專利名稱：：一種煙梗中倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于煙草化學(xué)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及煙梗中一種新的倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。倍半萜(sesquiterpenes)是指分子中含15個碳原子的天然萜類化合物。倍半萜類化合物分布較廣，在木蘭目(magnoliales)、蕓香目(rutales)、山茱萸目(cornales)及菊目(asterales)植物中最豐富。在植物體內(nèi)常以醇、酮、內(nèi)酯等等形式存在于揮發(fā)油中，是揮發(fā)油中高沸點(diǎn)部分的主要組成部分。多具有較強(qiáng)的香氣和生物活性，是醫(yī)藥、食品、化妝品工業(yè)的重要原料。煙梗是煙葉的粗梗葉脈，約占葉重的25%-30%。煙梗是煙草工業(yè)的副產(chǎn)物，目前多作棄置處理。研究表明，煙梗中含有多種有用的化學(xué)成分，其特殊天然植物素，如煙堿、果膠、煙酸及茄呢醇等，在精細(xì)化工、日化、食品、輕工、醫(yī)藥等行業(yè)都有著廣泛的應(yīng)用。我國是煙草大國，每年有數(shù)十萬噸煙梗資源被廢棄，既造成環(huán)境污染，同時也是對自然資源的浪費(fèi)。目前，已有從煙草廢棄物中提取煙堿、茄尼醇、植物蛋白等，這些研究成果為煙草廢棄物綜合利用開辟了一條新途徑。本發(fā)明從煙梗中分離得到了一種具有生物活性的倍半萜類化合物，為煙梗的綜合利用提供了新途經(jīng)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種新的倍半萜類化合物。本發(fā)明的另一個目的是提供一種從煙梗中提取所述化合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供所述化合物在抗菌和抗腫瘤中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。*除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。A.本發(fā)明從煙梗中分離出一種新的倍半萜類化合物，該化合物具有顯著的抗菌和抗腫瘤活性。本發(fā)明的新的倍半萜化合物具有下述結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>該化合物的命名為煙草倍半萜A。B.本發(fā)明提供了一種所述化合物的制備方法，該方法采用以下步驟
背景技術(shù)：
：1.煙梗樣品粉碎后以二氯甲烷分3次用超聲提取；2.合并提取液，并將提取液濃縮成浸膏；3.浸膏用硅膠柱層析初分，然后采用高效液相半制備色譜進(jìn)一步分離，即得到所需的該新化合物。C.本發(fā)明對所述的新化合物進(jìn)行了抗菌和抗腫瘤活性檢測，化合物顯示出良好的抗菌活性和抗腫瘤效果，可為醫(yī)藥工業(yè)提供有藥用價值的新化合物或先導(dǎo)化合物。圖1為化合物的高分辨質(zhì)譜(HRESIMS);圖2為化合物的核磁共振氫譜CHNMR);圖3為化合物的核磁共振炭譜(13CNMR);圖4本發(fā)明化合物和Caryolane-l，9P-diol結(jié)構(gòu)對比；圖5本發(fā)明化合物的主要HMBC相關(guān)；具體實(shí)施例方式通過下面給出的具體實(shí)施例和典型應(yīng)用實(shí)施例，可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明。但它們并不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。實(shí)施例1——化合物的制備煙梗樣品采于云南玉溪。將煙梗樣品取樣2.0kg粉碎到30目，用二氯甲烷超聲提取3次，提取液合并，并濃縮成浸膏，得浸膏42.5g。浸膏用80g粗硅膠(80-100目)拌樣，i.5kg硅膠(160-200目)裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用環(huán)己烷乙酸乙脂(i:o—o:i)梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個部分(純環(huán)己烷、環(huán)己烷-乙酸乙脂9:1、環(huán)己烷-乙酸乙脂8:2、環(huán)己烷-乙酸乙脂3:2、環(huán)己烷-乙酸乙脂i:1、環(huán)己烷-乙酸乙脂l:2、純乙酸乙酯)，其中環(huán)己烷-乙酸乙脂(8:2)洗脫部分3.5g用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以80%的甲醇為流動相，ZorbaxSB_C18(9.4X250mm，5ym)半制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為220nm，每次進(jìn)樣50yL，收集13.8min的色譜峰，多次累加后蒸干，再次用純甲醇溶解，再以甲醇為流動相，用S印hadexLH-20凝膠柱層析分離，即可得本發(fā)明的化合物。實(shí)施例2——化合物的鑒定表-1化合物的^和13CNMR數(shù)據(jù)(CDC13)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發(fā)明化合物為無色油狀物；HRESIMS(圖_1)顯示本發(fā)明化合物準(zhǔn)分子離子峰m/z275.1990[M+Na]+(計算值為275.1987)，結(jié)合"H和13CNMR譜(圖_2和圖-3，數(shù)據(jù)歸屬見表-l)給出其分子式(:16112802，不飽和度為3。^和"CNMR譜信號表明除一個甲氧基外，化合物分子骨架中有15個炭、25個氫，由于分子中沒有雙鍵，可初步推測該化合物為三環(huán)倍半萜?；衔锓肿又杏?個甲基、1個甲氧基，3個季炭(包括1個氧化的季炭)，3個次級甲基(包括1個氧化的次甲基)，6個亞甲基。本發(fā)明化合物的"C-NMR數(shù)據(jù)與已知化合物Caryolane-l，9P-dio1(圖-4)比較表明兩者非常相似，不同之處僅為本發(fā)明化合物中多了一個甲氧基信號，經(jīng)HMBC相關(guān)(圖-5)證實(shí)本發(fā)明化合物中甲氧基取代在C-6位，并近一步經(jīng)過ROESY相關(guān)譜證實(shí)了本發(fā)明化合物的立體結(jié)構(gòu)。至此，化合物的結(jié)構(gòu)式最終被確定，命名為煙草倍半萜A。實(shí)施例3——本發(fā)明化合物的體外抗腫瘤活性檢測供試驗細(xì)胞分別為人肝癌細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞和小鼠黑色素肉瘤細(xì)胞，細(xì)胞用含10%小牛血清的RPM11640在37°C，5%C02條件下培養(yǎng)，細(xì)胞存活率用MTT染色，MTT在活細(xì)胞線粒體脫氫酶作用下，發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成甲臢結(jié)晶，該結(jié)晶溶于二甲基亞砜(DMS0)中顯藍(lán)紫色，在595nm處有較大光吸收，參考波長655nm，細(xì)胞存活率按下式計算細(xì)胞存活率(％)=(實(shí)驗組A595/對照組A595)X100%將5X107個/L的細(xì)胞加入96孔板中，每孔100yL，培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的本發(fā)明化合物(溶于DMS0，匿S0在培養(yǎng)體系的終濃度為0.05%)，陽性對照孔每孔加入不同濃度的長春新堿，共設(shè)7個濃度(500，200，100，50，20，10，5mg/L)，每個濃度設(shè)6個平行。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，小心吸去藥液，每孔內(nèi)分別加入10iiLMTT(5mg/L)和90yL新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸去培養(yǎng)液，加入100iiLDMS0，振蕩5min，在ELISA酶標(biāo)儀上測出A595。以不加本發(fā)明化合物的細(xì)胞存活率為100%，由本發(fā)明化合物濃度的對數(shù)值和抑制率作線形回歸，求出藥物對3種細(xì)胞的生長半抑制濃度(IC5。)；結(jié)果表明本發(fā)明化合物對人肝癌細(xì)胞、人宮頸癌細(xì)胞、和小鼠黑色素肉瘤細(xì)胞1(:5。分別為148.2，62.3，151.2。說明本專利化合物具有一定的抗腫瘤活性，對人宮頸癌細(xì)胞活性更明顯。實(shí)施例4——本化合物的平板抑菌實(shí)驗經(jīng)試驗用細(xì)菌為大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌，經(jīng)孵育6-18h的3種菌液分別接種于瓊脂平皿上，均勻涂布于整個平板。在平板上置小鋼管，每個鋼管中加濃度為100mg/L的本發(fā)明化合物200yL(溶于匿SO中，DMSO在培養(yǎng)體系中的最終濃度為4%)，陽性對照每管中加100mg/L的氯霉素200iiL，陰性對照每管中加DMS0(4%)200yL，于37°C孵箱中培養(yǎng)，24h后測抑菌圈(有效藥物可在鋼管周圍出現(xiàn)一圈不長菌的區(qū)域，稱抑菌圈)直徑，重復(fù)3次。實(shí)驗結(jié)果顯示本化合物對金黃色葡萄球菌具有明顯的抑制活性。權(quán)利要求一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物FSA00000051549200011.tif2.權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，該方法采用以下步驟(1)煙梗樣品粉碎后以二氯甲烷分3次用超聲提取，合并提取液；(2)提取液減壓濃縮成浸膏；(3)浸膏用硅膠柱層析初分，然后采用高效液相半制備色譜進(jìn)一步分離，即得到所需的化合物。3.權(quán)利要求l所述的化合物作為抑菌劑的應(yīng)用。4.權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療或預(yù)防腫瘤的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種新穎的倍半萜化合物(A)及其制備方法和應(yīng)用。系將煙梗樣品粉碎后以二氯甲烷分3次用超聲提取，提取液減壓濃縮成浸膏，浸膏用硅膠柱層析初分，然后采用高效液相半制備色譜進(jìn)一步分離，即得到所需新化合物。對該化合物進(jìn)行了體外抗菌和抗腫瘤活性篩選，實(shí)驗結(jié)果顯示本發(fā)明的化合物具有較強(qiáng)的抗菌和抗腫瘤活性。文檔編號C07C41/36GK101792375SQ20101012162公開日2010年8月4日申請日期2010年3月11日優(yōu)先權(quán)日2010年3月11日發(fā)明者李忠,王嵐,繆明明,蔣次清,陳永寬,馬燕申請人:云南煙草科學(xué)研究院