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      一種測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物雜質(zhì)含量的方法

      文檔序號(hào):3564540閱讀:491來源:國(guó)知局
      專利名稱:一種測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物雜質(zhì)含量的方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域,具體涉及高效液相色譜法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制 劑中法羅培南聚合物含量的方法。
      背景技術(shù)
      法羅培南是一個(gè)非典型0 -內(nèi)酰胺類抗生素,屬于青霉烯類的衍生物。碳青霉烯 類及青霉烯類兩大類化合物已吸引人們極大的興趣,青霉烯類更有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)有五個(gè) 青毒烯類衍生物在開發(fā)之中,法羅培南便是其中之一。除對(duì)抑制綠膿桿菌較弱外,其抗菌譜 廣、對(duì)厭氧菌特別有效,勝過碳青霉烯類抗生素。它對(duì)需氧和厭氧的革蘭陽性菌、革蘭陰性 菌顯示出廣譜的抗菌活性,特別是對(duì)耐藥的葡萄球菌、腸球菌等革蘭陽性菌和擬桿菌等厭 氧菌的活性都優(yōu)于現(xiàn)有的口服抗菌藥。法羅培南與青霉素結(jié)合蛋白有很好的親合力及良好 的內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性,較少產(chǎn)生耐藥,主要用于敏感細(xì)菌所致的呼吸系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng) 感染、生殖系統(tǒng)感染和膽道感染等。隨著抗生素廣泛應(yīng)用,抗生素引起的不良反應(yīng)越來越引起人們的重視。內(nèi)酰 胺類抗生素引發(fā)的速發(fā)型過敏反應(yīng)是臨床最常見的不良反應(yīng),對(duì)患者的危害及大,研究表 明內(nèi)酰胺類抗生素本身只是半抗原,而其中存在的各類高分子聚合雜質(zhì)才是引發(fā)速發(fā) 型過敏反應(yīng)的真正過敏原,因此控制其聚合物限量是極其重要的。法羅培南鈉與同類其他 藥物一樣,它們?cè)谂R床上常引發(fā)過敏性休克反應(yīng),嚴(yán)重威脅著患者的安全。研究證明,引發(fā) 3_內(nèi)酰胺類抗生素速發(fā)型過敏反應(yīng)的過敏原是與其中存在的高分子聚合物含量有關(guān),所 以對(duì)此類藥物中高分子聚合物的測(cè)定越來越弓丨起人們的重視。凝膠色譜技術(shù),是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù),由 于設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果。利用凝膠色譜 的分子篩機(jī)制,讓藥物分子自由地進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,而讓高分子雜質(zhì)被排阻;由于溶質(zhì)分 子和凝膠介質(zhì)間存在多種次級(jí)相互作用,溶質(zhì)分子可被吸附于凝膠介質(zhì)的表面;在凝膠顆 粒內(nèi)部,凝膠顆粒有較大的比表面積和較小的自由空間,故溶質(zhì)分子更易和凝膠介質(zhì)接觸, 因而溶質(zhì)分子在凝膠顆粒內(nèi)部較凝膠顆粒外部更易被吸附,即色譜過程中除分子排阻作用 外,凝膠對(duì)藥物的吸附作用大于對(duì)高分子雜質(zhì)的吸附作用。據(jù)此原理可使高分子雜質(zhì)和藥 物分子間的分離度增加。目前已經(jīng)有多種0 -內(nèi)酰胺類抗生素的聚合物含量測(cè)定的報(bào)道,其中2005年片藥 典對(duì)頭孢他啶、頭孢曲松鈉、頭孢哌酮鈉、頭孢噻肟鈉、頭孢拉定、頭孢唑林鈉、頭孢呋辛鈉、 青霉素鈉、青霉素鉀、青霉素V鉀、阿莫西林等11抗生素的聚合物測(cè)定方法進(jìn)行了收錄,也 有文獻(xiàn)對(duì)頭孢地嗪鈉、頭孢噻肟鈉和頭孢替唑鈉聚合物的測(cè)定方法進(jìn)行了研究,楊鵬飛等 在《以葡聚糖凝膠G-10系統(tǒng)考察8種注射用頭孢菌素中的聚合物》中對(duì)注射用頭孢尼西 鈉、注射用頭孢硫脒鈉、注射用頭孢西丁、注射用頭孢唑肟鈉、注射用頭孢唑蘭、注射用頭孢 地嗪鈉、注射用頭孢替坦鈉等8種注射用頭孢菌素中的聚合物進(jìn)行了系統(tǒng)研究。目前并無
      3對(duì)法羅培南聚合物的具體測(cè)定方法的報(bào)道,因此對(duì)于建立法羅培南聚合物測(cè)定的方法對(duì)于 進(jìn)行碳青霉烯類抗生素的質(zhì)量控制和安全用藥有重要的意義。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的目的是提供一種測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的 方法。我們建立了一種對(duì)法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南鈉聚合物的含量進(jìn)行測(cè)定的高 效液相凝膠色譜法。發(fā)明人通過對(duì)水溶液種類、離子強(qiáng)度、溶液濃度、溶液PH、流速、柱溫、色 譜柱及波長(zhǎng)等條件進(jìn)行摸索,使法羅培南聚合物的測(cè)定方法分離度好,柱效高,重復(fù)性好。本發(fā)明提供的測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物雜質(zhì)含量的方法,該 方法為凝膠色譜法,使用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè),色譜條件為①凝膠色譜柱排阻分子量為600-800道爾頓;②流動(dòng)相具有兩種流動(dòng)相A 濃度為0. 01-0. 2mol/L之間的水相溶液,用pH調(diào)節(jié) 劑調(diào)節(jié)PH值為6. 5-8. 5 ;流動(dòng)相B 水或0. 005-0. 02%之間的十二烷基硫酸鈉溶液或甘氨 酸溶液;③柱溫室溫;④流速0.5-1. Oml/min ;⑤檢測(cè)波長(zhǎng)210-300nm。其中上述所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南鈉聚合物含量的方法,所述 的凝膠色譜柱選自葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜柱。其中上述所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,所述的 葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜,內(nèi)徑為5 20mm ;長(zhǎng)度200 500mm ;粒度40 60um ;孔徑 50 70A ;柱床1. 5 3. 5mL/g。其中上述所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,所述 的流動(dòng)相 A 的水相溶液為 NaH2P04、NH4CL、Na2HP04、KH2P04、K2HP04、NH4H2P04、(NH4)2HP04 一 種或兩種以上的混合水溶液,優(yōu)選NaH2P04和Na2HP04的混合水溶液,NaH2P04的濃度為 0. 01-0. 2mol/L, Na2HP04 的濃度為 0. 01-0. 2mol/L。其中上述所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,所述的 流動(dòng)相A的pH調(diào)節(jié)劑選自NaOH、磷酸、氨水和HCL等。波長(zhǎng)選取的標(biāo)準(zhǔn)與待檢物質(zhì)的光吸收性質(zhì)有關(guān),對(duì)頭孢類抗生素,其最大吸收波 長(zhǎng)是固定的,通過紫外掃描,發(fā)現(xiàn)法羅培南鈉聚合物210 300nm處波長(zhǎng)均有較強(qiáng)的紫外吸 收,均可作為檢測(cè)波長(zhǎng)。其中上述所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,其中所 述的方法為標(biāo)準(zhǔn)曲線法或外標(biāo)法。1)所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線包括如下步驟①作標(biāo)準(zhǔn)曲線取含量已知的法羅培南對(duì)照品為對(duì)照,梯度稀釋,以流動(dòng)相B為流 動(dòng)相,過凝膠色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取保留時(shí)間、峰高、峰面積等參數(shù), 得到標(biāo)準(zhǔn)曲線;②標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定法羅培南聚合物含量將待測(cè)原料或制劑用水作為溶劑配制成 一定濃度的溶液,以流動(dòng)相A為流動(dòng)相,過凝膠柱色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,
      4獲取峰高和峰面積等參數(shù),并將法羅培南聚合物對(duì)應(yīng)的相關(guān)參數(shù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算得到 法羅培南聚合物的含量。2)所述的外標(biāo)法包括如下步驟①標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍取含量已知的法羅培南對(duì)照品為對(duì)照,梯度稀釋,以流動(dòng) 相B為流動(dòng)相,過凝膠色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取峰高和峰面積等參數(shù), 得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍;②外標(biāo)法測(cè)定法羅培南聚合物含量在線性范圍內(nèi)選擇合適的濃度,配制對(duì)照溶 液和樣品溶液,在選定的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以相關(guān)參數(shù)進(jìn)行計(jì) 算,得到法羅培南聚合物的含量。本發(fā)明具備如下有益效果和顯著進(jìn)步性①本發(fā)明的測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,首次采用 高效液相凝膠色譜法對(duì)法羅培南鈉聚合物進(jìn)行定量測(cè)定,本方法自動(dòng)化程度高,利于操作, 為更好的控制羅培南鈉原料及制劑中聚合物的量提供了一種可靠的方法。②本發(fā)明的測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法,特異性 高,分離度好,柱效高、重復(fù)性好能夠正確的定量法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合 物的雜質(zhì),確保了保證產(chǎn)品質(zhì)量,提高了用藥的安全性。


      圖1為法羅培南對(duì)照品在流動(dòng)相B中的HPLC譜2為法羅培南鈉原料在流動(dòng)相A中的HPLC譜圖
      具體實(shí)施例實(shí)施例1 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合物含量一、色譜條件儀器美國(guó)Agilent 1100系列高效液相色譜儀;凝膠色譜柱:SephadexG-10,15. 0mm X 400mm ;流動(dòng)相流動(dòng)相A :NaH2P04l. 08g 和 Na2HP044. 38g 至 1000ml 水中,用 H3P04 調(diào) pH 到 7. 0 ;流動(dòng)相B 0. 01 %十二烷基硫酸鈉流速1.0ml/min柱溫室溫;波長(zhǎng)254nm二、實(shí)驗(yàn)步驟1、作標(biāo)準(zhǔn)曲線①法羅培南對(duì)照品62.5mg,置于50ml容量瓶中,用水將其稀釋成0. 05、0. 10、 0. 15,0. 20,0. 25,0. 30 和 0. 4mg/ml 的溶液,搖勻;②取各稀釋點(diǎn)對(duì)照品溶液各20ul依次通過凝膠柱,以流動(dòng)相B為流動(dòng)相,在254nm 波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,HPLC色譜圖見圖1,獲取保留峰面積,以濃度(C)對(duì)峰面積(A)進(jìn) 行線性回歸,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性方程,計(jì)算回歸系數(shù);
      ③經(jīng)計(jì)算得到回歸方程為C = 58253A-19. 734 R2 = 0. 99972、測(cè)定法羅培南鈉聚合物的含量取相當(dāng)于法羅培南50mg的法羅培南鈉原料或的制劑置于100ml容量瓶中,加純化 水配制成待測(cè)溶液,過凝膠色譜柱,在254nm波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,HPLC譜圖見圖2,獲 取聚合物峰面積,并將法羅培南鈉聚合物的峰面積代入線性方程,得到聚合物的含量值。三、結(jié)果如圖2所示,色譜圖上保留時(shí)間為24. 827分鐘的吸收峰為法羅培南聚合物的特征 峰,直接將檢測(cè)出的峰面積值代入回歸方程,即可測(cè)得法羅培南聚合物的含量為0. 24%。重復(fù)檢測(cè)5次,結(jié)果見表法羅培南聚合物的峰面積的RSD值為0. 06%,說明本方法 有很好的重現(xiàn)性。實(shí)施例2 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合物含量一、色譜條件同實(shí)施例1二、實(shí)驗(yàn)步驟1、作標(biāo)準(zhǔn)曲線①法羅培南對(duì)照品62.5mg,置于50ml容量瓶中,用水將其稀釋成0. 05、0. 10、 0. 15,0. 20,0. 25,0. 30 和 0. 4mg/ml 的溶液,搖勻;②取各稀釋點(diǎn)對(duì)照品溶液各20ul依次通過凝膠柱,以流動(dòng)相B為流動(dòng)相,在254nm 波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取保留峰面積,以濃度(C)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸,得到標(biāo) 準(zhǔn)曲線和線性方程,計(jì)算回歸系數(shù);③經(jīng)計(jì)算得到回歸方程為C = 57203A+76. 287R2 = 0. 99993、測(cè)定法羅培南鈉聚合物的含量①對(duì)照溶液和供試溶液的配制取法羅培南鈉對(duì)照品31. 25mg至,加純化水配制 成對(duì)照品溶液;取相當(dāng)于法羅培南50mg的法羅培南鈉原料或的制劑置于100ml容量瓶中, 加純化水配制成待測(cè)溶液。②對(duì)照溶液以流動(dòng)相B為流動(dòng)相,過凝膠色譜柱,在254nm波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜 圖,獲取對(duì)照品的峰面積;供試液以流動(dòng)相A為流動(dòng)相,過凝膠色譜柱,記錄色譜圖,獲取聚 合物峰面積。③按照外標(biāo)法計(jì)算公式聚合物的含量值。三、結(jié)果按外標(biāo)法計(jì)算得羅培南聚合物的含量0. 24%。RSD值為0. 05%。實(shí)施例3 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合物含量一、色譜條件儀器美國(guó)Agilent 1100系列高效液相色譜儀;凝膠色譜柱:SephadexG-10,15. 0mm X 400mm ;流動(dòng)相流動(dòng)相A 取NH4C1 0. 54g至1000ml水中,用NaOH調(diào)pH到7. 0流動(dòng)相B 0. 01 %十二烷基硫酸鈉流速1.0ml/min柱溫室溫;
      波長(zhǎng)254nm二、實(shí)驗(yàn)步驟同實(shí)施例1三、結(jié)果按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算得羅培南聚合物的含量0. 25%。RSD值為0. 06%。實(shí)施例4 外標(biāo)法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合物含量一、色譜條件儀器美國(guó)Agilent 1100系列高效液相色譜儀;凝膠色譜柱:SephadexG-10,15. 0mm X 400mm ;流動(dòng)相流動(dòng)相A 取NH4H2P041. 15g至1000ml水中,用NaOH調(diào)pH到7. 0流動(dòng)相B 0. 01 %十二烷基硫酸鈉流速1.0ml/min柱溫室溫;波長(zhǎng)254nm二、實(shí)驗(yàn)步驟同實(shí)施例2三、結(jié)果按外標(biāo)法計(jì)算得羅培南聚合物的含量0. 27%。RSD值為0. 08%。
      權(quán)利要求
      一種測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物雜質(zhì)含量的方法,其特征在于該方法為凝膠色譜法,使用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè),色譜條件為①凝膠色譜柱排阻分子量為600-800道爾頓;②流動(dòng)相具有兩種流動(dòng)相A濃度為0.01-0.2mol/L之間的水相溶液,用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值為6.5-8.5;流動(dòng)相B水或0.005-0.02%之間的十二烷基硫酸鈉溶液或甘氨酸溶液;③柱溫室溫;④流速0.5-1.0ml/min;⑤檢測(cè)波長(zhǎng)210-300nm。
      2.根據(jù)權(quán)利要求書1所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南鈉聚合物含量的方 法,其特征在于,所述的凝膠色譜柱選自葡聚糖凝膠G-IO凝膠色譜柱。
      3.根據(jù)權(quán)利要求書2所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法, 其特征在于,所述的葡聚糖凝膠G-IO凝膠色譜柱,內(nèi)徑為5 20mm ;長(zhǎng)度200 500mm ; 粒度40 60um ;孔徑50 70A ;柱床1. 5 3. 5mL/g。
      4.根據(jù)權(quán)利要求書1所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法, 其特征在于,所述的流動(dòng)相A的水相溶液為NaH2PO4、NH4CL、Na2HPO4、KH2PO4、K2HPO4、NH4H2PO4、 (NH4)2ΗΡ04 一種或兩種以上的混合水溶液。
      5.根據(jù)權(quán)利要求書4所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法, 其特征在于,所述的流動(dòng)相A的水相溶液為NaH2PO4和Na2HPO4的混合水溶液,NaH2PO4的濃 度為 0. 01-0. 2mol/L, Na2HPO4 的濃度為 0. 01-0. 2mol/L。
      6.根據(jù)權(quán)利要求書1所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量的方法, 其特征在于,所述的流動(dòng)相A的pH調(diào)節(jié)劑選自NaOH、磷酸、氨水或HCL。
      7.根據(jù)權(quán)利要求書1-6任一所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量 的方法,其特征在于,它是標(biāo)準(zhǔn)曲線法,包括如下步驟①作標(biāo)準(zhǔn)曲線取含量已知的法羅培南對(duì)照品為對(duì)照,梯度稀釋,以流動(dòng)相B為流動(dòng) 相,過凝膠色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取保留時(shí)間、峰高、峰面積等參數(shù),得 到標(biāo)準(zhǔn)曲線;②標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定法羅培南聚合物含量將待測(cè)原料或制劑用水作為溶劑配制成一定 濃度的溶液,以流動(dòng)相A為流動(dòng)相,過凝膠柱色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取 峰高和峰面積等參數(shù),并將法羅培南聚合物對(duì)應(yīng)的相關(guān)參數(shù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算得到法羅 培南聚合物的含量。
      8.根據(jù)權(quán)利要求書1-6任一所述測(cè)定法羅培南鈉原料及制劑中法羅培南聚合物含量 的方法,其特征在于,它是外標(biāo)法,包括如下步驟①標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍取含量已知的法羅培南對(duì)照品為對(duì)照,梯度稀釋,以流動(dòng)相B 為流動(dòng)相,過凝膠色譜柱,在檢測(cè)波長(zhǎng)下檢測(cè),記錄色譜圖,獲取峰高和峰面積等參數(shù),得到 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍;②外標(biāo)法測(cè)定法羅培南聚合物含量在線性范圍內(nèi)選擇合適的濃度,配制對(duì)照溶液和 樣品溶液,在選定的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以相關(guān)參數(shù)進(jìn)行計(jì)算,得 到法羅培南聚合物的含量。
      全文摘要
      本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域,具體涉及高效液相色譜法測(cè)定法羅培南鈉原料及其制劑中法羅培南聚合物含量的方法。本發(fā)明的測(cè)定方法為凝膠色譜法,使用高效液相色譜檢測(cè),色譜條件為(1)凝膠色譜柱排阻分子量為600~800道爾頓;(2)流動(dòng)相兩種流動(dòng)相,流動(dòng)相ApH值為5.5-8.5,濃度為0.01-0.2mol/L之間的水相溶液;流動(dòng)相B水或0.005-0.02%之間的十二烷基硫酸鈉水溶液或甘氨酸溶液;(3)柱溫室溫(4)流速0.5-1.0ml/min;(5)檢測(cè)波長(zhǎng)210-300nm。本發(fā)明的方法特異性強(qiáng),重復(fù)性好,自動(dòng)化程度高,可以對(duì)法羅培南鈉原料及制劑中的聚合物進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
      文檔編號(hào)C07D499/893GK101852782SQ200910132008
      公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2009年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日
      發(fā)明者趙志全 申請(qǐng)人:魯南制藥集團(tuán)股份有限公司
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