專利名稱：一種從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法。
背景技術(shù)：
仙草，又名仙人涼、涼粉草、薪草，為唇形科一年生草本植物，是一種重要的藥食兩 用的東方植物。仙草具有很高的藥用價(jià)值，中醫(yī)認(rèn)為，仙草性涼寒，味甘淡澀，具有清熱利 濕、涼血解暑，解渴利水和除熱毒的功效。在仙草所含功能性成分中，多糖物質(zhì)能增強(qiáng)人體 免疫力，部分具有抗氧化性能；多酚類物質(zhì)能清除自由基，具有抗氧化性能；微量元素能抑 制自由基形成，抗衰、抗癌；熊果酸和齊墩果酸能降壓、降血糖；維生素能調(diào)節(jié)和增強(qiáng)生理 機(jī)能，部分具有抗氧化性能。市場上，利用不同的食品加工方法以仙草為原料制成不同的保健食品。如以仙草 粉及淀粉為主要原料制成的即食涼粉凍粉，又叫仙草蜜；或制成仙草保健茶飲料，仙人飯； 這些產(chǎn)品主要是以水為溶劑提取的仙草膠為原料制成的。而一些水溶性差的物質(zhì)被當(dāng)做廢 物丟棄，造成巨大的資源浪費(fèi)。目前從仙草提取紫云英苷還未有見文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種步驟簡單、適合工業(yè)生產(chǎn)的從植物仙草中提取分離紫云 英苷的方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)
仙草采用丙酮水溶液提取，提取液濃縮干燥得到粗提物，粗提物經(jīng)大孔吸附樹脂柱層 析分離，收集洗脫液，濃縮干燥得到精提物，精提物經(jīng)高效液相色譜分離、制備，得到紫云英 苷純品。其中所述仙草采用全草，經(jīng)過干燥、裁剪、研磨，過40目篩網(wǎng)；所述全草包含花、 葉、莖和根。所述丙酮水溶液濃度為50% 90% (體積比)，仙草與丙酮溶液的固液比為1 :8 1 12 (w/v)；提取條件為提取溫度50°C 60°C，浸提時(shí)間1. 5 3h，浸提2 3次，趁熱 過濾，合并濾液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物。所述粗提物經(jīng)大孔吸附樹脂柱層析分離，收集55 65%乙醇洗脫組分，減壓濃縮 去除溶劑，真空干燥得到精提物；所述大孔吸附樹脂為弱極性大孔吸附樹脂；所述弱極性 大孔吸附樹脂為AB-8、DM130或HPD450大孔吸附樹脂；所述大孔吸附樹脂柱層析采用乙醇 水溶液梯度遞增洗脫；優(yōu)選的洗脫方式為先用水除雜，后用60%乙醇洗脫，最后用95%乙醇 洗脫柱中殘留，收集60%乙醇洗脫組分。所述高效液相色譜采用甲醇/水梯度洗脫。所述高效液相色譜方法中色譜柱 Varian C18 (5um,4. 6X250mm),流動(dòng)相甲醇-水(0_15min 50% 甲醇-90% 甲醇)，流速 1. Oml · mirT1，檢測波長280nm，柱溫室溫；紫云英苷的保留時(shí)間為10. 34min。鑒別采用核磁共振譜及質(zhì)譜法鑒定本發(fā)明分離得到的紫云英苷純品，如圖1-3所示，數(shù)據(jù) 結(jié)果與文獻(xiàn)一致。IH-NMR (600MHz , DMSO) δ :8· 032 (2Η，d，J=L 51Hz，Η_2，，Η_6，)，δ 6.883 (2Η, d, J=2. OHz, Η_3，，Η_5，)，δ :6· 426 (1Η, s, J=O. 95Ηζ, Η_8)，δ :6· 200 (1Η, s, J=O. 86Ηζ, Η-6), δ :5· 450 (1Η，d，J=O. 98Ηζ，Η_1 ”)，δ :3· 17 (lH，m，H_4”)，δ :3· 208 (2H，m，Η-2”，Η-3”)，3· 081 (lH，m，H_5”)，δ :3· 320 (1Η，m，J=3. 02Ηζ，Η_6” b)，δ :3· 550 (1Η, m, J=2. 96Hz, H_6”a)。13C-NMR (150MHz, DMSO) δ :156. 00 (C-2), 133. 04 (C-3)， 177.21 (C-4),98. 70 (C_6)，93.65 (C-8), 156. 33 (C-9), 103. 61 (C-10), 156. 00 (C_l，)， 130. 76 (C-2’)，114. 95 (C-3’)，159. 75 (C-4’)，114. 95 (C_5’)，130. 76 (C_6’)，100.75 (C-l”)，74. 00 (C-2"), 76. 16 (C-3"), 69. 65 (C-4"), 77. 33 (C_5”)，60. 60 (C_6”)。采用高效液相色譜儀法測定黃酮醇苷化合物中紫云英苷的含量，色譜柱 Varian C18 (5um,4. 6X250mm),流動(dòng)相甲醇-水(0_15min 50% 甲醇-90% 甲醇)，流速 1. Oml ·π η-1，檢測波長280nm，柱溫室溫；紫云英苷的保留時(shí)間為10. 34min，測得紫云英 苷含量為99%。紫云英苷的色譜圖如圖4所示。本發(fā)明采用溶劑提取，大孔吸附柱層析分離，液相色譜分離，液相色譜制備得到純 度為99%的紫云英苷。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明所用原料廉價(jià)易得，對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，工藝簡單易行、快捷，所獲得得紫 云英苷純度高，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。


圖1為紫云英苷的質(zhì)譜圖。圖2為紫云英苷的核磁氫譜圖。圖3為紫云英苷的核磁碳譜圖。圖4為紫云英苷高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，但是本發(fā)明不僅限于此。實(shí)施例1 表1實(shí)施例1粗提數(shù)據(jù)
②粗提物lg，AB-8弱極性大孔吸附柱層析分離(流動(dòng)相為不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇水溶 液先用水除雜，后用60%乙醇洗脫，最后用95%乙醇洗脫柱中殘留)，收集60%乙醇洗脫組 分，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到精提物，其多酚濃度為534. 9 mg GAE/g，具體數(shù)據(jù)如 表2所示。
表2實(shí)施例1精提數(shù)據(jù)
③0. 2g精提物經(jīng)高效液相色譜分離，制備，得到0. 05g99%紫云英苷黃色純品。高效液 相色譜流動(dòng)相為甲醇水。實(shí)施例2
①取裁剪、研磨過篩后的仙草全草10g，加約100mL75%丙酮溶液，60°C提取，浸提2h， 浸提兩次，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物，其多酚含量達(dá) 205. 1 士7. 1 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表 1 所示。②粗提物lg，DM130弱極性大孔吸附柱層析分離(流動(dòng)相為不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇 水溶液先用水除雜，后用60%乙醇洗脫，最后用95%乙醇洗脫柱中殘留)，收集60%乙醇洗 脫組分，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到精提物，其多酚濃度為298. 5 mg GAE/g，具體數(shù) 據(jù)如表3所示。表3實(shí)施例2精提數(shù)據(jù)
③0.2g精提物經(jīng)高效液相色譜分離，制備，得到0.028g99%紫云英苷黃色純品。高效 液相色譜流動(dòng)相為甲醇水。實(shí)施例3
①取裁剪、研磨過篩后的仙草全草10g，加約100mL75%丙酮溶液，60°C提取，浸提2h， 浸提兩次，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物，其多酚含量達(dá) 205. 1 士7. 1 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表 1 所示。②粗提物lg，HPD450弱極性大孔吸附柱層析分離(流動(dòng)相為不同體積分?jǐn)?shù)的乙 醇水溶液先用水除雜，后用60%乙醇洗脫，最后用95%乙醇洗脫柱中殘留)，收集60%乙醇 洗脫組分，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到精提物，其多酚濃度為415. 9 mg GAE/g，具體 數(shù)據(jù)如表4所示；
表4實(shí)施例3精提數(shù)據(jù)
③0. 2g精提物經(jīng)高效液相色譜分離，制備，得到0. 04g99%紫云英苷黃色純品。高效液 相色譜流動(dòng)相為甲醇水。綜上實(shí)施例1-3所述，3種不同的弱極性大孔吸附樹脂都可以用于從仙草粗提物 中分離富集紫云英苷，其中AB-8樹脂分離出的紫云英苷得率較大。實(shí)施例4
①取裁剪、研磨過篩后的仙草全草25g，加約500mL90%丙酮溶液，50°C提取，浸提
2. 5h，浸提三次，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物，其多酚含 量達(dá)22. 4士6. 6 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表5所示。
實(shí)施例5
②粗提物2g，AB-8大孔吸附柱層析分離，收集55%乙醇洗脫組分，減壓濃縮去除溶劑， 真空干燥得到精提物，其多酚含量達(dá)460. 1 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表8所示。
實(shí)施例6
①取裁剪、研磨過篩后的仙草全草15g，加約150mL85%丙酮溶液，50°C提取，浸提3h， 浸提三次，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物，其多酚含量達(dá) 21. 4士5 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表9所示。
表9實(shí)施例6粗提數(shù)據(jù)
②粗提物1. 4g，AB-8大孔吸附柱層析分離，收集55%乙醇洗脫組分，減壓濃縮去除溶 劑，真空干燥得到精提物，其多酚含量達(dá)81. 7 mg GAE/g extract，具體數(shù)據(jù)如表10所示。
表10實(shí)施例6精提數(shù)據(jù)
③0. 2g精提物經(jīng)高效液相色譜分離，制備，得到0. 0085g99%紫云英苷黃色純品。高效 液相色譜流動(dòng)相為甲醇水。
權(quán)利要求
一種從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于 仙草采用丙酮水溶液提取，提取液濃縮干燥得到粗提物，粗提物經(jīng)大孔吸附樹脂柱層析分離，收集洗脫液，濃縮干燥得到精提物，精提物經(jīng)高效液相色譜分離、制備，得到紫云英苷純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于所述 仙草采用全草，經(jīng)過干燥、裁剪、研磨，過40目篩網(wǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于所述 丙酮水溶液濃度為50% 90% (體積比)，仙草與丙酮溶液的固液比為1 :8 1 :12 (w/v)； 提取條件為提取溫度50°C 60°C，浸提時(shí)間1. 5 3h，浸提2 3次，趁熱過濾，合并濾 液，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥得到粗提物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于粗提 物經(jīng)大孔吸附樹脂柱層析分離，收集55 65%乙醇洗脫組分，減壓濃縮去除溶劑，真空干燥 得到精提物；所述大孔吸附樹脂為弱極性大孔吸附樹脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于所述 弱極性大孔吸附樹脂為AB-8、DM130或HPD450大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法，其特征在于所述 高效液相色譜采用甲醇/水梯度洗脫。全文摘要
本發(fā)明提供了一種從植物仙草中提取分離紫云英苷的方法。該方法采用仙草用丙酮水溶液提取，提取液濃縮干燥得到粗提物，粗提物經(jīng)大孔吸附樹脂柱層析分離，收集洗脫液，濃縮干燥得到精提物，精提物經(jīng)高效液相色譜分離、制備，得到純度為99%的紫云英苷純品。本發(fā)明所用原料廉價(jià)易得，對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，工藝簡單易行、快捷，所獲得的紫云英苷純度高，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/07GK101921301SQ20101028483
公開日2010年12月22日 申請日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者吳燕翔, 李玲, 林曉翠, 王碧玉, 邱挺, 鄭輝東 申請人:福州大學(xué)