Ron抗體及其用途的制作方法

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專利名稱：Ron抗體及其用途的制作方法
RON抗體及其用途
背景技術(shù)：
R0N(recepteur d，origine nantais，也稱為 MST1R)是一種對(duì)于胚胎發(fā)育必不可少的受體型蛋白酪氨酸激酶，并且還在炎癥反應(yīng)中起重要作用(Camp等人Arm. Surg. Oncol. 12 :273-281 (2005))。RON主要在來(lái)源于上皮的細(xì)胞類型中表達(dá)，并且有人提出 RON同大量的其它受體型酪氨酸激酶一樣可能在惡性上皮癌的演變中起作用(Wang等人 Carcinogensis 23 :1291_1297(2003))。受體型蛋白酪氨酸激酶通常由結(jié)合胞外配體諸如生長(zhǎng)因子和激素的胞外結(jié)構(gòu)域以及具備激酶功能結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。受體型蛋白酪氨酸激酶已被細(xì)分為許多類別，并且RON是受體酪氨酸激酶的MET家族的成員，該家族還包括Stk、c-Met和c-Sea (Camp 等人Ann. Surg. Oncol. 12 :273_281 (2005))。RON和c_Met是在人類中發(fā)現(xiàn)的僅有的該家族的成員，并且它們總體上共有約65%的同源性。C-Met是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子/分散因子(HGF/ SF)的受體并且已被相當(dāng)充分地表征為原癌基因。已經(jīng)確定RON的配體巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)，其與c_Met配體HGF/SF共有約 40%的同源性。MSP和HGF屬于通過(guò)Kringle結(jié)構(gòu)域表征的纖溶酶原-凝血酶原家族。有趣的是，MSP也已證實(shí)與癌癥有關(guān)。例如，Welm等人最近觀察到MSP與乳腺癌的轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)(PNAS104 7501-7575(2007)) ο已經(jīng)證實(shí)MSP與稱為腦信號(hào)蛋白(sema)結(jié)構(gòu)域的RON的胞外部分中的特定結(jié)構(gòu) 域結(jié)合。RON和c-Met是僅有的具有胞外sema結(jié)構(gòu)域的受體酪氨酸激酶，并且已經(jīng)證實(shí)RON 的sema結(jié)構(gòu)域包括其配體結(jié)合位點(diǎn)。MSP與RON的結(jié)合導(dǎo)致RON的激酶結(jié)構(gòu)域中磷酸化，這使得RON激酶活性增加?；蛘?，β工整聯(lián)蛋白可經(jīng)由Src依賴性途徑將RON磷酸化并活化(Camp等人Ann. Surg. Oncol. 12 :273_281 (2005))。RON的活化引發(fā)了許多途徑的信號(hào)傳導(dǎo)，包括PI3-K、RaS、Src、β-連環(huán)蛋白和Fak信號(hào)傳導(dǎo)。由RON活化的許多信號(hào)傳導(dǎo)途徑牽涉在與癌癥相關(guān)的過(guò)程諸如增殖和凋亡的抑制中。最近，由于多種原因，RON本身已牽涉在癌癥演變中。例如，RON在包括乳腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢癌和胰腺癌的多種人類腫瘤中表達(dá)。此外，RON已經(jīng)在體外顯示出增加細(xì) 胞增殖和活動(dòng)性。而且，RON在RON轉(zhuǎn)基因小鼠中誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移(metastisis) (Waltz 等人Cancer Research66 11967-11974 (2006))。因此，對(duì)可以抑制RON信號(hào)傳導(dǎo)途徑的包括抗RON抗體在內(nèi)的分子存在需求。

發(fā)明內(nèi)容
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至與選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、 M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、
20M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體與RON結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段包含與選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域相同的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的重鏈可變區(qū)(VH)包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少 90% 相同的氨基酸序列SEQ IDN0:4、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO 115, SEQ ID NO 125, SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:145。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的輕鏈可變區(qū)(VL)包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少 90%相同的氨基酸序列SEQ IDN0:9、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 29、SEQ ID N0: 39,SEQ ID NO 49,SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 89、SEQ IDNO 99、SEQ ID NO 120,SEQ ID NO 130,SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID N0:150。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ IDNO :84、SEQ ID NO : 94、SEQ ID N0:115、SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO: 145。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ IDNO :89、SEQ ID NO : 99、SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO: 150。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、 SEQ ID NO 74,SEQ IDNO : 84、SEQ ID NO : 94、SEQ ID NO : 115、SEQ ID NO 125,SEQ ID NO: 135 和 SEQ ID NO :145。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、 SEQ ID NO 79,SEQ IDNO :89、SEQ ID NO 99,SEQ TD NO 120,SEQ ID NO 130,SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO :150。
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在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和VL分別包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少 90%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO :14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24 禾口 SEQID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ IDNO 49 ；SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID N0:84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ IDNO :94 禾口 SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO :120、SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO :130、SEQ ID NO 135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ IDN0:145 和 SEQ ID NO 150。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和VL各自除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外，分別包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO 34 和 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO 44 和 SEQ TD NO 49 ；SEQ ID NO 54 和 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ； SEQ ID N0:94 禾口 SEQ ID NO 99、SEQ IDNO :115 禾口 SEQ ID NO 120,SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130, SEQ IDNO 135 禾口 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO 150。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和VL分別包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO 4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 115 禾口 SEQ ID NO :120、SEQ ID NO: 125 禾口 SEQ ID NO 130、SEQ IDNO 135 和 SEQ ID NO: 140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ο在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-1 (VH-⑶Rl)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶Rl氨基酸序列SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :15、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO
55、SEQID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :95、SEQ IDNO :116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136和SEQ ID N0:146。在另外的實(shí)施方案中，所述VH-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組:SEQ IDNO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO 45,SEQ ID NO 55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 85、SEQ IDNO :95、SEQ ID NO 116, SEQ ID NO 126, SEQ ID N0:136 和 SEQ ID NO 146。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-2 (VH-⑶R2)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶R2氨基酸序列SEQ ID N0:6、SEQ IDNO 16,SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID N0:
56、SEQID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO :86、SEQ ID NO :96、SEQ IDNO :117、SEQ ID NO 127,SEQ ID N0:137和SEQ ID NO 147。在另外的的實(shí)施方案中，所述VH-CDR2氨基酸
22序列選自由以下組成的組SEQ IDN0:6、SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 26, SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46,SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 86、SEQ IDNO :96、SEQ ID N0:117、SEQ ID NO 127, SEQ ID N0:137 禾口 SEQ IDNO :147。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-3 (VH-⑶R3)氨基酸序列相同的Kabat VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :7、SEQ IDNO :17、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO -JrJ、SEQ ID NO :87、SEQ ID NO :97、SEQ IDNO :118、SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138和SEQ ID N0:148。在另外的實(shí)施方案中，所述VH-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組:SEQ IDNO :7、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO 47,SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO :97、SEQ ID NO118,SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138 禾口 SEQ IDNO 148。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-I(VL-OTRl)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶Rl氨基酸序列SEQ ID NO :10、SEQ IDNO 20,SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 40,SEQ ID NO 50,SEQ ID NO
60、SEQID NO 70,SEQ ID NO 80,SEQ ID NO 90,SEQ ID N0:100、SEQID NO: 121、SEQ ID N0:131、SEQ ID N0:141和SEQ ID N0:151。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ IDNO :10、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、SEQ ID NO :90、SEQ IDNO :100、 SEQ ID N0:121、SEQ ID NO: 131、SEQ ID NO: 141 禾口 SEQ IDNO 151。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-2 (VL-⑶R2)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶R2氨基酸序列SEQ ID NO IUSEQ IDNO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO:
61、SEQID N0:71、SEQ ID N0:81、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO: 101、SEQID NO: 122、SEQ ID NO 132,SEQ ID NO: 142和SEQ ID NO : 152。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ IDNO :11、SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ IDNO :101、 SEQ ID NO 122, SEQ ID NO 132, SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-3 (VL-⑶R3)氨基酸序列相同的Kabat VL-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :12、SEQ IDNO :22、SEQ ID NO 32,SEQ ID NO :42、SEQ ID NO 52,SEQ ID NO
62、SEQID NO 72,SEQ ID N0:82、SEQ ID NO 92,SEQ ID NO 102,SEQID NO 123,SEQ ID NO 133,SEQ ID N0:143和SEQ ID N0:153。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組:SEQ IDNO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO :92、SEQ IDNO :102、 SEQ ID N0:123、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 143 和 SEQ ID NO 153。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中除了在所述VH-CDR中的至少一個(gè)上的一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或四個(gè)氨基酸取代以外，所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、 36 和 37 ；SEQ ID NO :45、46 和 47 ；SEQ ID NO :55、56 和 57 ；SEQID NO :65、66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID N0:116、117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ；SEQ ID NO :136、137 禾口 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3 氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID N0:65、66 和 67; SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、86 和 87 ；SEQID NO :95、96 和 97 ；SEQ ID NO :116、 117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO :146、 147 和 148。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中除了在VL-CDR中至少一個(gè)上的一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或四個(gè)氨基酸取代以外，所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ；SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NO :40、41和 42 ；SEQ ID NO :50、51和 52 ；SEQ ID NO :60、61和 62 ；SEQ ID NO :70、71和 72 ；SEQ ID NO 80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQID NO 100、101 和 102 ;SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ； SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ； SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 和 153。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的VL-⑶R1、VL-⑶R2和VL-⑶R3 氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 和 12 ;SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ； SEQ ID NO :40、41 和 42 ；SEQ ID NO :50、51 和 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、 71和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91和 92 ；SEQID NO 100、101 禾口 102 ；SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ;SEQ ID N0:141、142 禾口 143;以及 SEQ ID NO :151、152 和 153。在上述的抗體或其片段的各種實(shí)施方案中，除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH構(gòu)架區(qū)和/或VL構(gòu)架區(qū)是人類的。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段結(jié)合至線性表位或非線性構(gòu)象表位。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是多價(jià)的，并包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是雙特異性的。在上述的抗體或其片段的各種實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域是鼠的。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域來(lái)自選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和
241P5B10組成的組的單克隆抗體。在上述的抗體或其片段的各種實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域是完全人類的。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域來(lái)自選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、 M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 組成的組的單克隆 Fab 抗體片段。在各種實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是人源化的。在各種實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是嵌合的。在各種實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是靈長(zhǎng)源化的。在各種實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是完全人類的。在某些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段是Fab片段、Fab，片段、F (ab) 2片段或Fv 片段。在某些實(shí)施方案中，上述的抗體是單鏈抗體。在某些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段包含選自由人類κ恒定區(qū)和人類λ恒定區(qū)組成的組的輕鏈恒定區(qū)。在某些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段包含重鏈恒定區(qū)或其片段。在另外的實(shí) 施方案中，重鏈恒定區(qū)或其片段選自由人類IgG4、IgG4agly、IgGl和IgGlagly組成的組。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段以小于所述參考單克隆抗體的解離常數(shù) (Kd)的Kd所表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽。在另外的實(shí) 施方案中，解離常數(shù)(Kd)不大于 5Χ1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5Χ1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5Χ1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5Χ1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段相對(duì)于鼠RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段結(jié)合至細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì) 胞。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段阻斷MSP與RON結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段抑制MSP依賴性RON活化。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段抑制非MSP依賴性RON活化。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的RAS/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的ERK或AKT的磷酸化。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞遷移、腫瘤細(xì)胞侵入或腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段誘導(dǎo)凋亡。在另外的實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段還包含與其融合的異源性多肽。在一些實(shí)施方案中，上述的抗體或其片段軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié) 齊U、藥物劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)、和兩種或兩種以上任何所述劑的組合。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。在另外的實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括包含上述抗體或其片段和載體的組合物。本發(fā)明的某些實(shí)施方案包括一種包含編碼抗體VH多肽的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ IDNO 24,SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44,SEQ ID NO 54,SEQ ID NO 64,SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO 115,SEQ IDNO 125,SEQ ID N0:135和SEQ ID NO :145 ；并且其中包含所述VH多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH多肽的氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :4、SEQ IDNO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ IDNO :115、SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO 145。在某些實(shí)施方案中，編碼所述VH多肽的核苷酸序列被優(yōu)化以增加所述VH多肽的表達(dá)而不改變其氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案中，所述優(yōu)化包括識(shí)別和移除剪接供體位點(diǎn)和剪接受體位點(diǎn)和/或表達(dá)所述多核苷酸細(xì)胞的密碼子使用的優(yōu)化。在另外的實(shí)施方案中，所述核酸包含選自由以下組成的組的核苷酸序列SEQ ID N0:3、SEQ FD NO 13,SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :63、SEQ IDNO :73、SEQ ID NO 83,SEQ ID NO :93、SEQ ID NO : 114、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 134 禾口 SEQ ID NO: 144。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90% 相同SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :19、SEQ IDNO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID N0:120、SEQ IDNO :130、SEQ ID NO 140和SEQ ID NO 150 ；并且其中包含所述VL多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VL多肽的氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :9、SEQ IDNO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、 SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 120、SEQ ID NO 130, SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO 150。在某些實(shí)施方案中，編碼所述VL多肽的核苷酸序列被優(yōu)化以增加所述VL多肽的表達(dá)而不改變其氨基酸序列。在另外的實(shí)施方案中，所述優(yōu)化包括識(shí)別和移除剪接供體位點(diǎn)和剪接受體位點(diǎn)和/或表達(dá)所述多核苷酸細(xì)胞的密碼子使用的優(yōu)化。在另外的實(shí)施方案中，所述核酸包含選自由以下組成的組的核苷酸序列SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :58、SEQ ID NO :68、SEQ IDNO :78、SEQ ID NO 88,SEQ ID NO 98,SEQ ID NO 119,SEQ ID NO 129、SEQ ID N0:139 禾口 SEQ ID N0: 149。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼抗體VH多肽的核酸的分離的
26多核苷酸，其中除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外，所述VH多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、 SEQ ID NO :34、SEQID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO 84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 135 和 SEQID NO: 145;并且其中包含所述VH多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多核苷酸，其中除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外，所述VL多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同SEQID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 29, SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ IDNO :99、SEQ ID N0:120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ IDNO 150 ；并且其中包含所述VL多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VH-⑶Rl氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，其中除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH-CDRl氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考VH-CDRl氨基酸序列相同:SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 35,SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 85,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO :116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID N0:146;并且其中包含所述VH-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :116、SEQID NO :126、SEQ ID NO 136 和 SEQ ID NO
146。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VH-⑶R2氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，所述VH-CDR2氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外，與選自由以下組成的組的參考VH-CDR2氨基酸序列相同=SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :26、 SEQ ID NO :36、SEQID NO :46、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ ID NO
86、SEQID NO :96、SEQ ID NO :117、SEQ ID NO :127、SEQ ID NO 137 和 SEQ ID NO 147 ；并且其中包含所述VH-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH-⑶R2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :6、SEQ ID N0:16、SEQ ID NO 26,SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 86,SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 127、SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID N0:
147。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VH-⑶R3氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，所述VH-CDR3氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外，與選自由以下組成的組的參考VH-CDR3氨基酸序列相同SEQ ID NO :7、SEQ ID N0:17、SEQ ID NO :27、 SEQ ID NO :37、SEQID NO :47、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO :77、SEQ ID NO
87、SEQID NO :97、SEQ ID NO :118、SEQ ID NO :128、SEQ ID NO 138 和 SEQ ID NO 148 ；并且其中包含所述VH-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH-⑶R3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :7、SEQ ID N0:17、SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 67、SEQ IDNO 77、SEQ
27ID NO 87,SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 128、SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO: 148。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VL-CDRl氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，所述VL-CDRl氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外，與選自由以下組成的組的參考VL-CDRl氨基酸序列相同SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :30、 SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、SEQ IDNO
90、SEQID NO :100、SEQ ID NO :121、SEQ ID NO :131、SEQ FD NO 141 和 SEQ ID NO 151 ；并且其中包含所述VL-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :70、SEQ ID NO :80、 SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 100,SEQ ID NO 121、SEQID NO 131、SEQ ID NO 141 和 SEQ ID NO :151。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VL-CDR2氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，所述VL-CDR2氨基酸序列除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外，與選自由以下組成的組的參考VL-CDR2氨基酸序列相同SEQ ID NO =IUSEQ ID N0:21、SEQ ID NO :31、 SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ IDNO
91、SEQID NO 101 ； SEQ ID NO :122、SEQ ID NO :132、SEQ ID NO 142 和 SEQ ID NO 152 ；并且其中包含所述VL-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、 SEQ ID N0:91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO 122、SEQID NO 132、SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼VL-CDR3氨基酸序列的核酸的分離的多核苷酸，所述VL-CDR3氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外，與選自由以下組成的組的參考VL-CDR3氨基酸序列相同SEQ ID NO 12, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO :32、 SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、SEQ IDNO
92、SEQID N0:102、SEQ ID N0:123、SEQ ID N0:133、SEQ ID N0:143 禾口 SEQ ID NO 153 ；并且其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VL-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO 12,SEQ ID NO 22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :82、 SEQ ID NO 92,SEQ ID NO 102,SEQ ID NO 123、SEQID NO 133、SEQ ID N0:143 和 SEQ ID NO :153。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼抗體VH多肽的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VH多肽包含選自由以下組成的組的VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、 36 和 37;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID N0:116、117和 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ；SEQ ID NO :136、137 禾口 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148 ；并且其中包含所述VH-⑶R3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含編碼抗體VL多肽的核酸的分離的多核苷酸，其中所述VL多肽包含選自由以下組成的組的VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列=SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 和 22 ；SEQ ID NO :30、31 和 32 ；SEQ ID NO 40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 禾口 72 ;SEQ ID NO :80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQID N0:100、101和 102；SEQ ID NO :121、 122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 和 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、 152和153 ；并且其中包含所述VL-⑶R3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。在一些實(shí)施方案中，上述的多核苷酸還包含編碼融合于所述抗體VH多肽或所述抗體VL多肽的信號(hào)肽的核酸。在某些其它實(shí)施方案中，上述的多核苷酸還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域、編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2結(jié)構(gòu)域、編碼融合于所述VH 多肽的重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域、或編碼融合于所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。在另外的實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)選自由人類IgG4、IgG4agly、IgGl或IgGlagly組成的組。在一些實(shí)施方案中，上述的多核苷酸包含編碼融合于所述VL多肽的輕鏈恒定區(qū) 結(jié)構(gòu)域的核酸。在另外的實(shí)施方案中，所述輕鏈恒定區(qū)是人類κ。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合與選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10和M80-B03組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。在上述多核苷酸的各種其它實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、 M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH 多肽或所述VL多肽的構(gòu)架區(qū)是人類的。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合于線性表位或非線性構(gòu)象表位。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是多價(jià)的，并包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。在上述多核苷酸的某些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是雙特異性的。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段包含為完全人類的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E 12組成的組的單克隆Fab抗體片段的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段包含為鼠的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另外的實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu) 域與選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的單克隆抗體的重鏈和輕鏈可
29變結(jié)構(gòu)域相同。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是人源化的。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是靈長(zhǎng)源化的。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是嵌合的。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是完全人類的。在上述多核苷酸的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab) 2片段或FV片段。在上述多核苷酸的某些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈抗體。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段以解離常數(shù)(Kd)所表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽，所述解離常數(shù)(Kd)不大于 5 X 1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5 X 1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5 X 1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5 X 1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段相對(duì)于鼠RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合于細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移性細(xì)胞。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段阻斷MSP與RON結(jié)合。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制MSP依賴性RON活化。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制非MSP依賴性RON活化。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制Ras/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制RON介導(dǎo)的ERK的磷酸化。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制RON介導(dǎo)的細(xì)胞增殖或腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段誘導(dǎo)凋亡。在一些實(shí)施方案中，上述的多核苷酸還包含編碼異源性多肽的核酸。在上述多核苷酸的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、藥物制劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)、以及兩種或兩種以上任何所述劑的組合。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。在某些其它實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上述的多核苷酸的組合物。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上述的多核苷酸的載體。在另外的實(shí)施方案中，所述多核苷酸可操作地與啟動(dòng)子締合。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含這樣的載體的宿主細(xì)胞。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供其中多核苷酸可操作地與啟動(dòng)子締合的載體。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，包括培養(yǎng)含有包含上述的多核苷酸的載體的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供由上述方法產(chǎn)生的分離的多肽。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供由上述的多核苷酸編碼的分離的多肽。在上述多肽的另外的實(shí)施方案中，包含所述多肽的抗體或其片段特異性地結(jié)合至 RON。其它實(shí)施方案包括包含上述多肽的分離的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包括編碼與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 9 ；SEQ IDNO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQID NO 59 ； SEQ ID NO 64 和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ IDNO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94和 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO :115和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID NO 135 和 SEQ ID NO 140 ；以及 SEQ ID NO 145 和 SEQ IDNO 150 ；并且其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包括編碼選自由以下組成的組的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ； SEQ ID N0:14和SEQ ID NO: 19 ；SEQ IDNO :24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO 54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84 禾口 SEQ IDNO 89 ；SEQ ID NO :94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID N0:115 禾口 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID N0:135 禾口 SEQ IDNO 140 ；以及 SEQ ID NO: 145 禾口 SEQ ID NO 150。在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的 VL編碼多核苷酸的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包括編碼除了少于20個(gè)保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列的核酸:SEQ IDNO :4 禾口 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO :14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO :64 禾口 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ； SEQID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ；SEQ ID NO 135 和 SEQ ID NO 140 ；以及SEQ ID NO: 145和SEQ ID NO 150 ；并且其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合RON。在另外的實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸編碼包含選自由以下組成的組的 VH-CDRl、VH-CDR2 和 VH-CDR3 氨基酸序列的 VH 多肽SEQID NO :5、6 和 7 ;SEQ ID N0:15、 16 禾口 17;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID N0:85、86 和 87 ；SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID NO :116、117 和 118 ;SEQ ID NO : 126、127 和 128 ;SEQ ID NO : 136、137和138 ；以及SEQ IDNO 146、147禾口 148 ；其中所述VL編碼多核苷酸編碼包含選自由以下組成的組的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列的VL多肽SEQID NO 10、11和12· ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51和 52 ；SEQ ID NO :60、61和 62 ；SEQ ID NO :70、71和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQ ID NO 100、101 禾口 102 ;SEQ ID N0:121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 禾口 133 ;SEQ ID N0:141、142 禾口 143;以及 SEQ IDNO 151、152 禾口 153 ；并且其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合RON。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述抗體VH多肽的信號(hào)肽的核酸。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述抗體VL多肽的信號(hào)肽的核酸。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述 VH多肽的重鏈恒定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域的核酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2 結(jié)構(gòu)域的核酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域的核酸，或者還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。在另外的實(shí)施方案中，所述重鏈恒定區(qū)選自由人類IgG4、IgG4agly、IgGl和IgGlagly組成的組。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述 VL多肽的輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的核酸。在另外的實(shí)施方案中，所述輕鏈恒定區(qū)是人類κ。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、 M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、 1P4A3UP4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、 M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、 1P4A3UP4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體與RON結(jié)合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH和 VL多肽的構(gòu)架區(qū)是人類的。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其
32片段結(jié)合于線性表位或非線性構(gòu)象表位。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是多價(jià)的，并且包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是多特異性的。在另外的實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是雙特異性的。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段包含為完全人類的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另外的實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E12組成的組的單克隆Fab抗體片段的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段包含為鼠的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另外的實(shí)施方案中，所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu) 域與選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段是人源化的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段是靈長(zhǎng)源化的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段是嵌合的。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段是完全人類的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段或Fv片段。在上述組合物的某些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈抗體。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段以解離常數(shù)(Kd)表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽，其中所述解離常數(shù)(Kd)不大于 5 X 1(Γ2Μ、1(Γ2Μ、5 X 1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5 X 1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5 X 1(Γ5Μ、 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ 1(Γ7Μ、1(Γ7Μ、5Χ 1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ 1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ 1(Γ10Μ、1(Γ10Μ、 5 X IiT11M、1(Γ"Μ、5 X 1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、5 X 1(Γ13Μ、1(Γ13Μ、5 X 1(Γ14Μ、1(Γ14Μ、5 X ICT15M 或 IO-15M0在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段相對(duì)于鼠RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段結(jié)合至細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段阻斷MSP與RON結(jié)合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段抑制MSP依賴性RON活化。
33
在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段抑制非MSP依賴性RON活化。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段抑制Ras/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段抑制RON介導(dǎo)的ERK或AKT的磷酸化。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段抑制RON介導(dǎo)的細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞遷移、腫瘤細(xì)胞侵入或腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段誘導(dǎo)凋亡。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸、所述VL編碼多核苷酸、或所述VH和VL編碼多核苷酸二者還包含編碼異源性多肽的核酸。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié) 合片段軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、藥物制劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)、以及兩種或兩種以上任何所述劑的組合。在另外的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。在某些其它實(shí)施方案中，所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。在上述組合物的一些實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸包含在第一載體上且所述VL編碼多核苷酸包含在第二載體上。在另外的實(shí)施方案中，所述VH編碼多核苷酸可操作地與第一啟動(dòng)子締合且所述VL編碼多核苷酸可操作地與第二啟動(dòng)子締合。在某些其它實(shí)施方案中，所述第一啟動(dòng)子和所述第二啟動(dòng)子是相同啟動(dòng)子的拷貝。在另外的實(shí)施方案中，所述第一啟動(dòng)子和所述第二啟動(dòng)子是不相同的。在上述組合物的各種實(shí)施方案中，所述第一載體和所述第二載體包含在單個(gè)宿主細(xì)胞中。在上述組合物的某些其它實(shí)施方案中，所述第一載體和所述第二載體包含在分別的宿主細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，包括培養(yǎng)上述的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，包括共培養(yǎng)分別的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。在上述方法的另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供組合所述VH編碼多肽和VL編碼多肽，并回收所述抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供由上述的方法產(chǎn)生的一種特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供組合物，其中所述VH和VL編碼多核苷酸在同一載
34體上，以及所述組合物所在的載體。在上述載體的各種實(shí)施方案中，所述VH和VL編碼多核苷酸各自可操作地與啟動(dòng) 子締合。在上述載體的各種實(shí)施方案中，所述VH和VL編碼多核苷酸在框內(nèi)融合，從與其可操作地締合的單個(gè)啟動(dòng)子共轉(zhuǎn)錄，并共翻譯為單鏈抗體或其抗原結(jié)合片段。在上述載體的各種實(shí)施方案中，所述VH和VL編碼多核苷酸從與其可操作地締合的單個(gè)啟動(dòng)子共轉(zhuǎn)錄，但分別翻譯。在另外的實(shí)施方案中，所述載體還包括安放在所述VH 編碼多核苷酸與所述VL編碼多核苷酸之間的IRES序列。在某些其它實(shí)施方案中，各自與分別的啟動(dòng)子可操作地締合的所述編碼VH的多核苷酸和所述編碼VL的多核苷酸分別轉(zhuǎn) 錄。在另外的實(shí)施方案中，所述分別的啟動(dòng)子是同一啟動(dòng)子的拷貝，或所述分別的啟動(dòng)子是不相同的。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上述載體的宿主細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，包括培養(yǎng)上述的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種由上述的方法產(chǎn)生的特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療動(dòng)物的過(guò)度增生性病癥的方法，包括向需要治療的動(dòng)物施用包含以下組分的組合物a)如上述的分離的抗體或片段；和b)藥學(xué)上可接受的載體。在另外的實(shí)施方案中，所述過(guò)度增生性疾病或病癥選自由癌癥、贅生物、腫瘤、惡性腫瘤、或其轉(zhuǎn)移組成的組。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述抗體或其片段特異性地結(jié)合至惡性細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。在另外的實(shí)施方案中，所述抗體或其片段對(duì)惡性細(xì)胞的結(jié)合導(dǎo)致所述惡性細(xì) 胞的生長(zhǎng)抑制。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述抗體或其片段抑制RON磷酸化或抑制腫瘤細(xì) 胞增殖。在另外的實(shí)施方案中，通過(guò)阻止或阻滯轉(zhuǎn)移性生長(zhǎng)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞遷移。在另外的實(shí)施方案中，通過(guò)阻止或阻滯腫瘤向相鄰組織擴(kuò)散而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述過(guò)度增生性疾病或病癥是位于以下位置的贅生物前列腺、結(jié)腸、腹部、骨、乳房、消化系統(tǒng)、肝臟、胰、腹膜、腎上腺、甲狀旁腺、垂體腺、睪丸、卵巢、胸腺、甲狀腺、眼、頭、頸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、骨盆、皮膚、軟組織、脾臟、胸部、或泌尿生殖道。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述過(guò)度增生性疾病是癌癥，所述癌癥選自由以下組成的組上皮鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、胰腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、睪丸癌、甲狀腺癌和頭頸癌。在另外的實(shí)施方案中，所述癌癥選自由胃癌、腎癌、腦癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌組成的組。在上述方法的各種實(shí)施方案中，所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。在另外的實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是人類。
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圖1顯示與SW480細(xì)胞結(jié)合的抗體的代表性FACS結(jié)合曲線。圖2A和2B顯示單克隆鼠抗RON抗體和人類單克隆抗RON Fab對(duì)MSP與RON結(jié)合的作用。圖3A-3C顯示抗RON抗體對(duì)MB-453乳腺癌細(xì)胞和BxPC_3胰腺癌細(xì)胞中MSP引起的RON磷酸化的作用。圖4A-C顯示抗RON抗體對(duì)過(guò)表達(dá)野生型RON的293細(xì)胞、表達(dá)RON的組成型活化的激酶結(jié)構(gòu)域突變體的細(xì)胞和BxPC-3胰腺細(xì)胞中非MSP依賴性RON信號(hào)傳導(dǎo)的作用。圖5顯示抗RON抗體對(duì)BxPC3和MDA-MB-453腫瘤細(xì)胞中pAKT磷酸化的作用。圖6顯示與表達(dá)人類RON剪接變體RON δ 160的細(xì)胞結(jié)合的抗體的FACS結(jié)合曲線。圖7顯示測(cè)量RON抗體對(duì)可溶性RON的結(jié)合的ELISA測(cè)定結(jié)果。圖8顯示與表達(dá)RON的293細(xì)胞結(jié)合的抗體的FACS結(jié)合曲線。圖9是描繪測(cè)量與表達(dá)RON的CHO細(xì)胞結(jié)合的抗體的FACS測(cè)定結(jié)果的條形圖。圖10顯示用RON抗體處理的腫瘤細(xì)胞中ERK和磷酸-ERK的蛋白質(zhì)印跡。該條形圖顯示利用抗體1P3B2. 2獲得的蛋白質(zhì)印跡中的結(jié)果定量。圖IlA顯示用RON抗體處理的腫瘤細(xì)胞中AKT和磷酸-AKT的蛋白質(zhì)印跡。圖IlB 描繪條形圖，顯示利用抗體1P3B2. 2獲得的蛋白質(zhì)印跡中的結(jié)果定量。圖12顯示未處理的、用對(duì)照抗體處理的、用MSP處理的、或用MSP和抗RON抗體處理的各種腫瘤細(xì)胞中磷酸-AKT和磷酸-ERK的蛋白質(zhì)印跡。圖13A顯示測(cè)量RON抗體與可溶性人類RON和cyno RON的結(jié)合的ELISA測(cè)定結(jié) 果。圖13B和13C顯示測(cè)量人類MSP與可溶性人類RON (圖13C)和cyno (圖13B) RON的結(jié) 合的ELISA結(jié)果。圖 14A-C 顯示利用 HT1080 和 HT1080-R0N(圖 14A)、AGS (圖 14B)禾PMDA-MB-231 (圖 14C)細(xì)胞系的腫瘤細(xì)胞侵入測(cè)定結(jié)果。較高的條表示增加的細(xì)胞侵入。圖15顯示測(cè)量RON抗體對(duì)可溶性人類RON (Sema和PSI結(jié)構(gòu)域)和RON的PSI結(jié) 構(gòu)域的結(jié)合的ELISA測(cè)定結(jié)果。圖16顯示抗鼠RON抗體結(jié)合至表達(dá)鼠RON的293細(xì)胞的FACS結(jié)合曲線。圖17A顯示表達(dá)鼠RON的且用抗鼠RON抗體處理的CHO細(xì)胞中AKT和磷酸-AKT 的蛋白質(zhì)印跡。圖17B顯示其定量。圖18A-B顯示抗鼠RON抗體和抗人類RON抗體與表達(dá)鼠RON蛋白(圖18A)或人類(圖18B)RON蛋白的293細(xì)胞結(jié)合的FACS結(jié)合曲線。圖19是顯示在各種癌癥細(xì)胞類型中RON表達(dá)水平和磷酸-ERK與磷酸-AKT的增加的表格。圖20顯示展示施用了腫瘤細(xì)胞并用抗RON抗體治療的SCID小鼠中腫瘤大小的圖。箭頭表示施用抗體的時(shí)間點(diǎn)。發(fā)明詳述I.定義注意術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”實(shí)體是指一個(gè)或多個(gè)該實(shí)體；例如“RON抗體”理解為表示一個(gè) 或多個(gè)RON抗體。像這樣，術(shù)語(yǔ)“一個(gè))、“一個(gè)或多個(gè)”和“至少一個(gè)”在本文中可互換地使
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“多肽”旨在涵蓋單數(shù)的“多肽”以及復(fù)數(shù)的“多肽”，并且指的是由被酰胺鍵(也被稱作肽鍵)以線狀連接的單體(氨基酸)所組成的分子。術(shù)語(yǔ)“多肽”是指含兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸的任何鏈，并且不是指特定長(zhǎng)度的產(chǎn)物。因此，肽、二肽、三肽、低聚肽、“蛋白”、“氨基酸鏈”或用來(lái)指兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸的鏈的任何其它術(shù)語(yǔ)被包括在“多肽”的定義之中，而且術(shù)語(yǔ)“多肽”可替代這些術(shù)語(yǔ)中的任何一個(gè)使用或者可與這些術(shù)語(yǔ)中的任何一個(gè)互換地使用。術(shù)語(yǔ)“多肽”也意指多肽的表達(dá)后修飾的產(chǎn)物，所述修飾包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、由已知的保護(hù)/封端基團(tuán)進(jìn)行的衍生作用、蛋白酶剪切或由非天然存在的氨基酸進(jìn)行的修飾。多肽可由天然生物來(lái)源得到或由重組技術(shù)產(chǎn)生，但不一定是從指定的核酸序列翻譯而來(lái)。它能夠以任何方式產(chǎn)生，包括通過(guò)化學(xué)合成。本發(fā)明的多肽可以具有大約3個(gè)或更多個(gè)、5個(gè)或更多個(gè)、10個(gè)或更多個(gè)、20個(gè)或更多個(gè)、25個(gè)或更多個(gè)、50個(gè)或更多個(gè)、75個(gè)或更多個(gè)、100個(gè)或更多個(gè)、200個(gè)或更多個(gè)、 500個(gè)或更多個(gè)、1，000個(gè)或更多個(gè)或者2，000個(gè)或更多個(gè)氨基酸的大小。多肽可具有確定的三維結(jié)構(gòu)，雖然它們不一定具有這種結(jié)構(gòu)。具有確定的三維結(jié)構(gòu)的多肽被稱為是折疊的，而不具有確定的三維結(jié)構(gòu)的多肽反而能夠采用大量不同構(gòu)象并且被稱為是未折疊的。如本文所用，術(shù)語(yǔ)糖蛋白是指與至少一個(gè)碳水化合物部分偶聯(lián)的蛋白，其中所述碳水化合物部分是通過(guò)氨基酸殘基例如絲氨酸殘基或天冬酰胺殘基的含氧或含氮側(cè)鏈連接至蛋白的?！胺蛛x的”多肽或其片段、變體或衍生物意為不處于其天然環(huán)境的多肽。不需要特定水平的純化。例如，分離的多肽可從其天生的或天然的環(huán)境中取出。表達(dá)在宿主細(xì)胞中的重組產(chǎn)生的多肽和蛋白被認(rèn)為是為了本發(fā)明的目的而分離的，就像已通過(guò)任何適合的技術(shù)而分離、分餾或者部分地或基本上純化的天生或重組多肽一樣。本發(fā)明的多肽還包括前述多肽的片段、衍生物、類似物或變體及其任意組合。當(dāng)指本發(fā)明的RON抗體或抗體多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)“片段”、“變體”、“衍生物，，和“類似物，，包括保留相應(yīng)的天然抗體或多肽的至少一些抗原結(jié)合特性的任何多肽。本發(fā)明多肽的片段包括蛋白酶解片段以及缺失片段，另外還包括本文在別處所討論的具體抗體片段。本發(fā)明的RON抗體和抗體多肽的變體包括上述的片段，并且還包括含有由于氨基酸取代、缺失或插入所致的氨基酸序列改變的多肽。變體可天然地存在或非天然地存在。可以使用領(lǐng)域已知的誘變技術(shù)產(chǎn)生非天然地存在的變體。變體多肽可包括保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。本發(fā)明的RON抗體和抗體多肽的衍生物是已被改變以表現(xiàn)未見于天然多肽的其它特征的多肽。實(shí)例包括融合蛋白。變體多肽在本文還稱為“多肽類似物”。如本文所用，RON抗體或抗體多肽的“衍生物”是指具有通過(guò)功能側(cè)基的反應(yīng)而化學(xué)衍生出的一個(gè)或多個(gè)殘基的主題多肽。還包括為“衍生物”的是包含二十種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的一種或多種自然產(chǎn)生的氨基酸衍生物的肽。例如，4-羥基脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羥基賴氨酸可以取代賴氨酸；3-甲基組氨酸可以取代組氨酸；高絲氨酸可以取代絲氨酸；以及鳥氨酸可以取代賴氨酸。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”旨在涵蓋單數(shù)的核酸以及復(fù)數(shù)的核酸，并且是指分離的核酸分子或構(gòu)建體，例如信使RNA (mRNA)或質(zhì)粒DNA (pDNA)。多核苷酸可包括常規(guī)的磷酸二酯鍵或非常規(guī)的鍵(例如酰胺鍵，像在肽核酸(PNA)中發(fā)現(xiàn)的)。術(shù)語(yǔ)“核酸”是指任何一個(gè)或多個(gè)核酸區(qū)段，例如存在于多核苷酸中的DNA或RNA片段?！胺蛛x的”核酸或多核苷酸是指從其天生環(huán)境被取出的核酸分子、DNA或RNA。例如，為了本發(fā)明的目的，包含在載體中的編碼
37RON抗體的重組多核苷酸被視為分離的。分離的多核苷酸的另外的實(shí)例包括被保持在異源宿主細(xì)胞中的重組多核苷酸或溶液中的(部分地或基本上)純化的多核苷酸。分離的RNA 分子包括本發(fā)明多核苷酸的體內(nèi)或體外RNA轉(zhuǎn)錄物。根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸或核酸還包括通過(guò)合成而產(chǎn)生的那些分子。另外，多核苷酸或核酸可以是調(diào)節(jié)元件或者可以包括調(diào)節(jié)元件，例如啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)或轉(zhuǎn)錄終止子。如本文所用，“編碼區(qū)”是由翻譯為氨基酸的密碼子所組成的核酸分子的一部分。雖然“終止密碼子”(TAG、TGA或TAA)未被翻譯為氨基酸，但它可被視為編碼區(qū)的一部分，然而任何旁側(cè)序列例如啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止子、內(nèi)含子以及諸如此類不是編碼區(qū)的一部分。本發(fā)明的兩個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)可存在于單個(gè)多核苷酸構(gòu)建體中例如在單個(gè)載體上，或者在分別的多核苷酸構(gòu)建體中例如在分別的(不同的)載體上。此外，任何載體可含有單個(gè)編碼區(qū)，或者可包括兩個(gè)或更多編碼區(qū)，例如單個(gè)載體可分別編碼免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。另外，本發(fā)明的載體、多核苷酸或核酸可編碼異源性編碼區(qū)，所述異源性編碼區(qū)被融合或未被融合至編碼RON抗體或其片段、變體或衍生物的核酸。異源性編碼區(qū)包括但不限于專門的元件或模體，例如分泌信號(hào)肽或異源性功能域。在某些實(shí)施方案中，所述多核苷酸或核酸是DNA。在DNA的情況下，包括編碼多肽的核酸在內(nèi)的多核苷酸通?？砂c一個(gè)或多個(gè)編碼區(qū)可操作地締合的啟動(dòng)子和/或其它轉(zhuǎn)錄或翻譯控制元件?？刹僮鞯木喓鲜侵富虍a(chǎn)物例如多肽的編碼區(qū)以這樣一種方式與一個(gè)或多個(gè)調(diào)節(jié)序列相締合以將該基因產(chǎn)物的表達(dá)置于所述一個(gè)或多個(gè)調(diào)節(jié)序列的影響或控制之下。兩個(gè)DNA片段(例如多肽編碼區(qū)和與之相締合的啟動(dòng)子)是“可操作地締合的”，如果啟動(dòng)子功能的誘導(dǎo)導(dǎo)致編碼期望的基因產(chǎn)物的mRNA的轉(zhuǎn)錄并且如果這兩個(gè)DNA 片段之間的連接的性質(zhì)不干擾表達(dá)調(diào)節(jié)序列指導(dǎo)該基因產(chǎn)物的表達(dá)的能力或不干擾DNA 模板被轉(zhuǎn)錄的能力的話。因此，可將啟動(dòng)子區(qū)與編碼多肽的核酸可操作地締合，如果所述啟動(dòng)子能夠?qū)崿F(xiàn)該核酸的轉(zhuǎn)錄。所述啟動(dòng)子可以是只在預(yù)先確定的細(xì)胞中指導(dǎo)DNA的大量轉(zhuǎn) 錄的細(xì)胞特異性啟動(dòng)子。除了啟動(dòng)子之外的其它轉(zhuǎn)錄控制元件，例如增強(qiáng)子、操縱子、阻抑物和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，能夠與多核苷酸可操作地締合以指導(dǎo)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄。適合的啟動(dòng)子和其它轉(zhuǎn)錄控制區(qū)公開在本文中。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道各種轉(zhuǎn)錄控制區(qū)。這些包括但不限于在脊椎動(dòng)物細(xì)胞中起作用的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)，例如但不限于來(lái)自如下病毒的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子區(qū)段細(xì)胞巨化病毒(與內(nèi)含子A—起的立即早期啟動(dòng)子)、猿猴病毒40(早期啟動(dòng)子)和逆轉(zhuǎn)錄病毒(例如勞氏肉瘤病毒)。其它的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括源自脊椎動(dòng)物基因的那些，例如肌動(dòng)蛋白、熱激蛋白、牛生長(zhǎng)激素和兔球蛋白，以及能夠控制真核細(xì)胞中的基因表達(dá)的其它序列。另外的適合的轉(zhuǎn)錄控制區(qū)包括組織特異性啟動(dòng)子和增強(qiáng)子以及淋巴因子誘導(dǎo)的啟動(dòng)子(例如可被干擾素或白細(xì)胞介素誘導(dǎo)的啟動(dòng)子)。相似地，各種翻譯控制元件是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。這些包括但不限于核糖體結(jié)合位點(diǎn)、翻譯起始密碼子和終止密碼子以及源自微小RNA病毒的元件(特別是內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)或IRES，其也被稱作CITE序列)。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明的多核苷酸是RNA，例如以信使RNA (mRNA)的形式。本發(fā)明的多核苷酸和核酸編碼區(qū)可與編碼分泌肽或信號(hào)肽的另外的編碼區(qū)相締合，其中所述分泌肽或信號(hào)肽指導(dǎo)由本發(fā)明的多核苷酸編碼的多肽的分泌。根據(jù)信號(hào)假說(shuō)，由哺乳動(dòng)物細(xì)胞分泌的蛋白具有信號(hào)肽或分泌前導(dǎo)序列，其在生長(zhǎng)中的蛋白鏈跨粗面內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)輸出被啟動(dòng)時(shí)從成熟蛋白上被切下。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道，由脊椎動(dòng)物細(xì)胞分泌的多肽通常具有融合至所述多肽N端的信號(hào)肽，其從完整的或“全長(zhǎng)”的多肽被切下以產(chǎn)生分泌的或“成熟的”形式的多肽。在某些實(shí)施方案中，使用天然的信號(hào)肽例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號(hào)肽，或者該序列的功能衍生物，所述功能性衍生物保持了指導(dǎo)與之可操作地締合的多肽分泌的能力?；蛘?，可以使用異源性哺乳動(dòng)物信號(hào)肽或其功能性衍生物。例如，可以用人類組織纖溶酶原激活劑(TPA)或小鼠葡萄糖醛酸酶的前導(dǎo)序列取代野生型前導(dǎo) 序列。本發(fā)明還涉及某些RON抗體、或其抗原結(jié)合片段、變體或衍生物。除非具體地指原尺寸的抗體諸如自然產(chǎn)生的抗體，否則術(shù)語(yǔ)“RON抗體”涵蓋原尺寸的抗體以及這樣的抗體的抗原結(jié)合片段、變體、類似物或衍生物，例如，以類似于抗體分子的方式結(jié)合抗原的天然產(chǎn)生的抗體或免疫球蛋白分子或改造的抗體分子或片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”和“免疫球蛋白，，在本文中被互換地使用?？贵w或免疫球蛋白至少包含重鏈的可變結(jié)構(gòu)域，并且通常至少包含重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域。脊椎動(dòng)物系統(tǒng)中基本的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)被理解得相對(duì)較好。參見，例如Harlow等人，Antibodies =A Laboratory Manual (抗體實(shí)驗(yàn)手冊(cè))，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第 2 版，1988)。下面將更詳細(xì)地討論到，術(shù)語(yǔ)“免疫球蛋白”包括可通過(guò)生物化學(xué)手段區(qū)別的各種廣泛類別的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，重鏈被分類為gamma、mu、alpha、delta或 epsilon(y , μ、α、δ、ε )以及它們中的一些亞類(例如，Y 1_ Y 4)。此鏈的性質(zhì)決定抗體的“類別”分別為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亞類(同種型)例如IgGl、IgG2、 IgG3、IgG4、IgAl等被很好地表征并已知給予功能專門化。這些類別和同種型的各自的修飾形式是可由技術(shù)人員鑒于本公開而容易辨別的，并且因此在本發(fā)明的范圍內(nèi)。所有的免疫球蛋白類別都清楚地在本發(fā)明的范圍內(nèi)，下面的討論通常將針對(duì)免疫球蛋白分子的IgG 類別。關(guān)于IgG，標(biāo)準(zhǔn)的免疫球蛋白分子包含兩個(gè)分子量大約為23，000道爾頓的相同的輕鏈多肽和兩個(gè)分子量為53，000-70, 000的相同的重鏈多肽。這四條鏈通常被二硫鍵以“Y” 構(gòu)型連結(jié)，其中所述輕鏈支撐所述重鏈，其中所述重鏈從“Y”的口開始并延伸通過(guò)可變區(qū)。輕鏈被分類為kappa或lambda(K，λ)。每個(gè)重鏈類別可與κ或λ輕鏈結(jié)合。通常，輕鏈和重鏈互相以共價(jià)鍵相連，并且當(dāng)免疫球蛋白由雜交瘤、B細(xì)胞或基因工程改造的宿主細(xì)胞產(chǎn)生時(shí)，兩條重鏈的“尾”部由共價(jià)的二硫鍵連接或非共價(jià)的連接相連。在重鏈中，氨基酸序列從處于Y構(gòu)型叉端的N端向處于每條鏈底部的C端延伸。輕鏈和重鏈均被劃分成結(jié)構(gòu)和功能同源的一些區(qū)域。術(shù)語(yǔ)“恒定”和“可變”是就功能而言使用的。就此而言，將理解輕鏈(VL)和重鏈(VH)部分的可變結(jié)構(gòu)域均決定抗原的識(shí)別和特異性。相反地，輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域(CL)和重鏈的恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2或CH3) 賦予重要的生物特性，諸如分泌、經(jīng)胎盤移動(dòng)、Fc受體結(jié)合、補(bǔ)體結(jié)合等。按照慣例，恒定區(qū) 結(jié)構(gòu)域的編號(hào)隨著它們離抗原結(jié)合位點(diǎn)或抗體的氨基端更遠(yuǎn)而增加。N端部分是可變區(qū)，而在C端部分是恒定區(qū)；CH3和CL結(jié)構(gòu)域?qū)嶋H上分別包含重鏈和輕鏈的羧基端。如上指出，可變區(qū)允許抗體選擇性地識(shí)別并特異性地結(jié)合抗原上的表位。也就是說(shuō)，抗體的VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域，或者多個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的亞組聯(lián)合形成定義三維抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變區(qū)。這種四級(jí)抗體結(jié)構(gòu)形成存在于Y每條臂末端的抗原結(jié)合位點(diǎn)。更
39具體地，抗原結(jié)合位點(diǎn)是由在每條VH和VL鏈上的三個(gè)⑶R所定義的。在一些情況下，例如來(lái)源于駱駝科動(dòng)物物種或根據(jù)駱駝科動(dòng)物免疫球蛋白工程化的某些免疫球蛋白分子，完整的免疫球蛋白分子可以只由重鏈組成而不含輕鏈。參見，例如Hamers-Casterman等人， Nature 363 446-448(1993)。在天然存在的抗體中，各抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域中存在的六個(gè)“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”是當(dāng)抗體采取它在水環(huán)境中的三維構(gòu)型時(shí)被特定地設(shè)置以形成抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的短的、不連續(xù)的氨基酸序列?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域中余下的氨基酸顯示較少的分子間差異性，稱作“構(gòu)架” 區(qū)。構(gòu)架區(qū)很大程度地采用β折疊構(gòu)象而且⑶R形成環(huán)，所述環(huán)連接β折疊結(jié)構(gòu)并且在一些情況下形成β折疊結(jié)構(gòu)的一部分。因此，構(gòu)架區(qū)起到形成支架的作用，所述支架有助于通過(guò)鏈間非共價(jià)相互作用而將六個(gè)CDR置于正確的方向。由放置的CDR形成的抗原結(jié)合結(jié) 構(gòu)域確定與免疫反應(yīng)性抗原上的表位互補(bǔ)的表面。該互補(bǔ)的表面促進(jìn)抗體與其同類表位的非共價(jià)結(jié)合。對(duì)任何給定的重鏈或輕鏈可變區(qū)，分別包含CDR和構(gòu)架區(qū)的氨基酸可由本領(lǐng) 域普通技術(shù)人員容易地識(shí)別，因?yàn)樗鼈円驯粶?zhǔn)確地界定(參見，“Sequence of Proteinsof Immunological Interest (免疫學(xué)上重要蛋白的序列)"Kabat，Ε.等人，美國(guó)衛(wèi)生和服務(wù)部 (U. S. Department of Health and Human Services)，(1983)；以及 Chothia禾口 Lesk，J. Mol. Biol.，196 :901-917(1987)，其全文以引用的方式并入本文)。在本領(lǐng)域中使用和/或公認(rèn)術(shù)語(yǔ)的存在兩種或兩種以上定義的情況下，除非明確說(shuō)明相反，否則如本文所用的術(shù)語(yǔ)的定義意為包括所有這樣的含義。具體的實(shí)例是使用術(shù) 語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”(“CDR”)來(lái)描述見于重鏈和輕鏈多肽二者的可變區(qū)中的不連續(xù)抗原組合位點(diǎn)。這一特定區(qū)域已經(jīng)描述在Kabat等人，美國(guó)衛(wèi)生和服務(wù)部，“Sequence of Proteins of ImmunologicalInterest (免疫學(xué)上重要蛋白的序列)”(1983)和 Chothia 等人，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)，其以引用的方式并入本文，其中定義包括彼此比較時(shí)氨基酸殘基的重疊或亞組。然而，應(yīng)用任一種定義來(lái)指抗體或其變體的CDR意為在本文定義和使用的術(shù)語(yǔ)的范圍之內(nèi)。包含以上引用的參考文獻(xiàn)定義的CDR的適當(dāng)?shù)陌被釟埢性谙卤? 中作為比較。包含特定CDR的準(zhǔn)確殘基數(shù)將依賴于CDR的序列和大小而變化。給出抗體的可變區(qū)氨基酸序列時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可常規(guī)地確定哪些殘基包含特定⑶R。表1.CDR 定義權(quán)利要求
一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至與選自由M14 H06、M15 E10、M16 C07、M23 F10、M80 B03、M93 D02、M96 C05、M97 D03和M98 E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。
2.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、 M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、 1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體與RON結(jié)合。
3.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其片段包含與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和M98-E12組成的組的單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B 10組成的組的參考單克隆抗體的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域相同的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
4.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的重鏈可變區(qū)(VH)包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID N0:4、SEQ ID NO: 14、SEQ IDNO 24,SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44,SEQ ID NO 54,SEQ ID NO 64,SEQ ID NO 74,SEQ ID NO 84,SEQ ID NO 94,SEQ ID NO: 115、SEQ IDNO : 125、 SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO : 145。
5.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的輕鏈可變區(qū)(VL)包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 19、SEQ IDNO 29,SEQ ID NO 39,SEQ ID NO 49,SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID NO: 120、SEQ IDNO : 130、 SEQ ID N0:140 和 SEQ ID NO : 150。
6.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序歹Ij :SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 14、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO :44、 SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ IDNO 115、SEQ ID NO 125,SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID NO 145。
7.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序歹Ij :SEQ ID N0:9、SEQ IDNO 19,SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO :49、 SEQ ID NO 59,SEQ ID NO 69,SEQ ID NO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID N0: 120、SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID NO 150。
8.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO 34,SEQ ID NO 44、SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 84、SEQ ID N0:94、SEQ ID NO 115, SEQ ID N0:125、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID NO 145。
9.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 39,SEQ ID NO 49、SEQ IDNO 59、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 89、SEQ IDNO 99, SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO: 150。
10.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和 VL分別包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ IDNO 59 ；SEQ ID NO :64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO :74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO :99、SEQ IDNO 115 禾口 SEQ ID NO :120、SEQ ID N0:125 禾口 SEQ ID NO 130、SEQ IDNO 135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ο
11.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和 VL各自除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外，分別包含與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列SEQID NO 4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14和SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO 34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO 44 和 SEQTD NO 49 ；SEQ ID NO 54 和 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 和 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94和 SEQ ID NO :99、 SEQ ID N0:115 和 SEQ ID NO :120、SEQID N0:125 禾口 SEQ ID N0:130、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 和 SEQ ID NO 150。
12.—種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH和 VL分別包含選自由以下組成的組的氨基酸序列SEQ IDNO 4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO 14和 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO :24和 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34和 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO 44 禾口 SEQID NO 49 ；SEQ ID NO 54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQ IDNO 69 ；SEQ ID NO :74和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO :84和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO :94禾口 SEQ ID NO :99、SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO :120、SEQID NO 125 和 SEQ ID NO :130、SEQ ID N0:135 和 SEQ ID N0:140、以及 SEQ ID N0:145 和 SEQ ID N0:150。
13.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VH包含除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-1 (VH-CDRl)氨基酸序列相同的KabatVH-CDRl氨基酸序列=SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 15,SEQ ID NO 25,SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO :65、SEQ IDNO 75,SEQ ID N0:85、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 和 SEQ ID NO :146。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗體或其片段，其中所述VH-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:5、SEQ ID NO 15,SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 55,SEQ ID N0:65、SEQ ID NO 75,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO 95,SEQ ID NO :116、 SEQ IDNO :126、SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID N0:146。
15.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VH包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-2(VH-CDR2)氨基酸序列相同的KabatVH-CDR2氨基酸序列SEQ ID NO :6、SEQ ID N0: 16,SEQ ID NO 26,SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 66、SEQ IDNO 76,SEQ ID NO 86,SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 117,SEQ ID NO 127、SEQ ID N0:137 和 SEQID NO :147。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的抗體或其片段，其中所述VH-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 56, SEQ ID NO 66, SEQ ID NO 76, SEQ ID NO 86, SEQ ID NO 96, SEQ ID NO :117、 SEQID NO: 127、SEQ ID NO: 137 和 SEQ ID NO: 147。
17.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VH包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考重鏈互補(bǔ)決定區(qū)-3(VH-CDR3)氨基酸序列相同的KabatVH-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :7、SEQ ID NO: 17,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO :67、SEQ IDNO 77,SEQ ID N0:87、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 128,SEQ ID N0:138 和 SEQ ID NO :148。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的抗體或其片段，其中所述VH-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:7、SEQ ID NO 17,SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 57,SEQ ID NO 67,SEQ ID NO 77,SEQ ID NO87,SEQ ID N0:97、SEQ ID NO 118、 SEQID N0:128、SEQ ID N0:138 和 SEQ ID NO 148。
19.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VL包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-I(VL-CDRl)氨基酸序列相同的 KabatVL-CDRl 氨基酸序列=SEQ ID NO 10、SEQ ID N0: 20,SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 70、SEQ IDNO 80,SEQ ID NO 90,SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 121,SEQ IDNO 131、SEQ ID N0:141和 SEQ ID NO :151。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的抗體或其片段，其中所述VL-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :50、 SEQ ID NO 60,SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 100,SEQ ID N0:121、SEQIDNO:131、SEQ ID NO: 141 禾口 SEQ ID NO 151。
21.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VL包含除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-2(VL-CDR2)氨基酸序列相同的KabatVL-CDR2氨基酸序列=SEQ ID NO =IUSEQ ID N0: 21、SEQ ID N0:31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ IDNO 81,SEQ ID N0:91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO : 122、SEQ IDNO 132,SEQ ID N0:142 和 SEQ ID NO :152。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的抗體或其片段，其中所述VL-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :51、 SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ ID NO =IOUSEQ ID NO:122、SEQIDN0:132、SEQ ID N0:142 禾口 SEQ ID NO :152。
23.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的 VL包含除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)-3(VL-CDR3)氨基酸序列相同的 KabatVL-CDR3 氨基酸序列=SEQ ID NO :12、SEQ ID NO: 22,SEQ ID NO 32,SEQ ID NO 42、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :72、SEQ IDNO `82、SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :102、SEQ ID NO :123、SEQ ID NO :133、SEQ ID NO 143 和 SEQ ID NO :153ο
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的抗體或其片段，其中所述VL-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :52、 SEQ ID N0:62、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO :82、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO: 123、SEQID NO:133、SEQ ID NO: 143 禾口 SEQ ID NO 153。
25.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中除了在所述VH-CDR中的至少一個(gè)上的一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或四個(gè)氨基酸取代以外，所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6禾口 7 ;SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、46 禾口 47 ； SEQ ID NO :55、56 和 57 ；SEQ ID NO :65、66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、 86 和 87 ；SEQ ID NO :95、96 和 97 ；SEQID NO :116、117 禾口 118 ；SEQ ID NO :126、127 禾口 128 ； SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO 146,147 ^P 148。
26.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VH包含選自由以下組成的組的VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6和7 ； SEQ ID NO :15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID NO :35、36 和 37 ;SEQ ID NO :45、 46 和 47;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、76 和 77 ;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQID NO :116、117 禾口 118;SEQ ID N0:126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及 SEQ ID NO :146、147 和 148。
27.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中除了在所述VL-⑶R中的至少一個(gè)上的一個(gè)、二個(gè)、三個(gè)或四個(gè)氨基酸取代以外，所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的VL-CDRU VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列:SEQ ID NO :10、11和12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID N0:50、51 禾口 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQID NO :80、81 和 82 ；SEQ ID NO 90,91和 92 ；SEQ ID NO :100、101 禾口 102 ；SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ；SEQ ID NO :131、132 和 133 ;SEQ IDNO 141、142 禾口 143;以及 SEQ ID N0:151、152 和 153。
28.一種特異性地結(jié)合至RON的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段的VL包含選自由以下組成的組的VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3氨基酸序列=SEQ ID NO :10、11和 12 ；SEQ ID NO :20、21和 22 ；SEQ ID NO :30、31和 32 ；SEQ ID NO :40、41和 42 ；SEQ ID NO 50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 禾口 72 ;SEQ ID NO :80、81 禾口 82 ;SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ;SEQ ID NO :100、101 禾口 102 ;SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ;SEQ ID NO: 131,132 禾口 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 禾口 153。
29.根據(jù)權(quán)利要求1至28中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，其中除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH構(gòu)架區(qū)是人類的。
30.根據(jù)權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，其中除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VL構(gòu)架區(qū)是人類的。
31.根據(jù)權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段結(jié)合至線性表位。
32.根據(jù)權(quán)利要求1至30中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段結(jié)合至非線性構(gòu)象表位。
33.根據(jù)權(quán)利要求1至32中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是多價(jià)的，并包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。
34.根據(jù)權(quán)利要求1至33中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是多特異性的。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是雙特異性的。
36.根據(jù)權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是雙特異性的。
37.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域是鼠的。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的抗體或其片段，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域來(lái)自選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的單克隆抗體。
39.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域是完全人類的。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的抗體或其片段，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域來(lái)自選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 組成的組的單克隆Fab抗體片段。
41.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是人源化的。
42.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是嵌合的。
43.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是靈長(zhǎng)源化的。
44.根據(jù)權(quán)利要求1至36中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是完全人類的。
45.根據(jù)權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是Fab片段。
46.根據(jù)權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是Fab’片段。
47.根據(jù)權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是F(ab) 2 片段。
48.根據(jù)權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是Fv片段。
49.根據(jù)權(quán)利要求1至44中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段是單鏈抗體。
50.根據(jù)權(quán)利要求1至46和49中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段包含選自由人類κ恒定區(qū)和人類λ恒定區(qū)組成的組的輕鏈恒定區(qū)。
51.根據(jù)權(quán)利要求1至46和49中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段包含重鏈恒定區(qū)或其片段。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的抗體或其片段，其中所述重鏈恒定區(qū)或其片段選自由人類IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly 組成的組。
53.根據(jù)權(quán)利要求1至52中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段以小于所述參考單克隆抗體的解離常數(shù)(KD)的KD所表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽。
54.根據(jù)權(quán)利要求1至53中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段以解離常數(shù)(KD)所表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽，其中所述解離常數(shù)(KD)不大于 5 X 10-2M、10-2M、5 X 10-3M、10-3M、5 X 10-4M、10-4M、5 X 10-5M、10-5M、 5X10-6M、10-6M、5X 10-7M、10-7M、5X10-8M、10-8M、5X10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、 5X10-11M、10-11M、5X 10-12M、10-12M、5X10-13M、10-13M、5X10-14M、10-14M、5X10-15M 或 10-15M。
55.根據(jù)權(quán)利要求1至54中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段相對(duì)于鼠 RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。
56.根據(jù)權(quán)利要求1至55中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段結(jié)合至細(xì) 胞表面上表達(dá)的RON。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的抗體或其片段，其中所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。
58.根據(jù)權(quán)利要求1至57中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段阻斷MSP 與RON結(jié)合。
59.根據(jù)權(quán)利要求1至58中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制MSP 依賴性RON活化。
60.根據(jù)權(quán)利要求1至59中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制非 MSP依賴性RON活化。
61.根據(jù)權(quán)利要求1至60中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制RON 介導(dǎo)的RAS/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。
62.根據(jù)權(quán)利要求1至61中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制RON 介導(dǎo)的ERK或AKT的磷酸化。
63.根據(jù)權(quán)利要求1至62中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制RON 介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。
64.根據(jù)權(quán)利要求1至63中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞侵入或腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
65.根據(jù)權(quán)利要求1至64中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段誘導(dǎo)凋亡。
66.根據(jù)權(quán)利要求1至65中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，所述抗體或其片段還包含與其融合的異源性多肽。
67.根據(jù)權(quán)利要求1至66中任一項(xiàng)所述的抗體或其片段，其中所述抗體軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、藥物劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇 (PEG)、和兩種或兩種以上任何所述劑的組合。
68.根據(jù)權(quán)利要求67所述的抗體或其片段，其中所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免7疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的抗體或其片段，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。
70.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1至69中任一項(xiàng)所述抗體或其片段和載體。
71.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14,SEQ ID NO 24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ IDNO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :115、SEQ ID N0125、SEQ ID N0:135和SEQ ID NO : 145 ；并且其中包含所述VH多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的多核苷酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:4、SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 24, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO 44, SEQ ID NO :54、SEQ ID NO :64、SEQ IDNO :74、SEQ ID NO :84、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :115、SEQ ID NO 125, SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID N0:145。
73.根據(jù)權(quán)利要求71或72所述的多核苷酸，其中編碼所述VH多肽的核苷酸序列被優(yōu) 化以增加所述VH多肽的表達(dá)而不改變其氨基酸序列。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的多核苷酸，其中所述優(yōu)化包括識(shí)別和移除剪接供體位點(diǎn)和剪接受體位點(diǎn)。
75.根據(jù)權(quán)利要求73或74所述的多核苷酸，其中所述優(yōu)化包括表達(dá)所述多核苷酸細(xì)胞的密碼子使用的優(yōu)化。
76.根據(jù)權(quán)利要求71至75中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中所述核酸包含選自由以下組成的組的核苷酸序列:SEQ ID N0:3、SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 23、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO 43,SEQ ID NO :53、SEQ IDNO :63、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO :93、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 134 和 SEQ ID NO: 144。
77.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19,SEQ ID NO 29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :59、SEQ ID NO 69,SEQ IDNO 79,SEQ ID NO 89,SEQ ID NO 99,SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 130、SEQ ID N0:140和SEQ ID NO : 150 ；并且其中包含所述VL多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
78.根據(jù)權(quán)利要求77所述的多核苷酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 29, SEQ ID NO 39, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO :59、SEQ ID NO :69、SEQ IDNO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ ID NO :120、SEQ ID N0:130、SEQ ID NO: 140 和 SEQ ID NO: 150。
79.根據(jù)權(quán)利要求77或78所述的多核苷酸，其中編碼所述VL多肽的核苷酸序列被優(yōu) 化以增加所述VL多肽的表達(dá)而不改變其氨基酸序列。
80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的多核苷酸，其中所述優(yōu)化包括識(shí)別和移除剪接供體位點(diǎn)和剪接受體位點(diǎn)。
81.根據(jù)權(quán)利要求79或80所述的多核苷酸，其中所述優(yōu)化包括表達(dá)所述多核苷酸細(xì)胞的密碼子使用的優(yōu)化。
82.根據(jù)權(quán)利要求77至81中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中所述核酸包含選自由以下組成的組的核苷酸序列:SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 28、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO 48,SEQ ID NO :58、SEQ IDNO :68、SEQ ID NO :78、SEQ ID NO :88、SEQ ID NO :98、SEQ ID N0:119、SEQ ID NO 129, SEQ ID N0:139 和 SEQ ID N0:149。
83.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的氨基酸序列除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同:SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO 44,SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO :94、SEQ ID N0:115、SEQ ID NO 125、SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID NO : 145 ；并且其中包含所述 VH 多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
84.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的氨基酸序列除了 20個(gè)或更少的保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同:SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO 49,SEQ IDNO :59、SEQ ID NO :69、SEQ ID NO :79、SEQ ID NO :89、SEQ ID NO :99、SEQ ID N0:120、SEQ ID NO : 130、SEQ ID NO 140 ^P SEQ ID NO : 150 ；并且其中包含所述 VL 多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
85.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VH-CDRl氨基酸序列的核酸，其中所述VH-CDRl氨基酸序列除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考 VH-CDRl 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO : 25、SEQ ID NO:35、SEQIDNO :45、SEQ ID NO :55、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :75、SEQ ID NO :85、SEQ ID NO 95,SEQ ID N0:116、SEQ ID NO 126,SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID NO : 146 ；并且其中包含所述VH-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
86.根據(jù)權(quán)利要求85所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:5、SEQ ID NO 15、SEQ IDNO 25、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO :45、 SEQ ID NO55,SEQ ID NO 65,SEQ ID NO75,SEQ ID NO 85,SEQ ID NO95,SEQ ID NO:116、SEQIDN0:126、SEQ ID N0:136 禾口 SEQ ID NO : 146。
87.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VH-CDR2氨基酸序列的核酸，其中除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH-CDR2氨基酸序列與選自由以下組成的組的參考 VH-CDR2 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO:36、SEQID NO :46、SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :76、SEQ IDNO :86、SEQ ID NO 96,SEQ ID NO :117、SEQ ID NO 127,SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID NO : 147 ；并且其中包含所述VH-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
88.根據(jù)權(quán)利要求87所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 16,SEQ IDNO 26、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO :46、 SEQ ID N0:56、SEQ ID NO 66, SEQ ID NO : 76、SEQ ID NO 86, SEQ ID NO : 96、SEQ ID NO:117、SEQIDN0:127、SEQ ID N0:137 禾口 SEQ ID NO : 147。
89.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VH-CDR3氨基酸序列的核酸，其中所述VH-CDR3氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考 VH-CDR3 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 17,SEQ ID NO 27、SEQ ID NO: 37、SEQ IDNO :47、SEQ ID NO :57、SEQ ID NO :67、SEQ ID NO -JrJ、SEQ ID NO :87、SEQ ID NO 97,SEQ ID N0:118、SEQ ID NO 128 ；SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO : 148 ；并且其中包含所述VH-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
90.根據(jù)權(quán)利要求89所述的多核苷酸或其片段，其中所述VH-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :17、SEQ IDNO :27、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :47、 SEQ ID NO57,SEQ ID NO 67,SEQ ID NO77,SEQ ID NO 87,SEQ ID NO97,SEQ ID NO: 118、SEQID NO 128 ；SEQ ID N0:138 禾口 SEQ ID NO : 148。
91.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VL-CDRl氨基酸序列的核酸，其中所述VL-CDRl氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考 VL-CDRl 氨基酸序列相同:SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO 40,SEQ IDNO 50,SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO :100、SEQ ID NO :121、SEQ ID NO :131、SEQ FD NO 141 和 SEQ ID NO 151 ；并且其中包含所述VL-CDRl的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
92.根據(jù)權(quán)利要求91所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDRl氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :20、SEQ IDNO :30、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO 50、SEQID NO60,SEQ ID NO 70,SEQ ID NO80,SEQ ID NO 90,SEQ ID N0:100、SEQ ID NO: 121、SEQID NO: 131、SEQ ID NO 141 和 SEQ ID NO 151。
93.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VL-CDR2氨基酸序列的核酸，其中所述VL-CDR2氨基酸序列除了兩個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考 VL-CDR2 氨基酸序列相同SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :31、SEQ ID N0:41、SEQ IDN0:51、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :81、SEQ ID NO :91、SEQ ID NO 101 ；SEQ ID NO :122、SEQ ID NO :132、SEQ ID NO 142 和 SEQ ID NO 152 ；并且其中包含所述VL-CDR2的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
94.根據(jù)權(quán)利要求93所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDR2氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :21、SEQ IDNO :31、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO 51、SEQID N0:61、SEQ ID N0:71、SEQ ID N0:81、SEQ ID N0:91、SEQ ID NO 101 ；SEQ ID NO: 122、SEQID NO: 132、SEQ ID NO: 142 和 SEQ ID NO : 152。
95.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼VL-CDR3氨基酸序列的核酸，其中所述VL-CDR3氨基酸序列除了四個(gè)或更少的氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考 VL-CDR3 氨基酸序列相同=SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO 42,SEQ IDNO 52,SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO :102、SEQ ID NO :123、SEQ ID NO :133、SEQ ID NO 143 和 SEQ ID NO 153 ；并且其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
96.根據(jù)權(quán)利要求95所述的多核苷酸或其片段，其中所述VL-CDR3氨基酸序列選自由以下組成的組SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO :32、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO 52、SEQID N0:62、SEQ ID NO 72, SEQ ID N0:82、SEQ ID NO 92, SEQ ID NO 102, SEQ ID NO :123、SEQID NO 133, SEQ ID N0:143 和 SEQ ID N0:153。
97.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽包含選自由以下組成的組的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID NO :25、26 和 27 ;SEQ ID N0:35、36 和 37; SEQID NO :45、46 和 47 ;SEQ ID NO :55、56 和 57 ;SEQ ID NO :65、66 和 67 ;SEQ ID NO :75、 76 禾口 77;SEQ ID NO :85、86 和 87 ;SEQ ID NO :95、96 和 97 ;SEQ ID NO :116、117 和 118 ;SEQ ID N0:126、127 和 128 ；SEQID N0:136、137 禾口 138;以及 SEQ ID NO 146,147 ^P 148 ；并且其中包含所述VH-⑶R3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
98.一種分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽包含選自由以下組成的組的VL-⑶Rl、VL-⑶R2和VL-⑶R3氨基酸序列SEQ ID NO :10、11 禾口 12 ；SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ；SEQ ID NO :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ； SEQID NO :50、51 和 52 ；SEQ ID NO :60、61 和 62 ；SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQ ID NO :80、 81 和 82 ；SEQ ID NO :90、91 禾口 92 ；SEQ ID NO :100、101 和 102 ；SEQ ID NO :121、122 禾口 123 ； SEQ ID NO :131、132 和 133 ；SEQ ID NO :141、142 禾口 143 ；以及 SEQ ID NO :151、152 和 153 ；并且其中包含所述VL-⑶R3的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合至RON。
99.根據(jù)權(quán)利要求71至98中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述抗體VH 多肽的信號(hào)肽的核酸。
100.根據(jù)權(quán)利要求71至98中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述抗體VL 多肽的信號(hào)肽的核酸。
101.根據(jù)權(quán)利要求71至100中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域的核酸。
102.根據(jù)權(quán)利要求71至101中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2結(jié)構(gòu)域的核酸。
103.根據(jù)權(quán)利要求71至102中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域的核酸。
104.根據(jù)權(quán)利要求71至103中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。
105.根據(jù)權(quán)利要求101至104中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中所述重鏈恒定區(qū)選自由以下組成的組人類 IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly0
106.根據(jù)權(quán)利要求71至105中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼融合于所述VL多肽的輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的核酸。
107.根據(jù)權(quán)利要求106所述的多核苷酸，其中所述輕鏈恒定區(qū)是人類κ。
108.根據(jù)權(quán)利要求71至107中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段特異性地結(jié)合與選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。
109.根據(jù)權(quán)利要求71至108中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體。
110.根據(jù)權(quán)利要求71至109中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH多肽的構(gòu)架區(qū)是人類的。
111.根據(jù)權(quán)利要求71至110中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VL多肽的構(gòu)架區(qū)是人類的。
112.根據(jù)權(quán)利要求71至111中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合于線性表位。
113.根據(jù)權(quán)利要求71至112中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合于非線性構(gòu)象表位。
114.根據(jù)權(quán)利要求71至113中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是多價(jià)的，并包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。
115.根據(jù)權(quán)利要求71至114中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是多特異性的。
116.根據(jù)權(quán)利要求71至115中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是雙特異性的。
117.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段包含為完全人類的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
118.根據(jù)權(quán)利要求117所述的多核苷酸，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 組成的組的單克隆Fab抗體片段的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。
119.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段包含鼠的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
120.根據(jù)權(quán)利要求119所述的多核苷酸，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。
121.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是人源化的。
122.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是嵌合的。
123.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是靈長(zhǎng)源化的。
124.根據(jù)權(quán)利要求71至116中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是完全人類的。
125.根據(jù)權(quán)利要求71至124中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是Fab片段。
126.根據(jù)權(quán)利要求71至124中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是Fab’片段。
127.根據(jù)權(quán)利要求71至124中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是F (ab) 2片段。
128.根據(jù)權(quán)利要求71至124中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是Fv片段。
129.根據(jù)權(quán)利要求71至124中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段是單鏈抗體。
130.根據(jù)權(quán)利要求71至129中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段以解離常數(shù)(KD)所表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽，所述解離常數(shù)(KD)不大于5X10-2M、10-2M、5X10-3M、10-3M、 5X 10-4M、10-4M、5X 10-5M、10-5M、5X 10-6M、10-6M、5X 10-7M、10-7M、5X 10-8M、10-8M、 5X 10-9M、10-9M、5X10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X10-12M、10-12M、5X 10-13M、 10-13M、5X 10-14M、10-14M、5X 10-15M 或 10-15M。
131.根據(jù)權(quán)利要求71至130中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段相對(duì)于鼠RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。
132.根據(jù)權(quán)利要求71至131中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合于細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。
133.根據(jù)權(quán)利要求132所述的多核苷酸，其中所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。
134.根據(jù)權(quán)利要求71至133中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段阻斷MSP與RON結(jié)合。
135.根據(jù)權(quán)利要求71至134中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制MSP依賴性RON活化。
136.根據(jù)權(quán)利要求71至135中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制抑制非MSP依賴性RON活化。
137.根據(jù)權(quán)利要求71至136中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制RON介導(dǎo)的Ras/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。
138.根據(jù)權(quán)利要求71至137中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制RON介導(dǎo)的ERK或AKT的磷酸化。
139.根據(jù)權(quán)利要求71至138中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制RON介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。
140.根據(jù)權(quán)利要求71至139中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞侵入或腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
141.根據(jù)權(quán)利要求71至140中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段誘導(dǎo)凋亡。
142.根據(jù)權(quán)利要求71至141中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，還包含編碼異源性多肽的核酸。
143.根據(jù)權(quán)利要求71至142中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中包含由所述核酸編碼的多肽的抗體或其抗原結(jié)合片段軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、藥物制劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)、以及兩種或兩種以上任何所述劑的組I=I O
144.根據(jù)權(quán)利要求143所述的多核苷酸，其中所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。
145.根據(jù)權(quán)利要求143所述的多核苷酸，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。
146.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求71至145中任一項(xiàng)的多核苷酸和載體。
147.—種載體，所述載體包含權(quán)利要求71至145中任一項(xiàng)的多核苷酸。
148.根據(jù)權(quán)利要求147所述的載體，其中所述多核苷酸可操作地與啟動(dòng)子相締合。
149.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求147或權(quán)利要求148的載體。
150.一種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求 149的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。
151.一種分離的多肽，所述分離的多肽由權(quán)利要求150的方法產(chǎn)生。
152.一種分離的多肽，所述分離的多肽由權(quán)利要求71至145中任一項(xiàng)的多核苷酸編碼。
153.根據(jù)權(quán)利要求152所述的分離的多肽，其中包含所述多肽的抗體或其片段特異性地結(jié)合至RON。
154.一種分離的抗體或其片段，所述分離的抗體或其片段包含權(quán)利要求152或153的多肽。
155.—種組合物，所述組合物包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包含編碼與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列至少90%相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID NO: 14 禾口 SEQ IDNO 19 ； SEQ ID N0:24 禾口 SEQ ID NO 29 ； SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO 39 ； SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ IDNO :64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 禾口 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO 125 和 SEQ ID NO 130 ； SEQ ID N0:135 禾口 SEQ ID N0:140 禾口 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO :150 ；并且其中由所述 VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合RON。
156.根據(jù)權(quán)利要求155所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包含編碼選自由以下組成的組的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 9 ；SEQ ID N0:14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID N0:24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ IDNO :44和 SEQ ID NO 49 ；SEQ ID NO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 和 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 和 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQID NO 89 ；SEQ ID N0:94 禾口 SEQ ID NO 99 ；SEQ ID N0:115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID N0:125 和 SEQ ID N0: 130 ；SEQ ID N0:135 禾口 SEQ IDNO 140 ；以及 SEQ ID N0:145 禾口 SEQ ID NO 150。
157.一種組合物，所述組合物包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸分別包含編碼除了少于20個(gè)保守性氨基酸取代以外與選自由以下組成的組的參考氨基酸序列相同的氨基酸序列的核酸SEQ ID NO 4 禾口 SEQ IDNO 9 ；SEQ ID NO 14 禾口 SEQ ID NO 19 ；SEQ ID NO 24 禾口 SEQ ID NO 29 ；SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO 39 ；SEQ ID NO :44 禾口 SEQ ID NO 49 ；SEQ IDNO :54 禾口 SEQ ID NO 59 ；SEQ ID NO 64 禾口 SEQ ID NO 69 ；SEQ ID NO 74 禾口 SEQ ID NO 79 ；SEQ ID NO 84 和 SEQ ID NO 89 ；SEQ ID NO 94 和 SEQID NO 99 ；SEQ ID NO 115 和 SEQ ID NO 120 ；SEQ ID NO: 125 禾口 SEQ IDNO 130 ； SEQ ID NO: 135 禾口 SEQ ID NO: 140;以及 SEQ ID NO: 145 和 SEQID NO 150 ；并且其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合 RON。
158.—種組合物，所述組合物包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸，其中所述VH編碼多核苷酸編碼包含選自由以下組成的組的VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3 氨基酸序列的 VH 多肽SEQ IDNO :5、6 禾口 7 ;SEQ ID NO 15、16 和 17 ;SEQ ID N0:25、26 和 27 ；SEQID NO :35、36和37 ；SEQ ID NO :45、46和47 ；SEQ ID NO :55、56和57 ；SEQ ID NO :65、 66 和 67 ；SEQ ID NO :75、76 和 77 ；SEQ ID NO :85、86 和 87 ；以及 SEQ ID NO :95、96 和 97 ；其中所述VL編碼多核苷酸編碼包含選自由以下組成的組的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3 氨基酸序列的 VL 多肽SEQ ID NO :10、11 和 12 ;SEQ ID NO :20、21 禾口 22 ;SEQ ID NO :30、 31 禾口 32;SEQ ID NO :40、41 禾口 42 ;SEQ ID NO :50、51 禾口 52 ;SEQ ID NO :60、61 禾口 62 ;SEQ ID NO :70、71 和 72 ；SEQ ID NO :80、81和 82 ；SEQ ID NO :90、91 和 92 ；SEQ ID NO 100、101和 102 ；SEQ ID NO :116、117 和 118 ；SEQ ID NO :126、127 和 128 ；SEQ ID NO :136、137 和 138 ；以及SEQ ID NO :146、147和148 ；并且其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合RON。
159.根據(jù)權(quán)利要求155至158中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述抗體VH多肽的信號(hào)肽的核酸。
160.根據(jù)權(quán)利要求155至158中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述抗體VL多肽的信號(hào)肽的核酸。
161.根據(jù)權(quán)利要求155至160中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CHl結(jié)構(gòu)域的核酸。
162.根據(jù)權(quán)利要求155至161中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH2結(jié)構(gòu)域的核酸。
163.根據(jù)權(quán)利要求155至162中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域的核酸。
164.根據(jù)權(quán)利要求155至163中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述VH多肽的重鏈鉸鏈區(qū)的核酸。
165.根據(jù)權(quán)利要求155至164中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述重鏈恒定區(qū)選自由人類 IgG4、IgG4agly、IgGl 和 IgGlagly 組成的組。
166.根據(jù)權(quán)利要求155至165中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合于所述VL多肽的輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的核酸。
167.根據(jù)權(quán)利要求166所述的組合物，其中所述輕鏈恒定區(qū)是人類κ。
168.根據(jù)權(quán)利要求155至167中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性地結(jié)合與選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體相同的RON表位。
169.根據(jù)權(quán)利要求155至167中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段競(jìng)爭(zhēng)性地抑制選自由M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、 M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03和M98-E12組成的組的參考單克隆Fab抗體片段或選自由1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的參考單克隆抗體。
170.根據(jù)權(quán)利要求155至169中任一項(xiàng)所述的組合物，其中除了五個(gè)或更少的氨基酸取代以外，所述VH和VL多肽的構(gòu)架區(qū)是人類的。
171.根據(jù)權(quán)利要求155至170中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段結(jié)合于線性表位。
172.根據(jù)權(quán)利要求155至170中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段結(jié)合于非線性構(gòu)象表位。
173.根據(jù)權(quán)利要求155至170中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是多價(jià)的，并包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。
174.根據(jù)權(quán)利要求155至173中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是多特異性的。
175.根據(jù)權(quán)利要求155至174中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是雙特異性的。
176.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段包含為完全人類的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
177.根據(jù)權(quán)利要求176所述的組合物，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 M14-H06、M15-E10、M16-C07、M23-F10、M80-B03、M93-D02、M96-C05、M97-D03 和 M98-E12 組成的組的單克隆Fab抗體片段的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。
178.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段包含為鼠的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
179.根據(jù)權(quán)利要求178所述的組合物，其中所述重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與選自由 1P2E7、1P3B2、1P4A3、1P4A12和1P5B10組成的組的單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域相同。
180.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是人源化的。
181.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是嵌合的。
182.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是靈長(zhǎng)源化的。
183.根據(jù)權(quán)利要求155至175中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是完全人類的。
184.根據(jù)權(quán)利要求155至183中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是Fab片段。
185.根據(jù)權(quán)利要求155至183中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是Fab’片段。
186.根據(jù)權(quán)利要求155至183中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是F (ab) 2片段。
187.根據(jù)權(quán)利要求155至183中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是Fv片段。
188.根據(jù)權(quán)利要求155至183中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段是單鏈抗體。
189.根據(jù)權(quán)利要求155至188中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段以解離常數(shù)(KD)表征的親和力特異性地結(jié)合至RON多肽或其片段、或RON變體多肽，其中所述解離常數(shù)(KD)不大于5X10-2M、10-2M、5X10-3M、10-3M、 5X 10-4M、10-4M、5X 10-5M、10-5M、5X 10-6M、10-6M、5X10-7M、10-7M、5X 10-8M、10-8M、 5X 10-9M、10-9M、5X 10-10M、10-10M、5X10-11M、10-11M、5X 10-12M、10-12M、5X 10-13M、 10-13M、5X 10-14M、10-14M、5X 10-15M 或 10-15M。
190.根據(jù)權(quán)利要求155至189中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段相對(duì)于鼠RON多肽或其片段優(yōu)先地結(jié)合至人類RON多肽或其片段。
191.根據(jù)權(quán)利要求155至190中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段結(jié)合至細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。
192.根據(jù)權(quán)利要求191所述的組合物，其中所述細(xì)胞是惡性細(xì)胞、贅生性細(xì)胞、腫瘤細(xì) 胞、轉(zhuǎn)移性細(xì)胞或腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。
193.根據(jù)權(quán)利要求155至192中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段阻斷MSP與RON結(jié)合。
194.根據(jù)權(quán)利要求155至193中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制MSP依賴性RON活化。
195.根據(jù)權(quán)利要求155至194中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制非MSP依賴性RON活化。
196.根據(jù)權(quán)利要求155至195中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的Ras/MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化。
197.根據(jù)權(quán)利要求155至196中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的ERK或AKT的磷酸化。
198.根據(jù)權(quán)利要求155至197中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制RON介導(dǎo)的細(xì)胞增殖。
199.根據(jù)權(quán)利要求155至198中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞侵入或腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
200.根據(jù)權(quán)利要求155至199中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段誘導(dǎo)凋亡。
201.根據(jù)權(quán)利要求155至200中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸、所述VL編碼多核苷酸、或所述VH編碼多核苷酸與所述VL編碼多核苷酸二者還包含編碼異源性多肽的核酸。
202.根據(jù)權(quán)利要求155至201中任一項(xiàng)所述的組合物，其中由所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段軛合于選自由以下組成的組的劑細(xì)胞毒性劑、治療劑、細(xì)胞抑制劑、生物毒素、前體藥物、肽、蛋白、酶、病毒、脂質(zhì)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、藥物劑、淋巴因子、異源性抗體或其片段、可檢測(cè)標(biāo)記、聚乙二醇(PEG)、和兩種或兩種以上任何所述劑的組合。
203.根據(jù)權(quán)利要求202所述的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑選自由以下組成的組放射性核素、生物毒素、酶促活性的毒素、細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性治療劑、前體藥物、免疫活性的配體、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、或者兩種或兩種以上任何所述細(xì)胞毒性劑的組合。
204.根據(jù)權(quán)利要求202所述的組合物，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的組酶、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、放射性標(biāo)記、或者兩種或兩種以上任何所述可檢測(cè)標(biāo)記的組合。
205.根據(jù)權(quán)利要求155至204中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸被包含在第一載體上并且所述VL編碼多核苷酸被包含在第二載體上。
206.根據(jù)權(quán)利要求205所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸可操作地與第一啟動(dòng) 子相締合并且所述VL編碼多核苷酸可操作地與第二啟動(dòng)子相締合。
207.根據(jù)權(quán)利要求206所述的組合物，其中所述第一啟動(dòng)子和所述第二啟動(dòng)子是同一啟動(dòng)子的拷貝。
208.根據(jù)權(quán)利要求206所述的組合物，其中所述第一啟動(dòng)子和所述第二啟動(dòng)子是不相同的。
209.根據(jù)權(quán)利要求205至208中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述第一載體和所述第二載體被包含在單個(gè)宿主細(xì)胞中。
210.根據(jù)權(quán)利要求205至208中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述第一載體和所述第二載體被包含在分別的宿主細(xì)胞中。
211.—種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求 209的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。
212.—種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，所述方法包括共培養(yǎng)權(quán)利要求210的分別的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。
213.—種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，所述方法包括分別培養(yǎng)權(quán)利要求210的分別的宿主細(xì)胞，組合所述VH和VL編碼多肽，并回收所述抗體或其片段。
214.—種特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段，所述抗體或其片段由權(quán)利要求211至 213中任一項(xiàng)的方法產(chǎn)生。
215.根據(jù)權(quán)利要求155至204中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸在同一載體上。
216.權(quán)利要求215的載體。
217.根據(jù)權(quán)利要求216所述的載體，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸各自可操作地與啟動(dòng)子締合。
218.根據(jù)權(quán)利要求216所述的載體，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸在框內(nèi)融合，從與其可操作地締合的單個(gè)啟動(dòng)子共轉(zhuǎn)錄，并共翻譯為單鏈抗體或其抗原結(jié)合片段。
219.根據(jù)權(quán)利要求216所述的載體，其中所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸從與其可操作地締合的單個(gè)啟動(dòng)子共轉(zhuǎn)錄，但分別翻譯。
220.根據(jù)權(quán)利要求219所述的載體，還包含設(shè)置在所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸之間的IRES序列。
221.根據(jù)權(quán)利要求216所述的載體，其中各自與分別的啟動(dòng)子可操作地締合的所述編碼VH的多核苷酸和所述編碼VL的多核苷酸被分別轉(zhuǎn)錄。
222.根據(jù)權(quán)利要求221所述的載體，其中所述分別的啟動(dòng)子是同一啟動(dòng)子的拷貝。
223.根據(jù)權(quán)利要求221所述的載體，其中所述分別的啟動(dòng)子是不相同的。
224.—種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求216至223中任一項(xiàng)的載體。
225.—種產(chǎn)生特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求 224的宿主細(xì)胞，并回收所述抗體或其片段。
226.—種特異性地結(jié)合RON的抗體或其片段，所述抗體或其片段由權(quán)利要求225的方法產(chǎn)生。
227.—種用于治療動(dòng)物的過(guò)度增生性病癥的方法，所述方法包括向需要治療的動(dòng)物施用包含以下組分的組合物a)權(quán)利要求1至69、154、214和226中任一項(xiàng)的分離的抗體或其片段；和b)藥學(xué)上可接受的載體。
228.根據(jù)權(quán)利要求227所述的方法，其中所述過(guò)度增生性疾病或病癥選自由癌癥、贅生物、腫瘤、惡性腫瘤、或其轉(zhuǎn)移組成的組。
229.根據(jù)權(quán)利要求228所述的方法，其中所述抗體或其片段特異性地結(jié)合至惡性細(xì)胞表面上表達(dá)的RON。
230.根據(jù)權(quán)利要求229所述的方法，其中所述抗體或其片段與所述惡性細(xì)胞的結(jié)合使得所述惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)受抑制。
231.根據(jù)權(quán)利要求227至230中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
232.根據(jù)權(quán)利要求231所述的方法，其中通過(guò)阻止或阻滯轉(zhuǎn)移性生長(zhǎng)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
233.根據(jù)權(quán)利要求227至230中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體或其片段抑制腫瘤細(xì)胞遷移。
234.根據(jù)權(quán)利要求231所述的方法，其中通過(guò)阻止或阻滯腫瘤向相鄰組織擴(kuò)散來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖。
235.根據(jù)權(quán)利要求228所述的方法，其中所述過(guò)度增生性疾病或病癥是位于以下位置的贅生物前列腺、結(jié)腸、腹部、骨、乳房、消化系統(tǒng)、肝臟、胰、腹膜、腎上腺、甲狀旁腺、垂體腺、睪丸、卵巢、胸腺、甲狀腺、眼、頭、頸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、骨盆、皮膚、軟組織、脾臟、胸部、或泌尿生殖道。
236.根據(jù)權(quán)利要求228所述的方法，其中所述過(guò)度增生性疾病是癌癥，所述癌癥選自由以下組成的組上皮鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、白血病、骨髓瘤、胃癌、腦癌、肺癌、胰腺癌、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、前列腺癌、睪丸癌、甲狀腺癌和頭頸癌。
237.根據(jù)權(quán)利要求236所述的方法，其中所述癌癥選自由胃癌、腎癌、腦癌、膀胱癌、結(jié) 腸癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和前列腺癌組成的組。
238.根據(jù)權(quán)利要求227至237中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。
239.根據(jù)權(quán)利要求238所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人類。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)合RON(receptor d’origine nantais，MST1R)的抗體及其用途，特別是在癌癥的診斷和治療中的用途。提供了抑制RON介導(dǎo)的促存活和腫瘤增殖途徑的特異性抗體、及其變體、片段和衍生物。還提供了阻斷配體MSP與RON結(jié)合能力的特異性抗體、以及這些抗體的片段、變體和衍生物。本發(fā)明還包括編碼上述抗體或其片段、變體或衍生物的多核苷酸、以及含有這些多核苷酸的載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還包括使用本發(fā)明的抗體來(lái)診斷和治療癌癥的方法。
文檔編號(hào)C07K16/28GK101977937SQ200980110217
公開日2011年2月16日申請(qǐng)日期2009年1月22日優(yōu)先權(quán)日2008年1月22日
發(fā)明者C·加弗, E·加伯, H·休特, S·米克拉斯, V·貝利申請(qǐng)人:拜奧根Idec馬薩諸塞公司

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該技術(shù)已申請(qǐng)專利。僅供學(xué)習(xí)研究，如用于商業(yè)用途，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)所有人。
技術(shù)研發(fā)人員：Ｈ.休特;Ｖ.貝利;Ｅ.加伯;Ｃ.加弗;Ｓ.米克拉斯
技術(shù)所有人：拜奧根ＩＤＥＣ馬薩諸塞公司
我是此專利的發(fā)明人

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