專利名稱：一種萘人工免疫原na-bsa及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬萘的多克隆抗體領(lǐng)域，特別是涉及一種萘人工免疫原NA-BSA的制備及 用途。
背景技術(shù)：
(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)
環(huán)的碳氫化合物的統(tǒng)稱，如萘、蒽、菲、熒蒽、苯并芘等。近年來，海上石油開采，輪船運輸、海 損溢油，工業(yè)、生活燃燒廢氣排放等使得多環(huán)芳烴污染日益嚴重，大量調(diào)查研究表明，空氣、 土壤、水體及生物體等都受到了多環(huán)芳烴的污染。多環(huán)芳烴是最早發(fā)現(xiàn)且數(shù)量最多的致癌 物，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的致癌性多環(huán)芳烴及其衍生物已超過400種，占已被發(fā)現(xiàn)致癌物質(zhì)總數(shù) 的1/3以上。每年排放到大氣中的多環(huán)芳烴約幾十萬噸，因其毒性、生物蓄積性和半發(fā)揮性 以及在環(huán)境中的持久存在，已經(jīng)受到國際科學界的廣泛關(guān)注。1976年美國環(huán)保局提出129 種“優(yōu)先控制污染物”中，多環(huán)芳烴類化合物就有16種；歐盟最新有害物質(zhì)禁令中也列入了 16種多環(huán)芳烴；1990年我國提出的水中優(yōu)先控制的68種污染物中，其中多環(huán)芳烴類化合物 就占7種。萘是多環(huán)芳烴中較常見的物質(zhì)，是工業(yè)上最重要的稠環(huán)芳烴，它從煉油的副產(chǎn)品 煤焦油中大量生產(chǎn)，是制造某些染料、燃料、潤滑劑、苯酐、農(nóng)藥及其它有機化合物的主要原 料。作為防蛀劑，還廣泛應用于毛織品、皮貨、木材等的保存。1958年以來，代替滴滴涕等氯 化產(chǎn)品的甲萘威投產(chǎn)以后，用作殺蟲劑原料的比例大大增加。人暴露于萘的機會主要在萘 的生產(chǎn)和使用過程，另外吸煙和被動吸煙也是一種暴露機會，據(jù)報道香煙中含有一定量的 萘、甲基萘等，因此美國環(huán)保局(EPA)將萘及其衍生物視為普遍存在的環(huán)境污染物而受到 重視，我國也已規(guī)定禁止使用萘作為防蛀劑。因此尋求一種快速、簡便、靈敏且經(jīng)濟實用的 分析方法成為當前研究的主要方向。20世紀60年代發(fā)展起來的免疫分析(Immunoassay，ΙΑ)是基于抗原與抗體的特 異性、可逆性結(jié)合反應的分析技術(shù)。免疫反應涉及抗原與抗體分子間的立體化學、電荷、氫 鍵和偶極間的綜合作用，具有常規(guī)理化分析技術(shù)無可比擬的選擇性和高靈敏度，非常適宜 于復雜基質(zhì)中痕量組分的分析。因此，免疫分析具有特異性強、靈敏度高、方便快捷、分析容 量大、檢測成本低、安全可靠等優(yōu)點，可以滿足簡單、快速、靈敏地檢測環(huán)境激素的要求。目前關(guān)于免疫分析方法檢測萘的報道很少。合格的萘抗原是免疫得到合格的萘抗 體的重要前提，合格的萘抗體是建立萘免疫檢測方法的關(guān)鍵所在。有關(guān)萘抗體的制備，國內(nèi) 外報道甚少。

發(fā)明內(nèi)容
要解決的技術(shù)問題本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種萘人工免疫原NA-BSA的制備及用途，以克 服現(xiàn)有檢測技術(shù)中對萘樣品預處理復雜、耗時、且需要大量有機溶劑萃取，以及在檢測過程中要用到精密昂貴的檢測儀器而不適宜推廣使用和不利于當環(huán)境污染事件發(fā)生在野外時 的現(xiàn)場快速檢測等缺點。
技術(shù)方案
權(quán)利要求
一種萘人工免疫原NA BSA，結(jié)構(gòu)式如下其中BSA為牛血清白蛋白。FSA00000253707200011.tif
2.一種制備如權(quán)利要求1所述的萘人工免疫原NA-BSA的方法，包含以下步驟(1)萘半抗原的合成將丁二酸酐、萘、無水三氯化鋁按摩爾比1 1 2. 2投料，并溶 解于硝基苯中，得到無色液體，冰浴下攪拌反應，在0 4°C冰浴下進行7 8小時后，加入 稀鹽酸終止反應，將燒瓶中的液體倒出，加稀鹽酸水解，分離出的有機層用大量稀鹽酸水洗 后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去硝基苯，得到棕黃色固體粉末，在甲醇-乙醚中重結(jié)晶獲得黃色晶體狀的 萘半抗原NA，干燥后得純品；(2)萘人工免疫原的合成將溶有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和N，N’- 二環(huán)己基碳酰 亞胺(DCC)的有機溶劑逐滴加入溶有萘半抗原的有機溶劑中，冰浴下攪拌反應3 4小時， 離心分出上清液，加入到溶有BSA的磷酸緩沖液中，3 6°C反應12 16小時，將溶液裝 入透析袋，用PH6 8磷酸緩沖液透析3 6d ；透析后離心分出上清液，即得萘人工免疫原 NA-BSA偶聯(lián)物，分裝后-10°C _40°C保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種萘人工免疫原NA-BSA的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的萘的分子結(jié)構(gòu)式為
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的萘半抗原的化學名稱為Y _氧-2-萘丁酸，分子量228，分子結(jié)構(gòu)式為
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟⑵中的有機溶劑是N，N-二甲 基甲酰胺(DMF)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的半抗原、NHS、DCC摩爾 比為1 1.5 1.5，半抗原、蛋白質(zhì)摩爾比分別為200 1。
7.一種萘人工免疫原NA-BSA的應用，通過免疫動物制備成萘特異性抗體，能與萘發(fā)生 特異性免疫反應的免疫球蛋白IgG，用于現(xiàn)場檢測水體、土壤及大氣中痕量的萘。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種萘人工免疫原NA-BSA及其制備方法和用途，制備(1)將丁二酸酐、萘、無水三氯化鋁按摩爾比1∶1∶2.2投料，溶解于硝基苯中，冰浴攪拌，加稀鹽酸終止反應，有機層用大量稀鹽酸水洗后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去硝基苯，得到棕黃色固體粉末，重結(jié)晶，干燥；(2)將溶有N-羥基琥珀酸亞胺和N，N’-二環(huán)己基碳酰亞胺逐滴加入萘半抗原溶液中，冰浴下攪拌反應4小時后，加入到牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液中，4℃下反應12～16小時，透析后離心分出上清液，即得萘人工免疫原NA-BSA偶聯(lián)物，分裝后-20℃下保存。本發(fā)明制備簡便，成本低，容易工業(yè)化生產(chǎn)；萘人工免疫原NA-BSA通過動物制備成萘特異性抗體，用于現(xiàn)場檢測水體、土壤及大氣中痕量的萘。
文檔編號C07K16/44GK101948532SQ20101027031
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月2日
發(fā)明者李壹, 李方實, 楊明明, 謝卿 申請人:南京工業(yè)大學