專利名稱：反式3-取代苯基丙烯酸衍生物制造方法及用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于化合物及其制備方法，主要涉及反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物及其制備方法，以及其用于防治缺氧、缺血性心腦血管疾病的用途。

背景技術：
隨著生活方式及飲食習慣的改變，高血壓、高血脂、高血糖引起的慢性代謝性疾病成為現(xiàn)代人最大的健康殺手，其中心腦血管疾病死亡人數(shù)就占了十大死因中的三分之一。心腦血管病作為危害我國人民生命與健康的常見病、多發(fā)病，具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高和復發(fā)率高的特點。心腦血管病的發(fā)病率與年齡成正相關，隨著我國人口老齡化程度加重，其發(fā)病呈上升趨勢。以腦卒中為例，我國每年發(fā)病率為150/10萬人，死亡率為120/10萬人，存活中約有75％致殘，5年復發(fā)率高達41％，由此造成了社會和經(jīng)濟負擔日趨加重。對心腦缺血損傷的藥物防治研究是當代醫(yī)學亟待解決的關鍵問題。
心腦缺血再灌注損傷的機制十分復雜，迄今仍未完全闡明，一般認為是多種因素共同作用的的復雜病理生理過程，其發(fā)病機制涉及心肌、腦組織能量代謝紊亂；興奮性氨基酸毒性；自由基損傷；炎癥反應等多環(huán)節(jié)。心臟、腦是機體代謝率最高的器官，且大部分為有氧代謝獲得能量。在缺血時，自由基的產(chǎn)生遠遠超過自身內源性抗氧化系統(tǒng)的清除能力。研究表明心腦組織可能對氧化應激尤為易感。腦組織雖然只占體重的2％，但卻消耗總氧量的1/5并高頻率地實現(xiàn)大量的ATP循環(huán)。近年來，國內外許多學者已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)微循環(huán)局部與整體全過程的聯(lián)系，提出血管內皮細胞是腦缺血損傷致病因素的重要靶細胞(高梅等，缺血性中風治療新策略——靶向神經(jīng)血管單元?！吨袊R床藥理學與治療學》2008，13813-821)。血管內皮細胞為覆蓋于血管內膜表面的單層扁平或多角形的細胞，血管內皮細胞的損傷及功能紊亂已被眾多研究證明參與在在心腦血管疾病的發(fā)病病理生理過程中。氧化應激誘導內皮細胞損傷的機制非常復雜，主要表現(xiàn)為氧自由基的過氧化反應。機體或細胞內以氧自由基為代表的氧化性物質的產(chǎn)生與消除失衡，或外源性氧化物質的過量攝入，導致氧化性物質在血管內皮細胞內蓄積而易于引發(fā)氧化反應狀態(tài)，最終引起細胞膜脂質過氧化、蛋白質和核酸變性，導致不可逆損傷。因此，以血管內皮作為切入點，是進一步研究腦血管疾病治療方法的突破口所在(Zlokovic BV.The blood-brain barrier in health and chronicneurodegenerative disorders.Neuron.2008，24178-201.)。研發(fā)以血管內皮細胞為靶向的血管保護藥物對治療和改善血管疾病的預后有積極的意義。但是，國內外以血管內皮細胞為靶向的心腦血管保護藥開發(fā)缺遠遠滯后，具有極大的市場潛力。
丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng))》，列為傳統(tǒng)中藥中的上品。作為活血藥，現(xiàn)代常用于防治冠心病心絞痛、血栓閉塞性脈管炎、改善微循環(huán)、提高機體耐缺氧能力、抗凝血作用、促進組織的修復與再生等。丹酚酸類衍生物是傳統(tǒng)中藥丹參中的水溶性成分，具有強大的抗氧化作用，臨床主要用于治療冠心病、腦血栓、肝炎、肝硬化等疾病。反式-3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二羥基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(丹酚酸F)是丹酚總酸中活性最強成分——丹酚酸A的主要構成單位，但對于其天然產(chǎn)物的合成方法目前尚未見有成功報道；迄今為止只有關于其四甲基衍生物反式-3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸的兩種合成方法被報道。[1，2]這兩種方法均存在合成路線長、收率低的缺點。


發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的是提供反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯衍生物，具有以下結構通式
其中R1、R2、R3、R4可相同，亦可不同，其種類為氫原子(不包括同時是氫原子)、甲基(不包括同時是甲基)、乙基、丙基、異丙基、異丁基、特丁基、2-異戊烯基、乙?；?、苯甲?；腥我环N官能團， X可為氫原子，甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、苯基、芐基等脂肪族、芳香族官能團，以及鈉原子、鉀原子、鎂原子、鈣原子、鋰原子、鋅原子、鐵原子等中的任一種。
本發(fā)明的另一個目的是提供反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn) (1)在反應器中投入稱量好的過渡金屬絡合物催化劑、1-溴-2-(3，4-二取代苯乙烯基)-3，4-二取代苯、丙烯酸酯類化合物、無機堿、有機堿混溶于極性有機溶劑中，將此混合液加熱回流。反應結束后，加水淬滅催化劑活性，加入鹽酸調pH至2，有機溶劑萃取(100mL×4)，萃取液用無水硫酸鈉干燥，將濃縮后得到的粗產(chǎn)物經(jīng)重結晶或柱層析后得到中間體烷基酯I的純品； 反應式1
(2)烷基酯I經(jīng)酸性條件下水解、重結晶或柱層析精制后得化合物II的純品，所用的酸選用濃硫酸或鹽酸， 反應式2
或者烷基酯I衍生物經(jīng)堿性條件下水解后再經(jīng)鹽酸中和反應，所得粗產(chǎn)物再經(jīng)精制后分別制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物II的純品， 反應式3
(3)丙烯酸衍生物II經(jīng)堿性條件下水解后所得粗產(chǎn)物再經(jīng)重結晶等方法精制后制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸鹽衍生物III的純品， 反應式4
其中X(OH)n中的X為堿金屬元素，選用鈉、鉀、鎂、鋅、鈣或鐵等中的任一種，n為相應于堿金屬原子的化合價數(shù)； 或者烷基酯衍生物I經(jīng)堿性條件下水解后所得粗產(chǎn)物再經(jīng)重結晶等方法精制后制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸鹽衍生物II的純品， 反應式5
其中X(OH)n中的X為堿金屬元素，選用鈉、鉀、鎂、鋅、鈣或鐵中的任一種，n為相應于原子的化合價數(shù)； 上述步驟(1)中所使用的催化劑可選用過渡金屬鈀鹽的三苯基磷絡合物或過渡金屬鎳鹽的三苯基磷絡合物，其種類包括氯化鈀，溴化鈀、硫酸鈀、醋酸鈀、草酸鈀、雙乙酰乙酸乙酯基鈀、雙乙酰丙酮基鈀、氯化鎳、溴化鎳、雙乙酰乙酸乙酯基鎳、醋酸鎳、草酸鎳或雙乙酰丙酮基鎳等；反應中催化劑的用量為0.5～30mol％，反應時間為0.5～10小時，反應溫度為50～150度。
步驟(1)中所使用的極性有機溶劑選用丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰氧胺(DMA)或六甲基磷酰三胺(HMPA)中的一種。
反應中使用的堿類為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鈣、碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀中的任一種。
本發(fā)明的再一個目的是提供反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物在制備防治缺氧、缺血性心腦血管疾病藥物中的應用?；蛟谥苽渲委熝芄Ｈ膊∷幬镏械膽谩?br> 本發(fā)明的合成方法設計合理，可以在使用過渡金屬絡合物催化劑催化作用下、富電子的溴代苯類化合物與丙烯酸甲酯的偶聯(lián)反應可容易的進行，并以良好的收率得到各種類衍生物。用本發(fā)明方法制備反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物，操作簡便、可靠，反應迅速。



圖1為經(jīng)本發(fā)明衍生物處理后內皮細胞的存活率。

具體實施例方式 本發(fā)明結合反應式、實施例和附圖作進一步的說明。
實施例1 反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)甲酯的制備 將1-溴-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)-3，4-二甲氧基苯(1.52g，4.0mmol)、丙烯酸甲酯(0.55mL，6.0mmol)、氯化鈀(71mg，0.4mmol)、三苯基膦(210mg，0.8mmol)、吡啶(2.0當量)、以及碳酸鈉(2.0當量)混溶于乙腈中，將此混合液加熱回流，薄層層析監(jiān)測反應終點。反應結束后，加水淬滅催化劑活性，加入鹽酸調pH至1，乙酸乙酯萃取(100mL×4)，合并萃取液并用無水硫酸鈉干燥，濃縮的得粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析得到四甲基丹酚酸F甲酯純品1.07克(2.8mmol，收率70％)。熔點101-102℃；1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.01(d，1H，J＝15.0Hz)，7.40(d，1H，J＝8.0Hz)，7.36(d，1H，J＝2.0Hz)，7.14-7.16(m，2H)，6.89(q，2H，J1＝8.0Hz，J2＝6.0Hz)，6.65(d，1H，J＝16.0Hz)，6.28(d，1H，J＝16.0Hz)，3.95(s，3H)，3.91(s，6H)，3.77(s，3H)，3.54(s，3H)；13C-NMR(125MHz，CDCl3)137.1，133.2，130.1，125.1，124.1，121.6，119.8，119.3，114.4，111.7，110.1，60.0，55.9，56.0，55.5，51.5； 實施例2 反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)的制備 將反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)甲酯(0.385克，1.0mmol)溶于乙醇(5.0mL)中，加入2.0當量濃度的氯化氫乙醇溶液(1.0mL)，混合物回流3小時。有白色沉淀析出，濾取沉淀，水洗濾餅，濾餅干燥后得反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)0.352克(收率95％)。熔點179-181℃；1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.01(d，1H，J＝15.0Hz)，7.40(d，1H，J＝8.0Hz)，7.36(d，1H，J＝2.0Hz)，7.14-7.16(m，2H)，6.89(q，2H，J1＝8.0Hz，J2＝6.0Hz)，6.65(d，1H，J＝16.0Hz)，6.28(d，1H，J＝16.0Hz)，3.95(s，3H)，3.91(s，6H)，3.77(s，3H)；13C-NMR(125MHz，CDCl3)137.1，133.2，130.1，125.1，124.1，121.6，119.8，119.3，114.4，111.7，110.1，60.0，55.9，56.0，55.5。
實施例3反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)的制備 將反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)甲酯(0.385克，1.0mmol)溶于乙醇(5.0mL)中，加入氫氧化鉀(1.0mmol)，混合物回流3小時。加鹽酸調pH至酸性，有白色沉淀析出，濾取沉淀，水洗濾餅，濾餅干燥后得反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸(四甲基丹酚酸F)0.34克(收率90％)。熔點179-181℃； 實施例4反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以溴化鈀代替氯化鈀，目標化合物以66％的得率被確認。
實施例5反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以醋酸鈀代替氯化鈀，目標化合物以65％的得率被確認。
實施例6反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以雙乙酰氧乙酸乙酯基鈀代替氯化鈀，目標化合物以22％的得率被確認。
實施例7反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是氯化鈀的投入量為0.0036克，目標化合物以28％的得率被確認。
實施例8反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是氯化鈀的投入量為0.213克，目標化合物以68％的得率被確認。
實施例9反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以草酸鈀代替氯化鈀，目標化合物以38％的得率被確認。
實施例10反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以雙乙酰氧丙酮基鈀代替氯化鈀，目標化合物以18％的得率被確認。
實施例11反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以硫酸鈀代替氯化鈀，目標化合物以12％的得率被確認。
實施例12反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以醋酸鎳代替氯化鈀，目標化合物以12％的得率被確認。
實施例13反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氯化鎳代替氯化鈀，目標化合物以2％的得率被確認。
實施例14反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以溴化鎳代替氯化鈀，目標化合物以42％的得率被確認。
實施例15反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以草酸鎳代替氯化鈀，目標化合物以14％的得率被確認。
實施例16反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以雙乙酰氧乙酸乙酯基鎳代替氯化鈀，目標化合物以5％的得率被確認。
實施例17反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以雙乙酰氧丙酮基鎳代替氯化鈀，目標化合物以42％的得率被確認。
實施例18反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以硫酸鎳代替氯化鈀，目標化合物以8％的得率被確認。
實施例19反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應時間為0.5小時，目標化合物以21％的得率被確認。
實施例20反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應時間為0.5小時，目標化合物以21％的得率被確認。
實施例21反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應時間為5小時，目標化合物以65％的得率被確認。
實施例22反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應時間為10小時，目標化合物以61％的得率被確認。
實施例23反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應溫度為40度，目標化合物以11％的得率被確認。
實施例24反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是反應溫度為100度，目標化合物以41％的得率被確認。
實施例25反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙酮代替乙腈，目標化合物以22％的得率被確認。
實施例26反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以二甲基甲酰胺(DMF)代替乙腈，目標化合物以61％的得率被確認。
實施例27反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以碳酸鉀代替碳酸鈉，目標化合物以55％的得率被確認。
實施例28反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氫氧化鈉代替碳酸鈉，目標化合物以59％的得率被確認。
實施例29反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氫氧化鉀代替碳酸鈉，目標化合物以51％的得率被確認。
實施例30反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氫氧化鋰代替碳酸鈉，目標化合物以66％的得率被確認。
實施例31反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以磷酸鉀代替碳酸鈉，目標化合物以23％的得率被確認。
實施例32反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以磷酸氫二鉀代替碳酸鈉，目標化合物以12％的得率被確認。
實施例33反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以磷酸鈉代替碳酸鈉，目標化合物以18％的得率被確認。
實施例34反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以磷酸氫二鈉代替碳酸鈉，目標化合物以35％的得率被確認。
實施例35反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氫氧化鎂代替碳酸鈉，目標化合物以32％的得率被確認。
實施例36反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以氫氧化鈣代替碳酸鈉，目標化合物以30％的得率被確認。
實施例37反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸乙酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙烯酸乙酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以56％的得率被確認。Mp180～181度。
實施例38反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸丙酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙烯酸丙酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以60％的得率被確認。Mp176～178度。
實施例39反式反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸異丙酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙烯酸異丙酯酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以59％的得率被確認。
實施例40反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸正丁酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙烯酸正丁酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以66％的得率被確認。
實施例41反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸異丁酯的制備 操作參照實施例1，只是以丙烯酸異丁酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以50％的得率被確認。
實施例42反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以66％的得率被確認。熔點180-181℃.1H-NMR(500MHz，CDCl3)7.96(d，1H，J＝15.0Hz)，7.34(d，1H，J＝8.0Hz)，7.25(d，1H，J＝2.0Hz)，7.14-7.16(m，2H)，6.89(q，2H，J1＝8.0Hz，J2＝6.0Hz)，6.65(d，1H，J＝16.0Hz)，6.28(d，1H，J＝16.0Hz)，5.28(s，2H)，3.90(s，3H)，3.77(s，3H)，3.76(s，3H)，3.54(s，3H)。
實施例43反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸甲酯代替反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以96％的得率被確認。熔點231-233℃。1H-NMR(500MHz，DMSO)7.74(d，1H，J＝16.0Hz)，7.51(d，1H，J＝9.0Hz)，7.02-7.06(m，3H)，6.91(s，2H)，6.47(d，1H，J＝16.5Hz)，6.29(d，1H，J＝16.0Hz)，3.84(s，3H)，3.77(s，3H)，3.67(s，3H)。
實施例44反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸乙酯的制備 操作參照實施例42，只是以丙烯酸乙酯代替丙烯酸甲酯，目標化合物以53％的得率被確認。
實施例45反式3-[3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基甲氧基苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以80％的得率被確認。
實施例46反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以98％的得率被確認。
實施例47反式3-[3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以46％的得率被確認。
實施例48反式3-[3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以96％的得率被確認。
實施例49反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以65％的得率被確認。
實施例50反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以93％的得率被確認。
實施例51反式3-[3，4-二甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-(3，4-二甲氧基甲氧基)-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以66％的得率被確認。
實施例52反式3-[3，4-二甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3，4-二甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以89％的得率被確認。
實施例53反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例1，只是以反式1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯代替1-溴-3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯，目標化合物以60％的得率被確認。
實施例54反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例3，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-[(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)]苯基丙烯酸甲酯，目標化合物以80％的得率被確認。
實施例55反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作過程將3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸溶于3N HCl/THF溶劑中，50℃攪拌3h，反應結束，減壓除去溶劑，柱層析分離，得目標化合物321mg，收率90％。1H-NMR(500MHz，DMSO)7.74(d，1H，J＝16.0Hz)，7.51(d，1H，J＝9.0Hz)，7.02-7.06(m，3H)，6.91(s，2H)，6.47(d，1H，J＝16.5Hz)，6.29(d，1H，J＝16.0Hz)，3.84(s，3H)，3.77(s，3H)，3.67(s，3H)。
實施例56反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例55，只是以3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以93％的得率被確認。
實施例57反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸乙酯的制備 操作參照實施例55，只是以3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸乙酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以90％的得率被確認。
實施例58反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二羥基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例55，只是以3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以90％的得率被確認。
實施例59反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二羥基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例55，只是以3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以92％的得率被確認。
實施例60反式3-[3-羥基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以86％的得率被確認。
實施例61反式3-[3-羥基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以89％的得率被確認。
實施例62反式3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3，4-二甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以93％的得率被確認。
實施例63反式3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3，4-二甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以93％的得率被確認。
實施例64反式3-[3-甲氧基-4-羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以92％的得率被確認。
實施例65反式3-[3-甲氧基-4-羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以95％的得率被確認。
實施例66反式3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例55，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基甲氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以89％的得率被確認。
實施例67反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-乙酰氧基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作過程將3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸溶于無水DMF，加入2當量的乙酰氯，100℃攪拌過夜，減壓除去DMF，乙酸乙酯溶解后，無水硫酸鈉干燥，柱層析分離，收率85％。1H-NMR(500MHz，DMSO)7.74(d，1H，J＝16.0Hz)，7.51(d，1H，J＝9.0Hz)，7.02-7.06(m，3H)，6.91(s，2H)，6.47(d，1H，J＝16.5Hz)，6.29(d，1H，J＝16.0Hz)，3.84(s，3H)，3.77(s，3H)，3.67(s，3H)，2.27(s，3H)； 實施例68反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-乙酰氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羥基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以85％的得率被確認。
實施例69反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二乙酰氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二羥基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以68％的得率被確認。
實施例70反式3-[3-乙酰氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3-羥基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以78％的得率被確認。
實施例71反式3-[3-乙酰氧基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3-羥基-4-甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以75％的得率被確認。
實施例72反式3-[3，4-二乙酰氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以72％的得率被確認。
實施例73反式3-[3，4-二乙酰氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3，4-二羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以70％的得率被確認。
實施例74反式3-[3-甲氧基-4-乙酰氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3-甲氧基-4-羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以75％的得率被確認。
實施例75反式3-[3-甲氧基-4-乙酰氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸的制備 操作參照實施例67，只是以反式3-[3-甲氧基-4-羥基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸代替3-[3，4-二甲氧基-2-(3-羥基-4-甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸，目標化合物以78％的得率被確認。
實施例76反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸鈉鹽的制備 操作過程反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸(370mg，1.0mmol)溶于含有氫氧化鈉(40mg，1.0mmol)的乙醇(5mL)中，混合物室溫攪拌10分鐘，加入水30mL，混合液0℃保持3小時，濾取析出的結晶，得目標化合物349mg，收率89％。Mp277～278℃。
實施例77反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸鋰鹽的制備 操作過程反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸甲酯(370mg，1.0mmol)溶于含有氫氧化鋰(84mg，2.0mmol)的乙醇(5mL)中，混合物60℃攪拌10分鐘，加入水30mL，混合液0℃保持3小時，濾取析出的結晶，得目標化合物257mg，收率68％。Mp272～274℃。
實施例78反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸對缺氧低糖誘導血管內皮細胞損傷的保護作用 藥品與試劑 高糖DMEM、高糖DMEM培養(yǎng)基購于美國GIBICO公司，胎牛血清、新生小牛血清購于杭州四季青生物工程材料研究所，I型膠原酶和四氮唑藍為Sigma公司產(chǎn)品，其它試劑均為國產(chǎn)和進口分析純試劑。試驗所使用的細胞培養(yǎng)用人臍靜脈內皮EA.hy926細胞系為永生化細胞株。
細胞培養(yǎng) 人臍靜脈內皮EA.hy 926細胞用高糖DMEM培養(yǎng)液(含10％滅活國產(chǎn)胎牛血清)在37℃、飽和空氣濕度、含5％CO2的培養(yǎng)箱內常規(guī)傳代培養(yǎng)，細胞在培養(yǎng)瓶中呈單層貼壁生長。細胞長至融合，倒去培養(yǎng)液，PBS清洗2-3次，0.25％胰蛋白酶消化收集細胞，制成單細胞懸液。
體外低糖缺氧模型(Oxygen-Glucose Deprivation，OGD)構建 將單細胞懸液移入96孔板(3×103cells/well)，于5％CO2培養(yǎng)箱內37℃培養(yǎng)，細胞完全融合時加入不同處理空白對照組在正常條件下培養(yǎng)；OGD模型組及受試藥物處理組每孔用預熱至37℃的HBSS(NaCl 8.00g，KCl0.20g，CaCl2 0.14g，MgSO4.7H2O 0.20g，Na2HPO4.H2O 0.06g，KH2PO4 0.06g，NaHCO3 0.35g)清洗三次，并換入相同培養(yǎng)基，先放入缺氧密閉小室(美國Billups-Rothenberg公司產(chǎn)品，MIC-101)通入混合氣體(含95％N2，5％CO2)，然后將密閉小室放入37℃孵箱處理6h，最后換入正常高糖DMEM培養(yǎng)基，并加入20μL 0.5％MTT，輕輕搖勻后培養(yǎng)箱中孵育4h。加入150μLDMSO后，在酶標儀上以570nm波長測定吸光度，觀察細胞的形態(tài)學變化并檢測在不同濃度藥物處理后內皮細胞的存活率。
實驗結果 反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸(10-10-10-6μmol/L)在OGD模型制作前1h加入培養(yǎng)基直至實驗結束。實驗結果可見反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸10-10～10-6μmol/L可以有效降低人臍靜脈內皮EA.hy926細胞死亡率，且呈一定的劑量依賴性(P＜0.05)。參見圖1，反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸可以有效減少血管內皮細胞死亡率。
實施例79反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對亞硝酸鹽中毒小鼠生存時間的影響 藥品與試劑 健康ICR小鼠，體重18～22g，雄性，由浙江省實驗動物中心提供。隨機分為五組，空白對照組0.9％生理鹽水0.1ml/10g；復方丹參注射液20mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸小劑量組2mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸中劑量組10mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸大劑量組20mg/kg。15min后各組小鼠分別腹腔注射亞銷酸鈉0.1ml/10g，放回鼠籠中，記錄小鼠存活時間。
實驗結果 亞銷酸鈉作為一種強氧化劑，進入血液后可使血紅蛋白中的二價鐵氧化成三價鐵，使其喪失攜帶氧的能力而致機體缺氧。與模型組比較，DF低、中、高劑量組缺氧小鼠的存活時間均明顯延長并呈劑量依賴性，參見表1。
表1為不同濃度的反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對急性亞銷酸鈉中毒小鼠存活時間的影響(

±SD，n＝9)。表中DF即反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸。(與亞硝酸鹽對照組比較，**P＜0.01)。
表1
實施例80反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對小鼠常壓缺氧耐受性的影響 操作方法 健康ICR小鼠，體重18～22g，雄性，由浙江省實驗動物中心提供。小鼠隨機分為五組，空白對照組0.9％生理鹽水；復方丹參注射液組20mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸小劑量組2mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸中劑量組10mg/kg；反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸大劑量組20mg/kg。15min后將各組小鼠分別放入容積為300ml的廣口并磨口的缺氧瓶內(每個缺氧瓶預先放人鈉石灰5g)，每瓶放1只小鼠，常規(guī)密閉記錄存活時間(指標小鼠呼吸停止)。給藥容量均為0.1ml/10g。
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，統(tǒng)計學分析采用Dunnett-t檢驗。
實驗結果 與對照組相比，實驗結果顯示DF各劑量組可以明顯延長受試小鼠的存活時間。證明反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸具有增強小鼠抗缺氧能力的作用，并呈明顯的量效關系，與模型組比較差異有顯著性意義(*P＜0.05或**P＜0.01)，參見表2。由于心肌和大腦組織是對缺氧(缺血)反應最為敏感的組織器官之一，因此本實驗結果提示反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二一甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對增強小鼠的抗缺氧(缺血)能力可能有明顯作用。
表2是不同濃度的反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對缺氧小鼠存活時間的影響(

±SD，n＝9)。表中DF即反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸。(與對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01)。
表2
實施例81反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3，4-二甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸對大腦中動脈缺血再灌注大鼠腦損傷的保護作用 操作方法 SD雄性大鼠，體重220-270g。采用10％水合氯醛麻醉固定，頸正中切口，依次分離左側頸總動脈、頸外、頸內動脈、頸總動脈與頸外動脈近心端結扎，在距頸內、頸外動脈分叉之前剪口，插入直徑統(tǒng)一的尼龍線栓(造成大腦中動脈腦缺血現(xiàn)象)，90min后尼龍線栓退出(造成腦缺血再灌注現(xiàn)象)，皮膚逐層縫合。
實驗分組如下假手術組、大腦中動脈腦缺血+藥物治療組(低劑量)，大腦中動脈腦缺血+藥物治療組(中劑量)，大腦中動脈腦缺血+藥物治療組(高劑量)每組動物6只。實驗藥物采用腹腔注射，腦缺血損傷前60分和再灌注后兩次給藥。
24小時后按照Longa法對實驗動物進行神經(jīng)功能障礙評價，主要觀察動物行為變化、眼球震顫、共濟失調和運動障礙等一系列神經(jīng)功能損害的表現(xiàn)。評分標準如下0分無神經(jīng)功能缺損癥狀；1分為不能完全伸展對側前爪；2分為向外側轉圈；3分為向對側傾倒；4分為不能自發(fā)行走，意識喪失。
梗塞面積測定實驗動物大腦標本，去掉嗅球、小腦和低位腦干，用大鼠腦模冠狀切片(片厚2mm)，腦片用紅四氮唑(TTC)進行組織染色觀察。生理鹽水配置的1％TTC在37℃避光染色30min。選取大腦中動脈供血障礙后受影響最明顯的腦片(約在前囟后0.8mm-2.8mm之間的部位)，用微機化圖象分析系統(tǒng)(IMAGE J，美國NIH)計算同一位置腦片上梗塞面積占該腦片面積的百分比。
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，統(tǒng)計學分析采用Dunnett-t檢驗。
實驗結果 與腦缺血模型組相比，實驗結果顯示藥物治療組(小劑量)，藥物治療組(中劑量)，藥物治療組(高劑量)三組都得到比腦缺血模型組較低的神經(jīng)功能障礙評分(P＜0.05或P＜0.01)。此外。藥物治療組(中劑量)，藥物治療組(高劑量)兩組都得到比腦缺血模型組有較小的梗塞面積(P＜0.05)。證明反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸可以有效減少腦梗塞面積，同時有效改善了神經(jīng)功能障礙。
表3為不同濃度的反式3-[3，4-二甲氧基-2-(3-甲氧基-4-甲氧基甲氧基)苯乙烯基]苯基丙烯酸對大腦中動脈缺血再灌注損傷后神經(jīng)功能障礙及梗塞面積的影響(

±SD，n＝6)。表中DF即反式3-{3，4-二甲氧基-2-[(3-甲氧基-4- 甲氧基甲氧基)苯乙烯基]}苯基丙烯酸。(與腦缺血模型組比較，*P＜0.05；*P＜0.01)。
表3

本發(fā)明涉及的參考文獻
1Chinese Chemical Letter，1996，10(7)，888-891
2Tetrahydron，1999，55，6923-6930
權利要求
1.一種反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯衍生物，具有以下結構通式
其中
R1、R2、R3、R4相同或不同，其種類為氫原子、甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、特丁基、2-異戊烯基、乙?；?、苯甲酰基中任一種官能團，但R1、R2、R3、R4不能同時是氫原子或甲基；
X為氫原子、甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、苯基、芐基的脂肪族、芳香族官能團中的任一種，或者X是鈉原子、鉀原子、鎂原子、鈣原子、鋰原子、鋅原子或鐵原子中的任一種。
2.反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物的制備方法，通過以下步驟實現(xiàn)
(1)在反應器中投入稱量好的過渡金屬絡合物催化劑、1-溴-2-(3，4-二取代苯乙烯基)-3，4-二取代苯、丙烯酸酯類化合物、無機堿、有機堿混溶于極性有機溶劑中，將此混合液加熱回流，反應結束后，加水淬滅催化劑活性，加入鹽酸調pH至2，有機溶劑萃取，萃取液用無水硫酸鈉干燥，將濃縮后得到的粗產(chǎn)物經(jīng)重結晶或柱層析后得到中間體烷基酯I的純品，
反應式1
(2)將烷基酯I在酸性條件下水解、重結晶或柱層析精制后得到化合物II的純品，
反應式2
(3)將丙烯酸衍生物II經(jīng)堿性條件下水解后所得粗產(chǎn)物再經(jīng)重結晶精制后制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸鹽衍生物III的純品，
反應式4
3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于
步驟(2)為烷基酯I衍生物經(jīng)堿性條件下水解后再經(jīng)酸中和反應，所得粗產(chǎn)物再經(jīng)精制后分別制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物II的純品，
反應式3
4.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于
步驟(3)為烷基酯衍生物I經(jīng)堿性條件下水解后所得粗產(chǎn)物再經(jīng)重結晶等方法精制后制得3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸鹽衍生物II的純品；
反應式5
5.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所用的催化劑選用過渡金屬鈀鹽的三苯基磷絡合物或過渡金屬鎳鹽的三苯基磷絡合物，催化劑的用量為0.5～30mol％，反應時間為0.5～10小時，反應溫度為50～150度。
6.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)所用的極性有機溶劑選用丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰氧胺或六甲基磷酰三胺中的一種。
7.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于制備中使用的堿選用氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化鈣、碳酸鈉、碳酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀、磷酸氫二鈉或磷酸氫二鉀中的任一種。
8.根據(jù)權利要求1所述的反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物在制備防治缺氧、缺血性心腦血管疾病藥物中的應用。
9.根據(jù)權利要求1所述的反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物在制備治療血管梗塞疾病藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯衍生物，通過將1-溴-2-(3，4-二取代苯乙烯基)-3，4-二取代苯、丙烯酸酯類化合物、無機堿、有機堿混溶于極性有機溶劑中，經(jīng)過渡金屬絡合物催化，加酸調pH，有機溶劑萃取，干燥，濃縮后重結晶得到中間體烷基酯I，經(jīng)酸水解、重結晶后得化合物II，在堿性條件下水解，重結晶得到目的化合物。本發(fā)明的方法設計合理，有良好的收率得到各種類衍生物，可在制備防治缺氧、缺血性心腦血管疾病，或治療血管梗塞疾病藥物中的應用。用本發(fā)明方法制備反式3-[3，4-二取代-2-(3，4-二取代苯乙烯基)]苯基丙烯酸衍生物，操作簡便、可靠，反應迅速。本發(fā)明化合物結構通式
文檔編號C07C51/09GK101759560SQ20101003966
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月12日 優(yōu)先權日2010年1月12日
發(fā)明者張辰, 韓峰, 戚劍峰, 盧英梅, 樓宜嘉 申請人:浙江大學