專利名稱：微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法與裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多肽合成方法及其裝置，特別是一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方 法及其裝置，屬于有機化學(xué)和藥物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)，人工方法合成多肽已有百年的歷史 。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，多肽在醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，如多肽疫苗、抗腫瘤多肽、抗病 毒多肽、多肽導(dǎo)向藥物、細(xì)胞因子模擬肽、抗拒活性肽等。多肽不僅作為新藥開發(fā)目標(biāo)，同 時也成為開發(fā)其它藥物的篩選目標(biāo)。因此，多肽的合成成為各國學(xué)者研究的重要課題。
多肽合成的方法可分為液相合成法和固相合成法。自Merrifield創(chuàng)立并發(fā)展了固相合 成多肽的方法，使多肽合成領(lǐng)域取得了重大突破，對化學(xué)、生化、醫(yī)藥、免疫及分子微生物 學(xué)等領(lǐng)域也都起了巨大的推動作用。目前，人工合成多肽主要以固相合成為主。
微波是指頻率大于無線電波而小于紅外光的電磁波，其頻率范圍在300腿z 30GHz，相 應(yīng)的波長lm lcm范圍。大量研究結(jié)果表明，經(jīng)由微波照射可以大幅度提升許多反應(yīng)的反應(yīng) 速率，大大縮短反應(yīng)時間，產(chǎn)率也有所提高。目前研究涉及的反應(yīng)包括Diels-Alder反應(yīng)、 Claisen重排、氧化反應(yīng)、酯化反應(yīng)、自由基反應(yīng)、水解反應(yīng)、親核取代反應(yīng)等液相反應(yīng)。 此外，微波照射應(yīng)用在固相合成反應(yīng)和酶催化的反應(yīng)上，也可以很好地促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行( J. Z. Carrillo-Munoz， D. Bouvet， E. Guibe-Jampel ， J. Org. Chem.， 1996， 61-7746)
Wang等的研究指出，在使用微波照射的條件下，使用固相合成儀器合成目標(biāo)多肽，一 方面使偶聯(lián)反應(yīng)的時間縮短在6min內(nèi)(常規(guī)的液相合成這一多肽大約需要3h)，另一方面偶 聯(lián)效率也大大提高(比液相合成法大約提高了16%) (H.M.Yu， S.T.Chen， K. T. Wang ， J. Org. Chem. ， 1992， 57-1781)。據(jù)此，美國CEM公司生產(chǎn)出Liberty微波多肽合成儀，使多肽 合成的時間由過去以小時為單位計算的歷史改寫為以分鐘為單位計算。此外，中國發(fā)明專利 CN1298732C公開了一種多肽微波固相合成法，將微波技術(shù)用于多肽的固相合成，取得了一 定的成果。
但是，目前國內(nèi)多肽合成企業(yè)的產(chǎn)量較低，大部分僅達(dá)到克級水平，而國外已經(jīng)有很多企業(yè)的生產(chǎn)水平已經(jīng)達(dá)到公斤級甚至幾十公斤級，但是合成的效率及得率都不是很高。因此 ，開發(fā)一種可以高效率的大規(guī)模合成多肽的方法和裝置，對于促進(jìn)我國多肽藥物的發(fā)展，實 現(xiàn)高效低成本多肽的合成具有積極意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對上述不足之處，提供一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法及其 裝置，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級甚至幾十公斤級，從而實現(xiàn)了多肽的大規(guī)模生產(chǎn)。 本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置，包括反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心，微波反應(yīng)中心 設(shè)有出樣孔和進(jìn)樣孔；反應(yīng)釜的上端設(shè)有加料口和回流進(jìn)口，回流進(jìn)口與微波反應(yīng)中心的出
樣孔通過管路連接，反應(yīng)釜的下端設(shè)有出料口和回流出口，回流出口與微波反應(yīng)中心的進(jìn)樣 孔通過管路連接，在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動力裝置。此 微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置可以在短時間里，化學(xué)合成任何肽鏈長度的多肽以及多 肽化合物，合成的多肽化合物可以方便地經(jīng)在線檢測裝置檢測。微波反應(yīng)中心所采用的微波
發(fā)射為單模形式，所用的微波頻率可以是915腿z、 2450腿z、 5800腿z或22125腿z，其中較為 常用的是2450 MHz。經(jīng)由微波輻射，大幅度提升了整個合成反應(yīng)的反應(yīng)速率，大大縮短反應(yīng) 時間，產(chǎn)率也有所提高。
本發(fā)明的動力裝置優(yōu)選泵，通過調(diào)節(jié)泵的流速可以很好地控制反應(yīng)物質(zhì)流經(jīng)微波反應(yīng)中 心的時間，使反應(yīng)更為充分。
作為優(yōu)選，反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心設(shè)有自動調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，該攪拌裝置為外接機 械攪拌或磁力攪拌。
作為優(yōu)選，微波反應(yīng)中心設(shè)有紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置，冷卻裝置優(yōu)選 為冷凝回流裝置。紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置可以更好的控制反應(yīng)過程，使合 成反應(yīng)較為充分。
作為優(yōu)選，加料口設(shè)有多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；出料口設(shè)有 兩通道閥門，分別與樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)，能有效地將固體 反應(yīng)基質(zhì)與反應(yīng)溶劑分離。
作為優(yōu)選，在線檢測裝置選用紫外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個或兩個以上。
作為優(yōu)選，反應(yīng)釜由耐酸、耐堿、耐有機溶劑的材料制成，更為理想的材料是高密度聚 丙烯。本發(fā)明裝置可設(shè)置閥門控制、各種溫度和壓力控制及各種動力系統(tǒng)的控制，將其連接到 工作站，達(dá)到自動化控制的目的。
此方法并不只局限于Fmoc、 t-Boc或NSC化學(xué)合成法。
此方法并不只局限于多肽的合成，也可以用于其它分子，如碳水化合物、蛋白質(zhì)化合物 等的大規(guī)模合成。
本發(fā)明使用的專用術(shù)語名稱以及多肽載體的制備，多肽的偶聯(lián)合成反應(yīng)以及多肽偶聯(lián)反 應(yīng)的監(jiān)測方法都是本領(lǐng)域中為人熟知和常用的，除非有另外不同的定義，本文所使用的技術(shù) 與科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域一般技術(shù)人員通常所理解的一樣。但是關(guān)于本發(fā)明的實施或?qū)?驗，現(xiàn)對以下術(shù)語予以定義，并對本發(fā)明中的設(shè)計與材料加以描述。
多肽反應(yīng)載體反應(yīng)載體是一種具有硬性或半硬性表面，但同時具有功能鏈團(tuán)的高分子 材料。 一般以聚苯乙烯或聚乙烯為基本骨架，通過化學(xué)修飾，氨基酸可連接到反應(yīng)載體上。 反應(yīng)載體的孔徑一般為100 200目或70目，如此可以保持在過濾時反應(yīng)載體與溶劑的徹底分 離。
多肽合成反應(yīng)指按照多肽的自然序列，通過化學(xué)合成的方法將多種氨基酸連接起來。 多肽合成需要反應(yīng)釜、反應(yīng)載體、洗脫試劑、偶聯(lián)試劑等。本發(fā)明將反應(yīng)物通過微波反應(yīng)中 心的微波輻射來提升整個多肽合成反應(yīng)的反應(yīng)速率，縮短反應(yīng)時間。本發(fā)明的反應(yīng)載體是氨 基酸樹脂。
常用氨基酸雖然本發(fā)明可適用于任何保護(hù)氨基酸、小分子化合物的固相合成，但本發(fā) 明僅采取L-型常用保護(hù)氨基酸作為實例。
使用該合成裝置來大規(guī)模合成多肽的操作過程如下
① 取適量氨基酸-樹脂復(fù)合物投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基試劑，在微波反應(yīng)中心的微波 輻射下脫除氨基保護(hù)基，之后濾掉脫保護(hù)基試劑，用試劑DMF洗滌樹脂；根據(jù)多肽序列，向 反應(yīng)釜中加入下一個預(yù)先活化的帶保護(hù)基氨基酸和偶聯(lián)試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)，之后濾掉殘留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂；
② 按照氨基酸從羧基端到氨基端的順序，更換氨基酸，重復(fù)步驟①，合成所需的多肽；
③ 多肽完成所有的序列與反應(yīng)后，加入切割試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切 割，得到多肽粗品。
本發(fā)明中所述的在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù)基和進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)的 時間可以根據(jù)實際情況和需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。
作為優(yōu)選，脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)時間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮氣的方法脫液，
6重復(fù)洗滌、脫液操作3 5次；多肽偶聯(lián)反應(yīng)的時間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮氣的方法 脫液，重復(fù)洗滌、脫液操作2 3次。通氮脫液的方法使固液分離更為充分，減少了洗滌的次數(shù)。
本發(fā)明的方法使用能夠吸收微波的溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)為介質(zhì)，將微波技術(shù)應(yīng) 用在多肽合成中，利用微波的特殊效應(yīng)，降低反應(yīng)的活化能，提高反應(yīng)速度。
本發(fā)明通過使反應(yīng)物質(zhì)在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心之間的循環(huán)流動，來達(dá)到在反應(yīng)體系局 部加入微波輻射的目的，縮短了反應(yīng)時間，實現(xiàn)了目標(biāo)產(chǎn)物的大規(guī)?？焖俸铣伞１景l(fā)明不僅 提高了反應(yīng)效率，減少了副反應(yīng)的產(chǎn)生，而且提高了合成收率，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級 或幾十公斤級，同時降低了多肽的生產(chǎn)成本，有效解決了多肽生產(chǎn)成本高、合成周期長等問 題，具有顯著的社會價值和經(jīng)濟(jì)效益。


圖l是本發(fā)明的微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置示意圖。
標(biāo)號說明l反應(yīng)釜，2微波反應(yīng)中心，3動力裝置，4在線檢測裝置，5加料口， 6出料口 ，7回流出口， 8回流進(jìn)口， 9出樣口， IO進(jìn)樣口， ll原料罐，12試劑罐，13洗脫液罐，14廢 液罐，15樣品收集器。
具體實施例方式
以下通過具體的實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
由圖1所示，本發(fā)明的大規(guī)模多肽合成裝置包括反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2。微波反應(yīng)中 心2設(shè)有出樣孔9和進(jìn)樣孔10。微波反應(yīng)中心2外部設(shè)有微波發(fā)生裝置，所采用的微波發(fā)射為 單模形式，微波頻率為2450腿，也可以是915腿z、 5800腿z或22125腿z。微波反應(yīng)中心設(shè)有 紅外測溫裝置、壓力檢測裝置及冷卻回流裝置。紅外測溫裝置和壓力檢測裝置能監(jiān)控整個化 學(xué)反應(yīng)的溫度和壓力，使整個化學(xué)反應(yīng)在最佳反應(yīng)溫度下進(jìn)行，以達(dá)到最佳的合成得率，并 最大限度地減少副反應(yīng)。冷卻回流裝置能保證微波反應(yīng)中心溫度過高時調(diào)節(jié)至化學(xué)反應(yīng)最佳 的溫度。
反應(yīng)釜1的上端設(shè)有加料口5和回流進(jìn)口8，回流進(jìn)口8與微波反應(yīng)中心2的出樣孔9通過管 路連接，反應(yīng)釜1的下端設(shè)有出料口6和回流出口7，回流出口7與微波反應(yīng)中心2的進(jìn)樣孔10 通過管路連接。加料口5接有多通道的閥門，分別與原料罐ll、試劑罐12和洗脫液罐13連接 。為方便固態(tài)物料的加入，可以設(shè)置開口較大的加料口；也可以在反應(yīng)釜l上端加設(shè)可密封 的蓋子，固態(tài)物料通過蓋子加入，之后使其密封。出料口6接有兩通道閥門，分別與樣品收 集器15和廢液罐14連接。出料口蓋有篩網(wǎng)，以防止排液時固態(tài)物料隨廢液流出?？梢愿鶕?jù)需要設(shè)置多個原料罐，放置合成目標(biāo)肽所需要的各種氨基酸，根據(jù)肽序列設(shè)計 進(jìn)樣順序。試劑罐也可以根據(jù)需要設(shè)置，以保證整個化學(xué)反應(yīng)能夠順利完成，洗脫罐也可以 根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的需要來設(shè)計。
在反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置4和動力裝置3。在線檢測裝 置4為紫外檢測器，也可以選用紅外檢測器和拉曼光譜儀中的一個或兩個。動力裝置3為泵， 通過調(diào)節(jié)泵的流速可以很好地控制反應(yīng)物質(zhì)流經(jīng)微波反應(yīng)中心2的時間，使反應(yīng)更為充分。 反應(yīng)釜1和微波反應(yīng)中心2均設(shè)有自動調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，使反應(yīng)物混合均勻。
反應(yīng)釜由高密度聚丙烯制成，也可以由其它耐酸、耐堿、耐有機溶劑的材料制成。本裝 置的連接管路均為耐酸、耐堿、耐有機溶劑的材料制成。本發(fā)明的裝置可設(shè)置閥門控制、各 種溫度和壓力控制及各種動力系統(tǒng)的控制，將其連接到工作站，達(dá)到自動化控制的目的。
一般的Fmoc固相合成的技術(shù)與步驟均適用于這里。雖然所有的氨基酸(包括D-型)在這 里都適用，此實施例僅選用L-型的保護(hù)氨基酸。所有的氨基酸載體取代度控制在0.4mmol/g 左右。所用溶劑如DMF、偶聯(lián)劑如HBTU等為常規(guī)用法。
實施例l 胸腺五肽的制備
① 取5. 25kg取代度O. 4 mmol/g的Fmoc-Tyr (tBu) -Wang樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基 試劑30L，啟動泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動，同時開啟微波反應(yīng)中心的 微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時，在 微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。5分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保護(hù) 基試劑，加入試劑DMF 10.5L洗滌樹脂3次，通氮氣排液。根據(jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入預(yù) 先活化的Fmoc-Val-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，所用試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Val-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，5分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胸腺五肽中氨基酸從右往左的順序(H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH)，更換氨基酸 ，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用量和Fmoc-Val-OH相同，重復(fù)步驟①，合成胸腺五肽。
③ 向制備好的胸腺五肽中加入三氟乙酸50L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切割， 得到多肽粗品1.2kg。用液相色譜測得其純度為91.6%，產(chǎn)率為84%。
實施例2胸腺五肽的制備
本實施例要合成的多肽和操作與實施例l完全相同，僅采用的工藝條件有所不同。 ①微波輻射的時間為20分鐘，濾掉脫保護(hù)基試劑后洗滌樹脂5次，濾掉殘留的氨基酸與 試劑液體后洗滌樹脂3次，其余同實施例l。②、③步驟同實施例1。得到多肽粗品1.38kg。用液相色譜測得其純度為92. 5%，產(chǎn)率為
96%。
實施例3 胰高血糖素樣肽-1 (Glucagon-Like P印tide I)的制備
① 取1.26kg取代度0. 4mmol/g的Fmoc-Arg (Pbf) -Amide樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù) 基試劑10L，啟動泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動，同時開啟微波反應(yīng)中心 的微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時， 在微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。l分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保 護(hù)基試劑，加入試齊IJDMF 12.6L洗滌樹脂3次，通氮氣排液。根據(jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入 預(yù)先活化的Fmoc-Gly-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Gly-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，l分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胰高血糖素樣肽-l中氨基酸從右往左的順序
(His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gin-Ala-Ala-Lys -Glu-Phe-lie-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2)，更換氨基酸，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用 量和Fmoc-Gly-0H相同，重復(fù)步驟①合成胰高血糖素樣肽-1 。
③ 向制備好的胰高血糖素樣肽-l中加入三氟乙酸12. 6L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 進(jìn)行切割，得到多肽粗品1.5kg。用液相色譜測得其純度為86. 4%，純化后產(chǎn)率為90%。
實施例4 胸腺肽(Thymosin Alpha 1)的制備
① 取13.4kg取代度0.3mmol/g的Fmoc-Asn (trt) -Wang樹脂投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基 試劑134L，啟動泵使反應(yīng)物在微波反應(yīng)中心與反應(yīng)釜間循環(huán)流動，同時開啟微波反應(yīng)中心的 微波發(fā)生裝置使其產(chǎn)生微波，微波設(shè)置在7CTC， 1.2MPa。反應(yīng)物經(jīng)過微波反應(yīng)中心時，在 微波輻射下加速了脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)。10分鐘后，關(guān)閉泵并停止微波輻射，濾掉脫保護(hù) 基試劑，加入試劑DMF 134L洗滌樹脂3次，通氮氣排液。根據(jù)多肽序列，向反應(yīng)釜中加入預(yù) 先活化的Fmoc-Glu(tBu)-OH和偶聯(lián)試劑HBTU，所用試劑的摩爾比為原料樹脂
:Fmoc-Glu-0H:HBTU=1:3: 3，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下偶聯(lián)氨基酸，10分鐘后，濾掉殘 留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂2次。
② 按照胸腺肽中氨基酸從右往左的順序 (Ac—Ser—Asp—Ala—Ala—Val—Asp—Thr—Ser—Ser—Glu—Ile—Thr—Thr—Lys—Asp—Leu—Lys—Glu—Lys— Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn)更換氨基酸，氨基酸和偶聯(lián)試劑的用量和 Fmoc-Glu-0H相同，重復(fù)步驟①，合成胸腺肽。
9③向制備好的胸腺肽中加入三氟乙酸134L，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行切割，得 到多肽粗品11.3kg。用液相色譜測得其純度為88. 1%，產(chǎn)率為91%。
以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明 的具體實施只局限于這些說明。實施例中所述的在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù) 基和進(jìn)行氨基酸偶聯(lián)反應(yīng)的時間可以根據(jù)實際情況和需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，做出的若干簡單推演或替換，都應(yīng) 當(dāng)視為屬于本發(fā)明所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成裝置，包括反應(yīng)釜，其特征在于本裝置還包括微波反應(yīng)中心，微波反應(yīng)中心設(shè)有出樣孔和進(jìn)樣孔；所述反應(yīng)釜的上端設(shè)有加料口和回流進(jìn)口，回流進(jìn)口與微波反應(yīng)中心的出樣孔通過管路連接，反應(yīng)釜的下端設(shè)有出料口和回流出口，回流出口與微波反應(yīng)中心的進(jìn)樣孔通過管路連接；在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動力裝置。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的合成裝置，其特征在于所述的反應(yīng)釜和微 波反應(yīng)中心設(shè)有自動調(diào)節(jié)速度的攪拌裝置，該攪拌裝置為外接機械攪拌或磁力攪拌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的微波反 應(yīng)中心設(shè)有紅外測溫裝置、壓力檢測裝置和冷卻裝置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的加料口 設(shè)有多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；所述的出料口設(shè)有兩通道閥門，分 別與樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成裝置，其特征在于所述的加料口設(shè)有 多通道的閥門，與原料罐、試劑罐和洗脫液罐連接；所述的出料口設(shè)有兩通道閥門，分別與 樣品收集器和廢液罐連接；所述的出料口還設(shè)有篩網(wǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述在線檢測 裝置是紫外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個或兩個以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的合成裝置，其特征在于在線檢測裝置是紫 外檢測器、紅外檢測器、拉曼光譜儀中的一個或兩個以上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成裝置，其特征在于所述的反應(yīng)釜 由耐酸、耐堿、耐有機溶劑的材料制成。
9. 一種利用權(quán)利要求l所述的合成裝置來大規(guī)模合成多肽的方法，其 操作過程如下①取適量氨基酸-樹脂復(fù)合物投入反應(yīng)釜，加入脫保護(hù)基試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下脫除氨基保護(hù)基，之后濾掉脫保護(hù)基試劑，用試劑DMF洗滌樹脂；根據(jù)多肽序列，向 反應(yīng)釜中加入下一個預(yù)先活化的帶保護(hù)基氨基酸和偶聯(lián)試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下 偶聯(lián)氨基酸，之后濾掉殘留的氨基酸與試劑液體，用試劑DMF洗滌樹脂；② 按照氨基酸從羧基端到氨基端的順序，更換氨基酸，重復(fù)步驟①，合成所需的多肽③ 多肽完成所有的序列與反應(yīng)后，加入切割試劑，在微波反應(yīng)中心的微波輻射下進(jìn)行 切割，得到多肽粗品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的大規(guī)模合成多肽的方法，其特征在于所 述脫除氨基保護(hù)基的反應(yīng)時間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮氣的方法脫液，重復(fù)洗滌、脫 液操作3 5次；多肽偶聯(lián)反應(yīng)的時間為1 15分鐘，洗滌后采用通氮氣的方法脫液，重復(fù)洗 滌、脫液操作2 3次。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種微波輔助連續(xù)流大規(guī)模多肽合成方法與裝置，該裝置主要包括反應(yīng)釜、微波反應(yīng)中心以及連接管路，在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心的連接管路上設(shè)有在線檢測裝置和動力裝置。本發(fā)明通過使反應(yīng)物質(zhì)在反應(yīng)釜和微波反應(yīng)中心之間的循環(huán)流動，來達(dá)到在反應(yīng)體系局部加入微波輻射的目的，縮短了反應(yīng)時間，實現(xiàn)了目標(biāo)產(chǎn)物的大規(guī)模快速合成，將多肽的產(chǎn)量提高到公斤級或幾十公斤級。
文檔編號C07K1/00GK101538310SQ20091030105
公開日2009年9月23日 申請日期2009年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月13日
發(fā)明者卜遠(yuǎn)波, 琪 徐, 湘 李 申請人:杭州中肽生化有限公司