專利名稱：白介素-21受體結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及結(jié)合白介素-21受體(IL-21R)，特別是人IL-21R的結(jié)合蛋白及其抗原 結(jié)合片段，及其在調(diào)節(jié)IL-21R相關(guān)活性中的用途。本文中公開(kāi)的結(jié)合蛋白在治療和/或診 斷IL-21R相關(guān)病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)、移植排斥、高增殖性血液病 癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中有用。
背景技術(shù)：
抗原激起免疫應(yīng)答并激活最大的兩群淋巴細(xì)胞T細(xì)胞和B細(xì)胞。遭遇抗原后，T 細(xì)胞增殖并分化成效應(yīng)器細(xì)胞，而B(niǎo)細(xì)胞增殖并分化成抗體分泌漿細(xì)胞。這些效應(yīng)器細(xì)胞 分泌和/或響應(yīng)細(xì)胞因子，細(xì)胞因子是由淋巴細(xì)胞和其它細(xì)胞類型分泌的小蛋白質(zhì)(小于 約 30kDa)。人IL-21是與IL-2、IL-4和IL-15顯示序列同源性的細(xì)胞因子(Parrish-Novak 等0000)Nature 408:57-63)。盡管白介素細(xì)胞因子間序列同源性低，但是細(xì)胞因子分享 共同的折疊，折疊成該家族代表性的“四螺旋束”結(jié)構(gòu)。大多數(shù)細(xì)胞因子結(jié)合I類或II類 細(xì)胞因子受體。II類細(xì)胞因子受體包括IL-10和干擾素的受體，而I受細(xì)胞因子受體包括 IL-2至IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、和IL-15以及造血生長(zhǎng)因子、瘦蛋白、和生長(zhǎng)激素 的受體(Cosman (1993) Cytokine 5:95-106)。人IL-21R是I類細(xì)胞因子受體。編碼人IL-21及其受體(IL-21R)的核苷酸和氨基 酸序列記載于國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)WO 00/053761和WO 0 1/085792 ;Parrish_Novak等Q000) supra ；及 Ozaki 等(2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:11439-44。IL-21R 與 IL-2 受體 β鏈和IL-4受體α鏈具有最高的序列同源性(Ozaki等Q000) supra)。在配體結(jié)合時(shí)， IL-21R與IL-2、IL-3、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13和IL-15的受體復(fù)合物分享的共同伽馬細(xì) 胞因子受體鏈(Y c)聯(lián)合(Ozaki 等 Q000) supra ；Asao 等 Q001)J. Immunol. 167 :1_5)。IL-21R在淋巴樣組織中，特別是在T細(xì)胞、B細(xì)胞、天然殺傷(NK)細(xì)胞、樹(shù)突 細(xì)胞(DC)和巨噬細(xì)胞上表達(dá)(Parrish-Novak等(2000) supra)，這容許這些細(xì)胞響應(yīng) IL-21 (Leonard and Spolski (2005) Nat. Rev. Immunol. 5 :688-98)。IL-21R 的廣泛淋巴 樣分布指示IL-21在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。體外研究顯示了 IL-21顯著調(diào)控B細(xì) 胞、CD4+ 和 CD8+ T 細(xì)胞、及 NK 細(xì)胞的功能(Parrish-Novak 等 Q000) supra ；Kasaian 等 (2002) Immunity 16 :559-69)。最新的證據(jù)提示IL-21介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)可具有抗腫瘤活性 (Sivakumar等Q004) Immunology 112 :177-82)，而且IL-21能在小鼠中預(yù)防抗原誘導(dǎo)的消 除(Shang 等 Q006)Cell. Immunol. 241 :66-74)。在自身免疫中，破壞IL-21基因和注射重組IL-21顯示出分別調(diào)控實(shí)驗(yàn)性自身免 疫性重癥肌無(wú)力(EAMG)和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的發(fā)展(King等Q004)Cell117 :265-77 ；Ozaki 等(2004) J. Immunol. 173 :5361-71 ；Vollmer 等(2005) J. Immunol. 174 2696-2701 ；Liu 等(2006) J. Immunol. 176 :5247-54)。在這些實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，提示操縱 IL-21 介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)直接改變CD8+細(xì)胞、B細(xì)胞、T輔助細(xì)胞、和NK細(xì)胞的功能。發(fā)明概述本發(fā)明描述了特異性結(jié)合人和鼠IL-21R的結(jié)合蛋白例如人抗體及其片段的分離 和表征。本文中描述的結(jié)合蛋白衍生自抗體18A5，其披露于美國(guó)專利No. 7，495，085，通過(guò) 述及將其全部收入本文。本發(fā)明的結(jié)合蛋白具有程度比親本18A5抗體大得多的對(duì)人和/ 或鼠IL-21R的親和力。本發(fā)明至少部分提供以高親和力和特異性結(jié)合IL-21R，特別是人IL-21R的 IL-21R結(jié)合劑(諸如結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段 在本文中也分別稱作“抗IL-21R結(jié)合蛋白”及“其片段”。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或 其片段降低、抑制、或拮抗IL-21R活性。此類結(jié)合蛋白可用于通過(guò)拮抗IL-21R活性來(lái)調(diào)節(jié) 免疫應(yīng)答或IL-21R相關(guān)病癥。在其它實(shí)施方案中，抗IL-21R結(jié)合蛋白可用于診斷，或作為 靶向結(jié)合蛋白用于將治療劑或細(xì)胞毒劑投遞至IL-21R表達(dá)細(xì)胞。如此，本發(fā)明的抗IL-21R 結(jié)合蛋白在診斷和治療IL-21R相關(guān)病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)、移植 排斥、高增殖性病癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中有用。因而，在一個(gè)方面，本發(fā)明的結(jié)合蛋白特征為一種結(jié)合IL-21R，特別是人IL-21R 的分離的結(jié)合蛋白(例如分離的抗體)或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方案中，抗IL-21R 結(jié)合蛋白(例如抗體)可具有一項(xiàng)或多項(xiàng)下述特征(1)它是單克隆或單特異性結(jié)合蛋白； ⑵它是人結(jié)合蛋白；(3)它是體外生成的結(jié)合蛋白；(4)它是體內(nèi)(例如轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)) 生成的結(jié)合蛋白；(5)它抑制IL-21結(jié)合IL-21R;(6)它是IgGl ； (7)它以至少約IO5M4iT1 的結(jié)合常數(shù)結(jié)合人IL_21R;(8)它以至少約^clO4M4iT1的結(jié)合常數(shù)結(jié)合鼠IL-21R; (9)它以 約ΙΟ、—1或更少的解離常數(shù)結(jié)合人IL-21R ;(10)它以約ΙΟ、—1或更少的解離常數(shù)結(jié)合鼠 IL-21R ； (11)它以約1. 75ηΜ或更少的IC50抑制人IL-21R介導(dǎo)的人IL-21R表達(dá)性BaF3細(xì) 胞增殖；(12)它以約0. 5nM或更少的IC50抑制鼠IL-21R介導(dǎo)的鼠IL-21R表達(dá)性BaF3細(xì) 胞增殖；(13)它以約14. OnM或更少的IC50抑制人IL-21R介導(dǎo)的人IL-21R表達(dá)性TFl細(xì) 胞增殖；(14)它以約1.9nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的人原代B細(xì)胞增殖；(15)它以 約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的人原代⑶4+ T細(xì)胞增殖；和(16)它以約5. OnM 或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的鼠原代⑶4+ T細(xì)胞增殖。本發(fā)明的結(jié)合蛋白(術(shù)語(yǔ)“結(jié)合蛋白”根據(jù)需要還包括及指其抗原結(jié)合片段) 的非限制性例示性實(shí)施方案在本文中稱作AbA-AbZ，而且這些術(shù)語(yǔ)與美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng) No. 61/055，500中使用的術(shù)語(yǔ)的關(guān)系呈現(xiàn)于表2A。本發(fā)明的結(jié)合蛋白的其它例示性實(shí)施方 案，即scFv，在本文中稱作H3-H6、L1-L6、L8-L21、和L23-L25，如表2B中詳述的。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其 中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同 的氨基酸序列:SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48， 50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98， 100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136， 138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165—168，171—193，213—229，240, 242, 244, M6，和M8。分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段可以是例如抗體、scFv、VH、\、 或 CDR。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO :13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33， 35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83， 85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125， 127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161,239， 241，243，245，和 247。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是包含至少一種選自下組的氨基酸序列的分離的結(jié)合 蛋白或抗原結(jié)合片段SEQ ID NO :14,16,18,20,22,24,26,28,30,32,34,36,38,40,42, 44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92， 94,96,98,100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132， 134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193， 213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相 同的氨基酸序列:SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40， 42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90， 92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130， 132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162—195，213—229， 240, 242, 244, M6，和M8，且其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自 下組的序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194， 和195，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列 至少約 95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO 14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38， 40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88， 90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128， 130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168， 171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO :5，7，9，11，13，15，17，19，21，23，25，27， 29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77， 79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121， 123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159， 161，239，M1，M3，M5，和M7，且其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種由 與選自下組的序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID NO :5,7,9, 和11，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列 至少約95%相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO 13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77， 79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121， 123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159， 161, 239, 241, 243, 245,^P 247。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是包含至少一種選自下組的氨基酸序列的分離的結(jié)合 蛋白或抗原結(jié)合片段:SEQ ID NO :6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,28,30,32,34,36, 38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86， 88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126， 128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162—195， 213-229，240, 242, 244, M6，和M8，其中，如果所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種 與選自下組的序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169， 170，194，和195，那么所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨 基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :14，16，18，20，22，24，26，28，30，32， 34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82， 84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124， 126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162， 165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段， 其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該重鏈包含至少一種選自下 組的氨基酸序列:SEQ ID NO :14,16，18，20，68，70，72，88，90，92，94，213，218，219，240，和 242,或與其基本上相同的序列(例如與其基本上相同的序列包括與其至少約85 %，90 %， 95 %，96%，97%，98%，99%，或更多相同的序列)，或與其基本上同源的序列(例如與其 基本上同源的序列包括與其至少約50%，55%，60%，65%，70%，75%，80%，85%，90%， 95%,96%,97%,98%,99%,或更多相同的序列)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段包含\域和Vh域，且該￥11域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 14, 16，18，和20，或與其基本上相同或同源的序列。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合IL-21R的 分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈， 且其中該輕鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =22,24,26,28,30,32,34, 36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，74，76，78，80，82，84，86，96，98， 100，102，104，106，108，214-217，220-229，244，246，和 248，或與其基本上相同或同源的序 列。在又一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含\域和Vh域，且該\域包含至少 一種選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO =22,24,26,28,30,32,34,36,38,40,42,44,46,48, 50，52，54，56，58，60，62，64，66，215，217，221，223，225，227，和 229，或與其基本上相同或同 源的序列。在又一個(gè)實(shí)施方案中，重鏈包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =88,90,92, 94，213，218，219，M0，和M2，且輕鏈包含選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO =96,98,100, 102，104，106，108，214，216，220，222，224，226，228，244，246，和 248，或與其基本上相同或 同源的序列。本發(fā)明的結(jié)合蛋白，例如抗體，可以是種系的或非種系的。它們可以特異性結(jié)合與 AbA-AbZ, H3-H6、L1-L6、L8-L21、或L23-L25結(jié)合的表位相同的IL-21R表位或相似的表位(例如交疊表位)。在其它實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白特異性結(jié)合IL-21R片段，例如SEQ ID NO 2或4所示氨基酸序列或與其至少85%，90%，95%，96%，97%，98%，99%或更多相同的序 列的至少10，20，50，75，100，150，或200個(gè)連續(xù)氨基酸的片段。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是結(jié)合選自下組的結(jié)合蛋白識(shí)別的IL-21R表位的分 離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段AbA-AbZ，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和L23-L25，其中該結(jié) 合蛋白或抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)性抑制選自下組的結(jié)合蛋白結(jié)合人IL-21R:AbA-AbZ，H3-H6， L1-L6，L8-L21，和L23-L25。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含重鏈、輕 鏈、或Fv片段，其包含選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO :14，16，18，20，22，24，洸，28，30， 32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80， 82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122， 124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160， 162，165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248，或與其基本上相同或同源的序 列。在又一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，其包含由 選自下組的核苷酸序列編碼的氨基酸序列=SEQ ID NO 13，15，17，19，21，23，25，27，29，31， 33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81， 83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123， 125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161， 239，241,243, M5，和M7，或與其基本上相同或同源的序列。在其它實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包含這些Vh和\域的至少一種互補(bǔ)決定區(qū)(OTR) (例如一種或更多種、兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、或五種或更多種鄰近的 CDR(例如由框架區(qū)(FR)或接頭隔開(kāi)的兩種或更多種CDR)或非鄰近的CDR(例如由至少一 種其它CDR和例如FR隔開(kāi)的兩種或更多種CDR))。例如，結(jié)合蛋白可包括Vh域和/或八域 的一種、兩種、三種或更多種⑶R。本公開(kāi)提供來(lái)自AbA-AbZ、H3-H6、L1-L6、L8-L21、和 L23-L25 之 Vh 和 \ 域的核酸 序列。還涵蓋包含至少一種來(lái)自AbA-AbZ、H3-H6、Ll-L6、L8-L21、和L23-L25的CDR的核酸 序列。本公開(kāi)還提供包含此類核酸的載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可以是全長(zhǎng)的(例如包括至少一條完整重鏈和至少一條完整 輕鏈)，或者可以只包括抗原結(jié)合片段(例如，保留特異性結(jié)合抗原的能力的全長(zhǎng)結(jié)合蛋白 的Fab、Fab，、F(ab，)2、Fv、單鏈Fv片段、Fd片段、dAb片段、CDR、或其它片段)。結(jié)合蛋白 可以包括選自卡帕(κ)、拉姆達(dá)(λ)、阿爾法(α)、伽馬(Y)、德?tīng)査?δ)、厄普西隆(ε) 和謬(μ)恒定區(qū)基因任一的恒定區(qū)或其一部分。例如，可以使用各種同種型的重鏈恒定 區(qū)，包括=IgGl, IgG2，IgG3，IgG4，IgM, IgAl, IgA2，IgD，和IgE0輕鏈恒定區(qū)可以選自卡帕 或拉姆達(dá)。結(jié)合蛋白可以是IgG，或者它也可以是IgGl κ或IgGl λ。本文中描述的抗IL-21R結(jié)合蛋白可以衍生化或連接至另一功能性分子(諸如另 一肽或蛋白質(zhì)，例如Fab片段)。例如，本發(fā)明的結(jié)合蛋白可以功能性連接(例如通過(guò)化學(xué)偶 聯(lián)、遺傳融合、非共價(jià)聯(lián)合或其它方式)至至少一種其它分子實(shí)體，諸如另一結(jié)合蛋白(例 如雙特異性或多特異性結(jié)合蛋白)、毒素、放射性同位素、細(xì)胞毒劑或細(xì)胞抑制劑、等等。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段對(duì)人IL-21R的結(jié)合常數(shù) 為至少約IO5M4sA在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 75ηΜ或更少的IC50抑制IL-21介導(dǎo)的BaF3細(xì)胞增殖，且所述BaF3細(xì)胞包含人IL-21R。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約14. OnM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的TFl細(xì)胞增殖， 且所述TFl細(xì)胞包含人IL-21R。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 9nM 或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的原代人B細(xì)胞增殖，且所述B細(xì)胞包含人IL-21R。在又一 個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段以約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的原代 人⑶4+細(xì)胞增殖，且所述⑶4+細(xì)胞包含人IL-21R。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，所述蛋白或抗原結(jié)合 片段與和SEQ ID NO 2的至少100個(gè)連續(xù)氨基酸的任何序列至少約95%相同的氨基酸序 列特異性結(jié)合。另一個(gè)實(shí)施方案提供抑制IL-21結(jié)合IL-21R的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。 在至少一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段是IgGl。在至少一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段是人的。在另一個(gè)方面，本發(fā)明特征為一種藥物組合物，其含有至少一種抗IL-21R結(jié)合蛋 白和藥學(xué)可接受載體。藥物組合物可進(jìn)一步包括至少一種抗IL-21R結(jié)合蛋白和至少一種 其它治療劑(例如細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子抑制劑、免疫抑制劑、抗炎劑、代謝抑制劑、酶抑制 劑、細(xì)胞毒劑、細(xì)胞抑制劑、或其組合，如本文中更詳細(xì)描述的)的組合?？笽L-21R結(jié)合蛋 白和治療劑的組合也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的組合物和組合可用于調(diào)節(jié)IL-21R相關(guān) 免疫病癥，例如通過(guò)調(diào)控IL-21R信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白是抗體。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗體是多 克隆的、單克隆的、單特異性的、多特異性的、非特異性的、人源化的、人的、單鏈的、嵌合的、 合成的、重組的、雜合的、突變的、嫁接的(grafted)、體外生成的和/或多特異性的(例如自 至少兩種完整抗體形成的雙特異性抗體)。本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括編碼抗IL-21R結(jié)合蛋白的分離的核酸、包含該核酸 的表達(dá)載體、和經(jīng)該載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞、 植物細(xì)胞、或昆蟲(chóng)細(xì)胞。結(jié)合蛋白可以用可檢測(cè)物質(zhì)直接或間接標(biāo)記以便于結(jié)合的或未結(jié)合的結(jié)合蛋白的 檢測(cè)。合適的可檢測(cè)物質(zhì)包括但不限于各種酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、和放射性材料。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于在體內(nèi)將藥劑例如治療劑或細(xì)胞毒劑投遞或靶 向至IL-21R表達(dá)細(xì)胞的方法。該方法包括在容許結(jié)合蛋白結(jié)合IL-21R的條件下對(duì)受試 者施用抗IL-21R結(jié)合蛋白。結(jié)合蛋白可以偶聯(lián)至第二治療性模塊(second therapeutic moiety)，例如毒素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供診斷試劑盒，其包含本發(fā)明的結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段。本公開(kāi)的別的方面會(huì)在說(shuō)明中部分列出，而且根據(jù)說(shuō)明會(huì)部分顯而易見(jiàn)，或者通 過(guò)實(shí)踐本發(fā)明可學(xué)會(huì)。本發(fā)明在權(quán)利要求中列出和具體指出，而且本公開(kāi)不應(yīng)解釋為限制 權(quán)利要求的范圍。下面的詳細(xì)說(shuō)明包括本發(fā)明各種實(shí)施方案的例示性呈現(xiàn)，它們對(duì)于要求 保護(hù)的發(fā)明不是限制性的。附圖構(gòu)成本說(shuō)明書的一部分，而且與說(shuō)明一起只用來(lái)例示實(shí)施 方案，而非限制本發(fā)明。附圖簡(jiǎn)述圖l(a-c)描繪scFv對(duì)人IL_21R_BaF3細(xì)胞增殖的中和。將細(xì)胞與所示scFv
12混合，然后與100pg/ml人IL-21 —起溫育。48小時(shí)后通過(guò)CELLTITER GLO (Promega Corporation, Madison, WI) ij jfi±f·。圖2 (a-c)描繪scFv對(duì)人IL-21R-TF1細(xì)胞增殖的中和。將細(xì)胞與所示scFv混合， 然后與100pg/ml人IL-21 —起溫育。48小時(shí)后通過(guò)CELLTITER-GL0 測(cè)量增殖。圖3 (a-c)描繪scFv對(duì)鼠IL_21R_BaF3細(xì)胞增殖的中和。將細(xì)胞與所示scFv混 合，然后與400pg/ml鼠IL-21 —起溫育。48小時(shí)后通過(guò)CELLTITER-GL0 測(cè)量增殖。圖4(a_c)描繪scFv與親本抗體18A5IgG競(jìng)爭(zhēng)對(duì)鼠IL-21R的結(jié)合。將scFv與 生物素化的鼠IL-21R H/F混合，并將混合物添加至在ELISA板上固定化的抗體18A5。用 HRP-鏈霉親合素檢測(cè)mIL-21R捕捉，并以A450信號(hào)的降低指示對(duì)mIL_21R結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)。圖5描繪21對(duì)重鏈/輕鏈對(duì)IL-21依賴性增殖的中和。將圖中所示抗體添加至細(xì) 胞。隨后添加IL-21，并在48小時(shí)后用CELLTITER GLO 測(cè)量增殖。對(duì)人IL_21R_BaF3細(xì) 胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 5a_c)、對(duì)人 IL-2IR-TFl 細(xì)胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 5d-f)、 或?qū)κ驣L-21R-BaF3細(xì)胞用400pg/ml鼠IL-21 (圖5g_i)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。圖6描繪21種抗IL-21R IgG對(duì)瞬時(shí)表達(dá)人IL-21R(圖6a_c)、大鼠IL-21R(圖 6d-f)、獼猴IL-21R(圖6g-i)、和人伽馬(γ)共同鏈(圖6j-l)的CHO細(xì)胞的結(jié)合。用 IL-21R或?qū)φ召ゑR(Y)共同鏈瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，并在基于細(xì)胞的ELISA中用HRP偶聯(lián)的 抗人IgG測(cè)量結(jié)合。圖 7 (a-c)描繪特定抗 IL-21R 抗體(圖 7a，AbS ；圖 7b，AbQ、AbT、AbO ；圖 7c， AbR、AbP、和AbU)的結(jié)合特異性，這是通過(guò)表面等離振子共振測(cè)量得出的。在抗人IgG上 捕捉抗IL-21R抗體，并在BIAC0RE (GE Healthcare, Piscataway，NJ)儀器中測(cè)量隨后對(duì) 鼠IL-21R-H/F、人IL-13-H/F、人IL_2R0、或人可溶性IL-4R任一的結(jié)合。圖7d顯示人 IL-2Ri3和人可溶性IL-4R分別被特異性抗IL_2Ri3和抗IL-4R抗體所捕捉(對(duì)照)。圖8(a_d)描繪抗IL-21R抗體對(duì)人和鼠IL-21R的結(jié)合。在BIAC0RE 芯片上固定 化的抗人IgG上捕捉所示人抗IL-21R抗體。讓不同濃度的人IL-2IR-His/FLAG(圖8a_b) 和鼠IL-2IR-His/FLAG(圖8c_d)流過(guò)芯片，并監(jiān)測(cè)結(jié)合和解離。圖9描繪抗IL-21R抗體對(duì)人和獼猴IL-21R的結(jié)合。在BIAC0RE 芯片上固定化 的抗人IgG上捕捉人抗IL-21R抗體AbS和AbT。讓不同濃度的人和獼猴IL_21R-His/FLAG 流過(guò)芯片，并監(jiān)測(cè)結(jié)合和解離。圖9a顯示獼猴IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbS。圖9b顯示 人IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbS。圖9c顯示獼猴IL-2IR-His/FLAG結(jié)合至AbT。圖9d顯 示人 IL-2IR-His/FLAG 結(jié)合至 AbT。

圖10描繪IL-21R抗體的表位評(píng)估。在圖IOa所示實(shí)驗(yàn)中(還可見(jiàn)Y軸左邊的圖 解)，通過(guò)BIAC0RE 芯片上固定化的抗IL-21R抗體AbS來(lái)捕捉鼠IL-21R-H/F (His-Flag融 合蛋白)。使別的抗IL-21R抗體(AbS、AbT、D5 (D5-20，一種中和性抗鼠IL-21R抗體)、和 7C2(—種非中和性抗鼠IL-21R對(duì)照抗體))流過(guò)芯片，并監(jiān)測(cè)它們對(duì)捕捉到的IL-21R-H/F 的結(jié)合。在圖IOb所示實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)BIAC0RE 芯片上固定化的抗IL-21R抗體AbS來(lái)捕捉 人IL-21R-H/F。使別的抗IL-21R抗體(AbS、AbT、和9D2( —種非中和性抗人IL-21R對(duì)照 抗體))流過(guò)芯片，并監(jiān)測(cè)它們對(duì)捕捉到的IL-21R-H/F的結(jié)合。圖11描繪所示抗體對(duì)人IL-21R_BaF3細(xì)胞和鼠IL_21R_BaF3細(xì)胞增殖的中和。 將抗體添加至細(xì)胞。隨后添加IL-21，并在48小時(shí)后用CELLTITER GLO 測(cè)量增殖。對(duì)人IL-21R-BaF3 細(xì)胞用 100pg/ml 人 IL-21 (圖 Ila)、對(duì)鼠 IL_21R_BaF3 細(xì)胞用 200pg/ml 鼠 IL-21 (圖lib)、及對(duì)人IL-21R-TF1細(xì)胞用100pg/ml人IL-21 (圖lie)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。圖12描繪對(duì)人原代B細(xì)胞的IL-21依賴性增殖的中和。與抗⑶40抗體和人IL-21 一起將所示抗體添加至原代人B細(xì)胞。3天后測(cè)量3H-胸苷摻入。圖1 描繪AbQ、AbR、 AbS、AbT、AbU、IL-13三重突變體、和18A5親本抗體之間的比較；圖12b描繪AbT、AbV、AbW、 AbU、和人IgGl對(duì)照(hlgl)之間的比較。圖13描繪對(duì)人原代⑶4+ T細(xì)胞的IL-21依賴性增殖的中和。與人IL-21 —起將 所示抗體添加至活化的原代人CD4+ T細(xì)胞，并在3天后測(cè)量3H-胸苷摻入。圖14描繪對(duì)鼠原代⑶8+ T細(xì)胞的IL-21依賴性增殖的中和。與人IL-21 —起將 所示抗體添加至活化的原代鼠CD8+ T細(xì)胞，并在3天后測(cè)量3H-胸苷摻入。圖15描繪由抗IL-21R抗體誘導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)的測(cè)量。通 過(guò)碘化丙啶的摻入來(lái)測(cè)量經(jīng)所示抗IL-21R抗體包被的CFSE標(biāo)記的BJAB細(xì)胞的PBMC依賴 性殺傷。包括抗CD20抗體利妥昔單抗(RITUXAN ,Genentech，Inc.，South San Francisco, CA)作為陽(yáng)性對(duì)照，而且包括抗IL-13抗體作為陰性對(duì)照。圖16描繪抗IL-21R抗體的補(bǔ)體Clq結(jié)合。在ELISA板上固定化所示抗IL-21R 抗體，并在與人血清一起溫育后，用雞抗人Clq和HRP偶聯(lián)的抗雞IgY抗體測(cè)量Clq結(jié)合。 包括抗⑶20抗體利妥昔單抗(RITUXAN )作為陽(yáng)性對(duì)照，并包括抗IL-13抗體作為陰性 對(duì)照。圖17 (a-c)描繪 AbQ 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖18 (a-c)描繪 AbR 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖19 (a-c)描繪 Abff 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖20 (a-c)描繪 AbS 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖21 (a-c)描繪 AbT 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖22 (a-c)描繪 AbO 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、
和恒定區(qū)。圖23 (a-c)描繪 AbP 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖 24 (a-c)描繪 AbU 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖25 (a-c)描繪 AbV 的氨基酸序列，包括 Vh 和 Vl 域、CDR (Hl，H2，H3，Ll，L2，和 L3)、 和恒定區(qū)。圖沈(『0描繪與產(chǎn)生圖5、11、12、13、和14(上文描述的)所示結(jié)果的研究類似 實(shí)施的別的研究產(chǎn)生的結(jié)果。圖27描繪IL-21細(xì)胞因子與抗體AbT競(jìng)爭(zhēng)對(duì)鼠IL-21R的結(jié)合。將媒介(vehicle)或漸增量的IL-21與生物素化的鼠IL-2IR-His/FLAG混合，并將混合物添加至在ELISA板 上固定化的AbT。用HRP-鏈霉親合素檢測(cè)mIL-2 IR捕捉，并以A450信號(hào)的降低指示mIL_2 IR 結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)。發(fā)明詳述本發(fā)明的結(jié)合蛋白最初衍生自親本抗體18A5，但是在重鏈和/或輕鏈互補(bǔ)決定區(qū) 3(CDR3)部分氨基酸序列方面不同于18A5。另外，本發(fā)明的結(jié)合蛋白顯示結(jié)合和中和人和 鼠IL-21R 二者方面與等同形式(例如scFv或IgG)的18A5相比改良的效力。先前沒(méi)有報(bào) 告單一結(jié)合蛋白對(duì)來(lái)自這兩個(gè)物種(人和小鼠)的IL-21R的高效力中和。具有比它們的 親本抗體更大的中和效力的本發(fā)明結(jié)合蛋白可轉(zhuǎn)化為與先前記載的藥劑相比更高的功效。 另外，已經(jīng)改變了 Vh和\框架區(qū)的氨基酸序列以匹配由人基因組序列編碼的序列，由此降 低用本發(fā)明結(jié)合蛋白處理的患者中人抗人抗體應(yīng)答的潛力。定義為了更容易理解本發(fā)明，首先定義某些術(shù)語(yǔ)。別的定義遍及詳述和說(shuō)明書中的其 它地方列出。術(shù)語(yǔ)“結(jié)合蛋白”如本文中使用的包括如下的任何天然發(fā)生的、重組的、合成的、 或遺傳工程的蛋白質(zhì)或其組合，其結(jié)合抗原、靶蛋白質(zhì)、或肽，或其片段。本發(fā)明的結(jié)合蛋 白可包括抗體，或衍生自至少一種抗體片段。結(jié)合蛋白可包括天然發(fā)生的蛋白質(zhì)和/或合 成工程的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可結(jié)合抗原或其片段以形成復(fù)合物，并引發(fā)生物學(xué)應(yīng) 答(例如激動(dòng)或拮抗特定生物學(xué)活性)。結(jié)合蛋白可包括分離的抗體片段。由抗體重和 輕鏈的可變區(qū)組成的“Fv”片段、其中輕和重鏈可變區(qū)經(jīng)肽接頭相連接的重組單鏈多肽分 子(“scFv蛋白質(zhì)”)、和由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識(shí)別單元。結(jié)合蛋白片段 還可包括功能性抗體片段，諸如例如Fab、Fab，、F(ab，)2、Fe、Fd、Fd，、Fv、和單抗體可變域 (dAb)。結(jié)合蛋白抗原是雙鏈或單鏈，而且可包含單個(gè)結(jié)合域或多個(gè)結(jié)合域。結(jié)合蛋白還可包括結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白，其中結(jié)合域多肽融合或以其它 方式連接至免疫球蛋白鉸鏈或鉸鏈作用區(qū)多肽，后者繼而融合或以其它方式連接至包含來(lái) 自免疫球蛋白重鏈的一個(gè)或多個(gè)天然或工程化恒定區(qū)的區(qū)域，所述恒定區(qū)不同于CH1，例如 IgG和IgA的Ch2和Ch3區(qū)或者IgE的CH3和CH4區(qū)(更完整的說(shuō)明參見(jiàn)例如Ledbetter等， 美國(guó)專利公開(kāi)文本2005/0136049)。結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白可進(jìn)一步包括如下的區(qū) 域，其包括融合或以其它方式連接至鉸鏈區(qū)多肽的天然或工程化免疫球蛋白重鏈Ch2恒定 區(qū)多肽(或CH3，在構(gòu)建物完全或部分衍生自IgE的情況中)和融合或以其它方式連接至 Ch2恒定區(qū)多肽(或Ch3，在構(gòu)建物完全或部分衍生自IgE的情況中)的天然或工程化免疫 球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)多肽(或CH4，在構(gòu)建物完全或部分衍生自IgE的情況中)。通常，此 類結(jié)合域-免疫球蛋白融合蛋白具有至少一項(xiàng)選自下組的免疫學(xué)活性抗體依賴性細(xì)胞介 導(dǎo)的細(xì)胞毒性、補(bǔ)體結(jié)合、和/或?qū)Π形?例如靶抗原)的結(jié)合。本發(fā)明的結(jié)合蛋白可衍生 自任何物種，包括但不限于小鼠、人、駱駝、美洲駝、魚(yú)、鯊魚(yú)、山羊、家兔、雞、和牛。術(shù)語(yǔ)“抗體”如本文中使用的指對(duì)指定蛋白質(zhì)或肽或其片段有反應(yīng)性的免疫球蛋 白。此類抗體包括但不限于人抗體、靈長(zhǎng)類化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、單特異性抗體、 多克隆抗體、多特異性抗體、非特異性抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、人源化抗體、合 成抗體、重組抗體、雜合抗體、突變型抗體、嫁接偶聯(lián)抗體(即偶聯(lián)或融合至其它蛋白質(zhì)、放射性標(biāo)記物、細(xì)胞毒素的抗體)、和體外生成的抗體?？贵w可來(lái)自任何類的抗體，包括但不限 于IgG, IgA、IgM, IgD、和IgE，及來(lái)自任何亞類(例如IgGl、IgG2、IgG3、和IgG4)的抗體。 抗體可具有選自例如IgGl、IgG2、IgG3、或IgG4的重鏈恒定區(qū)?？贵w還可具有選自例如卡 帕(κ)或拉姆達(dá)(λ)的輕鏈。本發(fā)明的抗體可衍生自任何物種，包括但不限于小鼠、人、 駱駝、美洲駝、魚(yú)、鯊魚(yú)、山羊、家兔、雞、和牛?？贵w的恒定區(qū)可進(jìn)行改變，例如突變，以修飾 抗體的特性(例如以提高或降低下述一項(xiàng)或多項(xiàng)Fc受體結(jié)合、抗體糖基化、半胱氨酸殘基 的數(shù)目、效應(yīng)器細(xì)胞功能、或補(bǔ)體功能)。通常，抗體特異性結(jié)合預(yù)定抗原，例如與病癥有關(guān) 的抗原，病癥例如炎性的、免疫性的、自身免疫性的、神經(jīng)變性性的、代謝的、和/或惡性的 病癥。術(shù)語(yǔ)“單域結(jié)合蛋白”如本文中使用的包括結(jié)合抗原、蛋白質(zhì)、或多肽的任何單域 結(jié)合支架。單域結(jié)合蛋白可包括如下的任何天然的、重組的、合成的、或遺傳工程的蛋白質(zhì) 支架或其組合，其結(jié)合抗原或其片段以形成復(fù)合物，并引發(fā)生物學(xué)應(yīng)答(例如激動(dòng)或拮抗 特定生物學(xué)活性)。單域結(jié)合蛋白可衍生自天然發(fā)生的蛋白質(zhì)或抗體，或者它們可以合成 工程化或通過(guò)重組技術(shù)來(lái)生成。單域結(jié)合蛋白可以是任何現(xiàn)有技術(shù)的單域結(jié)合蛋白或任 何未來(lái)的單域結(jié)合蛋白，而且可衍生自任何物種，包括但不限于小鼠、人、駱駝、美洲駝、魚(yú)、 鯊魚(yú)、山羊、家兔、雞、和牛。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，單域結(jié)合蛋白支架可衍生自在魚(yú) 中找到的免疫球蛋白的可變區(qū)，諸如例如衍生自在鯊魚(yú)血清中找到的稱作新型抗原受體 (NAR)的免疫球蛋白同種型的可變區(qū)。生成衍生自NAR可變區(qū)(“IgNAR”)的單域結(jié)合支架的 方法記載于國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào) No. WO 03/014161 及 MreltsovQ005)Protein Sci. 14(11) 2901-09。在其它實(shí)施方案中，單域結(jié)合蛋白是現(xiàn)有技術(shù)中描述為不含輕鏈的重鏈抗體的天 然發(fā)生的單域結(jié)合蛋白。此類單域結(jié)合蛋白披露于例如國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)WO 94/004678。出 于清楚原因，衍生自天然不含輕鏈的重鏈抗體的可變域結(jié)合蛋白在本文中稱作VHH或“納 米抗體” (nanobody)以將它與常規(guī)四鏈免疫球蛋白的Vh區(qū)分開(kāi)。此類VHH分子可衍生自在 駱駝科(Camelidae)物種中產(chǎn)生的抗體，例如在駱駝、美洲駝、單峰駝、羊駝、和原駝中。駱 駝科以外的其它科也可用于生成天然不含輕鏈的重鏈結(jié)合蛋白。VHH分子比傳統(tǒng)的IgG分 子小大約10倍。它們是單一多肽，而且非常穩(wěn)定，對(duì)極端pH和溫度條件有抗性。此外，它們 對(duì)蛋白酶的作用有抗性，常規(guī)抗體則不然。此外，體外表達(dá)VHH能生成高產(chǎn)量的、正確折疊 的功能性VHH。另外，在camelids中生成的結(jié)合蛋白能識(shí)別經(jīng)抗體文庫(kù)或經(jīng)免疫camelids 以外的哺乳動(dòng)物在體外生成的抗體識(shí)別的表位以外的表位(參見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)WO 97/049805和WO 94/004678，通過(guò)述及將二者收入本文)。術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合域”和“抗原結(jié)合片段”指結(jié)合蛋白的一部分，其包負(fù)責(zé)含結(jié)合蛋白 和抗原之間特異性結(jié)合的氨基酸。抗原中受到結(jié)合蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的部分稱作“表 位”。抗原結(jié)合域可包含抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)(Vh)；然而，它不必包含二者。 例如，F(xiàn)d片段具有兩個(gè)Vh區(qū)，而且常常保留完整抗原結(jié)合域的抗原結(jié)合功能。結(jié)合蛋白的 抗原結(jié)合片段的例子包括但不限于(I)Fab片段，即具有\(zhòng)、Vh、(^和ChI域的單價(jià)片段；(2) F(ab' )2片段，即具有通過(guò)鉸鏈區(qū)處的二硫橋相連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(3)Fd 片段，其具有兩個(gè)Vh和一個(gè)ChI域；(4) Fv片段，其具有抗體單臂的\和Vh域；(5) dAb片段 (參見(jiàn)例如Ward等(1989) Nature 341力44-46)，其具有Vh域；(6)分離的CDR;和(7)單鏈可變片段(scFv)。雖然Fv片段的兩個(gè)域(即\和Vh)由分開(kāi)的基因編碼，但是它們能接合 在一起，這使用重組方法，通過(guò)合成的接頭，使得它們能夠作為單一蛋白質(zhì)鏈生成，其中八 和Vh區(qū)配對(duì)以形成單價(jià)分子(稱作scFv)(參見(jiàn)例如Bird等(1988) Science 242 :423-26 ； Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. ki. USA 85:5879-83)。這些結(jié)合域片段可使用本領(lǐng)域 技術(shù)人員知道的常規(guī)技術(shù)來(lái)獲得，而且可以以與完整結(jié)合蛋白諸如例如抗體相同的方式對(duì) 片段評(píng)估功能。術(shù)語(yǔ)“中和”指結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段(例如抗體)降低或阻斷信號(hào)傳導(dǎo)途 徑或抗原，例如IL-21/IL-21R信號(hào)傳導(dǎo)途徑或IL-21R抗原的活性。術(shù)語(yǔ)“有效量”指足以調(diào)節(jié)IL-21R活性以改善或減輕臨床癥狀的嚴(yán)重程度或?qū)崿F(xiàn) 期望的生物學(xué)結(jié)果，例如降低T細(xì)胞和/或B細(xì)胞活性、遏制自身免疫、遏制移植排斥的劑
量或量。術(shù)語(yǔ)“人結(jié)合蛋白”包括具有基本上與本領(lǐng)域已知的人種系免疫球蛋白序列(包 括例如 Kabat 等(5th ed. 1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest， U. S. Department of Health and Human ServicesiNIH Publication No. 91 3242記載的) 對(duì)應(yīng)的可變和恒定區(qū)的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的人抗體可包括不是由人種系免疫球蛋白序列 編碼的氨基酸殘基(例如在體外通過(guò)隨機(jī)或定點(diǎn)誘變或在體內(nèi)通過(guò)體細(xì)胞突變引入的突 變)，例如在⑶R中，特別是在⑶R3在。人抗體中可以有至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、 或更多個(gè)位置被不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基替換。短語(yǔ)“抑制”、“拮抗”、“阻斷”、或“中和” IL-21R活性及其類似短語(yǔ)指IL-21R的至 少一種活性由于結(jié)合抗IL-21R抗體而降低、抑制、或以其它方式減弱，其中降低是相對(duì)于 IL-21R在該抗體缺失下的活性。IL-21R活性可使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)來(lái)測(cè)量。抑制或 拮抗不必指示完全消除IL-21R生物學(xué)活性?；钚缘慕档涂梢允羌s10^,20^,30^,40%, 50%，60%，70%，80%，90%，95%，或更多。術(shù)語(yǔ)“白介素-21受體”或“IL-21R”等等指結(jié)合IL-21配體的I類細(xì)胞因子 家族受體，也稱作MU-I (參見(jiàn)例如美國(guó)專利申請(qǐng)No. 09/569，384和美國(guó)申請(qǐng)公開(kāi)文本 No. 2004/0265960 ；2006/0159655 ；2006/0024268 ；和 2008/0241098) ,NILR 或 zalphall (參 見(jiàn)例如國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)號(hào) WO 01/085792 ；Parrish Novak 等 Q000) supra ;0zaki 等 QOOO) supra)。IL-21R與 IL-2 和 IL-15 受體分享的 β 鏈、和 IL-4 α 同源(Ozaki 等 Q000) supra)。 在配體結(jié)合時(shí)，IL-21R能夠與共同伽馬細(xì)胞因子受體鏈(Yc)相互作用并誘導(dǎo)STATl和 STAT3(Asao 等 Q001) supra)或 STAT5 (Ozaki 等 Q000) supra)磷酸化。IL-21R 顯示廣泛 的淋巴樣組織分布。術(shù)語(yǔ)“白介素-21受體”或“IL-21R”等等還指能夠與IL-21 (優(yōu)選哺乳 動(dòng)物起源的IL-21，例如鼠或人IL-21)相互作用且具有至少一項(xiàng)下述特征的多肽(優(yōu)選哺 乳動(dòng)物起源的，例如鼠或人IL-21R)或(在上下文需要時(shí))編碼此類多肽的多核苷酸(1) 天然發(fā)生的哺乳動(dòng)物IL-21R多肽的氨基酸序列或其片段，例如SEQ ID N0:2(人-對(duì)應(yīng)于 GENBANK (U. S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda,MD)登錄號(hào) NP_068570) 或SEQ ID NO :4(鼠-對(duì)應(yīng)于GENBANK .登錄號(hào)NP_068687)所列氨基酸序列或其片段； (2)與SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 4所列氨基酸序列或其片段基本上同源例如至少85%， 90 %，95%，98%，或99%同源的氨基酸序列；C3)由天然發(fā)生的哺乳動(dòng)物IL-21R核苷酸序 列或其片段(例如SEQ ID NO :1(人-對(duì)應(yīng)于GENBANK 登錄號(hào)NM_021798)或SEQ ID N0:3 (鼠-對(duì)應(yīng)于GENBANK 登錄號(hào)NM_021887)或其片段)編碼的氨基酸序列；(4)由與SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :3所列核苷酸序列或其片段基本上同源例如至少85%，90%，95%， 98%，或99%同源的核苷酸序列編碼的氨基酸序列；( 由與天然發(fā)生的IL-21R核苷酸序 列或其片段例如SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :3或其片段簡(jiǎn)并的核苷酸序列編碼的氨基酸 序列；或(6)在嚴(yán)格條件(例如高嚴(yán)格條件)下與前述核苷酸序列之一雜交的核苷酸序列。 另外，涵蓋在所公開(kāi)的方法中有用的其它非人和非哺乳動(dòng)物IL-21R。術(shù)語(yǔ)“白介素-21 ”或“ IL-21，，指與IL-2、IL-4和IL-15顯示序列同源性 (Parrish-Novak等Q000) supra)且結(jié)合IL-21R的細(xì)胞因子。此類細(xì)胞因子分享共同的 折疊，折疊成該家族特征性的“四螺旋束”結(jié)構(gòu)。IL-21主要在活化的CD4+ T細(xì)胞中表達(dá)， 而且據(jù)報(bào)告對(duì) NK、B 和 T 細(xì)胞有效果(Parrish Novak 等(2000) supra ；Kasaian 等(2002) supra)。在IL-21結(jié)合至IL-21R時(shí)，IL-21R的活化引起例如STAT5或STAT3信號(hào)傳導(dǎo) (Ozaki等(2000) supra)。術(shù)語(yǔ)“白介素-21”或“ IL-21”還指能夠與IL-21R (優(yōu)選哺乳動(dòng) 物起源的，例如鼠或人IL-21R)相互作用且具有至少一項(xiàng)下述特征的多肽(優(yōu)選哺乳動(dòng)物 起源的，例如鼠或人IL-21)或(在上下文需要時(shí))編碼此類多肽的多核苷酸(1)天然發(fā) 生的哺乳動(dòng)物IL-21的氨基酸序列或其片段，例如SEQ ID NO :212 (人)所列氨基酸序列或 其片段；(2)與SEQ ID NO :212所列氨基酸序列或其片段基本上同源例如至少85%，90%， 95%，98%，或99%同源的氨基酸序列；C3)由天然發(fā)生的哺乳動(dòng)物IL-21核苷酸序列或其 片段(例如SEQ ID NO :211 (人)或其片段)編碼的氨基酸序列；⑷由與SEQ ID NO :211 所列核苷酸序列或其片段基本上同源例如至少85 %，90 %，95 %，98 %，或99 %同源的核苷 酸序列編碼的氨基酸序列；(5)由與天然發(fā)生的IL-21核苷酸序列或其片段簡(jiǎn)并的核苷酸 序列編碼的氨基酸序列；或(6)在嚴(yán)格條件(例如高嚴(yán)格條件)下與前述核苷酸序列之一 雜交的核苷酸序列。術(shù)語(yǔ)“IL-21R活性”等等(例如“IL-21R的活性”、“IL-21/IL-21R活性”)指因 IL-21R結(jié)合而發(fā)起或中斷的至少一種細(xì)胞過(guò)程。IL-21R活性包括但不限于(1)與配體 (例如IL-21多肽)相互作用(例如結(jié)合)；(2)聯(lián)合或活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(也稱作“信號(hào)傳導(dǎo)”， 指響應(yīng)特定刺激發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)級(jí)聯(lián))和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(例如伽馬鏈(Yc)和JAK1)，和/或 刺激STAT蛋白質(zhì)(例如STAT5和/或STAT3)的磷酸化和/或活化；及( 調(diào)控免疫細(xì)胞 (例如T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和巨核細(xì)胞)的增殖、分化、 效應(yīng)器細(xì)胞功能、細(xì)胞溶解活性、細(xì)胞因子分泌、和/或存活。如本文中使用的，“體外生成的抗體”指如下的抗體，其中整個(gè)或部分可變區(qū)(例如 至少一個(gè)CDR)是在非免疫細(xì)胞選擇(例如體外噬菌體展示、蛋白質(zhì)芯片、或能對(duì)候選序列 測(cè)試它們結(jié)合抗原的能力的任何其它方法)中生成的。術(shù)語(yǔ)“分離的”指基本上不含其天然環(huán)境的分子。例如，分離的蛋白質(zhì)基本上不含 細(xì)胞材料或來(lái)自衍生它的細(xì)胞或組織來(lái)源的其它蛋白質(zhì)。該術(shù)語(yǔ)還指如下的制備物，其中 分離的蛋白質(zhì)對(duì)于藥物組合物是足夠純的，或者至少70-80% (w/w)純的、至少80-90% (w/ w)純的、至少 90-95% (w/w)純的、或至少 95%，96%，97%，98%，99%，或 100% (w/w)純 的。短語(yǔ)“百分比相同”或“百分比同一性”指至少兩種不同序列之間的相似性。此百 分比同一性可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)算法來(lái)確定，例如Altshul等((1990) J. Mol. Biol. 215 :403-10)記載的基本局部比對(duì)搜索工具(Basic Local Alignment Search Tool, BLAST) ；Needleman 等((1970) J. Mol. Biol. 48 :444-53)的算法；或 Meyers 等((1988) Comput. App 1. Biosci. 4 11-17)的算法。一組參數(shù)可以是Blosum 62評(píng)分矩陣及缺口罰分12、缺口延伸罰分4、 和移碼缺口罰分5。兩種氨基酸或核苷酸序列之間的百分比同一性還可以使用Meyers和 Miller ((1989) CABIOS 4 :11-17)的算法來(lái)確定，該算法已經(jīng)摻入ALIGN程序(2. O版)，使 用PAM120權(quán)重殘基表、缺口長(zhǎng)度罰分12、和缺口罰分4。百分比同一性通常通過(guò)比較相似 長(zhǎng)度的序列來(lái)計(jì)算。術(shù)語(yǔ)“全集(r印ertoire)”指完全或部分地自編碼至少一種免疫球蛋白的至少一 種序列衍生的至少一種核苷酸序列?？梢酝ㄟ^(guò)在體內(nèi)重排重鏈的V、D、和J區(qū)段及輕鏈的V 和J區(qū)段來(lái)生成序列。或者，可以自響應(yīng)例如體外刺激而發(fā)生重排的細(xì)胞生成序列?；蛘?， 可以通過(guò)DNA剪接、核苷酸合成、誘變、或其它方法來(lái)獲得部分或整個(gè)/所有序列(參見(jiàn)例 如美國(guó)專利No. 5，565，332)。全集可以只包括一種序列，或者可以包括多種序列，包括遺傳 上多樣的集合中的多種序列。術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”等等指兩個(gè)分子形成在生理?xiàng)l件下相對(duì)穩(wěn)定的復(fù)合物。特異 性結(jié)合以高的親和力和低至中的能力來(lái)表征，與通常具有低的親和力和中至高的能力的非 特異性結(jié)合區(qū)分開(kāi)。通常，當(dāng)結(jié)合常數(shù)Ka高于約IOl1iT1時(shí)，認(rèn)為結(jié)合是特異性的。如果 必要，通過(guò)改變結(jié)合條件，能降低非特異性結(jié)合且基本上不影響特異性結(jié)合。熟練技術(shù)人員 能使用常規(guī)技術(shù)來(lái)改進(jìn)適宜的結(jié)合條件，諸如結(jié)合蛋白的濃度、溶液的離子強(qiáng)度、溫度、容 許結(jié)合進(jìn)行的時(shí)間、封閉劑(例如血清清蛋白或乳酪蛋白)的濃度、等。本文中列出了例示 性的條件，但是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道的其它條件落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“嚴(yán)格”、“嚴(yán)格性”、等等描述用于雜交和清洗的條件。本發(fā) 明的分離的多核苷酸可用作雜交探針和引物來(lái)鑒定和分離具有如下序列的核酸，該序列與 編碼所公開(kāi)的多核苷酸的序列相同或相似。因此，以此方式分離得到的多核苷酸可用于生 成針對(duì)IL-21R的結(jié)合蛋白或鑒定表達(dá)此類結(jié)合蛋白的細(xì)胞。用于鑒定和分離核酸的雜交 方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) ,Southern雜交、原位雜交和Northern雜交，而且是本領(lǐng)域 技術(shù)人員公知的?？梢栽诰哂胁煌瑖?yán)格性的條件下實(shí)施雜交反應(yīng)。雜交反應(yīng)的嚴(yán)格性包括任意兩個(gè) 核酸分子會(huì)彼此雜交的難度和它們會(huì)保持雜交的條件。優(yōu)選的是，在低嚴(yán)格性條件、更優(yōu)選 嚴(yán)格條件、和最優(yōu)選高嚴(yán)格條件下，每個(gè)雜交的多核苷酸雜交至其對(duì)應(yīng)多核苷酸。嚴(yán)格條件 是本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的，而且可見(jiàn)于例如Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989)6.3. 1-6.3.6。含水的和不含水的方法均在此文獻(xiàn)中有記 載，而且均可使用。嚴(yán)格雜交條件的一個(gè)例子是在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中于約45°C 雜交，接著在0. 2X SSC/0. 1% SDS中于50°C清洗至少一次。嚴(yán)格雜交條件還可用在例如 0. 2X SSC/0. SDS中于551、601、或651清洗來(lái)實(shí)現(xiàn)。高嚴(yán)格條件包括例如在0. 5M磷 酸鈉/7% SDS中于65°C雜交，接著在0. 2X SSC/1 % SDS中于65 °C清洗至少一次。嚴(yán)格條 件的其它例子顯示于下文表1 高嚴(yán)格條件指至少像例如條件A-F那樣嚴(yán)格的條件；嚴(yán)格條 件指至少像例如條件G-L那樣嚴(yán)格的條件；而低嚴(yán)格條件指至少像例如條件M-R那樣嚴(yán)格 的條件。表1 雜交條件
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權(quán)利要求
1.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60， 62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108， 110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146， 148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。
2.權(quán)利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是抗體。
3.權(quán)利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 ScFv0
4.權(quán)利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是VH。
5.權(quán)利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是VL。
6.權(quán)利要求1的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 CDR。
7.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼的 氨基酸序列:SEQ ID NO :13,15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47， 49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97， 99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133，135， 137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245，和 247。
8.權(quán)利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是抗體。
9.權(quán)利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 是 ScFv0
10.權(quán)利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是VH。
11.權(quán)利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是\。
12.權(quán)利要求7的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是CDR。
13.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含至少一種選自下組的氨基酸序列 SEQ ID NO 14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56， 58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104， 106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142， 144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242，244， 246，和 248。
14.權(quán)利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是抗體。
15.權(quán)利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是scFv。
16.權(quán)利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是VH。
17.權(quán)利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是八。
18.權(quán)利要求13的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片 段是CDR。
19.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基酸序列SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162-195，213-229，240，242，244，246，和 248，且其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的序列至少約95% 相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194，和195，那么該結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基 酸序列=SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165-168，171-193，213-229，240，242， 244，246，和 248。
20.一種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列編碼 的氨基酸序列:SEQ ID NO :5,7,9,11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41， 43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91， 93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131， 133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245， 和247，且其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種由與選自下組的序列至少約95% 相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID N0:5，7，9，和11，那么該結(jié)合蛋白或抗原 結(jié)合片段必須還包含至少一種由與選自下組的核苷酸序列至少約95%相同的核苷酸序列 編碼的氨基酸序列:SEQ ID NO :13,15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43， 45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93， 95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129，131，133， 135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，239，241，243，245，和，247。
21.權(quán)利要求19的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含至少一種選自下組的氨基酸序列 SEQ ID NO 6,8,10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50， 52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100， 102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138， 140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162-195，213-229，240，242，244，246， 和 248，其中，如果該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含至少一種與選自下組的序列至少約95% 相同的氨基酸序列=SEQ ID NO :6，8，10，12，163，164，169，170，194，和195，那么該結(jié)合蛋 白或抗原結(jié)合片段必須還包含至少一種與選自下組的氨基酸序列至少約95%相同的氨基 酸序列=SEQ ID NO :14,16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52， 54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，84，86，88，90，92，94，96，98，100，102， 104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140， 142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，165—168，171—193，213—229，240，242， 244，246，和 248。
22.—種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該重鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO 14,16，18，20，68，70，72，88，90，92，94，213，218，219，240，和 242。
23.—種結(jié)合IL-21R的分離的結(jié)合蛋白或其抗原結(jié)合片段，其中該結(jié)合蛋白或其抗 原結(jié)合片段包含輕鏈和重鏈，且其中該輕鏈包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO :22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，74， 76,78,80,82,84,86,96,98,100，102，104，106，108，214-217，220-229，244，246，和 248。
24.權(quán)利要求22的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含 Vl域和Vh域，且其中該Vh域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =14,16,18, 和20。
25.權(quán)利要求23的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段包含 Vl域和Vh域，且其中該VL域包含至少一種選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO =22,24,26, 28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，215，217，221，223， 225，227，和 229。
26.權(quán)利要求22或23的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈包含選自下組的氨基 酸序列=SEQ ID NO :88，90，92，94，213，218，219，240，和對(duì)2，且所述輕鏈包含選自下組的氨 基酸序列:SEQ ID NO :96,98,100，102，104，106，108，214，216，220，222，224，226，228，244， 246，和 248。
27.一種結(jié)合受選自下組的結(jié)合蛋白識(shí)別的IL-21R表位的分離的結(jié)合蛋白或其抗原 結(jié)合片段AbA-AbW，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和L23-L25，其中該結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段 競(jìng)爭(zhēng)性抑制選自下組的結(jié)合蛋白對(duì)人IL-21R的結(jié)合AbA-AbW，H3-H6，L1-L6，L8-L21，和 L23-L250
28.權(quán)利要求27的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，所述重鏈、輕 鏈、或Fv片段含有選自下組的氨基酸序列=SEQ ID NO 14，16，18，20，22，24，洸，28，30，32，.34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82， 84，86，88，90，92，94，96，98，100，102，104，106，108，110，112，114，116，118，120，122，124， 126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162， 165-168，171-193，213-229，240，242，244，246，和 248。
29.權(quán)利要求27的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，包含重鏈、輕鏈、或Fv片段，所述重鏈、輕 鏈、或Fv片段含有由選自下組的核苷酸序列編碼的氨基酸序列SEQ ID NO 13,15,17,19, 21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69， 71，73，75，77，79，81，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，107，109，111，113，115， 117，119，121，123，125，127，129，131，133，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153， 155，157，159，161，239，241，243，245，和 247。
30.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段對(duì)人IL-21R的結(jié)合常數(shù)為至少約IO5M4sA
31.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1.75nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的BaF3細(xì)胞增殖，且其中所述BaF3 細(xì)胞包含人IL-21R。
32.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約14. OnM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的TFl細(xì)胞增殖，且其中所述TFl 細(xì)胞包含人IL-21R。
33.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1.9nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的原代人B細(xì)胞增殖，且其中所述 B細(xì)胞包含人IL-21R。
34.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段以約1. 5nM或更少的IC5tl抑制IL-21介導(dǎo)的原代人CD4+細(xì)胞增殖，且其中所 述CD4+細(xì)胞包含人IL-21R。
35.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合與SEQ ID NO :2的至少100個(gè)連續(xù)氨基酸的任何序列至少約95% 相同的氨基酸序列。
36.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段抑制IL-21結(jié)合IL-21R。
37.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是IgGl。
38.權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是人的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
39.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
40.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
41.一種表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求40的核酸。
42.一種宿主細(xì)胞，其經(jīng)權(quán)利要求41的載體轉(zhuǎn)化。
43.權(quán)利要求42的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞、植 物細(xì)胞、或昆蟲(chóng)細(xì)胞。
44.一種診斷試劑盒，包含權(quán)利要求1，2，19，或20任一項(xiàng)的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。
45.權(quán)利要求19-38任一項(xiàng)的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是抗體。
46.權(quán)利要求19-38任一項(xiàng)的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是scFv。
47.權(quán)利要求19-38任一項(xiàng)的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是VH。
48.權(quán)利要求19-38任一項(xiàng)的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是\。
49.權(quán)利要求19-38任一項(xiàng)的分離的結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段，其中所述結(jié)合蛋白或 抗原結(jié)合片段是CDR。
全文摘要
本發(fā)明提供特異性結(jié)合人白介素-21受體(IL-21R)的結(jié)合蛋白及其抗原結(jié)合片段。該結(jié)合蛋白能起例如IL-21R活性拮抗劑的作用，由此調(diào)控一般而言的免疫應(yīng)答，及具體而言的由IL-21R介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。所公開(kāi)的組合物和方法可以例如在診斷和/或治療IL-21R相關(guān)病癥例如炎性病癥、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)、移植排斥、癌癥、和其它免疫系統(tǒng)病癥中使用。
文檔編號(hào)C07K16/28GK102105491SQ200980128968
公開(kāi)日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2009年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月23日
發(fā)明者尤利亞·武格梅斯特, 德博拉·A·揚(yáng), 戴維·洛, 維亞·瓦爾格-阿徹, 萊爾德·布盧姆, 達(dá)文德·吉爾 申請(qǐng)人:醫(yī)學(xué)免疫有限公司, 惠氏有限責(zé)任公司