專利名稱：：鹵代呋喃酮化合物及其在制備抗感染藥物上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及有機(jī)化合物在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用，具體涉及一種鹵代呋喃酮化合物及其在制備抗感染藥物上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：1961年人們首次發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MethicillinResistantSto;/^/ococcwm^e叫MRSA)，此后MRSA感染日益增多，并且對(duì)大多數(shù)抗生素耐藥，給臨床治療帶來極大困難。許多常用抗生素抗菌效能日漸減低，細(xì)菌耐藥已經(jīng)成為感染性疾病治療的難題。細(xì)菌生物膜是一個(gè)具有結(jié)構(gòu)性、協(xié)調(diào)性和和功能性的高度組織群體，其形成被發(fā)現(xiàn)為抗生素耐藥的一個(gè)重要因素。近代研究發(fā)現(xiàn)與細(xì)菌生物膜有關(guān)的臨床感染日益增多，據(jù)報(bào)道80%的人類細(xì)菌感染與細(xì)菌生物膜有關(guān)，尤其是如糖尿病足潰瘍等慢性難愈合創(chuàng)面感染與細(xì)菌生物膜密切相關(guān)。因此細(xì)菌生物膜抑制劑的研究己成為醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、微生物學(xué)等眾多領(lǐng)域關(guān)注的課題。群體感應(yīng)(QuorumSensing,QS)信號(hào)分子在細(xì)菌生物膜形成中發(fā)揮了重要的作用，應(yīng)用群體感應(yīng)信號(hào)分子拮抗劑來抑制細(xì)菌致病因子表達(dá)可以達(dá)到治療的目的，被國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為是目前研究耐藥性問題很好的突破口。一些研究者通過合成出化合物干擾自體誘導(dǎo)分子信號(hào)可以干擾細(xì)菌的QS系統(tǒng)，使之對(duì)抗生物細(xì)菌生物膜的形成，降低細(xì)菌致病力的同時(shí)又不致使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。到現(xiàn)在為止，科學(xué)家通過從自然界發(fā)掘或人工合成的途徑，已得到多種群體感應(yīng)抑制劑(QuorumSensingInhibitors,QSIs)，如天然及人工合成的呋喃酮類化合物、吡咯酮類化合物和二酮呱嗪類化合物等?？茖W(xué)家在澳大利亞海域中發(fā)現(xiàn)一種海藻(Ddiseapiilchra)能阻止細(xì)菌定植在其表面，這種海藻能產(chǎn)生一系列化合物一鹵代呋喃酮，這種現(xiàn)象引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注，科學(xué)家們開始天然提取以及人工合成鹵代呋喃酮，如Manny等[MannyAJ，KjellebergS，KumarN，etal.Reinvestigationofthesulfuricacid-catalyzedcyclizationofbrominated2-alkyllevulinicacidsto3-alkyl-5-methylene-2(5//)-fUranones.T^ra/ze&o",1997,53(46):15813-15826]合成的呋喃酮可以阻斷?；呓z氨酸內(nèi)酯(AcylhomoserineLactone,AHLs)分子與受體蛋白結(jié)合，己取得明顯的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；Hentzer等[HentzerM,WuH,AndersenJB，etal.Attenuationof尸sew(iomo"ayaen<§7'"asavirulencebyquorumsensinginhibitors.五jWB(9J,2003,22(15):3803-3815]利用一種新的呋喃酮衍生物作為戶^n^"w"的QS信號(hào)拮抗劑，經(jīng)該呋喃酮衍生物處理的Paerwg!Vwsa，對(duì)其他的抗生素敏感，沒被處理的/3^n^/"om，使用托普霉素治療，只有生物膜表面細(xì)胞被殺死；Daniels等[DanielsR,VanderleydenJ,MichielsJ.Quorumsensingandswarmingmigrationinbacteria.FEMSMicrobiolRev,2004,28(3):261-289]在不同的革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌中，發(fā)現(xiàn)一些鹵代呋喃酮化合物能抑制AI-2(自體誘導(dǎo)分子Autoinducer-2)分子介導(dǎo)的QS信號(hào)系統(tǒng)；Grossmann等[GrossmannG,PoncioniM,BornandM,etal.BioactivebutenolidesfromStreptomycesantibioticusT99:absoluteconfigurationsandsynthesisofanalogs.7^ra/ze<ira",2003,59(18):3237-325l]以一種基本的呋喃酮為起始原料與各種脂肪醛進(jìn)行反應(yīng)，合成得到了一系列呋喃酮衍生物，并通過定量生物活性測(cè)試的方法，觀察它們?cè)贑7zramo6acten'wwWo/acewwCV026生成紫色桿菌素產(chǎn)物過程中對(duì)QS效應(yīng)的影響作用，發(fā)現(xiàn)其中部分呋喃酮化合物有著較好的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一系列新的人工合成的鹵代呋喃酮化合物，這些化合物均具有良好的抑制細(xì)菌群體感應(yīng)的效果。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述鹵代呋喃酮化合物作為細(xì)菌生物膜抑制劑在制備抗感染藥物上的應(yīng)用本發(fā)明的上述目的是通過如下方案予以實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的鹵代呋喃酮化合物，是以不同的原料人工合成而得，其結(jié)構(gòu)式如式(I)~式(週)所示其中，R=Me(甲基)、Et(乙基)或iPr(異丙基)。上述鹵代呋喃酮化合物都是根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法合成得到，其各自的化學(xué)合成原料以及中間產(chǎn)物如下所示(1)式(I)所示鹵代呋喃酮化合物是以糠醛為原料，其合成路線為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)式(II)所示鹵代呋喃酮化合物是以上述式(I)合成過程中的中間產(chǎn)物(IX)為原料，其合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(5)(3)式(III)所示鹵代呋喃酮化合物是以粘氯酸為原料，其合成路線為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(III)(4)式(IV)所示鹵代呋喃酮化合物是以溴代乙酰乙酸乙酯為原料，其合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(5)式(V)所示鹵代吡咯酮是鹵代呋喃酮的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，以已知鹵代呋喃酮化合物(Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5^)-呋喃酮為原料，其合成路線為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(6)式(VI)所示鹵代呋喃酮化合物是先以粘氯酸為原料合成中間產(chǎn)物(XI)，再合成而得，其合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(7)式(vn)和式(wi)所示鹵代呋喃酮化合物也是由上述中間產(chǎn)物(xi)合成而得，其合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>上述各合成路線中，con,H2S04為濃硫酸，NaBH4為硼氫化鈉，MeOH為甲醇，AcOH為乙酸，AcOK為醋酸鉀，DMF為二甲基甲酰胺，Et3N為三乙胺，上述這些化學(xué)物質(zhì)的縮寫均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所共知的。本發(fā)明人對(duì)上述化學(xué)合成所得的式(I)~式(WI)所示鹵代呋喃酮化合物進(jìn)行最低抑菌濃度測(cè)試(MIC)和細(xì)菌生物膜的定量比色分析等研究，檢測(cè)這些化合物的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些化合物均可以通過競(jìng)爭(zhēng)性作用與受體蛋白拮抗AHLS分子，從而達(dá)到良好的抑制細(xì)菌生物膜形成的效果。此外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)上述化學(xué)合成步驟中的一些中間產(chǎn)物也具有良好的抑制細(xì)菌群體感應(yīng)的效果，如式(ix)~式(xn)所示化合物。上述式(do~式(xn)所示化合物通過其結(jié)構(gòu)式可以看出，它們也屬于鹵代呋喃酮化合物，式(ix)~式(xn)所示化合物的結(jié)構(gòu)己經(jīng)公開，但是現(xiàn)有技術(shù)中并未發(fā)現(xiàn)這些化合物也具有抑制細(xì)菌群體感應(yīng)的效果。本發(fā)明的鹵代呋喃酮化合物及其衍生物因其可有效抑制細(xì)菌生物膜的形成，克服細(xì)菌抗生素耐藥的問題，因此可作為細(xì)菌生物膜形成抑制劑，可用于制備新型抗感染藥物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果1.本發(fā)明通過常規(guī)的簡(jiǎn)單的化學(xué)合成方法，設(shè)計(jì)并合成得到了一系列的鹵代呋喃酮化合物，通過對(duì)這些化合物進(jìn)行活性分析研究發(fā)現(xiàn)，這些化合物可通過競(jìng)爭(zhēng)性作用與受體蛋白拮抗AHLs分子，從而達(dá)到良好的抑制細(xì)菌生物膜形成的效果；2.本發(fā)明不但合成得到一系列新的對(duì)細(xì)菌生物膜形成具有抑制作用的鹵代呋喃酮化合物，而且對(duì)這些化合物合成過程中的中間產(chǎn)物也進(jìn)行了活性分析，從而發(fā)現(xiàn)作為中間產(chǎn)物的部分鹵代呋喃酮化合物也同樣具有良好的抑制細(xì)菌生物膜形成的效果；3.本發(fā)明的鹵代呋喃酮化合物及其中間產(chǎn)物可用作細(xì)菌生物膜抑制劑，其制造工藝簡(jiǎn)單，不需要大型儀器和昂貴的原料，可單獨(dú)用藥、或聯(lián)合抗生素用藥來克服臨床上抗生素耐藥的難題，具有廣闊的應(yīng)用前景。圖1為式(I)~式(VID所示鹵代呋喃酮化合物的結(jié)構(gòu)式示意圖；其中，R=Me、Et或iPr;圖2為化合物118的生物膜比色分析的吸光度柱形圖。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地描述，但具體實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何限定。實(shí)施例1式(I)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖1中式(I)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)中間產(chǎn)物一式(IX)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將9.6g新蒸糠醛和110mL水，冰浴冷卻下加入86g溴，升溫回流0.5h，減壓濃縮得淡黃色固體；將該淡黃色固體經(jīng)活性碳脫色重結(jié)晶得粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱色譜(V乙酸乙酯V石油醚二l:6)得白色固體16.79g，即為式(IX)所示化合物，中文名稱為5-羥基-3，4-二溴-2(5/^)-呋喃酮，其產(chǎn)率為65.1%。!HNMR(300MHz,CDC13)56.07(s，1H),4.43(s，1H);MS(ESI):m/z257(M+H)+。為了方便后續(xù)的活性檢測(cè)，這里對(duì)后面需要用到的化合物進(jìn)行編號(hào)，此處式(IX)所示化合物編號(hào)為化合物3，下面實(shí)施例所制備的鹵代呋喃酮化合物也同樣進(jìn)行編號(hào)。(2)中間產(chǎn)物一式(X)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將5.14g上述式(IX)所示化合物溶解于30mL甲醇中，冰浴冷卻至0。C，加入1.14gNaBH4，0。C反應(yīng)15min，然后加入1.96g濃H2S04，繼續(xù)反應(yīng)lh后，再加入50mL水和50mL二氯甲烷，分離水相和有機(jī)相；水相用二氯甲烷(20mLx3)萃取，合并有機(jī)相，減壓濃縮得到粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱色譜(V乙酸乙酯V石油醚二h8)得白色固體3.01g，產(chǎn)率為62.3%，該白色固體即為式(X)所示鹵代呋喃酮化合物，中文名稱為3,4-二溴-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物4。NMR(300MHz,CDC13)S4.86(s，2H);MS(ESI):m/z241(M+H)+。(3)終產(chǎn)物一式(I)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.484g上述式(X)所示化合物和0.13g正丙醛溶解于7mL甲醇中，攪拌下緩慢滴加0.145mL三乙胺，室溫反應(yīng)3h，停止反應(yīng)，減壓濃縮，向殘留物加入乙酸乙酯15mL與2mol/LHC1溶液，分出有機(jī)相，用2mol/LHC1溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮，得粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱色譜(1:10)純化得白色固體0.19g，產(chǎn)率為32.0%，該白色固體即為圖1中式(I)所示鹵代呋喃酮化合物，中文名稱為3,4-二溴-5-(1-羥基丙基)-2(5用-呋喃酮，編號(hào)為化合物5。iHNMR(400MHz,CDC13)M.07(t,/=8Hz,3H),1.23(m，2H),3.97(m,1H),4.90(d,/=1.2Hz,1H),13CNMR(75MHz)S166.6,146.3,114.8，86.4,70.9,27.0,10.1，MS(ESI):Wz321.3(M+Na)+。實(shí)施例2式(n)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖i中式(n)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)中間產(chǎn)物一式(IX)所示化合物的合成式(IX)所示化合物的合成步驟同實(shí)施例1。(2)當(dāng)R^Me時(shí)，終產(chǎn)物3，4-二溴-5-甲氧基-2(5/f)-呋喃酮的合成將6.45g上述式(IX)所示化合物溶解于llmL甲醇中，加入lmL濃硫酸，回流反應(yīng)5h;冷至室溫，加入60mL水猝滅反應(yīng)，用苯(60mLx3)萃取；然后用120mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮得到無色液體，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(V乙酸乙酷V石油醚二h5)純化得到白色固體4.98g，產(chǎn)率73.2%，該白色固體即為3,4-二溴-5-甲氧基-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物6。1HNMR(400固z,CDC13)S6.19(s,1H),3.47(s,3H);MS(ESI):m/z271(M+H)+。(3)當(dāng)R:Et時(shí)，終產(chǎn)物3,4-二溴-5-乙氧基-2(5^)-呋喃酮的合成將6.45g上述式(IX)所示化合物溶解于13mL乙醇中，加入1mL濃硫酸，回流5h;后續(xù)處理同R二Me時(shí)的操作，最后得到白色固體4.84g，產(chǎn)率為67.8%，所得白色固體即為3，4-二溴-5-乙氧基-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物!HNMR(400MHz,CDCl3)51.32(t，J=8.0Hz,3H)，3.82(m，2H)，5.85(s,1H);MS(ESI):m/z285.0(M+H)+。(3)當(dāng)R—Pr時(shí)，終產(chǎn)物3,4-二溴-5-異丙氧基-2(5/7)-呋喃酮的合成將6.45g上述式(IX)所示化合物溶解于18mL異丙醇中，加入1mL濃硫酸，回流5h;后續(xù)處理同R-Me時(shí)的操作，最后得到白色固體4.62g，產(chǎn)率為61.6%，所得白色固體即為3,4-二溴-5-異丙氧基-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物8。&NMR(400MHz,CDC13)S1.34(m,6H),4.13(m,1H),5.84(s,lH),MS(ESI):m/z320.9(M+Na)+。實(shí)施例3式(m)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖i中式(in)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)當(dāng)R^Me時(shí)，3,4-二氯-5-甲氧基-2(5用-呋喃酮的合成將4.23g粘氯酸溶解于llmL甲醇中，加入lmL濃硫酸，回流反應(yīng)5h;后續(xù)處理同實(shí)施例2中當(dāng)R=Me時(shí)的操作，最后得無色液體2.36g，產(chǎn)率為51.6%,該無色液體即為3,4-二氯-5-甲氧基-2(5/7)-呋喃酮，編號(hào)為化合物9。&NMR(300固z,CDC13)S3.60(s，3H),5.78(s,1H);MS(ESI):m/z183(M+H)+，205.1(M+Na)+。(2)當(dāng)R:Et時(shí)，3,4-二氯-5-乙氧基-2(577)-呋喃酮的合成將4.23g粘氯酸溶解于13mL乙醇中，加入lmL濃硫酸，回流5h;后續(xù)處理同實(shí)施例2中當(dāng)R=Me時(shí)的操作，最后得無色液體2.50g，產(chǎn)率為50.8%，該無色液體即為3,4-二氯-5-乙氧基-2(5^)-呋喃酮，編號(hào)為化合物10。^NMR(400固z,CDCl3)S1.26(t，《/=7.1Hz,3H)，3.82(q，J=7.1,2H)，5.85(s,1H);MS(ESI):m/z219.1(M+Na)+。(3)當(dāng)R—Pr時(shí)，3,4-二氯-5-異丙氧基-2(5//)-呋喃酮的合成將4.23g粘氯酸溶解于18mL異丙醇中，加入1mL濃硫酸，回流5h;后續(xù)處理同實(shí)施例2中當(dāng)R=Me時(shí)的操作，最后得無色液體2.62g，產(chǎn)率為49.6%，該無色液體即為3,4-二氯-5-異丙氧基-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物11。NMR(400MHz,CDC13)51.21(m,6H),4.07(m，1H),5.83(s,1H),MS(ESI):m/z211(M+H)+。實(shí)施例4式(IV)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖1中式(IV)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)中間產(chǎn)物一式(xn)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.9g醋酸鉀、3mL乙酸和1.9g溴代乙酰乙酸乙酯，在80。C反應(yīng)5h，冷卻后過濾，向?yàn)V液中加入40mL10%(V/V)HC1，15'C繼續(xù)攪拌反應(yīng)41h;混合液減壓濃縮，殘留物用苯(10mLx3)洗滌；然后用10mL乙酸乙酯洗滌，最后用乙醇萃取，減壓濃縮得粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(V^^:V石油醚=1:5)得白色固體0.289g，產(chǎn)率為32.1%，該白色固體即為式(Xn)所示鹵代呋喃酮化合物，中文名稱為4-羥基-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物12。MS(ESI):m/z101(M+H)+。！HNMR(400MHz,CDC13)S4.82(d,7=1.5Hz，2H),6.32(s,1H)。(2)終產(chǎn)物一式(IV)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.45g上述式(Xn)所示化合物懸浮于10mL二氯甲垸與0.45mLDMF的混合液中，冷卻至0"C加入0.5mL草酰氯，溶液呈綠色，0"C下反應(yīng)1h，升至室溫反應(yīng)2h;加入12mL水猝滅反應(yīng)，分離收集有機(jī)相。并用乙醚(3xl0mL)萃取水相，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾、減壓濃縮得粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(V乙酸乙酯V石油醚二h6)得到白色粉末0.242g，產(chǎn)率為42.5%，該白色固體即為式(1￥)所示鹵代呋喃酮化合物，中文名稱為4-氯-2(5印-呋喃酮，編號(hào)為化合物13。GS-MS(%):118.1(49%)，89.1(100%)0NMR(400MHz,DMSO-d6)S4.82(d,J=1.5Hz,2H),6.32(s,1H)。實(shí)施例5式(V)所示鹵代吡咯酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖1中式(V)所示鹵代吡咯酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟將1.0g(Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5/Z)-呋喃酮與1.5g乙酸銨溶解于20mL冰乙酸中，攪拌回流20h，冷卻到20。C，加入8mL乙酸乙酯，分離出有機(jī)相，水相用乙酸乙酯(8mLx3)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾、減壓濃縮后經(jīng)硅膠柱色譜(V乙酸乙酷V石油魅二l:8)分離得白色固體0.343g，產(chǎn)率為34.5%，該白色固體即為式(V)所示鹵代吡咯酮化合物，中文名稱為(Z)-4-溴-5-(溴亞甲基)-2(5印-吡咯酮，編號(hào)為化合物14。&NMR(300固z，CDC13)S6.26(s，1H)，6.46(s，1H)，7.39(s,1H);13CNMR(75MHz)594.4,121.5,135.2，150.6，165.7;MS(ESI):附/z252(M+H)+,274.2(M+Na)+。實(shí)施例6式(VI)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖1中式(VI)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)中間產(chǎn)物一式(XI)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將6.0g粘氯酸溶解于60mL甲醇中，冰浴下加入2.1gNaBH4，反應(yīng)15min后，滴加溶解于30mL甲醇的濃H2S044.2g，保持低溫反應(yīng)15min，然后加入60mL二氯甲垸和120mL水，分離出有機(jī)相，水相用二氯甲垸(60mLx3)萃取，合并有機(jī)相，將有機(jī)相飽和食鹽水洗滌、無水硫酸鈉干燥、減壓濃縮后得到粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(V'酸乙酷Vs=l:8)得白色固體3.16g，產(chǎn)率是58.3%，該白色固體即為中文名稱為3,4-二氯-2(5^)-呋喃酮，編號(hào)為化合物15。iHNMR(300MHz,CDC13)54.94(s，2H);MS(ESI):m/z153(M+H)+。(2)終產(chǎn)物一式(VI)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.306g上述式(XI)所示化合物和0.13g正丙醛溶解于7mL甲醇中，室溫?cái)嚢柘录尤?.145mL三乙胺，反應(yīng)3h后，減壓濃縮，殘留物加入乙酸乙酯15mL與2mol/LHCl溶液，分離出有機(jī)相，用2mol/LHC1溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮后經(jīng)硅膠柱色譜(Vws:V5=l:10)，得到無色液體0.19g，產(chǎn)率為46.1%，該無色液體即為式(VI)所示化合物，中文名稱為3,4-二氯-5-(1-羥基丙基)-2(5//)-呋喃酮，編號(hào)為化合物16。^NMR(400固z，CDCl3)51.06(t,/=7.6Hz,3H),1.62(m,2H),3.99(m,1H):5.04(d,/=4Hz,1H);13CNMR(75MHz)5165.1,149.6,122.2,84.5,70.6,27.0，10.1;MS(ESI):m/z209.4(M+H)+。實(shí)施例7式(w)和式(vin)所示鹵代呋喃酮化合物的合成本實(shí)施例合成圖1中式(W)和式(VEI)所示鹵代呋喃酮化合物，其合成方法采用本領(lǐng)域常規(guī)的化學(xué)合成方法，具體包括如下步驟(1)中間產(chǎn)物一式(XI)所示鹵代呋喃酮化合物的合成式(XI)所示化合物的合成同實(shí)施例6。(2)終產(chǎn)物一式(vn)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.306g上述式(XI)所示化合物和0.286g對(duì)羥基苯甲醛溶解于7mL甲醇中，室溫?cái)嚢柘录尤?.145mL三乙胺；后續(xù)處理同實(shí)施例6中式(VI)所示化合物合成的操作，最后得到白色固體0.186g，產(chǎn)率為36.2%，該白色固體即為式(Vn)所示化合物，中文名稱為(Z)3,4-二氯-5-(4-羥基芐叉基)-2(5H)-呋喃酮，編號(hào)為化合物17。1HNMR(400固z，DMS0-d6)510.2(s,1H),7.71(d，J=8Hz,2H),6.88(d,J=8Hz,2H),6.61(s,1H);13CNMR(75固z)5159.6,140.7,133.07,132.4,122.8,116.7,116.1,115.1,112.9;MS(ESI):w/z255.2(M畫H)+。(3)終產(chǎn)物一式(Vffl)所示鹵代呋喃酮化合物的合成將0.306g上述式(XI)所示化合物和0.286g對(duì)羥基苯甲醛溶解于7mL甲醇中，室溫?cái)嚢柘录尤?.145mL三乙胺；后續(xù)處理同實(shí)施例6中式(VI)所示化合物合成的操作，最后得到白色固體0.183g，產(chǎn)率為35.2%，該白色固體即為式(，)所示化合物，中文名稱為(Z)3,4-二氯-5-(3-羥基芐叉基)-2(5/^呋喃酮，編號(hào)為化合物18。&NMR(400麗z,DMSO-^)S9.72(s,1H),7.30(m,1H)，7.27(m,1H)，7.23(m,1H),6.85(d,/=1.6Hz,1H),6.61(s，1H);13CNMR(75MHz)S161.8,157.6,142.8,142.0,132.6，129.9,122.2,118.7，117.4,116.7,112.1,MS(ESI):附/z255.2(M-H)+。實(shí)施例8式(I)~式(XE)所示鹵代呋喃酮化合物的抗菌活性鑒定本實(shí)施例采用已知具有群體感應(yīng)抑制劑活性的化合物1和化合物2作為陽性對(duì)照藥(Manefield,M.;Rasmussen,T.B.;Henzter,M.HalogenatedfUranonesinhibitquorumsensingthroughacceleratedLuxRturnover.M/cro6/o/ogvf7￡<3(i/"g，2002,1119-1127)，化合物1的結(jié)構(gòu)式如式(XIII)所示，化合物2的結(jié)構(gòu)式如式(XIV)所示。Br已rBr(XIII)(XIV)本實(shí)施例以化合物1和2為陽性對(duì)照，對(duì)化合物3~18進(jìn)行最低抑菌濃度測(cè)試(MIC)和細(xì)菌生物膜的定量比色分析的研究，從而分析化合物3~18的活性。一、供試菌液的制備取綠膿桿菌(市售)無菌操作接種于LB液體培養(yǎng)基(市售)中，37'C振培養(yǎng)16h，制備得到供試菌液。二、最低抑菌濃度(MinimumInhibitoryConcentration,MIC)測(cè)定實(shí)驗(yàn)本實(shí)施例的MIC采用本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)檢測(cè)方法——二倍稀釋法，其操作可參考相關(guān)教科書。對(duì)化合物118分別進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)取無菌試管13支，第1管加1.8mL營養(yǎng)肉湯，第213管各加lmL營養(yǎng)肉湯；以無菌操作吸取配制好的待測(cè)化合物0.2mL(待測(cè)化合物的溶液配制方法為MIC的常規(guī)操作)到第1管中，混勻后吸取lmL入第2管中，依次倍比稀釋至第12管，至第13管時(shí)吸取lmL棄去，使待試化合物的濃度依次是512pg/mL、256pg/mL、128pg/mL、64pg/mL、32pg/mL、16嗎/mL、8pg/mL、4嗎/mL、2|ig/mL、l嗎/mL和0.5jig/mL;同時(shí)設(shè)空白對(duì)照管(只含培養(yǎng)基)和細(xì)菌生長對(duì)照管(含菌液和培養(yǎng)基)；將上述供試菌液用比濁儀配制0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，然后l:10稀釋，將稀釋后的菌液分別吸取0.05mL加到各試管中，混勻，置于37。C培養(yǎng)20h，以肉眼觀察無細(xì)菌生長的試管的藥物最低濃度為該試驗(yàn)化合物的MIC，化合物118的MIC如表1所示。表1化合物1~18的MIC測(cè)定結(jié)果化合物MIC(pg/mL)化合物MIC(pg/mL)14101628111616122564161332161486161587321616816178981816三、生物膜形成的定量比色分析本實(shí)施例將化合物1~18作用于綠膿桿菌，并采用本領(lǐng)域常規(guī)的細(xì)菌生物膜比色法來檢測(cè)各化合物對(duì)綠膿桿菌生物膜形成的抑制活性。依照細(xì)菌粘附到微量聚氯乙烯96孔板的能力進(jìn)行分析。將100培養(yǎng)過夜的供試菌液(OD6Q。=0.05)，加入到96孔微量板的各孔中，分別加入待測(cè)試的化合物118，化合物118釆用的濃度為各化合物MIC的1/2，37'C培養(yǎng)24h后，用無菌雙蒸水洗滌2次，然后加入125|LiL1%結(jié)晶紫溶液，室溫放置15min后，用無菌雙蒸水洗滌3次，加入300pL95體積％乙醇溶解染色的生物膜，生物膜形成的程度通過測(cè)定溶液在630nm的吸光度進(jìn)行分析，平行測(cè)定三次。本實(shí)施例另外還設(shè)置空白組，空白組是不加測(cè)試藥物的對(duì)照試驗(yàn)組。本實(shí)施例通過比色法測(cè)定吸光度來檢驗(yàn)化合物對(duì)生物膜的影響，細(xì)菌生物膜主要成分由藻酸鹽組成，通過與結(jié)晶紫反應(yīng)染色，然后可檢測(cè)到吸光度，從而間接反應(yīng)生物膜的量。生物膜抑制率=(A空白一A樣品)/A空白X100X。表2是化合物118對(duì)綠膿桿菌生物膜形成的抑制活性。圖2是依據(jù)表2中化合物的生物膜比色分析的吸光度值所作的柱形圖，吸光度值越小表示生物膜形成越少。表2化合物對(duì)綠膿桿菌生物膜形成的抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>從表2和圖2可看出，給藥組陽性對(duì)照品化合物1和化合物2對(duì)抑制生物膜的形成具有明顯作用，而本發(fā)明的鹵代呋喃酮化合物對(duì)細(xì)菌生物膜抑制也有良好的效果，特別是化合物5、14、16、17和18，這五個(gè)化合物的生物膜抑制活性與對(duì)照品非常接近，說明這五個(gè)化合物對(duì)生物膜的形成具有比其它幾種化合物更加明顯的抑制作用，具有進(jìn)一步的研究開發(fā)前景。權(quán)利要求1、一種鹵代呋喃酮化合物，該化合物的結(jié)構(gòu)式如式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)所示其中，R為甲基、乙基或異丙基。2、權(quán)利要求1所述鹵代呋喃酮化合物在制備抗感染藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開一種鹵代呋喃酮化合物及其在制備抗感染藥物上的應(yīng)用，該鹵代呋喃酮化合物的結(jié)構(gòu)式如式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)所示。本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的鹵代呋喃酮化合物，具有良好的抑制細(xì)菌生物膜形成的效果，可用作細(xì)菌生物膜抑制劑，單獨(dú)用藥或聯(lián)合抗生素用藥來克服臨床上抗生素耐藥的難題，具有廣闊的應(yīng)用前景。文檔編號(hào)C07D207/44GK101503397SQ20091003805公開日2009年8月12日申請(qǐng)日期2009年3月23日優(yōu)先權(quán)日2009年3月23日發(fā)明者孫平華,宋秋玲,王玉真,超程,陳衛(wèi)民申請(qǐng)人:暨南大學(xué)