專利名稱：用于檢測(cè)老化、及伴隨有血管障礙的疾病的組合物、試劑盒及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在老化、及伴隨有血管障礙的疾病的診斷中有用的組合物及試劑品 。本發(fā)明還涉及一種使用該組合物或試劑盒檢測(cè)(或者判定或鑒定)老化及伴隨有 血管障礙的疾病的方法。
背景技術(shù)：
由于醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和生活·社會(huì)環(huán)境的變化使得平均壽命延長，因此近年來， 高齡者人口持續(xù)地增加。與此相伴，高齡者患有的各種疾病逐漸被關(guān)注起來。代表性地如 生活習(xí)慣病，據(jù)說這些疾病是體內(nèi)產(chǎn)生的微小變化隨年齡的增長而逐漸蓄積并發(fā)生和發(fā)展 的。其中，以血管障礙為主要原因的疾病已經(jīng)成為嚴(yán)重的社會(huì)問題。血管障礙是指由某種原因引起血管組織變性，引發(fā)出血、通透性變化、瘤形成、梗 死、血管新生、旁路形成等的狀態(tài)。血管障礙在血管豐富的器官 組織發(fā)生時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重問 題，如果血管障礙在感覺器官特別是在眼組織發(fā)生時(shí)，有時(shí)導(dǎo)致失明。黃斑是視網(wǎng)膜中與視力最密切相關(guān)的一部分，分辨顏色和形狀的大多數(shù)細(xì)胞位于 該部分。老年黃斑變性是一種隨年齡的變化而引起的黃斑部分的疾病，人們認(rèn)為眼組織的 血管障礙是原因之一。該疾病是高齡者視力下降的原因之一。隨著近年來高齡者人口的急 劇增加，患者數(shù)也持續(xù)增加。由于是與視力下降有關(guān)的疾病，所以早期進(jìn)行診斷是非常重要的。一直以來，在老 年黃斑變性的診斷中，主要進(jìn)行眼底檢查，在檢查之前對(duì)患者滴入用于擴(kuò)大瞳孔的眼藥水， 或者在手腕靜脈注射對(duì)視網(wǎng)膜血管進(jìn)行染色的熒光色素后，醫(yī)師使用眼底鏡或眼底照相機(jī) 直接觀察視網(wǎng)膜。但是，由于眼藥水導(dǎo)致瞳孔處于擴(kuò)張狀態(tài)，畏光不能看見的狀態(tài)約持續(xù)3 小時(shí)左右，所以即使是暫時(shí)的但對(duì)患者來說也是負(fù)擔(dān)。另外，現(xiàn)狀是靜注熒光色素后不能說 完全不存在引起惡心、嘔吐、休克等副作用的可能性。進(jìn)而，不能說醫(yī)師對(duì)視網(wǎng)膜的直接觀 察一定是客觀的檢測(cè)方法，由于每個(gè)患者都必須被一個(gè)醫(yī)師檢查，所以難以將該檢查應(yīng)用 于包括大量受試者的集團(tuán)檢查。因此，人們期望一種能夠更客觀·定量地顯示患者的病態(tài) 的發(fā)展程度和治療中的經(jīng)時(shí)變化、使患者負(fù)擔(dān)少的高通量的檢測(cè)方法。使用診斷標(biāo)記的檢測(cè)方法是客觀的高通量方法之一。到目前為止公開了使用特異 性地識(shí)別纖連蛋白的ED-B區(qū)域的抗體的老年黃斑變性的診斷法(專利文獻(xiàn)1)和使用血漿 中的丙二醛的檢測(cè)方法(非專利文獻(xiàn)1)。上述具有所述標(biāo)記的方法不能判定特異性相對(duì)較 高的老年黃斑變性，因此該方法目前仍處于研究階段。隨著近年的基因組分析或蛋白質(zhì)組分析的進(jìn)步，已經(jīng)報(bào)道了各種各樣的新型標(biāo)記 候選。老年黃斑變性中，通過使用眼組織的蛋白質(zhì)組分析，已經(jīng)報(bào)道了各種各樣的新型標(biāo)記 候選(非專利文獻(xiàn)2、非專利文獻(xiàn)幻。但是，還沒有通過使用血液樣品的蛋白質(zhì)組分析發(fā)現(xiàn) 檢測(cè)老年黃斑變性的蛋白質(zhì)標(biāo)記的報(bào)道，也未知使用老年黃斑變性患者的血液中的蛋白質(zhì)標(biāo)記診斷老年黃斑變性的方法。人們期待如果能夠開發(fā)出可以診斷老年黃斑變性的標(biāo)記及 可以使用該標(biāo)記進(jìn)行診斷的方法，則可以擴(kuò)大應(yīng)用于血管障礙的診斷、甚至是老化自身的 診斷。專利文獻(xiàn)1 日本特表2002-514405非專利文獻(xiàn)1 :Yildirim 0，Ates ΝΑ, Tamer L, Muslu N, ErcanB, Atik U, Kanik Α. , Ophthalmologica. 2004May-Jun, 218 (3) :202-6. Changes in antioxidant enzyme activity and malondialdehydelevel in patients with age-related macular degeneration.非專利文獻(xiàn) 2 =Ethen CM, Reilly C, Feng X，Olsen Tff, FerringtonDA.，Invest Ophthalmol Vis Sci. 2006Jun,47(6) :2280-90. Theproteome of central and peripheral retina with progression of age-related macular degeneration.非專利文獻(xiàn)3 Crabb Jff, Miyagi Μ, Gu X，Shadrach K, WestKA, Sakaguchi H, Kamei Μ, Hasan A, Yan L, Raybom ME, SalomonRG, Hollyfield JG. , Proc Natl Acad Sci USA.2002Novl2,99(23) 14682-7. Drusen proteome analysis :an approach to the etiology of age-related macular degeneration.

發(fā)明內(nèi)容
上述已知的標(biāo)記、及標(biāo)記候選物缺乏特異性及/或靈敏性，并且還沒有確立從生 物樣品檢測(cè)上述標(biāo)記的有效方法，所以通常情況下不進(jìn)行臨床上的使用，因此強(qiáng)烈需要一 種特異性及靈敏性更高的、老化及伴隨有血管障礙的疾病的標(biāo)記。另外，人們期望一種能夠 更客觀·定量地顯示出患者的病態(tài)的發(fā)展程度及術(shù)后的經(jīng)時(shí)變化、使患者負(fù)擔(dān)小的高通量 檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)老化及伴隨有血管障礙的疾病、特別是老年黃斑變 性的診斷有用的組合物或試劑盒，及使用該組合物或試劑盒的老化及伴隨有血管障礙的疾 病的檢測(cè)方法。本發(fā)明人等通過對(duì)老年黃斑變性患者和其他的眼部疾病患者的血液樣品進(jìn)行蛋 白質(zhì)組分析，發(fā)現(xiàn)了在老年黃斑變性患者中被特異性檢測(cè)的血中蛋白質(zhì)標(biāo)記，并由此發(fā)明 了使用該蛋白質(zhì)標(biāo)記的、診斷檢測(cè)老化及伴隨有血管障礙的疾病的方法。本發(fā)明具有以下特征。(1) 一種老化的檢測(cè)方法，包括定量或定性地測(cè)定及/或檢測(cè)包含在來自受試者 的生物樣品中的多肽、其突變體或其片段中的任意1種或多種，所述多肽含有序列號(hào)1 21 所示的氨基酸序列。(2)如(1)所述的方法，其中，所述老化為血管障礙。(3)如( 所述的方法，其中，所述血管障礙為伴隨有新生血管增生的出血或水 腫。(4)如( 所述的方法，其中，所述血管障礙是伴隨有眼組織新生血管增生的出血 或水腫。(5)如(4)所述的方法，其中，所述伴隨有眼組織新生血管增生的出血或水腫為老年黃斑變性。
(6)如⑴ (5)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述多肽、其突變體或其片段的測(cè)定 及/或檢測(cè)是使用質(zhì)譜法進(jìn)行的。(7)如(6)所述的方法，其中，上述測(cè)定及/或檢測(cè)是使用能夠與上述多肽、其突變 體或其片段結(jié)合的物質(zhì)進(jìn)行的。(8)如(7)所述的方法，其中，上述能夠結(jié)合的物質(zhì)是抗體或其抗原結(jié)合片段。(9)如(8)所述的方法，其中，使用的上述抗體是被酶、熒光物質(zhì)、色素、放射性同 位素或生物素中的任意一種標(biāo)記的抗體。(10)如⑶或(9)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述抗體或其抗原結(jié)合片段為單克 隆抗體或多克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。(11)如(1) (10)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述生物樣品為血液、血漿或血清。(12) 一種用于診斷及/或檢測(cè)老化的組合物，含有選自抗體或其抗原結(jié)合片段或 它們的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段或 它們的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片 段中的至少1種特異性結(jié)合。(13) 一種用于診斷及/或檢測(cè)老化的試劑盒，含有選自抗體或其抗原結(jié)合片段或 它們的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段或 它們的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片 段中的至少1種特異性結(jié)合。(14)如(1 或(1 所述的組合物或試劑盒，其中，所述老化為血管障礙。(15)如(14)所述的組合物或試劑盒，其中，所述血管障礙為伴隨有新生血管增生 的出血或水腫。(16)如(1 所述的組合物或試劑盒，其中，所述血管障礙為伴隨有眼組織新生血 管增生的出血或水腫。(17)如(16)所述的組合物或試劑盒，其中，所述伴隨有眼組織新生血管增生的出 血或水腫為老年黃斑變性。(18)抗體探針在(13) (17)中任一項(xiàng)所述的試劑盒的制備中的應(yīng)用，其中，所述 抗體探針是選自抗體或其抗原結(jié)合片段或它們的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種，所述抗 體或其抗原結(jié)合片段或它們的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列 的多肽、其突變體或其片段中的至少1種特異性結(jié)合。< 定義 >本說明書中使用的用語具有以下定義。本說明書中所謂的含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽的突變體，是指在 序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列或其部分序列中含有1個(gè)或多個(gè)、優(yōu)選為1個(gè)或幾個(gè)的氨 基酸的缺失、取代、添加或插入的突變體，或者是含有與該氨基酸序列或其部分序列具有約 80%以上、約85%以上、優(yōu)選為約90%以上、較優(yōu)選為約95%以上、約97%以上、約98%以 上、約99 %以上同一性的氨基酸序列的突變體。本說明書中使用的“ ％同一性”的用語通常是指通過在2個(gè)氨基酸序列中引入空 隙、或不引入空隙進(jìn)行編組(比對(duì))時(shí)，兩個(gè)序列共有的同一氨基酸殘基或位置的數(shù)相對(duì)于5氨基酸殘基或位置的總數(shù)的比例(％)。2個(gè)氨基酸序列的同一性可以使用數(shù)學(xué)算法判定， 所述算法的例子為 Karlin and Altshul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990，87 :2洸4 及作為 其改良版的 Karlin and Altshul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA1993,90 5873-58770 這種算 法被引入 BLASTN、BLASTX 等(Altshulet al.，J. Mol. Biol. 1990，215 :403)。為了得到與本 發(fā)明的序列號(hào)1 21所示的多肽的各氨基酸序列相同的氨基酸序列，使用例如分?jǐn)?shù)=50、 字長=3的BLAST程序進(jìn)行BLAST的蛋白質(zhì)檢索。另外，為了得到引入空隙的比對(duì)，可以使 用空隙引入 BLAST (gapped BLAST) (Altshul et al.，Nucleic Acid Res. 1997,25 :3389)。本說明書中使用的“幾個(gè)”的用語是指10、9、8、7、6、5、4、3或2的整數(shù)。本說明書中使用的“化學(xué)修飾衍生物”的用語，是指例如通過酶、熒光物質(zhì)、色素、 放射性同位素等標(biāo)記的標(biāo)記化衍生物；或者含有生物素化、乙?；⑻腔?、磷酸化、泛素 化、硫酸化等化學(xué)修飾的衍生物，但不限定于上述物質(zhì)。本說明書中使用的“用于診斷及/或檢測(cè)的組合物或試劑盒”的用語，是指可以直 接或間接用于下述用途的組合物或試劑盒診斷及/或檢測(cè)老化、老年黃斑變性等伴隨有 血管障礙的疾病的罹患的有無、罹患的程度、改善的有無或改善的程度，或者篩選對(duì)老化、 及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病的預(yù)防、改善或治療有用的候選物質(zhì)。本說明書中作為檢測(cè)或診斷對(duì)象的所謂的“生物樣品”，是指取自生物體的、含有 或者可能含有隨老化、及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病的發(fā)生而出現(xiàn)的靶多肽的 樣品，例如細(xì)胞、組織、體液(例如血液、淋巴液、尿等)等樣品。本說明書中所謂“特異性結(jié)合”是指抗體或其抗原結(jié)合片段只與本發(fā)明中作為老 年黃斑變性標(biāo)記的靶多肽、其突變體或其片段形成抗原-抗體復(fù)合體，與其他的肽性或多 肽性物質(zhì)實(shí)質(zhì)上不形成該復(fù)合體。此處所謂的“實(shí)質(zhì)上”，是指可能發(fā)生非特異性的復(fù)合體 形成但程度小。本發(fā)明中的老化、及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病的標(biāo)記，由于在老年 黃斑變性患者的血液等生物樣品中被發(fā)現(xiàn)，但在白內(nèi)障或青光眼等其他的眼部疾病中基本 上或完全未被發(fā)現(xiàn)，因此僅以該標(biāo)記的存在或量為指標(biāo)可以得到如下顯著的作用效果例 如使用血液可以容易地檢測(cè)老年黃斑變性、老化、及伴隨有血管障礙的疾病。本說明書包含作為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本專利申請(qǐng)2008-092245號(hào)說明書 及/或附圖
中記載的內(nèi)容。
具體實(shí)施例方式以下更具體地說明本發(fā)明。<老化、及伴隨有血管障礙的疾病的標(biāo)記>本發(fā)明的使用組合物或試劑盒用于診斷及/或檢測(cè)老化、及伴隨有血管障礙的疾 病的標(biāo)記，是含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片段，所述組合物 或試劑盒用于診斷或檢測(cè)老化、及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病。本發(fā)明的含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其蛋白質(zhì)號(hào)(Swiss-Prot 注冊(cè)名及注冊(cè)號(hào))、以及它們的特性均示于下述表1。上述多肽在老年黃斑變性患者血漿中 被特異性檢測(cè)，在白內(nèi)障及青光眼的患者的血漿中未被檢測(cè)或者與老年黃斑變性患者血漿 中相比檢測(cè)顯著地減少。需要說明的是，如序列表所示的上述多肽的氨基酸序列可以通過存取在Swiss-Prot等數(shù)據(jù)庫中而獲得。[表 1]
權(quán)利要求
1.一種老化的檢測(cè)方法，包括定量或定性地測(cè)定及/或檢測(cè)包含在來自受試者的生物 樣品中的多肽、其突變體或其片段中的任意1種或多種，所述多肽含有序列號(hào)1 21所示 的氨基酸序列。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述老化為血管障礙。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述血管障礙為伴隨有新生血管增生的出血或水腫。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述血管障礙是伴隨有眼組織新生血管增生的出 血或水腫。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述伴隨有眼組織新生血管增生的出血或水腫為 老年黃斑變性。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述多肽、其突變體或其片段的測(cè)定 及/或檢測(cè)是使用質(zhì)譜法進(jìn)行的。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述測(cè)定及/或檢測(cè)是使用能夠與所述多肽、其突 變體或其片段結(jié)合的物質(zhì)進(jìn)行的。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述能夠結(jié)合的物質(zhì)是抗體或其抗原結(jié)合片段。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中，使用的所述抗體是被酶、熒光物質(zhì)、色素、放射性同 位素或生物素中的任意一種標(biāo)記的抗體。
10.如權(quán)利要求8或9所述的方法，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段為單克隆抗體或 多克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
11.如權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述生物樣品為血液、血漿或血清。
12.一種用于診斷及/或檢測(cè)老化的組合物，含有選自抗體或其抗原結(jié)合片段或它們 的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段或它們 的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片段中 的至少1種特異性結(jié)合。
13.一種用于診斷及/或檢測(cè)老化的試劑盒，含有選自抗體或其抗原結(jié)合片段或它們 的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種的抗體探針，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段或它們 的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片段中 的至少1種特異性結(jié)合。
14.如權(quán)利要求12或13所述的組合物或試劑盒，其中，所述老化為血管障礙。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物或試劑盒，其中，所述血管障礙為伴隨有新生血管增 生的出血或水腫。
16.如權(quán)利要求15所述的組合物或試劑盒，其中，所述血管障礙為伴隨有眼組織新生 血管增生的出血或水腫。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物或試劑盒，其中，所述伴隨有眼組織新生血管增生的 出血或水腫為老年黃斑變性。
18.抗體探針在權(quán)利要求13 17中任一項(xiàng)所述的試劑盒的制備中的應(yīng)用，其中，所述 抗體探針是選自抗體或其抗原結(jié)合片段或它們的化學(xué)修飾衍生物中的1種或多種，所述抗 體或其抗原結(jié)合片段或它們的化學(xué)修飾衍生物能與含有序列號(hào)1 21所示的氨基酸序列 的多肽、其突變體或其片段中的至少1種特異性結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)老化、及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病的方法，以及用于診斷老化、及老年黃斑變性等伴隨有血管障礙的疾病的組合物或試劑盒，其中，所述方法包括測(cè)定來自受試者的生物樣品中的含有序列號(hào)1～21所示的氨基酸序列的多肽、其突變體或其片段中的任意1種或多種。
文檔編號(hào)C07K16/18GK102047112SQ20098011960
公開日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月31日
發(fā)明者巖田岳, 松野圣, 棚橋一裕 申請(qǐng)人:參天制藥株式會(huì)社, 獨(dú)立行政法人國立病院機(jī)構(gòu)