專利名稱：一種由普魯蘭糖制備高純度麥芽三糖的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種麥芽三糖的制備方法，尤其是涉及一種由普魯蘭糖(puUulan)制備 高純度麥芽三糖的方法。
背景技術：
麥芽三糖是一種非常有價值的低聚糖，由三個葡萄糖單元經(jīng)a-l， 4-糖苷鍵連接而成, 其分子量為504.44。 a-淀粉酶的測定在臨床上應用已有多年，自70年代后期國外開始研制 以人工合成底物測定淀粉酶的方法，近年來此類研究發(fā)展較快，并取得很大進展，在臨床 上已廣泛應用，其中以對硝基苯酚麥芽寡糖苷(PNP"Gn)和2-氯4-硝基苯酚麥芽糖苷(CNP 一Gn)為主要發(fā)展趨勢，尤其以麥芽三糖連接的底物，因其不用輔助酶、價格低廉、精確 度高，而得到廣泛的認可和應用。對診斷急性胰腺疾病來說，測定人血清中的胰淀粉酶(一 種a-淀粉酶)活性是最實用和最靈敏的方法。最新的研究結果表明，由2-氯4-硝基苯酚
與麥芽三糖組成的底物最適于急性胰腺疾病的診斷。
但目前麥芽三糖的生產(chǎn)方法有(1)以小麥淀粉為原料通過酶解的方式獲得含麥芽三 糖70%左右的優(yōu)質(zhì)糖漿，其純度較低，分離提取困難，不能作為診斷試劑使用；(2)發(fā)酵 法，通過發(fā)酵方式獲得試劑級高純度的麥芽三糖，同樣存在純度較低提取困難的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種由普魯蘭多糖為原料，采用普魯蘭酶酶解，然后經(jīng)分離純化制得醫(yī)藥 級麥芽三糖的生產(chǎn)方法。本發(fā)明所述工藝路線生產(chǎn)麥芽三糖，產(chǎn)品純度高，得率高，成本 低，生產(chǎn)過程可實現(xiàn)連續(xù)化和自動化，由普魯蘭糖可大量制備醫(yī)藥級的麥芽三糖，簡化了 麥芽三糖制備工藝。
普魯蘭多糖是一種由出芽短梗霉產(chǎn)生的胞外水溶性粘質(zhì)多糖，該多糖是由a -1， 4-糖 苷鍵連接的麥芽三糖重復單位經(jīng)a -1， 6-糖苷鍵聚合而成的直鏈狀高分子多糖。
3本發(fā)明的技術方案是(1)采用普魯蘭酶，對普魯蘭多糖進行酶解；(2)采用超濾 膜去除反應液中的大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)；(3)采用納濾膜去除反應液中的小分子鹽類物 質(zhì)及濃縮反應液，(4)采用色譜柱分離并獲得高純度的麥芽三糖溶液，真空千燥得成品
麥芽三糖。
本發(fā)明一種由普魯蘭多糖制備高純度麥芽三糖的方法，包括以下步驟
(1) 將普魯蘭多糖溶解于pH5.7的0.2M的磷酸緩沖液，配置成8% (質(zhì)量百分濃度) 的普魯蘭多糖溶液,按照每lkg普魯蘭多糖溶液加入2.5g普魯蘭酶的比例加入普魯蘭酶， 保持溫度在45 48'C，反應時間為8小時；
(2) 反應結束后，采用超濾膜分離器除去反應液中的大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)，、所述超 濾過程是將反應液從反應罐泵入第一儲罐中，由第一儲罐泵入膜分離器中，膜的截留分子 量為3000-10000D (道爾頓)，截留液返回第一儲罐中，透出液流入第二儲罐，此過程連續(xù) 向第一儲罐中補充去離子水，直至截留液中麥芽三糖殘留量達標。
(3) 采用納濾膜法去除步驟(2)中透出液中的小分子鹽類物質(zhì)，所述膜濾過程是將 步驟(2)中第二儲罐內(nèi)的透出液泵入納濾膜分離器中，膜的截留分子量為180D，截留液 返回第二儲罐中，此過程連續(xù)向第二儲罐中補充去離子水，直至溶液的電導率小于 200ns/cm，停止補加去離子水，繼續(xù)進行膜濾操作，直至濃縮液體積達到步驟(1)中反應 液體積的二十分之一；
(4) 將濃縮液通過色譜柱，收集獲得高純度麥芽三糖組分，直接真空冷凍干燥，粉 碎機粉碎，得到麥芽三糖成品，本發(fā)明釆用的色譜柱為工業(yè)用葡聚糖凝膠G25柱，洗脫液 為去離子水。
本發(fā)明采用的超濾膜分離器可以是商用的板式超濾膜或者巻式超濾膜。膜的孔徑以能 透過麥芽三糖和通透量為參考，但是必須截留蛋白質(zhì)分子，通常為3000-10000道爾頓。
本發(fā)明采用的納濾膜分離器可以是商用的板式納濾膜或者巻式納濾膜。膜的孔徑以能 透過水分子及小分子鹽類物質(zhì)和通透量為參考，但是必須截留麥芽三糖分子，通常為180
道爾頓。本發(fā)明的效果是采用本發(fā)明所述工藝路線生產(chǎn)麥芽三糖，產(chǎn)品純度高(大于99%)，
得率高(》85%),成本低，生產(chǎn)過程可實現(xiàn)連續(xù)化和自動化，由普魯蘭多糖可大量制備醫(yī) 藥級的麥芽三糖，簡化了麥芽三糖制備工藝，對于急性胰腺疾病快速診斷試劑的生產(chǎn)以及 具有藥用前景的糖類化合物的開發(fā)都具有重要意義。 '


本發(fā)明附圖為本發(fā)明制備方法的工藝流程圖。
具體實施例方式
本發(fā)明一種由普魯蘭多糖制備高純度麥芽三糖的方法的實現(xiàn)過程如下-實施例l:
(1) 將普魯蘭多糖8kg溶解于92kg0.2MpH5.7的磷酸緩沖液中(溶解及反應在同一 罐體中進行，罐體積為150L，帶攪拌)，配制成質(zhì)量百分濃度為8%普魯蘭多糖溶液，然后 加入250g普魯蘭酶，保持溫度在45 48'C度之間，不斷輕輕攪拌，反應時間為8小時；
(2) 反應結束后，將反應液泵入第一儲罐中，由第一儲罐泵入超濾膜分離器中，膜 的截留分子量為5000D，截留液返回罐中，麥芽三糖及小分子鹽類物質(zhì)等和水透過膜，將 透出液收集于第二儲罐中，在此過程中連續(xù)向第一儲罐中補加去離子水，去離子水的補加 量為透出液體積的50%，當截留液中麥芽三糖殘留量達標時，停止膜濾操作；
(3) 將第二儲罐中透出液泵入納濾膜分離器中，采用納濾膜分離器對所得透出液進 行脫鹽和濃縮，所述膜濾過程是將除去蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的透出液從儲罐泵入膜分離器 中，膜的截留分子量為180D，截留液返回第二儲罐中，小分子鹽類物質(zhì)及其他小分子物質(zhì) 和水透過膜，在此過程中連續(xù)向第二儲罐補充去離子水，去離子水的補加量為透過液體積 的50%,當溶液的電導率小于200ns/cm時，停止補加去離子水，繼續(xù)進行膜濾操作，直到 截留液體積濃縮至步驟(1)中反應液體積的二十分之一；
(4)將濃縮液通過色譜柱分離純化出高純度麥芽三糖，直接真空冷凍干燥，粉碎機 粉碎，得到6.7kg麥芽三糖成品(純度為99.9%)，采用的色譜柱為葡聚糖凝膠G25柱，洗脫 液為去離子水。實施例2:
(1) 將普魯蘭多糖6.4kg溶解于73.6kg0.2MpH5.7的磷酸緩沖液中(溶解及反應在同 一罐體中進行，罐體積為150L，帶攪拌)，配制成質(zhì)量百分濃度為8%普魯蘭多糖溶液，然 后加入200g普魯蘭酶，保持溫度在45 48'C度之間，不斷輕輕攪拌，反應時間為8小時；
(2) 反應結束后，將反應液泵入第一儲罐中，由第一儲罐泵入超濾膜分離器中，膜 的截留分子量為7000D，截留液返回罐中，麥芽三糖及小分子鹽類物質(zhì)等和水透過膜，將 透出液收集于第二儲罐中，在此過程中連續(xù)向第一儲罐中補加去離子水，去離子水的補加 量為透出液體積的50%，當截留液中麥芽三糖殘留量達標時，停止膜濾操作；
(3) 將第二儲罐中透出液泵入納濾膜分離器中，采用納濾膜分離器對所得透出液進 行脫鹽和濃縮，所述膜濾過程是將除去蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的透出液從儲罐泵入膜分離器 中，膜的截留分子量為180D,截留液返回第二儲罐中，小分子鹽類物質(zhì)及其他小分子物質(zhì) 和水透過膜，在此過程中連續(xù)向第二儲罐補充去離子水，去離子水的補加量為透過液體積 的50%，當溶液的電導率小于200ps/cm時，停止補加去離子水，繼續(xù)進行膜濾操作，直到 截留液體積濃縮至步驟(1)中反應液體積的二十分之一；
(4)將濃縮液通過色譜柱分離純化獲得高純度麥芽三糖溶液，直接真空冷凍干燥， 粉碎機粉碎，得到5.6kg麥芽三糖成品(純度為99.5%)，采用的色譜柱為葡聚糖凝膠G25柱， 洗脫液為去離子水。
權利要求
1、一種由普魯蘭糖制備高純度麥芽三糖的方法，包括如下步驟(1)將普魯蘭糖溶解于pH5.7的0.2M的磷酸緩沖液，配置成質(zhì)量百分濃度8％的普魯蘭糖溶液，按照每1kg普魯蘭糖溶液加入2.5g普魯蘭酶的比例加入普魯蘭酶，保持溫度在45～48℃，反應時間為8小時；(2)反應結束后，采用超濾膜分離器除去反應液中的大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)，所述超濾過程是將反應液從反應罐泵入第一儲罐中，由第一儲罐泵入膜分離器中，膜的截留分子量為3000-10000D，截留液返回第一儲罐中，透出液流入第二儲罐，此過程連續(xù)向第一儲罐中補充去離子水，直至截留液中麥芽三糖殘留量達標；(3)采用納濾膜法去除步驟(2)中透出液中的小分子鹽類物質(zhì)，所述膜濾過程是將步驟(2)中第二儲罐內(nèi)的透出液泵入納濾膜分離器中，膜的截留分子量為180D，截留液返回第二儲罐中，此過程連續(xù)向第二儲罐中補充去離子水，直至溶液的電導率小于200μs/cm，然后停止補加去離子水，繼續(xù)進行膜濾操作，直至濃縮液體積達到步驟(1)中反應液體積的二十分之一；(4)將濃縮液通過色譜柱，收集獲得高純度麥芽三糖組分，直接真空冷凍干燥，粉碎機粉碎，得到麥芽三糖成品，所述色譜柱為葡聚糖凝膠G25柱，洗脫液為去離子水。
2、 根據(jù)權利要求1所述的一種由普魯蘭糖制備高純度麥芽三糖的方法，其特征是，所述的超濾膜分離器為是商用的板式超濾膜或者巻式超濾膜。
3、 根據(jù)權利要求l所述的一種由普魯蘭糖制備高純度麥芽三糖的方法，其特征是，所述 納濾膜分離器是商用的板式納濾膜或者巻式納濾膜。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種普魯蘭糖制備麥芽三糖的方法，其技術方案在于(1)采用普魯蘭酶對普魯蘭糖進行酶解；(2)采用超濾膜去除反應液中的大分子蛋白質(zhì)類物質(zhì)；(3)采用納濾膜去除反應液中的小分子鹽類物質(zhì)及濃縮反應液，(4)采用色譜柱分離，收集麥芽三糖純品，真空干燥得成品麥芽三糖。本發(fā)明采用酶法生產(chǎn)麥芽三糖，產(chǎn)物純度可達99％以上，成本低，生產(chǎn)過程可實現(xiàn)連續(xù)化和自動化，可大量制備醫(yī)藥級的麥芽三糖，對于急性胰腺疾病快速診斷試劑的生產(chǎn)以及具有藥用前景的糖類化合物的開發(fā)都具有重要意義。
文檔編號C07H1/06GK101555507SQ200910015419
公開日2009年10月14日 申請日期2009年5月18日 優(yōu)先權日2009年5月18日
發(fā)明者蘭文忠, 吉武科, 張彥昊, 王金忠, 理 蘇, 董學前, 藺春蘭, 趙雙枝, 魏連圣 申請人:理 蘇