專利名稱：愈創(chuàng)木烷型倍半萜的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從植物大葉盤果菊中分離得到的一個(gè)愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物15-羥基-2-氧-愈創(chuàng)木-3-烯-Ια，5α，6β，7α，10α， 11 β 氫-12，6-內(nèi)酯(15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-eh-l α，5α，6β，7α，10 α，ΙΙβΗ—12， 6-olide，化合物1)的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
大葉盤果菊(Prenanthes macrophylla Franch.)為菊禾斗(Compositae)盤果菊屬(Prenanthes)植物，是中國(guó)的特有植物。本屬植物全世界約40種，主要分布于熱帶和溫帶地區(qū)，我國(guó)約有16種，其中1種可做藥用，有治癰瘡腫毒，活血止血的功效。目前對(duì)該屬植物化學(xué)成分報(bào)道較少，其主要含有三萜、倍半萜、植物留醇等。菊科植物富含倍半萜內(nèi)酯等成分，現(xiàn)代藥理研究表明，倍半萜內(nèi)酯類化合物具有很好的活性，如抗腫瘤、抗炎、抗氧化等。目前，國(guó)內(nèi)外除本實(shí)驗(yàn)室曾對(duì)大葉盤果菊的石油醚萃取部位化學(xué)成分進(jìn)行研究外，尚未見其化學(xué)成分及相關(guān)藥理活性的報(bào)道。為充分開發(fā)利用這一我國(guó)特有的植物資源，發(fā)明人對(duì)大葉盤果菊全草的化學(xué)成分及活性進(jìn)行系統(tǒng)、深入的研究，分離鑒定出一個(gè)愈創(chuàng)木烷型倍半萜。體外抗腫瘤活性篩選表明，該化合物有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，為后續(xù)深入的研究奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一個(gè)愈創(chuàng)木烷型倍半萜化合物 15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-eh-l α，5α，6β，7α，10 α，11 β Η—12，6—olide 的帝[J 備方法及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式見附圖
。本發(fā)明化合物可按以下步驟制備大葉盤果菊干燥全草，粉碎后經(jīng)95%乙醇室溫浸泡提取，減壓濃縮去醇得總浸膏。 總浸膏用水懸浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇3個(gè)萃取層。正丁醇層上硅膠柱層析，用乙酸乙酯-甲醇極性梯度洗脫，最后用甲醇沖柱，TLC檢測(cè)合并成分相同部分。倍半萜富集流分過S印hadex LH-20柱，氯仿-甲醇極性梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)，取有土黃色斑點(diǎn)的組分，上硅膠小柱，用石油醚_乙酸乙酯極性梯度洗脫，部分組分有白色粉末析出，再經(jīng)制備型高效液相色譜儀純化得該化合物純品。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例1 本發(fā)明化合物的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定(1)、提取取5. 5kg大葉盤果菊干燥全草，粉碎后經(jīng)95%乙醇室溫浸泡提取4次， 每次7天。減壓濃縮去醇后，得浸膏320g。浸膏用水懸浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，得到石油醚部分60g，乙酸乙酯部分80g和正丁醇部分130g。
(2)、分離正丁醇層用等量硅膠拌樣上硅膠柱層析，用乙酸乙酯-甲醇(1 0 0 1)極性梯度洗脫，最后用甲醇沖柱，合并成分相同部分后共得8個(gè)組分(Fr I FrVDO。 Fr III過S印hadexLH-20柱，氯仿-甲醇極性梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)，取有土黃色斑點(diǎn)的組分， 用等量硅膠拌樣，上硅膠小柱(200-300目)，用石油醚-乙酸乙酯極性梯度洗脫，待溶劑揮發(fā)后有白色粉末析出。白色粉末用甲醇溶解后經(jīng)制備型高效液相色譜儀，以甲醇_水為洗脫劑分離得該化合物純品。本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1 無(wú)色針晶(乙酸乙酯)，5%硫酸乙醇溶液顯土黃色。EI-MS(m/Z) 264 [M+]。13C-NMR和DEPT譜顯示有2 X CH3, 3 X CH2, 7 X CH, 3 X C共計(jì)15個(gè)碳信號(hào)，初步推斷該化合物為倍半萜。13C-NMR可見δ 211. 6為α，β不飽和酮羰基的碳信號(hào)，一對(duì)雙鍵信號(hào) δ 129. 2和186. 2，其中186. 2由于與酮羰基共軛使其移向低場(chǎng)。在δ 180. 4為另一羰基碳信號(hào)，S 83. 4為一個(gè)與氧相連的碳信號(hào)，結(jié)合NMR譜和質(zhì)譜推出分子式為C15H2tlO4，不飽和度為 6。1H-NMR 譜中出現(xiàn)兩個(gè)甲基二重峰 δ 1. 19 (3Η, d, J = 6. 8Hz), 0. 77 (3Η, d, J = 7. 6Hz), 結(jié)合質(zhì)譜和生源關(guān)系，提示該化合物具有愈創(chuàng)木烷型倍半萜內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)特征。本發(fā)明化合物的波譜學(xué)數(shù)據(jù)如下EI-MS (m/z) 264 [M+]，246 [M-H2O]，233，218，206，191，177，163，135，123，107，91， 79，69，61，55，43 ；1H-NMR(400MHz, CD3OD, ppm) δ 6. 30 (1Η, s, H—3)，4. 61 (1H, brd, J = 20Hz, H-15) ,4. 50 (1H, dd, J = 9，10Hz，H-6)，3. 25 (1H，m，H-5)，2. 82 (1H, dd, J = 4,6. 8Hz, H-l)，2. 55 (1H, m, H-9)，2. 42 (1H, m, H-11)，1. 95 (1H, m, H-9)，1. 86 (1H, m, H-8)，1. 69 (1H, m, H-9)，1. 58 (1H, m, H-8)，1. 19 (3H, d, J = 6. 8Hz, Η-13)，0· 77 (3Η, d, J = 7. 6Hz, H-14)。 13C-NMR(1 OOMHz，CD3OD, ppm) δ 211. 6 (C-2)，186. 2 (C-4)，180. 4(C_12)，129. 2 (C-3)， 83. 4 (C-6)，63. 0 (C-15)，54. 9 (C-I)，52. 2 (C-7)，52. 1 (C-5)，42. 5 (C-Il)，35. 6 (C-10)， 35. 5 (C-9)，26. 2 (C-8)，15. 1 (C-14)，12. 9 (C-13)。以上光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致，因此鑒定化合物1為 15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-en-l α,5α,6β,7α,10α,11β H-12,6_olide0 (Christian Ζ. , Ernst P.Ε., Karl. 0., et al. New Taxonomically Significant Sesquiterpenoids from Leontodon autumnal is. J NatProd,2003,63(6) :812_816.)實(shí)施例2 本發(fā)明化合物對(duì)人腫瘤細(xì)胞系的增殖抑制作用方法分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人腫瘤細(xì)胞系K-562、HL-60、M0LT-4和NB4細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板上，每孔接種分別為量為6000/150 μ L、6000/150 μ L、12000/150 μ L禾口 12000/150 μ L0實(shí)驗(yàn)設(shè)藥物實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照孔。藥物實(shí)驗(yàn)組每孔加不同濃度的本發(fā)明化合物50 μ L，每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔；陰性對(duì)照組每孔加營(yíng)養(yǎng)液50 μ L，共設(shè)6個(gè)復(fù)孔；空白對(duì)照孔只加營(yíng)養(yǎng)液200 μ L，用于儀器調(diào)零。作用72h后，離心棄上清，每孔加二甲基亞砜(DMSO) 150 μ L，震蕩5min，待結(jié)晶完全溶解后，用酶標(biāo)儀(BI0-RAD產(chǎn)品)在570nm 波長(zhǎng)處測(cè)定每個(gè)小孔的吸光度值(A57tl),各組取平均值，計(jì)算抑制率IR= (1-實(shí)驗(yàn)組A57tl/ 對(duì)照組A5J X 100%。用SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并計(jì)算IC5(1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)一次。結(jié)果見表1和表2。表1不同濃度化合物1對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用
權(quán)利要求
1.具有下述化學(xué)結(jié)構(gòu)式的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物15-羥基-2-氧-愈創(chuàng)木-3-烯-Ια，5α，6β，7α，10α，11β 氫-12，6-內(nèi)酯 (15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-en-l α ,5α ,6β ,7α ,10α ，11 β Η—12，6_olide，化合物 1)
2.如權(quán)利要求1所述的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物的制備方法，其具體步驟如下大葉盤果菊干燥全草，粉碎后經(jīng)95%乙醇室溫浸泡提取，減壓濃縮去醇得總浸膏，用水懸浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇3個(gè)萃取層，正丁醇層經(jīng)反復(fù)硅膠柱和kphadex LH-20柱分離，再經(jīng)制備型高效液相色譜儀純化得該化合物純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜的制備方法及應(yīng)用。該愈創(chuàng)木烷型倍半萜化合物為15-羥基-2-氧-愈創(chuàng)木-3-烯-1α，5α，6β，7α，10α，11β氫-12，6-內(nèi)酯(15-hydroxy-2-oxo-guaia-3-en-1α，5α，6β，7α，10α，11βH-12，6-olide，化合物1)，從大葉盤果菊全草中提取分離得到。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，該化合物對(duì)多種人體腫瘤細(xì)胞具有良好的抑制活性，因此，可以用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)C07D307/93GK102260234SQ20101018404
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者張永紅, 謝捷明, 陳永勝 申請(qǐng)人:福建醫(yī)科大學(xué)