專(zhuān)利名稱(chēng)：胰島成像用分子探針前體及其使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及胰島成像用分子探針前體及其使用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)在，日本的2型糖尿病推斷超過(guò)820萬(wàn)人并且持續(xù)增加。作為其對(duì)策，進(jìn)行以耐糖功能檢查為基準(zhǔn)的糖尿病發(fā)病前的介入，但不能得到充分的成果。作為其原因，在耐糖功能檢查中功能異常變得明顯的邊界型階段中，胰島的障礙已經(jīng)高度發(fā)展，作為開(kāi)始介入時(shí)期存在變遲的可能性。S卩，在糖尿病的發(fā)病過(guò)程中，由于胰島量(尤其是胰臟β細(xì)胞量)比耐糖功能異常先行減少，因此，在功能異常到達(dá)被檢出或自我感覺(jué)階段以后，糖尿病已經(jīng)進(jìn)入難以治療的階段。另一方面，如果能夠在早期發(fā)現(xiàn)胰島量和/或胰臟β細(xì)胞量的減少，則存在能夠預(yù)防、治療糖尿病的可能性。因此，為了進(jìn)行糖尿病的預(yù)防、診斷，非侵襲性的胰島成像技術(shù)、 尤其是用于測(cè)定胰島量和/或胰臟β細(xì)胞量的非侵襲性的胰島成像技術(shù)備受期待。其中， 特別期待能夠進(jìn)行胰島、優(yōu)選進(jìn)行胰臟β細(xì)胞成像的分子探針。作為用于將薄片切片進(jìn)行成像的分子探針，已知有GLP_1R(胰高血糖素樣肽-1受體)的配體之一的Exendin(9-39)。即，已知如果由小鼠尾靜脈投與125I標(biāo)記的 Exendin(9-39)，與其它臟器相比，向胰臟特異地選擇性地積聚，并且在胰臟中也與胰島選擇性地結(jié)合(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1 :E. Mukai et al. Non-invasive imaging of pancreatic islets targeting glucagon—like peptide—1 receptors,44thEASD Annual Meeting Rome 2008, abstract. Presentation No. 359[on line]。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題但是，以上述的125I標(biāo)記Exendin(9-39)進(jìn)行非侵襲的三維成像是困難的。因此， 本發(fā)明在于提供能夠進(jìn)行非侵襲的胰島三維成像的胰島成像用分子探針。用于解決課題的方法本發(fā)明涉及可以在胰島的成像中使用的分子探針的前體，包括如下多肽下述式(1) (12)的任一個(gè)所示的多肽，由下述式(1) (12)的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸而得到、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，或與下述式(1) (12)的多肽的氨基酸序列具有80%以上相同性、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，上述分子探針是在胰島的成像中使用的分子探針，
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*-dlskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (1)(序列編號(hào) 1)*-lskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (2)(序列編號(hào) 2)*-skqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (3)(序列編號(hào) 3)*-kqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (4)(序列編號(hào) 4)*-dlsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (5)(序列編號(hào) 5)
*-lsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (6)(序列編號(hào) 6)*-sk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (7)(序列編號(hào) 7)*-k*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (8)(序列編號(hào) 8)dlsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (9)(序列編號(hào) 9)lsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (10)(序列編號(hào) 10)sk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (11)(序列編號(hào) 11)k*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (12)(序列編號(hào) 12)上述式⑴ ⑶中，“*_”表示末端氨基利用保護(hù)基保護(hù)，上述⑴ (12)中， “K*”表示賴(lài)氨酸(lysine)的側(cè)鏈氨基利用保護(hù)基保護(hù)，"-NH2”表示C末端的羧基被酰胺化。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明的胰島成像用分子探針前體，例如，通過(guò)正電子發(fā)射斷層攝影法(pet) 等，胰島的成像、優(yōu)選胰島的三維成像、更優(yōu)選非侵襲的胰島成像成為可能。


圖1是表示實(shí)施例中的binding assay的結(jié)果的一個(gè)例子的圖。圖2是表示本發(fā)明的分子探針的體內(nèi)分布的經(jīng)時(shí)變化的結(jié)果的一個(gè)例子的圖。圖3是表示使用本發(fā)明的分子探針的體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一個(gè)例子的圖。圖4是表示本發(fā)明中的胰島成像(pet)的結(jié)果的一個(gè)例子的圖。圖5是表示本發(fā)明的分子探針的體內(nèi)分布的經(jīng)時(shí)變化的結(jié)果的其它例子的圖。圖6是表示本發(fā)明中的胰島成像(pet)的結(jié)果的其它例子的圖。圖7是表示本發(fā)明的分子探針的體內(nèi)分布的經(jīng)時(shí)變化的結(jié)果的一個(gè)例子的圖。圖8是表示使用本發(fā)明的分子探針的體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果的其它例子的圖。
具體實(shí)施例方式目前，已知有以Bolton-Hunter標(biāo)記法標(biāo)記的125I標(biāo)記Exendin(9-39)(例如，商品名NEX335，Perkinelmer公司生產(chǎn))。但是，125I標(biāo)記Exendin (9-39)以非侵襲進(jìn)行三維成像是困難的，對(duì)人的胰島進(jìn)行成像而定量在技術(shù)上是困難的。另外，如上所述，已知125I標(biāo)記的Exendin (9-39)，相比于其它臟器，向胰臟特異地選擇性積聚，并且，在胰臟中也與胰島選擇性結(jié)合(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1)，但例如在進(jìn)行由正電子發(fā)射核素產(chǎn)生的標(biāo)記時(shí)是否也顯示同樣的舉動(dòng)仍不清楚。本發(fā)明是基于如下見(jiàn)解作出的如果在來(lái)自Exendin(9-39)的多肽的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基或n末端氨基標(biāo)記正電子發(fā)射核素，則例如通過(guò)正電子發(fā)射斷層攝影法(pet)能夠非侵襲地進(jìn)行胰島的三維成像，并且能夠確保定量性。即，本發(fā)明優(yōu)選實(shí)現(xiàn)使胰島的非侵襲三維成像成為可能的效果。另外，本發(fā)明優(yōu)選實(shí)現(xiàn)能夠進(jìn)行胰島定量用成像的效果，更優(yōu)選發(fā)揮同時(shí)實(shí)現(xiàn)以往是困難的胰島定量用成像和胰島非侵襲的三維成像的效果。根據(jù)本發(fā)明，胰島的三維成像成為可能，并且，分子探針的核素結(jié)合部位為一個(gè)部位，因此，優(yōu)選胰島量的測(cè)定成為可能。另外，根據(jù)本發(fā)明，非侵襲的成像成為可能，因此，優(yōu)選在人的檢查和診斷中也能夠適用。即，根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選基于胰島量的測(cè)定的糖尿病的預(yù)防、治療、診斷方法成為可能。另外，如上所述，在糖尿病的發(fā)病過(guò)程中，已知耐糖功能異常先行，胰島量減少。因此，由于通過(guò)進(jìn)行胰島成像和/或胰島量的測(cè)定，例如，在糖尿病的發(fā)病前和初期狀態(tài)，能夠發(fā)現(xiàn)胰島的微小變化，因此，糖尿病的超早期發(fā)現(xiàn)、診斷成為可能。因此，本發(fā)明的胰島成像用分子探針的前體，在糖尿病的早期發(fā)現(xiàn)、診斷、優(yōu)選在糖尿病的超早期發(fā)現(xiàn)、診斷中有用。s卩，本發(fā)明涉及[1] 一種胰島成像用分子探針前體，包括如下多肽下述式(1) (12)的任一個(gè)所示的多肽，由下述式(1) (1 的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸而得到、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，或與下述式(1) (12)的多肽的氨基酸序列具有 80%以上相同性、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，上述分子探針是在胰島的成像中使用的分子探針，*-dlskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (1)(序列編號(hào) 1)*-lskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (2)(序列編號(hào) 2)*-skqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (3)(序列編號(hào) 3)*-kqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (4)(序列編號(hào) 4)*-dlsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (5)(序列編號(hào) 5)*-lsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (6)(序列編號(hào) 6)
*-sk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (7)(序列編號(hào) 7)*-k*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (8)(序列編號(hào) 8)dlsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (9)(序列編號(hào) 9)lsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (10)(序列編號(hào) 10)sk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (11)(序列編號(hào) 11)k*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (12)(序列編號(hào) i2)上述式⑴ ⑶中，“*_”表示末端氨基利用保護(hù)基保護(hù)，上述⑴ (12)中， “K*”表示賴(lài)氨酸(lysine)的側(cè)鏈氨基利用保護(hù)基保護(hù)，"-NH2”表示C末端的羧基被酰胺化；[2]可以在非侵襲性的胰島成像中使用的[1]所述的胰島成像用分子探針前體；[3]可以在用于定量胰島量的胰島成像中使用的[1]或[2]所述的胰島成像用分子探針前體；[4]可以在用于糖尿病的預(yù)防、治療或診斷的胰島成像中使用的[1] [3]中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體；[5] [1] [4]中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體，其中，N末端的氨基或賴(lài)氨酸被標(biāo)記化；
[6] [1] [5]中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體，其中，胰島成像利用正電子發(fā)射斷層攝影法(PET)進(jìn)行；[7] 一種胰島成像方法，包括將[1] [6]的任一項(xiàng)中所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)的步驟；[8] [7]所述的胰島成像方法，其中，還包括從使用上述分子探針的胰島成像的結(jié)果判斷胰島狀態(tài)的步驟；[9] 一種胰島量的測(cè)定方法，包括將[1] [6]中任一項(xiàng)中所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)而制備胰島成像用分子探針的步驟和從使用上述分子探針的胰島成像的結(jié)果算出胰島量的步驟；[10] 一種胰島成像用分子探針的制造方法，包括將[1] [6]中任一項(xiàng)中所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)的步驟；[11] [10]所述的制造方法，其中上述胰島成像用分子探針前體的標(biāo)記化是N末端的氨基或賴(lài)氨酸殘基的標(biāo)記化；[12] 一種用于制備胰島成像用分子探針的試劑盒，含有[1] [6]中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體；[13] 一種非侵襲性的胰島成像用分子探針，其是能夠通過(guò)[10]或[11]所述的制造方法得到的；[14] 一種糖尿病的診斷方法，包括將[1] W]中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)而制備胰島成像用分子探針的步驟，使用上述胰島成像用分子探針進(jìn)行胰島成像的步驟和基于得到的胰島圖像和/或胰島量判定胰島狀態(tài)的步驟；[15] [9]所述的胰島量的測(cè)定方法，還包括提示算出的胰島量的步驟。[胰島成像]本發(fā)明中，胰島成像是指胰島的分子成像(molecular imaging)，包括將體內(nèi)胰島的空間性和/或時(shí)間性分布圖像化。另外，從涉及糖尿病預(yù)防、治療、診斷的觀點(diǎn)出發(fā)，本發(fā)明中胰島成像優(yōu)選以胰臟β細(xì)胞為標(biāo)的分子。本發(fā)明中，從胰島量的定量性和在人體中使用的觀點(diǎn)出發(fā)，胰島成像還優(yōu)選為非侵襲性的三維的成像。作為成像的方法，只要是能夠非侵襲的胰島成像方法即可，沒(méi)有特別限制，例如，可以列舉利用正電子發(fā)射斷層攝影法 (PET)、單光子放射線計(jì)算機(jī)斷層攝影法(SPECT)等的方法。其中，從利用本發(fā)明的分子探針前體進(jìn)行胰島量定量的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選PET。[本發(fā)明的分子探針前體]本發(fā)明的分子探針前體是在胰島成像中使用的多肽，包括在上述式(1) (12)的任一項(xiàng)所示的多肽。上述式(1) (12)的多肽的氨基酸序列分別是在序列表的序列編號(hào) 1 12中所述的氨基酸序列。其中，在上述式⑴ ⑶的多肽的N末端氨基中，為了保護(hù)該氨基，結(jié)合有保護(hù)基。從與胰臟β細(xì)胞的結(jié)合性提高的觀點(diǎn)出發(fā)，上述式(1) (12)的多肽的C末端羧基利用氨基酰胺化。另外，在上述式(1)多肽的第19位、上述式O)多肽的第18位、上述式(3)多肽的第17位和上述式(4)多肽的第16位的賴(lài)氨酸(lysine)的側(cè)鏈氨基以及上述式(5)多肽的第4位、上述式(6)多肽的第3位、上述式(7)多肽的第2 位和上述式(8)多肽的第1位的賴(lài)氨酸(lysine)的側(cè)鏈氨基中，為了保護(hù)氨基，結(jié)合有保護(hù)基。因此，在將后述的氨基標(biāo)記化的標(biāo)記系統(tǒng)中，如果將包括上述式(1) (8)多肽的本
7發(fā)明的分子探針前體標(biāo)記化，則可以標(biāo)記化沒(méi)有結(jié)合保護(hù)基的賴(lài)氨酸的側(cè)鏈氨基。另外，在上述式(9)多肽的第4位和第19位、上述式(10)多肽的第3位和第18位、上述式(11)多肽的第2位和第17位以及上述式(12)多肽的第1位和第16位的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基中，為了保護(hù)氨基，結(jié)合有保護(hù)基。因此，在將后述的氨基標(biāo)記化的標(biāo)記系統(tǒng)中，如果將包括上述式 (9) (12)多肽的本發(fā)明的分子探針前體標(biāo)記化，則可以標(biāo)記化本發(fā)明的分子探針前體的 N末端的氨基。這里，上述式(1)(序列表的序列編號(hào)1)、上述式(5)(序列表的序列編號(hào)5)和上述式(9)(序列表的序列編號(hào)9)的氨基酸序列，除了 C末端的羧基利用氨基酰胺化和與保護(hù)基結(jié)合的氨基，與Exendin (9-39)的氨基酸序列一致。Exendin (9_39)已知與胰臟β細(xì)胞上表達(dá)的GLP-IR(胰高血糖素樣肽-1的受體)結(jié)合。將本發(fā)明的分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)得到的分子探針(以下，也稱(chēng)為“本發(fā)明的分子探針”)，也能夠優(yōu)選與胰臟β細(xì)胞結(jié)合。從容易對(duì)胰島進(jìn)行成像出發(fā)，本發(fā)明的分子探針前體的更優(yōu)選實(shí)施方式中，優(yōu)選在N末端一側(cè)的賴(lài)氨酸，即在相當(dāng)于序列編號(hào)5的第4位的賴(lài)氨酸殘基、序列編號(hào)6的第3 位的賴(lài)氨酸殘基、序列編號(hào)7的第2位的賴(lài)氨酸殘基、序列編號(hào)8的第1位的賴(lài)氨酸殘基的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基上結(jié)合用于保護(hù)氨基的保護(hù)基。因此，本發(fā)明的分子探針前體中，優(yōu)選C末端一側(cè)的賴(lài)氨酸，即優(yōu)選相當(dāng)于上述式(5)(序列編號(hào)幻的第19位的賴(lài)氨酸殘基、上述式 (6)(序列編號(hào)6)的第18位的賴(lài)氨酸殘基、上述式(7)(序列編號(hào)7)的第17位的賴(lài)氨酸殘基和上述式(8)(序列編號(hào)8)的第16位的賴(lài)氨酸殘基的賴(lài)氨酸被標(biāo)記化。從將胰島成像變得更容易出發(fā)，本發(fā)明的分子探針前體的更加優(yōu)選的實(shí)施方式中，更優(yōu)選在多肽中含有的全部賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基結(jié)合有用于保護(hù)氨基的保護(hù)基。因此，本發(fā)明的分子探針前體中，更優(yōu)選上述式(9)(序列編號(hào)9)的N末端氨基、上述式(10)(序列編號(hào)10)的N末端氨基、上述式(11)(序列編號(hào)11)的N末端氨基和上述式(12)(序列編號(hào) 12)的N末端氨基被標(biāo)記化。作為其它實(shí)施方式，本發(fā)明的分子探針前體是在胰島成像中使用的多肽，可以包括由上述式(1) (1 的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸的、在標(biāo)記化和去保護(hù)后與胰島結(jié)合的多肽。這里，所謂1 數(shù)個(gè)，能夠包括1 10、1 9、1 8、1 7、1 6、1 5、1 4、1 3、1 2和1個(gè)。該實(shí)施方式的本發(fā)明的分子探針前體中，是由上述式⑴ (8)的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸的多肽時(shí)，優(yōu)選包括利用保護(hù)基的N末端氨基的保護(hù)、C末端的羧基酰胺化，優(yōu)選含有1個(gè)被標(biāo)記化的賴(lài)氨酸(lysine)，還含有其它賴(lài)氨酸時(shí)，優(yōu)選其它賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基被保護(hù)基保護(hù)。另外，在是由上述式(9) (12)的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸的多肽時(shí)，優(yōu)選包括C末端的羧基酰胺化，另外，含有賴(lài)氨酸時(shí)，優(yōu)選賴(lài)氨酸的側(cè)鏈氨基被保護(hù)基保護(hù)，使得N末端氨基能被標(biāo)記化。另外，作為其它實(shí)施方式，本發(fā)明的分子探針前體還是在胰島成像中使用的多肽， 能夠包括具有與上述式(1) (1 的多肽的氨基酸序列80%以上相同性、在標(biāo)記化和去保護(hù)后與胰島結(jié)合的多肽。這里，上述相同性既可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員以通常使用的算法、例如BLAST或FASTA等算出的相同性，或者，也可以基于以進(jìn)行比較的2個(gè)多肽的同一氨基酸殘基數(shù)除以一個(gè)多肽全部長(zhǎng)度得到的數(shù)。上述相同性，能夠包括85%以上、90%以上、95% 以上。在該實(shí)施方式的本發(fā)明的分子探針前體中，為具有與上述式(1) (8)的多肽80%以上相同性的多肽時(shí)，優(yōu)選包括利用保護(hù)基的N末端氨基的保護(hù)、C末端羧基的酰胺化，含有1個(gè)被標(biāo)記化的賴(lài)氨酸(lysine)，還含有其它賴(lài)氨酸時(shí)，優(yōu)選其它賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基被保護(hù)基保護(hù)。為具有與上述式(9) (12)的多肽80%以上相同性的多肽時(shí)，優(yōu)選包括C末端的羧基酰胺化，另外，含有賴(lài)氨酸時(shí)，優(yōu)選賴(lài)氨酸的側(cè)鏈氨基被保護(hù)基保護(hù)，使得N末端氨基能被標(biāo)記化。本發(fā)明中，所謂能夠與胰島結(jié)合，從胰島量的定量性和檢查、診斷用途的觀點(diǎn)出發(fā)，本發(fā)明的分子探針優(yōu)選能夠與胰臟β細(xì)胞結(jié)合，更優(yōu)選至少在胰臟中特異與胰臟β細(xì)胞結(jié)合，更加優(yōu)選在人體內(nèi)與其它器官、組織信號(hào)不重合程度地特異結(jié)合。另外，本發(fā)明的分子探針前體，能夠通過(guò)按照確定方法的肽合成制造，該肽的合成方法沒(méi)有特別限制。如上所述，本發(fā)明的分子探針前體是在胰島成像中可以使用的分子探針前體，從人的檢查、診斷用途的觀點(diǎn)出發(fā)，可以?xún)?yōu)選在非侵襲性的胰島成像中使用，從同樣的觀點(diǎn)出發(fā)，可以?xún)?yōu)選在用于對(duì)胰島量進(jìn)行定量的胰島成像中使用。本發(fā)明的分子探針前體，還優(yōu)選可以在用于糖尿病的預(yù)防、治療或診斷的胰島成像中使用。這些胰島成像可以通過(guò)正電子發(fā)射斷層攝影法(PET)進(jìn)行。[保護(hù)基]本發(fā)明的分子探針前體中的保護(hù)基是在標(biāo)記化本發(fā)明的分子探針的特定氨基， 即，在將本發(fā)明的分子探針前體的特定賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基或本發(fā)明的分子探針前體的N末端氨基中保護(hù)其它氨基的基團(tuán)，可以使用實(shí)現(xiàn)那樣的功能的公知的保護(hù)基。作為上述保護(hù)基， 沒(méi)有特別限制，例如，可以列舉9-芴甲氧羰基(Fmoc)、叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)、 2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc)、烯丙氧基羰基(Alloc)等，從處理性方面出發(fā)，優(yōu)選Fmoc 和Boc。這些保護(hù)基的去保護(hù)方法，分別是公知的，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員就能夠適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行去保護(hù)。本發(fā)明的分子探針前體，可以在被標(biāo)記化的特定氨基，即本發(fā)明的分子探針前體的特定賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基或本發(fā)明的分子探針前體的N末端氨基，例如結(jié)合有氟代苯甲酰基 (FB)。另外，除此之外，本發(fā)明的分子探針前體，也可以在被標(biāo)記化的特定氨基，例如結(jié)合有能夠與金屬放射性同位素(金屬核素)結(jié)合的螯合部位和載持與肽結(jié)合的配體部。作為金屬核素，例如，可以列舉62Ciu64Ciu67fei、68(;a、82Rb、99mTC、mIn等。作為螯合化合物，例如，可以列舉二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、6_胼基吡啶-3-羧酸(HYNIC)、四氮雜環(huán)十二烷四乙酸 (DOTA)、二硫基縮氨基脲(DTS)、雙胺二硫酚(DADT)、巰基乙酰三甘氨酸(MAG3)、單酰胺單胺二硫醇(MAMA)、二酰胺二硫醇(DADS)、丙二胺肟(PnAO)等。[本發(fā)明的分子探針的制備方法]本發(fā)明的分子探針能夠通過(guò)將本發(fā)明的分子探針前體根據(jù)成像方法進(jìn)行標(biāo)記化， 此后，進(jìn)行保護(hù)基的去保護(hù)而制備。作為在標(biāo)記化中可以使用的核素，例如，可以列舉"C、 13N,150,18F.62Cu,64Cu,68Ga,82Rb等正電子發(fā)射核素、67Ga、99mTc、mh等單光子發(fā)射核素等。作為標(biāo)記化的程序，例如，可以列舉通過(guò)使用公知的方法，例如使用SFB (N-琥珀酰亞胺-4-氟苯甲酸酯，N-succinimidyl 4-fluorobenzoate)等的方法，在進(jìn)行 PET 時(shí)，將"C、150、18F 等正電子發(fā)射核素標(biāo)記化，在進(jìn)行SPECT時(shí)，將991(、111^等單光電子發(fā)射核素標(biāo)記化。另外， 使用金屬核素標(biāo)記化時(shí)，例如，可以列舉使用上述螯合化合物標(biāo)記化。如果以這些方法標(biāo)記
9上述式⑴ ⑶的多肽，則上述式⑴多肽的第4位、上述式⑵多肽的第3位、上述式 (3)多肽的第2位和上述式(4)多肽的第1位的賴(lài)氨酸(lysine)側(cè)鏈氨基一級(jí)上述式(5) 多肽的第19位、上述式(6)多肽的第18位、上述式(7)多肽的第17位和上述式⑶多肽的第16位的賴(lài)氨酸(lysine)側(cè)鏈氨基被標(biāo)記。另外，如果以該方法標(biāo)記上述式(9) (12) 的多肽，則上述式(9) (12)多肽的N末端的氨基被標(biāo)記。但是，本發(fā)明中的標(biāo)記化方法不限定于這些方法。標(biāo)記后的去保護(hù)，能夠以對(duì)應(yīng)于保護(hù)基種類(lèi)的公知的方法進(jìn)行。因此， 作為其它方式，本發(fā)明涉及本發(fā)明的分子探針的制造方法，包括將本發(fā)明的分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)的步驟。另外，本發(fā)明的分子探針的制造方法中，本發(fā)明的分子探針前體的標(biāo)記化優(yōu)選是N末端氨基的標(biāo)記化。作為其它方式，本發(fā)明還涉及能夠利用本發(fā)明的分子探針的制造方法得到的非侵襲性的胰島成像用分子探針。根據(jù)本發(fā)明的胰島成像用分子探針，能夠進(jìn)行非侵襲的胰島三維成像。本發(fā)明的分子探針，例如，可以結(jié)合有62Ciu64CiuOTGa、68(ia、82Rb、99mTC、mh等金屬核素和11C^l15CK18F等核素。另外，本發(fā)明的分子探針，也可以在特定的氨基，結(jié)合有例如結(jié)合在上述金屬核素的上述螯合化合物和載持有結(jié)合金屬核素的螯合部位與肽的結(jié)合的配體部。[成像方法]作為其它方式，本發(fā)明還涉及包括將本發(fā)明的分子探針前體標(biāo)記化，此后，將保護(hù)基去保護(hù)的步驟的胰島成像方法。本發(fā)明的胰島成像方法，可以包括使用本發(fā)明的分子探針對(duì)胰島進(jìn)行成像的步驟。從檢查、診斷用途的觀點(diǎn)出發(fā)，本發(fā)明的胰島成像方法優(yōu)選是胰臟β細(xì)胞的成像方法。關(guān)于前體的標(biāo)記化和去保護(hù)如上所述，關(guān)于胰島成像也如上所述。 另外，本發(fā)明的胰島成像方法，還可以包括從使用上述分子探針的胰島成像的結(jié)果判斷胰島的狀態(tài)的步驟。從使用分子探針的胰島成像的結(jié)果判斷胰島的狀態(tài)的步驟，例如，包括通過(guò)解析胰島成像的圖像，判斷有無(wú)胰島、判斷胰島量的增減等。本發(fā)明的胰島成像方法，可以包括在對(duì)象中投與上述制備的本發(fā)明的分子探針的步驟和從分子探針的投與經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后進(jìn)行利用正電子發(fā)射斷層攝影法(PET)等方法的測(cè)定的步驟。在利用PET等的測(cè)定中，例如，包括圖像的攝影、胰島量的測(cè)定等。作為投與對(duì)象，可以列舉人和除人以外的哺乳類(lèi)。對(duì)對(duì)象的投與既可以是局部性的，也可以是全身性的。投與途徑能夠根據(jù)對(duì)象的狀態(tài)等適當(dāng)確定，例如，可以列舉向靜脈、動(dòng)脈、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)的注射或輸液等。本發(fā)明的分子探針優(yōu)選和載體同時(shí)投與。作為載體，例如可以使用水性溶劑和非水性溶劑。作為水性溶劑，例如，可以列舉磷酸鉀緩沖液、生理食鹽水、林格氏液、蒸餾水等。作為非水性溶劑，例如，可以列舉聚乙二醇、植物性油脂、乙醇、甘油、二甲基亞砜、丙二醇等。用于胰島成像或胰島量測(cè)定的本發(fā)明的分子探針用量，例如能夠?yàn)镮yg 以下。從投與到測(cè)定的時(shí)間，例如，能夠根據(jù)分子探針向胰島的結(jié)合時(shí)間、分子探針的種類(lèi)和分子探針的分解時(shí)間等適當(dāng)確定。[胰島量的測(cè)定方法]作為其它方式，本發(fā)明還涉及胰島量的測(cè)定方法，包括將本發(fā)明的分子探針進(jìn)行標(biāo)記化和去保護(hù)而制備本發(fā)明的分子探針的步驟和從使用分子探針的胰島成像的結(jié)果算出胰島量的步驟。本發(fā)明的胰島量的測(cè)定方法，可以包括使用制備的本發(fā)明的分子探針進(jìn)行胰島成像的步驟。關(guān)于標(biāo)記化和去保護(hù)如上所述，關(guān)于胰島成像也如上所述。從使用分
10子探針的胰島成像結(jié)果的胰島量算出，例如，能夠通過(guò)解析胰島成像的圖像等進(jìn)行。另外， 從成像的結(jié)果進(jìn)行成像對(duì)象物的定量，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員，則例如能夠使用校正曲線和適當(dāng)?shù)某绦蛉菀椎剡M(jìn)行。從檢查、診斷用途的觀點(diǎn)出發(fā)，本發(fā)明的胰島量的測(cè)定方法優(yōu)選是胰臟β細(xì)胞量的測(cè)定方法。另外，本發(fā)明的胰島量的測(cè)定方法，還可以包括提示算出的胰島量的步驟。算出的胰島量提示的步驟，例如，包含保存算出的胰島量的步驟或向外部輸出的步驟。向外部輸出，例如包括在控制器顯示或打印等。[糖尿病的預(yù)防、治療、診斷方法]作為其它方式，本發(fā)明還涉及糖尿病的預(yù)防、治療或診斷方法。本發(fā)明的糖尿病的預(yù)防、治療或診斷方法，具體而言，能夠包括將本發(fā)明的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)而制備胰島成像用分子探針的步驟，使用上述胰島成像用分子探針進(jìn)行胰島的成像的步驟，和基于得到的胰島圖像和/或胰島量判斷胰島的狀態(tài)而進(jìn)行糖尿病的診斷的步驟，包括基于上述診斷預(yù)防或治療糖尿病的步驟。如上所述，在糖尿病的發(fā)病過(guò)程中，胰島量(尤其是胰臟β細(xì)胞量)耐糖功能異常先行減少，但進(jìn)入功能異常被檢出、自我感覺(jué)階段以后，糖尿病已經(jīng)進(jìn)入難以治療的階段。但是，根據(jù)使用本發(fā)明的分子探針前體的成像方法和/或胰島量的測(cè)定方法能夠早期發(fā)現(xiàn)胰島量和/或胰臟β細(xì)胞量的減少，進(jìn)而能夠構(gòu)筑新的糖尿病的預(yù)防、治療、診斷法。作為糖尿病的預(yù)防、治療、診斷的對(duì)象，可以列舉人和除人以外的哺乳類(lèi)。例如，本發(fā)明的糖尿病預(yù)防方法，能夠包括定期地進(jìn)行胰島量的測(cè)定、 檢查有無(wú)胰島量減少的傾向的步驟。另外，本發(fā)明的糖尿病治療方法，能夠包括著眼于胰島量的變化，評(píng)價(jià)對(duì)對(duì)象包含投藥和飲食療法的效果。另外，本發(fā)明的糖尿病診斷方法，能夠包括進(jìn)行胰島的成像或胰島量的測(cè)定，與作為基準(zhǔn)的大小或量的比較，或者判斷糖尿病的發(fā)病程度的步驟。作為其它優(yōu)選方式，本發(fā)明涉及糖尿病的超早期診斷方法。本發(fā)明的糖尿病的超早期診斷方法，例如，在短期綜合體檢、健康診斷中，利用本發(fā)明的方法進(jìn)行胰島成像和/ 或胰島量測(cè)定的步驟，和基于得到的胰島圖像和/或胰島量判斷胰島的狀態(tài)的步驟。另外， 本發(fā)明的糖尿病的治療方法，能夠包括由本發(fā)明的方法進(jìn)行胰島成像的步驟和/或胰島量測(cè)定及基于得到的胰島圖像和/或胰島量、評(píng)價(jià)胰島的功能恢復(fù)的步驟。[試劑盒]作為其它方式，本發(fā)明還涉及含有本發(fā)明的分子探針前體試劑盒。作為本發(fā)明的試劑盒的實(shí)施方式，可以列舉用于制備本發(fā)明的分子探針試劑盒、用于進(jìn)行本發(fā)明的成像方法試劑盒、用于進(jìn)行本發(fā)明的胰島量測(cè)定方法試劑盒、本發(fā)明的糖尿病預(yù)防或治療或診斷試劑盒等。這些各實(shí)施方式中，優(yōu)選含有對(duì)應(yīng)于各種方式的使用說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明的試劑盒，例如，還能夠含有用于制備緩沖液、滲透壓調(diào)整劑等成分和注射器等在分子探針投與中使用的器具等。以下，使用實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受以下的實(shí)施例限定解釋。實(shí)施例[結(jié)合分析(binding assay)]首先，準(zhǔn)備3種分子探針前體(在序列編號(hào)1的第19位的賴(lài)氨酸殘基上結(jié)合有保護(hù)基的上述式(1)的分子探針前體、在序列編號(hào)5的第4位的賴(lài)氨酸殘基上結(jié)合有保護(hù)基的上述式(5)的分子探針前體和在序列編號(hào)9的第4位與第19位的賴(lài)氨酸殘基上結(jié)合有保護(hù)基的上述式(9)的分子探針前體)。另外，作為保護(hù)基，使用Fmoc。另外，各分子探針前體的C末端的羧基被酰胺化。接著，使上述分子探針前體QOO μ g)在硼酸鹽緩沖液(pH7. 8)中溶解，在其中加入[19F] SFB，將反應(yīng)溶液調(diào)整為pH8. 5 9. 0，進(jìn)行標(biāo)記化。此后，通過(guò)加入DMF、哌啶進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)，得到3種目的的分子探針X、Y和Z。具體而言，分子探針X是使用式(1)的分子探針前體得到的分子探針，是在序列編號(hào)1的氨基酸序列中在第4位的賴(lài)氨酸側(cè)鏈上結(jié)合[19F]氟代苯甲?；褻末端的羧基被酰胺化的分子探針，分子探針Y是使用上述式(5) 的分子探針前體得到的分子探針，是在序列編號(hào)5的氨基酸序列中在第19位的賴(lài)氨酸殘基上結(jié)合[19F]氟代苯甲?；褻末端的羧基被酰胺化的分子探針。分子探針Z是使用上述式(9)的分子探針前體得到的分子探針，是在第9位的氨基酸序列中，在N末端的氨基上結(jié)合[19F]氟代苯甲酰基且C末端的羧基被酰胺化的分子探針。接著，將從小鼠分離的胰島分散成為單一細(xì)胞，以成為1. 7Χ IO5個(gè)/樣品的方式準(zhǔn)備。在制備的細(xì)胞中添加含有以Bolton-Hunter標(biāo)記法標(biāo)記的125I標(biāo)記Exendin (9-39)的溶液，使得 125I 標(biāo)記 Exendin (9-39)的最終濃度為 0. 1 μ Ci (0. 045pmol :0. 153ng/100 μ 1)。 接著，在添加有125I標(biāo)記Exendin的細(xì)胞中，分別添加含有制備的分子探針Χ、Υ和Z的試劑 (各分子探針的最終濃度1Χ10_6 1Χ10_12Μ)，在室溫孵育1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾停止反應(yīng)， 使用液體閃爍計(jì)數(shù)儀進(jìn)行放射能的測(cè)定。在圖IA C中表示其結(jié)果。圖IA C是表示以Sigma Plotll (商品名)解析的結(jié)果的一個(gè)例子的圖，圖IA 是分子探針X的結(jié)果的一個(gè)例子，圖IB是分子探針Y的結(jié)果的一個(gè)例子，圖IC是分子探針 Z的結(jié)果的一個(gè)例子。如圖IA C所示，分子探針X、Y和Z均依賴(lài)于濃度地抑制GLP-IR 和125I標(biāo)記Exendin (9-39)的結(jié)合。另外，分子探針X的IC5tl為2. 35 X 10_8M，分子探針Y的 IC50 為 2. 36 X 1(Γ8Μ，分子探針 Z 的 IC50 為 1. 5 X IO-9M0(實(shí)施例1)使用在序列編號(hào)1的N末端和第19位的賴(lài)氨酸殘基上結(jié)合保護(hù)基的上述式(1) 的本發(fā)明的分子探針前體，進(jìn)行小鼠的體內(nèi)分布測(cè)定和小鼠的三維胰島成像。首先，如以下地操作，制備本發(fā)明的分子探針。[分子探針的制備]使使用Fmoc作為保護(hù)基的上述式(1)的分子探針前體(500 μ g)在硼酸鹽 (pH7. 8)中溶解，在其中加入[18F]Sra，將反應(yīng)溶液調(diào)整為pH8. 5 9. 0，進(jìn)行標(biāo)記化。此后， 通過(guò)加入DMF、哌啶進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)，得到目的物(在序列編號(hào)1的第4位的賴(lài)氨酸殘基被標(biāo)記化的分子探針)。即，得到的分子探針是在序列編號(hào)1的氨基酸序列中，在第4位的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基上結(jié)合[18F]FB (氟代苯甲?；?且C末端的羧基被酰胺化的分子探針。[體內(nèi)分布]對(duì)無(wú)麻醉下的6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)，通過(guò)靜脈注射(尾靜脈)投與制備的分子探針(69 μ Ci)。在投與5分鐘后、15分鐘后、30分鐘后、60分鐘后、120分鐘后， 摘出各臟器(n =幻。測(cè)定各臟器的重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。在圖2中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。圖2A是表示向各臟器的分子探針?lè)e聚的經(jīng)時(shí)變化的圖，圖2B是將圖2A放大的圖。如圖2所示，本實(shí)施例中制備的分子探針向胰臟的積聚，在投與5分鐘后為4%dose/g，在投與15分鐘后為4. 9% dose/g，在投與30分鐘后為4. 7% dose/g。另外，本實(shí)施例中制備的分子探針，在投與5 40分鐘之間，在胰臟中比作為胰臟相鄰連接的臟器的胃和腸大量積聚，暗示可以得到充分對(duì)比度的PET圖像用于觀察。[體內(nèi)抑制試驗(yàn)]使用如上述操作制備的分子探針(在序列表的序列編號(hào)1的氨基酸序列中第4位的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基被標(biāo)記化且C末端的羧基被酰胺化的分子探針)，進(jìn)行體內(nèi)抑制試驗(yàn)。小鼠使用6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)。首先，對(duì)無(wú)麻醉下的小鼠，通過(guò)靜脈注射預(yù)投與(0. ImL的0. 5mg/mL)未被標(biāo)記化的Exendin(9-39)(低溫探針)制備的分子探針。在預(yù)投與30分鐘后，通過(guò)靜脈注射投與制備的分子探針(52 μ Ci)。從分子探針投與30分鐘后，摘出各臟器(n =幻。測(cè)定各臟器的重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。在圖3中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。作為對(duì)照，不預(yù)投與低溫探針，對(duì)無(wú)麻醉下的小鼠上通過(guò)靜脈注射投與制備的分子探針(52 μ Ci)。在投與30分鐘后，摘出各臟器(n =幻。測(cè)定各臟器的重量和放射能， 從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。將該結(jié)果的一個(gè)例子和預(yù)投與的結(jié)果一并在圖3中表示。圖3A是表示有預(yù)投與的積聚量(％ dose/g)和對(duì)照的積聚量(％ dose/g)的圖，圖 3B是表示伴隨預(yù)投與低溫探針的抑制率(={(有預(yù)投與的積聚量)_(對(duì)照的積聚量)}/ (對(duì)照的積聚量)X100)積聚量的圖。如圖3A和圖;3B所示，通過(guò)預(yù)投與低溫探針而抑制向受體的結(jié)合，觀察到在胰臟中的制備的分子探針的攝入約15%被抑制。[三維成像]對(duì)麻醉的6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)中通過(guò)靜脈注射投與制備的分子探針 (82 μ Ci)，以下述的PET裝置和條件進(jìn)行三維成像。攝像裝置=Explore Vista(商品名，GE公司生產(chǎn))攝像方法Static Scan三維重建2D0SEM(DynamicOS-EM)在圖4中表示其結(jié)果的一個(gè)例子。圖像是分子探針投與8分鐘后的圖像。圖4是三維成像的冠狀截面圖像(coronal view)，圖4A (累計(jì)運(yùn)算時(shí)間15分鐘)是小鼠整體(無(wú)切除)的圖像，圖4B(累計(jì)運(yùn)算時(shí)間10分鐘)是切除肝臟后的圖像，圖4C(累計(jì)運(yùn)算時(shí)間 10分鐘)是除了切除肝臟以外還切除腎臟后的圖像，圖4D(累計(jì)運(yùn)算時(shí)間15分鐘)是切除肝臟、腎臟、胃后的圖像。圖4的圖像都是同一個(gè)體的圖像。在圖4B D中的白點(diǎn)表示胰臟的位置。圖4A D的對(duì)比度是相同的。如圖4所示，使用本發(fā)明的分子探針前體，能夠進(jìn)行胰島的三維成像。另外，小鼠的情況下，如圖4A所示，肝臟和胰臟非常接近，另外，由于使用的PET的分解能力是1. 4mm， 因此，難以判斷胰臟的位置，但在人體的情況下，臟器本身的尺寸也大，臟器的位置也獨(dú)立。 因此，暗示如果是本發(fā)明的分子探針前體，能夠?qū)θ梭w進(jìn)行非侵襲的三維胰島成像。(實(shí)施例2)使用在序列編號(hào)5的N末端和第4位的賴(lài)氨酸殘基側(cè)鏈氨基上保護(hù)基結(jié)合的上述式(5)的本發(fā)明的分子探針前體，進(jìn)行小鼠的體內(nèi)分布測(cè)定和小鼠的三維胰島成像。首先，如以下地操作，制備本發(fā)明的分子探針。[分子探針的制備]使使用Fmoc作為保護(hù)基的上述式(5)的分子探針前體(500 μ g)在硼酸鹽緩沖液 (pH7. 8)中溶解，在其中加入[18F]Sra，將反應(yīng)溶液調(diào)整為pH8. 5 9. 0，進(jìn)行標(biāo)記化。此后， 通過(guò)加入DMF、哌啶進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)，得到目的物(在序列編號(hào)5的第19位的賴(lài)氨酸殘基被標(biāo)記化的分子探針)。即，得到的分子探針是在序列編號(hào)5的氨基酸序列中，在第19位的賴(lài)氨酸側(cè)鏈氨基上結(jié)合[18F]FB且C末端的羧基被酰胺化的分子探針。[體內(nèi)分布]對(duì)無(wú)麻醉下的6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)，通過(guò)靜脈注射(尾靜脈)投與制備的分子探針(67 μ Ci)。在投與5分鐘后、15分鐘后、30分鐘后、60分鐘后、120分鐘后， 摘出各臟器(n =幻。測(cè)定各臟器的重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。在圖5中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。圖5A是表示向各臟器的分子探針的積聚的經(jīng)時(shí)變化的圖，圖5B是將圖5A放大的圖。如圖5所示，本實(shí)施例中制備的分子探針向胰臟的積聚，投與5分鐘后為4% dose/g，投與15分鐘后為4. 1% dose/g，投與30分鐘后為3.9% dose/g。與實(shí)施例1中制備的分子探針(序列編號(hào)1的第4位的賴(lài)氨酸殘基被標(biāo)記化的分子探針)的體內(nèi)分布相比，本實(shí)施例中制備的分子探針(序列編號(hào)5的第19位的賴(lài)氨酸殘基被標(biāo)記化的分子探針)向在體內(nèi)分布中的肝臟的積聚變多，除了向作為胰臟相鄰連接臟器的胃和腸的積聚少以外，向胃和腸的積聚經(jīng)時(shí)變化也顯著變小。由此，暗示通過(guò)使用序列編號(hào)5的第19位的賴(lài)氨酸殘基被標(biāo)記化的分子探針，進(jìn)一步使用相當(dāng)于C末端一側(cè)的賴(lài)氨酸殘基的賴(lài)氨酸被標(biāo)記的分子探針，還能夠得到對(duì)比度高的PET圖像用于觀察胰島的可能性。[三維成像]對(duì)麻醉的7周齡ddy小鼠(雄性，體重32g)中通過(guò)靜脈注射投與本實(shí)施例中制備的分子探針(174 μ Ci)，以與實(shí)施例1同樣的條件進(jìn)行三維成像。在圖6中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。圖像是分子探針投與30分鐘后的圖像(累計(jì)運(yùn)算時(shí)間10分鐘)。圖6Α是三維成像的冠狀截面圖像(coronal view)，圖6B是三維成像的矢狀截面圖像(sagittal view), 圖6C是三維成像的橫軸截面圖像(transverse view)。在圖6A C中的白點(diǎn)表示胰臟的位置，在圖6C(橫軸截面圖像)中，在胰臟(白點(diǎn))的兩邊更白的臟器是腎臟。另外，圖6A C的對(duì)比度是同樣的。如圖6所示，通過(guò)使用上述式( 的本發(fā)明的分子探針前體，能夠明確地判斷非侵襲的胰臟位置。即，能夠通過(guò)本發(fā)明的分子探針前體進(jìn)行非侵襲的胰島三維成像。(實(shí)施例3)使用由在第4位和第19位的賴(lài)氨酸殘基、保護(hù)基結(jié)合且C末端的羧基被酰胺化的、序列編號(hào)9的多肽組成的上述式(9)的本發(fā)明的分子探針前體，如以下地操作制備本發(fā)明的分子探針。[分子探針的制備]使使用Fmoc作為保護(hù)基的上述式(9)的分子探針前體(500 μ g)在硼酸鹽緩沖液 (pH7. 8)中溶解，在其中加入[18F]Sra，將反應(yīng)溶液調(diào)整為pH8. 5 9. 0，進(jìn)行標(biāo)記化。此后， 通過(guò)加入DMF、哌啶進(jìn)行去保護(hù)反應(yīng)，得到目的物(在序列表的序列編號(hào)9的氨基酸序列中，
14N末端的氨基被標(biāo)記化的分子探針)。即，得到的分子探針是在序列編號(hào)9的氨基酸序列中在Ν末端的氨基上結(jié)合[18F]ra且C末端的羧基被酰胺化的分子探針。使用如上述地制備的分子探針，進(jìn)行小鼠的體內(nèi)分布測(cè)定和體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)。[體內(nèi)分布]對(duì)無(wú)麻醉下的6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)，由尾靜脈投與制備的分子探針 (13 μ Ci)。在投與5分鐘后、15分鐘后、30分鐘后、60分鐘后、120分鐘后，摘出各臟器(η =5)。測(cè)定各臟器的重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。在圖 7中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。圖7A是表示向各臟器的分子探針的積聚的經(jīng)時(shí)變化的圖，圖 7B是將圖7A放大的圖。如圖7所示，本實(shí)施例中制備的分子探針向胰臟的積聚，投與5分鐘后為5. 4% dose/g，投與15分鐘后為7. 2% dose/g，投與30分鐘后為9.0% dose/g，投與60分鐘后為 6.4% dose/g。另外，根據(jù)本實(shí)施例中制備的分子探針，大于5% dose/g的向胰臟的積聚被長(zhǎng)時(shí)間維持，特別是從投與后15分鐘至50分鐘期間，向胰臟的積聚大于7% dose/g。另外， 與實(shí)施例1的分子探針(圖2)和實(shí)施例2的分子探針(圖3)相比，在實(shí)施例3中制備的分子探針向胰臟的積聚最多。由此，N末端的氨基被標(biāo)記化的分子探針適合于PET圖像的攝像，暗示通過(guò)使用該分子探針得到對(duì)比度高的PET圖像用于觀察胰臟的可能性。[體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)]使用如上所述地制備的分子探針(在序列表的序列編號(hào)9的氨基酸序列中，N末端的氨基被標(biāo)記化，并且，C末端的羧基被酰胺化的分子探針)，進(jìn)行體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)。小鼠使用6周齡ddy小鼠(雄性，體重30g)。首先，通過(guò)靜脈注射對(duì)無(wú)麻醉下的小鼠上預(yù)投與(0. ImL的0. 5mg/mL)未被標(biāo)記化的Exendin (9-39)。在預(yù)投與30分鐘后，通過(guò)靜脈注射投與制備的分子探針(17 μ Ci)。在分子探針的投與30分鐘后，摘出各臟器(11 = 。測(cè)定各臟器重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。在圖8中表示該結(jié)果的一個(gè)例子。作為對(duì)照，不預(yù)投與低溫探針，對(duì)無(wú)麻醉下的小鼠通過(guò)靜脈注射投與制備的分子探針(17 μ Ci)。在投與30分鐘后摘出各臟器(n =幻。測(cè)定各臟器的重量和放射能，從每單位重量的放射能算出積聚量(％ dose/g)。將該結(jié)果的一個(gè)例子和預(yù)投與的結(jié)果一并在圖8中表示。圖8A是表示有預(yù)投與的積聚量(％ dose/g)和對(duì)照的積聚量(％ dose/g)的圖，圖 8B是表示伴隨預(yù)投與低溫探針的抑制率(={(有預(yù)投與的積聚量)_(對(duì)照的積聚量)}/ (對(duì)照的積聚量)X100)積聚量的圖。如圖8A和圖8B所示，通過(guò)預(yù)投與低溫探針而抑制向受體的結(jié)合，觀察到在胰臟中的制備的分子探針的攝入75%以上被抑制。因此，能夠確認(rèn)在序列表的序列編號(hào)9的氨基酸序列中N末端的氨基被標(biāo)記化且C末端的羧基被酰胺化的分子探針特異地?cái)z入到小鼠體內(nèi)的胰臟β細(xì)胞中。根據(jù)以上的結(jié)果，暗示如果是本發(fā)明的分子探針前體，則能夠在人體中非侵襲地進(jìn)行胰臟的三維成像，特別是進(jìn)行非侵襲的胰臟β細(xì)胞的三維成像。工業(yè)上的可利用性如以上所說(shuō)明地，本發(fā)明在例如醫(yī)療領(lǐng)域、分子成像領(lǐng)域、糖尿病相關(guān)領(lǐng)域等中有用。
序列表獨(dú)立文本序列編號(hào)1 12 本發(fā)明的分子成像前體的氨基酸序列。
權(quán)利要求
1.一種胰島成像用分子探針前體，其特征在于，包括如下多肽 下述式(1) (12)的任一個(gè)所示的多肽，由下述式(1) (12)的多肽缺失、添加或取代1 數(shù)個(gè)氨基酸而得到、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，或與下述式(1) (12)的多肽的氨基酸序列具有80%以上相同性、在標(biāo)記化和去保護(hù)后能夠與胰島結(jié)合的多肽，所述分子探針是在胰島的成像中使用的分子探針， *-dlskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(i)(序列編號(hào) 1)*-lskqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(2)(序列編號(hào) 2) *-skqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(3)(序列編號(hào) 3) *-kqmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (4)(序列編號(hào) 4) *-dlsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2(5)(序列編號(hào) 5) *-lsk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2(6)(序列編號(hào) 6) *-sk*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2(7)(序列編號(hào) 7)*-k*qmeeeavrlfiewlknggpssgappps-nh2 (8)(序列編號(hào) 8)dlsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(9)(序列編號(hào) 9)lsk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(io)(序列編號(hào) 10)sk*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2(11)(序列編號(hào) 11) k*qmeeeavrlfiewlk*nggpssgappps-nh2 (12)(序列編號(hào) i2)上述式(1) (8)中，“*-”表示末端氨基利用保護(hù)基保護(hù)，上述(1) (12)中，“k*” 表示賴(lài)氨酸(lysine)的側(cè)鏈氨基利用保護(hù)基保護(hù)，"-nh2”表示c末端的羧基被酰胺化。
2.如權(quán)利要求1所述的胰島成像用分子探針前體，其特征在于 在非侵襲性的胰島成像中使用。
3.如權(quán)利要求1或2所述的胰島成像用分子探針前體，其特征在于在用于定量胰島量的胰島成像中使用。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體，其特征在于 在用于糖尿病的預(yù)防、治療或診斷的胰島成像中使用。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體，其特征在于 n末端的氨基或賴(lài)氨酸被標(biāo)記化。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體，其特征在于 胰島成像利用正電子發(fā)射斷層攝影法(pet)進(jìn)行。
7.一種胰島成像方法，其特征在于包括將權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)的步驟
8.如權(quán)利要求7所述的胰島成像方法，其特征在于還包括從使用所述分子探針的胰島成像的結(jié)果判斷胰島的狀態(tài)的步驟。
9.一種胰島量的測(cè)定方法，其特征在于，包括將權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)而制備胰島成像用分子探針的步驟，和從使用所述分子探針的胰島成像的結(jié)果算出胰島量的步驟。
10.一種胰島成像用分子探針的制造方法，其特征在于包括將權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)的步馬聚ο
11.如權(quán)利要求10所述的制造方法，其特征在于所述胰島成像用分子探針前體的標(biāo)記化是N末端的氨基或賴(lài)氨酸殘基的標(biāo)記化。
12.—種試劑盒，其特征在于其是用于制備胰島成像用分子探針的試劑盒，含有權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體。
13.一種非侵襲性的胰島成像用分子探針，其特征在于 其是通過(guò)權(quán)利要求10或11所述的制造方法得到的。
14.一種糖尿病的診斷方法，其特征在于，包括將權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的胰島成像用分子探針前體標(biāo)記化和去保護(hù)而制備胰島成像用分子探針的步驟，使用所述胰島成像用分子探針進(jìn)行胰島成像的步驟，和基于得到的胰島圖像和/或胰島量判定胰島狀態(tài)的步驟。
15.如權(quán)利要求9所述的胰島量的測(cè)定方法，其特征在于 還包括提示算出的胰島量的步驟。
全文摘要
本發(fā)明提供胰島成像用分子探針前體，其是具有下述式(1)～(12)的任一個(gè)所示的多肽或與上述多肽具有相同性的多肽。*-DLSKQMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(1)，*-LSKQMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(2)，*-SKQMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(3)，*-KQMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(4)，*-DLSK*QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(5)，*-LSK*QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(6)，*-SK*QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(7)，*-K*QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(8)，DLSK*QMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(9)，LSK*QMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(10)，SK*QMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(11)，K*QMEEEAVRLFIEWLK*NGGPSSGAPPPS-NH2(12)。
文檔編號(hào)C07K14/00GK102159252SQ20098013683
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2009年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月20日
發(fā)明者豐田健太郎, 佐治英郎, 平尾佳, 木村寬之, 永川健兒, 稻垣暢也 申請(qǐng)人:國(guó)立大學(xué)法人京都大學(xué), 愛(ài)科來(lái)株式會(huì)社