專利名稱：乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮衍生物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列乙酰氨基酸節(jié)酯修飾的異黃酮衍生物及其制備方法，進 一步涉及它們在制備抗肺瘤藥物中的用途。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是一種嚴重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，人類因惡性腫瘤而 引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，僅次于心腦血管疾病。腫瘤的治療 方法有手術(shù)治療，放射治療和藥物治療(化學(xué)治療)。目前，化學(xué)治療仍然是 臨床治療腫瘤的主要手段。尋找抗肺瘤藥物是新藥研究的熱點之一。
5,7,4'-三羥基異黃酮是一種已知的具有抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物，其抗腫瘤作 用通過對腫瘤細胞的細胞毒作用、對上皮細胞生長因子受體的抑制作用、對腫 瘤血管生成的抑制作用、對多要耐藥蛋白(MPR)的特異性抑制作用等多個途 徑實現(xiàn)。不過，5,7,4'-三羥基異黃酮的抗腫瘤活性不能夠滿足抗腫瘤治療所需。 藥物發(fā)明人認識到，在5,7,4'-三幾基異黃酮的7位、4'位同時引入氨基酸節(jié)酯或 5位、7位、4'位同時引入氨基酸卡酯可增強5,7,4'-三鞋基異黃酮的抗腫瘤活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是，在5,7,4'-三羥基異黃酮的7位、4'位同時引入氨基酸 千酯或5位、7位、4'位同時引入氨基酸千酯，得到抗腫瘤活性增強的異黃酮衍 生物。
本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
通式Ia-q的乙酰氨基酸卡酯修飾的異黃酮衍生物，式中Ri、 &和R3均為 CH2CO-AA-Obzl,或者R^和112均為CH2CO-AA-OBzl, R3為H;其中，所述 CH2CO-AA-OBzl中的AA選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、 亮氨酸、纈氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。本發(fā)明的的目的之二是，提供一種制備上述乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮 書亍生物的方法。
本發(fā)明的目的之二是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的
(1) 將溴代乙酸與氨基酸芐酯偶聯(lián)，得到溴乙酰氨基酸芐酯，其中，所述氨 基酸選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、
天冬氨酸、谷氨酸；
(2) 將溴乙酰氨基酸節(jié)酯引入5,7,4'-三羥基異黃酮的7位和4'位或者將溴乙 酰氨基酸卡酯引入5,7,4'-三羥基異黃酮的5位、7位和4'位。
該制備方法可以用圖1的路線概括。
本發(fā)明采用小鼠S18o肉瘤模型評價了通式Ia-q的乙酰氨基酸芐酯修飾的異 黃酮衍生物的抗肺瘤作用，表明它們具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性，可作為抗腫瘤劑。


圖1為通式Ia-q的乙酰氨基酸千酯修飾的異黃酮衍生物的合成路線。i) THF， DCC, NMM，水浴；ii)丙酮，K2C03，水浴。其中R!、 R2和R3均為 CH2CO-AA-OBzl，或者R4和R2均為CH2CO-AA-OBzl， R3為H; CH2CO-AA-OBzl 中的AA選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨 酸、天冬氨酸、谷氨酸。
為了進一步闡迷本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證 性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
具體實施例方式
實施例1制備溴乙酰氨基酸節(jié)酯的通法
將0.005 mol溴代乙酸用60 ml無水THF溶解在100 ml茄瓶中，水浴下加 入0.005 mol DCC,待反應(yīng)完全(約30分鐘)，加入0.005 mol AA-OBzl,加入NMM 調(diào)節(jié)PH-8 9, TLC監(jiān)測反應(yīng)情況，待AA-OBzl原料消失后終止反應(yīng)，過濾，濾 液減壓濃縮至干。得到的殘余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏 斗中、依次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30 mLx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30 mLx3)、5%硫酸氫鐘水溶液洗(30 mLx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30 mLx3)、飽和碳酸氫 鈉水溶液洗(30mLx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mLx3)。合并的乙酸乙酯層用無 水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干，得到的化合物溴乙酰氨基酸芐酯為 無色固體。
實施例2制備溴乙酰甘氨酸節(jié)酯
按照實施例l的通法，用lg Tos.Gly-OBzl制得585 mg (收率68.9°/。)溴乙酰甘 氨酸節(jié)酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z)310 [M+H+Na]+。
實施例3制備溴乙酰丙氨酸芐酯
按照實施例l的通法，用lgTos.Ala-OBzl制得455mg(收率53.2。/(0溴乙酰丙 氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 324 [M+H+Na]+。
實施例4制備溴乙酰苯丙氨酸節(jié)酯
按照實施例l的通法，用lg Tos.Phe-OBzl制得534mg (收率60.6%)溴乙酰苯 丙氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 400 [M+H+Na]+。
實施例5制備溴乙酰色氨酸芐酯
按照實施例1的通法，用lg H3P(VTrp-OBzl制得643mg (收率60.7%)溴乙酰 色氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 439 [M+H+Na〗+。
實施例6制備溴乙酰異亮氨酸千酯
按照實施例l的通法，用lg Tos'Ile-OBz^Wf367mg (收率42.1%)溴乙酰異 亮氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 366 [M+H+Na]+。
實施例7制備溴乙酰亮氨酸芐酯
按照實施例l的通法，用lgTos.Leu-OBzl制得250mg(收率28.7。/。)溴乙酰亮 氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 366 [M+H+Na]+。
實施例8制備溴乙酰纈氨酸芐酯
按照實施例l的通法，用lg Tos'Val -OBz^WfMlmg (收率50,9°/。)溴乙酰錄氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 352 [M+H+Na]+。
實施例9制備溴乙酰天冬氨酸節(jié)酯
按照實施例l的通法，用lg Tos'Asp-(OBzl)-OBzl制得463mg (收率51.7%)溴 乙酰天冬氨酸節(jié)酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 458 [M+H+Na]+。
實施例10制備溴乙酰谷氨酸千酯
按照實施例l的通法，用lgTos'Glu-(OBzl)-OBzl制得511mg(收率56.9%) 溴乙酰谷氨酸千酯，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 449 [M+H]+。
實施例11制備5-羥基-7，4'-二乙酰基氨基酸節(jié)酯-異黃酮的通法
0.001 mol染料木素用60ml丙酮溶解在100ml茄瓶中，水浴下分兩次加入 0.0035mol共0.007molK2CO3,約2個小時后，加入0.006mol溴乙酰氨基酸，TLC 監(jiān)測反應(yīng)情況，待染料木素原料消失后終止反應(yīng)，過濾，濾液減壓濃縮至干。 得到的殘余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏斗中、依次用飽和 碳酸氬鈉水溶液洗(30 mLx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30 mLx3)。合并的乙酸乙酯 層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干。得到5-羥基-7,4'-二乙?；?基酸千酯-異黃酮，為無色固體。
實施例12制備5-幾基-7，4'-二乙酰甘氨酸節(jié)酯-異黃酮(Ia)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Gly-OBzl制得68 mg (收率17.2%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z)681 [M+H]+。
實施例13制備5-鞋基-7，4'-二乙酰丙氨酸節(jié)酯-異黃酮(Ib)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Ala-OBzl制得99 mg (收率25.4%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 709 [M+H〗+。
實施例14制備5-羥基-7，4'-二乙酰苯丙氨酸千酉旨-異黃酮(Ic)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Phe-OBzl制得100 mg (收率20.5%)目 標化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 861 [M+H〗+。實施例15制備5-羥基-7,4'-二乙酰色氨酸千酯-異黃酮(Id)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Trp-OBzl制得84mg (收率22.3%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 939[M+H]+。
實施例16制備5-羥基-7，4'-二乙酰異亮氨酸節(jié)酉旨-異黃酮(Ie)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Ile-OBzl制得166mg (收率42.9%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 793 [M+H]+。
實施例17制備5-羥基-7，4'-二乙酰亮氨酸節(jié)酯-異黃酮(If)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Leu-OBzl制得75mg (收率19.4%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 793 [M+H〗+。
實施例18制備5-羥基-7，4'-二乙酰纈氨酸千酯-異黃酮(Ig)的數(shù)據(jù)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Val-OBzl制得47mg (收率12.1%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 765 [M+H〗+。
實施例19制備5-羥基-7，4'-二乙酰天冬氨酸千酉旨-異黃酮(Ih)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Asp-(OBzl)-OBzl制得85mg (收率22.7%) 目標化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 978 [M+H+Na〗+。
實施例20制備5-羥基-7，4'-二乙酰谷氨酸千酯-異黃酮(Ii)
按照實施例11的通法，用lg BrAC-Glu-(OBzl)-OBzl制得127mg (收率34.0%) 目標化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1005 [M+H]+。
實施例21制備5，7，4'-三乙酰氨基酸千酯-異黃酮的通法
0.001 mol染料木素用60 ml丙酮溶解在100ml茄瓶中，水浴下分兩次加入 0扁5mo1共0.007molK2CO3,約2個小時后，加入0.006mol溴乙酰氨基酸，TLC 監(jiān)測反應(yīng)情況，待染料木素原料消失后終止反應(yīng)，過濾，濾液減壓濃縮至干。 得到的殘余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏斗中、依次用飽和 碳酸氫鈉水溶液洗(30mLx3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mLx3)。合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮至干。得到5,7,4'-三乙酰氨基酸芐酯 -異黃酮，為無色固體。
實施例22制備5，7，4'-三乙酰甘氨酸芐酯-異黃酮(Ij)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Gly-OBzl制得80mg (收率15.5%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 886 [M+H]+。
實施例23制備5,7，4'-三乙酰丙氨酸芐酯-異黃酮(Ik)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Ala-OBzl制得140mg (收率27.2%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 938 [M+H]+。
實施例24制備5，7，4'-三乙酰苯丙氨酸芐酯-異黃酮(11)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Phe-OBzl制得250mg (收率48.8%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1156 [M+H廣。
實施例25制備5，7，4'-三乙酰色氨酸芐酯-異黃酮(Im)
按照實施例21的通法，用lgBrAC-Trp-OBzl制得108mg (收率21.1%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1273 [M+H〗+。
實施例26制備5，7，4'-三乙酰亮氨酸節(jié)酯-異黃酮(In)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Leu-OBzl制得76mg (收率14.8%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1054 [M+H]+。
實施例27制備5,7，4'-三乙酰纈氨酸節(jié)酯-異黃酮(Io)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Val-OBzl制得390mg (收率75.9%)目標 化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1012 [M+H]+。
實施例28制備5，7，4'-三乙酰天冬氨酸芐酯-異黃酮(Ip)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Asp-(OBzl)-OBzl制得204mg (收率40.0%) 目標化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1331 [M+H]+。實施例29制備5，7,4'-三乙酰谷氨酸節(jié)酯-異黃酮(Iq)
按照實施例21的通法，用lg BrAC-Glu-(OBzl)-OBzl制得177mg (收率34.7%) 目標化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/z) 1372 [M+H〗+。
試驗例1通式Ia-q的化合物的抗腫瘤活性實驗 1 )陽性對照品為阿霉素。
2) 實驗動物ICR小鼠，雄性，體重20士2g(^士s);每10只小鼠一組，空白 及陽性對照各一組。
3) 劑量設(shè)置
本發(fā)明的化合物設(shè)為8.9jimol/kg，陽性對照設(shè)為2.0pmol/kg，均采用腹腔單 次給藥。
3) 藥物配制
本發(fā)明的通式Ia-q化合物在水中難溶，實驗時加入少量的吐溫80潤濕助溶， 逐漸加入0.5。/。CMC-Na溶液至所需濃度。陽性對照品阿霉素用同樣方法溶解。
4) 給藥方案
本發(fā)明的化合物每天腹腔給藥一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。 陰性對照每天一次，0.2ml 0.5。/。CMC-Na/鼠，連續(xù)給藥7天，共給藥7次。 陽性對照腹腔給藥。每天一次腹腔給藥一次，0.2ml/鼠，連續(xù)給藥7天，共 給藥7次。
5) 動物模型
采用體內(nèi)抗腫瘤腋皮下接種模型在無菌條件下抽取接種7d,后取生長旺 盛S咖腹水瘤瘤液，用生理鹽水稀釋成(1:2)的液體充分混合，將腫瘤細胞懸液用 新鮮配制的0.2%臺盼藍染色，混勻后按白細胞計數(shù)方法計數(shù)，染藍色者為死細 胞，不染色者為活細胞，按如下公式計算細胞濃度和細胞存活率。
細胞濃度=4大方格內(nèi)活細胞數(shù)/4 x 104x稀釋倍數(shù)=細胞數(shù)/ml
細胞存活率-活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))x 100%
將存活率大于90%的瘤液用勻漿法制備成lxl0M"/ml的細胞懸液，于相應(yīng)宿 主腋皮下接種0.2m1/鼠，制成實體瘤動物模型。
6) 實體瘤抑瘤率和體重增長的測定
各組連續(xù)給藥7天后，于第8天脫頸推處死小鼠，稱取體重(處死體重)，然后 用鑷子固定小鼠右腋腫瘤生長部位，剪開皮膚，暴露腫瘤，鈍性剝離，稱重，按如下公式計算抑瘤率。
抑瘤率％ =[(陰性對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)+CMC-Na對照組平均 瘤重]xl00。/()
7) 統(tǒng)計方法
本實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計均采用f檢驗和方差分析，以(j^tSD)表示。
8) 實驗結(jié)果
本發(fā)明的化合物對荷S180肉瘤的體內(nèi)抗腫瘤活性實驗結(jié)果如表1所示。在 8.9pmol/kg劑量下本發(fā)明的化合物經(jīng)腹腔連續(xù)7天給藥以后，對S180小鼠肺瘤有 顯著的抑制作用。
表l本發(fā)明的通式Ia-q化合物的抗腫瘤活性 給藥組別 瘤重(mg) 抑瘤率％
CMC陽Na1482.3±190.6—
阿霉素985.5±251.7**33.5
Ia1239.8±303.616.4
Ib979.9±294.(T33.8
Ic926.1±363.8**37.5
Id1225.7±242.8*17.3
Ie*承 1183.1±116.120.2
If1086.2±278.5"26.7
Ig1305.2±189.412.0
Ih680.4±198.5"54.1
Ii1151.4±215.4**22.3
Ij875.5±185.7**40.9
Ik936.4±379.8"36.8
111377.3±380.17.0
Im1003.2 ±256.4"32.3
In1256.1±239.9*15.3
Io1297.5±173.512.5
Ip774.8±286.9"47.7Iq 809.3土241.2" 45.4
染料木素_1130.2±281.7*_23.8
注:與對照組比較*尸< 0. 05, **尸< 0. 01; Ia-q劑量=8.9 pmol/kg;阿霉素劑量=2.0
|imol/kg
權(quán)利要求
1、通式Ia-q的乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮衍生物，式中R1、R2和R3均為CH2CO-AA-Obzl，或者R1和R2均為CH2CO-AA-OBzl，R3為H；其中，所述CH2CO-AA-OBzl中的AA選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。
2、 制備權(quán)利要求1的乙酰氨基酸節(jié)酯修飾的異黃酮衍生物的方法，該方法 包括(1) 將溴代乙酸與氨基酸節(jié)酯偶聯(lián)，得到溴乙酰氨基酸芐酯；(2) 將溴乙酰氨基酸節(jié)酯引入5,7,4'-三羥基異黃酮的7位和4'位或者將溴乙 酰氨基酸芐酯引入5，7,4'-三羥基異黃酮的5位、7位和4'位。
3、 權(quán)利要求2的乙酰氨基酸千酯修飾的異黃酮衍生物的制備方法，其中， 所述氨基酸節(jié)酯的氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、 亮氨酸、纈氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。
4、 一種治療腫瘤的藥物組合物，由有效量的權(quán)利要求1的乙酰氨基酸千酯 修飾的異黃酮衍生物和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成。
5、 權(quán)利要求1的乙酰氨基酸爺酯修飾的異黃酮衍生物在制備抗腫瘤藥物中 的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了通式Ia-q的乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮衍生物，式中R₁、R₂和R₃均為CH₂CO-AA-OBzl或者R₁和R₂均為CH₂CO-AA-Obzl而R₃為H，其中所述CH₂CO-AA-OBzl中的AA選自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。還公開了通式Ia-q的乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮衍生物的制備方法。本發(fā)明采用S₁₈₀小鼠模型評價了通式Ia-q的乙酰氨基酸芐酯修飾的異黃酮衍生物的抗腫瘤作用，表明它們具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性，可作為抗腫瘤劑。
文檔編號C07D405/00GK101565413SQ200910084399
公開日2009年10月28日 申請日期2009年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月22日
發(fā)明者彭師奇, 李一帆, 明 趙 申請人:北京大學(xué)