專利名稱：：從玄參中提取多酚類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從玄參中提取多酚類化合物的方法。
背景技術(shù)：
：玄參(ScrophulariaL.)為玄參禾斗植物玄參(ScrophularianingpoensisHemsl)的干燥根，別名元參、黑參、浙玄參、烏元參等。玄參中含有豐富的多酚類化合物。多酚類化合物的主要功能性質(zhì)是作為許多酶體系的抑制劑或激活劑、金屬螯合劑以及自由基清除劑。多酚類化合物通過酚羥基的離解和自由基途徑產(chǎn)生抗氧化作用，是醫(yī)藥、食品、化妝品中很有前景的一類天然抗氧化劑和自由基清除劑。所以從玄參中如何提取多酚類化合物具有重要的研究?jī)r(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。目前采用的從玄參中提取多酚類化合物的方法有回流、冷浸、回流和滲漉等方法(國(guó)家藥典委員會(huì)編，中華人民共和國(guó)藥典(2005年版一部)，2005:76-77;程存歸等，南京理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2006(30)，243-247)。以粉碎的玄參藥材為原料，以滲漉法和回流法等從玄參中提取多酚類化合物，提取時(shí)間長(zhǎng)，溶劑消耗量大，受儀器限制提取量小，成本也高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了從玄參中提取多酚類化合物的方法，采用快速溶劑萃取(簡(jiǎn)稱ASE)方法。該ASE方法是在一定的溫度(50°C-200°C)和壓力(1000-3000psi或10.3-20.6MPa)下用溶劑對(duì)固體或半固體樣品進(jìn)行萃取的方法。使用常規(guī)的溶劑、利用增加溫度和提高壓力提高萃取的效率，其結(jié)果大大加快了萃取的時(shí)間并明顯降低萃取溶劑的使用量。ASE快速溶劑萃取技術(shù)具有如下的顯著特點(diǎn)時(shí)間短(僅用15-20分鐘)、溶劑少(萃取10-20克樣品僅用15-30毫升溶劑)、萃取效率高。從玄參中提取多酚類化合物的方法的步驟和條件如下按照干燥的玄參粉末和硅藻土的質(zhì)量比為11.2:24，把干燥的玄參粉末和硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力9.6-20.6MPa、靜態(tài)5-10min，提取溫度為40-8(TC，提取溶劑為體積濃度為60-90%的乙醇水溶液；提取次數(shù)為1-3次，合并萃取液，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。本發(fā)明得到的玄參中提取的多酚類化合物的總多酚含量，采用Folin-Ciocalteu測(cè)定方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取上述提取的樣品溶液O.2ml，加入lmL0.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入0.8mL7.5%的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度。用質(zhì)量濃度范圍為0.020.2mg/mL的沒食子酸溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，y=9.5623x_0.1332(R2=0.9999)，如圖1所示。所有測(cè)定重復(fù)2次，一致性很好。有益效果本發(fā)明提供的從玄參中提取多酚類化合物的方法，比傳統(tǒng)方法節(jié)省提取時(shí)間短僅用15-20分鐘；使用的溶劑少萃取10-20克樣品僅用15-30毫升溶劑)漂取效率高經(jīng)過本發(fā)明的方法提取的總多酚化合物的含量為0.3658-0.3842mg/g，所提取的總多酚的含量是其他提取方法約1.5-1.8倍。圖l為沒食子標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖2為不同提取方法獲得的從玄參中提取的總多酚化合物含量的柱狀圖。圖中分別為本發(fā)明提供的ASE方法、超聲提取法和回流提取法柱狀圖?？梢钥闯霰景l(fā)明提供的ASE方法，可以明顯提高從玄參中提取多酚類化合物的產(chǎn)量。具體實(shí)施方式實(shí)施例1將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.049g，加入3.058g硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力10.3MPa、靜態(tài)5min，提取溫度4(TC，提取溶劑為80X(v/v)乙醇水溶液，提取次數(shù)為1次，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入0.8mL7.5(m/m)%的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.2909mg/g。實(shí)施例2將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.030g，加入2.980g硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力11.8MPa、靜態(tài)5min，提取溫度45t:，提取溶劑為60X(V/V)乙醇水溶液，提取次數(shù)為2次，合并萃取液，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.2055mg/g。實(shí)施例3將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.016g，加入2.004硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力10.3MPa、靜態(tài)5min，提取溫度6(TC，提取溶劑為80X(V/V)乙醇水溶液，提取次數(shù)為3次，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入0.8mL7.5%(m/m)的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.0450mg/g。實(shí)施例4將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.032g，加入2.432g硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力10.3MPa、靜態(tài)5min，提取溫度8(TC，提取溶劑為80^乙醇水溶液，提取次數(shù)為3次，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.3658mg/g。實(shí)施例5將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.063g，加入0.2341硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力13.3MPa、靜態(tài)5min，提取溫度80°C，提取溶劑為60%乙醇水溶液，提取次數(shù)為1次，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入O.8mL7.5%(m/m)的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.2498mg/g。實(shí)施例6將干燥的玄參粉末，過60目篩，準(zhǔn)確稱量2.002g，加入2.234g硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力10.3MPa、靜態(tài)5min，提取溫度65t:，提取溶劑為60X乙醇水溶液，提取次數(shù)為2次，萃取結(jié)束后濃縮提取液，得到了玄參中提取的多酚類化合物。樣品總酚含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu方法，結(jié)果表示為每克樣品中含有相當(dāng)沒食子酸的毫克數(shù)。吸取O.2mL上述提取液，加入lmLO.5N的Folin-Ciocalteu試劑，再加入0.8mL7.5%(m/m)的碳酸鈉溶液充分混合，室溫下放置0.5小時(shí)，然后在765nm下測(cè)吸光度，測(cè)得從玄參中提取的總多酚的含量為0.2401mg/g。玄參ASE正交試驗(yàn)因素水平表、正交表和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析如下表l因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2LJ33)正交表和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>采用L9(33)正交試驗(yàn)，來(lái)確定利用ASE150型快速溶劑萃取儀進(jìn)行了玄參快速溶劑萃取的最佳條件，結(jié)果見表2。各因素對(duì)快速溶劑萃取玄參影響大小的順序?yàn)锽(主)一C—A(次)。本實(shí)驗(yàn)選擇AAC3組合萃取作為從玄參中快速溶劑萃取的最佳工藝，即使用80-90%(V/V)乙醇水溶液在8(TC溫度下提取3次，每次5min。參考文獻(xiàn)[l]Kitagawaletal.OntheiridoidconstituentisolatedfromtherootsofscrophulariabuergeranaMiq.ChemArarmBull,1967，15(8):1254[2]LIYM，JIANGSH，ZHUDY.Progressofstudyonthechemicalconstituentofinscrophulariaplantandactivityinpharmacology[J].ChinTraditHerbDrugs(中草藥)，1999，30(4):307310.[3]李醫(yī)明，蔣山好，高文運(yùn)，等.玄參中的苯丙素苷成分[J].中草藥.1999，30(7):487489[4]李醫(yī)明，蔣山好，高文運(yùn)，等.玄參的脂溶性化學(xué)成分[J].藥學(xué)學(xué)報(bào).1999，34(6):448450[5]李醫(yī)明，蔣山好，等.玄參屬植物化學(xué)成分與藥理活性研究進(jìn)展[J].中草藥1999,30(4):307310[6]張建春，朱健美.玄參的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥工業(yè).2003,22(1):2527[7]張?chǎng)?，?中藥玄參的化學(xué)成分[J].云南植物研，1994，16(4):407412[8]鄒臣亭，楊秀偉.玄參中一個(gè)新的環(huán)烯醚萜苷化合物[J].中草藥.2000，31(4):241243[9]SubramaniSellappan，CasimirCAkoh&GerardKrewer.PhenolicCompoundsandAntioxidantCapacityofGeorgia—GrownBlueberriesandBlackberries[J].J.Agric.FoodChem.，2002，50(8):2432-2438.[10]Sanchez-MorenoC，LarrauriJA&Saura-CalixtoF.Freeradicalscavengingcapacityandinhibitionoflipidoxi_dationofwines，grapejuicesandrelatedpolyphenoliccon_stituents[J].FoodRes.Int.，1999，32:407-412.[11]石碧，狄瑩植物多酚[M].北京:科學(xué)出版社，2000:124.[12]陳欣欣，許時(shí)嬰.黑莓渣提取物中多酚類化合物抗氧化活性的研究[J].食品工業(yè)，20Q7(3):3-6.權(quán)利要求從玄參中提取多酚類化合物的方法，其特征在于步驟和條件如下按照干燥的玄參粉末和硅藻土的質(zhì)量比為1～1.2∶2～4，把干燥的玄參粉末和硅藻土混勻后裝入萃取池，萃取壓力9.6-20.6Mpa，靜態(tài)5-10min，提取溫度為40-80℃，提取溶劑為體積濃度為60-90％的乙醇水溶液，提取次數(shù)為1-3次，合并萃取液，濃縮提取液，得到玄參中提取的多酚類化合物。全文摘要本發(fā)明提供了從玄參中提取多酚類化合物的方法。取干燥的玄參藥材粉末，加入硅藻土混勻后入萃取，萃取結(jié)束后濃縮提取液。本發(fā)明提供的從玄參中提取多酚類化合物的方法，與傳統(tǒng)方法相比提取時(shí)間短僅用15-20分鐘；使用的溶劑少萃取10-20克樣品僅用15-30毫升溶劑)；萃取效率高經(jīng)過本發(fā)明的方法提取的總多酚化合物的含量為0.3658-0.3842mg/g，所提取的總多酚的含量是其他提取方法約1.5-1.8倍。文檔編號(hào)C07G99/00GK101709068SQ20091021784公開日2010年5月19日申請(qǐng)日期2009年11月12日優(yōu)先權(quán)日2009年11月12日發(fā)明者劉春明,劉質(zhì)凈,張紅晶,時(shí)東方,李麗,王強(qiáng),鄭梅竹申請(qǐng)人:長(zhǎng)春師范學(xué)院