專利名稱：：4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬化合物制備及用途，主要涉及4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物的制備，以及在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：依托泊苷和替尼泊苷是目前臨床上使用的抗腫瘤藥物，它們都是4’-0-去甲基表鬼臼毒素的半合成衍生物。4’-0_去甲基表鬼臼毒素類衍生物可通過抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性，破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。盡管上述的兩個(gè)化合物已經(jīng)在臨床上使用多年，但仍存在水溶性差，骨髓抑制，容易產(chǎn)生耐藥性等問題，從而限制了其應(yīng)用。因此，為了克服上述缺點(diǎn)，尋找更為高效低毒的鬼臼毒素類化合物，研究者對鬼臼毒素進(jìn)行了一系列結(jié)構(gòu)改造工作。在總結(jié)鬼臼毒素的結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系的基礎(chǔ)上，1999年ClaudeMonneret等人提出了鬼臼毒素類化合物的構(gòu)效關(guān)系間二氧戊環(huán)是最佳選擇；E環(huán)自由旋轉(zhuǎn)和2α、3β構(gòu)型是活性所必需的；4β構(gòu)型的抗腫瘤活性明顯高于4α構(gòu)型；4位是有效的修飾位點(diǎn)，依托泊苷糖苷部分用氨基取代有利于提高化合物對DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制活性，同時(shí)引起DNA鏈的斷裂。值得注意的是，一些4β-芳基胺類鬼白毒素衍生物不僅對一些依托泊苷耐受的腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒活性，還能降低DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II的表達(dá)或降低多藥耐受(MDR)蛋白的過表達(dá)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物，主要指4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，具有下述結(jié)構(gòu)通式(I)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>(I)其中X表示-(CH2)η_，η為O2或-CH=CH-；R1,R2,R3,R4,R5相同或不同，R1,R2,R3,R4,R5為氫原子、鹵原子、羥基、硝基、含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或含1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基；本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。初步的體外篩選發(fā)現(xiàn)它們對多種腫瘤細(xì)胞株，包括95D，A549，KB,KB/VCR等均有較好的抑制增殖作用，顯示出較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，其中化合物GL2，GL3的作用尤為突出，對上述細(xì)胞株的IC5tl值在0.4216.43μM之間。進(jìn)一步的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，化合物GL3在100mg/kg的大劑量給藥條件下，抑瘤率達(dá)到58.1%，比陽性對照藥物順鉬的抑瘤率高13.7%，這一結(jié)果表明該類化合物在提高對腫瘤的抑制作用的同時(shí)，能夠很好地降低其毒性。對人高轉(zhuǎn)移性肺癌95D裸小鼠移植瘤的抑制作用發(fā)現(xiàn)，化合物GL3的抑瘤率達(dá)到57.3%。本發(fā)明的特點(diǎn)是利用現(xiàn)有的抗腫瘤藥物依托泊苷作為先導(dǎo)化合物，通過結(jié)構(gòu)改造，合成一系列具有抗腫瘤活性的化合物，以期發(fā)現(xiàn)抗腫瘤活性較高、毒性較低、對多藥耐藥腫瘤有效的抗腫瘤藥物。初步的體外篩選和體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，這些化合物具有較好的抗腫瘤活性，其中化合物GL3在提高對腫瘤抑制作用的同時(shí)，其毒性也明顯降低。具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。以下的實(shí)施例是說明本發(fā)明的，而不是以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1本發(fā)明的合成通式為H2N-NH2——~H2N-<^^>—NHBocIII/^^―NHBocοφ^^^οοφ^OO^MeO^^OMeMeO^^OMeMeO^^^OMeOHOHOHTTl[VVH1^nh23hc'H々V^第四步第五步.p-^^K^r5R4^^<οΛΧΧ(0f^N0οOH0HV1通式I實(shí)施例2化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”-對甲氧基苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GLl)的制備第一步(參照文獻(xiàn)方法:FrancescoTroisietal.TetrahedronLetters2007,48,7986-7989)將5.05g二碳酸二叔丁酯(Boc2O,23mmol)溶解于二氧六環(huán)中，在冰浴條件下，滴加入5g對苯二胺(化合物I，46.3mmol)的二氧六環(huán)溶液中，滴加完后在室溫下攪拌過夜，然后將反應(yīng)溶液減壓濃縮，用硅膠色譜純化剩下的殘余物(洗脫劑乙酸乙酯/石油醚=7/3)，得化合物II，收率92.7%；黃色固體，熔點(diǎn)108.9-113.7°C.第二步在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將5g依托泊苷(化合物III，8.5mmol)與5.Ilg碘化鈉(34mmol)溶于50mL無水乙腈中；另將干燥的4.3mL三甲基氯硅烷溶于30mL無水乙腈中，在冰浴條件下，將此溶液緩慢滴加到反應(yīng)液中，滴加完畢后，室溫?cái)嚢?小時(shí)，得到中間體4’-0-去甲基-4-脫氧-4-碘代表鬼白毒素(化合物IV)，無需純化，直接進(jìn)行下步反應(yīng).第三步在化合物IV的反應(yīng)液中加入5.Ig無水碳酸鋇(34mmol)，攪拌10分鐘，加入無水三乙胺將反應(yīng)液調(diào)至堿性，加入2.12g化合物11(10.2mmol)，室溫?cái)嚢?215小時(shí)；將反應(yīng)液抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠色譜純化剩下的殘余物(洗脫劑乙酸乙酯/石油醚=1/1)，得化合物V，收率85.7%，黃色固體，熔點(diǎn)136.1138.6/ΗNMR(500MHz,CDCl3)δ7.20-7.21(m,2Η,)，6·74(s，1Η)，6·51(s,1Η)，6·48-6.50(d,J=9.0Ηζ，2Η)，6.36(ws,1Η),6.33(s,2Η),5.95and5.97(d,J=10.5Hz，2Η)，5·47(ws，1Η)，4·61(m，1Η)，4.57-4.58(d,J=5.OHz,1Η)，4.34-4.37(t,J=8.OHz,1Η)，3.96-4.00(m,1Η)，3.79(s,6Η)，3.13-3.16(dd,J=5.OHz,1Η)，2.94-3.01(m,1Η).第四步將3.Ig化合物V(5.24mmol)溶于30mL無水乙酸乙酯溶液中，將干燥的HCl氣體通入反應(yīng)液中，在0°C以下進(jìn)行反應(yīng)3小時(shí)；將反應(yīng)液抽濾，得到的固體為化合物VI，收率95.7%,黃色固體，熔點(diǎn)183.3186.3°C,1HNMR(500MHz,DMS0)δ9.93(s,1H)，7.11-7.13(m，2H，)，6·76-6.77(m，3H)，6.54(s，1H)，6·25(m，2H)，6.33(s，2H)，5·96and5.99(d,J=10.5Hz,2H)，4.85(m,1H)，4.50-4.51(d,J=5.OHz,1H)，4.33-4.35(m,2H)，3.64(s，6H)，3.27-3.28(dd,J=5.OHz,1H)，2.96-3.03(m,1H).第五步將IlOmg化合物VI(0.18mmol)溶于5mL無水二氯甲烷溶液中，加入三乙胺將溶液調(diào)至堿性，攪拌片刻后，加入36mg1-羥基苯并三唑(H0Bt，0.27mmol)，28mg對甲氧基苯甲酸(0.18mmol)，并在冰浴下加入38mg1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl,0.20mmol)，攪拌5分鐘后，室溫反應(yīng)5_8小時(shí)；將反應(yīng)液倒入水中，萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥；將有機(jī)相減壓濃縮，用硅膠柱色譜純化剩下的殘余物(洗脫劑乙酸乙酯/石油醚=1/1)，得到GLl，產(chǎn)量65mg,收率56.7%，黃色固體，熔點(diǎn)=143.8-145.7°C，1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.82(d,J=8.5Hz，2H，2”，，6”，-H)，7·65(s,1H,-C0NH-)，7·44(d,J=8.0Ηζ，2Η，3”，5”-Η)，6·96(d,J=8.5Ηζ，3”，，5”，-H)，6·76(s,1Η，5_Η)，6·55(d,J=9.0Hz，2H，2”，6”-H)，6.52(s，lH，8-H)，6.34(s，2H，2，，6，-H)，5.95and5.97(ABq,J=1.0Ηζ，2Η，-OCH2O-)，4.69(m，lH，4-H)，4.61(d，J=5.0Hz，1H，1_H)，4.39(t，J=8.0Hz，1H,11-H),4.02(t,J=8.0Hz，1H，11-H)，3.91(s，3H，-OCH3)，3.83(s，6H，3，，5，-OCH3),3.16(dd,J=5.OHz，14.OHz，1H,2-H)，3.04(m,1H,3-H)·ESI-MS:m/z[M+H]+625.實(shí)施例3:化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對氟苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GL2)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對氟苯甲酸代替對甲氧基苯甲酸。得到黃色固體，收率57%，熔點(diǎn)157·2-158.9°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.86(m，2H，2”，，6”，-H),7.66(s,1H，-C0NH-)，7.44(d,J=8.5Hz，2Η，3”，5”_Η)，7·14(t,J=8.5Hz，3”，，5”，_Η)，6·76(s,1Η,5-Η)，6.55(d,J=9.ΟΗζ，2Η，2”，6”-H)，6.52(s，1Η，8_Η)，6.34(s，2Η，2，，6，-H)，5.95and5.97(ABq,J=1.OHz，2Η，-OCH2O-)，4.66(m,1H,4-H)，4.59(d,J=5.5Hz,1H,1-H)，4.36(t,J=8.0Hz,1H,11-H),3.98(t,J=8.ΟΗζ,1H,11-H)，3·85(br,1H,-C0NH)，3.79(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.13(dd,J=5.OHz,14.ΟΗζ,1H,2—H)，3.00(m,1H,3—H).實(shí)施例4:化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對乙酰氧基苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GL3)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對乙酰氧基苯甲酸代替對甲氧基苯甲酸。得到黃色固體，收率28.13%，熔點(diǎn)182.2-184.5°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.87(d,J=8.5Hz，2H，2”，，6”，-Η)，7·71(s，lH，-C0NH-)，7·44(d,J=8.5Hz，2H，3”，5”-H)，7·20(d,J=8.5Hz,3”，，5”，-H)，6·76(s，1Η，5-Η)，6·55(d,J=9.ΟΗζ，2Η，2”，6”_Η)，6·53(s,1Η，8_Η)，6·34(s，2Η，2，，6，-H)，5·95and5.97(ABq,J=1.OHz，2Η，-OCH2O-),4.65(m,1Η，4_Η)，4·58(d,J=4.5Hz,1Η,1-Η)，4.36(t,J=8.ΟΗζ,1Η,11-Η)，3.98(t,J=8.ΟΗζ,1Η,11-Η)，3.85(br,1Η,-C0NH)，3.79(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.12(dd,J=5.ΟΗζ,14.ΟΗζ,1Η，2_Η)，2.98(m,1Η,3-Η)·2.33(s，3Η,-COCH3)·ESI-MS:m/z[Μ+Η]+653.實(shí)施例5化合物4’-0_去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對硝基苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼白毒素(GL4)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對硝基苯甲酸代替對甲氧基苯甲酸。得到橙色固體，收率43·57%，熔點(diǎn)230·1-231.7°C/H匪R(500MHz，CDCl3)δ8.34(d,J=8.5Hz，2H，2”，，6”，-H)，8·03(d,J=8.5Hz，2H，3”，，5”，-H)，7.70(s,1H,-C0NH-)，7.47(d,J=8.OHz，2H，3”，5”-Η)，6·77(s，1Η，5-Η)，6·58(d，J=9.0Hz，2H，2”，6”-H)，6.54(s，1H，8_H)，6.34(s，2H，2，，6，-H)，5.97and5.98(ABq,J=1.0Hz，2H，-OCH2O-)，4.68(m，1H，4_H)，4.61(d，J=5.0Hz,1H,1-H),4.37(t,J=8.0Hz，1H，11-H)，3.99(t，J=8.OHz,11-H),3.87(br,1H,-C0NH-)，3.79(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.13(dd,J=5.OHz,14.OHz,1H，2_H)，3.00(m,1H,3-H).實(shí)施例6化合物4’-O-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_苯丙酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GL5)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用苯丙酸代替對甲氧基苯甲酸。得到黃色固體，收率60.63%，熔點(diǎn)156.8-158.5°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.15(d,J=9.0Hz，2H，3”，，6”，-H)，7·41(d,J=9.0Ηζ，2Η，4”，，5”，-H)，6·91(s,1Η,-C0NH-)，6·73(s,1Η，5_Η)，6·53(s，1Η，8-Η)，6.48(d，J=8.5Ηζ，2Η，2”，6”-H)，6.33(s，2Η，2，，6，-H)，5.95and5.97(ABq,J=1.0Hz，2H，-OCH2O-),4.62(m,1Η，4_Η)，4·59(d,J=5.ΟΗζ,1Η,1-Η),4.34(t,J=8.ΟΗζ,1Η,11-Η),3.95(t,J=8.ΟΗζ,11-Η),3.79(s，6Η，3，，5，-OCH3),3.15(t，J=7.5Ηζ,2Η,-NHCOCH2CH2-Ph)，3.11(dd,J=5.OHz，14.OHz，1Η,2_Η)，2.99(m,1Η,3-Η).2.66(t,J=7.5Hz,2H,-NHCOCH2CH2-Ph).實(shí)施例7化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_鄰硝基苯丙酰胺基)苯胺基]表鬼白毒素(GL6)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用鄰硝基苯丙酸代替對甲氧基苯甲酸。得到棕色固體，收率31.90%，熔點(diǎn)158.3-159.2°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.15(d,J=9.0Hz，2H，3，，，，6”，-H)，7.41(d，J=9·0Hz，2H，4”，，5”，-H)，6·91(s，1H，-C0NH-),6.73(s，1H，5_H)，6.53(s，1H，8-H)，6·48(d,J=8.5Hz，2H，2”，6”_H)，6.33(s，2H，2，，6，_H)，5.95and5.97(ABq,J=1.0Hz，2H，-OCH2O-)，4.62(m,1H，4_H)，4.59(d,J=5.OHz,1H,1_H)，4.34(t,J=8.OHz,1H,11-H),3.95(t,J=8.OHz,11-H)，3.79(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.15(t，J=7.5Hz,2H,-NHCOCH2CH2-Ph)，3.11(dd,J=5.OHz，14.OHz，1H,2_H)，2.99(m,1H,3_H).2.66(t,J=7.5Hz,2H,-NHCOCH2CH2-Ph).實(shí)施例8化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_苯丙烯酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GL7)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用桂皮酸代替對甲氧基苯甲酸。得到黃色固體，收率29.84%，熔點(diǎn)153·7-155.2°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.73(m,1H,-CH=CH),7.54(d,J=5.0Hz，2H，2”，，6”，-H)，7·47(d,J=5.5Hz，2Η，3”，5”_Η)，7·39(m，3Η，3”，，4”，，5”，-H)，7.15(s，1Η，-CH=CH)，6·77(s，1Η，5-Η)，6·57(s，1Η，8-Η)，6·54(m，J=4.0Ηζ，2Η，2”，6”-Η)，6·35(s，2H，2，，6，-H)，5·97and5.98(ABq,J=1·OHz，2Η，-OCH2O-)，4·66(m，1Η，4-H),4.60(d,J=4.5Hz，1H，1-H)，4.37(t，J=8.0Hz，1H，11-H)，4.00(t，J=8.0Hz，11-H),3.80(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.13(dd,J=5.OHz,14.OHz,1H，2_H)，3.01(m,1H,3-H).實(shí)施例9化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對甲氧基苯丙酰胺基)苯胺基]表鬼白毒素(GL8)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對甲氧基苯丙酸代替對甲氧基苯甲酸。得到灰白色固體，收率71.78%，熔點(diǎn)149.4-151.2°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.24(m，2Η，2”，，6”，_Η)，7.16(d,J=8.5Hz，2H，3”，5”-H)，6.84(m，3H，3”，4”，5”-H)，6.74(s，1H，5_H)，6.52(s,1H,8-H),6.48(d,J=8.0Hz，2H，2”，6”-H)，6.33(s，2H，2，，6，-H)，5.95and5.97(ABq,J=1.OHz，2H，-OCH2O-)，4.62(m,1H，4_H)，4.59(d,J=5.OHz,1H,1-H),4.34(t,J=8.OHz,1H,11-H)，3.96(t,J=8.OHz,11-H),3.79(m，6H，3，，5，-OCH3)，3.11(dd,J=5.OHz,14.OHz,1H,2-H)，3.00(m,1H,3-H)，2.98(t，J=7.5Hz,2H,-NHCO-CH2CH2-Ph)，2.59(t，J=7.5Hz,2H,-NHCO-CH2CH2-Ph).實(shí)施例10化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對溴苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼白毒素(GL9)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對溴苯甲酸代替對甲氧基苯甲酸。得到紫色固體，收率46.77%，熔點(diǎn)160.9-162.6°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.06(d,J=8.5Hz，2H，2”，，6”，-H)，7·74(d,J=8.5Hz，2Η，3”，，5”，-H)，7·69(s,1Η,-C0NH-)，7·62(m，2Η，2”，6”-H)，7.45(d,J=8.5Ηζ，2Η，3”，5”-Η)，6·78(s,1Η，8_Η)，6·56(m，3Η，5_Η，2，，6，-H)，5·97and5.99(ABq,J=1.OHz，2Η，-OCH2O-),4.67(m，2H，4_H，1_Η)，4·43(m,1Η,11-Η)，3·87(m,1Η,11-Η)，3·70(s，6H，3，，5，-OCH3),3.19(m,1Η，2_Η)，3·02(m,1Η，3_Η).實(shí)施例11化合物4’-0-去甲基-4-脫氧-[4-(4”_對氯苯甲酰胺基)苯胺基]表鬼臼毒素(GLlO)的制備操作過程如實(shí)施例1，只是用對氯苯甲酸代替對甲氧基苯甲酸。得到紫色固體，收率14.26%，熔點(diǎn)165.6-167.2°C,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.01(d,J=9.0Hz，2H，2”，，6”，-H)，7·72(d,J=8.5Hz，2Η，3”，，5”，-H)，7·65(s,1Η,-C0NH-)，7·52(m，2Η，2”，6”-H)，7.41(d,J=8.5Hz，2H，3”，5”-H)，6.75(m，lH，8-H)，6.51(m，3H，5-H，2，，6，_H)，5.97and5.99(ABq,J=1.0Hz,2H,-OCH2O-)，4.61(m，2H，4_H，1_H)，4.37(m，1H，11-H)，3.80(m，1H，11-H),3.68(s，6H，3，，5，-OCH3)，3.12(m,1H，2_H)，3.00(m,1H,3-H).實(shí)施例12:4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物對不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株人高轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞株95D、人肺癌細(xì)胞株A549、人口腔表皮癌細(xì)胞株KB及其耐藥株KB/VCR。培養(yǎng)基HG-DMEM培養(yǎng)基或RPMI1640培養(yǎng)基，含10%小牛血清或胎牛血清。藥物及配制藥物為4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，藥物溶于DMS0，并按一定比例稀釋得到5個(gè)濃度。2.實(shí)驗(yàn)方法將上述處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，以2XIO4個(gè)/ml接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加細(xì)胞懸液200μ1，在培養(yǎng)24h后，分別加入上述配制的藥液1μ1，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞在37°C，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)后，加入濃度為2.5mg/ml的MTT溶液20μ1，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。吸去上清液，加入100μ1DMSO搖勻，用酶標(biāo)儀于570nm波長下測定各孔的OD值，細(xì)胞抑制率的計(jì)算公式為細(xì)胞抑制率(對照組OD值-用藥組OD值)/對照細(xì)胞OD值X100%，用Bliss法求出IC5tl。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1.所合成的10個(gè)代表性化合物對不同腫瘤細(xì)胞株的IC5tl(μM)值<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物作用72小時(shí)后，分別測定IC5tl值。結(jié)果表明1)10個(gè)化合物對人高轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞株95D、人肺癌細(xì)胞株Α549、人口腔表皮癌細(xì)胞株KB和人口腔表皮癌耐藥細(xì)胞株KB/VCR均有一定的抑制活性；2)10個(gè)化合物對人高轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞株95D有較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，其IC5tl值在0.416.56μM之間，對人口腔表皮癌耐藥細(xì)胞株KB/VCR有較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，其IC5tl值在2.1516.43μM之間，表現(xiàn)較好的抗耐藥活性；3)化合物GL2，GL3對四種受試腫瘤細(xì)胞株均有較依托泊苷更強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，對上述細(xì)胞的IC5tl值在0.4216.43μM之間。實(shí)施例13:4’-0_去甲基-4-脫氧_4_取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物GL3對S180骨肉瘤小鼠的抑制作用1.實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)ICR種小鼠，雄性，24只，體重25士2g。由斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK(滬)2007-0008。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SCXK(ff)2007-0098ο動(dòng)物飼養(yǎng)條件符合SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施要求，溫度2025°C，濕度4070%，光照明暗各12h，換氣次數(shù)為1020次/小時(shí)，自由飲水(城市飲用水)，光照為晝夜明暗交替12h/12h。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1接種S180細(xì)胞將5XIO6個(gè)S180細(xì)胞腹腔注射ICR小鼠，接種后第7天抽取小鼠腹水，用無菌生理鹽水稀釋成細(xì)胞數(shù)為IXIO6個(gè)/mL的瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠于右前肢腋下接種0.2mL，次日隨機(jī)分組，開始給藥。2.2分組及給藥接種S180瘤株的24只小鼠，隨機(jī)分成3組，分別為陰性對照組、GL3100mg/kg、cisplatin2mg/kg，其中陰性對照組動(dòng)物10只，cisplatin組動(dòng)物8只，GL3組動(dòng)物為6只。陰性對照組灌胃給以溶劑0.lml/10g，GL3100mg/kg組小鼠給予相應(yīng)劑量的藥液0.lml/10g,cisplatin組給以0.2mg/ml藥液0.lml/10g,GL3于接種后第1，2，4給藥后停藥，第9天處死小鼠，取瘤塊稱重，計(jì)算腫瘤抑制百分率。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果GL3組100mg/kg組給藥3次后與對照相比，體重略有下降，有明顯的抑瘤作用。結(jié)果見表2。化合物GL3在100mg/kg的大劑量給藥條件下，抑瘤率達(dá)到58.1%，比陽性對照藥物順鉬的抑瘤率高13.7%，這一結(jié)果表明該化合物在提高對腫瘤的抑制作用的同時(shí)，能夠很好地降低其毒性。表2.GL3對S180荷瘤小鼠瘤重的影響(又士SE)~“動(dòng)物數(shù)(只)體重(g)瘤重(g)抑瘤率_幵始結(jié)束幵始結(jié)束_(%)~MM101026.7土0.5~40.7士1.41.82土0.22~順鉬8825.9±0.737.2士0.70.99士0.09**45.8GL3_6_624.5士0.730.9±1.90.76士0.25**58.1**p<0.01與對照組比較實(shí)施例14:4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物GL3對人高轉(zhuǎn)移性肺癌95D裸小鼠移植瘤的抑制作用1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸小鼠Balb/c品系，雌性，20只，45周齡，體重17士lg。由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)SCXK(滬)2007-0005。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1接種腫瘤細(xì)胞95D肺癌細(xì)胞用含10%胎牛血清的1640于37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，傳代后，待細(xì)胞達(dá)到所需量時(shí)，消化收集細(xì)胞。將IXIO7個(gè)95D人高轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞株注射入裸小鼠左側(cè)腋下，待腫瘤生長至100-200mm3后，將動(dòng)物隨機(jī)分組開始給藥。2.2分組與給藥方式從20只預(yù)先接種95D裸小鼠中選擇腫瘤生長較一致的10只裸小鼠隨機(jī)分成2組。DControl組，5只；2)GL350mg/kg組，5只。GL350mg/kg組隔天灌胃給以5mg/mlGL3溶液0.lml/10g，連續(xù)給藥20天。每周一、三、五稱重并測定腫瘤體積，于第20天處死裸小鼠，稱體重，測定瘤塊體積，計(jì)算相對腫瘤體積(RTV)、相對腫瘤增值率(T/C)和腫瘤抑制百分率，做統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果GL3組給藥5天后，體重變化明顯，并在第7天有動(dòng)物死亡，此后是否給藥由動(dòng)物的狀態(tài)決定，在整個(gè)過程中，只有在第1，3，10，12，14，17和19天給藥。動(dòng)物給藥20天后，Control組相對瘤體積(RTV)為9.3士1.5，GL350mg/kg組RTV值為4.3士0.6，相應(yīng)的相對腫瘤增值率(T/C)為46.3%(見表3)。給藥20天后剖殺取瘤塊稱重，GL350mg/kg組裸小鼠移植瘤平均重量為0.84士0.10g，其抑瘤率(％)為57.3。GL350mg/kg組小鼠移植瘤平均重量與對照組相比有明顯下降，并且有顯著性差異，見表4。這一結(jié)果表明該化合物對人高轉(zhuǎn)移性肺癌95D裸小鼠移植瘤具有明顯的抑制作用。表3.GL3對人肺癌95D裸小鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用(義±5)平均體重(g)腫瘤體積(mm3).相對腫-—----^相對腫瘤^^劑量瘤增值藥物體積+(mg/kg)DlD20DlD20、率(T/C)(RTV)_(%)胃照、—17.5±0.821.6士0.6153.±261370±2259.3±1.5—τ,18.2±1.016.8±0.5**:165土37527士21*4.3±0.6*46.3Dl給藥第一天。*:Ρ<0·05，***:Ρ<0.001，vs同一天的溶劑對照組，student-t檢驗(yàn)。表4.GL3對人肺癌95D裸小鼠移植瘤腫瘤重量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求一種4’-O-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物，其特征在于，具有以下結(jié)構(gòu)通式(I)其中X為-(CH2)n-，n為0～2或-CH＝CH-；R1，R2，R3，R4，R5相同或不同，R1，R2，R3，R4，R5為氫原子、鹵原子、羥基、硝基、含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基或含1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基。FSA00000077107300011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，其特征在于，所述X為-(CH2)n-,η為OjR1=R2=R4=R5為氫，R3為氟、氯、溴、甲氧基或硝基、氰基或乙酰氧基。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，其特征在于，所述X為-(CH2)n-,η為0，R2=R3=R4=R5為氫，R1為氟、氯、溴、甲氧基、硝基、氰基或乙酰氧基。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，其特征在于，所述X為-(CH2)n-,η為1，R1=R2=R4=R5為氫，R3為氟、氯、溴、甲氧基、硝基、氰基或乙酰氧基。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，其特征在于，所述X為-(CH2)n-,η為2,R2=R3=R4=R5為氫，R1為氟、氯、溴、甲氧基或硝基、氰基或乙酰氧基。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4’-0_去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼白毒素衍生物，其特征在于，所述X為-CH=CH-,R1=R2=R3=R4=R5為氫。7.根據(jù)權(quán)利要求16中任一所述的4’-0-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供一類4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物，是指4′-O-去甲基-4-脫氧-4-取代苯胺基表鬼臼毒素衍生物，是利用現(xiàn)有的藥物依托泊苷作為先導(dǎo)化合物，通過結(jié)構(gòu)改造，合成一系列具有抗腫瘤活性的化合物，初步的體外篩選和體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，這些化合物具有較好的抗腫瘤活性，其中化合物GL3在提高對腫瘤抑制作用的同時(shí)，其毒性也明顯降低，可制備具有抗腫瘤活性較高、毒性較低、對多藥耐藥腫瘤有效的抗腫瘤藥物；本發(fā)明的結(jié)構(gòu)通式文檔編號(hào)C07D493/04GK101817829SQ201010140109公開日2010年9月1日申請日期2010年4月2日優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日發(fā)明者何俏軍,楊波,汪麗,胡永洲申請人:浙江大學(xué)