專利名稱：使用芳香族磺酸化合物的新型Clear Native電泳法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及電泳用試劑、電泳用組合物、電泳用試劑盒及蛋白質(zhì)的分離方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)在，多使用Blue-Native電泳法作為在保持天然的狀態(tài)或酶活性的狀態(tài)下對膜蛋白質(zhì)及超分子復(fù)合體(complex)的分子量和聚集狀態(tài)進(jìn)行研究的方法。上述方法由 khagger等開發(fā)(參照非專利文獻(xiàn)1)，帶有負(fù)電荷的考馬斯亮藍(lán)(Coomassie Brilliant Blue，以下稱為“CBB”)G250利用其與蛋白質(zhì)的結(jié)合，使蛋白質(zhì)的總電荷偏向負(fù)電，然后對具有微細(xì)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)施加電壓，從而按照分子的大小進(jìn)行分離。但是，由于電泳用緩沖液呈現(xiàn)出源自CBB G250的藍(lán)色，因此向凝膠中添加蛋白質(zhì)樣品的操作存在不便。此外，由于電泳后的凝膠呈現(xiàn)出源自CBB G250的藍(lán)色，因此，其不適于在 GFP融合蛋白質(zhì)電泳中用于GFP的熒光檢測。近年來，Wittig等提出了使用脫氧膽酸(DOC)的Clear Native電泳法，其中，上述脫氧膽酸為一種具有負(fù)電荷的表面活性劑(參照非專利文獻(xiàn)2、。由于DOC為無色，因此可以以透明的狀態(tài)進(jìn)行Native電泳。但是，其存在如下問題對于某種蛋白質(zhì)，形成天然狀態(tài)下不存在的多聚體蛋白?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1 :Anal. Biochem. 1991 Dec 199(2)223-231非專利文獻(xiàn)2 :Mol. Cell Proteomics, 2007 Jul 6(7) 1215-122
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明的主要目的在于，提供蛋白質(zhì)電泳用試劑、電泳用組合物、以及使用了上述電泳用試劑和電泳用組合物的蛋白質(zhì)的分離方法和電泳用試劑盒，它們在維持蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)和復(fù)合體結(jié)構(gòu)的同時，能夠以總體帶有負(fù)電荷的狀態(tài)進(jìn)行蛋白質(zhì)的電泳分離，并且， 可以在透明的狀態(tài)下進(jìn)行電泳。解決問題的方法本發(fā)明人以解決上述問題為主要目的進(jìn)行了深入研究，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，特定的化合物在可見光的波長區(qū)域幾乎不發(fā)生光吸收，并且能夠得到與Blue-Native-電泳法幾乎相同的電泳圖譜，因而進(jìn)一步進(jìn)行深入研究從而完成本發(fā)明。gp，本發(fā)明涉及下述項(xiàng)目。項(xiàng)目1.電泳用試劑，其包含至少一種實(shí)質(zhì)上無色的化合物，并且，所述化合物能夠在中性的電泳緩沖液中與蛋白質(zhì)結(jié)合并形成分子整體帶負(fù)電的復(fù)合體。項(xiàng)目2.如項(xiàng)目1所述的電泳用試劑，上述化合物具有至少一個芳基磺酸基。項(xiàng)目3.如項(xiàng)目1或項(xiàng)目2所述的電泳用試劑，其包含至少一種實(shí)質(zhì)上無色的化合物，并且，該化合物能夠在中性的電泳緩沖液中與蛋白質(zhì)結(jié)合并形成分子整體帶負(fù)電的復(fù)合體，上述化合物以下式(I)表示，式權(quán)利要求
1.電泳用試劑，其包含至少一種實(shí)質(zhì)上無色的化合物，所述化合物能夠在中性的電泳緩沖液中與蛋白質(zhì)結(jié)合并形成分子整體帶負(fù)電的復(fù)合體，并且所述化合物以下式(I)表示，
2.如權(quán)利要求1所述的電泳用試劑，其中，含有下述通式(Ia)所表示的至少一種化合物，式2
3.如權(quán)利要求1或2所述的電泳用試劑，其中，含有下式(Ib)所表示的至少一種化合物，式4
4.如權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的電泳用試劑，其中，含有下式(Ic)所表示的至少一種化合物， 式5
5.含有電泳用凝膠和權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的電泳用試劑的電泳用凝膠組合物。
6.含有電泳用緩沖液和權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的電泳用試劑的電泳用緩沖液組合物。
7.蛋白質(zhì)的分離方法，其特征在于，在蛋白質(zhì)樣品和/或電泳用緩沖液中添加權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的電泳用試劑來進(jìn)行蛋白質(zhì)的Clear Native電泳。
8.蛋白質(zhì)電泳用試劑盒，其特征在于，含有選自權(quán)利要求1-4中任一權(quán)利要求所述的電泳用試劑、權(quán)利要求5所述的電泳用凝膠組合物以及權(quán)利要求6所述的電泳用緩沖液組合物中的至少一種。
9.下式(Ig)和(Ih)中的任一個所表示的化合物， 式全文摘要
本發(fā)明提供蛋白質(zhì)電泳用試劑、含有所述試劑的電泳用凝膠或緩沖液組合物、以及使用了所述試劑和組合物的蛋白質(zhì)的分離方法以及電泳用試劑盒。
文檔編號C07C309/46GK102232186SQ20098014833
公開日2011年11月2日 申請日期2009年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月2日
發(fā)明者巖田想, 日野智也, 村田武士, 菅敏幸 申請人:國立大學(xué)法人京都大學(xué), 獨(dú)立行政法人科學(xué)技術(shù)振興機(jī)構(gòu), 靜岡縣公立大學(xué)法人