專利名稱：一種脫水穿心蓮內(nèi)酯分離純化方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及中藥有效成分分離純化方法，確切地說是一種脫水穿心蓮內(nèi)酯分離純化方法。
二背景技術(shù)：
穿心蓮[Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees]為爵床科植物穿心蓮的全草或 葉。別名春蓮秋柳(《嶺南采藥錄》)、 一見喜(《泉州本草》)、欖核蓮、苦膽草、斬 蛇劍、日行千里、印度草(廣東)，苦草(福建)等。原產(chǎn)于印度，我國主產(chǎn)于華南、西南 等長江以南溫暖、濕潤地區(qū)。其氣味苦、性寒、歸大腸、心、肺、膀胱經(jīng)，具有清熱解毒、 涼血、消腫。用于感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，頓咳勞嗽，泄瀉痢疾，熱淋澀痛，癰腫 瘡瘍，毒蛇咬傷。
穿心蓮內(nèi)酯類化合物主要活性成分有穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、 新穿心蓮內(nèi)酯等。還含穿心蓮垸，穿心蓮酮，穿心蓮甾醇，e-谷甾醇-D-葡萄糖甙等。
脫水穿心蓮內(nèi)酯(deoxyandrographolide)，別名穿心蓮丁素、14-deoxy-ll， 12-didehydroandrographolide，為萜類化合物；易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于
苯，幾乎不溶于水；無色針狀結(jié)晶(30%或50%乙醇)；熔點204°C;分子式C2()H2804;分 子量332.42。有以下化學結(jié)構(gòu)式
HO
脫水穿心蓮內(nèi)酯具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細菌性與病毒性上呼吸道感染及痢
疾有特殊療效，被譽為天然抗生素藥物。抗腫瘤，利膽保肝，抗蛇毒及毒蕈堿樣作用；并有
終止妊娠等作用。
鑒于脫水穿心蓮內(nèi)酯有上述專屬性功效，有必要進行分離純化，為中藥新藥開發(fā)提供優(yōu) 質(zhì)原料。而國內(nèi)對穿心蓮內(nèi)酯類化合物提取分離研究比較早，也比較多。早期主要以水浸提、乙醇提取、堿水提取為主，得到的產(chǎn)品為粗提物(穿心蓮總內(nèi)酯含量在30%左右)。 關于脫水穿心蓮內(nèi)酯提取分離方法的申請發(fā)明專利有2件
(1) CN1962650A(申請?zhí)?00610032546. 0，《一種高純度脫水穿心蓮內(nèi)酯的制備方法》): 該發(fā)明是一穿心蓮全草為原料，采用乙醇進行熱浸提，再上大孔樹脂進行吸附分離，用不同 濃度乙醇溶液梯度洗脫，再上硅膠柱色譜分離，采用氯仿與甲醇的混合液進行洗脫，收集目 標物質(zhì)，再采用乙醇進行重結(jié)晶。該方法涉及兩次不同的層析分離，存在脫除產(chǎn)品中樹脂殘 留物和有害溶劑的難題。
(2) CN101168537A (申請?zhí)?00710142800. 7，《同時制備穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi) 酯的方法》)該發(fā)明是一穿心蓮全草為原料，采用醇溶劑進行提取，再上大孔樹脂進行吸 附分離，用不同濃度乙醇溶液梯度洗脫，分別獲得較高純度的目標物質(zhì)，再進行溶劑重結(jié)晶， 可獲得97%的穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯。
目前制備高純度萜類化合物大都采用有機溶劑反復重結(jié)晶方法，其耗時長、得率低，且 純度也難于達到98%以上。

發(fā)明內(nèi)容
要發(fā)明旨在為開發(fā)I類中藥新藥提供高純度的原料藥脫水穿心蓮內(nèi)酯，所要解決的技術(shù) 問題是對現(xiàn)有的純化方法進行改進。
本發(fā)明的技術(shù)方案是以穿心蓮浸膏(穿心蓮總內(nèi)酯含量》30%)為起始原料，浸膏先經(jīng)過 氯仿進行萃取，脫溶后得到淺黃色的粗晶體，再上色譜柱，接收含量70%以上的脫水穿心 蓮內(nèi)酯單體組分，濃縮為飽和溶液后，再進行超臨界流體抗溶劑結(jié)晶。
所謂的超臨界流體抗溶劑結(jié)晶，就是以超臨界流體為逆溶劑，其與溶質(zhì)、溶劑形成的溶 液相混合，快速帶走溶劑和部分雜質(zhì)使溶液在較短的時間內(nèi)形成較高的過飽和度，溶質(zhì)結(jié)晶 析出，得到純度高，粒徑分布均勻的微粒。 一般選C02為超臨界流體。
具體技術(shù)方案是
將穿心蓮浸膏溶解于溫水中，用氯仿進行萃取，萃取液脫溶后上色譜柱，并用混合溶劑 洗脫，接收含量90%以上的脫水穿心蓮內(nèi)酯組分，再進行超臨界C02結(jié)晶，通過控制壓力、 溫度、時間進行抗溶劑結(jié)晶，經(jīng)2次抗溶劑結(jié)晶后，可制得99%上的脫水穿心蓮內(nèi)酯高純
叫o
具體操作步驟是
(1)首先將穿心蓮浸膏溶解到10_20倍體積的30 5(TC的溫水中，選擇氯仿進行溶 劑萃取至少2次；(2) 將萃取液合并、脫溶后，進行色譜柱層析分離，分離介質(zhì)(固定相)選自硅膠等，流動相選自石油醚與乙酸乙酯的混合液，進行分段收集流份，主要收集含量90%以上的目標物質(zhì)流份；
(3) 將上述收集到的流分濃縮成飽和溶液后，進行超臨界C02抗溶劑結(jié)晶，控制在壓力8 15MPa，溫度在40 65。C，時間在45 90min;
(4) 停機后收集首次抗溶劑結(jié)晶產(chǎn)物，產(chǎn)品純度達97%左右；
(5) 上述結(jié)晶產(chǎn)物再配成飽和丙酮溶液，抗溶劑結(jié)晶1次，可制得純度99%以上脫水穿心蓮內(nèi)酯。
本發(fā)明為相關企業(yè)提供一種集成溶劑萃取一柱層析分離一超臨界流體(C02)抗溶劑結(jié)晶純化的方法，制備純度達99%以上的脫水穿心蓮內(nèi)酯。超臨界C02抗溶劑結(jié)晶不但具有傳統(tǒng)的細化微粒的效果，同時具有脫除溶劑和萃取微量雜質(zhì)等功能，從而達到結(jié)晶純化效果；結(jié)晶析出脫水穿心蓮內(nèi)酯的結(jié)晶條件要求低， 一般壓力小于15MPa，溫度65'C以下，所析晶體純度高，可達到99%以上，適合高純物質(zhì)的制備。本法工藝簡單，無需冷凍干燥或噴霧干燥等復雜耗能工藝。同時其得率也較傳統(tǒng)工藝高，脫水穿心蓮內(nèi)酯純度超過99%，收率》30%(以浸膏中脫水穿心蓮內(nèi)酯計)，適合批量生產(chǎn)。穿心蓮浸膏產(chǎn)品目前市場飽和，價格便宜，運輸方便。既可提高分離純化生產(chǎn)效率，又可降低層析柱的污染。具體實施例方式
實施例1:
(1) 稱取lkg穿心蓮浸膏(脫水穿心蓮內(nèi)酯含量10%以上)，按1 : 20 (W/V)的固液比溶于3(TC溫水中，再用氯仿萃取2次；
(2) 將氯仿萃取溶液合并、真空脫溶得到固體粉末，將粉末轉(zhuǎn)移到硅膠色譜柱中，用石油醚與乙酸乙酯(30% : 70% 60% : 40%， V/V)流動相洗脫，以紫外檢測器在線檢測定位，收集90%以上的脫水穿心蓮內(nèi)酯流份；
(3) 將上述流份合并、濃縮成飽和溶液(至有微量晶體析出)，冷卻到40 50。C左右，再放
置于超臨界C02結(jié)晶釜中，結(jié)晶壓力控制在9MPa，溫度在6(TC，進行超臨界C02抗溶劑結(jié)
曰
曰曰5
(4) 在超臨界狀態(tài)下結(jié)晶70min，停機后取出結(jié)晶產(chǎn)物，進行含量檢測，產(chǎn)品純度在97%以上；
(5) 將上述結(jié)晶產(chǎn)物用45。C左右丙酮溶劑配成飽和溶液，再進行超臨界狀態(tài)下抗溶劑結(jié)
曰
曰曰5
(6) 試驗結(jié)束后，取樣檢測，可得到99y。以上高純脫水穿心蓮內(nèi)酯30.3g。實施例2:
(1) 稱取lkg穿心蓮浸膏(脫水穿心蓮內(nèi)酯含量10%以上)，按1 : 15 (W/V)的固液比溶于4(TC溫水中，再用氯仿萃取2次；
(2) 將氯仿萃取溶液合并、真空脫溶得到固體粉末，將粉末轉(zhuǎn)移到硅膠色譜柱中，用石油醚與乙酸乙酯(30% : 70% 60% : 40%， V/V)流動相洗脫，以紫外檢測器在線檢測定位，收集90%以上的脫水穿心蓮內(nèi)酯流份；
(3) 將上述流份合并、濃縮成飽和溶液(至有微量晶體析出)，冷卻到45C左右，再放置于超臨界C02結(jié)晶釜中，結(jié)晶壓力控制在15MPa，溫度在45'C，進行超臨界0)2抗溶劑結(jié)晶；
(4) 在超臨界狀態(tài)下結(jié)晶60min，停機后取出結(jié)晶產(chǎn)物，進行含量檢測，產(chǎn)品純度在97%以上；
(5) 將上述結(jié)晶產(chǎn)物用45'C左右丙酮溶劑配成飽和溶液，再進行超臨界狀態(tài)下抗溶劑結(jié)
曰
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(6) 試驗結(jié)束后，取樣檢測，可得到99免以上高純脫水穿心蓮內(nèi)酯3l.lg。實施例3:
(1) 稱取lkg穿心蓮浸膏(脫水穿心蓮內(nèi)酯含量10%以上)，按l : 10 (W/V)的固液比溶于5(TC溫水中，再用氯仿萃取2次；
(2) 將氯仿萃取溶液合并、真空脫溶得到固體粉末，將粉末轉(zhuǎn)移到硅膠色譜柱中，用石油醚與乙酸乙酯(30% : 70% 60% : 40%， V/V)流動相洗脫，以紫外檢測器在線檢測定位，收集90%以上的脫水穿心蓮內(nèi)酯流份；
(3) 將上述流分合并、濃縮成飽和溶液(至有微量晶體析出)，冷卻到45"C左右，再放置于超臨界C02結(jié)晶釜中，結(jié)晶壓力控制在12MPa，溫度在5(TC，進行超臨界(302抗溶劑結(jié)晶；
(4) 在超臨界狀態(tài)下結(jié)晶50min，停機后取出結(jié)晶產(chǎn)物，進行含量檢測，產(chǎn)品純度在97%以上；
(5) 將上述結(jié)晶產(chǎn)物用45X:左右丙酮溶劑配成飽和溶液，再進行超臨界狀態(tài)下抗溶劑結(jié)
曰
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(6) 試驗結(jié)束后，取樣檢測，可得到99y。以上高純脫水穿心蓮內(nèi)酯32.0g。
權(quán)利要求
1、一種脫水穿心蓮內(nèi)酯分離純化方法，以10％左右脫水穿心蓮內(nèi)酯的浸膏為起始原料，包括萃取分離、柱層析分離和結(jié)晶純化，其特征在于所述的萃取是穿心蓮浸膏溶于30～50℃溫水中用氯仿萃取至少兩次，萃取液脫溶得到固體粉末，然后用色譜柱層析分離，混合溶劑洗脫，收集含量≥90％脫水穿心蓮內(nèi)酯流份，真空濃縮成飽和溶液，最后用超臨界CO2抗溶劑結(jié)晶純化，壓力8～15MPa、溫度40～65℃。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于層析色譜柱固定相選自硅膠。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于層析色譜柱流動相為石油醚與乙酸乙 酯混合溶劑，石油醚與乙酸乙酯的體積比3 : 7 6 : 4。
全文摘要
一種脫水穿心蓮內(nèi)酯分離純化方法，是一種集成溶劑萃取—柱層析—超臨界流體抗溶劑結(jié)晶的方法對穿心蓮浸膏進行加工制備高純脫水穿心蓮內(nèi)酯。浸膏先用氯仿萃取；柱層析填料(固定相)采用硅膠等，流動相為石油醚與乙酸乙酯的混合溶劑；超臨界流體CO₂抗溶劑結(jié)晶純化，條件為壓力≤15MPa，溫度≤65℃。產(chǎn)品純度達99％以上。該分離純化工藝，方法簡便、成本低、易于工業(yè)生產(chǎn)應用。
文檔編號C07D307/00GK101671321SQ20091018516
公開日2010年3月17日 申請日期2009年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月30日
發(fā)明者玲 劉, 張文成, 張海濤, 鄭仁娟 申請人:合肥工業(yè)大學