專利名稱：一種葫蘆素b的提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物有效成分的提取與分離，具體涉及一種葫蘆素B的提取分離 方法。
背景技術(shù)：
葫蘆素B是一種分布在多種植物中的葫蘆烷類物質(zhì)，人們?cè)谔鸸?、葫蘆、白泄根等 植物中均有發(fā)現(xiàn)葫蘆素B的分布。但是傳統(tǒng)的葫蘆素B提取技術(shù)主要有乙醇熱提取法、超 聲乙醇提取法等，在這些提取分離方法與技術(shù)中，其基于的技術(shù)原理均是針對(duì)具有生物活 性的目標(biāo)化合物的理化性質(zhì)而采取相應(yīng)的分離方法與技術(shù)，整個(gè)過(guò)程中為一種物理過(guò)程， 并未考慮天然產(chǎn)物的所有化學(xué)成分的綜合利用，因而資源利用率低、產(chǎn)品得率低且由于相 似組分多而使分離難度大。 結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化提取法是指在提取過(guò)程中，先采用一些基于化學(xué)、生物反應(yīng)技術(shù)(如水 解、酶解、微生物轉(zhuǎn)化等)，將與目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)類似的化合物轉(zhuǎn)化成目標(biāo)物，再進(jìn)行相關(guān)的 提取分離，從而提高目標(biāo)化合物的提取得率的一種方法。該方法應(yīng)用于天然產(chǎn)物微量、高值 成分的提取中，不僅可以使原料得到充分的利用，提高得率，同時(shí)也會(huì)使有效成分的分離純 化難度大為降低，從而能降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。 隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，目前絕大部分天然產(chǎn)物中的主要化學(xué)成分已闡明，這使得結(jié) 構(gòu)轉(zhuǎn)化法應(yīng)用于天然產(chǎn)物有效成分的提取分離成為可能。目前，利用結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化法應(yīng)用于天 然產(chǎn)物的合成和對(duì)先導(dǎo)化合物結(jié)構(gòu)修飾的研究較多，但在天然產(chǎn)物有效成分的提取分離方 面的報(bào)道卻較少，而將其作為一種提取的方法或技術(shù)概念運(yùn)用到提取分離中，目前還尚未 見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種葫蘆素B的提取分離方法，通過(guò)將結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化 法方法運(yùn)用到提取中以提高葫蘆素B的提取率，該工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，有效成分的提 取率高。 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
—種葫蘆素B的提取分離方法，包括如下步驟 1)將原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇滲漉乙醇回流提取，提取液濃縮以后，用乙酸乙酯萃 取三次以上，回收乙酸乙酯，即得總葫蘆素提取物； 2)取總葫戸素提取物溶于體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液中，在醋酸存在下進(jìn) 行水解反應(yīng)，充分反應(yīng)后調(diào)節(jié)pH值至中性，濃縮至干；所述醋酸的濃度為0. 1 0. 3mol/L ;
3)步驟2)所得濃縮物經(jīng)純化處理得到葫蘆素B含量在60X以上的葫蘆素B產(chǎn)品。
進(jìn)一步，本發(fā)明所述的純化處理推薦采用如下方法所得濃縮物用體積分?jǐn)?shù)25 45 %的乙醇水溶液溶解，再通過(guò)大孔樹(shù)脂柱層析，以體積分?jǐn)?shù)50 60 %的乙醇水溶液洗 脫，收集洗脫液，濃縮得到葫蘆素B含量在60%以上的葫蘆素B產(chǎn)品。本方法純化制得的葫蘆素B產(chǎn)品，其中葫蘆素B的質(zhì)量含量在60%以上，符合中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī) 定。所述的大孔樹(shù)脂優(yōu)選XAD-16。 本發(fā)明步驟2)中采用酸性水解，其目的是將其中的葫蘆素B葡萄糖苷轉(zhuǎn)化為葫蘆 素B，以增加葫蘆素B的量。所述的酸性水解在體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液中進(jìn)行， 當(dāng)乙醇水溶液的體積分?jǐn)?shù)低于25%時(shí)，不利于總葫蘆素提取物的溶解；當(dāng)乙醇水溶液的體 積分?jǐn)?shù)高于45%時(shí)，則會(huì)影響水解效率。最優(yōu)選酸性水解在體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇水溶液中 進(jìn)行。 步驟2)所述的水解反應(yīng)推薦在70 9(TC進(jìn)行2 5小時(shí)，優(yōu)選在70 8(TC進(jìn) 行2小時(shí)。 步驟2)所述的水解反應(yīng)體系中，優(yōu)選醋酸濃度為0. 1 0.2mol/L，最優(yōu)選 0.lmol/L。 步驟2)水解反應(yīng)中所述的體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液的體積用量以總葫蘆 素提取物的質(zhì)量計(jì)推薦為50 100ml/g。 本發(fā)明步驟l)中，滲漉或回流提取使用的乙醇，優(yōu)選體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇。萃 取劑乙酸乙酯的體積推薦為濃縮后的提取物體積的3 4倍。
本發(fā)明具體推進(jìn)所述的方法按照如下進(jìn)行 1)將原料甜瓜蒂粉碎，用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇滲漉或者體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇回 流提取，提取液濃縮以后，用體積為濃縮后的提取物體積3 4倍的乙酸乙酯萃取三次，回 收乙酸乙酯，再濃縮，即得總葫蘆素提取物； 2)取總葫蘆素提取物溶于體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液中，所述體積分?jǐn)?shù) 25 45%的乙醇水溶液的體積用量以總葫蘆素提取物的質(zhì)量計(jì)推薦為50 100ml/g，在 0. 1 0. 2mol/L醋酸存在下于70 8(TC進(jìn)行水解反應(yīng)2小時(shí)，然后調(diào)節(jié)pH值至中性，濃 縮至干； 3)步驟2)所得提取物用體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液溶解，再通過(guò)XAD-16 大孔樹(shù)脂柱層析，以體積分?jǐn)?shù)50 60%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮得到葫蘆素B 含量在60%以上的葫蘆素B產(chǎn)品。 本發(fā)明與現(xiàn)有的提取分離葫蘆素B的技術(shù)相比，所具有的優(yōu)點(diǎn)在葫蘆素B的提取 過(guò)程中，通過(guò)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化將葫蘆素B的結(jié)構(gòu)類似物(如葫蘆素B葡萄糖苷)轉(zhuǎn)化為葫蘆素B， 提高了葫蘆素B的提取率，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便。
具體實(shí)施例 下面以具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限 于此 實(shí)施例1 :總葫蘆素提取物的制備 將原料甜瓜蒂lkg，粉碎，用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇80°C回流提取3次，每次1小時(shí)，提 取液濃縮以后，用3-4倍體積的乙酸乙酯萃取三次，取乙酸乙酯萃取液再濃縮，得總葫蘆素 提取物138. 6g。
實(shí)施例2 取總葫戸素提取物O. 58g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容
至100ml 。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量為60. 39mg。 同樣方法做對(duì)照試驗(yàn)，取總葫蘆素提取物0.58g，加體積分?jǐn)?shù)30X乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ra至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫戸素B在總葫戸素提取物含量為54. 63mg。 實(shí)施例3 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. 2mol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配
制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容
至100ml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量為57. 53mg。 同樣方法做對(duì)照試驗(yàn)，取總葫蘆素提取物0. 58g，加體積分?jǐn)?shù)30%乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ra至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫戸素B在總葫戸素提取物含量為54. 63mg。 實(shí)施例4 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. 3mol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配
制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容
至100ml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量為56. 72mg。 同樣方法做對(duì)照試驗(yàn)，取總葫蘆素提取物0.58g，加體積分?jǐn)?shù)30X乙醇水溶液
50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ra至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容至
lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫戸素B在總葫戸素提取物含量為54. 63mg。 實(shí)施例5 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至100ml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量58. 86mg。
實(shí)施例6 取總葫戸素提取物O. 56g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流5h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至100ml 。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量56. 32mg。
實(shí)施例7 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴70°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量58.48mg。
實(shí)施例8 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量59.04mg。
實(shí)施例9 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴90°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至50ml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量56. 35mg。
5
實(shí)施例10 取總葫戸素提取物O. 5g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至100ml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量為59. 32mg。
另取總葫蘆素提取物0.5g，用甲醇溶解定容至lOOml，樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫 蘆素B在總葫蘆素提取物含量為54. 56mg。水解后葫蘆素B的含量比未經(jīng)過(guò)水解提高了 8. 72%。 實(shí)施例11 取總葫戸素提取物1.4g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ffl至7，減壓濃縮至干，用體積分?jǐn)?shù) 30%乙醇溶解，再通過(guò)大孔樹(shù)脂XAD-16柱層析，用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇洗脫至流出液淡黃 色，開(kāi)始收集并富集，濃縮得到0. llg，其中葫蘆素B的含量占60. 33%。
實(shí)施例12 取總葫戸素提取物0.8g，加0. lmol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ffl至7，減壓濃縮至干，用體積分?jǐn)?shù) 30%乙醇溶解，再通過(guò)大孔樹(shù)脂XAD-16柱層析，用體積分?jǐn)?shù)50%乙醇洗脫至流出液淡黃 色，開(kāi)始收集并富集，濃縮得到72. 6mg，其中葫蘆素B的含量占65. 34%。
對(duì)比實(shí)施例1 取總葫戸素提取物O. 53g，加0.4mol/L醋酸(用體積分?jǐn)?shù)30 %乙醇水溶液配 制)50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)PH至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容 至100ml 。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫蘆素B在總葫蘆素提取物含量為46. 86mg。
同樣方法做對(duì)照試驗(yàn)，取總葫蘆素提取物0.58g，加體積分?jǐn)?shù)30X乙醇水溶液 50ml，在水浴80°C ，加熱回流2h，回流結(jié)束后調(diào)節(jié)ra至7，減壓濃縮至干，再用甲醇定容至 lOOml。樣品經(jīng)HPLC檢測(cè)，測(cè)得葫戸素B在總葫戸素提取物含量為54. 63mg。
權(quán)利要求
一種葫蘆素B的提取分離方法，包括如下步驟1)將原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇滲漉或者乙醇回流提取，提取液濃縮以后，用乙酸乙酯萃取三次以上，回收乙酸乙酯，即得總葫蘆素提取物；2)取總葫蘆素提取物溶于體積分?jǐn)?shù)25～45％的乙醇水溶液中，在醋酸存在下進(jìn)行水解反應(yīng)，充分反應(yīng)后調(diào)節(jié)pH值至中性，濃縮至干；所述醋酸的濃度為0.1～0.3mol/L；3)步驟2)所得濃縮物經(jīng)純化處理得到葫蘆素B含量在60％以上的葫蘆素B產(chǎn)品。
2. 如權(quán)利要求1所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟3)所述的純化處理 采用如下方法所得濃縮物用體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液溶解，再通過(guò)大孔樹(shù)脂柱層 析，以體積分?jǐn)?shù)50 60%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮得到葫蘆素B含量在60% 以上的葫蘆素B產(chǎn)品。
3. 如權(quán)利要求2所述的葫蘆素B的提取方法，其特征在于所述的大孔樹(shù)脂為XAD-16。
4. 如權(quán)利要求1 3之一所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟2)所述的 水解反應(yīng)在70 90。C進(jìn)行2 5小時(shí)。
5. 如權(quán)利要求4所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟2)所述的水解反應(yīng) 在70 8(TC進(jìn)行2小時(shí)。
6. 如權(quán)利要求4所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟2)所述醋酸的濃度 為0.1 0. 2mol/L。
7. 如權(quán)利要求4所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟2)所述乙醇水溶液 的體積分?jǐn)?shù)為30%。
8. 如權(quán)利要求1 3之一所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于步驟2)水解 反應(yīng)中所述的體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液的體積用量以總葫蘆素提取物的質(zhì)量計(jì)為 50 100ml/g。
9. 如權(quán)利要求1所述的葫蘆素B的提取分離方法，其特征在于所述的提取分離方法按 照如下進(jìn)行1) 將原料甜瓜蒂粉碎，用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇滲漉或者體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇回流提 取，提取液濃縮以后，用體積為濃縮后的提取物體積3 4倍的乙酸乙酯萃取三次以上，回 收乙酸乙酯，即得總葫蘆素提取物；2) 取總葫蘆素提取物溶于體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液中，所述的體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液的體積用量以總葫蘆素提取物的質(zhì)量計(jì)為50 100ml/g，在0. 1 0. 2mol/L的醋酸存在下于70 8(TC進(jìn)行水解反應(yīng)2小時(shí)，然后調(diào)節(jié)pH值至中性，濃縮至 干；3) 步驟2)所得濃縮物用體積分?jǐn)?shù)25 45%的乙醇水溶液溶解，再通過(guò)XAD-16大孔 樹(shù)脂柱層析，以體積分?jǐn)?shù)50 60%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮得到葫蘆素B含量 在60X以上的葫戸素B產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種葫蘆素B的提取分離方法，包括如下步驟1)將原料甜瓜蒂粉碎，用乙醇滲漉或者乙醇回流提取，提取液濃縮以后，用乙酸乙酯萃取三次以上，回收乙酸乙酯，即得總葫蘆素提取物；2)取總葫蘆素提取物溶于25～45％乙醇水溶液中，在醋酸存在下進(jìn)行水解反應(yīng)，充分反應(yīng)后調(diào)節(jié)pH值至中性，濃縮至干；然后所得提取物經(jīng)純化處理得到葫蘆素B含量在60％以上的葫蘆素B產(chǎn)品；所述醋酸的濃度為0.1～0.3mol/L。本發(fā)明與現(xiàn)有的提取分離葫蘆素B的技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)提取過(guò)程中通過(guò)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化將葫蘆素B的結(jié)構(gòu)類似物(如葫蘆素B葡萄糖苷)轉(zhuǎn)化為葫蘆素B，提高了葫蘆素B的提取率，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便。
文檔編號(hào)C07J9/00GK101759746SQ20091015483
公開(kāi)日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月24日
發(fā)明者單偉光, 單海峰, 占扎君, 唐嵐 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)