專(zhuān)利名稱(chēng)：O⁶-烷基鳥(niǎo)嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶及其突變體的新型底物的制作方法
O6-烷基鳥(niǎo)嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶及其突變體的新型底物
背景技術(shù)：
親電化合物如N-甲基-N-亞硝基脲的致突變效應(yīng)和致癌效應(yīng)主要原因?yàn)镈NA的鳥(niǎo)嘌呤殘基發(fā)生O6-烷基化。哺乳動(dòng)物和細(xì)菌中存在防止這一DNA烷基化的保護(hù)機(jī)制，特別是O6-烷基鳥(niǎo)嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶(AGT)能修復(fù)這些損傷(lesions)。AGT將位于烷基化鳥(niǎo)嘌呤O6位上的烷基基團(tuán)轉(zhuǎn)移至AGT自身的其中一個(gè)半胱氨酸的巰基上，導(dǎo)致AGT發(fā)生不可逆的烷基化。這一基團(tuán)轉(zhuǎn)移通過(guò)雙分子親核取代(nucleophilic substitution of type 2)進(jìn)行，這就解釋了為什么除烷基可能發(fā)生轉(zhuǎn)移外，芐基也可能發(fā)生轉(zhuǎn)移。由于腫瘤細(xì)胞中AGT的過(guò)表達(dá)是對(duì)基于DNA烷基化發(fā)揮作用的藥物(如丙卡巴胼(procarbazine)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)和雙 O-氯乙基)-N-亞硝基脲)產(chǎn)生抗性的主要原因，因此提出將AGT抑制劑用作化療治療中的敏化劑 (sensitizing agent)(Pegg等，Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 51 :167-223,1995)。美國(guó)專(zhuān)利5 691 307中記載了芐基上帶有各種取代基的O6-芐基鳥(niǎo)嘌呤衍生物，還記載了它們用于降低腫瘤細(xì)胞中AGT水平、從而增強(qiáng)它們對(duì)基于使用烷基化試劑治療的敏感性的用途。類(lèi)似地，專(zhuān)利申請(qǐng)WO 97/20843公開(kāi)了用于此用途的其他化合物，所述化合物為O6-芐基甲基嘧啶衍生物和O6-雜芳基甲基嘧啶衍生物的形式。專(zhuān)利DE 199 03 895公開(kāi)了對(duì)AGT進(jìn)行的分析，該分析基于A(yíng)GT和O6-烷基鳥(niǎo)嘌呤的生物素化衍生物之間的反應(yīng)而進(jìn)行，該反應(yīng)造成AGT的生物素化，這樣使得能夠在覆蓋有鏈霉親和素的板上分離AGT，并通過(guò)例如ELISA分析對(duì)AGT進(jìn)行檢測(cè)。提出用這種技術(shù)是為了監(jiān)測(cè)癌組織中的AGT水平，也是為了突出(highlight)AGT抑制劑。WO 01/85221提出使用O6-芐基鳥(niǎo)嘌呤的氟代或碘代放射性衍生物來(lái)檢測(cè)AGT。同樣出于測(cè)定該酶在癌細(xì)胞中的表達(dá)水平以改善化療治療效果的目的， Damoiseaux等，ChemBiochem. 4 =285-287,2001公開(kāi)了引入到寡脫氧核糖核苷酸中的O6-烷基鳥(niǎo)嘌呤衍生物，以及該衍生物作為標(biāo)記AGT的探針的用途。申請(qǐng)WO 02/083937記載了用于對(duì)與AGT融合的目標(biāo)蛋白進(jìn)行檢測(cè)和調(diào)控 (manipulate)的方法，該方法在于將這種融合蛋白與帶有標(biāo)記的AGT底物接觸，這樣使得在將目標(biāo)分子轉(zhuǎn)移到AGT后能夠檢測(cè)或調(diào)控這種目標(biāo)蛋白。該申請(qǐng)還公開(kāi)了包含AGT的各種融合蛋白、有關(guān)AGT底物結(jié)構(gòu)的一般原則以及各種標(biāo)記和檢測(cè)所述標(biāo)記的方法。申請(qǐng)WO 2004/031404記載了包含AGT和目標(biāo)蛋白的特定融合蛋白，該融合蛋白能夠用于前述方法中；還記載了通過(guò)此方法得到的標(biāo)記后的融合蛋白以及使用所述融合蛋白的方法。申請(qǐng)WO 2004/031405和WO 2005/085470記載了帶有一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記的特定AGT 底物，并且還記載了它們的制造方法，這些底物能夠用于WO 02/083937中記載的方法。AGT底物的實(shí)例是如下的芐基鳥(niǎo)嘌呤衍生物和芐基胞嘧啶衍生物
權(quán)利要求
1.式(Γ )的化合物
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，B為式(II')的基團(tuán)，其特征還在于，R1為 NH2。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，B為式(III')的基團(tuán)；其特征還在于， R2 為 NH2，且 R3 為 H。
4.如權(quán)利要求1-3中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，L2為共價(jià)鍵或?yàn)檫x自于如下基團(tuán)的二價(jià)的有機(jī)基任選含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵或三鍵的、直鏈或支鏈的C1-C2tl亞烷基； C5-C8亞環(huán)烷基；和C6-C14亞芳基；所述的亞烷基、亞環(huán)烷基或亞芳基任選含有一個(gè)或多個(gè)如氧、氮、硫、磷的雜原子，或任選含有一個(gè)或多個(gè)氨基甲?；螋弱０坊?；并且所述的亞烷基、亞環(huán)烷基或亞芳基任選被C1-C8烷基、C6-C14芳基、磺酸鹽/酯或氧代基團(tuán)取代。
5.如利要求1-4中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，L2選自于如下的二價(jià)基團(tuán) D-(CH2)n-
6.如權(quán)利要求1-5中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，L2選自于如下基團(tuán)其中，q、U、t為1-10之間的整數(shù)。
7.如權(quán)利要求1-6中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，M是能夠產(chǎn)生或調(diào)節(jié)可測(cè)量信號(hào)的標(biāo)記。
8.如權(quán)利要求1-7中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，M為選自于如下的目標(biāo)分子發(fā)光化合物或熒光團(tuán)；放射性分子；結(jié)合伴侶對(duì)中的成員；能與其他生物分子相互作用的分子；能與其他分子共價(jià)或非共價(jià)地鍵合的分子；與H2A和抗壞血酸接觸能夠產(chǎn)生氫氧基的分子；受到光照后能產(chǎn)生活性基的分子；與固相載體共價(jià)結(jié)合的分子；能將自身插入質(zhì)膜中的脂質(zhì)或任何其他分子；以及具有目標(biāo)酶性質(zhì)、目標(biāo)化學(xué)性質(zhì)或目標(biāo)物理性質(zhì)的生物分子。
9.如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于，M選自于親和素、鏈霉親和素、生物素。
10.如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于，M選自于如下的發(fā)光化合物或熒光團(tuán)-有機(jī)熒光團(tuán)，例如花青苷及其衍生物；熒光素及其衍生物；香豆素及其衍生物；羅丹明及其衍生物；carbopyronine及其衍生物；噁嗪及其衍生物；AlexaFluors ；結(jié)晶紫及其衍生物；茈酰亞胺及其衍生物；方酸菁；BODIPk ；NBD (硝基苯并噁二唑)及其衍生物； DABCYL(4-((4-( 二甲氨基)苯基)偶氮)苯甲酸)及其衍生物；-蛋白熒光團(tuán)，例如GFP及其變體；從珊瑚中提取的熒光蛋白；藻膽蛋白，如B-藻紅蛋白、R-藻紅蛋白、C-藻藍(lán)蛋白、別藻藍(lán)蛋白，特別是已知名為XL665的蛋白；-熒光鑭系元素配合物，例如鑭系元素穴狀化合物、鑭系元素鰲合物，特別是銪、鋱、釤、 鏑、釹的螯合物和穴狀化合物。
11.如權(quán)利要求1-7中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，M是選自于如下基團(tuán)的反應(yīng)基團(tuán)丙烯酰胺；經(jīng)活化的胺，例如尸胺或乙二胺；經(jīng)活化的酯；醛；鹵代烷；酐；苯胺；疊氮化物；氮丙啶；羧酸；重氮烷；鹵代乙酰胺；鹵代三嗪，如一氯三嗪、二氯三嗪；胼，包括酰胼；亞胺酯；異氰酸鹽/酯；異硫氰酸鹽/酯；馬來(lái)酰亞胺；磺酰商；或硫醇；酮；胺；?；u；羥基琥珀酰亞胺酯；羥基硫代琥珀酰亞胺酯；疊氮硝基苯基；疊氮苯基；3-(2-吡啶基二硫)_丙酰胺；乙二醛；以及特別是下式的基團(tuán)
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其特征在于，M是選自于如下基團(tuán)的反應(yīng)基團(tuán)羧酸、 胺、琥珀酰亞胺羧酸酯、鹵代乙酰胺、胼、異硫氰酸鹽/酯、馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)、脂肪族胺。
13.如權(quán)利要求1-12中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，所述化合物對(duì)應(yīng)于下式之一
14.如權(quán)利要求1-12中的任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，所述化合物對(duì)應(yīng)于下式之一
15. 一種用基團(tuán)M標(biāo)記目標(biāo)蛋白的方法，所述的目標(biāo)蛋白以與AGT酶形成融合蛋白的形式表達(dá)，所述方法的特征在于，所述方法包括將所述融合蛋白與如權(quán)利要求1-10、13或14中的任一項(xiàng)所述的化合物接觸的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I′)的化合物其中，A、L2、M和B如說(shuō)明書(shū)中所定義。所述化合物構(gòu)成O6-烷基鳥(niǎo)嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶及其突變體的底物。
文檔編號(hào)C07D403/12GK102245580SQ200980146734
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月23日
發(fā)明者伊曼紐爾·布里埃, 埃爾韋·巴贊, 埃里克·特蘭凱特, 洛朗·拉馬克, 米歇爾·拉熱, 諾貝爾·蒂內(nèi)爾 申請(qǐng)人:Cis-生物國(guó)際公司