專(zhuān)利名稱(chēng)：：法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物及其應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：利用微生物本身及其代謝產(chǎn)物來(lái)防治農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)近年來(lái)在病蟲(chóng)害防治中的地位已越來(lái)越重要。由于微生物殺蟲(chóng)劑，對(duì)人畜安全，毒性小，環(huán)境污染小，低殘留，對(duì)有害靶標(biāo)特異性強(qiáng)，不易殺傷天敵和有益生物，有利于生態(tài)平衡。生產(chǎn)原料和有效成分屬天然產(chǎn)物，能保證自然生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展，因此，近年來(lái)，微生物殺蟲(chóng)劑的品種在不斷增加，應(yīng)用范圍在不斷擴(kuò)大，微生物殺蟲(chóng)劑的研究開(kāi)發(fā)和應(yīng)用已進(jìn)人了一個(gè)新的歷史時(shí)期。由于微生物代謝物可以方便地解決菌株活體應(yīng)用時(shí)的種種缺點(diǎn)，為害蟲(chóng)防治提供更為廣泛的選擇，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，微生物代謝產(chǎn)物在害蟲(chóng)防治上的應(yīng)用研究引起人們?cè)絹?lái)越多的重視。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的旨在提供一種具有殺線蟲(chóng)活性的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物及其應(yīng)用。本發(fā)明從具有毒殺線蟲(chóng)功能的真菌中篩選出高毒力Talaromycessp.YMl-3，從YM1-3菌株的次生代謝產(chǎn)物中提取高毒力殺線蟲(chóng)化合物，為研究開(kāi)發(fā)生物殺線蟲(chóng)制劑和研究開(kāi)發(fā)仿生生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明人在前期研究中，篩選獲得了具有良好殺線蟲(chóng)功能的真菌Talaromycessp.YM1-3，YM1-3菌株已于2009年11月05日保存于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)為CGMCCNO.3400。本發(fā)明將YM1-3菌株采用YEP培養(yǎng)基，用常規(guī)發(fā)酵方法培養(yǎng)，將發(fā)酵液低壓濃縮后，用乙酸乙酯萃取，然后將有機(jī)部分合并濃縮后，再通過(guò)硅膠(氯仿/甲醇洗脫)和SephedeX-LH20凝膠柱(甲醇洗脫)反復(fù)層析，即得到本發(fā)明的無(wú)色的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)化合物，該類(lèi)化合物是經(jīng)核磁共振波譜，質(zhì)譜，紅外光譜紫外和旋光光譜確定為兩個(gè)新的結(jié)構(gòu)相似的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)代謝產(chǎn)物，命名為法尼基環(huán)六烷醇DkligosporolD)和法尼基環(huán)六烷醇EkiigosporolE)。該類(lèi)代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)如下(以下分別簡(jiǎn)稱(chēng)為化合物1和2，上部分為化合物1的結(jié)構(gòu)式，下部分為化合物2的結(jié)構(gòu)式)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本發(fā)明所述的從少孢節(jié)從孢中分離得到的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)次生代謝產(chǎn)物的物理外觀分別為無(wú)色油狀，與硫酸顯色呈棕色；黃色油狀，與硫酸顯色呈黃綠色變灰色；無(wú)色油狀，與硫酸顯色呈黃色變灰色。分子式都為C22H3406。核磁譜特征見(jiàn)表1，其溶解溶劑為CD3C0CD3，400MHz，8:ppm.法尼基環(huán)六燒醇D(oligosporolD)(1):Colorlessoil；[a]-12.29°(c0.1，MeOH)；UV(MeOH)Amax(loge)203(4.14)；IR(KBr)vmax3424，2966，2922，2856，1657，1638，1631，1460，1451，1442，1433，1383，1271，1172，1109，1087，1019，948，740，670，580，552cm-l；1H匪Rand13C匪RseeTable1；NegativeESI-MSm/z429[M+C1]_；NegativeHRESI-MSm/z429.2044[M+C1F(calculatedforC22H3406C1,429.2043).法尼基環(huán)六燒醇E(oligosporolE)(2):Colorlessoil;[a]+19.36°(c0.3，MeOH)；UV(MeOH)Amax(loge)205.2(3.90)；IR(KBr)vmax3423，2967，2924，2856，1657，1639,1630,1441,1384,1261,1167,1104,1076,1021,950,896cm-l；1HNMRand13CNMRseeTable1；NegativeESI-MSm/z429[M+Cl]-；NegativeHRESI-MSm/z429.2041[M+Cl]、calculated429.2047forC22H3406C1.表1.化合物1禾P2的and13CWR數(shù)據(jù)a<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>"Dataweremeasuredinacetone_d6at400MHzforand100MHzfor13Cwithreferencetothesolventsignals,6inppmandJinHz.實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的活性化合物在液體浸泡法的抗線蟲(chóng)活性測(cè)試中，在處理時(shí)間為48小時(shí)時(shí)，化合物對(duì)Panagrellusredivevus線蟲(chóng)的LC5(1(半致死率)分別為110.2ugml—1和80.6iigml—1，表現(xiàn)了殺線蟲(chóng)活性。因此，該類(lèi)化合物能作為制備殺線蟲(chóng)藥劑的應(yīng)用。本發(fā)明具有對(duì)環(huán)境無(wú)污染、成本低、毒殺線蟲(chóng)效果佳的優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1化合物1和2的分離制備1.真菌YM1-3的種子培養(yǎng)YEP培養(yǎng)基Yeastextract(酵母膏)lg，Multi-p印tone(多蛋白胨)2g，Beefextract(牛肉膏)lg，Glucose(葡萄糖)10g，Agar(瓊脂)20g，Distilledwater(蒸餾水)1L，自然PH，滅菌后倒成平板。將YM1-3菌塊接種到平板上，38°C培養(yǎng)57天。2.真菌YM1-3的液體發(fā)酵培養(yǎng)YEP培養(yǎng)基YEP培養(yǎng)基Yeastextract(酵母膏)lg，Multi-p印tone(多蛋白胨)2g，Beefextract(牛肉膏)lg，Glucose(葡萄糖)10g,Distilledwater(蒸餾水)1L,自然PH。將平板菌種接種到500ml三角瓶中(每瓶裝250ml)液體培養(yǎng)基，在38°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速180rpm，培養(yǎng)時(shí)間12天。3.將發(fā)酵液過(guò)濾，濾液即發(fā)酵原液減壓濃縮后，用乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯部萃取物合并后進(jìn)行硅膠色譜分離，以甲醇/氯仿=0-25%為洗脫劑梯度洗脫。4.收集2%10%的甲醇/氯仿洗脫液，減壓濃縮。將濃縮液再進(jìn)行反復(fù)硅膠色譜分離5.收集TLC板上硫酸顯色為綠色的洗脫液濃縮，經(jīng)甲醇S印hedex-LH20，丙酮Sephedex-LH20反復(fù)分離后得到化合物1和2。實(shí)施例2用液體浸入法檢測(cè)本發(fā)明化合物的單體抗線蟲(chóng)活性的實(shí)驗(yàn)1.試驗(yàn)用藥劑將化合物1和2溶于10ill丙酮，再加入10%濃度的吐溫-20溶液，分別制備400ugmr\200ugmr'UOOugmr\50ugmF1禾口25ygmF1濃度的供試液，在該溶液中，丙酮的終濃度不超過(guò)3%，吐溫-20的終濃度不超過(guò)0.5%。另將相同濃度的丙酮溶解于含有0.5%(v/v)的吐溫-20水溶液作為對(duì)照。2.線蟲(chóng)的培養(yǎng)與制備將P.redivevus線蟲(chóng)接種于燕麥培養(yǎng)基上(燕麥20g，水80ml)，于28°C培養(yǎng)57天。用貝爾曼漏斗法洗出所需線蟲(chóng)，經(jīng)次氯酸鈉消毒2分鐘后，用無(wú)菌蒸餾水將線蟲(chóng)稀釋為6000/ml作為線蟲(chóng)懸液。3.試驗(yàn)方法將供試液3ml放于6cm平板中，加入活線蟲(chóng)18000條，置于28°C恒溫培養(yǎng)箱，分別于6，12，18，24，36小時(shí)和48小時(shí)在光學(xué)顯微鏡下檢查計(jì)算線蟲(chóng)死亡率。并在雙目顯微鏡下觀察線蟲(chóng)體壁消解的情況。鑒定死亡的方法死亡線蟲(chóng)僵直或呈“J”型，活線蟲(chóng)則卷曲扭動(dòng)。用針尖撥動(dòng)靜止線蟲(chóng)身體各部，線蟲(chóng)仍未做出任何反應(yīng)則鑒定為死亡。死亡率=(死亡線蟲(chóng)數(shù)/(死亡線蟲(chóng)數(shù)+活線蟲(chóng)數(shù)))X100%校正死亡率=供試樣品死亡率_對(duì)照組死亡率以未加樣品的測(cè)試溶液為對(duì)照，整個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取三次平均值，計(jì)算出平均死亡率和校正死亡率。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1供試化合物對(duì)P.redivevus線蟲(chóng)的毒殺性結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)果表明本發(fā)明的化合物1和2對(duì)松材線蟲(chóng)都有較好的毒殺作用，能用于制備農(nóng)藥殺線劑用。化合物1和2對(duì)P.redivevus線蟲(chóng)的LC5(1(半致死率)在48小時(shí)分別為lOOug-mF1和80.6iigml—1，對(duì)腐生線蟲(chóng)具有良好毒殺活性。權(quán)利要求法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物，由生產(chǎn)菌株經(jīng)常規(guī)發(fā)酵、提取分離獲得；其特征在于a.生產(chǎn)菌株Talaromycessp.YM1-3已于2009年11月05日保存于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)為CGMCCNO.3400；b.法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物由2種化合物組成，其結(jié)構(gòu)式為F2009102183063C00011.tif2.權(quán)利要求1所述的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物，其特征在于該法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物作為制備殺線蟲(chóng)藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物及其應(yīng)用，屬微生物農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明的生產(chǎn)菌株Talaromycessp.YM1-3已于2009年11月05日保存于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號(hào)為CGMCCNo.3400。本發(fā)明由YM1-3經(jīng)常規(guī)發(fā)酵、提取分離獲得兩個(gè)新的結(jié)構(gòu)相似的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)代謝產(chǎn)物，命名為法尼基環(huán)六烷醇D(oligosporolD)和法尼基環(huán)六烷醇E(oligosporolE)。本發(fā)明的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)代謝產(chǎn)物在液體浸泡法的抗線蟲(chóng)活性測(cè)試中顯示出殺線蟲(chóng)活性，均能有效毒殺線蟲(chóng)。本發(fā)明的法尼基環(huán)六烷醇類(lèi)衍生物具有對(duì)環(huán)境無(wú)污染、成本低、毒殺線蟲(chóng)效果佳的優(yōu)點(diǎn)，能作為制備殺線蟲(chóng)藥劑的應(yīng)用。文檔編號(hào)C07D303/14GK101830868SQ20091021830公開(kāi)日2010年9月15日申請(qǐng)日期2009年12月9日優(yōu)先權(quán)日2009年12月9日發(fā)明者張克勤,牛雪梅,褚衍生,魏錄霞申請(qǐng)人:云南大學(xué)