 * CH2)，1，89 (s，3H，Me)， 2，30(dd，4H，Jl = 7，43Hz, J2 = 15，92Hz，2 * CH2)，2，83(t，2H，J = 5，84，H2，)，3，84 (m, 1H, H3，),4,09-4，35(m，7H，2 * CH2 (glycerol)，H4，，H5，)，5，27(s, 1H, CHglycerol), 6, 22(t, 1H, J = 6，81Hz，Hl，)，7，61(s，lH，Hbase).RMN 13C(75MHz，CDC13) : δ en ppm 19，29 (CH3)，23，71 (CH2)，26，57 (CH2)， 28，73 (CH2)，32，76 (CH2)，37，85 (CH2)，48，90 (CH2)，166，15 (C = 0) ·RMN 3 IP (121MHz, CDCl3) δ en ppm 0, 61.FAB 高解析質(zhì)譜-理論 m/z = 815. 4823 觀測(cè) m/z = 815. 4794.實(shí)施例2胸苷3' -(1,2- 二棕櫚?；?sn-甘油_3_磷酸酯)(di C16dT) 在氮?dú)庀拢瑢?，_0-(4，4，- 二甲氧三苯甲基)_2，-脫氧胸苷，3，_[(2_氰基-乙 基)-N, N- 二異丙基)]亞磷酰胺(0. 500g, 1當(dāng)量，0. 67毫摩爾)、1，2- 二棕櫚?；?sn-甘油 (0. 496g，1. 3當(dāng)量，0. 87毫摩爾/溶解在3mL THF中)和在乙腈中的0. 45M四唑溶液(2mL, 1. 3當(dāng)量，0. 87毫摩爾)溶于3mL無(wú)水乙晴中。在環(huán)境溫度下和在氮?dú)庀麓帕嚢柙摲磻?yīng)介 質(zhì)24小時(shí)。然后通過(guò)加入43mL在THF/Pyr/H20中0. 02M 二碘溶液氧化該混合物。在環(huán)境溫 度下12小時(shí)后，在真空下將溶劑蒸發(fā)掉并且使用泵在P2O5下干燥過(guò)夜。將殘留物溶于SmL
O
二
Olplo -
O
17二氯甲烷中。然后，在5小時(shí)內(nèi)將0. 2mL的1，5-二氮雜雙環(huán)[5.4.0] i^一碳_7_烯(DBU) (1. 3當(dāng)量，0. 87毫摩爾)加入到該反應(yīng)介質(zhì)。反應(yīng)介質(zhì)用0. IN HCl溶液然后用Na2S2O3飽 和溶液洗滌。有機(jī)相在真空下進(jìn)行濃縮。通過(guò)快速色譜分離法(ISOmg)通過(guò)使用洗脫梯度 (MeOH/DCM 98 2直至1 1)純化后獲得化合物。產(chǎn)率為24%。Rf 0. 3 (DCM/Me0H8 2)RMN IH(300MHz, CDC13) δ en ppm 0，88 (t，6H，J = 6，9Hz，2 * CH3)，1，25 (m，48H， 24 * CH2)，1，42(dd，4H，Jl = 8, 4Hz, J2 = 15，6Hz，2 * CH2)，1，90 (s，3H，Me)，2，33 (m， 4H，2 * CH2)，2, 83(t，2H，J = 5，6Hz，H2，)，3，84 (m，1H，H3，)，4，09-4，35 (m，7H，2 * CH2 (glycerol) ,H4', H5' )，5，27 (s，1H，CH glycerol), 6, 21 (t, 1H, J = 6，7Hz，Hl，), 7, 54 (s, 1H,H base).RMN 13C(75MHz，CDC13) : δ en ppm 12，4 (CH3base)，14，1 (CH3 ChaTne ), 19，6 (CH2)，19，7 (CH2)，22，6 (CH2)，24，8 (CH2)，29，1-29, 6 (CH2) ,31, 9 (CH2)，33，9 (CH2)， 34，1 (CH2) ,61, 5 (CH2) ,61, 7 (CH2)，62，5 (CH2)，62，6 (CH2)，66，1 (CH2)，66，2 (CH2)，69，1 (CH)， 78，8 (CH)，85，5 (CH)，86，1 (CH)，111，3 (Cbase)，136，8 (CH base)，150，5 (C = 0 base), 164，ι (C = ο base)，173，ο (C = ο chaine)，173，5 (C = ο chaTne).RMN 31P (121MHz，CDC13) δ en ppm 2，1.質(zhì)譜ESI-理論 m/z = 872. 5 觀測(cè) m/z = 871. 3。實(shí)施例35，-(4-十六烷氧基甲基-[1，2，3]三唑基)_5，，2，二脫氧胸苷 將200毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 75毫摩爾)和 在THF和水(1/1)的混合物中0. IM溶液形式的231毫克如在制備5中描述的1-炔丙氧基 十八烷(1當(dāng)量)引入到在燒瓶中。然后，依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng)量，0. 15 毫摩爾)和12毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加 熱5小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且 通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。在二氧化硅柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 8/2)之后獲得180毫克白色 固體。Rf 0. 72 (AcOEt/MeOH 8/2)產(chǎn)率為42%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量576. 4125，測(cè)定質(zhì)量576. 4120實(shí)施例4
5，-(4-十六烷氧基甲基-[1，2，3]三唑基)_5，，2，- 二脫氧腺苷 將200毫克如在制備4中描述的5’-疊氮基_5’，2’- 二脫氧腺苷(0. 72毫摩爾) 和在THF和水(1/1)的混合物中0. IM溶液形式的223毫克如在制備5中描述的1_炔丙 氧基十八烷(1當(dāng)量)引入到在燒瓶中。然后，依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng)量， 0. 15毫摩爾)和12毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C 加熱5小時(shí)，然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且 通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。在柱色譜分離法之后(AcOEt/MeOH 8/2)獲得150毫克白色固體。Rf 0. 65 (AcOEt/MeOH 8/2)產(chǎn)率為35%。RMN1H (300，13MHz，CDCl3) δ 0, 89 (t, j = 6Hz，3H，CH3) , δ 1, 26 (m, 30Η, CH2), δ 1，55(m，2H，CH2)，δ 2，54 (m, 1Η, CH2)，δ 3，06 (m, 1Η, CH2)，δ 3，45 (t, j = 6Ηζ，2Η，CH2)， 5 4, 50(m,4H,CH2,CH), δ 4，89 (m，？ )，δ 5，88 (s，2H，NH2)，δ 6，40 (t，j = 6Hz，1H，CH)， δ 7，42 (s，1H, CH)，δ 7，81 (s，1Η, CH)，δ 8，35 (s，1H, CH).高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量585. 4241，測(cè)定質(zhì)量585. 4254實(shí)施例55，-(4-(1_ 羥基-己基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷 將215毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 8毫摩爾)和在 THF和水(1/1)中0. IM溶液形式的101毫克辛-1-炔-3-醇(1當(dāng)量)引入到在燒瓶中。 然后，依次加入31. 5毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng)量，0. 15毫摩爾)和13毫克的硫酸銅(0. 1 當(dāng)量，0.075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán) 境溫度。然后該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色譜 分離法(AcEt/MeOH 85/15)獲得純的化合物。獲得255毫克白色固體。Rf 0. 48(AcOEt/MeOH 85/15)產(chǎn)率為78%。RMN1H (300, 13MHz, DMSO d6) δ 0, 83 (t, j = 6Hz，3H，CH3), δ 1, 24(m,6H, CH2),
19δ 1，68(m，2H，CH2)，δ 1，81 (s，3H，CH3)，δ 4，06 (m，1H，CH)，δ 4，27 (m，1H，CH)，δ 4，62 (m， 3H, CH2, CH)，δ 5，2 (d, j = 6Hz, 1Η, OH)，δ 5，5 (s, 1H, OH)，δ 6，17 (t, j = 6Hz, 1Η, CH)， δ 7，37 (s，1Η, CH)，δ 7，89 (s，1Η, CH).RMN 13C (75, 47MHz, DMSO d6) δ 12, 5 (CH3), δ 014, 4 (CH3), δ 22，6 (CH2)，δ 25，1， δ 31, 7 (CH2), δ 38, 4 (CH2), δ 51，6 (CH2-N)，δ 66, O (CH-O), δ 71, 3(C), δ 84，4，δ 84，5， δ 110, 3( = C-N), δ 122，8，δ 136，4，δ 150，9，δ 152，4，δ 164，1.高解析度MS[M+Na]+ 計(jì)算質(zhì)量416. 1910，測(cè)定質(zhì)量416. 1897實(shí)施例65，-(4-(己基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷 將200毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基-5’ -脫氧胸苷(0. 75毫摩爾)和在 THF和水(1/1)的混合物中0. IM溶液形式的82. 65毫克壬-1-炔(1當(dāng)量)引入到在燒瓶 中。然后，依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng)量，0.15毫摩爾)和12毫克的硫酸銅 (0. 1當(dāng)量，0. 075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷 卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色 譜分離法(AcOEt/MeOH 8/2)獲得純化合物。獲得130毫克白色固體。Rf 0. 62 (AcOEt/MeOH 8/2)產(chǎn)率為46%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量576. 4125，測(cè)定質(zhì)量576. 4120實(shí)施例75，_(4-(庚基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷 將200毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 75毫摩爾)和在 THF和水(1/1)的混合物中的0. IM溶液形式的93毫克壬-1-炔(1當(dāng)量)弓丨入到燒瓶中。 然后，依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0. 2當(dāng)量，0. 15毫摩爾)和12毫克的硫酸銅(0. 1 當(dāng)量，0.075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色譜分離 法(AcOEt/MeOH 85/15)獲得純化合物。獲得120毫克白色固體。Rf (AcOEt/MeOH 85/15)產(chǎn)率為41%。RMN1H(300, 13MHz, CDCl3) δ 0, 83 (t, j = 6Hz，3H，CH3) , δ 1, 25(m,8H, CH2), δ 1，55 (m, 2Η, CH2)，δ 1，79 (s, 3Η, CH3)，δ 2, 10 (t, j = 6Ηζ,2Η, CH2)，δ 2，61 (t, j = 6Ηζ, 2Η, CH2)，δ 4，06 (s, 1Η, CH)，. δ 4，27 (s, 1Η, CH)，δ 4，59 (m, 2Η, CH2)，δ 5，5 (s，1Η, OH)， δ 6，16 (t, j = 6Ηζ, 1Η, CH)，· δ 7，29 (s, 1Η, CH)，δ 7，82 (s, 1Η, CH)，δ 11，31 (s, 1Η, NH).RMN13C (75，47MHz，DMSO d6) δ 12, 6 (CH3) , δ 14, 4 (CH3) , δ 22，5 (CH2)， δ 25, 4 (CH2) , δ 28, 9 (CH2) , δ 29，0 (CH2)，δ 29，4 (CH2)，. δ 31，7 (CH2)，δ 38, 4 (CH2), δ 51, 5 (CH2) , δ 71，I(CH), δ 84, 4 (CH) , δ 110 (C) , δ 123，1 (CH)，δ 136, 5 (CH), δ 147，4(C), δ 150，9 (C = 0)，δ 164，1 (C = 0) ·實(shí)施例85，-(4_(2，2-雙十三烷基-[1，3] 二氧戊環(huán)_4_基甲氧基甲基)-[1，2，3]三 唑-1-基)-5’，2’ 二脫氧胸苷 將264mg如在制備3中描述的5，-疊氮基-5，-脫氧胸苷(1毫摩爾)和在THF 水混合物(1/1)中的0. IM溶液形式的500mg 4-丙-2-炔氧基甲基-2，2-雙十三烷基-[1， 3] 二氧戊環(huán)(1當(dāng)量)引入到在燒瓶中。依次加入39. 5毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng)量，0.2 毫摩爾)和16毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 1毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5 小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。然后該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且 通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色譜分離法(AcEt/MeOH 8/2)獲得純化合物。獲得550毫克白 色固體。產(chǎn)率為72%高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量774. 5745，測(cè)定質(zhì)量774. 5739實(shí)施例95，-(4-(2，2_雙十三烷基-[1，3] 二氧戊環(huán)_4_基丁氧基甲基)-[1，2，3]三 唑-1-基)-5’，2’ 二脫氧胸苷 將195mg如在制備3中描述的5’-疊氮基-5’-脫氧胸苷(0. 73毫摩爾)和在THF 水混合物(1/1)中0. IM溶液形式的400mg的4-(4-丙-2-炔氧基-丁基)-2，2-雙十三烷 基-[1，3] 二氧戊環(huán)(1當(dāng)量)引入到在燒瓶中。依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng) 量，0. 15毫摩爾)和12毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 073毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在 60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上， 并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 9/1)獲得純化合物。獲得180 毫克白色固體。Rf 0. 43 (AcOEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為30%。實(shí)施例105，-(4-((0_膽甾醇基)_甲基)_[1，2，3]三唑基)_5，，2，二脫氧胸苷 將170mg如在制備3中描述的5’-疊氮基-5’-脫氧胸苷(0. 63毫摩爾)和在THF 水(1/1)混合物中0. IM溶液形式的270毫克如在制備7中描述的O-炔丙基膽甾醇(1當(dāng) 量)引入到在燒瓶中。依次加入20mg的抗壞血酸鈉(0. 2當(dāng)量，0. 13毫摩爾)和10毫克 硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 063毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混 合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通 過(guò)柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 8/2)獲得純化合物。獲得260毫克白色固體。Rf 0. 57(AcOEt/MeOH 8/2)產(chǎn)率為59%。MS[M+H]+ 692. 3
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實(shí)施例111，12_ 雙-[5，-(4-(甲基)-[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷]-氧十 烷 將IOOmg如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 375毫摩爾)和在 THF水混合物(1/1)中0. IM溶液形式的52mg由在制備6中描述的化合物制備的1，12-二 炔丙氧基十二烷(0.5當(dāng)量)引入到在燒瓶中。依次加入15毫克的抗壞血酸鈉(0.2當(dāng) 量，0. 075毫摩爾)和6毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 0375毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且 在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化 硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò)柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 8/2)獲得純化合物。獲得 90毫克白色固體。產(chǎn)率為59%。RMN1H(300, 13MHz, MeOH d4) δ 1，28 (m, 16H, CH2)，δ 0，83(m，4H，CH2)，δ 1，89 (s, 6H, CH3), δ 2，17(s，2H，CH2)，δ 2，25 (m，4Η，CH2)，δ 3，51 (t，j = 6Hz，4H，CH2)，δ 4, 18 (m, 2H，CH) δ 4，42 (m，2H，OH) δ 4，58 (s，4H，CH2)，δ 4, 76 (qd, j = 6Hz,4H, CH2), δ 6, 21 (t, j = 6Hz,2H, CH)，δ 7，23 (s，2H, CH)，δ 7，99 (s，2Η, CH) ·實(shí)施例125，-(4-(l(R)_ 羥基-己基)-[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷 將215毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 8毫摩爾)和在 THF和水(1/1)混合物中0. IM溶液形式的101. 5毫克辛-1-炔-3-醇(1當(dāng)量)引入到在 燒瓶中。依次加入31. 5毫克的抗壞血酸鈉(0. 2當(dāng)量，0. 15毫摩爾)和13毫克的硫酸銅 (0.1當(dāng)量，0.075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合物冷 卻至環(huán)境溫度。然后該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通過(guò) 柱色譜分離法(AcEt/MeOH 9/1)獲得純化合物。獲得240毫克白色固體。Rf 0. 48 (AcEt/MeOH 9/1)產(chǎn)率為76%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量576. 4125，測(cè)定質(zhì)量576. 4120實(shí)施例135，-(4-(l(S)_ 羥基-己基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧胸苷
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將215毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 8毫摩爾)和在 THF和水(1/1)混合物中0. IM溶液形式的101. 5毫克(S)辛炔_3_醇(1當(dāng)量)引入 到在燒瓶中。依次加入31. 5毫克的抗壞血酸鈉(0. 2當(dāng)量，0. 15毫摩爾)和13毫克的硫 酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然后將該混合 物冷卻至環(huán)境溫度。然后該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除溶劑。通 過(guò)柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 85/15)獲得純化合物。獲得255毫克白色固體。Rf 0. 48(AcOEt/MeOH 85/15)產(chǎn)率為78%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量576. 4125，測(cè)定質(zhì)量576. 4120實(shí)施例145，-(4-(1_ 羥基-己基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫氧腺苷 將200毫克如在制備3中描述的5’ -疊氮基_5’ -脫氧胸苷(0. 75毫摩爾)和在 THF和水(1/1)混合物中0. IM溶液形式的95毫克辛-1-炔-3-醇的外消旋混合物(1當(dāng) 量)引入到在燒瓶中。然后，依次加入30毫克的抗壞血酸鈉(0. 2當(dāng)量，0. 15毫摩爾)和 12毫克的硫酸銅(0. 1當(dāng)量，0. 075毫摩爾)。攪拌該反應(yīng)介質(zhì)并且在60°C加熱5小時(shí)。然 后將該混合物冷卻至環(huán)境溫度。該反應(yīng)介質(zhì)直接被吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)蒸發(fā)去除 溶劑。通過(guò)柱色譜分離法(AcOEt/MeOH 8/2)獲得純化合物。獲得240毫克白色固體。Rf 0. 47(AcOEt/MeOH 8/2)產(chǎn)率為80%。高解析度MS[M+H]+ 計(jì)算質(zhì)量576. 4125，測(cè)定質(zhì)量576. 4120實(shí)施例15 制備納米顆粒在實(shí)施例2中制備的化合物胸苷3’-(1，2- 二棕櫚?；?sn-甘油_3_磷酸酯)(di C16dT)用作式(I )化合物和二油基磷脂酰膽堿(DOPC)用作共_類脂。1)制備母液-a)制備順鉬溶液將15毫克順鉬溶解在IOmL miIliQ水(5mM)中。攪拌該懸浮液1分鐘(旋渦)， 然后在37°C溫育24小時(shí)。
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-b)制備類脂溶液溶液A 將20mg diC16dT溶解在2mL氯仿(10mg/mL)中。在_20°C儲(chǔ)存該樣品。溶液B =DOPC 在氯仿中20mg/mL溶液，在_20°C儲(chǔ)存。2)制備類脂配制劑使52. 3 μ L溶液A與23. 6 μ 1溶液B在2mL Eppendorf 試管中混合。這些體積 對(duì)應(yīng)于1/1的摩爾比。在氮?dú)庀抡舭l(fā)掉氯仿以獲得均勻的類脂膜。3)制備納米顆粒在37°C預(yù)溫育的1. 2mL順鉬溶液用于再水合預(yù)先制備的類脂膜。在37°C溫育該 混合物30分鐘。進(jìn)行一系列10個(gè)加熱(在45°C的水浴)和冷凍(干冰/甲醇-78°C )周 期。4)洗滌和回收納米顆粒一旦完成該系列10個(gè)周期，在4°C在2100rpm離心該試管5分鐘。在去除上清液 之后，將沉淀物再懸浮在ImL MilliQ水中。進(jìn)行第二次離心(2100rpm在4°C達(dá)5分鐘)， 然后除去上清液并且干燥沉淀物。再懸浮在ImL MilliQ水中的沉淀物的濃度(ICP/光學(xué))為2. 844mM當(dāng)量順鉬 (852. 2mg/L)。該濃度對(duì)應(yīng)于最初使用的47. 4%順鉬。實(shí)施例16 制備納米膠囊在實(shí)施例2中制備的化合物胸苷3’-(1，2- 二棕櫚酰基-sn-甘油_3_磷酸酯)(di C16dT)用作式(I )化合物和二油基磷脂酰膽堿(DOPC)用作共_類脂。1)制備母液-a)制備順鉬溶液將15毫克順鉬溶解在IOmL miIliQ水(5mM)中。攪拌該懸浮液1分鐘(渦旋)， 然后在37°C溫育24小時(shí)，偶爾攪拌。-b)制備類脂溶液溶液A 將20mg di C16dT溶解在2mL 二氯甲烷(10mg/mL)中。在_20°C儲(chǔ)存該溶液。溶液B :D0PC 在二氯甲烷中的20mg/mL溶液，在_20°C儲(chǔ)存。2)制備類脂配制劑使52. 3 μ L溶液A與47. 2 μ 1溶液B在2mL Eppendorf 試管中混合。這些體積 對(duì)應(yīng)于1/1的摩爾比。使用壓縮氮?dú)鈱⒍燃淄檎舭l(fā)掉以獲得均勻的類脂膜。3)制備納米顆粒在環(huán)境溫度下使用預(yù)先制備的類脂膜溫育1. 2mL順鉬溶液(5mM)過(guò)夜，不攪拌。進(jìn) 行一系列10個(gè)加熱(在45°C水浴)和冷凍(干冰/乙醇_78°C )周期。4)洗滌和回收納米顆粒一旦完成該系列10個(gè)周期，攪拌該懸浮液并且放置在玻璃溶血管中，然后使其經(jīng) 受超聲處理達(dá)5分鐘。在超聲處理后，在1000rpm/2. 5分鐘/20°C離心該懸浮液以取出大膠囊，其位于將被去除的沉淀物中。在10000rpm/5min/20°C再離心該上清液。納米顆粒位 于沉淀物中。將后者再懸浮在ImL MilliQ水中并且進(jìn)行第二次離心。將該沉淀物懸浮在 ImL中并且在電感耦合等離子體(ICP)-光學(xué)中進(jìn)行測(cè)定。實(shí)施例17 穩(wěn)定度測(cè)試根據(jù)實(shí)施例16的方案制備的納米顆粒通過(guò)ICP-光學(xué)進(jìn)行測(cè)定(測(cè)定值對(duì)應(yīng)于總 濃度)。將納米顆粒的懸浮液等分到5個(gè)eppendorf 管(150yL)中。在攪拌(300rpm) 下，后者在37°c溫育不同時(shí)間(0，2. 5，5，10和24小時(shí))。在給定時(shí)間(χ)，以14000rpm/10min/20°C離心該管并且測(cè)定50 μ L上清液(小心 回收以便不使沉淀物再懸浮))。根據(jù)與對(duì)比例相同的方案制備基于1，2- 二油?；?sn-甘油基_3_[磷酸-L-絲 氨酸](DOPS)與1，2- 二油酰基-sn-甘油基_3_膽堿磷酸(DOPC)(作為共-類脂)的納米 顆粒。順鉬遞送百分比根據(jù)以下方程式進(jìn)行計(jì)算遞送的順鉬％ = Cx-C0/Ct-C0Cx 在給定時(shí)間(χ)得到的濃度CO 在溫育之前在上清液中得到的濃度。Ct 不溫育和不離心時(shí)得到的總濃度。作為溫育時(shí)間的函數(shù)的順鉬的遞送曲線在

圖1中表示。實(shí)施例16的納米顆粒由 符號(hào)-ο-表示和基于D0PC/D0PS的納米顆粒由符號(hào)_ ▲-表示。結(jié)果表明，對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的納米顆粒半衰期(釋放50%順鉬所需的溫育時(shí)間) 大于24h，而對(duì)于基于D0PC/D0PS的納米顆粒為約6. 5h。實(shí)施例18 測(cè)量納米顆粒的尺寸根據(jù)實(shí)施例16的方案制備的納米顆粒使用MALVERN Mtasizer粒度儀進(jìn)行分析。將納米顆粒懸浮在2mL MilliQ水中(尺寸測(cè)量所需的體積)。濃度為大約 0.5mM(懸浮液必須是渾濁的以散射光)。使用一次性小池(lcm/lcm)用于該測(cè)量。結(jié)果表明大于95%的納米顆粒具有100-250nm的尺寸與0. 228的多分散性。實(shí)施例19 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的順鉑^m80%匯合(直徑IOcm盤)的IGROVl細(xì)胞(卵巢惡性腺瘤系)用ΙΟΟμΜ游離的順 鉬或者封裝在實(shí)施例16的納米顆粒中的順鉬處理2、4或6小時(shí)。在該處理結(jié)束時(shí)，用PBS 進(jìn)行兩次洗滌。細(xì)胞用胰蛋白酶處理并且再懸浮在PBS中。進(jìn)行用PBS兩次洗滌該細(xì)胞懸 液(1000rpm/lmin離心)。將細(xì)胞懸浮在ImL PBS中并且計(jì)數(shù)。ICP光學(xué)測(cè)定用500 μ L細(xì)胞溶解溶液(來(lái)自SIGMA的溶胞緩沖液)對(duì)IO6個(gè)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞溶 解。體積用具有HNO3酸的MilliQ水補(bǔ)充至5mL。MM結(jié)果示在圖2中，其顯示在細(xì)胞溶解之后隨時(shí)間釋放的順鉬的濃度，其對(duì)應(yīng)于在 處理的細(xì)胞中內(nèi)在化(internalisS)的順鉬的濃度。對(duì)于每個(gè)時(shí)段，陰影線柱(在左邊)對(duì)應(yīng)于游離的順鉬和斑點(diǎn)柱(在右方)對(duì)應(yīng)
26于包含順鉬的納米顆粒。結(jié)果表明，順鉬的內(nèi)在化(internalisation)在納米顆粒存在下是明顯更有效 的。例如，在相同條件下(IO6細(xì)胞，100 μ Μ, 2h)，在游離的順鉬情況下，0. 5納摩爾順鉬被內(nèi) 在化，而在納米顆粒情況下該內(nèi)在化大4. 5倍(2. 3納摩爾)。實(shí)施例20 根據(jù)本發(fā)明制備的納米顆粒的細(xì)胞毒件作用的研究納米顆粒根據(jù)在實(shí)施例15中描述的方法進(jìn)行制備。使用下式的化合物C20dT用 作式(I)的化合物其中 η = 18，該化合物描述在Nathalie Campins 等，New J. Chem 2007,31,1928-1934 中。實(shí)施的測(cè)試使用人類癌細(xì)胞系HCT8(結(jié)腸直腸惡性腺瘤)，其由于它對(duì)鉬衍生物 的固有抗性而已知。方案如下-在J3，細(xì)胞以每孔50000個(gè)細(xì)胞的密度植入96孔板中。-在J0，細(xì)胞用測(cè)試配制劑進(jìn)行處理，或者在生理血清中的短接毒時(shí)間(dude d’ exposition) (30分鐘)，或者在培養(yǎng)基中長(zhǎng)接毒時(shí)間(72h)。進(jìn)行的濃度范圍包括點(diǎn) 0-0. 4-0. 8-1. 5-3-6. 25-12. 5-25-50和100mg/L。同時(shí)進(jìn)行負(fù)對(duì)照(未經(jīng)處理的細(xì)胞)和 正對(duì)照(順鉬)。-在J3，改變培養(yǎng)基，停止該72h處理。-在J6，結(jié)束該方案，保留在孔底部的細(xì)胞用結(jié)晶紫染色。結(jié)果的表汰測(cè)定細(xì)胞的存活，在不同測(cè)試配制劑濃度獲得的總死亡百分比(或者細(xì)胞毒性) 與由負(fù)對(duì)照(未經(jīng)處理的細(xì)胞)得到的相當(dāng)。細(xì)胞毒性結(jié)果以效果_劑量曲線形式表示， 其通過(guò)它們的抑制濃度50 (CI5tl)(即觀測(cè)到50%死細(xì)胞時(shí)的濃度)進(jìn)行表征。在30分鐘時(shí)的初步結(jié)果(CI5J結(jié)果如下表1所示。表 1
k、
27化合物(I)共-類脂混合物的摩爾比CI50(mg/L)沒(méi)有(只有順鈾)-未測(cè)定 CI50>100mg/LC20dTDOPCDOPC/C20dT 1:133mg/L結(jié)果表明，包含式(I )化合物C20dT的根據(jù)本發(fā)明的納米顆粒在該測(cè)試中在 30min具有顯著低于單獨(dú)使用順鉬的劑量的細(xì)胞毒性(用CI5tl表示)。實(shí)施例21 根據(jù)本發(fā)明制備的納米顆粒的細(xì)胞毒性作用的研究以下化合物用作式(I )化合物-實(shí)施例2的diC16dT(胸苷3’_(1，2_ 二棕櫚酰基-sn-甘油_3_磷酸酯)和 共-類脂(DOPC)，或-實(shí)施例12 的 5，-(4-(l(R)_ 羥基-己基)_[1，2，3]三唑 基)_5，，2，二脫 氧-胸苷，但沒(méi)有加入共類脂。納米顆粒根據(jù)在實(shí)施例15中描述的方法進(jìn)行制備，但是使用對(duì)于實(shí)施例12的化 合物單個(gè)加熱/冷卻周期。方案每孔1000-5000個(gè)IGROVl細(xì)胞在100 μ L具有血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行培育(96孔 板)。在24h之后將培養(yǎng)基取出和用根據(jù)本發(fā)明的配制劑和/或游離的順鉬(以期望濃度) 處理細(xì)胞1-3天。細(xì)胞在37°C在200 μ 1具有血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行培育。細(xì)胞成活力通過(guò) 在該處理結(jié)束時(shí)MTS比色測(cè)定進(jìn)行顯示。結(jié)果的表汰測(cè)定細(xì)胞的存活，在不同所測(cè)試的配制劑濃度獲得的總死亡百分比(或者細(xì)胞毒 性)可與使用負(fù)對(duì)照樣品(未經(jīng)處理的細(xì)胞)得到的死亡總百分比相當(dāng)。細(xì)胞毒性結(jié)果以 效果-劑量曲線形式表示，其通過(guò)它們的抑制濃度50(CI5Q)(即觀測(cè)到50%死細(xì)胞時(shí)的濃 度)進(jìn)行表征。結(jié)果示于下面表2，其中CI50用順鉬的μ M或者用mg/L表示(溫育時(shí)間24h)表 2
化合物(I)共-類脂CI50 用mg/L表示CI50 用μΜ表示無(wú) (只有順鉑)-9.4831.6實(shí)施例2DOPC0.481.6實(shí)施例12-0.953.16 結(jié)果表明包含式(I )化合物、在存在或不存在共_類脂下制備的根據(jù)本發(fā)明的
28納米顆粒在該測(cè)試中在24h具有顯著低于單獨(dú)使用的順鉬的劑量的細(xì)胞毒性(用CI5tl表 示)°實(shí)施例22 根據(jù)本發(fā)明制備的納米顆粒的細(xì)胞毒件作用的研究Tf^a/細(xì)胞的準(zhǔn)備和處理在96孔板中每孔2500個(gè)細(xì)胞(IGR0V1，SK0V3，卵巢惡性腺瘤系)在100 μ L具有 血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行培育。在24小時(shí)后，吸出培養(yǎng)基，細(xì)胞用在100 μ 1不含血清的培養(yǎng)基 中具有不同濃度(500，100,10,1,0. 1,0.01,0. 001Μ)的游離順鉬或者封裝在實(shí)施例16的納 米顆粒中的順鉬進(jìn)行處理。在處理24小時(shí)后，除去培養(yǎng)基并且細(xì)胞用IOOyL PBS洗滌兩 次然后用100 μ L具有血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培育。b/毒件的顯示在該兩次洗滌之后48小時(shí)，細(xì)胞成活力通過(guò)加入20 μ L MTS進(jìn)行顯示。在37°C培 育2-4小時(shí)之后測(cè)量在490nm的吸光度。吸光度與細(xì)胞成活力成正比例。C)結(jié)果結(jié)果顯示在圖3中，其顯示用游離順鉬(柱A)或者包含順鉬的納米顆粒(柱B) 獲得50%細(xì)胞死亡所需的濃度(CI50)。圖3A涉及IGROVl細(xì)胞系和圖3B涉及SK0V3細(xì)胞系。結(jié)果表明，在兩個(gè)細(xì)胞系IGROVl (對(duì)順鉬敏感)和SK0V3 (抗順鉬)中，包含順鉬 的實(shí)施例16的納米顆粒是比游離順鉬更有效的。對(duì)于細(xì)胞系IGR0V1，由0. 27 μ M包含順鉬的納米顆粒得到50%細(xì)胞死亡，而必須 使用2. 41Μ游離順鉬以獲得該結(jié)果。對(duì)于細(xì)胞系SK0V3，用0. 54 μ M包含順鉬的納米顆粒得 到50%細(xì)胞死亡，而需要4. 3 μ M游離順鉬。對(duì)于細(xì)胞系IGROVl和SK0V3，包含順鉬的納米顆粒比游離順鉬效力分別高9和8倍。
權(quán)利要求
用于封裝治療劑方法，其包括這樣的步驟，該步驟在于a)制備至少一種式(Ⅰ)的功能兩親化合物和治療劑，優(yōu)選抗腫瘤劑的混合物其中 X表示氧或者硫原子或者亞甲基， B表示嘌呤堿或者嘧啶堿，如尿嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、次黃嘌呤或者它們的衍生物，或者非天然的單或者雙環(huán)的雜環(huán)堿，其每個(gè)環(huán)包含4 7個(gè)鏈節(jié)，其任選地被取代； L1和L2，相同或者不同的，表示氫、氧羰基 O C(O) 、硫代氨基甲酸酯基團(tuán) O C(S) NH 、碳酸酯基團(tuán) O C(O) O 、氨基甲酸酯基團(tuán) O C(O) NH 、氧原子、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)或者包含1 4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳基未被取代或者被直鏈或支鏈的，飽和或者不飽和的C2 C30烴鏈取代，或者，L1和L2一起形成下式的縮醛基或者，L1或L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1 4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳基未被取代或者被直鏈或支鏈的C2 C30烷基鏈取代； R1和R2，相同的或者不同的，表示 飽和或者部分不飽和的直鏈或支鏈的C2 C30，優(yōu)選地C6 C25，特別地C8 C25烴鏈，其任選地完全地或者部分地氟化，其未被取代或在鏈端的碳上被氟原子或者被芐基酯或醚或者萘基酯或醚取代，或者 二酰基鏈，其中每個(gè)?；?zhǔn)荂2 C30鏈，或者 甘油二酯、鞘氨醇或者神經(jīng)酰胺基團(tuán)，或者 當(dāng)L1或L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1 4個(gè)氮原子的雜芳基時(shí)，R1和R2不存在； R3表示 羥基、氨基、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)、磷脂酰膽堿基團(tuán)，O 烷基磷脂酰膽堿基團(tuán)、硫代磷酸酯基團(tuán)、磷NH2 R4、NHR4R5或NR4R5R6其中R4、R5和R6，相同的或者不同的，表示氫原子或者直鏈或支鏈的C1 C5烷基鏈或者羥烷基鏈，或者 直鏈或支鏈的C2 C30烷基鏈，其任選地被羥基取代，或者 環(huán)糊精殘基，或者 殘基其中V表示 O 、 S 或 NH 鍵，R7表示H或CH3，和n＝1 500，或 (CH2)n V R8基團(tuán)，其中R8表示C2 C30烷基，和n＝1 500，或 包含1 4個(gè)氮原子的雜芳基，其未被取代或者被以下基團(tuán)取代C2 C30烷基或(CH2)m O (CH2)p R9基團(tuán)，其中m＝1 6和p＝0 10和R9表示包含5 7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮醛基團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè)直鏈或支鏈的C2 C30烷基或者被甾醇?xì)埢〈?，或?R3通過(guò)共價(jià)鍵與另一相同或者不同的式(Ⅰ)化合物的另一相同或者不同的取代基R3連接，以形成呈二聚物形式的式(Ⅰ)化合物，b)使所述混合物經(jīng)受重復(fù)的加熱和凍結(jié)周期，以便獲得包含所述治療劑的納米顆粒，和c)回收如此獲得的包含所述治療劑的納米顆粒。FPA00001188361000011.tif,FPA00001188361000012.tif,FPA00001188361000021.tif,FPA00001188361000022.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，特征在于在式(I)中，X代表氧。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)的方法，特征在于在式(I)中，B代表胸腺嘧啶、腺嘌呤。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的方法，特征在于在式(I)中 -X和B如在權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)中所定義；-L1表示磷酸酯基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基或者二酰基，其中每個(gè)?；?zhǔn)荂2-C3tl 鏈，和R3是羥基；或者-L1和L2表示氧原子，R1和R2表示氫和R3表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，其被C2-C3tl 烷基取代，或-L1表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基和R3是羥基，或 -L1表示羥基，L2表示氫和R3是被C2-C3tl烷基鏈取代的三唑基，該烷基鏈任選地被羥基 取代，或者R3是基團(tuán)或-(CH2)n-V-R8基團(tuán)，其中V表示-0-或-NH-和R8表示C2-C3tl烷基， 或-L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m= 1-6 和ρ = 0-10和R9表示包含5-7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮醛基團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè)直 鏈或支鏈的C2-C3tl烷基或者被留醇?xì)埢〈?，或?L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m= 1-6 和ρ = 0-10，其通過(guò)共價(jià)鍵連接至另一相同的式(I )化合物的另一相同取代基R3，以形 成二聚物形式的式(I )化合物，或者-L1表示磷酸酯基，L2表示氫R1表示二?；湥渲忻總€(gè)二?；?zhǔn)荂2-C3tl鏈，和R3是 羥基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的方法，特征在于，在式(I)中 -X、B、L^R1和R2如在式(I )中所定義，和-取代基L1或取代基R3包括被取代或未被取代的三唑基團(tuán)或由其構(gòu)成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的方法，特征在于其包括這樣的步驟，步驟在于 -使式(I)化合物溶于有機(jī)溶劑中以形成類脂混合物，-蒸發(fā)所述混合物以形成膜； -將期望量的治療劑，優(yōu)選地抗腫瘤劑溶于蒸餾水中； -類脂膜在治療劑，優(yōu)選抗腫瘤劑的溶液中進(jìn)行再水合； -使如此獲得的混合物經(jīng)受進(jìn)行1-10次的加熱和冷卻周期。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，特征在于使式(I)化合物溶于存在共類脂的有 機(jī)溶劑中。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，特征在于該共類脂選自選自二油基磷脂酰膽堿(DOPC)或者 二油基磷脂酰絲氨酸磷脂酰膽堿(DOUPC)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，特征在于治療劑選自鉬絡(luò)合物，或者能夠與鉬絡(luò) 合物連接的釕，或者基于釕II或者III、鈦、鎵、鈷、鐵或者金的不含鉬的無(wú)機(jī)絡(luò)合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的方法，特征在于治療劑選自順鉬、卡鉬、奧沙利鉬、奈達(dá) 鉬、洛鉬。
11.可以通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的方法獲得的納米顆粒。
12.固體納米顆粒，特征在于其由被一個(gè)或多個(gè)由式(I)化合物構(gòu)成的類脂層包圍的 富含治療劑，優(yōu)選抗腫瘤劑的核心構(gòu)成，有或沒(méi)有共類脂，其中 -X表示氧或者硫原子或者亞甲基，-B表示嘌呤堿或者嘧啶堿，如尿嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、次黃嘌呤或 者它們的衍生物，或者非天然的單或者雙環(huán)的雜環(huán)堿，其每個(gè)環(huán)包含4-7個(gè)鏈節(jié)，其任選地 被取代；-L1和L2，相同或者不同的，表示氫、氧羰基-0-C(0)-、硫代氨基甲酸酯基 團(tuán)-0-C(S)-NH-、碳酸酯基團(tuán)-0-C(0)-0-、氨基甲酸酯基團(tuán)-0-C(0)-NH-、氧原子、磷酸酯基 團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳基未被取代或者被直鏈或支鏈的， 飽和或者不飽和的C2-C3tl烴鏈取代，或者，L1和L2 —起形成下式的縮醛基 或者，L1或L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，該雜芳基未被 取代或者被直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基鏈取代； -R1和R2，相同的或者不同的，表示-飽和或者部分不飽和的直鏈或支鏈的C2-C3tl，優(yōu)選地C6-C25,特別地C8-C25烴鏈，其任 選地完全地或者部分地氟化，其未被取代或在鏈端的碳上被氟原子或者被芐基酯或醚或者 萘基酯或醚取代，或者-二?；?，其中每個(gè)?；?zhǔn)荂2-C3tl鏈，或者 -甘油二酯、鞘氨醇或者神經(jīng)酰胺基團(tuán)，或者-當(dāng)L1或L2表示氫，另一個(gè)表示羥基或者包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基時(shí)，R1和R2不存在；-R3表示-羥基、氨基、磷酸酯基團(tuán)、膦酸酯基團(tuán)、磷脂酰膽堿基團(tuán)，0-烷基磷脂酰膽堿基團(tuán)、硫 代磷酸酯基團(tuán)、磷鴒、NH2-R4、NHR4R5或NR4R5R6,其中R4、R5和R6,相同的或者不同的，表示氫 原子或者直鏈或支鏈的C1-C5烷基鏈或羥烷基鏈，或者-直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基鏈，其任選地被羥基取代，或者-環(huán)糊精殘基，或者-殘基 其中V表示-O-、-S-或-NH-鍵，R7表示H或CH3,和η = 1-500，或 -(CH2)n-V-R8 基團(tuán)，其中 R8 表示 C2-C3tl 烷基，和 η = 1-500，或 -包含1-4個(gè)氮原子的雜芳基，其未被取代或者被以下基團(tuán)取代=C2-C3tl烷基或(CH2) m-0-(CH2)p-R9基團(tuán)，其中m = 1-6和ρ = 0-10和R9表示包含5_7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮醛基 團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè)直鏈或支鏈的C2-C3tl烷基或者被留醇?xì)埢〈蛘?R3通過(guò)共價(jià)鍵與另一相同或者不同的式(I )化合物的另一相同或者不同的取代基 R3連接，以形成呈二聚物形式的式(I )化合物。
13.式(I )化合物 其中-X表示氧或者硫原子，-B表示嘌呤堿或者嘧啶堿，如尿嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、次黃嘌呤或 者它們的衍生物，或者非天然的單或者雙環(huán)的雜環(huán)堿，其每個(gè)環(huán)包含4-7個(gè)鏈節(jié)，其任選地 被取代；和LrLyIVRdn R3選自以下定義中之一；-L1表示磷酸酯基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基或者二?；?，其中每個(gè)酰基鏈?zhǔn)荂2-C3tl 鏈，和R3是羥基；或者-L1和L2表示氧原子，R1和R2表示氫和R3表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，其被C2-C3tl 烷基取代，或-L1表示三唑、四唑、吡唑或者咪唑基，L2表示氫，R1表示C2-C3tl烷基和R3是羥基，或 -L1表示羥基，L2表示氫和R3是被C2-C3tl烷基鏈取代的三唑基，該烷基鏈任選地被羥基 取代，或者R3是基團(tuán)或-(CH2)n-V-R8基團(tuán)，其中V表示-0-或-NH-和R8表示C2-C3tl烷基， 或-L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m= 1-6 和ρ = 0-10和R9表示包含5-7個(gè)碳原子的環(huán)狀縮醛基團(tuán)，其未被取代或者被至少一個(gè)直 鏈或支鏈的C2-C3tl烷基或者被留醇?xì)埢〈?，或?L1表示羥基，L2表示氫和R3是被(CH2)m-O-(CH2)p-R9基團(tuán)取代的三唑基，其中m= 1-6 和ρ = 0-10通過(guò)共價(jià)鍵連接至另一相同的式(I )化合物的另一相同取代基R3，以形成二 聚物形式的式(I )化合物，或者-L1表示磷酸酯基，L2表示氫R1表示二酰基鏈，其中每個(gè)二?；?zhǔn)荂2-C3tl鏈，和R3是 羥基。
14.式(I )化合物其中 -X、B、L2, R1和R2如在權(quán)利要求1中所定義；-L1或R3包括被取代或未被取代的三唑基團(tuán)或由其構(gòu)成。
15.納米顆粒，其包含根據(jù)權(quán)利要求13或14任一項(xiàng)的式(I)化合物和治療劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的納米顆粒，特征在于治療劑是抗腫瘤劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求11、12、15或16任一項(xiàng)的納米顆粒，特征在于治療劑選自順鉬、卡鉬、 奧沙利鉬、奈達(dá)鉬和洛鉬。
18.根據(jù)權(quán)利要求11、12、15、16或17任一項(xiàng)的納米顆粒的用途，其用于治療劑，特別為 抗腫瘤劑的運(yùn)送或者載體化。
19.根據(jù)權(quán)利要求11、12、15、16或17任一項(xiàng)的納米顆粒的用途，用于治療劑，特別為抗 腫瘤劑的細(xì)胞內(nèi)遞送。
20.根據(jù)權(quán)利要求11、12、15、16或17任一項(xiàng)的納米顆粒的用途，用于制備抗腫瘤藥物。
21.根據(jù)權(quán)利要求11、12、15、16或17任一項(xiàng)的納米顆粒，其用于治療腫瘤疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及任選地在至少一種共類脂存在下，制備基于功能兩親分子或者大分子的納米顆粒的方法，其可以包封治療劑，特別為抗腫瘤劑，和其用于治療劑，特別地抗腫瘤劑的運(yùn)送或者載體化的用途。
文檔編號(hào)C07H19/06GK101932310SQ200880126008
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2008年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者B·喬弗特, F·布耶, M·坎普洛, N·坎平斯, P·巴塞萊邁 申請(qǐng)人:維克托謝閣蘭波爾多第二大學(xué);勃艮第大學(xué);地中海大學(xué)