專利名稱：一種新結(jié)構(gòu)類型化合物蓮子心新堿及其分離鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新化合物蓮子心新堿及其提取分離和 鑒定方法。
二背景技術(shù)：
蓮子心為常用中藥，又名蓮薏、苦薏、薏，來源于睡蓮科蓮屬植物蓮AfeAy/^o/wci/ei^ Gaertn干燥的種子幼葉及胚根。傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為，蓮子心具有清心、去熱、止血、澀精 的功效，主治心煩、口渴、吐血、遺精、目赤腫痛、高血壓等癥。現(xiàn)代藥理研究表明，蓮子 心所含生物堿有較強(qiáng)的降壓作用，降壓機(jī)理主要是外周作用，讓機(jī)體釋放組織胺，使外周血 管擴(kuò)張，其次與神經(jīng)因素也有關(guān)；蓮子心所含生物堿還能對(duì)抗腎上腺素所致家兔心律失常、 烏頭堿所致大鼠心律失常、哇巴因所致豚鼠心律失常及結(jié)扎大鼠冠脈復(fù)灌的心律失常等；蓮 子心所含的去甲基衡州烏藥堿(demethylcoclaurine)則具有顯著的平滑肌松弛作用。最近
有一項(xiàng)發(fā)明專利己獲得授權(quán)，它公開了一種蓮子心有效部位的提取方法，這種蓮子心有效部 位具有提高機(jī)體胰島素敏感性、改善代謝綜合癥的作用(潘揚(yáng)，蔡寶昌，李澤友，等. 一種
蓮子心有效部位提取物及其用途.專利CN1314397C， 2007—05—09)。
根據(jù)有關(guān)植物蓮生物堿類化學(xué)成分研究文獻(xiàn)的報(bào)道，蓮子心所含生物堿主要為單芐基異 喹啉和雙節(jié)基異喹啉兩類，包括荷葉堿(nuciferine)、前荷葉堿(pronuciferine)、蓮心季 銨堿(lorusine)、甲基紫堇杷靈(methylcorypalline )、去甲基衡州烏藥堿 (demethylcoclaurine)、 亞美罌粟堿(armepavine)、 蓮心堿(liensinine )、 異蓮心堿 (isoliensinine)、甲基蓮心堿(neferine)等[張弦，潘揚(yáng).植物蓮中生物堿類成分的研 究概況.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2002， 18 (6): 382 384]。
目前尚無有關(guān)屬于蓮子心中三芐基異喹啉苯醚類新結(jié)構(gòu)類型化合物蓮子心新堿(英文名 neoliensinine)的研究報(bào)道。
三
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蓮子心中新結(jié)構(gòu)類型生物堿蓮子心新堿；本發(fā)明的另一個(gè)目 的在于提供一種新化合物蓮子心新堿的提取、分離、制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提 供一種新化合物蓮子心新堿的結(jié)構(gòu)鑒定方法。本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的-
一種新結(jié)構(gòu)類型生物堿蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:<formula>formula see original document page 6</formula>本發(fā)明化合物還可以制備成以上述結(jié)構(gòu)式為母體化合物的衍生物或其鹽、衍生物鹽。其 中該化合物的衍生物或其鹽、衍生物鹽可以但不限于如下八種
A.該化合物2—NCH3、 2'—NCH3和2"—NCH3位甲基分別或同時(shí)發(fā)生去甲基化，然后進(jìn)一 步進(jìn)行烴基化,生成2_N、 2'—N和2"—N位乙基、丙基、異丙基、丁基、烯丙基等直鏈烴 基；或是環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等環(huán)狀烴基；或是e —氟乙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、
苯甲基、吡啶甲基、呋喃甲基、e—苯基乙基、a—甲基芐基、烷氧甲酰甲基、吡啶甲基等
取代烴基類化合物，示例結(jié)構(gòu)式為<formula>formula see original document page 7</formula> 其中R、 R，、 R"=甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、烯丙基等直鏈烴基；或是環(huán)戊基、 環(huán)己基、環(huán)庚基等環(huán)狀烴基；或是e—氟乙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基、苯甲基、吡啶甲 基、呋喃甲基、e—苯基乙基、a—甲基芐基、垸氧甲酰甲基、吡啶甲基等(注意R、 R'、 R"不能同時(shí)為甲基)。
B.該化合物及A所述衍生物19，位酚羥基垸基化，得到19，位甲醚、乙醚、丙醚、異丙 基醚、苯醚衍生化合物，示例結(jié)構(gòu)式為其中R =甲基、乙基、丙基、異丙基、苯基。
C.該化合物及A所述衍生物19，位酚羥基與Na+、 K+、 Ca2+、 Mg2+、 Fe2+、 Fe3+、 Cu2+、 Zn: 等金屬離子結(jié)合生成金屬鹽衍生物，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為
其中R =甲基、乙基、丙基、異丙基、苯基。D.該化合物及A所述衍生物19，位酚羥基與酸、酸酐或酰鹵生成酯類衍生物，如與甲酸、 乙酸或乙酸酐、丙酸或丙酸酐、丁酸或丁酸酐、丁二酸或丁二酸酐、苯甲酸或苯甲酸酐等小 分子有機(jī)酸、酸酐或酰鹵生成有機(jī)酸酯，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為-
如與棕櫚酸、亞油酸、月桂酸等大分子有機(jī)酸生成有機(jī)酸酯，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為:其中R =棕櫚酸基、亞油酸基、月桂酸基。
如與硫酸、硝酸、磷酸、亞硝酸等含氧無機(jī)酸反應(yīng)，生成無機(jī)酸酯，示例衍生物結(jié)構(gòu)式
為
5"
其中R = S03H基、N02基、P03H2基、N0基。E.該化合物及A所述衍生物可發(fā)生分子間脫水，生成醚衍生物，示例結(jié)構(gòu)式為-
<formula>formula see original document page 11</formula>F.該化合物及上述A E所述衍生物2—NCH3、 2'—NCH3和2"—NCH3位可分別或同時(shí)脫去 側(cè)鏈(甲基)，生成衍生物，示例結(jié)構(gòu)式為G.該化合物及上述A F所述衍生物苯環(huán)氫原子可分別或同時(shí)被磺化劑濃硫酸、發(fā)煙硫
酸直接磺化，發(fā)生親電取代反應(yīng)，生成磺化產(chǎn)物，示例衍生物結(jié)構(gòu)式為
H.該化合物及上述A G所述衍生物可與鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、醋酸、蘋果酸、枸
櫞酸、酒石酸、丁二酸等生成鹽類衍生物，示例結(jié)構(gòu)式為蓮子心新堿的理化性質(zhì)為淡黃色結(jié)晶物質(zhì)，熔點(diǎn)為91.1 91.6 °C，易溶于苯、乙醚、 氯仿、醋酸乙酯，不溶于水。
本發(fā)明新化合物蓮子心新堿的分離方法為
選用市售睡蓮科蓮屬植物蓮yVe7〃歷力o ""w'/era Gaertn干燥的種子幼葉及胚根，或新鮮 采集的蓮或同屬其他植物的種子幼葉及胚根或其他部位為原料，經(jīng)過或不經(jīng)過堿化用正丁醇、 丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或它們的至少兩種混合液為溶劑提取；或用酸性水、 甲醇、乙醇或它們的至少兩種混合液為溶劑提取，回收溶劑后將提取物通過選自酸溶堿沉法 一有機(jī)溶劑萃取、等度PH萃取法、兩相溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、硅膠柱層析法、反相 柱層析法或凝膠柱層析法的一種或多種方式分離，用水、甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮、醋酸 乙酯、氯仿、乙醚、石油醚、正己烷或它們的至少兩種混合液為溶劑洗脫，采用薄層層析法、 碘化鉍鉀顯色法檢識(shí)，合并部分洗脫液，重結(jié)晶、干燥后得到蓮子心新堿。
根據(jù)本發(fā)明，對(duì)原料進(jìn)行堿化時(shí)，采用的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水、石灰乳， 且配成濃度范圍為1 10%水溶液，根據(jù)堿溶液的濃度不同選用按原料重量1/ 10 1/ 2的 比例加入并拌勻；采用酸性溶劑進(jìn)行提取時(shí)調(diào)pH 2 5，所用的酸包括鹽酸、硝酸、硫酸、 磷酸。
根據(jù)本發(fā)明，對(duì)原料進(jìn)行提取是在室溫或加熱狀態(tài)下，采用冷浸、滲漉、煎煮、加熱回 流、索氏提取器提取、超聲提取、微波提取、高壓提取、超臨界提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。其中，優(yōu)選75 90%乙醇水溶液室溫浸泡4 12小時(shí)，加熱回流提取1 3 次，每次提取0.5 5小時(shí)。
根據(jù)本發(fā)明，所用的酸溶堿沉一有機(jī)溶劑萃取法中酸溶所用的酸為鹽酸、硝酸、硫酸或 磷酸，調(diào)pH 2 5，溶解可以在室溫、加熱狀態(tài)下，采用攪拌法、機(jī)械振蕩法、超聲波振蕩 法；堿沉所用堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水，調(diào)pH8 11，助沉劑為氯化鈉、氯化鉀、氯 化銨、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸銨，沉淀可以在室溫、0 10。C狀態(tài)下，放置時(shí)間為2 10小時(shí)。
根據(jù)本發(fā)明，將酸溶堿沉液用乙醚、氯仿、醋酸乙酯萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可 以是多次。合并萃取液，低溫減壓濃縮。合并有機(jī)相萃取液，用水、甲醇、乙醇萃取，萃取 次數(shù)可以是一次，也可以是多次。棄去水相(雜質(zhì))的分離出來，將有機(jī)相低溫減壓濃縮。 其中，優(yōu)選用2 10%硫酸水溶液調(diào)pH 3 4，超聲波振蕩法溶解，過濾；濾液加氨水調(diào) pH9 10， 1(TC下放置0.5 1小時(shí)，用氯仿萃取3 5次，每次萃取0.5 2小時(shí)，合并氯仿 層，用水萃取3 5次，每次萃取0.5 2小時(shí)，棄去水層，氯仿層低溫減壓濃縮至干。
根據(jù)本發(fā)明，所用的等度pH萃取法為將提取液或提取物用乙醚、氯仿、醋酸乙酯分散 溶解，用0.4 4%氫氧化鈉水溶液(使成鹽)萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。 其中，優(yōu)選將提取物用氯仿分散溶解，用1 2%氫氧化鈉水溶液萃取，3 5次，每次萃取 0.5 2小時(shí)，合并萃取液，用2 10%硫酸水溶液調(diào)pH 3 4，過濾；濾液加氨水調(diào)pH 9 10， 1(TC下放置0.5 1小時(shí)，用氯仿萃取3 5次，每次萃取0.5 2小時(shí)，合并氯仿層，用 水萃取3 5次，每次萃取0.5 2小時(shí)，棄去水層，氯仿層低溫減壓濃縮至干。
根據(jù)本發(fā)明，所用的大孔樹脂吸附法中所用的樹脂為聚苯乙烯型吸附樹脂，洗脫溶劑選 自水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮或它們的至少兩種混合液，洗脫方法可以是等度洗脫，也 可以是梯度洗脫。
根據(jù)本發(fā)明，所用的大孔樹脂為AB—8型大孔吸附樹脂、D101型大孔吸附樹脂、D4020 型大孔吸附樹脂、AKS—W型大孔吸附樹脂、HP—2—MG型大孔吸附樹脂、S—8型大孔吸附樹 脂、HZ—806型大孔吸附樹脂等，洗脫溶劑用水、甲醇、乙醇、丙酮或它們的至少兩種混合 液，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。其中大孔樹脂吸附法優(yōu)選為將提取 液或提取物用水、甲醇、乙醇或它們的至少兩種混合液分散溶解，上清液或過濾液通過大孔 吸附樹脂，用水或5 10%的甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮水溶液進(jìn)行清洗以除去雜質(zhì)，清洗 液用量為大孔樹脂體積的2 5倍；再用20 90%的甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮水溶液進(jìn)行 洗脫，洗脫液用量為大孔樹脂體積的3 9倍，收集洗脫液，回收溶劑，即得含有蓮子心新堿 的部位。
在本發(fā)明所用的硅膠柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用填料為40 400目(37 420 urn)硅膠，用正已烷、石油醚、乙醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、異丙醇、乙醇、甲醇或 它們的至少兩種混合液為洗脫劑，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
在本發(fā)明所用的反相柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用填料為十八垸基鍵合相 或八垸基鍵合相，洗脫溶劑為水、甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇、四氫呋喃或它們的至少兩種 混合液，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
在本發(fā)明所用的凝膠柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用凝膠過濾填料主要為葡 聚糖凝膠(S印hadex) LH—20系列，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水異丙醇、含水 丙酮組成的混合溶劑，洗脫溶劑濃度為5 100%，分步收集，根據(jù)檢測(cè)情況，合并部分流份， 洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
在本發(fā)明所用的凝膠柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用凝膠過濾填料主要為多 孔半堅(jiān)硬凝膠樹脂Toy叩earlHW—40系列，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水異丙醇、 含水丙酮組成的混合溶劑，洗脫溶劑濃度為5 100%，分步收集，根據(jù)檢測(cè)情況，合并部分 流份，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
在本發(fā)明合并洗脫液后，可以采用甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、二氧六 環(huán)、石油醚、苯、正已垸或它們的至少兩種混合液為溶劑進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，重結(jié)晶可以是 一次，也可以是多次。
本發(fā)明新化合物蓮子心新堿的結(jié)構(gòu)鑒定方法為
淡黃色結(jié)晶物質(zhì)，在酸性溶液中與碘化汞鉀試劑(Mayer's reagent)反應(yīng)生成白色或淡 黃色沉淀、與碘化鉍鉀試劑(Dragendorff，s reagent)反應(yīng)生成桔紅色沉淀、與硅鎢酸試劑 (Bertrand reagent)反應(yīng)生成灰白色沉淀，或在中性或酸性溶液中與磷鉬酸試劑反應(yīng)生成 鮮黃色或棕黃色沉淀；或在中性溶液中與苦味酸試劑(Hager，s reagent)反應(yīng)生成黃色結(jié)晶。 在酸性溶液中與三氯化鐵溶液反應(yīng)顯藍(lán)紫色。提示本發(fā)明新化合物蓮子心新堿為酚性生物堿 類化合物。
薄層層析色譜以0.3M羧甲基纖維鈉水溶液為粘合劑的硅膠G薄層板層析，在展開缸 內(nèi)預(yù)飽和15分鐘，氯仿—丙酮一二乙胺(5: 4: 1)展開，Rf值約為0.70。在薄層層析中， 該化合物以在紫外光(254 nm)下觀察、改良碘化鉍鉀試劑噴霧和碘蒸氣薰三種顯色方法， 蓮子心新堿分別呈現(xiàn)藍(lán)色熒光斑點(diǎn)、橙紅色斑點(diǎn)和黃棕色斑點(diǎn)。(圖l)
HPLC歸一化純度分析以十八烷基硅膠鍵合相十八垸基硅烷鍵合硅膠為填空劑，流動(dòng)相 為乙腈_0.04 mo1/ L十二垸基磺酸鈉水溶液一O. 2 mo1/ L醋酸水溶液(70: 25: 5)，流速 為1.2ml/min，柱溫30°C，檢測(cè)波長為282 nm。在此條件下，蓮子心新堿"值約為11. 82 min，理論板數(shù)按蓮子心新堿峰計(jì)算不低于5000，并達(dá)到基線分離(分離度大于1.5)。歸一化分析純度大于95.0%。(圖2)
紫外光譜乂隨咖222.4 (log s = 5.37)， 282.0 (log s = 4.87)，前者是芳香核有 發(fā)色團(tuán)取代時(shí)出現(xiàn)的K吸收帶，后者是芳香族化合物的B特征吸收帶(圖3)。
紅外光譜、axcm-': 3431 [brs. ， v (0—H)]; 2934， 2835， 2779為CH、 CH2、 013的伸縮 振動(dòng)；1611， 1511， 1464為苯環(huán)骨架振動(dòng)[v (C=C)]; 1249， 1214 [ v (C—O—C)]，提 示新化合物存在羥基、苯環(huán)系統(tǒng)、醚鍵，而沒有羰基的存在(圖4)。
質(zhì)譜(T0F—MS) m/z: ESI正離子模式，質(zhì)子化/質(zhì)子化作用得到雙電荷分子離子[M + H] 2+的豐度比單電荷[M + H] +的豐度高許多，其m/z測(cè)定精確值為514. 7468，表明在該條 件下形成的雙電荷分子離子要比單電荷分子離子穩(wěn)定得多。經(jīng)校正后所得到的m/z 1028. 5033 為通過質(zhì)子化作用獲得的單電荷分子離子，通過工作站數(shù)據(jù)庫檢索，推斷新化合物分子式為 C63H69N3010，分子量為1027.49。(圖5)
"CNMR譜(in CDC13， 125 MHz, S ppm， TMS):可見56條譜線，但由于共在7處信號(hào) S 145.509、 S 130.544、 S 130.449、 S 130.420、 S 113.613、 S 113.378、 S 40,101 相互重疊，因此新化合物應(yīng)有63個(gè)碳。(圖6)
DEPT譜(in CDC13， S卯m):比較13CNMR與DEPT譜，發(fā)現(xiàn)這63個(gè)碳分別屬于9個(gè)甲 基、9個(gè)亞甲基、23個(gè)次甲基、22個(gè)季碳原子。在9個(gè)甲基碳中，其中6個(gè)歸屬于氧甲基一 0CH3 ( S 55,785， S 55.748， S 55.704， S 55.594， S 55.066， S 55.029)， 3歸屬于 氮甲基一NCH3(S 42.720， S 42.676， S 42.507)。在9個(gè)亞甲基中，其中6個(gè)取代芳?xì)?位置，直接連接在苯環(huán)上(S 47.378， S 47.040， S 46.688， S 40.790， S 40.101， S 40.101)。在23個(gè)次甲基中，其中20個(gè)峰落在芳環(huán)區(qū)，僅有3個(gè)屬于連接在苯環(huán)上脂肪碳質(zhì) 子(S 64.558， S 64.536， S 64.492)。在22個(gè)季碳原子中，并未發(fā)現(xiàn)存在羰基碳，且均 為芳碳的貢獻(xiàn)，其中有13個(gè)屬于連氧原子的芳季碳，位于S 157.91至S 142.245之間低 場(chǎng)區(qū)。(圖7)
'HNMR譜(inCDCl3， 500 MHz， S ppm， TMS): S 6. 931至S 6. 093之間低場(chǎng)區(qū)按相對(duì) 積分強(qiáng)度計(jì)算有20芳環(huán)氫，與以上該區(qū)域碳數(shù)目正好相吻合；信號(hào)S 2.477 (3H，單峰)、 2.414 (3H，單峰)、S 2.455 (3H，單峰)示有3個(gè)一NCH3;信號(hào)S 3.786 (3H，單峰)、S 3.747 (3H，單峰)、S 3.672 (3H，單峰)、S 3.667 (3H，單峰)、S 3.665 (3H，單峰)、 S 3.586 (3H,單峰)示有6個(gè)一0CH3。與雙節(jié)基異喹啉類化合物(bisbenzylisoquinoline， BBI)蓮心堿、異蓮心堿和甲基蓮心堿結(jié)構(gòu)[潘揚(yáng)，楊光明，蔡寶昌.核磁共振譜分析蓮子心 中酚性生物堿的結(jié)構(gòu).南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2005， 21 (6): 371 373]相比，
16新化合物不但增加了 1個(gè)單元單芐基異喹啉的連接，而且還應(yīng)包含1個(gè)苯醚基團(tuán)，屬于三節(jié) 基異喹啉苯醚類新結(jié)構(gòu)類型的化合物(tribenzylisoquinoline， TBI)。(圖8)
HSQC譜(inCDCl3， S ppm):在S 3.786， S 3.747， S 3.672， S 3.667， S 3.665， S 3.586處，顯示有6個(gè)—0CH3。在S 2.477， 2.455， 2. 414處，表明有3個(gè)一仏。其余 峰的相對(duì)積分強(qiáng)度之和為15個(gè)，與飽和脂肪區(qū)氫—CH2、 一CH的數(shù)目相一致，其中分別表示 6個(gè)一CH2和3個(gè)一CH。 'HNMR譜可以確定的質(zhì)子個(gè)數(shù)為62個(gè)，對(duì)照T0F—MS得出的分子式應(yīng) 有63個(gè)氫，由于在酸性溶液中與三氯化鐵溶液反應(yīng)顯藍(lán)紫色提示其屬于酚性生物堿，因此還 有l(wèi)個(gè)質(zhì)子歸屬于酚羥基(一0H)。雖有少部分質(zhì)子信號(hào)存在完全或部分重疊，但對(duì)它們?cè)诜?形或偶合常數(shù)等方面的辨別影響不大，因此通過HSQC譜關(guān)聯(lián)分析基本可以確定其與碳的一一 對(duì)應(yīng)關(guān)系。(圖9)
'H-COSY譜(in CDC13， S ppm): 20芳環(huán)氫除6個(gè)以單峰形式出現(xiàn)外，有14個(gè)Ar—H 以雙峰的形式存在。分成四組，且二二相似有二組分別在S 6.885 (J = 8.5Hz)， S 6.640
(J = 8.55 Hz)處以及在S 6.922 (J = 8.85 Hz)， S 6.713 (J = 8.55 Hz)處，均表現(xiàn) 為AA'、 BB，系統(tǒng)(1， 4—二取代苯環(huán)系統(tǒng))，分別為C環(huán)H-11， H-15和H_12， H-14以及C" 環(huán)H-11"， H-15"和H-12"， H-14"之間相互偶合引起。H-12， H-14由于C-13—0CH3的取代，以 及H-12"， H-14"由于C-13"—0CH3的取代，前二者出現(xiàn)在比H-ll， H-15，后以及二者出現(xiàn)在 比H-11"， H-15"更高場(chǎng)區(qū)。另二組則分別以雙二重峰信號(hào)5 6.640 (H-15，， J = 8. 55 Hz， 1.8 Hz)和S 6.452 (H-21，， J = 8. 55Hz， 2. 75 Hz)為中心以出現(xiàn)在C，環(huán)和D，環(huán)中，H-15， 既與H-14， (S 6.763, d， J = 8. 25 Hz)發(fā)生鄰位偶合，又與H-ll， (S 6.597， d， J = 1. 8 Hz)發(fā)生間位偶合；H-21，既與H-20' (S 6.819， d， J = 8. 85 Hz)發(fā)生鄰位偶合，又與H-17，
(S 6.493， d， J = 2.75 Hz)發(fā)生間位偶合。這一推斷在'H」H COSY譜中則得到進(jìn)一步證 實(shí)可見H-11 (—CH)， H-11" (—CH)與H-12 (—CH)， H-12" (—CH)的相互相關(guān)點(diǎn)，說明 它們分別兩兩相連；可見H-ll， (一CH)與H-15' (—CH)的相互相關(guān)點(diǎn)，說明它們兩兩相連； 可見H—14 (—CH)， H—14， (一CH)， H-14" (一CH)與H-15 (—CH)， H-15， (一CH)， H—15"(— CH)的相互相關(guān)點(diǎn)，說明它們分別兩兩相連；可見H-17， (一CH)與H-21， (一CH)的相互相 關(guān)點(diǎn)，說明它們兩兩相連；可見H-20' (—CH)與H-21' (—CH)的相互相關(guān)點(diǎn)，說明它們兩 兩相連。在'H」H COSY譜中，還可見亞甲基和次甲基氫的化學(xué)位移值分為三組即B環(huán)、B， 環(huán)、B"環(huán)三個(gè)組，可見H-1， H-1，， H-1" [一CH， S 3.619 (IH， m); S 3.586 (2H， m)]與 H-9， H—9，， H-9" [—CH" S 3.008 (1H， m)， S 2.931 (1H, dd， J = 14.05 Hz， 5.5Hz); S 3.008 (1H， m)， S 2.673 (1H， m); S 2.751 (2H， m)]的相互相關(guān)點(diǎn)，說明它們分別 兩兩相連。同時(shí)H-3， H-3，, H-3" [一CH" S 2.686 (2H， m); 5 2.720 (2H， m); S 3.155(1H， m)， S 3.120 (m， m)]與H—4， H—4，， H—4" [—CH2， S 2.805 (2H， m); 5 2.528 (2H， m)， S 2.477 (2H， m); 5 2.618 (1H， m)， S 2.580 (1H， m)]的相互相關(guān)點(diǎn)，證 實(shí)它們分別兩兩相連并存在同碳偶合現(xiàn)象。結(jié)合HSQC譜來看，與氫相連碳的化學(xué)位移也分成 歸屬于B環(huán)、B，環(huán)、B"環(huán)三個(gè)組;C-9 (S 40.101)， C_9， (S 40.790)， C-9" (S 40.101), C-9，與C-9、 C-9，，的AS 一樣，均約為0.7 ppm; C-4、 C-4'、 C-4" (S 26.089， S 25.128， S 25.965)雖尚不能明確定位。但三者極差不超過1. 0 ppm,空間位阻明顯較小，因此C-1、 C-l，、 C-l"的絕對(duì)構(gòu)型為R、 S、 R型(Koike L, Marsaioli A J, Riiveda E A, et al. Stereochemical aspects and WCNMR spectroscopy of the berbamine class of bisbenzyl isoquinoline alkaloids. Tetrahedron Lett, 1979, 39: 3765 3768)。(圖10)
HMBC譜(inCDCl3， 5 ppm):可見S 64.558， S 64.536， S 64. 492與H-3 (—CH2)， H-3， (一CH2)， H-3" (—CH2)的相關(guān)點(diǎn)；與H-8 (—CH)， H_8, (—CH)， H_8" (—CH)的相關(guān) 點(diǎn)；與C-2—NCH" C-2，—線，C-2"—NCH3的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這3個(gè)碳?xì)w屬于Ol， C-l，或C-l"。 可見S 47.378， S 47.040， S 46. 688與C-2—NCH3， C-2，一線，C-2"—NCH3的相關(guān)點(diǎn)， 證實(shí)這3個(gè)碳?xì)w屬于C-3， C-3，或C-3"?？梢奡 26.089， 5 25.965， S 25. 128與H-5， H-5'， H-5"的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這3個(gè)碳?xì)w屬于C-4，C-4，或C-4，，。可見S 130.544， S 129.224， 5 130.302 與H-5， H-5'， H-5"的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這3個(gè)碳分別歸屬于C-4a， C-4，a， C-4"a?？梢奡 149. 075， S 147.351， 5 149.155與H-5， H_5，， H-5"的相關(guān)點(diǎn)；與H-8， H-8，， H-8"的相關(guān)點(diǎn)；與C-6 —0CH3， C-6，一0CH3， C-7"—0CH3的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這3個(gè)碳分別歸屬于C_6， C_6，， C-6"，并 指認(rèn)出H-5，H-5，，H-5"與H-8，H-8'，H-8，,的歸屬于?？梢奡 131.535， S 125.974， S 130.544 與H-8， H-8'， H-8"的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這3個(gè)碳分別歸屬于C-8a， C-8'a， C-8"a?？梢奡 131. 681， S 131.395與H-9， H-9"的相關(guān)點(diǎn);與H-12， H-12"的相關(guān)點(diǎn);與H-14， H-14"的相關(guān)點(diǎn)，證 實(shí)這2個(gè)碳分別歸屬于C-10， C-10"，并顯示出2個(gè)單芐基構(gòu)架?？梢奡 135.848與H-9'， H-14，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-10，，并顯示出l個(gè)單芐基構(gòu)架?？梢奡 130.420， S 130.449 與H-9， H-9"的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這2個(gè)碳分別歸屬于C-11， C-11"?？梢奡 119.386與H-9'， H-15，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-11'?？梢奡 148.180與H-14，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-12'。 可見S 157.768， S 157.914與H-11， H-ll"的相關(guān)點(diǎn);與H-15， H-15，，的相關(guān)點(diǎn)；與C-13 一OCH" C-13"—0CH3的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這2個(gè)碳分別歸屬于C-13， C-13"。可見S 145. 509與 H-11，， H-14', H-15，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-13，?？梢奡 130.420， S 130. 449與H-9， H-9"的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這2個(gè)碳分別歸屬于C-15， C-15"?？梢奡 124.250與H-9'， H-ll，的相 關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-15'。可見S 145.509與H-20，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)它歸屬于C-16'，并顯 示出1個(gè)苯醚基構(gòu)架?？梢奡 142.692， S 150. 366與H-17'， H-20'， H-21，的相關(guān)點(diǎn)，證實(shí)這2個(gè)碳分別歸屬于C-18', C-19'。(圖ll)
綜上所述，確定該化合物的結(jié)構(gòu)如上圖所示，分子式為Ce3He具0i。，分子量為1027.49。
經(jīng)文獻(xiàn)檢索未見報(bào)道，因而確定為新化合物，命名為蓮子心新堿(neoliensinine)，是一種 新型的7—0—11'(首一尾)，12，一0—16'， 18，一0—7"(通過苯環(huán)，尾—首)三氧橋連接的 三芐基異喹啉生物堿，其正式的化學(xué)名為10 —羥基一二苯醚，—3— 2， 3， 4—四氫
—6, 7 —二甲氧基一2—甲基一l一異喹啉)]甲基一6— [(l， 2, 3， 4一四氫一1一 [(4一甲 氧基苯基)甲基]—6—甲氧基一2—甲基一7 —異喹啉)氧基]—9_ [(l， 2， 3， 4一四氫一 卜[(4一甲氧基苯基)甲基]一6—甲氧基一2—甲基一7 —異喹啉)氧基]一，[R— (R*， R*， R*)]。


.-
圖l蓮子心新堿的薄層層析色譜分析圖
左在紫外燈下(254 nm)下觀察 右以改良碘化鉍鉀試液噴霧顯色
1.對(duì)照品混合物；2.甲基蓮心堿3.蓮子心新堿；4.異蓮心堿；5.蓮心堿。
圖2蓮子心新堿的HPLC歸一化純度分析圖 注neoliensine即為蓮子心新堿
圖3蓮子心新堿的UV譜圖
掃描范圍'190. 00 400. 00 nm;最大吸收波長282.00線222.40 nm 圖4蓮子心新堿的IR譜圖 圖5蓮子心新堿的質(zhì)譜圖(T0F—MS)
上雙電荷分子離子和單電荷分子離子 下單電荷分子離子(放大) 圖6蓮子心新堿的"C薩R譜圖(in CDC1" 125 MHz， TMS) 圖7蓮子心新堿的DEPT譜圖(in CDC13) 圖8蓮子心新堿的HSQC譜圖(in CDC13) 圖9蓮子心新堿的'HNMR譜圖(in CDC13， 500 MHz， TMS) 圖10蓮子心新堿的'H-'H C0SY譜圖(in CDC13) 圖11蓮子心新堿的HMBC譜圖(in CDC13)
具體實(shí)施例方式
下列實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。 實(shí)驗(yàn)例l:蓮子心新堿薄層層析色譜鑒定實(shí)驗(yàn)。
硅膠G薄層板板；蓮子心新堿對(duì)照品、蓮心堿對(duì)照品、異蓮心堿對(duì)照品、甲基蓮心堿對(duì)照品分別加甲醇使溶解，制成每1 ml含1 mg的溶液；吸取上述對(duì)照品溶液各5 ^，分別點(diǎn) 于同一以0.3X羧甲基纖維鈉水溶液為粘合劑的硅膠G薄層板(10X20 cm)上，以氯仿一丙 酮一一.乙胺(5: 4: 1)為展開劑，在展開缸內(nèi)預(yù)飽和15分鐘，展開，展距約12cm，取出， 晾干，在薄層層析中，在紫外光(254 nm)下觀察，以改良碘化鉍鉀試劑噴霧，各對(duì)照品均 呈現(xiàn)橙紅色斑點(diǎn)；以碘蒸氣薰，各對(duì)照品均呈現(xiàn)黃棕色斑點(diǎn)。
薄層層析色譜結(jié)果甲基蓮心堿對(duì)照品Rf = 0.82;蓮子心新堿對(duì)照品Rf = 0.70; 異蓮心堿對(duì)照品Rf = 0.55;蓮心堿對(duì)照品Rf = 0.34。
實(shí)驗(yàn)例2:蓮子心新堿質(zhì)譜鑒定實(shí)驗(yàn)。
TOF-MS儀；ESI正離子模式；毛細(xì)管電壓3000 V;錐孔電壓60 V;錐孔氣流量50 L/h;干燥氣流速400 L/h;干燥氣溫度200°C;離子源溫度IOO"C。
數(shù)據(jù)分析(DA)參數(shù)數(shù)據(jù)分析操作選項(xiàng)分子特征提?。粓?bào)告類型包括數(shù)據(jù)庫檢索確證 篩選。
處理選項(xiàng)/峰檢出S/N閾值50;最小相對(duì)量2.5%;加合物H， NH4， Na， K。 確證篩選質(zhì)量允差5 ppra。
校正物質(zhì)亮氨酸腦啡呔(Sigma產(chǎn)品，。2風(fēng))，[M + H] +精確值為556. 2771。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果單電荷分子離子[M + H]'質(zhì)量測(cè)定精確值為1028.5033，理論計(jì)算值應(yīng)為 1028.5061，其質(zhì)量允差為-2.7 ppm。雙電荷分子離子[M + H] 2+的豐度比單電荷[M + H] + 的豐度高許多，其質(zhì)量測(cè)定精確值為514. 7468，表明在該條件下形成的雙電荷分子離子要比 單電荷分子離子穩(wěn)定得多。
實(shí)驗(yàn)例3:蓮子心新堿結(jié)構(gòu)核磁共振譜鑒定實(shí)驗(yàn)。
表l蓮子心新堿的'HNMR譜(in CDC13, 500 MHz)-"CNMR譜(in CDC13， 125 MHz)及二維譜數(shù)據(jù)
Positio
Unit
5 ('H,)
S (,3CNMR)
'H-'H COSY
HMBC
C-1，C-1， CH
或c-r
C-2，C-2， NCH3 或C-2"
C-3，C-3' CH2 ^C-3，' 濕
3.619加，m)
3.586 (m)
3.586 (m)
2.477 (s)
2.455 (s)
2.414 (s)
2.686 (m)
2.720 (m)
64. 558 64. 536 64. 492
42. 720 42. 676 42. 507
46. 688
47. 040
H-9， H-9'或 H-3, H-8， C-2-跳； H-9" H-3'， H-8'， C-2'-跳
或 H-3" ， H-8"，
C-2，，一跳
H-3 , H-4 ; C-2-NCH3 , C-2'-NCH3 H-3，， H-4，或或C-2"-NCH3CH23.155(m), 3. 120(m)47. 378H-3"，H-4"
C-4, C-4'CH22.805(m)26. 089H-3 ,H-4 ;H-5, H-5'或H-5"
或C-4"CH22,528(m)， 2.477(m)25. 128H-3，，H-4，或
CH22.618(m), 2.580(m)25. 965H-3",H-4"
C-4aC130. 544H-5
C-4，aC129. 224H-5'
C-4"aC130. 302H-5"
C-5CH6.661(s)112. 506
C-5，CH6.482(s)111.310
C-5"CH6.556(s)112.柳
C-6C149. 075H-5， H-8， H-6-0CH3
C-60CH33.665(s)55. 029
C-6，C147.351H-5，， H-8', H-6'-0CH3
C-6，0CH33.786(s)55. 748
C-6"C149. 155H-5"， H-8"， H-6""OCH3
C-6，'0CH33.747(s)55. 785
C-7C142. 245
C-7，C146. 580
C-7，0CH33.586(s)55. 704
C-7"C .142. 773
C-8CH6.383(s)120.538
C-8，CH6.093(s)110. 936
C-8'，CH6.344(s)119. 482
C-8aC131.535H-8
C-8'aC125. 974H-8'
C-8"aC130. 544H-8"
C-9CH23.008(m)， 2.931(dd,40. 101H-l
14. 05,5.5)
c-9，ch23.008(m), 2.673(m)40. 790h-r
c-9"ch22.751W40. 101h-1"
C-IOC131.681H-9， H-12, H-14
C-10'C135. 848h-9，， h-14'
c-io"C131. 395H-9"， H-12"， H-14"
C-llcri6.885(d， 8.5)130. 420H-12H-9
c-irCH6.597(d, 1.8)119. 386H_15，H-9'， H-15，
C-11"CH6.922(d， 8.85)130. 449H-12"H-9"
C-12CH6.640(d， 8.55)113.378H-11
C-12'C .148. 180
C-12"CH6.713(d, 8.55)113.613H-ll"
C-13C157. 768H-ll, 15， H—13—0CH3
C-130CH33.667(s)55. 066
C-13'C145. 509H-11，， H-14'， H-15'
C—13"C157.914H-ll"， 15"， H—13，HXBC-13"0CH33.672(s)55. 594
C-14CH6,640(d,8. 55)113.378H-15
C-14'CH6.763(d，8. 25)119. 188H-15，
C-14"CH6.713(d，8. 55)113.613H-15"
C-15CH6,885(d，8. 5)130.420H-14H-9
C-15'CH6.640(d,8. 55，1.8)124. 250H-11', H-14'H-9',H-ll，
C-15"CH6.922(d,8.85)130. 449H-14"H-9"
C-16'C145. 509H-20，
C-17'CH6.493(d，2. 75)109. 036H-21'
C-18'C142. 692H-17，，H-20，
C-19'c150. 366H-17，，H-20，
C-20'CH6.819(d，8.85)115. 572H-21，
C-21'CH6.452(dd,8. 55,2. 75)112.968H-17', H-20，
下列實(shí)驗(yàn)例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果
實(shí)施例l:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
<formula>formula see original document page 22</formula>
其分離方法為選用當(dāng)年產(chǎn)睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根1000g，在60'C以下烘 干(約6小時(shí))，粉碎、過40目(380 um)篩，置索氏提取器中，用4 BV (倍體積份)的 60 80%乙醇提取至提取液近無色(約7.5小時(shí))，放冷，過濾。濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在水浴中 減壓濃縮，敞口揮盡乙醇，得蓮子心流浸膏。流浸膏用1 2X硫酸溶液溶解并稀釋至2000ml (pH 2 3)，過濾，濾液用2 BV乙醚萃取3~4次，棄去乙醚層，將水層用濃氨水調(diào)pH 9 10， 3 BV乙醚萃取5 6次，合并乙醚層，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫常壓回收溶劑，蒸 干溶劑后得非水溶性總堿(疏松狀粉末)6.5 g。將非水溶性總堿部分(5 g)用硅膠柱層析 分離(色譜分離I ),取一定量非水溶性總堿用氯仿溶解，用等體積100 200目(75 150 ii m) 普通硅膠拌樣，50 BV 100 200目硅膠裝柱，常壓下以氯仿一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 99: 1 — 97: 3 — 95: 5 — 93: 7 — 91: 9梯度洗脫，分份收集，每300 ml為一流份，共獲 得90 100個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離I得到的 流份46 66合并，繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離n)， 50BV 200 300目(48 75 y m) 硅膠裝柱，低壓下以氯仿一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 99: 1 — 97: 3 — 95: 5 — 93: 7 — 91: 9梯度洗脫，分份收集，每150 ml為一流份，共獲得60 70個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢 識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份26 38合并，用經(jīng)S印hadex LH —20柱層析分離(色譜分離m)， 40 BV 20 150 u m S印hadex LH—20裝柱，以水一甲醇混 合系統(tǒng)l: 1 — 1: 2 — 0: 1梯度洗脫，分份收集，每40 ml為一流份，共獲得20 30個(gè) 流份，其中12 22流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并，減壓濃縮至10ml，靜 置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到蓮子心新堿40mg。 mp91. 1 91.6°C。 'H國R譜(inCDCl3, 500 MHz， S ppm， TMS): H-l (S 2.48， 3H， s)、 2.41 (3H， s)、 S 2.46 (3H， s)，示有3個(gè)一NCH"分別歸屬于C-2—NCH3， C-2' — NCft或C-2" _線。S 3.66 (3H， s)、 S 3.79 (3H， s)、 S 3.75 (3H， s)、 5 3.59 (3H， s)、 5 3.66 (3H， s)、 S 3.67 (3H， s)，示有6個(gè)一0CH3，分別歸屬于C-6—0CH3， C-6' _0CH3， C-6" —0CH3， C-7， —OCH:" C—13—0CH3， C-13" —0CH3。 H—11， H-15 ( S 6.88， 2H， d, J = 8. 5Hz)， H—12， H-14 ( S 6.64， 2H， d， J = 8.55 Hz); H-ll" ， H-15" ( S 6.92， 2H， d， J = 8.85 Hz), H—12" ， H-14" (5 6.71， 2H， d， J = 8.55 Hz)，示有二組AA， 、 BB'苯環(huán)系統(tǒng)。H-15， (S 6.64， 1H， dd， J = 8.55Hz， 1.8 Hz)， H-14， (S 6.76， d， J = 8.25Hz)， H-ll' (S 6.60， d， J =1.8 Hz); H-21， (S 6.45， J = 8. 55 Hz， 2. 75Hz)， H_20， (S 6.82, d， J = 8. 85Hz)， H-17' (S ， 6.49， d， J = 2.75Hz)，示有二組既發(fā)生鄰位偶合又發(fā)生間位偶合苯環(huán)系統(tǒng)。 其余質(zhì)子歸屬于情況如下H-l， H-1'或H-l" [S 3.62 (1H， m)， S 3.59 (2H， m)]; H-3， H-3'或H-3" [S 2.69 (2H, m)， S 2.72 (2H， m)， S 3.16 (1H， m)和S 3.12 (1H， m)]; H-4， H-4'或H-4" [S 2.80 (2H， m)， S 2.53 (1H， m)和S 2.48 (1H, m)， S 2.62 (1H， m)和S 2.58 (1H， m); H—5 (S 6.66， 1H， s)， H-5， (S 6.48， 1H， s)， H—5" (S 6.56， 1H, s); H-8 (S 6.38， 1H， s), H—8' (S 6.09， 1H， s)， H—8" (S 6.34， 1H， s); H-9 (S 3.01, 1H， m; S 2.93， 1H， dd， J= 14.05， 5.5 Hz), H-9' (S 3.01， 1H， m; S 2.67， 1H， m)， H-9" (S 2.75， 2H， m)。
23實(shí)施例2:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下-
<formula>formula see original document page 24</formula>
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根5000g，在6(TC以下烘干(約 6小時(shí))，粉碎、過20目(830 ym)篩，取干粉放入容器中，用18 22 BV的甲醇，室溫下 密閉浸提三次(第一次8 10倍，第二次5 6倍，第三次5 6倍)，每次2 3天，合并濾 液水浴減壓回收溶劑，敞口揮干溶劑，得蓮子心流浸膏。流浸膏用1 2%硫酸溶液溶解并調(diào) 節(jié)pH 2 3，用水稀釋至10000 ml，過濾，濾液用2 BV石油醚(60 90°C)萃取3 4次， 棄去石油醚層，將水層用濃氨水調(diào)pH 9 10， 3 BV氯仿萃取5 6次，合并氯仿層，過濾， 濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀低溫常壓回收溶劑，蒸干溶劑后得非水溶性總堿(棕黃色粉末)55 g。將 非水溶性總堿部分用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(15 g)非水溶性總堿用氯仿 溶解，用等體積100 200目(75 150 u m)普通硅膠拌樣，10倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 ym)混合裝柱，低壓下以石油醚一氯仿一二乙胺混合系統(tǒng)90: 10: 0.5 — 85: 15: 0.5 — 80: 20: 0. 5 — 60: 40: 0. 5 — 40: 60: 0. 5 — 20: 80: 0.5梯度洗脫，分 份收集，每300 ml為一流份，共獲得70 80個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后 合并相同流份。色譜分離I得到的流份28 40合并，用經(jīng)反相膠柱層析分離(色譜分離II)， 40 BV 40 75 " m Chromatorex ds硅膠鍵合相裝柱，中壓下以水一 乙腈一 乙二胺混合系統(tǒng)
90: 10: 0.5 — 70: 30: 0. 5 — 50: 50: 0. 5 — 30: 70: 0. 5 — 10: 90: 0. 5梯度洗脫，
分份收集，每50 ml為一流份，共獲得50 60個(gè)流份，其中12 22流份經(jīng)硅膠薄層色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，濃縮至干，1 2%硫酸溶液溶解并稀釋至50 ml (pH 2 3)，過 濾，濾液用濃氨水調(diào)pH9 10，加入氯化銨或氯化鈉至近飽和，再以3BV乙醚萃取5 6次， 合并乙醚層，過濾，濾液回收溶劑，蒸干后得到得蓮子心新堿(淡黃粉末)90mg。即91. l 91.6 。C。
實(shí)施例3:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
OCH:
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根50 kg，置多功能提取罐(一
噸)中，用20 24 BV的60 80%乙醇回流提取三次(第一次8 10倍，第二次6 7倍， 第二次6 7倍)，每次3小時(shí)，放冷，過濾。合并濾液用酒精回收罐減壓回收溶劑，敞口揮 盡乙醇，得蓮子心流浸膏81 kg，相對(duì)密度1.06/80°C。流浸膏用10X硫酸溶液調(diào)pH 2 3， 過濾，濾液用濃氨水調(diào)pH 9 10， 3 BV乙醚萃取5 6次，合并乙醚層，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀低溫常壓回收溶劑，蒸干溶劑后得非水溶性總堿(疏松狀粉末)150 g。將非水溶性總 堿部分用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(50 g)非水溶性總堿用二氯甲烷溶解， 用等體積100 200目(75 150 um)普通硅膠拌樣，10倍100 200目硅膠40倍200~300 目(48 75 um)混合裝柱，常壓下以二氯甲烷一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 —94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度洗脫，分份收集，每500 ml為一流份，共獲 得220 240個(gè)流份，硅膠薄層色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并相同流份。色譜分離I得到的 流份143 185合并，繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離II)， 50倍200 300目硅膠裝柱，
25常壓下以氯仿一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 99: 1 — 97: 3 — 95: 5 — 93: 7 — 91: 9— 89-ll梯度洗脫，分份收集，每500ml為一流份，共獲得170 180個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、 碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份76 140合并，再繼續(xù)用硅膠柱層析 分離(色譜分離in)，50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿一甲醇混合系統(tǒng)100:0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 , 88: 12梯度洗脫，分份收集，每500 ml為 一流份，共獲得35 40個(gè)流份，其中14 20流份經(jīng)硅膠薄層色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合 并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到蓮子心新堿600mg。即91.1 91.6 。C。
實(shí)施例4:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
OCH.
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根50 kg，置多功能提取罐(一
噸)中，用14 18 BV的60 80%乙醇回流提取二次(第一次8 10倍，第二次6~8倍， 每次4小時(shí)，放冷，過濾。合并濾液用酒精回收罐減壓回收溶劑至無醇味，濃縮液用10%鹽 酸溶液調(diào)pH 2 3，離心(4000 5000 rpm) 15分鐘，取上液用石灰乳調(diào)pH 9 10,并加入 1/10 BV的氯化銨，4 1(TC下冷置10 12小時(shí)，離心(4000 5000 rpm) 15分鐘，得沉淀 物，在6(TC以下烘干(約8小時(shí))，粉碎、過40目(380 y m)篩，得非水溶性總堿(黃棕 色粉末)150 g。將非水溶性總堿部分用硅膠柱層析分離(色譜分離I ),取一定量(50 g) 非水溶性總堿用二氯甲垸溶解，用等體積100 200目(75 150 ym)普通硅膠拌樣，10倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 u m)混合裝柱，常壓下以二氯甲烷一 甲醇混合 系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度洗脫，分份 收集，每500 ml為一流份，共獲得220 240個(gè)流份，硅膠薄層色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后 合并相同流份。色譜分離I得到的流份154 190合并，繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離II )， 50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 99: 1 — 97: 3 — 95: 5 — 93: 7 — 91: 9— 89: ll梯度洗脫，分份收集，每500ml為一流份，共獲得160 170 個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份72 120 合并，再繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離m)， 50倍200~300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿 —甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度 洗脫，分份收集，每500ml為一流份，共獲得40~45個(gè)流份，其中18 26流份經(jīng)硅膠薄層 色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到 蓮子心新堿560 mg。 mp 91. 1 91. 6 。C。
實(shí)施例5:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下-
OCH.
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根1000 g，在6(TC以下烘干(約 6小時(shí))，粉碎、過20目(830 ym)篩，加8 10 BV的60 80X乙醇，室溫下先密閉浸泡 8 10小時(shí)，然后用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌提取2 4小時(shí)，轉(zhuǎn)速為400 rpm;再如上法攪拌提取二 次，每次均加5 6 BV的60 80X乙醇，提取時(shí)間、轉(zhuǎn)速同上。濾過，合并乙醇浸提液，減
27壓回收溶劑并濃縮至無醇味，得蓮子心流浸膏。流浸膏用10%鹽酸溶液溶解并調(diào)pH 4 6， 加水稀釋至5000 ml (含生藥0.2 g/ ml)，過濾。濾液通過D101—A (天津南開大學(xué)化工廠， 非極性聚苯乙烯型，比表面積為480 580 m7 g，孔徑為28 30 nm)大孔吸附樹脂柱[大 孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24小時(shí)使充分溶脹，濕法裝柱，用乙醇和蒸餾水交替洗脫，洗 至乙醇液與水混合(1 : 2)不呈白色混濁為止，然后以去離子水洗至無醇味]，上樣后預(yù)吸附 2小時(shí)，流速l BV/ h (BV為柱床沉降體積倍份)。吸附完畢后用先，以蒸餾水、15%乙醇洗 脫4倍樹脂體積去除水溶性雜質(zhì)，再用60 70%乙醇洗脫3 5 BV，流速為1 BV/ h。收集 60 70%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑并濃縮至無醇味，40 6(TC真空干燥得蓮子心總堿(淡 黃色粉末)。將蓮子心總堿用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(15 g)非水溶性總 堿用甲醇溶解，用等體積100 200目(75 150 um)普通硅膠拌樣，6(TC以下烘干(約1 小時(shí))，IO倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 um)混合裝柱，低壓下以石油醚 —氯仿一二乙胺混合系統(tǒng)90: 10: 0.5 — 85: 15: 0.5 — 80: 20: 0.5 — 60: 40: 0.5 — 40: 60: 0.5 — 20: 80: 0.5梯度洗脫，分份收集，每300 ml為一流份，共獲得90 100 個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份38 50 合并，再繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離III)， 50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿 —甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度 洗脫，分份收集，每150ml為一流份，共獲得70 80個(gè)流份，其中24 32流份經(jīng)硅膠薄層 色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到 蓮子心新堿180 mg。 mp 91.1 91.6 。C。
實(shí)施例6:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下<formula>formula see original document page 29</formula>
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根1000 g，在60'C以下烘干(約 6小時(shí))，粉碎、過20目(830 um)篩，加8 10 BV的60 80X乙醇，室溫下先密閉浸泡 8 10小時(shí)，然后用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌提取2 4小時(shí)，轉(zhuǎn)速為400 rpm;再如上法攪拌提取二 次，每次均加5 6 BV的60 80X乙醇，提取時(shí)間、轉(zhuǎn)速同上。濾過，合并乙醇浸提液，減 壓回收溶劑并濃縮至無醇味，得蓮子心流浸膏。流浸膏用10%鹽酸溶液溶解并調(diào)pH 4 6， 加水稀釋至5000 ml (含生藥0.2 g/ ml)，過濾。濾液通過AB_8 (天津南開大學(xué)化工廠， 弱極性聚苯乙.烯型，比表面積為480 520 m7 g，孔徑為130 140 nm)大孔吸附樹脂柱[大 孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24小時(shí)使充分溶脹，濕法裝柱，用乙醇和蒸餾水交替洗脫，洗 至乙醇液與水混合(1 : 2)不呈白色混濁為止，然后以去離子水洗至無醇味]，上樣后預(yù)吸附 2小時(shí)，流速l BV/ h (BV為柱床沉降體積)。吸附完畢后用先，以蒸餾水、15%乙醇洗脫4 倍樹脂體積去除水溶性雜質(zhì)，再用60 70%乙醇洗脫3 5 BV，流速為1 BV/ h。收集60 70%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑并濃縮至無醇味，40 6(TC真空干燥得蓮子心總堿(淡黃色 粉末)。將蓮子心總堿用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(15 g)非水溶性總堿用 甲醇溶解，用等體積100 200目(75 150 ym)普通硅膠拌樣，60'C以下烘干(約1小時(shí))， 10倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 ym)混合裝柱，低壓下以石油醚一氯仿
—二乙胺混合系統(tǒng)90: 10: 0.5 — 85: 15: 0. 5 — 80: 20: 0. 5 — 60: 40: 0. 5 — 40:
60: 0.5 — 20: 80: 0. 5梯度洗脫，分份收集，每300 ml為一流份，共獲得90 100個(gè)流 份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份36 50合并， 再繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離III)， 50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿一甲醇
29混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度洗脫， 分份收集，每150 ml為一流份，共獲得70 80個(gè)流份，其中26 33流份經(jīng)硅膠薄層色譜、 碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到蓮子心 新堿150 mg。即91.1 91.6 。C。
實(shí)施例7:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下-
<formula>formula see original document page 30</formula>
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根1000g,在6(TC以下烘千(約 6小時(shí))，粉碎、過20目(830 ym)篩，加8 10 BV的60 80%乙醇，室溫下先密閉浸泡 8 10小時(shí)，然后用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌提取2 4小時(shí)，轉(zhuǎn)速為400 rpm;再如上法攪拌提取二 次，每次均加5 6 BV的60 80X乙醇，提取時(shí)間、轉(zhuǎn)速同上。濾過，合并乙醇浸提液，減 壓回收溶劑并濃縮至無醇味，得蓮子心流浸膏。流浸膏用10%鹽酸溶液溶解并調(diào)pH 4 6， 加水稀釋至5000 ml (含生藥0.2 g/ ml)，過濾。濾液通過AKS—W (天津南開大學(xué)化工廠， 非極性聚丙烯酸酯型，比表面積為480 520m7g，孔徑為29 nm左右)大孔吸附樹脂柱[大 孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24小時(shí)使充分溶脹，濕法裝柱，用乙醇和蒸餾水交替洗脫，洗 至乙醇液與水混合(1 : 2)不呈白色混濁為止，然后以去離子水洗至無醇味]，上樣后預(yù)吸附 2小時(shí)，流速l BV/ h (BV為柱床沉降體積)。吸附完畢后用先，以蒸餾水、15%乙醇洗脫4 倍樹脂體積去除水溶性雜質(zhì)，再用60 70%乙醇洗脫3 5 BV，流速為1 BV/ h。收集60 70%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑并濃縮至無醇味，40 60。C真空干燥得蓮子心總堿(淡黃色粉末)。將蓮子心總堿用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(15 g)非水溶性總堿用 甲醇溶解，用等體積100 200目(75 150 ym)普通硅膠拌樣，6(TC以下烘干(約1小時(shí))， 10倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 nra)混合裝柱，低壓下以石油醚一氯仿
一二乙胺混合系統(tǒng)90: 10: 0.5 — 85: 15: 0. 5 — 80: 20: 0.5 — 60: 40: 0. 5 — 40:
60: 0.5 — 20: 80: 0. 5梯度洗脫，分份收集，每300 ml為一流份，共獲得90 100個(gè)流 份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份37 48合并， 再繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離ill)， 50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿一甲醇 混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度洗脫， 分份收集，每150 ml為一流份，共獲得70 80個(gè)流份，其中22~29流份經(jīng)硅膠薄層色譜、 碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到蓮子心 新堿110 mg。 mp 91. 1 91.6 。C。
實(shí)施例8:
化合物蓮子心新堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
其分離方法為選用睡蓮科植物蓮的干燥種子幼葉及胚根1000 g，在6(TC以下烘干(約 6小時(shí))，粉碎、過20目(830 um)篩，加8~10 BV的60 80%乙醇，室溫下先密閉浸泡 8 10小時(shí)，然后用電動(dòng)攪拌機(jī)攪拌提取2 4小時(shí)，轉(zhuǎn)速為400 rpm;再如上法攪拌提取二 次，每次均加5 6 BV的60 80X乙醇，提取時(shí)間、轉(zhuǎn)速同上。濾過，合并乙醇浸提液，減 壓回收溶劑并濃縮至無醇味，得蓮子心流浸膏。流浸膏用10%鹽酸溶液溶解并調(diào)pH 4 6，加水稀釋至5000 ml (含生藥0.2 g/ ml),過濾。濾液通過HP—2—MG [日本三菱化工公司 (MCC)，中等極性聚丙烯酸酯型，比表面積為470 m7 g左右，孔徑為170 nm左右]大孔吸 附樹脂柱[大孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24小時(shí)使充分溶脹，濕法裝柱，用乙醇和蒸餾水 交替洗脫，洗至乙醇液與水混合(1 :2)不呈白色混濁為止，然后以去離子水洗至無醇味]， 上樣后預(yù)吸附2小時(shí)，流速lBV/h (BV為柱床沉降體積)。吸附完畢后用先，以蒸餾水、15 %乙醇洗脫4倍樹脂體積去除水溶性雜質(zhì)，再用60 70%乙醇洗脫3 5 BV，流速為1 BV/ h。 收集60 70%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑并濃縮至無醇味，40 6(TC真空干燥得蓮子心總堿 (淡黃色粉末)。將蓮子心總堿用硅膠柱層析分離(色譜分離I )，取一定量(15 g)非水溶 性總堿用甲醇溶解，用等體積100 200目(75 150 um)普通硅膠拌樣，60'C以下烘干(約 l小時(shí))，10倍100 200目硅膠40倍200 300目(48 75 um)混合裝柱，低壓下以石油 醚一氯仿一二乙胺混合系統(tǒng)90: 10: 0.5 — 85: 15: 0. 5 — 80: 20: 0.5 — 60: 40: 0.5 —40: 60: 0.5 — 20: 80: 0. 5梯度洗脫，分份收集，每300ml為一流份，共獲得90 100 個(gè)流份，硅膠薄層色譜檢識(shí)、碘化鉍鉀顯色后合并相同流份。色譜分離II得到的流份40 53 合并，再繼續(xù)用硅膠柱層析分離(色譜分離m), 50倍200 300目硅膠裝柱，常壓下以氯仿 一甲醇混合系統(tǒng)100: 0 — 98: 2 — 96: 4 — 94: 6 — 92: 8 — 90: 10 — 88: 12梯度 洗脫，分份收集，每150ml為一流份，共獲得70 80個(gè)流份，其中27 34流份經(jīng)硅膠薄層 色譜、碘化鉍鉀顯色檢識(shí)后合并，靜置，讓溶劑揮發(fā)，析出結(jié)晶，經(jīng)過多次重結(jié)晶后，得到 蓮子心新堿165 mg。 mp 91. 1 91. 6 。C。
實(shí)施例9:
化合物蓮子心新堿甲醚的合成，其方法為量取無水甲醇5ml，置于干燥的三頸瓶中， 加入金屬鈉O.l g，反應(yīng)完畢后加入蓮心堿新堿1. 03 g (0.001 mo1/ L)，加熱攪拌使溶解， 水浴蒸去甲醇，加入甲苯20ml，稍冷，加入草酸二甲酯236 mg (0.002 mol/L)，加熱回流， 用10 20%的鹽酸提取，再以1 2X的氫氧化鉀水溶液堿化至pH 9 11，析出沉淀，過濾， 沉淀用蒸餾水洗至中性，40 6(TC下真空干燥，得淡黃色粉末，乙醚重結(jié)晶，得白色結(jié)晶約 450<formula>formula see original document page 33</formula>實(shí)施例10:
化合物蓮子心新堿乙醚的合成，其方法為量取無水甲醇5ml，置于干燥的三頸瓶中， 加入金屬鈉O. 1 g，反應(yīng)完畢后加入蓮心堿新堿1.03 g (0.001 mo1/ L),加熱攪拌使溶解， 水浴蒸去甲醇，加入甲苯20ml，稍冷，加入草酸二甲酯292 mg (0. 002 mo1/L)，加熱回流， 用10 20%的鹽酸提取，再以1 2X的氫氧化鉀水溶液堿化至pH 9 11，析出沉淀，過濾， 沉淀用蒸餾水洗至中性，40 6(TC下真空干燥，得淡黃色粉末，乙醚重結(jié)晶，得白色結(jié)晶約 680 mg。其結(jié)構(gòu)式為
OCH'實(shí)施例ll:
化合物蓮子心新堿鹽酸鹽和硫酸鹽的合成，其方法為取蓮心堿新堿置于干燥的三角瓶
中，超聲振蕩使之先溶解于無水乙醇中，然后于冰水浴上降溫至2 6。C，滴加鹽酸或硫酸調(diào)節(jié)至pH 2 4，靜置于2 6t:處析晶，過濾，沉淀用冰無水乙醇洗至中性，40 6(TC下真空干燥，得白色結(jié)晶。二者的結(jié)構(gòu)式分別為<formula>formula see original document page 34</formula>
權(quán)利要求
1、一種新結(jié)構(gòu)類型化合物蓮子心新堿(neoliensinine)，其特征在于其結(jié)構(gòu)式為
2、 一種新化合物，其特征在于該藥物含有如下結(jié)構(gòu)式的化合物及鹽或衍生物，衍生物包 括對(duì)該化合物結(jié)構(gòu)式中2(N) 、 2'(N)和2"(N)位甲基分別或同時(shí)進(jìn)行去甲基化然后再烴基化， 以及19'位酚羥基垸基化，得到衍生化合物<formula>formula see original document page 2</formula>
3、如權(quán)利要求1所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于該方法為-選用市售睡蓮科蓮屬植物蓮AW"/^0 Gaertn干燥的種子幼葉及胚根制成的蓮子心飲片，或新鮮采集的蓮或同屬其他植物的種子幼葉及胚根或其他部位為原料，經(jīng)過或不 經(jīng)過堿化用正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或它們的至少兩種混合液為溶劑提?。换蛴盟嵝运?、甲醇、乙醇或它們的至少兩種混合液為溶劑提取，回收溶劑后將提取 物通過選自酸溶堿沉—有機(jī)溶劑萃取法、等度pH萃取法、兩相溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、 硅膠柱層析法、反相柱層析法或凝膠柱層析法的一種或多種方式分離，用水、甲醇、乙醇、 正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚、正已垸或它們的至少兩種混合液為溶劑洗 脫，采用薄層層析法、碘化鉍鉀顯色法檢識(shí)，合并部分洗脫液，重結(jié)晶、干燥后得到蓮子心 新堿。
4、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于對(duì)原料進(jìn)行堿化時(shí)， 采用的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水、石灰乳，且配成濃度范圍為1% 10%水溶液， 根據(jù)堿溶液的濃度不同選用按原料重量1/10 1/2的比例加入并拌勻；采用酸性溶劑進(jìn)行提 取時(shí)調(diào)pH 2 5，所用的酸包括鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸。
5、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于對(duì)原料進(jìn)行提取是 在室溫或加熱狀態(tài)下，采用冷浸、滲漉、煎煮、加熱回流、索氏提取器提取、超聲提取、微 波提取、高壓提取、超臨界提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
6、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的酸溶堿沉法 中酸溶所用的酸為鹽酸、硝酸、硫酸或磷酸，調(diào)pH 2 5，溶解可以在室溫、加熱狀態(tài)下， 采用攪拌法、機(jī)械振蕩法、超聲波振蕩法；堿沉所用堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨水，調(diào)PH 8 11，助沉劑為氯化鈉、氯化鉀、氯化銨、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸銨，沉淀可以在室溫、(TC IO'C狀態(tài)下，放置時(shí)間為0 h 4 h。
7、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的兩相溶劑萃 取法包括有機(jī)溶劑萃取法和水洗分液法。有機(jī)溶劑萃取法是用有機(jī)溶劑把水相中溶于該溶劑 的組分分離出來；水洗分液法是用水、甲醇、乙醇將有機(jī)相中溶于水相(水、甲醇、乙醇) 的雜質(zhì)分離出來。有機(jī)溶劑可以是正丁醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚、正已烷 或它們的至少兩種混合液，在室溫或加熱狀態(tài)下進(jìn)行兩相萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可 以是多次。
8、 如權(quán)利要求7所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的有機(jī)溶劑萃 取法為將酸溶堿沉液用乙醚、氯仿、醋酸乙酯萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。 水洗分液法為合并有機(jī)相萃取液，用水、甲醇、乙醇萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以 是多次。棄去水相(雜質(zhì))，將有機(jī)相低溫減壓濃縮。
9、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的等度pH萃 取法為將提取液或提取物用乙醚、氯仿、醋酸乙酯分散溶解，用0.4% 4%氫氧化鈉水溶 液(使成鹽)萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
10、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的大孔樹脂 吸附法中所用的樹脂為聚苯乙烯型吸附樹脂，洗脫溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮 或它們的至少兩種混合液，洗脫方法可以是等度洗脫，也可以是梯度洗脫。
11、 如權(quán)利要求10所述的大孔樹脂吸附法，其特征在于所用的大孔樹脂為AB-8型大孔 吸附樹脂、D101型大孔吸附樹脂、D4020型大孔吸附樹脂、HPD400型大孔吸附樹脂、S-8型 大孔吸附樹脂、HZ-806型大孔吸附樹脂。
12、 如權(quán)利要求10所述的大孔樹脂吸附法，其特征在于所述大孔樹脂吸附法為將提取 液或提取物用水、甲醇、乙醇或它們的至少兩種混合液分散溶解，上清液或過濾液通過大孔 吸附樹脂，用水或5% 10%的甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮水溶液進(jìn)行清洗(以除去雜質(zhì))， 清洗液用量為大孔樹脂體積的1 4倍；再用20% 90%的甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮水溶 液進(jìn)行洗脫，洗脫液用量為大孔樹脂體積的3 9倍。
13、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的硅膠柱層 析法為常壓或加壓柱層析，所用填料為40目 400目硅膠，用正巳烷、石油醚、乙醚、氯仿、 醋酸乙酯、丙酮、異丙醇、乙醇、甲醇或它們的至少兩種混合液為洗脫劑，洗脫時(shí)可以采用 等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
14、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的反相柱層 析法為常壓或加壓柱層析，所用填料為十八烷基鍵合相或八烷基鍵合相，洗脫溶劑選自水、 甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇、四氫呋喃或它們的至少兩種混合液，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫， 也可以采用梯度洗脫。
15、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于所用的凝膠柱層 析法為常壓或加壓柱層析，所用凝膠過濾填料主要為葡聚糖凝膠(S印hadex) LH-20系列、 多孔半堅(jiān)硬凝膠樹脂Toy叩earl HW-40系列，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水異丙 醇、含水丙酮組成的混合常溶劑，洗脫時(shí)可以采用等度洗脫，也可以采用梯度洗脫。
16、 如權(quán)利要求3所述的新化合物蓮子心新堿的分離方法，其特征在于合并洗脫液后， 可以采用甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、二氧六環(huán)、石油醚、苯、正己烷或它 們的至少兩種混合液為溶劑進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，重結(jié)晶可以是一次，也可以是多次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新結(jié)構(gòu)類型化合物蓮子心新堿(neoliensinine)及其提取、分離、制備和鑒定方法，該化合物具有潛在的藥物應(yīng)用前景。本發(fā)明化合物蓮子心新堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖。本發(fā)明還包括對(duì)蓮子心新堿制成的鹽或其衍生物以及上述結(jié)構(gòu)式中通過2(N)、2’(N)和2”(N)位進(jìn)行去甲基化然后再烴基化，19’位酚羥基烷基化得到19’位甲醚、乙醚、丙醚、異丙基醚、苯醚等多種化學(xué)反應(yīng)得到的衍生化合物或衍生物鹽。
文檔編號(hào)C07D217/20GK101665460SQ20091018309
公開日2010年3月10日 申請(qǐng)日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月7日
發(fā)明者皓 吳, 晶 商, 楊光明, 霞 涂, 揚(yáng) 潘, 龍 陳 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)