專利名稱：環(huán)十一縮酚酸肽化合物及其作為藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系關(guān)于環(huán)十一縮酚酸肽化合物。本發(fā)明還涉及該化合物作為藥劑的用途， 尤其作為抗病毒劑，特別是在用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
C型肝炎病毒(HCV)是在約15年前由Choo及其同事(參見kience 244, (1989)， 359-362)克隆及定性。HCV屬于黃病毒科(Flaviviridae)，其包括一個(gè)外套核殼體，及一正極性的單股 RNA 基因體(參見 Bartenschlager et al. , Antiviral Res. 60, (2003)， 91-102)。HCV主要由血液、血液制品傳播，以及于懷孕期間的垂直傳播。采用診斷試劑以篩選血液制品已大幅降低新感染的比率。然而，HCV仍然為一個(gè)嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)問題。目前有大約1.7億人感染HCV。感染起初的進(jìn)程通常和緩。但是免疫系統(tǒng)時(shí)常無法清除此病毒，且長(zhǎng)期受感染的人會(huì)有高風(fēng)險(xiǎn)罹患肝硬化以及肝癌(見 Poynard et al.，Lancet 349，(1997)，825-832)?，F(xiàn)在沒有可用的疫苗，且治療的選項(xiàng)非常有限(見Marms et al.，Indian J. Gastroenterol. 20 (Suppl. 1), (2001), C47-51 ；Tan et al. , Nat. Rev. Drug Discov. 1, (2002) ,867-881)。已有人鑒別出強(qiáng)力結(jié)合于親環(huán)素(cyclophilin)的化合物，但這些化合物為免疫抑制性的(Nakagawa M et al. , Biochemical and biophysical research communications, Academic Press Inc. Orlando, FL, US, Vol. 313, N° 1,2 January2004, pages 42-47，XP004479114)。因此，在最近的20年間，已有人選行一些醫(yī)學(xué)化學(xué)研究以鑒別非免疫抑制性化合物例如OTM 811，或其它也呈現(xiàn)高效力于抑制HIV-I復(fù)制且基本欠缺免疫抑制活性的化合物，見 WO 00/01715 (ffenger et al. ； DEBIOPHARM SA) and Tetrahedron Lett. ,41, (2000), 7193-6。已有人發(fā)現(xiàn)結(jié)合于親環(huán)素的非免疫抑制性化合物對(duì)于C型肝炎病毒(HCV)具有抑制性作用。長(zhǎng)期受C型肝炎病毒感染已被鑒別是非A、非B型肝炎的主要成因，有人認(rèn)為其與肝臟疾病例如慢性肝炎、肝硬化或肝細(xì)胞癌密切相關(guān)。此類肝臟疾病的發(fā)展為一重要的公共衛(wèi)生問題。有效的抗HCV治療法，受限于以干擾素，或組合干擾素及利巴韋林 (ribavirin)治療。但是，由于以此類已知藥劑治療的HCV病人中的約半數(shù)，并未將此病毒消滅，故對(duì)于替代的抗HCV藥劑仍有強(qiáng)烈需求。從WO 2005/021028(Novartis Pharma GMBH)及 WO 2006/038088(DEBI0PHARM SA)，已知環(huán)i^一縮酚酸肽具有抑制C型肝炎病毒復(fù)制的性質(zhì)。Hanssons M J等人在Journal of Bioenergetics and biomembranes, plenum publishing, New York, NY, US, Vol.36, n° 4，1 August 2004，pages 407-413 (XP002330699)報(bào)告以 WO 2006/038088 所述化合物在mPT抑制方面有更好的效力。但是，盡管此類肽當(dāng)中的一些已在臨床實(shí)驗(yàn)階段，仍然需要
4開發(fā)在抑制尤其是HCV復(fù)制方面具有令人滿意的性質(zhì)而且有改善的藥物動(dòng)力學(xué)曲線(例如，肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(h印atic transporter)抑制曲線及結(jié)果的藥物交互作用)及改善的毒理學(xué)曲線(例如，非免疫抑制性活性，及得到的不利后果)的新的抗病毒劑。因此，本發(fā)明目的在于提供進(jìn)一步的非免疫抑制性化合物以供使用于預(yù)防或治療 C型肝炎感染或HCV引起的病癥。此類化合物具有出人意料的優(yōu)點(diǎn)，可減少關(guān)于抑制肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的潛在的不利作用或是關(guān)于抑制肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的潛在藥物間交互作用或甚至是兩者。此外，本發(fā)明的目的亦在于提供一種易于合成尤其是以產(chǎn)業(yè)規(guī)模合成的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種新的抗病毒劑，其具有上述改善的性質(zhì)，且令人意外的，已發(fā)現(xiàn)到前述需求已可由以式(I)表示之環(huán)十一縮酚酸肽化合物達(dá)成 Cyclo- (Axx1-Axx2-Axx3-Axx4-Axx5-Axx6-Axx7-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (I)1 2 3 4 5 6 7 89 10 11其中，AXX1 為 MeBmt、4-氟-MeBmt、二氫-MeBmt、8_ 羥基-MeBmt ；O-乙酰基-MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、ThHOCOOl2CH2CH2OH) Nva、5-羥基-Nva ；AXX3 為 D-MeAla、D_3_ 氟-MeAla、D-MeSer, D-MeSer (OAc) D-MeSer (O-CH2CH2OH)、 D-MeSer (OCH2CH2NEt2)、D-MeAsp (OMe)；AXX4為Melle、MeMet, MeMet (Ox)，Ox代表甲硫胺酸的硫原子為亞砜或砜、MeVal、 MeThr、MeThr (OAc)、MeThr (OtBu)、MeThr (OMe)、MeAla、Me11 e、MeThr、EtVal、Et11 e、EtPhe、 EtTyr、EtThr(OAc)、MeThr(OAc)、MeTyr、MeTyr(OAc)、MeTyr(OMe)、MePhe ；AXX5 為 Leu、Val、Ile、Ala ；AXX6 為 MeAla、Sar、MeLeu ；及AXX7 為 Gly、Ala。本發(fā)明另一目的在于提供一種藥物組合物供預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥，其包含式I的化合物，及一個(gè)或多個(gè)藥物學(xué)可接受的稀釋劑或載體。本發(fā)明又一目的在于提供一種藥物組合物，至少包含a)第一藥劑，其由式I的化合物或該藥物組合物組成；及b)第二藥劑，具有對(duì)抗HCV復(fù)制的性質(zhì)。依照式I的化合物，可用于制造治療或預(yù)防C型肝炎感染或HCV引起的病癥的藥劑。本發(fā)明又另一目的在于，提供一種方法供預(yù)防或治療需要的對(duì)象當(dāng)中的C型肝炎感染或HCV引起的病癥，其包含對(duì)于此對(duì)象給藥治療上有效量的依照本發(fā)明之式I的化合物或藥物組合物。本發(fā)明亦提供一種用于抑制需要的病患當(dāng)中的HCV復(fù)制的方法，包含對(duì)于此對(duì)象給藥治療上有效量之本發(fā)明之式I的化合物或藥物組合物。


為更好地了解本發(fā)明并了解如何作用，參照以下附圖示出本發(fā)明的特定實(shí)施例、方法及步驟。圖1顯示基于本發(fā)明的化合物的化學(xué)合成與基于WO 2006/038088的化合物即 [D-MeAla]3-[EtVal]4-CsA(Debio 025)的化學(xué)合成的比較。
具體實(shí)施例方式若沒有另外定義，所有在此使用的技術(shù)及科學(xué)用語(yǔ)是與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者通常理解的用語(yǔ)具有相同意義。即便與在此所述之方法及材料類似或均等者可用于實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，以下仍將敘述適當(dāng)?shù)姆椒安牧?。所有在此提及的出版物、專利申?qǐng)、專利及其它參考文獻(xiàn)完整納入于此作為參考。當(dāng)有抵觸時(shí)，以本發(fā)明說明書包含定義在內(nèi)為準(zhǔn)。此外，材料、方法及實(shí)施例僅為便于理解而非用于限制。此處使用之以下的定義是為了促進(jìn)更了解本發(fā)明。“包含”一般為包括之意，即容許存在一以上的特征或成分。本發(fā)明一個(gè)目的為提供一種式(I)的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，Cyclo- (Axx1-Axx2-Axx3-Axx4-Axx5-Axx6-Axx7-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (I)1234 5 6 789 10 11其中，AXX1 為 MeBmt、4-氟-MeBmt、二氫-MeBmt、8_ 羥基-MeBmt ；O-乙?；?MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、Thr (0C0CH2CH2CH20H)、Nva、5_ 羥基-Nva ；AXX3 為 D-MeAla、D_3_ 氟-MeAla、D-MeSer、D-MeSer (OAc)、D-MeSer (O-CH2CH2OH)、 D-MeSer (O-CH2CH2NEt2)、D-MeAsp (OMe)；AXX4 為 Melle、MeMet> MeVaU MeThr> MeThr (OAc)、MeAla、EtVaU Etlle、EtPhe> EtTyr、EtThr (OAc)、MeThr (OAc)、MeTyr、MeTyr (OAc)、MeTyr (OMe)、MePhe、MeMet (Ox)，其中， 甲硫胺酸的硫原子為亞砜或砜；AXX5 為 Leu、Val、Ile ；AXX6 為 MeAla、Sar> MeLeu ；且AXX7 為 Gly、Ala依照IUPAC認(rèn)可的定義，環(huán)縮酚酸肽為具有胺基及羥基羧酸殘基序列的天然或合成的化合物(通常為α -胺基酸及α -羥基酸)，且此類殘基連接于一環(huán)(參見IUPAC Compendium of Chemical Terminology, 2nd Edition (1997)。此環(huán)縮酚酸肽為雜環(huán)肽，其中至少有1個(gè)酰胺鍵被取代為酯鍵(見J. Peptide Sci. 10 :115-8(2004)).本發(fā)明的化合物包含11個(gè)殘基，10個(gè)為α-胺基酸，1個(gè)α-羥基酸。此α-羥基酸為0 -2-羥基-3-甲基丁酸，也稱為0-(1-羥基異戊酸，簡(jiǎn)寫為!《)-!1"-0!1。式(I) 中，此羥基酸位于第8位置。其于羧酸末端為一酰胺鍵鍵結(jié)于第9位置的α-胺基酸的胺基，BP, N-甲基-白胺酸，且于羥基末端為一酯鍵鍵結(jié)于第7位置的α -胺基酸的羧酸基， 即丙胺酸或甘胺酸。式⑴之α-胺基酸是以常用于稱呼胺基酸之3字母簡(jiǎn)稱記載，且除非特別指明， 其構(gòu)形為L(zhǎng)-構(gòu)形。殘基編號(hào)從AXX1開始，其代表N-甲基-GR) -4- [ (E) -2- 丁烯基]-4-甲基-L-蘇胺酸或Metot，且其結(jié)構(gòu)衍生物如上定義。當(dāng)烷基例如甲基Me或乙基肚出現(xiàn)在一胺基酸的簡(jiǎn)寫之前，代表此烷基系固定在該胺基酸殘基的胺基上。相較于先前技術(shù)所述的對(duì)應(yīng)的環(huán)十一肽化合物的規(guī)則環(huán)狀酰胺骨架，本發(fā)明的化合物的優(yōu)點(diǎn)在于，本發(fā)明化合物在巨大環(huán)狀骨架中的酯鍵。不受理論限制，據(jù)相信將第 7位置的胺基酸AXX7與第8位置的D-HIV間的酰胺取代為酯鍵會(huì)對(duì)于以下特性有強(qiáng)烈的作用構(gòu)造形態(tài)及物理化學(xué)特性例如增加構(gòu)造形態(tài)的柔軟性(于P. J.Flory，Statistical Mechanics of Chain Molecules, Hanser Publishers，NY，1988)，及親脂性，以及缺少氫捐出者鍵。據(jù)相信此類構(gòu)造特性使得本發(fā)明化合物比起源自環(huán)孢霉素A(CsA)的類似物類型，在物理化學(xué)、藥物動(dòng)力及生物學(xué)性質(zhì)上有顯著不同。在系統(tǒng)化的SAR研究中，觀察到的對(duì)于胺基酸取代的較高寬容度的可能理由是由于相關(guān)于生物活性構(gòu)造形態(tài)的構(gòu)造形態(tài)空間增加的緣故(V. Mikol et al.，J. Mol. Biol. (1998)283,451-461) 相對(duì)于先前技術(shù)的環(huán)i^一肽，US 5，116，816例2或WO 02/092033，例4，步驟4-1 觀察到于天然的環(huán)十一縮酚酸肽中，在第二位置的胺基酸與第7位置的胺基酸之間的片段的單一或多數(shù)取代會(huì)造成維持對(duì)于親環(huán)素的高結(jié)合能力，此也由符合本發(fā)明準(zhǔn)則的化合物列表證明。尤其相較于WO 2006/038088的化合物，S卩[D_MeAla]3-[EtVal]4-CsA(Debio 025)，觀察到本發(fā)明的化合物對(duì)于親環(huán)素A的結(jié)合親和力增加最多2-4個(gè)因子。除了改善的活性概況(參見實(shí)施例5及實(shí)施例6)，本新的化合物類型也提供改善的尤其是在產(chǎn)業(yè)規(guī)模的制備步驟。本發(fā)明也包含式I的化合物的化學(xué)改性，以延長(zhǎng)其循環(huán)的時(shí)間。具有此性質(zhì)的適當(dāng)?shù)木?乙二醇)衍生物的粒子，敘述于例如US 2005171328 (NEKTAR THERAPEUTICS AL CORP)或 US 6，713，454 (Ν0ΒΕΧ CORP)。更佳為，本發(fā)明的化合物以式(I)定義，其中，
AXX1 為 MeBmt、二氫-MeBmt、8_ 羥基-MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、Thr (0C0CH2CH2CH20H)、5-羥基-Nva ；AXX3 為 D-MeAla、D_3_ 氟-MeAla> D-MeSer > D-MeSer (OAc)、D-MeAsp (OMe)；AXX4為Me11 e、MeMet、MeMet (Ox) [Ox代表甲硫胺酸的硫原子為亞砜或砜]、 MeVal、EtVal、Etlie、MeTyr、MeTyr (OAc)、MeTyr (OMe)、MeThr、MeThr (OtBu)、MeThr (OAc)、 MeThr(OMe)、MePhe ；AXX5 為 Leu、Val、Ile、Ala ；AXX6 為 MeAla、Sar> MeLeu ；且AXX7 為 Gly、Ala更優(yōu)選為，式(I)的化合物定義為AXX1 為 MeBmt、8-羥基-MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、Thr (0C0CH2CH2CH20H)、5-羥基-Nva ；
AXX3 為 D-MeAla、D_3_ 氟-MeAla、D-MeSer > D-MeSer (OAc)、D-MeAsp (OMe)；AXX4 為 MeIle、MeMet、MeMet(0x)，其中，Ox 為-SOMe、-SO2Me、MeVal、EtVal、Etlie、 MeTyr ；及AXX5 為 Leu、Val、IleAXX6 為 MeAla、Sar> MeLeu ；及
AXX7 為 Gly、Ala在本發(fā)明一個(gè)特定的實(shí)施例中，式(I)的化合物定義為AXX1 為 MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr ；AXX3 為 D-MeAla ；AX)(4 為 MeIIe、MeVal、EtVal ；AXX5 為 Leu、Val、Ile ；AXX6 為 MeAla、MeLeu> Sar ；及AXX7 為 Gly、Ala依照本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選實(shí)施方式，式(I)的化合物以下列式描述cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal)(Ia)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Ile-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ic)cyclo- (MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal) (Id)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Val-MeAla-Ala-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal)(Ie)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal)(If)
cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-IIe-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ig)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ih)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-Melle-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ii)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-Sar-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ik)以上所列化合物符合本發(fā)明最重要準(zhǔn)則中的整體最優(yōu)化，亦即化學(xué)合成、藥理學(xué)性質(zhì)、藥物動(dòng)力學(xué)及毒理學(xué)曲線的改進(jìn)。尤其，此類化合物相較于Debio 025，在抑制肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白例如MRP2或0ATP1B1顯示出更低的效力。因此，可預(yù)期此類化合物會(huì)減少與抑制肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)的潛在不利效果 (例如，高膽色紅素血癥或潛在的藥物間交互作用(例如，與羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA) 還原酶抑制劑，例如阿伐他汀間的交互作用)，或甚至兩者都減少。其它本發(fā)明的化合物如下cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeThr(OtBu)-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)
cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-Sar-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cvc1ο-(MeBmt-Thr-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hi V-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-IIe-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeIIe-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeIIe-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-MeAla-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Leu-MeAla-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeThr-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)
cyclo-(MeBmt-Thr(OMe)-D-MeA1a~MeVa1-Leu-MeLeu-A1a-D-Hi v-MeLeu-Leu-MeVa1)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeTyr-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Leu-Sar-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Thr-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Ala-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-IIe-MeAla-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-Sar-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)其它感興趣的化合物，鑒別為以下所示cyclo-(MeBmt-Thr(OMe)-D-MeA1a-EtVa1-Leu-MeLeu-A1a-D-Hi v-MeLeu-Leu-MeVa1)cyclo- ((8-輕基)MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-(5-0H)Nva-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo- (MeBmt-Thr (OR) (R = -COCH3, -C0CH2CH2CH2-0H) -D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu -A1a-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVa1)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Val-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeSer-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo- (MeBmt-Abu-D-MeSer-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeSer(OAc)-MeVa1-Leu-MeLeu-G1y-D-Hi v-MeLeu-Leu-MeVa1)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAsp(OMe)-MeVa1-Leu-MeLeu-G1y-D-Hi v-MeLeu-Leu-MeVa1)cyclo- (MeBmt-Val-D- (3_ 氟)MeAla-MeVal-Leu-MeLeU"Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu_MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-(3_ 氟)MeAla-Melle-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeMet-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeMet (Ox) (Ox = -SOMe, -SO2Me) -Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeTyr(OR)(R = Ac, Me)-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeL eu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeThr(OR)(R = Me, Ac)-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeL eu-Leu-MeVal)cyclo- (MeBmt-Abu-D- (3_ 氟)MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtIIe-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo- ( 二氧)MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo- ((8_ 羥基)MeBmt-Abu-D-MeAla-EWal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)cyclo- ((8-羥基)MeBmt-Val-D-MeAla-EWal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)本發(fā)明的化合物可由應(yīng)用傳統(tǒng)的肽(溶液或固相肽合成；述于Houben-Wey 1， Methods of Organic Chemistry, Vol.E 22d, Ed. -in-Chief :M. Goodman, Thieme Verlag, Stuttgart, 2003)及有機(jī)化學(xué)或生物科技得到，例如應(yīng)用^fenger在Helv. Chim. Acta, 67, 502-25,1984或者在Helv. Chim. Acta, 66, 2672-702 (1983)中所記載的化學(xué)工具，并且采用2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N, N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)作為偶聯(lián)劑，如 Rich, D. H. et al, Comparative studies of the coupling of N-methylated,sterically hindered amino acid during SPPS，Tetr. Letters. 35，5981-5984 (1994)所記載。例如，一可能的常規(guī)性方案包括制備2個(gè)片段，即A片段及B片段，其中包含適當(dāng)?shù)臍埢乙曅枰m當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)性基及活化基，且于制備的最后步驟，將其等連結(jié)在一起以得到十一肽，然后將此十一肽環(huán)化成為環(huán)十一縮酚酸肽。例如，(Ax)片段可如下所示H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-AXX1-OH (Ax)(Bx)片段可如下所示H-AXX2-AXX3-AXX4-AXX5-AXX6-AXX7-OR, (R 為烷基)(Bx)，然后將 Ax 及 Bx 偶聯(lián)為 i^一縮酚酸肽 Ax-Bx，H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-AX)(1-AX)(2-AX)(3-AX)(4-AX)(5-AX)(6-AXX7-OR ( R =烷基，H)，最終階段為巨大內(nèi)酯化。A片段包括α-羥基酸殘基D-Hiv，可藉由降解天然環(huán)十一縮酚酸肽(即，cycl0-( MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)得到，該環(huán)^^一縮酚酸肽之制備，記述于US 5，116,816，例2，或WO 02/092033，例4，步驟4_1。本發(fā)明化合物相對(duì)于先前技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，不僅在于其活性概況(見實(shí)施例5及實(shí)施例6)，也在于其改進(jìn)的尤其在產(chǎn)業(yè)規(guī)模的制備步驟。1.以天然化合物(CsA R cyclo-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv -MeLeu-Leu-MeVal)作為起始，見圖1，環(huán)i^一縮酚酸肽類似物的整體產(chǎn)率> 50%，DEBIO 025 ([D-MeAla]3-[EtVall4-CsA 則為 20%，如 WO 2006/038088，DEBIOPHARM SA)。2.不需要合成昂貴的二肽衍生物BoC-D-MeAla-EtVal-0H(包括4個(gè)化學(xué)步驟)。 此外，有些化合物含有一 C-末端甘胺酸(la、Ic、If、Ig、Ii、讓)，其會(huì)促進(jìn)合成的最后步驟 (巨大內(nèi)酯化，無差向立體異構(gòu))。3.依照本發(fā)明化合物的情形，試劑其及起始化合物的成本低相當(dāng)多。尤其，CsA的開環(huán)反應(yīng)不需要使用梅爾魏因(Meerwein)試劑。4.可使用市售的起始化合物有效率地以固相合成得到B片段(六肽AXX2-AXX7) (見圖1)。5.于最優(yōu)化從天然起始化合物制備A片段以及縮合(A片段與B片段)、大環(huán)化及最終純化步驟，獲得藥理學(xué)關(guān)注的化合物的整體產(chǎn)率可至多達(dá)到80%。6.整體而言，于上列方面可達(dá)成良好功效及在尤其是以產(chǎn)業(yè)規(guī)模合成化合物的成本降低。本發(fā)明化合物抑制HCV復(fù)制的能力，顯示于復(fù)制子分析，且免疫抑制活性實(shí)質(zhì)上不存在系以T細(xì)胞增殖試驗(yàn)評(píng)估(見實(shí)施例5及實(shí)施例6)。依照本發(fā)明的“非免疫抑制性”化合物應(yīng)理解為一種化合物，其比起環(huán)孢霉素A的免疫抑制性至少小30倍(以此化合物之IC5tl (半最大抑制濃度)對(duì)環(huán)孢霉素A的IC5tl的比值決定(IC5tl化合物/IC5tlCsA))，較佳為小150倍，甚至小200倍，甚至更佳為小300倍。理想上，伴刀豆球蛋白-A-誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖試驗(yàn)，本發(fā)明的化合物于體外的非免疫抑制性活性與CsA至少有2個(gè)對(duì)數(shù)值的差距。因此，可考慮將本發(fā)明的化合物作為一藥劑，尤其是抗病毒劑，更具體而言，用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥。C型肝炎感染或HCV引起的病癥，例如慢性肝炎、肝硬化，或肝炎例如肝細(xì)胞癌。本發(fā)明的化合物也可用于例如作為對(duì)于由已感染HCV 的母親所生的新生兒或暴露于病毒環(huán)境的健康護(hù)理人員，或移殖的接受者例如器官或組織移殖例如肝臟移殖之接受者的預(yù)防性治療，以消除移殖后可能再發(fā)的HCV感染?！爸委煛敝钢委熜灾委熂邦A(yù)防性或防護(hù)性方法。需要治療者，包括已有此病癥以及欲預(yù)防此病癥者。因此，此處欲治療的哺乳動(dòng)物可為已被診斷為患有此病癥或亦受此病癥感染或易受影響者。治療用途中的“哺乳動(dòng)物“”意指分類為哺乳動(dòng)物的任意動(dòng)物，包括人、圈養(yǎng)及放養(yǎng)的動(dòng)物，或?qū)櫸锢绻?、馬、貓、牛、猴等。較佳為，該哺乳動(dòng)物為人類?！爸委熒嫌行Я俊币庵笇?duì)于治療一哺乳動(dòng)物中的疾病或病癥為有效的藥量。本發(fā)明的化合物可對(duì)于需要的病患例如以口服給藥，例如包在預(yù)先濃縮的微乳液中。本發(fā)明的化合物、其醫(yī)藥上可接受的鹽類及前體，若可應(yīng)用，可利用藥物組合物的形式給藥，其中，此藥物組合物中包含有醫(yī)藥上可接受的佐劑、稀釋劑或載體，以供預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥。本發(fā)明更提供一種藥物組合物，包含一本發(fā)明的化合物或如在此之前已定義的其醫(yī)藥上可接受鹽，以及醫(yī)藥上可接受的佐劑、稀釋劑或載體。適當(dāng)?shù)馁x形劑、稀釋劑及佐劑的參考文獻(xiàn)可采引述此類的標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)，例如〃 Comprehensive Medicinal Chemis-try" , Pergamon Press 1990 第 5 第第二 5· 2 章，及〃 Lexikon der Hilfsstoffe fiir Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete“ , H. P. Fiedler, Editio Cantor, 2002所記載的。本發(fā)明的化合物亦可包在例如以凝聚技術(shù)或界面聚合制備的微膠囊中，各例如羥基甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚_(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，于膠體藥物傳送系統(tǒng)(例如，微脂體、白蛋白微球體、微乳液、納米微粒及納米膠囊)，或于巨乳液。此種技術(shù)揭露在 Remington' s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol, A. Ed. (1980)。也可制備持續(xù)釋放制備物。持續(xù)釋放制備物的適當(dāng)例子，包括含有本發(fā)明化合物的固體疏水性聚合物的半可透基質(zhì)，此基質(zhì)系為成形物品的形式，例如薄膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子，包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)，或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國(guó)專利No. 3，773，919)、L-麩胺酸與麩胺酸乙酯之共聚物、非可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-甘醇酸共聚物例如用于制備 LUPRON DEPOT(TM)藥劑的物質(zhì)(注射用微球體，由乳酸-甘醇酸共聚物及醋酸亮丙瑞林 (leuprolide acetate)組成)，及聚 _D_(-) _3_ 羥基丁酸。本發(fā)明的每日劑量，視所治療之主體、特定投藥路徑以及所欲治療的病的嚴(yán)重程度及種類而必然不同。因此，最適劑量可由治療任一特定病患的醫(yī)師決定。本發(fā)明之藥物組合物，當(dāng)用于局部給藥，可配方為乳霜、凝膠、溶液、軟膏、懸浮液或硬膏等；當(dāng)用于吸入，可配方為例如氣溶膠或干燥粉末；當(dāng)用于口服給藥，可配方為例如錠劑、膠囊、凝膠、糖漿、懸浮液、溶液、粉末或顆粒；當(dāng)用于直腸或陰道給藥，可配方為例如栓劑；當(dāng)用于非經(jīng)口之注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、血管內(nèi)或輸液)可配方為無菌溶液、懸浮液或乳化液。
本發(fā)明的活性化合物可藉由任意已知路徑給藥。其可以非經(jīng)口路徑投藥，例如以注射溶液或注射儲(chǔ)存配方的形式。較佳者，以口服方式給藥，形式為飲用溶液或懸浮液、錠劑或膠囊。包含本發(fā)明之環(huán)十一縮酚酸肽化合物的口服給藥用的藥物組合物，記載于實(shí)施例中。如實(shí)施例所示，此類藥物組合物一般包含本發(fā)明之環(huán)十一縮酚酸肽化合物以及1種以上醫(yī)藥上可接受的載體物質(zhì)。一般而言，此類組成物系經(jīng)濃縮且在給藥前需要與適當(dāng)?shù)南♂寗├缢M合。非經(jīng)口給藥用的藥物組合物一般尚包含1種以上賦形劑?？蛇x用的賦形劑包括一等張劑、緩沖液或其它PH控制劑，以及一保存劑。此類賦形劑之添加可用于此組成物之維持及保持在較佳的PH范圍(約6. 5-7. 5)及容積滲透濃度(約300mOsm/ L)。其它用于口服給藥的實(shí)施例可見于美國(guó)專利Nos. 5，525，590及5，639，724，及美國(guó)專利 Appl. 2003/0104992。利用口服路徑，本發(fā)明的環(huán)十一縮酚酸肽化合物供每日至每周2次投藥的指示劑量，可從約lmg/kg至約100mg/kg，較佳為約lmg/kg至約20mg/kg。利用靜脈內(nèi)路徑，對(duì)應(yīng)的指示劑量可從約lmg/kg至約50mg/kg，較佳為約lmg/kg至約25mg/kg。本發(fā)明的環(huán)十一縮酚酸肽化合物的有效量，理解為當(dāng)對(duì)于需要治療HCV感染的病患在療程中反復(fù)投藥的量造成客觀的臨床反應(yīng)，例如，于此病患中的血清HCV力價(jià)在統(tǒng)計(jì)上有顯著降低或血清ALT活性顯著降低。當(dāng)臨床人員決定測(cè)試包含本發(fā)明化合物的藥物組合物對(duì)抗HCV感染的效力的測(cè)試劑量時(shí)，考慮許多因素。其中主要者為選用的本發(fā)明的環(huán)十一縮酚酸肽化合物的毒性及其半衰期。其它的因素，包括病患體重、年紀(jì)、及一般情形(包括重大的全身性或主要的疾病，包含代償機(jī)能減退的肝疾病、重度的先存在的骨髓功能低下及其它病毒性感染)、例如由血清丙胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平量指示的HCV感染的階段(急性對(duì)慢性)、HCV的特定基因型、先前對(duì)于HCV感染的治療法、在該病患中存在其它藥物等。治療療程需要重復(fù)給藥本發(fā)明的藥物組合物。一般而言，足夠藥量將每周給藥3 7次，并且治療期間約4周至6 個(gè)月，較佳為約4周至約12個(gè)月。治療可在確定血清中的HCV以及測(cè)量血清ALT水平量后進(jìn)行。治療的終點(diǎn)為開始治療后數(shù)個(gè)月后或完成治療后數(shù)個(gè)月，即在治療療程的終點(diǎn)，病毒性響應(yīng)不存在HCV。血清中的HCV可使用例如定量RT-PCR或北方墨點(diǎn)法于RNA層級(jí)測(cè)量， 或以酶免疫分析或增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光免疫分析病毒蛋白質(zhì)于蛋白質(zhì)層級(jí)測(cè)量。此終點(diǎn)也包括確定血清ALT水平量位于正常范圍。本發(fā)明之藥物組合物除了本發(fā)明的化合物，尚可包含1種以上對(duì)抗HCV感染的其它成分，例如其它的抗病毒藥物物質(zhì)，例利巴韋林或干擾素α。本發(fā)明的化合物與此種其它的活性成分可以同時(shí)給藥作為同藥物組成物的一部分，或可以分別給藥作為適當(dāng)?shù)耐端幉呗缘囊徊糠郑杂糜讷@得組合療法的益處。適當(dāng)?shù)耐端幉呗?、各劑投藥量，及各活性藥劑投藥間的特別的間隔，將視采用的活性藥劑的特別組合、預(yù)治療的病患的情形，以及其它在前面各項(xiàng)討論過的因素而定。此種額外的活性成分一般而言，給藥量小于或等于當(dāng)其為單一治療藥劑時(shí)有效的量。目前已有已通過美國(guó)食品藥物管理局(FDA)核可的供對(duì)于人類給藥的此種活性藥劑的核可劑量。本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)的成分給藥或與其它藥物一起給藥，例如與具有抗HCV 活性的藥物，例干擾素例如干擾素-α "2a或干擾素-α _2b，例如lntron A 、Roferon 、 Avonex Rebif 或Betaferon ，或結(jié)合于水溶性聚合物或人類白蛋白的干擾素，例如 Albuferon (Human Genome Science)，抗病毒劑例利巴韋林、拉米夫定、NV08或匪沘3，HCV編碼之蛋白質(zhì)例如NS3-4A絲胺酸蛋白酶、解旋酶或RNA聚合酶的抑制劑，或者此抑制劑的前體、抗纖維化劑例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊馬替尼，免疫調(diào)節(jié)劑例如霉酚酸，其鹽類或前體例如霉酚酸鈉或霉酚酸嗎啉乙酯，或SlP受體激動(dòng)劑例如FTY720， 或其類似物(選擇性地經(jīng)磷酸化)例如揭露于EP 627406AU EP 778263AU EP1002792AU WO 02/18395、WO 02/76995、WO 02/06268、JP2002316985、W003/29184、WO 03/29205、WO 03/62252及WO 03/62248者，完整納入于此作為參考。于特別的實(shí)施例中，本發(fā)明使用的例示干擾素選自由htron-A ；PEG-lntron Roferon ⑧；Pegasys ；BereforSumiferon ； lferon Infergen Alferon ⑧; Viraferon Albuferon (Human Genome Science) ；Rebif ；Omniferon ;0mega 構(gòu)成的群組中及其組合。干擾素結(jié)合于水溶性聚合物，系指尤其結(jié)合于聚氧化烯烴(polyalkylene oxide) 均聚物例如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物。就聚氧化烯烴系聚合物的替代選擇而言，可使用有效的非抗原性材料例如葡聚糖、聚乙烯基吡咯酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、碳水化合物類聚合物等之類。此種干擾素-聚合物結(jié)合物記載于 U. S. Pat. Nos. 4，766，106 ；4，917，888、European Patent Application No. O 236 987、European Patent Application No. O 510 356，及國(guó)際申請(qǐng)案公開號(hào) WO 95/13090。 因?yàn)榇司酆闲缘男揎棾浞纸档涂乖磻?yīng)，故外來的干擾素不需要完全為自體性的。用于制備聚合物結(jié)合物的干擾素可從哺乳動(dòng)物抽取物例如人、反芻動(dòng)物或牛干擾素制備，或以重組制造。其它形式的干擾素包括干擾素β、Y及τ ω，例如krono出品Rebif(干擾素 β la)、Viragen 出品 Omniferon(天然干擾素)，或 Boehringer Ingelheim 出品的 ω 干擾素?？诜蓴_素例如Amarillo Biosciences出品的口服干擾素α。較佳者為將干擾素結(jié)合于聚乙二醇，也稱為聚乙二醇干擾素。更優(yōu)選的干擾素結(jié)合物為聚乙二醇α-干擾素，例如聚乙二醇干擾素-a-2a、 聚乙二醇干擾素-α-2b;聚乙二醇復(fù)合干擾素或聚乙二醇純化干擾素-a制品。聚乙二醇干擾素-α "2a記載于例如European Patent 593，868且市售品為可得的，例如商品名 PEGASYS (Hoffmann-La Roche)。聚乙二醇干擾素-α-2b 記載于例如 European Patent 975，369且為市售可得的，例如商品名PEG-INTR0N A (Schering Plough)。聚乙二醇一致干擾素記載于WO 96/11953(完整引入于此作為參考)。較佳的聚乙二醇α-干擾素為聚乙二醇干擾素- a - 及聚乙二醇干擾素- α -2b。聚乙二醇一致干擾素亦為較佳。使用的助劑的每日劑量，視例如采用的化合物、主體、給藥模式以及欲治療的情況的嚴(yán)重程度而定。例如，拉米夫定每日給藥量可為lOOmg。聚乙二醇干擾素可以每周以非口服給藥1 3次，較佳為每周1次，總體的每周劑量在2至10百萬(wàn)IU的范圍，較佳為5至10百萬(wàn)IU，最佳為8至10百萬(wàn)IU。此可對(duì)應(yīng)于以每周1次、每周3次、每隔1天或每天的基準(zhǔn)，每周0. 5至2. O微克/公斤。在其它實(shí)施例中，此干擾素α為一聚乙二醇干擾素a-2a，且聚乙二醇干擾素 a -2a的給藥量為以每周1次、每周3次、每隔1天或每天為基準(zhǔn)，每周20至250微克/公斤。較佳為，每周1次以ISOug的量給藥干擾素peg-IFNda。一般用于治療HCV的抗病毒劑也包含在本發(fā)明的組合中。此藥劑包括有效于抑制在哺乳動(dòng)物中形成及/或復(fù)制病毒的化合物或生物分子。包括的藥劑例如ValeantPharmaceuticals, Inc. Costa Mesa, CA 出品的利巴韋林(1_ β _D_ 呋喃核糖基-1H-1，2， 4-三唑-3-羧酰胺)；Schering-Plough Corporation，Kenilworth，NJ 出品的 Rebetol ， 及Hoffmann-La Roche, Nut ley, NJ出品的Copegus Valeant研發(fā)中的利巴韋林類似物如左旋利巴韋林及Viramidine及咪唑立賓單磷酸鹽。此外，本發(fā)明的組合可更包含給藥基質(zhì)系HCV NS3-4A絲胺酸蛋白酶之蛋白酶抑制劑、非基質(zhì)系的NS3蛋白酶抑制劑；菲醌、四氫噻唑及苯甲酰苯胺等對(duì)于對(duì)抗HCV感染顯示活性者。治療HCV的蛋白酶抑制劑，揭露于例如美國(guó)專利No. 6，004, 933 (Spruce et al)；美國(guó)專利 No. 5，990，276 (Zhang et al)；美國(guó)專利 No. 5，538，865 (Reyes et al.)； WO 02/008251(Corvas International, Inc.), WO 02/08187 及 WO 02/008256 (Schering Corporation)；美國(guó)專利 Nos. 6，534，523，6，410，531 及 6，420，380 (Boehringer lngelheim) R WO 02/060926 (Bristol Myers Squibb) ；WO 02/48172and WO 02/18198(Schering Corporation) ；WO 02/48157 R WO 02/48116(Bristol Myers Squibb) ；WO 98/17679 (Vertex Pharmaceuticals)，均完整納入于此作為參照。 所示的非基質(zhì)基NS3蛋白酶抑制劑例如2，4，6-三羥基_3_硝基苯甲酰胺衍生物 (Sudo K. et al. , Biochemiscal and Biophysical Research Communications, 1997,238 643-647 ；Sudo K. et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy，1998，9，186)，可使用者包括 RD3-4082 及 RD3-4078。其它已顯示對(duì)于HCV療法為有效的實(shí)驗(yàn)性藥劑包括Boehringer Ingelheim出品的 HCV NS3-4A 絲胺酸蛋白酶抑制劑 BILN 2061、Vertex 出品的 VX-950、Schering-Plough 出品的 SCH-6、SCH-7 及 SCH-351633，及其它 GlaxoSmithKline、Bristol Myers Squibb、 Abbot、Roche、Merck、Pfizer及Gilead的處于臨床前開發(fā)或臨床開發(fā)的HCV蛋白酶抑制劑。其它目前在治療HCV的臨床開發(fā)中且在此處揭露之本發(fā)明組合中可能為有用的藥劑， 包括 TMC435350 (Tibotec)及 ITM-191 (Intermune)。核苷類似物也可使用。此種類似物之一例為Idenix出品的 telbivudine (US6444652、US6596700 及 W00196353)。也可使用 HCV NS5B RNA-依存性 RNA 聚合酶的核苷或非核苷抑制劑例如2' -C-甲基-3' -0-L-纈草胺酸酯呋喃核糖基胞核苷 _83，Idenix)，如揭露于 WO 2004/002422 者。也可使用揭露于 W001/90121 and WO 01/92282 (Idenix Pharmaceuticals)的分支核苷。此類國(guó)際專利申請(qǐng)案的內(nèi)容完整引入于此作為參照。其它的治療性化合物可包括目標(biāo)為對(duì)抗HCV基因體的反義分子，或互補(bǔ)于HCV基因體的任一部分的反義序列，以增進(jìn)治療效果。同樣被預(yù)期的是在HCV生命周期中的其它標(biāo)靶，例如Celgosivir (MBI3253)， 為Migenix出品的一糖蛋白處理抑制劑，Trimeris出品的融合抑制劑、Achillion出品的ACH-0137171。受體促效劑例如類鐸受體(toll like rec印tor，TLR)促效劑，包括 Anadys 出品的 ANA245、ANA971、ANA975 (US 5041426,4880784) ；CpG-IOlOla TLR-9 促效劑(Coley Pharmaceuticals) ；IMPDH抑制劑、霉酚酸、其鹽或前體霉酚酸鈉或霉酚酸嗎啉乙酯，或 Merimebodib (VX-497，Vertex 出品)；胸腺肽 α-1 (Zadaxin 或其組合，SciClone 出品)；SCV-07 (SciClone)、Belerofon (改良的 IFN-α，Nautilus 出品)；NABI 出品的
14CIVACIR (C型肝炎免疫球蛋白)，或SlP受體促效劑例如FTY720或其類似物(選擇性經(jīng)磷酸化)例如揭露于 EP 627406AUP 778263AUEP 1002792AUW0 02/18395、WO 02/76995、 WO 02/06268,JP2002316985,WO 03/29184,WO 03/29205,WO 03/62252 及 WO 03/62248 者， 此類揭露完整納入于此作為參照；3MPharmaceuticals出品的Resiquimod[VML 600]，一種咪喹莫特類似物其為干擾素及其它細(xì)胞素的有效引發(fā)劑。此外，本發(fā)明的化合物可以組合介白素-IO(Schering-Plough)、Endo Labs Solvay 出品的 AMANTADINE(Symmetrel)、 Idun Pharma 出品的 caspase 抑制劑 IDN-6556、Chiron 出品的 HCV/MF59、Maxim 出品的 CEPLENE (組織胺二氯化物)、Idun PHARM 出品的 IDN-6556、T67、Tularik 出品的 β -微管蛋白抑制劑、Fujisawa Healthcare 出品的 FK788、IdBI 016 (Siliphos, oral silybin-phosphatidyl choline phytosome)、Immtech 出品的 Dication、Aethlon Medical 出品的 hemopurifier、United Therapeutics 出品的 UT 231 B ；Bayer 出品的 HepeX-C SMU PPV0-Bay55-8800(Parapoxvirus ovis) ;Angion 出品的 Refanalin(HGF mimetic)、R803 (Rigel)、JTK-003、JTK-002，及 JTK-109 (均為 Japan Tobacco 出品)、 HCV-086 (ViroPharma/ffyeth)、ISIS-14803 (ISIS Pharmaceuticals)、GS-9132 (Achillion pharmaceuticals 出品的聚合酶抑制劑)、HCV-793 (Pharmasset 及 Roche)、(Roche)。其它感興趣的化合物包括Ursodiol(EP 00269516，Axcan Pharma)、HE-2000 (a DHEA 類似物，Colthurst Ltd)、EHC-18 (免疫調(diào)節(jié)劑，Enzo biochem)、組織胺二鹽酸鹽(H2 促效劑，WOO9KMO37, Estero-Anstalt)、nitazoxanide (Romark)、1-胺基-烷基環(huán)己烷(美國(guó)專禾Ij No. 6，034，134)、烷基脂質(zhì)(美國(guó)專利No. 5，922，757)、維生素E及其它抗氧化劑 (U. S. Patent. No. 5，922，757)、膽酸(美國(guó)專利 No. 5，846，964)、N-(膦酰乙酰基)-L-天冬胺酸)美國(guó)專禾U No. 5，830，905)、苯二羧酰胺(美國(guó)專利No. 5，633，388)、聚腺苷酸衍生物 (美國(guó)專利No. 5，496，546)、2' 3' -二脫氧肌苷(美國(guó)專利No. 5，(^6，687)、苯并咪唑(美國(guó)專禾Ij No. 5，891，874)、植物萃取物(美國(guó)專利No. 5，837，257 ；美國(guó)專利No. 5，725，859及美國(guó)專利No. 6，056，961)，及哌啶(美國(guó)專利No. 5，830，905) ；N-(膦酰乙?；?-L-天冬胺酸、苯二羧酰胺、多腺苷酸衍生物、糖化抑制劑，及阻擋由于病毒造成的細(xì)胞損害的非專一性細(xì)胞保護(hù)劑，。本發(fā)明的化合物也可與疫苗或抗體類的方法組合以治療HCV。治療的疫苗 1lntercell [ij ηππ W ^ |ej (Therapeutic peptide vaccine IC41 HCV) > Epimmune/ Genecor> Merix、Tripep (Chiron-VacC)、Avant 公司的免疫療法(Therapore)、CellExSys 的T細(xì)胞療法、STL出品的單株抗體XTL-002、Anadys出品的ANA 246及ANA 246, hnogenetics出品的針對(duì)E2的治療性疫苗、XTLBio出品的對(duì)抗E2外套蛋白質(zhì)的mAb、 GI-5005(Globel_ne Inc)、InnoVac-C(TO 9967285，Innogenetics) > IC-41 (lntercell) > 干擾素 α -n3 (Interferon Sciences)。基于前述，本發(fā)明還包括另一方面，提供一種藥物組合物，包含至少a) —個(gè)第一藥劑，其由本發(fā)明化合物或其藥物組合物組成，及b) —個(gè)第二藥劑，其具有對(duì)抗HCV復(fù)制的性質(zhì)。尤其，此藥物組合物是用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥。更包含一種用于預(yù)防或治療于一需要對(duì)象中的C型肝炎感染或HCV引起的病癥， 包含對(duì)于該對(duì)象給藥一治療上有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明的藥物組合物。
此外，提供一種用于抑制于一需要的病患中的HCV復(fù)制的方法，包含對(duì)于該對(duì)象給藥一治療上有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種方法，包含同時(shí)或依序共同給藥一治療上有效量的本發(fā)明化合物或本發(fā)明的藥物組合物以及選自具有抗HCV性質(zhì)的藥劑的助劑。在此使用的用語(yǔ)“共同給藥”或“組合給藥”等，系意指包含對(duì)于單一病患給藥所選治療劑，且意欲包括藥劑不一定以相同給藥路徑或相同時(shí)間給藥的治療療程。給藥本發(fā)明的藥物組合物會(huì)得到有益效果，例如比起僅使用一種其醫(yī)藥活性成分的單一療法，具有相乘的治療效果。一較佳的相乘組合，為將本發(fā)明的環(huán)十一縮酚酸肽化合物與一干擾素組合，且可隨意地結(jié)合于一聚合物。一更佳的組合為，將本發(fā)明的式I的化合物與霉酚酸、其鹽或前體組合，或與Sl P 受體促效劑例如FTY720組合。所有在此處引用的專利、專利申請(qǐng)案及出版品應(yīng)被認(rèn)為已完整引入于此作為參考。該技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者將了解到除非有特別記述否則在此所述的本發(fā)明可為變化或修飾。且應(yīng)了解到本發(fā)明包括所有在不違背本發(fā)明精神及其主要特征的范圍的所有此種變化及修飾。本發(fā)明也包括所有個(gè)別或集體地在本說明書中提及或指出的步驟、 特色、組成物及化合物，以及所有組合或該等步驟或特色中的2個(gè)以上。故本發(fā)明的揭露應(yīng)被認(rèn)為系便于理解而非限制性，本發(fā)明的范圍系由附帶的權(quán)利要求所定義，且意欲包含所有在其含義及均等范圍內(nèi)的改變。本說明書將引用各種參考文獻(xiàn)，各件均完整納入于此作為參考。以上敘述將可參照以下實(shí)施例而更完整地令人了解。然而，此類實(shí)施例是實(shí)施本發(fā)明的范例方法，并未意欲用來限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例la:制備環(huán)i^一縮酚酸肽(Ia):cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)1.制備(Aa)片段，起自天然環(huán)i^一縮酚酸肽 cyclo-(MeBrnt-Thr-Sar-MeLeu-Leu -MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(見 US 5，116，816，例 2，或 WO 02/092033)，例 4，步驟 4-1) =H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH(Aa)1.1 變型 A制備cyclo- (MeBmt-Thr (0- (N-咪唑基)羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv -MeLeu-Leu-MeVal)(IA)將 cyclo- (MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (US 5，116，816，例 2，或 WO 02/092033，例 4，步驟 4-1) (3. 00g, 2. 40mmol, 1. 0 當(dāng)量)及 1， 1'-羰基二咪唑(1. 17g，7. 21mmol，3.0當(dāng)量)溶于15mL無水CH2Cl2得到的溶液在室溫?cái)嚢?. 5小時(shí)。以分析性UPLC監(jiān)控反應(yīng)的進(jìn)行。得到81. 的轉(zhuǎn)換率。將額外量的1， 1'-羰基二咪唑(0. 39g，2.40mmOl，1.0當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物。于再攪拌16小時(shí)后，得到98.8%的轉(zhuǎn)換率。于減壓下將溶液蒸發(fā)。將殘?jiān)苡贏cOEt (45mL)，依序以10%檸檬酸 (45mL)及鹵水G5mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)，以得到兩化合物(IA)及OA)的混合物白色粉末。UPLC-ESI-MS (m/z) (IA) 1342. 75 [M+H]+ ([C68H117N12O15] + ;calc. 1342. 73)，(2A) 1274. 77 [M+H] + ( [C65H113N10O15]+ ；calc. 1274. 65)制備 cyclo- (MeBmt-Thr (0，N-羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-L eu-MeVal)(2A)將前面反應(yīng)得到的化合物(IA)及、2k)的混合物(3.41g，2.40mmol)溶于無水 DMSO(15mL)得到的溶液攪拌并于氬氣氛圍于100°C加熱2小時(shí)。以分析性UPLC監(jiān)控反應(yīng)的進(jìn)行。得到完全的轉(zhuǎn)換。接著，將此溶液溶于Ac0Et(45mL)，并依序以HCllM(30mL) 及23. 2% NaCl水溶液(15mL)洗滌，再以11. 6% NaCl水溶液(45mL)洗滌。將有機(jī)相以 Na2SO4干燥，過濾，并于減壓下蒸發(fā)以得環(huán)十一縮酚酸肽cyclo- (MeBmt-Thr (0，N-羰基)-S ar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (2A)白色粉末。UPLC-ESI-MS(m/z) 1274. 65 [M+H]+ ([C65H113NltlO15]+ ；calc. 1274. 65。制備H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe ((Aa)片段甲酯(3A)將于前面反應(yīng)得到的環(huán)i^一縮酚酸肽(1. OOg, 0. 78mmol)溶于30mLMe0H(無水) 的溶液冷卻至0°c，于氬氣下一次性加入Ca(OMe)2(0. 24g，2. 35mmol)。于0°C 5小時(shí)后， 于室溫反應(yīng)1小時(shí)，UPLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示轉(zhuǎn)換率為98. 6%。將溶液冷卻至0°C， 并以10%檸檬酸水溶液中和。將甲醇蒸發(fā)。將此水性混合物倒入100M1的AcOEt/NaCl 23.2% (1 1 ν/ν)混合物。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離；得到五肽-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (3AUPLC-ESI-MS (m/z) 669. 16 [M+H] + ( [C35H65N4O8]+ ；calc. 669. 48)制備(Aa)片段H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OHG)將前面反應(yīng)得到的五肽(3A) (1. 15g，1. 72mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于THF(8. 6mL)及水 (1. ImL)得到的溶液于冰浴中冷卻至0°C，然后，將2M LiOH(l. 72mL，3. 44mmol,2. 0當(dāng)量) 在20秒內(nèi)加入。然后移除冷卻浴，將混合物(pH = 12-13)于室溫?cái)嚢杓s3小時(shí)。UPLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示已完全轉(zhuǎn)換。接著，將此溶液冷卻至0°C并以10%檸檬酸中和。于減壓下將四氫呋喃蒸發(fā)。將此殘?jiān)苡贏cOEt (50mL)并以10%檸檬酸(3mL)及23. 2% NaCl 水溶液(50mL) (pH 3)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓蒸發(fā)以得(Aa)片段H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4)白色粉末。UPLC-ESI-MS (m/z) 655. 21 [M+H] + ([C34H63N4O8] + ；calc. 655. 46)1. 2 變型 B制備 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe將冷卻于0°C 的天然 cyclo-(MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-Me Leu-Leu-MeVal)(從 US 5，116，816，例 2，或 WO 02/092033，例 4，步驟 4-1 得到)(3. Og, 2. 40mmol)溶于無水Me0H(90mL)的溶液中，于氬氣下加入Me0Na(0. 519g，9. 6mmol，4. 0當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)1小時(shí)后，于室溫反應(yīng)2小時(shí)，HPLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示已反應(yīng)完成。 將此溶液冷卻至0°C并以10%檸檬酸水溶液中和至(pH 5-6)。將甲醇蒸發(fā)。將水性混合物倒入150mL的乙酸乙酯中。將有機(jī)層以H20(20mL)及鹵水(20mL)洗滌，并以MgSO4干燥，并過濾。于真空將溶劑蒸發(fā)及于硅膠閃式色譜，得到純的H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-Meant-Thr_Sar_MeLeu_Leu_MeLeu_Ala_OMe。
制備H-D-Hiv(0-(N-咪唑基)羰基)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr (0_(N-咪唑基)羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (IB)將前面反應(yīng)得到的i^一肽(2.96g，2. 31mmOl，1.0當(dāng)量)及1，1，-羰基二咪唑 (1. 50g，9. 25mmol,4. 0當(dāng)量)溶于53mL的無水CH2Cl2得到的水溶液，于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。 以分析性HPLC及TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)行。將溶液于減壓下蒸發(fā)。將殘?jiān)苡?50mL的乙酸乙酯，并依序以10%檸檬酸(30mL)、H20(30mL)及鹵水(30mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥， 過濾并于減壓蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物以閃式色譜精制，以得H-D-HiV(0-(N-咪唑基)羰基)-MeLeU -Leu-MeVal-MeBmt-Thr (0- (N-咪唑基)羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (IB)白色粉末。制備H-D-Hiv (0- (N-咪唑基)羰基)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr (0，N-羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe(2B)將前面反應(yīng)得到的i^一肽(3. 26g,2. 22mmol)溶于無水DMS(K40mL)得到的溶液， 攪拌并于100°c于氬氣氛圍加熱3. 5小時(shí)。以TLC及分析性HPLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)行。接著，將溶液溶于AcOEt (200mL)，并依序以10%檸檬酸水溶液O次，30mL)、H2O (1 X 30mL)，及飽和 NaCl水溶液(lX30mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾，并于減壓下蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物以閃式色譜精制。溶劑蒸發(fā)后的殘?jiān)诟哒婵崭稍?，得到十一肽H-D-Hiv(0-(N-咪唑基)羰基)-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Thr (0，N-羰基)-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-OMe (2B)白色粉末。制備H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OMe (3B)將冷卻至0 °C的前面反應(yīng)得到的十一肽OB) (3. 05g, 2. 17mmol)溶于IOOmL MeOH(無水)得到的溶液中，于氬氣下一次性加入MeOK (0. 456g，6. 53mmol)。于0°C反應(yīng)1 小時(shí)，再于室溫反應(yīng)1小時(shí)后，HPLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將溶液冷卻于0°C并以10%檸檬酸水溶液中和。將甲醇蒸發(fā)。將水性混合物倒入IOOmL的AcOEVH2O(1 Iv/ ν)混合物。將有機(jī)層以H2O (IX IOmL)及鹵水(IXlOmL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以制備性HPLC分離，以得到五肽H-D-Hiv-MeLeu-Leu-M eVal-MeBmt-OMe(3B)。制備H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH (4，Aa 片段)將前面反應(yīng)得到的五肽(1. 265g，1. 88mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于THF(18. 8mL)得到的溶液于冰浴冷卻至0°c，并花費(fèi)20分鐘滴加0. 2M LiOH(18. 8mL，3. 66mmol,2. 0當(dāng)量)。然后移除冷卻浴，并將此混合物(pH = 12-13)于室溫?cái)嚢杓s2. 5小時(shí)(TLC對(duì)照組)。接著， 將此溶液冷卻至0°C，并以0. IM HCl (pH 2-3)中和。將四氫呋喃于減壓下蒸發(fā)。將殘?jiān)苡?AcOEt (IOOmL)，并以 10%檸檬酸(lX20mL), H20(lX20mL)及鹵水(lX20mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，以得到五肽(鈉鹽)H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-ONa 白色粉末。HR-MALDI-MS :677. 46 [M+Na]+ ([C34H62N4NaO8] + ；calc. 677. 4465)2.制備(Ba)片段H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe (Ba)2. 1.制備 Boc-MeLeu-Gly-OMe將冷卻至0°C的市售可得的H-Gly-OMe 'HCl (4. Og, 31. 8mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于無水DCM(240mL)的溶液，于氬氣下加入DIPEA (32. 88mL, 189. Ommol，6. O當(dāng)量)。接著，于15分鐘后，一次性加入 HATU (15. 72g，41. 34mmol, 1. 3 當(dāng)量)及 Boc-MeLeu-OH (7. 8g, 31. 8mmol, 1. O 當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘再于室溫反應(yīng)22. 45小時(shí)后，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。以添加10% NaHCO3 (40mL)將反應(yīng)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM^OOmL)稀釋，并以10%檸檬酸(lX80mL)、H20(lX80mL)及鹵水(lX80mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4 干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物分離以得到酯Boc-MeLeu-Gly-OMe白色油狀泡沫。UPLC-ESI-MS (m/z) 339. 0234 [M+Na]+ ([C15H28N2NaO5]+ ；calc. 339. 1896)2. 2.制備 H-MeLeu-Gly-OMe將前面反應(yīng)得到的二肽(9.9g，31. 29mmol, 1. O 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(30mL，2 3v/ ν)的溶液保持在0°C 45分鐘，并于室溫維持2小時(shí)，并于減壓下將溶劑移除。將粗制產(chǎn)物于高真空干燥(20分鐘)。接著，加入DCM(60mL)，并將此混合物于0°C與DIPEA (2. OmL) 一起研磨至PH 7-8以中和過量的TFA。蒸發(fā)并干燥后，此二肽H-MeLeu-Gly-OMe的粗制胺鹽用于其次的偶聯(lián)步驟而無需經(jīng)進(jìn)一步精制。UPLC-ESI-MS (m/z) 217. 0546 [M+H]+ ([C10H21N2O3I+ ；calc. 217. 1552).2. 3.制備 Boc-Leu-MeLeu-Gly-OMe將冷卻至0°C的前面反應(yīng)得到的二肽(3. 38g，15.63mmOl，1.0當(dāng)量)溶于無水 DCM(160mL)的溶液中，于氬氣下添加DIPEA (8. 08mL，46. 89mmol，3. 0當(dāng)量)。接著，于10 分鐘后，一次性添加 HATU (7. 72g，20. 14mmol, 1. 3 當(dāng)量)及 Boc-Leu-OH(3. 98g, 17. 19mmol, 1. 1當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘，再于室溫反應(yīng)15. 45小時(shí)，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。藉由添加10% NaHCO3(36mL)將此反應(yīng)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物 U DCM(240mL)稀釋，并以 10%檸檬酸(1 X60mL)、H2O(1 X60mL)及鹵水(lX60mL)洗滌。 將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾，于減壓下蒸發(fā)。將此粗制混合物以柱色譜分離，以得到酯 Boc-Leu-MeLeu-Gly-Ome 淡黃色油。UPLC-ESI-MS (m/z) 430. 0120 [M+H]+ ([C21H40N3O6]+ ；calc. 430. 2917)2.4.制備 H-Leu-MeLeu-Gly-OMe將前面反應(yīng)得到的三肽(3.Og, 6. 98mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(12mL，1 Iv/ ν)的溶液于0°C維持1小時(shí)，并于室溫維持2小時(shí)，然后，于減壓下將溶劑移除。將此粗制品于高真空干燥(15分鐘)。接著，加入DCMQOmL)，并將混合物于0°C與DIPEA—起研磨至 PH 7-8以中和過量的TFA。蒸發(fā)及干燥后，將此H-Leu-MeLeu-Gly-Ome的粗制胺鹽用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需進(jìn)一步精制。UPLC-ESI-MS (m/z) 330. 0227 [M + H] + ([C16H32N3O4] + ；calc. 330. 2393)； 352. 0016 [M+Na]+ ([C16H31N3NaO4]+ ；calc. 352. 4248) ；659. 1626 [2M+H]+ ([C32H63N6O8]+ ； calc. 659. 1626)2. 5.制備 Boc-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe于0°C冷卻的前面反應(yīng)得到的三肽O. 3g，6.98mmOl，1.0當(dāng)量)溶于無水 DCM(105mL)的溶液中，于氬氣下添加DIPEA(3. 61mL，20. 34mmol，3. 0當(dāng)量)。接著，10分鐘后，一次性添加 HATU(3. 45g，9. 07mmol, 1. 3 當(dāng)量)及 Boc-MeVal-OH(1. 78g，7. 68mmol, 1. 1 當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘，再于室溫反應(yīng)15. 45小時(shí)后，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3 Q5mL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM(150mL)
19稀釋，并以10%檸檬酸(lX50mL)、H20(lX50mL)及鹵水(lX50mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4 干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物分離，以得酯Boc-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe淡黃色油。UPLC-ESI-MS (m/z) 543. 0484 [M + H]+ ([C27H51N4O7] + ；calc.543.3758)； 565. 0467 [M+Na]+ ([C27H50N4NaO7]+ ；calc. 565. 3577)2. 6.制備 H-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe將前面反應(yīng)得到的四肽(3.56g，6. 56mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(12mL，1 Iv/ ν)得到的溶液于0°C維持1小時(shí)，并于室溫維持2小時(shí)，并于減壓下將溶劑移除。將粗制產(chǎn)物于高真空干燥(約15分鐘)。接著，將DCMG5mL)加入，并將此混合物于0°C與DIPEA—起研磨至PH 7-8，以中和過量的TFA。蒸發(fā)及干燥后，將此四肽H-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe 的粗制胺鹽用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需進(jìn)一步精制。UPLC-ESI-MS (m/z) 443. 0694 [M + H]+ ([C22H43N4O5]+ ；calc. 443. 3233)； 465. 0063 [M+Na]+ ([C22H42N4NaO5]+ ；calc. 465. 3053)2. 7.制備 Boc-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe將冷卻于0°C的前面反應(yīng)得到的四肽(2.90g，6. 56_ο1，1.0當(dāng)量)溶于無水 DCM(IlOmL)得到的溶液中，于氬氣下添加DIPEA(3. 39mL，19. 68mmol，3. 0當(dāng)量)。接著， 于 10 分鐘后，一次性加入 HATU(3. 24g，8. 53mmol, 1· 3 當(dāng)量)及 Boc-D-MeAla-0H(l. 46g, 7. 21mmol,l. 1當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘，再于室溫反應(yīng)17. 45小時(shí)后，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(25mL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以 DCM(150mL)稀釋，并以 10%檸檬酸(1 X50mL)，H2O(1 X50mL)及鹵水(lX50mL)洗滌。 將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將此粗制混合物以柱色譜分離，以得到酯B Oc-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe 淡黃色泡沫。UPLC-ESI-MS (m/z) 628. 56 [M + H] + ( [C31H58N5O8] + ；calc. 628. 4285)； 650. 53 [M+Na]+ ([C31H57N5NaO8]+ ；calc. 650. 4105)2. 8.制備 H-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe將前面反應(yīng)得到的五肽(1.6g，2. 55mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(6mL，1 lv/v) 得到的溶液于0°c維持1小時(shí)，并于室溫維持2小時(shí)，并將溶劑于減壓下移除。將粗制產(chǎn)物于高真空干燥(約15分鐘)。接著，加入DCMQOmL)，并將此混合物于0°C與DIPEA —起研磨至pH 7-8，以中和過量的TFA。蒸發(fā)及干燥后，此五肽H-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly -OMe的粗制胺鹽用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需經(jīng)進(jìn)一步精制。UPLC-ESI-MS (m/z) 528. 49 [M+H]+ ([C26H50N5O6]+ ；calc. 528. 3761).2. 9.制備 Boc-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe于0°C冷卻的前面反應(yīng)得到的五肽(1.33g，2. 52mmOl，1.0當(dāng)量)溶于無水 DCM(60mL)中，于氬氣下加入DIPEA(1. 30mL，7. 56mmol，3. 0當(dāng)量)。接著，于10分鐘后，一次性加入 HATU(1. 25g，3. 28mmol, 1. 3 當(dāng)量)及 Boc-Abu-OH(0. 56g，2. 77mmol, 1· 1 當(dāng)量)。 于0°C反應(yīng)15分鐘后，于室溫反應(yīng)整夜，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(15mL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM(IOOmL)稀釋，并以10% 檸檬酸(lX40mL)、H20(lX40mL)及鹵水(lX40mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將此粗制混合物以柱色譜分離，以得到酯Boc-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe淡黃色泡沫。UPLC-ESI-MS (m/z) 713. 1 5 1 3 [M + H]+ ([C35H65N6O9] + ；calc.713.4813)； 735. 1010 [M+Na]+ ([C35H64N6NaO9]+ ；calc. 735. 4632)2. 10.制備 H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe (Ba)將前面反應(yīng)得到的六肽(0.82g，1. 15mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(6mL, 1 Iv/ ν)得到的溶液于0°C維持1小時(shí)，并于室溫維持1小時(shí)，將溶劑于減壓下去除。將此粗制產(chǎn)物于高真空干燥(約15分鐘)。接著，加入DCMQ5mL)，并將此混合物于以0°C與DIPEA — 起研磨至PH 7-8以中和過量的TFA。于蒸發(fā)及干燥后，將此六肽H-Abu-D-MeAla-MeVal-Le u-MeLeu-Gly-OMe的粗制胺鹽用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需進(jìn)一步精制。UPLC-ESI-MS (m/z) 613. 1925 [M+H]+ ([C30H57N6O7]+ ；calc. 613. 4289)3.偶聯(lián)(Aa)片段和(Ba)片段3. 1. ^ D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe在0 °C 冷卻的前面反應(yīng)得到的六肽 H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly -OMe (0. 7g，l. 14mmol,1.0當(dāng)量)溶于無水DCM(33mL)得到的溶液中，于氬氣下加入 DIPEA(0. 59mL, 3. 42mmol,3. 0 當(dāng)量)。接著，于 10 分鐘后，一次性加入 HATU(0. 56g， 1. 48mmol, 1. 3 當(dāng)量)及五肽 D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH(0. 75g, 1. 14mmol, 1· 0 當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘后，于室溫反應(yīng)16. 45小時(shí)，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。 將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(IOmL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM(130mL)稀釋，并以10%檸檬酸(lX35mL)、H20(lX35mL)及鹵水(lX35mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4 干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將此粗制產(chǎn)物以柱色譜純化，以得到十一肽D-Hiv-MeLeu-Leu -MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OMe 白色泡沫。UPLC-ESI-MS (m/z) 625. 6903 [M/2+H]+ ([C32H59N5O7]+ ；calc. 625. 4415) ； 1249. 7793 [ M+H] + ( [C64H117N10O14]+ ；calc. 1249. 8751)3. 2.制備 D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OH將前面反應(yīng)得到的i^一肽(1. 30g, 1. 04mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于THF (10. 4mL)的溶液于冰水浴中冷卻至0°C，并于10分鐘內(nèi)滴加0. 2M Li0H(10. 4mL，2. 08mmol,2. 0當(dāng)量)。將此冷卻浴維持，并將此混合物(pH = 12-13)于0°C攪拌約20分鐘，并于室溫?cái)嚢?0分鐘 (TLC對(duì)照)。接著，將此溶液冷卻至0°C，并以10%檸檬酸水溶液(pH 3-4)中和。將溶液于減壓下蒸發(fā)。將殘?jiān)苡贏c0Et(140mL)，并以H20(lX30mL)及鹵水(lX30mL)清洗。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將此粗制產(chǎn)物以柱色譜純化，以得到十一肽D -Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-OH 白色粉末。UPLC-ESI-MS (m/z) 1235. 7690 [M+H]+ ([C63H115NltlO14]+ ；calc. 1235. 8594)4.大環(huán)內(nèi)酯化芾[J備 cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ia)將DMAP (0. 507g，4. 144mmol,4. 0當(dāng)量)及苯并三唑基氧三吡咯啶基鱗六氟磷酸酯(PyBOP) (1.078g，2. 071mmol，2.0當(dāng)量)溶于DCM(U8mL)的溶液中，經(jīng)2小時(shí)滴加前面反應(yīng)得到的i^一肽(1. 28g, 1. 036mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于DCMQOmL)的溶液。將此混合物
21攪拌整夜(22小時(shí))。添加酸結(jié)束后；將混合物移到分液漏斗中?？俁T = 24小時(shí)。將溶液由0. IM HCl (20mL)洗滌，并將有機(jī)層分離，并以MgSO4干燥，過濾，并于減壓下濃縮。將此粗制產(chǎn)物以柱色譜精制，得到環(huán)i^一縮酚酸肽cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeL eu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)白色固體。接著，將得到的化合物再以制備性HPLC 再精制，以得到 cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeV al)白色粉末。純度99. 38% (80°C，30分鐘)(C63H112N10O13, MW = 1217. 6226g/mol).UPLC(40°C, ACQUITY UPLC BEH C18 1. 7 μ m，214nm，50 — 95%，7 分鐘)tE = 2. 923 分鐘UPLC 從天然環(huán)^^一縮酚酸肽 cyclo- (MeBmt-Thr-Sar-MeLeu-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-Me Leu-Leu-MeVal)得到環(huán)i^一縮酚酸肽 cyclo- (MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly -D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal)的總產(chǎn)率為大于 50%。實(shí)施例Ib 化合物(Ic)、(If)、(Ig)、(Ii)及(Ik)可依照類似于實(shí)施例Ia的反應(yīng)路徑制備。實(shí)施例2 制備環(huán)十一縮酚酸肽(Ib)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)2.制備(Bb)片段H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe (Bb)2. 1.制備 Boc-MeLeu-Ala-OMe將冷卻至0°C 的市售的 H-Ala-OMe · HCl (2. 00g, 14. 32mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于無水 DCM(130mL)得到的溶液中，于氬氣下加入DIPEA(14. 68mL，86. 0mmol，6. 0當(dāng)量)。接著， 于 15 分鐘后，一次性加入 HATU(6. 52g, 17. 18mmol, 1. 2 當(dāng)量)及 Boc-MeLeu_0H(3· 512g, 14. 32mmol, 1. 0當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘后，于室溫反應(yīng)48小時(shí)(RT = 2天又15分鐘)， TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(20mL)淬熄并攪拌15 分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM(200mL)稀釋，并以10%檸檬酸(1 X40mL)、H2O(1 X40mL)及鹵水(lX40mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，以得到酯Boc-MeLeu-Ala-OMe微黃色油。將樣品(30mg)用半制備RP-HPLC再精制， 將肽冷凍干燥，得到酯Boc-MeLeu-Ala-OMe白色粉末。2. 2.制備 H-MeLeu-Ala-OMe將前面反應(yīng)得到的二肽(1.70g，5. 14mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(10mL，2 3v/ ν)得到的溶液在0°C維持1. 5小時(shí)，并將溶劑于減壓下移除。將粗制產(chǎn)物于高真空干燥(20 分鐘)。接著，加入DCM(IOmL)，并將混合物于0°C與DIPEA —起研磨至pH 7-8以中和過量的TFA。接著，將反應(yīng)混合物由DCM (60mL)稀釋，并以H2O (1 X IOmL)及鹵水(IXlOmL)洗滌。 將有機(jī)相過濾、干燥(Na2SO4)并于高真空干燥。H-MeLeu-Ala-OMe的粗制胺鹽使用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需經(jīng)進(jìn)一步精制。2. 3 制備 Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe
將冷卻至0°C的前面反應(yīng)得到的二肽(2. 17g，9.42mmOl，1.0當(dāng)量)溶于無水 DCM(108mL)得到的溶液中，于氬氣下添加DIPEA (6. 45mL，37. 68mmol，4. 0當(dāng)量)。接著，于10 分鐘后，一次性加入 HATU (4. 65g, 12. 25mmol, 1. 3 當(dāng)量)及 Boc-Leu_0H(2· 39g, 10. 36mmol, 1. 1當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘后，再于室溫反應(yīng)15小時(shí)(1 15分鐘)，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(IOmL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCM(50mL)稀釋，并以10%檸檬酸(1 X 20mL)、H2O (1 X 20mL)及鹵水(lX20mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜精制，得到三肽 Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe淡黃色油。將樣品以半制備性RP-HPLC再精制，并將肽冷凍干燥以得到三肽Boc-Leu-MeLeu-Ala-OMe白色粉末。2. 4.制備 H-Leu-MeLeu-Ala-OMe將前面反應(yīng)得到的三肽(2.00g, 4. 50mmol, 1. 0 當(dāng)量)溶于 TFA/DCM(10mL，2 3v/ ν)的溶液在0°C保持2小時(shí)，并于減壓下將溶劑移除。將產(chǎn)物于高真空干燥OO分鐘)以得到此粗制材料。接著，加入DCM QOmL)，并將此混合物在0°C與DIPEA—起研磨至pH 7_8(石蕊試紙)以中和過量的TFA。蒸發(fā)及干燥后，將粗制的H-Leu-MeLeu-Ala-OMe胺用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需經(jīng)進(jìn)一步精制。將樣品05mg)以半制備性RP-HPLC再精制，并將產(chǎn)物冷凍干燥以得到三肽H-Leu-MeLeu-Ala-OMe固體。2. 5.制備 Boc-D-MeAla-EtVal-OHBoc-D-MeAla-EtVal-OH 的獲得是，起始于 Boc-D-MeAla-Val-OMe，使用 BuLi 及三乙基氧鐺氟硼酸酯，再依文獻(xiàn)水解次甲基酯而得到(Jean Frai^ois. Guichou, PhD thesis entitled "De nouveaux analogues de Cyclosporine A comme agent anti-VIH-l “， Facultedes Sciences, Universitede Lausanne, 2001, p.121—122)。2. 6.制備 Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe將冷卻至-8°C 之三肽 H-Leu-MeLeu-Ala-OMe (0. 096g，0. 291mmol，1· O 當(dāng)量)溶于無水DCM(8mL)得到之溶液中，于氬氣下添加DIPEA(0. 15mL，0. 87mmol, 3.0當(dāng)量)。接著，10分鐘后，一次性加入HATU (0. 13g,0. 35mmol,1.2當(dāng)量)及二肽 Boc-D-MeAla-EtVal-OH (0. Ig, 0. 29mmol, 1. O 當(dāng)量)。于 _8°C 反應(yīng) 10 分鐘后，再于室溫反應(yīng) 40分鐘，HPLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(ImL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCMQOmL)稀釋，并以10%檸檬酸(1 X 5mL)、H20 (1 X 5mL)及鹵水(lX5mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，以得到五肽Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe油。將樣品以半制備RP-HPLC 再度精制，并冷凍干燥，以得到五肽Boc-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe白色粉末。2. 7.制備 H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe將于前面反應(yīng)得到的五肽(0. 45g，0. 69mmol，1.0當(dāng)量)溶于TFA/DCM0. OmL, 2 3v/v)的溶液于0°C維持1.5小時(shí)，并將溶劑于減壓下去除。將殘?jiān)诟哒婵崭稍?(0. 5h)。接著，加入DCM(IOmL)，并將混合物于0°C與DIPEA —起研磨至pH 7-8 (石蕊試紙) 以中和過量的TFA。于蒸發(fā)及干燥后，將粗制的五肽H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OM e的胺鹽用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需進(jìn)一步精制。將樣品(30mg)以半制備RP-HPLC精制， 并將該肽冷凍干燥，以得到五肽H-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe的游離胺的白色粉末。
2. 8.制備 Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe將冷卻至0°C之前面反應(yīng)得到的粗制五肽(0. 2g，0. 36mmol, 1. O當(dāng)量)溶于無水 DCM(IOmL)的溶液中，于氬氣下添加DIPEA (0. 18mL，1. 08mmol，3. 0當(dāng)量)。接著，5分鐘后， 一次性加入 HATU (0. 19g，0. 5mmol, 1. 4 當(dāng)量)及 Boc-Abu_0H(0· 088g，0. 42mmol, 1. 1 當(dāng)量)。 于0°C反應(yīng)15分鐘再于室溫反應(yīng)1. 15小時(shí)后(RT = 1. 5小時(shí))，TLC的反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。將反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3^iiL)淬熄并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物由 DCM(50mL)稀釋，并以10%檸檬酸(1 X IOmL) ,H2O(1 X IOmL)及鹵水(IXlOmL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，以得到六肽Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe 淡黃色油。樣品(30mg)以半制備性 RP-HPLC 再精制，并將產(chǎn)物冷凍干燥以得到六肽Boc-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe黃色粉末。2. 9.制備 H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe (Bb)片段將前面反應(yīng)得到的六肽(0. 187g，0. 25mmol，1.0當(dāng)量)溶于TFA/DCM(3. OmL, 2 3v/v)得到的溶液在0°C維持1.5小時(shí)，并將此溶劑于減壓下移除。將粗制產(chǎn)物于高真空干燥(0. 5小時(shí))。接著，加入DCM(3mL)，并將此混合物于0°C與DIPEA —起研磨至pH 7-8 (石蕊試紙)以移除TFA。于蒸發(fā)及干燥后，將粗制胺H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLe u-Ala-OMe用于隨后的偶聯(lián)步驟而無需進(jìn)一步精制。取一粗制產(chǎn)物樣品(23mg)，以半制備性RP-HPLC再精制，并將此肽冷凍干燥，以得到(Ba)片段H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLe u-Ala-OMe白色粉末。UPLC-ESI-MS (m/z) 641. 259 [M+H] + ( [C32H61N6O7]+ ；calc. 641. 4602)3.偶聯(lián)(Aa)片段和(Bb)片段3. 1. ^ H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Al a-OMe將冷卻至0°C之前面反應(yīng)得到的六肽H-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-A Ia-OMe (0. 16g，0. 25mmol, 1. 0當(dāng)量)溶于無水DCM(IOmL)的溶液中，于氬氣下添加 DIPEA(0. 214mL, 1. 26mmol,5. 0 當(dāng)量)。接著，于 5 分鐘后，一次性加入 HATU(0. 12g， 0. 31mmol, 1. 25 當(dāng)量)及如上得到的五肽H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-OH(4) (0. 16g, 0. 25mmol, 1. 0當(dāng)量)。于0°C反應(yīng)15分鐘并于室溫反應(yīng)1. 15小時(shí)后(RT = 1. 5h),TLC反應(yīng)進(jìn)展對(duì)照組指示反應(yīng)完成。反應(yīng)藉由添加10% NaHCO3(3mL)淬熄，并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物以DCMGOmL)稀釋，并以10%檸檬酸(1 X 8mL)、H2O (1 X 8mL)及鹵水(lX8mL)洗滌。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾，并于減壓下蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，得到十一肽 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe 白色泡沫。 將分析樣品(18mg)以半制備RP-HPLC再精制，并將產(chǎn)物冷凍干燥，以得到十一肽H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe 白色粉末。3. 2.制備 H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Al a-OH將前面反應(yīng)得到的i^一肽甲酯(0. 27g，0. 21mmOl，1.0當(dāng)量)溶于THF(2. 5mL)的溶液于冰水浴中冷卻至0°c，然后花10分鐘加入0. 2M LiOH(2. llmL，0· 42mmol,2. 0當(dāng)量)。 然后移除冷卻浴，將混合物(PH = 12-13 ；石蕊試紙)于室溫?cái)嚢?小時(shí)20分鐘(TLC對(duì)照)。接著，將溶液冷卻至0°C，并以1. OMHCl酸化至pH 3-4。將溶液于減壓下蒸發(fā)。將殘?jiān)芙庥贏c0Et(40mL)，并以10%檸檬酸(1 X8mL)、H20(1 X8mL)及鹵水(lX8mL)清洗。將有機(jī)相以Na2SO4干燥，過濾并減壓蒸發(fā)。將粗制混合物以柱色譜分離，以得到酸H-D-Hiv-M eLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OH 白色粉末。樣品 QOmg)以半制備RP-HPLC再精制，產(chǎn)物冷凍干燥得到i^一肽H-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal-MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-OH 白色粉末。4.大環(huán)內(nèi)酯化芾[J備 cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ib)將DMAP(0. 048g，0. 39mmol,4. 0當(dāng)量)及苯并三唑基氧三吡咯啶基鱗六氟磷酸酯(PyBOP) (0. 102g，0. 196mmol,2. 0當(dāng)量)溶于DCM(12mL)的溶液中，以1. 5小時(shí)滴加前面反應(yīng)得到的i^一肽(0. 124g，0.098mmOl，1.0當(dāng)量)溶于DCM(4mL)的溶液。完成添加酸后，攪拌混合物(RT = 24h)，然后移到分液漏斗。將溶液以IM HCl (2mL)洗滌，將有機(jī)層分離并以MgSO4干燥，過濾并于減壓下濃縮。將粗制產(chǎn)品以柱色譜精制，得到環(huán)十一縮酚酸肽 cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ia)白色固體。取樣品(77mg)以半制備RP-HPLC精制，將產(chǎn)物冷凍干燥，以得到環(huán)十一縮酚酸肽cycl ο- (MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (Ib)白色粉末。UPLC-ESI-MS (m/z) 1245. 787 [M+H]+ ([C65H117N10O13] + ；calc. 1245. 8802)， 623. 465 [M/2+H] +(calc. 623. 444)實(shí)施例3 制備 cyclo- (MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-HiV-MeLeu-Leu-MeVa 1) (Ih)(Ih)以類似實(shí)施例2記載的化合物的方式制備。(Bh)片段以如實(shí)施例2記載之制備(Bb)片段的反應(yīng)條件制備。然后，以類似于實(shí)施例2記載的反應(yīng)條件，將(Bh)片段與(Aa)片段偶聯(lián)。然后以類似實(shí)施例加記載的條件進(jìn)行大環(huán)內(nèi)酯化，得到環(huán)十一縮酚酸肽cycl0-( MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ih)UPLC-ESI-MS (m/z) 1259. 888 [M+H] "([C66H119N10O13]+ ；calc. 1259. 8958) ； 1260. 788 [ M+2H]2+( [C66H120N10O13]2+ ；calc. 1260. 9037)。實(shí)施例4 制備 cyclo- (MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVa 1) (Id)H-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-OMe (Bd)片段以類似于實(shí)施例 1 記載的制備(Ba)的反應(yīng)條件制備。然后，對(duì)(Aa)片段之偶聯(lián)及大環(huán)內(nèi)酯化，利用提供類似于實(shí)施例1記載之反應(yīng)條件，得到環(huán)i^一縮酚酸肽cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLe u-A 1 a-D-Hi v-MeLeu-Leu-Me Va 1) (Id)。UPLC-ESI-MS (m/z) 1261. 888 [M+H]+ ([C66H117N10O14]+ ； calc. 1261. 8751)實(shí)施例5 于HCV復(fù)制體(r印licon)系統(tǒng)中的抑制效果為了確定是否本發(fā)明的環(huán)十一縮酚酸肽化合物具有抗HCV活性，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比較此類化合物于HCV復(fù)制體系統(tǒng)中的抑制效果。試驗(yàn)使用Huh 9-13，其包含C型肝炎病毒基因型lb Conl復(fù)制體(Lohmann et al. 2001. J. Virol. 75 :1437-1449 ；and Lohmann et al. 1999. Science. 285 :110-113)。將細(xì)胞繼代培養(yǎng)于細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基DMEM，其中以1 4-1 5比例補(bǔ)充有10% FCS、1 %非必需胺基酸、青霉素/鏈霉素及2%遺傳霉素(Invitrogen)，并于75cm2組織培養(yǎng)瓶(Techno Plastic Products)中生長(zhǎng)3_4天，收集并接種在試驗(yàn)培養(yǎng)基(DMEM，10% FCS，1 %非必需胺基酸，1 %青霉素/鏈霉素)，密度為5000細(xì)胞/井(100 μ 1/井)于96井組織培養(yǎng)微孔板 (Falcon, Beckton Dickinson)，以用于評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)抑制/細(xì)胞毒性及抗病毒效果。將此微孔板培養(yǎng)整夜(37°C，5% CO2，相對(duì)濕度95-99% )，得到未融合的細(xì)胞單層。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的96井平板(Beckton-Dickinson)上的平行培養(yǎng)物，使用MTT試驗(yàn)法 (CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay,Promega)評(píng)估細(xì)胞密度及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制效果。于此試驗(yàn)法中，3- (4，5- 二甲基-噻唑-2-基)-5- (3-羧基甲氧基-苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鐺鹽(MTS)經(jīng)生物還原為甲臜，并以平板讀取儀于498nm定量。甲臜的生成直接相關(guān)于活細(xì)胞數(shù)目。于波長(zhǎng)498nm(Saf ire2，Tecan)測(cè)定吸收，并且將光學(xué)密度(0D值)轉(zhuǎn)換為未處理的對(duì)照組的百分比。將此化合物溶于DMSO使?jié)舛葹?mm0le/L。將母液立即用于安排實(shí)驗(yàn)。測(cè)定此化合物于M個(gè)不同的濃度，范圍為0. 0001 μ mole/L至100 μ mole/L。在試驗(yàn)中最高濃度的 DMSO定為2. 5% (化合物最終濃度為100 μ Μ)。在試驗(yàn)安排期間，DMSO百分比隨著化合物濃度同時(shí)降低。針對(duì)評(píng)估抗病毒效果，將試驗(yàn)培養(yǎng)基抽氣，并將帶有干燥單層的平板于-80°C保存以待萃取。將平板解凍至室溫后，將細(xì)胞單層以100μ 1的cell-to-cDNA溶細(xì)胞緩沖液 (Invitrogen)溶解。于室溫進(jìn)行10分鐘的細(xì)胞溶解，之后，將所有的液體移到PCR平板 (Axygen)。將此PCR平板于75°C孵育15分鐘(T3，Biometra)。將溶解物以無水RNase/ DNase按1 2稀釋，之后，取5 μ 1移到實(shí)時(shí)PCR平板(Applied Biosystems)。復(fù)制體RNA內(nèi)容，使用實(shí)時(shí)定量單步驟RT-PCR方法(RT-qPCR)定量Low Rox One-步驟RT-qPCR master mix，Abgene。使用的順向及反向起動(dòng)子各為5，-CCA GAT CAT CCT GAT CGA CCA G-3，及 5，-CCG GCT ACC TGC CCATTC-3，。熒光探針為 5' -ACATCGCATCGAGCGAGCACGTAC-3‘。樣品的分析使用 SDS7500F(Applied Biosystems, 標(biāo)準(zhǔn)熱循環(huán)48°C 30分鐘，95°C 10分鐘，40個(gè)循環(huán)的95°C 15秒，60°C 1分鐘)，之后，將復(fù)制體RNA的量轉(zhuǎn)換為未處理對(duì)照組的百分比。EC50 (劑量-響應(yīng)曲線得到的值)，代表觀察到抑制病毒復(fù)制50 %的濃度。CC5tl (劑量-響應(yīng)曲線得到的值)，代表細(xì)胞代謝活性減少成未處理細(xì)胞的代謝活性50%時(shí)的濃度。從此類實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果可用于計(jì)算EC5tl士 SD (標(biāo)準(zhǔn)差)，此值為抑制HCV復(fù)制體復(fù)制50%所需要的有效濃度，且CC5tl士SD(隨時(shí)可能)為抑制指數(shù)成長(zhǎng)的細(xì)胞的增殖50%所需要的濃度。EC5tl及CC5tl 士 SD值，各來自3個(gè)單獨(dú)的劑量-響應(yīng)曲線得到的所有EC5tl或CC5tl 值的中位數(shù)。選擇性指數(shù)(Si)，指示該化合物的治療窗口，其以CC5tl與EC5tl間的比值計(jì)算。表1顯示比較Huh 9-13細(xì)胞中，所選化合物的EC50, CC50 ( μ mole/L)及SI值的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種環(huán)十一縮酚酸肽化合物，以式(I)表示Cyclo-(Axx1-Axx2-Axx3-Axx4-Axx5-Axx6-Axx7-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal) (I) 12 345 6 7 8 9 10 11其中，AXX1 為 MeBmt、4-氟-MeBmt、二氫-MeBmt、8-羥基-MeBmt ；0-乙?；?MeBmt ； AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、Thr (0C0CH2CH2CH20H)、Nva、5_ 羥基-Nva ； AXX3 為 D-MeAla、D-3-氟-MeAla、D-MeSer、D-MeSer (OAc)、D-MeSer (OCH2CH2OH)、 D-MeSer (OCH2CH2NEt2)、D-MeAsp (OMe)；AXX4 為 MeIIe、MeMet、MeVal、MeThr、MeThr (OAc)、MeAla、EtVal、EtIIe、EtPhe、EtTyr、 EtThr (OAc) ,MeThr (OAc)、MeTyr、MeTyr (OAc) ,MeTyr (OMe)、MePhe、MeMet (Ox)，其中，甲硫胺酸的硫原子為亞砜或砜； AXX5 為 Leu、Val、Ile ； AXX6 為 MeAla、Sar, MeLeu ；及 AXX7 為 Gly、Ala。
2.如權(quán)利要求1所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，其中，式(I)中， AXX1 為 MeBmt、8-羥基-MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr、Thr (OMe)、Thr (OAc)、Thr (0C0CH2CH2CH20H)、5_ 羥基-Nva ； AXX3 為 D-MeAla、D_3_ 氟-MeAla、D-MeSer, D-MeSer (OAc)、D-MeAsp (OMe)； AXX4 為 MeIIe、MeMet、MeMet (Ox),其中，Ox 為-SOMe、-SO2Me, MeVal、EtVal、Etlie、 MeTyr ；及AXX5 為 Leu、Val、Ile AXX6 為 MeAla、Sar, MeLeu ；及 AXX7 為 Gly，Ala。
3.如權(quán)利要求1或2所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，其中， AXX1 為 MeBmt ；AXX2 為 Abu、Val、Thr ；AXX3 為 D-MeAla ；AX)(4 為 MeIIe、MeVal、EtVal ；AXX5 為 Leu、Val、Ile ；AXX6 為 MeAla、MeLeu, Sar ；及AXX7 為 Gly、Ala。
4.如權(quán)利要求1-3中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，其為cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ia) cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ib) cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-IIe-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ic) cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hi V-MeLeu-Leu-MeVal)(Id) cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-Val-MeAla-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ie) cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(If) cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeVal-IIe-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ig)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-EtVal-Leu-MeLeu-Ala-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ih)cyclo-(MeBmt-Abu-D-MeAla-MeIIe-Leu-MeLeu-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ii)cyclo-(MeBmt-Val-D-MeAla-MeVal-Val-Sar-Gly-D-Hiv-MeLeu-Leu-MeVal)(Ik)
5.一種用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥的藥物組合物，包含權(quán)利要求 1-4中任一所述的化合物，以及一種以上藥物學(xué)可接受的稀釋劑或載體。
6.一種藥物組合物，至少包含a) —個(gè)第一藥劑，其由權(quán)利要求1-4中任一所述的化合物或權(quán)利要求5所述藥物組合物組成；及b) —個(gè)第二藥劑，其具有對(duì)抗HCV復(fù)制的性質(zhì)。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥。
8.如權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，其作為藥劑。
9.如權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，其作為抗病毒劑。
10.一種權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物在制備治療或預(yù)防C型肝炎感染或HCV引起的病癥的藥物中的用途。
11.一種預(yù)防或治療有需要的客體中的C型肝炎感染或HCV引起的病癥的方法，包含 向所述客體給藥治療有效量的權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物或權(quán)利要求5所述的藥物組合物。
12.—種抑制有需要的患者體內(nèi)的HCV復(fù)制的方法，包含想所述患者給藥治療有效量的權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物或權(quán)利要求5所述的藥物組合物。
13.如權(quán)利要求11-12中任一所述的方法，包含同時(shí)或依序共同給藥治療有效量的權(quán)利要求1-4中任一所述的環(huán)十一縮酚酸肽化合物或權(quán)利要求5所述的藥物組合物，以及至少一個(gè)第二藥劑，該第二藥劑選自具有抗HCV復(fù)制性質(zhì)的藥劑。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，該具有抗HCV性質(zhì)的藥劑選自由以下構(gòu)成的群組干擾素，例如干擾素- a - 或干擾素- α _2b ；或結(jié)合于水溶性聚合物或人類白蛋白的干擾素；抗病毒劑，例如利巴韋林、拉米夫定、NV08或匪觀3 ；HCV編碼因子例如NS3-4A蛋白酶、解旋酶或RNA聚合酶的抑制劑；抗纖維化劑，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物；免疫調(diào)節(jié)劑，例如霉酚酸；或Sl P受體促效劑，例如FTY720或其任意磷酸化的類似物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新穎的環(huán)十一縮酚酸肽化合物，及該化合物作為藥劑的用途，尤其作為抗病毒劑，特別是在用于預(yù)防或治療C型肝炎感染或HCV引起的病癥的藥物中的用途。
文檔編號(hào)C07K11/02GK102202679SQ200980144254
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月6日
發(fā)明者扎諾拉里 勞拉·諾瓦羅利, 奧利維爾·特平, 帕特里克·加魯斯特, 拉斐爾·克拉布, 曼弗雷德·穆特爾, 格雷古瓦·維亞尼奧, 瓦萊麗·尼古拉斯, 羅伯特·利塞克, 羅蘭·威戈 申請(qǐng)人:帝柏奧研究制藥有限公司