專利名稱：從神農(nóng)香菊中分離提取芹菜素、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種從天然植物中提取化學(xué)物質(zhì)的方法，具體涉及到從天然植物神農(nóng) 香菊分離得到芹菜素、刺槐素-7-0-3 -D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0-3 -D-葡萄糖苷的方法。
背景技術(shù)：
神農(nóng)香菊 Dendranthema indicum(L. )Des Monl. var aromaticum Q. H. Liuet S. F. Zhang.系菊科菊屬(Dendranthema)的一個(gè)新變種，為神農(nóng)架特有植物，產(chǎn)于湖北省神 農(nóng)架林區(qū)，分布于海拔1200米以上的向陽(yáng)開(kāi)闊的山坡、路旁、巖石縫、灌叢邊的空曠地中， 全株具有特殊的濃郁香氣，民間以其花、葉陰干作香囊。鄂西山區(qū)將神農(nóng)香菊用于防治感 冒、頭痛、菌痢、腸炎、便秘、冠心病和高血壓等疾病，神農(nóng)香菊還具有殺菌消炎、平肝明目、 散風(fēng)降壓的功效。它可用來(lái)提取精油或浸膏，用于醫(yī)藥、飲料、香煙及化妝品等方面。研究 表明神農(nóng)香菊疏風(fēng)、清熱、明目、解毒功效的主要活性成分為黃酮類化合物。但是目前關(guān)于 神農(nóng)香菊的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究較少，現(xiàn)有的對(duì)神農(nóng)香菊化學(xué)成分的相關(guān)報(bào)道中，尚未有關(guān) 于發(fā)現(xiàn)芹菜素、刺槐素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷的報(bào)道?，F(xiàn)有的 關(guān)于菊科植物化學(xué)成分芹菜素、刺槐素-7-0- 3 -D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0- 3 -D-葡萄糖苷 的分離，尤其神農(nóng)香菊化學(xué)成分的分離方法多采用反復(fù)硅膠洗脫之后，再采用其他類型的 昂貴的固定相且消耗大量有機(jī)試劑的柱色譜分離得到化合物，此方法對(duì)環(huán)境污染較大。如 楊彥松等對(duì)洋甘菊中黃酮類活性成分進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)確定的研究中是經(jīng)過(guò)聚酰胺反 復(fù)柱色譜進(jìn)行分離、純化得到芹菜素-7-0-0-D-葡萄糖苷的，其方法分離周期長(zhǎng)、消耗試 劑大、成本高且對(duì)環(huán)境污染大。顧瑤華等采用反復(fù)硅膠柱層析法從亳菊中分離得到芹菜素、 芹菜素-7-0-3 -D-葡萄糖苷，其方法分離周期長(zhǎng)、所得產(chǎn)品純度低、消耗試劑大、成本高且 對(duì)環(huán)境污染大。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種從神農(nóng)香菊中分 離提取芹菜素、刺槐素-7-0- 3 -D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0- 3 -D-葡萄糖苷的方法，它具有 分離效果好、時(shí)間短、得到產(chǎn)品純度高、消耗有機(jī)試劑少、對(duì)環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案是從神農(nóng)香菊中分離提取芹菜素、刺槐素-7-0-0 -D-葡萄糖 苷、芹菜素-7-0-3 -D-葡萄糖苷的方法按以下步驟依次進(jìn)行[1]制備浸膏(1)將神農(nóng)香菊干花，粉碎過(guò)20目篩；(2)將神農(nóng)香菊干花粉以70%乙醇浸泡12小時(shí)后，用70%乙醇滲漉提取，收集滲 漉液；(3)收集滲漉液至原藥材量的10倍，再采用水浴加熱或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將滲漉液進(jìn)行 濃縮，濃縮得神農(nóng)香菊浸膏；
[2]萃取在神農(nóng)香菊浸膏中加入蒸餾水，使神農(nóng)香菊浸膏在水中呈懸浮狀態(tài)，依次用石油 醚、氯仿、乙酸乙酯對(duì)神農(nóng)香菊浸膏進(jìn)行萃取，得到3個(gè)提取部位，保留乙酸乙酯提取部位；[3]分離提取(1)將上述的乙酸乙酯提取部位進(jìn)行常壓或減壓200-300目的硅膠層析柱進(jìn)行層 析，以石油醚-乙酸乙酯、氯仿_甲醇系統(tǒng)反復(fù)洗脫層析柱，以薄層析方法檢測(cè)流份，顯色后 收集流份；(2)將上述流份經(jīng)半制備高效液相色譜儀分離，分離后得到3種流份，將3種 流份分別進(jìn)行濃縮、干燥及重結(jié)晶，分別得到化合物刺槐素-7-0-3-D-葡萄糖苷、芹菜 素-7-0-0 -D-葡萄糖苷、芹菜素。本發(fā)明的方法采用硅膠柱層析之后直接采用半制備高效液相色譜儀分離得到以 上三化合物，本方法分離效果好、時(shí)間短、得到產(chǎn)品純度高、消耗有機(jī)試劑少、對(duì)環(huán)境污染
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的有關(guān)技術(shù)問(wèn)題作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。本方法與同類文獻(xiàn)報(bào)道最大的改進(jìn)之處就是采用硅膠柱層析之后直接采用半制 備高效液相色譜儀分離得到以上三化合物。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)單、分離效果好，時(shí)間短、得到 產(chǎn)品純度高、大大減少有機(jī)試劑的消耗，且環(huán)保?，F(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于采用常壓和減壓硅膠柱層 析及半制備高效液相色譜法從菊科植物中分離得到芹菜素、刺槐素-7-0-3 -D-葡萄糖苷、 芹菜素-7-0-3 -D-葡萄糖苷的報(bào)道未見(jiàn)。尤其沒(méi)有關(guān)于采用常壓和減壓硅膠柱層析及半 制備高效液相色譜法從神農(nóng)香菊植物中分離得到芹菜素、刺槐素-7-0-3 -D-葡萄糖苷、芹 菜素-7-0-0 -D-葡萄糖苷的報(bào)道。申請(qǐng)人:采用半制備高效液相色譜的條件為流動(dòng)相甲醇水(63 37)，流速 2. 5mL/min，柱溫25°C，進(jìn)樣量0. 5mL。申請(qǐng)人對(duì)所提取的3種化合物進(jìn)行了相關(guān)的鑒定， 對(duì)鑒定情況作如下簡(jiǎn)要說(shuō)明。(1)刺槐素-7-0-3 -D-葡萄糖苷淡黃色結(jié)晶，mp 260 262°C。鹽酸-鎂粉和Molish反應(yīng)為陽(yáng)性。酸水解檢出葡 萄糖。提示為黃酮苷類化合物；在鋯鹽-枸櫞酸顯色反應(yīng)中，加入二氯氧鋯(ZrOCl2)后顯 亮黃色，再加入枸櫞酸黃色消失，因此分子中含有C5-0H存在，但沒(méi)有游離的C3-0H存在。'H-NMR [600MHz, DMS0_d6] 12. 93 (1H, s，5_0H)，8. 08 (2H, d, J = 7. 8Hz, H_2' and 6' )，7. 15(2H，d，J = 7. 8Hz，H-3' and 5' )，6. 91 (1H，s，H_3)，6. 89 (1H，d，J = 2. 1Hz， H-8), 6. 49 (1H, d, J = 2. 1Hz, H_6)，5. 13 5. 49 (4H, m，糖上 OH)，5. 10 (1H, d, J = 7. 2Hz, H-葡萄糖端基質(zhì)子為 3-構(gòu)型)，3.27-3.90(5扎111，糖上11)，3.79(311，8，4' _0CH3)。13C-WR [600MHz，DMS0-d6] :182. 7 (C_4)，163. 7 (C_7)，164. 5 (C_2)，161. 8 (C_4')， 157. 6(C-9)，163. 1(C-5),128. 9(C_2 ' and 6 ' )，123. 0(C_l),115. 1(C_3 ' and 5 ')， 106. 6 (C-10)，100. 1 (C-6)，95. 5 (C_8)，55. 9 (C_0CH3)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)并對(duì)照文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定為刺槐素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷(acacetin-7 -0-^ -D-glucopyranoside) 其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
(2)芹菜素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷黃色粉末(MeOH)，mp 226 228 °C，鹽酸-鎂粉反應(yīng)和Molish反應(yīng)均為陽(yáng)性。 酸水解檢出葡萄糖，提示為黃酮苷類化合物；在鋯鹽-枸櫞酸顯色反應(yīng)中，加入二氯氧鋯 (ZrOCl2)后顯亮黃色，再加入枸櫞酸黃色消失，因此分子中含有C5-0H存在，但沒(méi)有游離的 C3-OH存在。'H-NMR[600MHz, DMS0_d6] 7. 78 (2H, d, J = 9. 0Hz, H_2' and 6' ) ,6. 83 (2H, d, J = 9.0Hz，H-3' and 5' ),6. 71 (1H, s, H_3)，6. 39 (1H，d, J = 1.8，H_8)，6. 39 (1H，d, J =1.8泡，11-6^環(huán)7位被糖基取代)，4.97(111，(1，=6. 6Hz，H-葡萄糖端基質(zhì)子為構(gòu) 型)，3. 39 3. 84(5H, m)。13C-NMR [600MHz，DMSO-dJ 184. 0 (C_4), 164. 8 (C_7), 166. 6 (C_2), 162. 8 (C_4')， 158. 9(C-9)，162. 9(C_5),129. 6(C_2 ‘，C_6 ' )，123. 1(C_l ' )，117. 2(C_3 '，C_5 ')， 107. 1(C-10)，104.5 (C-3)，101.2 (C-6)，96.2 (C-8)，78.6 (C-5 “ )，77.9(C_3 “)， 74. 8 (C-2" )，71.3(C-4〃)，62.5(C_6〃)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的芹菜素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷基本一致，故鑒定化合物為 芹菜素-7-0-0 -D-葡萄糖苷(apigenin-7-0-0 -D-glucopyranoside)。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 (3)芹菜素黃色粉末(MeOH)，mp 345 347°C，溶于甲醇、乙醇、稀堿溶液。鹽酸-鎂粉反應(yīng) 為陽(yáng)性。Molish反應(yīng)為陰性，提示可能為黃酮苷元。EI-MS m/z :270，242，152，128，121，118。iH-WR^OOMHzJMSO-cQ S :7. 71(2H，d，J = 7. 8，H-2' and H-6' )，6.83(2H，d， J = 7. 8Hz, H-3' and H_5' ) ,6. 42 (1H, s, H_3)，6. 31 (1H，d, J = 1. 8Hz，H_8)，6. 10 (1H, d, J = 1. 8Hz, H-6)。13CNMR(600MHz, DMS0_d6) 8 181. 6 (C_4)，165. 9 (C-2)，163. 6 (C_7)， 161. 2(C-4 ' )，161. 4 (C-9)，157. 6 (C-5)，128. 5 (C-2 ' and 6 ' )，121.3(C_1 ')， 116. 1 (C-3' and 5' )，103. 2 (C-3)，102. 8 (C-10)，99. 3 (C-6)，94. 3 (C-8)。以上光譜數(shù)據(jù)和芹菜素相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故推斷化合物為芹菜素 (apigenin)。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下 本發(fā)明采用硅膠柱層析之后直接采用分離效果好、時(shí)間短、所得產(chǎn)品純度 高、消耗有機(jī)試劑少的半制備高效液相色譜首次從神農(nóng)香菊中分離得到芹菜素、刺槐 素-7-0-^-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0-0 -D-葡萄糖苷。本方法與同類文獻(xiàn)報(bào)道最大的改 進(jìn)之處就是采用硅膠柱層析之后直接采用半制備高效液相色譜儀分離得到以上三化合物。 且采用常壓和減壓硅膠柱層析及半制備高效液相色譜法從菊科植物中分離得到芹菜素、刺 槐素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷、芹菜素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷的報(bào)道未見(jiàn)。提取工藝簡(jiǎn)單、分離 效果好，時(shí)間短、得到產(chǎn)品純度高、有機(jī)試劑消耗少、低成本，且環(huán)保，為研究神農(nóng)香菊的化 學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)提供了 一定的參考依據(jù)。實(shí)施例1神農(nóng)香菊干花，粉碎過(guò)20目篩，取3公斤，以70%乙醇浸泡12小時(shí)后滲漉提取， 收集滲漉液至原藥材量的10倍，回收溶劑得浸膏，用適量蒸餾水將浸膏懸浮，依次用石油 醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，得到三個(gè)提取部位，然后對(duì)乙酸乙酯部位進(jìn)行常壓和減壓200-300 目的硅膠柱層析，以石油醚_乙酸乙酯、氯仿_甲醇系統(tǒng)反復(fù)洗脫，以TLC為檢出手段，收 集流份，經(jīng)半制備高效液相色譜儀分離，濃縮、干燥及重結(jié)晶。色譜條件流動(dòng)相甲醇7jC (63 37)，流速2. 5mL/min,柱溫25°C，進(jìn)樣量0. 5mL。鑒定淡黃色結(jié)晶，mp 260 262°C。鹽酸-鎂粉和Molish反應(yīng)為陽(yáng)性。酸水解 檢出葡萄糖。提示為黃酮苷類化合物；在鋯鹽-枸櫞酸顯色反應(yīng)中，加入二氯氧鋯(&0C12) 后顯亮黃色，再加入枸櫞酸黃色消失，因此分子中含有C5-oh存在，但沒(méi)有游離的C3-OH存在。'H-NMR[600MHz, DMS0_d6] 12. 93 (1H, s，5_0H)，8. 08 (2H, d, J = 7. 8Hz, H_2' and 6' )，7. 15(2H，d，J = 7. 8Hz，H-3' and 5' )，6. 91 (1H，s，H_3)，6. 89 (1H，d，J = 2. 1Hz， H-8)，6. 49 (1H, d, J = 2. 1Hz, H_6)，5. 13 5. 49 (4H, m，糖上 OH)，5. 10 (1H, d, J = 7. 2Hz, H-葡萄糖端基質(zhì)子為 3-構(gòu)型)，3.27-3.90(5扎111，糖上11)，3.79(311，8，4' _0CH3)。13C-WR [600MHz，DMS0-d6] :182. 7 (C_4)，163. 7 (C_7)，164. 5 (C_2)，161. 8 (C_4')， 157. 6(C-9)，163. 1(C-5),128. 9(C_2 ' and 6 ' )，123. 0(C_l),115. 1(C_3 ' and 5 ')， 106. 6 (C-10)，100. 1 (C-6)，95. 5 (C_8)，55. 9 (C_0CH3)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)并對(duì)照文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定為刺槐素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷。實(shí)施例2神農(nóng)香菊干花，粉碎過(guò)20目篩，取3公斤，以70%乙醇浸泡12小時(shí)后滲漉提取， 收集滲漉液至原藥材量的10倍，回收溶劑得浸膏，用適量蒸餾水將浸膏懸浮，依次用石油 醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，得到三個(gè)提取部位，然后對(duì)乙酸乙酯部位進(jìn)行常壓和減壓硅膠柱 層析，以石油醚_乙酸乙酯、氯仿_甲醇系統(tǒng)反復(fù)洗脫，以TLC為檢出手段，收集流份，經(jīng)半 制備高效液相色譜儀分離，濃縮、干燥及重結(jié)晶。色譜條件流動(dòng)相甲醇水(63 37)， 流速2. 5mL/min，柱溫25°C，進(jìn)樣量0. 5mL。鑒定黃色粉末(MeOH)，mp 226 228°C，鹽酸-鎂粉反應(yīng)和Molish反應(yīng)均為陽(yáng)性。酸水解檢出葡萄糖，提示為黃酮苷類化合物；在鋯鹽-枸櫞酸顯色反應(yīng)中，加入二氯氧 鋯(ZrOCl2)后顯亮黃色，再加入枸櫞酸黃色消失，因此分子中含有C5-0H存在，但沒(méi)有游離 的(3-011存在。'H-NMR[600MHz, DMS0_d6] 7. 78 (2H, d, J = 9. 0Hz, H_2' and 6' ) ,6. 83 (2H, d, J = 9.0Hz，H-3' and 5' ),6. 71 (1H, s, H_3)，6. 39 (1H，d, J = 1.8，H_8)，6. 39 (1H，d, J =1.8泡，11-6^環(huán)7位被糖基取代)，4.97(111，(1，=6. 6Hz，H-葡萄糖端基質(zhì)子為構(gòu) 型)，3. 39 3. 84(5H, m)。13C-NMR [600MHz，DMSO-dJ 184. 0 (C_4), 164. 8 (C_7), 166. 6 (C_2), 162. 8 (C_4')， 158. 9(C-9)，162. 9(C_5),129. 6(C_2 ‘，C_6 ' )，123. 1(C_l ' )，117. 2(C_3 '，C_5 ')， 107. 1(C-10)，104.5 (C-3)，101.2 (C-6)，96.2 (C-8)，78.6 (C-5 “ )，77.9(C_3 “)， 74. 8 (C-2" )，71.3(C-4〃)，62.5(C_6〃)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的芹菜素-7-0- 0 -D-葡萄糖苷基本一致，鑒定化合物為芹 菜素-7-0-0-D-葡萄糖苷。實(shí)施例3神農(nóng)香菊干花，粉碎過(guò)20目篩，取3公斤，以70%乙醇浸泡12小時(shí)后滲漉提取，收 集滲漉液至原藥材量的10倍，回收溶劑得浸膏，用適量蒸餾水將浸膏懸浮，依次用石油醚、 氯仿、乙酸乙酯萃取，得到三個(gè)提取部位，然后對(duì)乙酸乙酯部位進(jìn)行常壓和減壓200-300目 的硅膠柱層析，以石油醚_乙酸乙酯、氯仿_甲醇系統(tǒng)反復(fù)洗脫，以TLC為檢出手段，收集流 份，經(jīng)半制備高效液相色譜分離，收集流份，流份經(jīng)濃縮、干燥及重結(jié)晶。色譜條件流動(dòng)相 甲醇水(63 37)，流速2. 5mL/min，柱溫25°C，進(jìn)樣量0. 5mL。鑒定黃色粉末(MeOH)，mp 345 347°C，溶于甲醇、乙醇、稀堿溶液。鹽酸-鎂粉 反應(yīng)為陽(yáng)性。Molish反應(yīng)為陰性，提示可能為黃酮苷元。EI-MS m/z :270，242，152，128，121，118。iH-WR^OOMHzJMSO-cQ S :7. 71(2H，d，J = 7. 8，H-2' and H-6' )，6.83(2H，d， J = 7. 8Hz, H-3' and H_5' ) ,6. 42 (1H, s, H_3)，6. 31 (1H，d, J = 1. 8Hz，H_8)，6. 10 (1H, d, J = 1. 8Hz, H-6)。13CNMR(600MHz, DMS0_d6) 8 181. 6 (C_4)，165. 9 (C-2)，163. 6 (C_7)， 161. 2(C-4 ' )，161. 4 (C-9)，157. 6 (C-5)，128. 5 (C-2 ' and 6 ' )，121.3(C_1 ')， 116. 1 (C-3' and 5' )，103. 2 (C-3)，102. 8 (C-10)，99. 3 (C-6)，94. 3 (C-8)。以上光譜數(shù)據(jù)和芹菜素相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定化合物為芹菜素。
權(quán)利要求
一種從神農(nóng)香菊中分離提取芹菜素、刺槐素 7 O β D 葡萄糖苷、芹菜素 7 O β D 葡萄糖苷的方法，其特征在于所述的分離提取方法按以下步驟依次進(jìn)行[1]制備浸膏(1)將神農(nóng)香菊干花，粉碎過(guò)20目篩；(2)將神農(nóng)香菊干花粉以70％乙醇浸泡12小時(shí)后，用70％乙醇滲漉提取，收集滲漉液；(3)收集滲漉液至原藥材量的10倍，再采用水浴加熱或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將滲漉液進(jìn)行濃縮，濃縮得神農(nóng)香菊浸膏；[2]萃取在神農(nóng)香菊浸膏中加入蒸餾水，使神農(nóng)香菊浸膏在水中呈懸浮狀態(tài)，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯對(duì)神農(nóng)香菊浸膏進(jìn)行萃取，得到3個(gè)提取部位，保留乙酸乙酯提取部位；[3]分離提取(1)將上述的乙酸乙酯提取部位進(jìn)行常壓或減壓200 300目的硅膠層析柱進(jìn)行層析，以石油醚 乙酸乙酯、氯仿 甲醇系統(tǒng)反復(fù)洗脫層析柱，以薄層析方法檢測(cè)流份，顯色后收集流份；(2)將上述流份經(jīng)半制備高效液相色譜儀分離，分離后得到3種流份，將3種流份分別進(jìn)行濃縮、干燥及重結(jié)晶，分別得到化合物刺槐素 7 O β D 葡萄糖苷、芹菜素 7 O β D 葡萄糖苷、芹菜素。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從神農(nóng)香菊中分離提取芹菜素、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，屬于一種從天然植物中提取化學(xué)物質(zhì)的方法。方法按以下步驟依次進(jìn)行[1]制備浸膏；[2]萃取依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯對(duì)神農(nóng)香菊浸膏進(jìn)行萃??；[3]分離提取(1)將乙酸乙酯提取部位進(jìn)行常壓和減壓硅膠柱層析；(2)將上述流份經(jīng)半制備高效液相色譜儀分離，得到化合物刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素。本發(fā)明的方法采用硅膠柱層析之后直接采用半制備高效液相色譜儀分離得到以上三化合物，分離效果好、時(shí)間短、產(chǎn)品純度高、對(duì)環(huán)境污染小。
文檔編號(hào)C07D311/40GK101891727SQ200910062199
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2009年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日
發(fā)明者盧金清, 李琳, 郭國(guó)寧 申請(qǐng)人:湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司