專利名稱：從陜西衛(wèi)矛中提取的陜西衛(wèi)矛醇苷Ⅰ及其提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從陜西衛(wèi)矛中提取的陜西衛(wèi)矛醇苷I及其提取工藝。
二背景技術(shù)：
陜西衛(wèi)矛(f〃o"，"51 5"c力e/75"i朋"s1 Maxim.)為衛(wèi)矛禾斗(Celastraceae)衛(wèi)矛 屬(^/朋J^iAS")植物，又名金絲吊蝴蝶、金蝴蝶。據(jù)《新華本草綱要》記載， 該科植物多具有殺蟲活性，主要集中在雷公藤屬、衛(wèi)矛屬、南蛇藤屬。自20世 紀(jì)80年代以來，我國學(xué)者對衛(wèi)矛科許多植物的殺蟲活性進(jìn)行了廣泛的研究，其 中發(fā)現(xiàn)陜西衛(wèi)矛對昆蟲幼蟲具有拒食和麻醉作用。廣泛分布于我國華北南部， 華中各省，主要分布在河南省伏牛山區(qū)。為什么陜西衛(wèi)矛具有殺蟲活性呢？其 有效成分如何提取至今未見有公開報(bào)導(dǎo)。
三
發(fā)明內(nèi)容
針對上述上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，本發(fā)明之目的就是通過對陜 西衛(wèi)矛進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從陜西衛(wèi)矛葉、莖中分離并鑒定出一種新的 化合物，從而提供一種從陜西衛(wèi)矛中提取的陜西衛(wèi)矛醇苷I及其提取工藝，可 有效解決從陜西衛(wèi)矛中提取活性成分陜西衛(wèi)矛醇苷I的問題，其解決的技術(shù)方 案是，本發(fā)明所稱的陜西衛(wèi)矛醇苷I ，無色油狀；比旋光度為["]效-14.5(^0.23， MeOH);易溶于丙酮，甲醇。茴香醛-濃硫酸噴霧后加熱先顯藍(lán)色，而后變?yōu)榧t 色(105。C)。 HR-TOF-MS m/z: 439.2307 [M+Na]+(計(jì)算值439.2308)，分子式: C21H3608，其結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明的陜西衛(wèi)矛醇苷I的提取工藝為取新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉，室溫
15-25'C下在70。/。丙酮水溶液中用閃式提取器(常用提取設(shè)備)組織破碎提取兩 次，每次15-20分鐘，提取液合并后低溫45。C減壓回收溶劑，得干粉，干粉加 水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂柱DiakmHP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色，得到的10%甲醇洗脫液，低溫45"C 減壓回收溶劑得千粉，將干粉用水溶解上凝膠Toyopearl HW-40柱，用水洗脫， 得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板(薄層板為公知常用試劑板)上展開，展開 后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧(茴香醛-濃硫酸顯色劑為公知常用顯色劑)， 在105i:下先顯藍(lán)色，后變紅色RF值(組分的色譜斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)的距離與溶 劑前沿至原點(diǎn)距離的比值)為0.4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依 次通過MCIGelCHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得無色油狀物質(zhì)陜西衛(wèi)矛醇苷I 。
本發(fā)明是一種新的化合物，其制備方法先進(jìn)、科學(xué)，操作方便，對陜西、 河南、山東等地的陜西衛(wèi)矛樣品按上述方法進(jìn)行反復(fù)多次制備，均取得了相同 或相近似的結(jié)果，表明本發(fā)明可靠性強(qiáng)，有效解決了從陜西衛(wèi)矛中提取活性成 分陜西衛(wèi)矛醇苷I，為陜西衛(wèi)矛的應(yīng)用提供了有利的技術(shù)手段和藥用價(jià)值，經(jīng) 濟(jì)和社會效益巨大。
四

圖1為陜西衛(wèi)矛醇苷I的結(jié)構(gòu)式。
圖2為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的iH-NMR譜。 圖3為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的"C-NMR譜。 圖4為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的HSQC譜。 圖5為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的HMBC譜。 圖6為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的IR譜。 圖7為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的HR-TOF-MS譜。 圖8為化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的UV譜。
五具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。
在實(shí)施和試驗(yàn)中，本發(fā)明所用儀器和材料柱層析填料DiaionHP-20、 MCI Gel CHP-20為日本三菱化學(xué)公司生產(chǎn)，Toyopearl HW-40為日本TOSOH公司生 產(chǎn)，Sephadex LH-20為Parmacia Biotech公司生產(chǎn)，柱層析所用硅膠H由青島海 洋化工廠生產(chǎn)(160-200目)，薄層層析硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)(顆粒范圍10-40|im),以0.5。/oCMC-Na制板，陰干，105。C活化0.5h。
核磁共振用DPX-400(400MHz for 'H-NMR and 100MHz for "C-NMR)核磁 共振儀測定，TMS為內(nèi)標(biāo)，由鄭州大學(xué)分析測試中心代測。紅外分光光度計(jì)型 號為Shimadzu FTIR-8201，質(zhì)譜由鄭州大學(xué)分析測試中心代測，所用質(zhì)譜儀為 APEX II型。熔點(diǎn)用Kofler顯微熔點(diǎn)測定儀測定，未經(jīng)校正。N-1000型旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)，SHB-B95A型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工 貿(mào)有限公司)，DFZ-3型真空干燥箱(上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠)。
實(shí)施例1
取河南產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉10kg，室溫18。C下在70。/。丙酮水溶液中用 閃式提取器組織破碎提取兩次，第1次20分鐘，第2次15分鐘，提取液合并 后45"C減壓回收溶劑，得干粉410g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔 吸附樹脂柱DiaionHP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10°/。甲醇沖洗至洗脫 液無色，得到的10%甲醇洗脫液，45'C減壓回收溶劑，得干粉15g，將干粉用水 溶解上凝膠ToyopearlHW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板 上展開，展開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105"C下先顯藍(lán)色，后變紅色 的RF值為0. 4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20 柱，Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得26mg 陜西衛(wèi)矛醇苷I。
實(shí)施例2
取陜西產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉15kg，室溫2(TC下在70。/。丙酮水溶液中用 閃式提取器組織破碎提取兩次，每次各18分鐘，提取液合并后45X:減壓回收溶 劑，得干粉605g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂柱Diaion HP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色，得到的 10%甲醇洗脫液，45"減壓回收溶劑，得干粉23g，將干粉用水溶解上凝膠 Toyopearl HW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開，展 開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105。C下先顯藍(lán)色，后變紅色的RF值為 0. 4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得到39.5mg 陜西衛(wèi)矛醇苷I。 實(shí)施例3
取山東產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉20kg，室溫22t:下在70。/。丙酮水溶液中用 閃式提取器組織破碎提取兩次，第一次15分鐘，第2次20分鐘，提取液合并 后45'C減壓回收溶劑，得干粉825g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔 吸附樹脂住DiaionHP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫 液無色，得到的10°/。甲醇洗脫液，45"C減壓回收溶劑，得干粉32g，將干粉水溶 上凝膠Toyopearl HW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展 開，展開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105'C下先顯藍(lán)色，后變紅色的RF 值為0. 4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20 柱，Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得到 51mg陜西衛(wèi)矛醇苷I 。
本發(fā)明的陜西衛(wèi)矛醇苷I的結(jié)構(gòu)解析經(jīng)研究分析，并經(jīng)試驗(yàn)測試，陜西衛(wèi) 矛醇苷I，無色油狀；比旋光度為[a]效-14.5(c0.23，MeOH);易溶于丙酮，甲 醇。茴香醛-濃硫酸噴霧后加熱先顯藍(lán)色，而后變?yōu)榧t色(105'C)。HR-TOF-MS m/z: 439.2307 [M+Na]+(計(jì)算值439.2308)，分子式C21H3608。 UV: w^eOHnm(logs): 205.9nm; IR(KBr): i)maxcm": 3366， 2924， 2862, 1611, 1588, 1463, 1375.與GJH-14 的1 1-皿&譜相比，除了在3W.58-3.08之間多出7個氫質(zhì)子的信號外，其余譜 峰都十分相似，對比二者"C-NMR譜，在^97.6-62.3之間多出6個碳信號，由 此可以推出該化合物是以GJH-14為苷元，又連接了一個葡萄糖。^-NMR譜中， 低場區(qū)出現(xiàn)5個氫質(zhì)子信號，其中^5.96(1H, dd, /= 10.7, 17.3Hz, H-2), 5.21 (1H, dd, /= 1.9， 17.3Hz, H畫U)和4.96 (1H， dd, /= 1.9， 10.7Hz， H-lc)是一個乙烯基的 ABX系統(tǒng)，^5.68 (1H， dt, /= 15.5， 6.4Hz， H-5)和(1H, d, /= 15.5Hz， H-6) 構(gòu)成一個反式雙鍵上的兩個質(zhì)子，其偶合常數(shù)是J^ 15.5Hz。 ^^3.88(1H，t，J: 6.9Hz，H-10)為一個次甲基質(zhì)子信號，且連有含氧基團(tuán)；^2.20(2H，t，J-6.4Hz， H-4)， 1.86 (2H, m， H-8)和1.84 (2H， m， H-9)是3個亞甲基信號；<^1.20 (3H， s, H-14), 1.27(3H， s， H國15)， 1.11 (3H, s，H-12)和1.11 (3H， s, H畫13)是4個甲基信號。 以上信號與GJH-14的^-NMR譜信號基本吻合。另夕卜，^4.58(1H，d，J^7.8Hz，H-l')為葡萄糖上端基氫信號，由其偶合常數(shù)推知為々構(gòu)型。"C-NMR譜中顯示 21個碳信號，除去苷元上的15個碳信號，其余6個碳信號05c97.6， 77.3, 76.2, 74.2, 71.1, 62.3)應(yīng)為葡萄糖上的碳信號。HMBC譜中，^4.58(1H， d, /= 7.8Hz， H-l') 與178.5 (C-ll)和^;74.2 (C-2')有遠(yuǎn)程相關(guān)，說明葡萄糖連在11位上。因此， 確定GJH-17的結(jié)構(gòu)為(3& 7i , 105)-3, 11-二羥基-7, 10-環(huán)氧-3, 7, 11-三甲基十二 碳-l,5-二烯-ll-0-々-D-葡萄糖苷。經(jīng)査閱文獻(xiàn)未見報(bào)道，確定為一新化合物，命 名為陜西衛(wèi)矛醇苷I。同時，該化合物經(jīng)對稻螟、蝗蟲等多種昆蟲幼蟲進(jìn)行數(shù) 十次試驗(yàn)，均表明對幼蟲具有拒食和麻醉作用，具有殺蟲活性。
下表給出本發(fā)明化合物陜西衛(wèi)矛醇苷I的^-NMR (400 MHz, Acetone-d6) 和13C-NMR (100 MHz, Acet one-d6)數(shù)據(jù)。
NO- 3c
110.54.96 (1H, 1.9， 10.7Hz)
5.21 (1H, (!(!， /= 1.9， 17.3Hz)
2146.05.96 (IH， dd, /= 10.7, 17.3Hz)
371.9
445.42.20 (2H, t, /= 6.4Hz)
5122.95.68 (1H, dt, /= 15.5, 6.4Hz)
6138.95.51 (1H, d,_/= 15.5Hz)
782.4
837.21.86 (2H, m)
925.71.84(2H,m)
1084.53.88(lH,t，/=6.7Hz)
1178.5
1225.41.11 (3H, s)
1325.41.11 (3H， s)
1426.71.20 (3H,s)
1528.81.27 (3H， s)
Glc
r97.64.58 (1H, d， /= 7.8Hz)
2,74.23.08 (IH， m)
3，76.23.30 (IH， m)
4,71.13.27 (IH， m)
5,77.33.35(lH,m)
6,62.33.60 (lH,dd, 5.7, 11.6Hz)
3.79 (lH，dd, 2.1, 11.6Hz)
注該表給出了該化合物的碳?xì)錃w屬，證明結(jié)構(gòu)解析的正確性。
權(quán)利要求
1、一種陜西衛(wèi)矛醇苷I，其特征在于所說的陜西衛(wèi)矛醇苷I的分子式為C21H36O8，結(jié)構(gòu)式為
2、 權(quán)利要求1所述的陜西衛(wèi)矛醇苷I的提取工藝，其特征在于取新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉，室溫15-25卩下在70%丙酮水溶液中用閃式提取器組織破碎提 取兩次，每次15-20分鐘，提取液合并后低溫45'C減壓回收溶劑，得干粉，干 粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂柱DiaionHP-20，用水沖洗至洗 脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色，得到的10%甲醇洗脫液，低溫 45'C減壓回收溶劑得干粉，將干粉用水溶解上凝膠ToyopearlHW-40柱，用水洗 脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開，展開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑 噴霧，在105'C下先顯藍(lán)色，后變紅色RF值為0.4的流份，收集該流份得到組 分A，組分A依次通過MCIGelCHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚 糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得無色油狀物質(zhì)陜西衛(wèi)矛醇苷I 。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的陜西衛(wèi)矛醇苷I的提取工藝，其特征在于，取河 南產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉10kg，室溫18。C下在70。/。丙酮水溶液中用閃式提取 器組織破碎提取兩次，第1次20分鐘，第2次15分鐘，提取液合并后45"C減 壓回收溶劑，得干粉410g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂 柱DiaionHP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色， 得到的10°/。甲醇洗脫液，45'C減壓回收溶劑，得干粉15g，將干粉用水溶解上凝 膠ToyopeariHW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開， 展開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105'C下先顯藍(lán)色，后變紅色的RF值為 0. 4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20柱， Toyopearl HW40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得26mg陜 西衛(wèi)矛醇苷I。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的陜西衛(wèi)矛醇苷I的提取工藝，其特征在于，取陜 西產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉15kg，室溫2(TC下在70。/。丙酮水溶液中用閃式提取 器組織破碎提取兩次，每次各18分鐘，提取液合并后45"C減壓回收溶劑，得干 粉605g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂柱Diakm HP-20, 用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色，得到的10%甲醇 洗脫液，45。C減壓回收溶劑，得干粉23g，將干粉用水溶解上凝膠Toyopearl HW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開，展開后用茴 香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105-C下先顯藍(lán)色，后變紅色的RF值為0. 4的流份， 收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40 柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得到39.5mg陜西衛(wèi)矛醇苷I 。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的陜西衛(wèi)矛醇苷I的提取工藝，其特征在于，取山 東產(chǎn)新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉20kg，室溫22'C下在70M丙酮水溶液中用閃式提取 器組織破碎提取兩次，第一次15分鐘，第2次20分鐘，提取液合并后45。C減 壓回收溶劑，得干粉825g，干粉加水分散溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂 住DiaionHP-20，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10%甲醇沖洗至洗脫液無色， 得到的10%甲醇洗脫液，45'C減壓回收溶劑，得干粉32g，將干粉水溶上凝膠 Toyopearl HW-40柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開，展 開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，在105'C下先顯藍(lán)色，后變紅色的RF值為 0. 4的流份，收集該流份得到組分A，組分A依次通過MCI Gel CHP-20柱， Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得到51mg 陜西衛(wèi)矛醇苷I。
全文摘要
本發(fā)明涉及從陜西衛(wèi)矛中提取的陜西衛(wèi)矛醇苷I及其提取工藝，工藝是，取新鮮的陜西衛(wèi)矛莖、葉，室溫下在丙酮水溶液中組織破碎提取、減壓回收溶劑得干粉，干粉加水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹脂柱，用水沖洗至洗脫液無色，然后用10％甲醇沖洗至洗脫液無色，得到的10％甲醇洗脫液，低溫減壓回收溶劑得干粉，將干粉水溶上凝膠柱，用水洗脫，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開，展開后用茴香醛-濃硫酸顯色劑噴霧，先顯藍(lán)色，后變紅色的流份，該流份依次通過MCI Gel CHP-20柱，Toyopearl HW-40柱，羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱，硅膠柱得無色油狀物質(zhì)陜西衛(wèi)矛醇苷I，本發(fā)明是一種新的化合物，其制備方法操作方便，可靠性強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)和社會效益巨大。
文檔編號C07H15/26GK101633678SQ20091006590
公開日2010年1月27日 申請日期2009年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月24日
發(fā)明者馮衛(wèi)生, 王小蘭, 鄭曉珂, 郭錦輝 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院