專利名稱：魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)物質(zhì)的純化方法，具體涉及一種魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法。
背景技術(shù)：
神經(jīng)酰胺是細(xì)胞膜的組成部分，具有以下生物功能1、神經(jīng)酰胺與糖甙結(jié)合形成神經(jīng)鞘苷，存在于動(dòng)、植物等真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，參與細(xì)胞功能；2.調(diào)節(jié)細(xì)胞生長變異的作用；3.誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；4.調(diào)節(jié)蛋白分泌；5.在炎癥中的作用；6.具有良好的保水作用等。在申請?zhí)枮?00910263528. 7的中國發(fā)明專利申請中，就公開了一種1至5%魔芋神經(jīng)酰胺。目前，普遍認(rèn)為神經(jīng)酰胺具有抗腫瘤、抗病毒、抗肝毒、保水等醫(yī)療和保健作用，因此，神經(jīng)酰胺被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品領(lǐng)域。盡管神經(jīng)酰胺在自然界分布十分廣泛，但含量很低，再加上其雙親性(既親水又親油)，提取非常困難。以前，歐、美等發(fā)達(dá)國家主要從牛腦、雞冠等動(dòng)物組織中提取，并形成了含量3%左右的粗品，用于化妝品作為良好的保濕劑，以及醫(yī)藥原料。由于瘋牛病和禽流感的影響，動(dòng)物來源的神經(jīng)酰胺的安全性被廣泛質(zhì)疑，許多國家已經(jīng)明令禁止使用該類產(chǎn)品，到目前為止，市場上基本上沒有動(dòng)物源性的神經(jīng)酰胺產(chǎn)品。市場急需安全可靠的神經(jīng)酰胺，來滿足制藥業(yè)和化妝品市場對該類產(chǎn)品的需求。 為了滿足市場的要求，人們努力尋找安全的神經(jīng)酰胺，研究方向轉(zhuǎn)向以植物、藻類及微生物等為提取原料，同時(shí)還進(jìn)行人工合成研究。盡管人工合成的產(chǎn)品可以在有限的范圍內(nèi)作替代，但不能真正解決問題。而植物、藻類及微生物等材料，由于其細(xì)胞結(jié)構(gòu)的特殊性(與動(dòng)物細(xì)胞相比多了細(xì)胞壁)，使得提取難度更大。目前國際國內(nèi)有關(guān)于從小麥的麩皮、酵母細(xì)胞、海藻以及其他植物中能提取出神經(jīng)酰胺的報(bào)道，并對其結(jié)構(gòu)、分子量進(jìn)行了鑒定。但由于神經(jīng)酰胺含量非常低，提取成本非常高，尚無有商業(yè)意義的產(chǎn)品形成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種從魔芋中提取出的神經(jīng)酰胺粗產(chǎn)品的純化方法。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的步驟⑴采用不同極性的溶劑作為萃取劑；步驟( 采用硅膠柱層析分兩次純化采用干法上樣，有機(jī)溶劑梯度洗脫，分第一次硅膠柱層析和第二次硅膠柱層析兩次柱層析，純化神經(jīng)酰胺。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟(1)所述萃取劑為石油醚和乙酸乙酯，石油醚沸程為 30至60°C，石油醚和乙酸乙酯均為分析純。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟( 所述梯度洗脫有機(jī)溶液為石油醚、乙酸乙酯及甲醇，均為分析純。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟O)中所述第一次硅膠柱層析時(shí)洗脫液梯度變化為 石油醚乙酸乙酯為9 1至1 9體積比，乙酸乙酯甲醇為9 1至3 7體積比。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟( 所述第一次硅膠柱層析純化時(shí)，神經(jīng)酰胺粗品于洗脫液為乙酸乙酯甲醇為28至55體積比時(shí)收集得到。
更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟( 第一次硅膠柱層析收集得到的神經(jīng)酰胺粗品經(jīng)第二次硅膠柱層析進(jìn)一步純化，洗脫液梯度變化為石油醚乙酸乙酯為9 1至1 9體積比，乙酸乙酯甲醇為9 1至3 7體積比。更進(jìn)一步的技術(shù)方案是步驟( 所述第二次硅膠柱層析純化時(shí)，神經(jīng)酰胺洗脫液為乙酸乙酯甲醇為28至55體積比時(shí)收集得到。本發(fā)明提供了從魔芋中提取出的神經(jīng)酰胺粗產(chǎn)品的純化方法，可以將魔芋神經(jīng)酰胺進(jìn)行提純，將其純度提高到50% (wt)以上，從而可以獲得更大的用途。
具體實(shí)施例方式一種魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，是對專利申請?zhí)枮?00910263528. 7的發(fā)明專利申請中得到的含1至5%魔芋神經(jīng)酰胺的產(chǎn)品進(jìn)行純化的方法，包括如下步驟(1)將魔芋粗提液依次用石油醚，乙酸乙酯萃取，合并提取液，減壓濃縮至浸膏狀。 經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，洗脫液流速為2. 5ml/min，每25ml收集一次，TLC點(diǎn)板，合并同類物，體系在乙酸乙酯至甲醇O 8-5 5，體積比)收集的組分， 靜置后析出白色絮狀物，離心收集，得白色無定形粉末狀物質(zhì)，為組分I，其純度約為30%
(Wt) 。。(2)組分I的柱層析分離組分I，經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙醋-甲醇梯度洗脫，洗脫液流速為2. 5ml/ min，每20ml收集一次，TLC點(diǎn)板，合并，乙酸乙醋至甲醇O 8，體積比)收集得組分II，其純度約為50%以上(wt)。。經(jīng)過HR 至 ESI 至 MS，1HNMR 13(MffiHMBC 1H 至 1H COSY,乙?；?，甲醇水解 GC 至 MS 分析，可知組分II為神經(jīng)酰胺類物質(zhì)-腦苷脂混合物。
權(quán)利要求
1.魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征在于該方法通過以下步驟實(shí)現(xiàn)步驟(1)采用不同極性的溶劑作為萃取劑；步驟( 采用硅膠柱層析分兩次純化采用干法上樣，有機(jī)溶劑梯度洗脫，分第一次硅膠柱層析和第二次硅膠柱層析兩次柱層析，純化神經(jīng)酰胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟(1)所述萃取劑為石油醚和乙酸乙酯，石油醚沸程為30至60°C，石油醚和乙酸乙酯均為分析純。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟( 所述梯度洗脫有機(jī)溶液為石油醚、乙酸乙酯及甲醇，均為分析純。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟O)中所述第一次硅膠柱層析時(shí)洗脫液梯度變化為石油醚乙酸乙酯為9 1至1 9體積比，乙酸乙酯 甲醇為9 1至3 7體積比。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟( 所述第一次硅膠柱層析純化時(shí)，神經(jīng)酰胺粗品于洗脫液為乙酸乙酯甲醇為2 8至5 5體積比時(shí)收集得到。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟( 第一次硅膠柱層析收集得到的神經(jīng)酰胺粗品經(jīng)第二次硅膠柱層析進(jìn)一步純化，洗脫液梯度變化為石油醚乙酸乙酯為9 1至1 9體積比，乙酸乙酯甲醇為9 1至3 7體積比。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法，其特征為步驟( 所述第二次硅膠柱層析純化時(shí)，神經(jīng)酰胺洗脫液為乙酸乙酯甲醇為2 8至5 5體積比時(shí)收集得到。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種魔芋神經(jīng)酰胺的純化方法。其主要步驟為步驟(1)采用不同極性的溶劑作為萃取劑；步驟(2)采用硅膠柱層析分兩次純化采用干法上樣，有機(jī)溶劑梯度洗脫，分第一次硅膠柱層析和第二次硅膠柱層析兩次柱層析，純化神經(jīng)酰胺。本發(fā)明工藝先進(jìn)，操作簡便，收率高，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)C07H15/10GK102190689SQ201010254120
公開日2011年9月21日 申請日期2010年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月16日
發(fā)明者侯雪, 李獻(xiàn) 申請人:成都希福生物科技有限公司