專利名稱：從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽的方法。
背景技術(shù)：
目前腫瘤已成為僅次于心腦血管疾病的第二大殺手，盡管目前腫瘤治療模式取得 了很大進展，但是腫瘤仍是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都很高的一種的疾病。在美國，腫瘤 是導致85歲以下人群死亡的主要原因。并且許多腫瘤，諸如皮膚癌，前列腺癌，乳腺癌，腎 癌等的發(fā)病率仍在持續(xù)上升。腫瘤嚴重威脅著人類健康，已經(jīng)成為世界各國面臨的重要社 會問題之一。尋找高效、低毒的抗腫瘤藥物是目前世界范圍內(nèi)的研究熱點之一。然而，目前尚無一種抗腫瘤活性物質(zhì)進行較大規(guī)模的商品化生產(chǎn)，其原因可能是 藥源問題難以解決，或者在具有明確的抗腫瘤活性同時也存在一定的毒副作用，難以在臨 床上直接使用。生物活性肽(bioactive peptides)是一類天然存在于動、植物和微生物等生物 體內(nèi)，或動、植物蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶解以及人工化學合成、生物工程等方法也可以獲得。生 物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)幾百種肽，是機體完成各種復雜生理活性必不可少的參與者。所有生物細胞 都能合成多肽物質(zhì)，其功能活動也受多肽的調(diào)節(jié)。近年來，國內(nèi)外研究者試圖從天然物質(zhì)中 獲取具有單一活性抗腫瘤多肽，以克服現(xiàn)有藥物不良反應(yīng)及腫瘤耐藥性。與傳統(tǒng)的化療和 放療相比，天然抗腫瘤活性多肽最大的優(yōu)點在于相對分子質(zhì)量小、活性高、不良反應(yīng)小、易 于多途徑吸收、不易產(chǎn)生耐藥性。而且它們多存在內(nèi)源性靶點、極易穿透腫瘤細胞、提高免 疫應(yīng)答、抑制腫瘤血管形成、抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等特點，已成為腫瘤治療研究的一個新熱 點ο幾十年來，人們一直在抗腫瘤藥物領(lǐng)域不停的探索，已經(jīng)取得了一定的成果。從天 然資源中尋找特異性高、活性強、毒副反應(yīng)小且使用面廣的抗腫瘤新藥研究已廣泛開展，目 前已發(fā)現(xiàn)很多天然來源的抗腫瘤藥物具有很好的療效，明確其作用機制，有利于開發(fā)利用 其有效結(jié)構(gòu)并加以改進，使之更好的發(fā)揮分子靶向作用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，抗腫瘤 藥物研發(fā)已經(jīng)迎來新的時代，這也為抗腫瘤生物活性肽的研發(fā)提供了樂觀的前景。鷹嘴豆(Cicer arietinumol/L L.)屬于豆科，豌豆族，鷹嘴豆屬，在新疆有2500 年的生長歷史，是維吾爾醫(yī)常用藥材，維吾爾語名為諾胡提，已被收載在中華人民共和國衛(wèi) 生部《藥品標準》維吾爾藥分冊和《維吾爾藥志》中，“它具有清除異常體液，開通體液閉阻， 調(diào)節(jié)機體等作用。用于身體瘦弱，性欲低下，食欲不振，皮膚瘙癢及糖尿病等疾病”。雖然鷹 嘴豆用藥歷史悠久，但其功能因子不清楚，特別是具有生物活性多肽類化合物的研究空白。本發(fā)明的目的在于提供一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽 的方法，該方法通過磷酸緩沖溶液提取、硫酸氨沉淀、以及脫鹽后離心等步驟純化得到具有 抗腫瘤活性的蛋白質(zhì)和多肽，為維吾爾藥食兩用植物鷹嘴豆的生物活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并 開發(fā)相應(yīng)的產(chǎn)品提供了依據(jù)。該方法制備過程簡單，又不易使蛋白質(zhì)和多肽失活，制備的蛋 白質(zhì)和多肽抗腫瘤活性高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，易于擴大規(guī)模生產(chǎn)，降低純化過程成本，是制備生物活性蛋白質(zhì)和多肽的理想方法之一。通過該方法獲得的蛋白質(zhì)和多肽作為制備食 品、藥品添加劑的用途
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽的 方法，該方法通過磷酸緩沖溶液提取、硫酸銨沉淀得到具有生物活性(如抗腫瘤活性)的蛋 白質(zhì)和多肽，為維吾爾藥食兩用植物鷹嘴豆的生物活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并開發(fā)相應(yīng)的產(chǎn)品 提供了依據(jù)。該方法提取過程簡單，又不易使蛋白質(zhì)和多肽失活，制備的蛋白質(zhì)和多肽抗腫 瘤活性高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，易于擴大規(guī)模生產(chǎn)，降低生產(chǎn)成本，是制備生物活性蛋白質(zhì) 和多肽的理想方法之一。通過該方法獲得的蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品、藥品添加劑的用 途。本發(fā)明所述的一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽的方法，按 下列步驟進行a、將鷹嘴豆清洗除去雜物，浸泡Ih-Sh ；b、將步驟a清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，溫度為15_30°C，水溫 15-30°C，淋水時間3-10秒，淋水間隔2-6小時，發(fā)芽時間3-7天；C、將步驟b發(fā)芽的鷹嘴豆豆芽上的芽和豆瓣分開，并分別晾干；d、將步驟c晾干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過10-60目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂， 所得脫脂粉備用；e、將步驟d脫脂粉用液氮研磨，再用磷酸緩沖液攪拌提取，時間為1-5小時，過濾， 將濾液用低溫離心機除去沉淀，得到上清液備用；f、將步驟e上清液加入無水硫酸氨，充分攪拌溶解后放置冰箱靜置24小時，低溫 離心，時間20min，將沉淀用水溶解透析脫鹽后，再進行低溫離心，時間20min，沉淀干燥即 可得到抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽；g、再利用常規(guī)方法十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳確定提取的蛋白質(zhì)和 多肽的成分及其分子量，對提取的蛋白質(zhì)和多肽進行抑制結(jié)腸癌細胞的活性來確定提取的 蛋白質(zhì)和多肽的抗腫瘤活性。步驟e、f和g中的提取、分離、純化過程所用水均為三蒸水。步驟e、f中的低溫離心速度為12000轉(zhuǎn)/分。步驟e中磷酸鹽緩沖溶液的濃度為0. 01-0. lmol/L,ρΗ = 4. 0-10.0。 步驟f中無水硫酸銨飽和度為30 % -80 %。通過本發(fā)明所述的方法獲得的鷹嘴豆天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食 品或藥品的添加劑的用途。


圖1為本發(fā)明鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽的15% SDS-PAGE考馬斯染色圖， 其中0 標準蛋白標記，甲狀旁腺激素(1-34) (4. lkDa)，抑肽酶(6. 5kDa)，甲狀旁腺激 素(1-84) (9.5kDa)，溶菌酶(14. 4kDa)，胰蛋白酶抑制劑(20. OkDa)，磷酸丙糖異構(gòu)酶(27. OkDa)，豬胃蛋白酶(35. OkDa)，卵清蛋白(45. OkDa)，牛血清白蛋白(66. OkDa)；圖中1 號為實施例1 ；2號為實施例2 ；3號為實施例3 ；4號為實施例4 ；5號為實施例5 ；6號為實 施例6。
具體實施例方式實施例1 鷹嘴豆豆瓣的制備將Ikg鷹嘴豆清洗除去外雜物，浸泡Ih ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為15°C，水溫20°C，淋水 時間3秒，淋水間隔2小時，發(fā)芽時間4天；將發(fā)芽4天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過10目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備 用；蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣粉用液氮研磨，再用濃度為0. lmol/L, pH = 6. 0的磷 酸緩沖液在溫度4°C攪拌提取2小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉淀， 得到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為30 %，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，將沉淀透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和多肽溶液再 次低溫離心，時間20min，得到水溶性蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多肽，并分別低 溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例2鷹嘴豆豆瓣的制備將Ikg鷹嘴豆清洗除去外雜物，浸泡4h ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為20°C，水溫15°C，淋水 時間5秒，淋水間隔6小時，發(fā)芽時間3天；將發(fā)芽3天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過40目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備 用；蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣粉用液氮研磨，再用濃度為0. 05mol/L,pH = 7. 0的磷 酸緩沖液在溫度4°C攪拌提取1小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉淀， 得到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為50 %，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和多肽溶液再次低溫離心，時間20min，得到水溶性的蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多 肽，并分別低溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例3鷹嘴豆豆瓣的制備 將Ikg鷹嘴豆清洗除去外雜物，浸泡5h ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為25°C，水溫25°C，淋水 時間7秒，淋水間隔4小時，發(fā)芽5天；將發(fā)芽5天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過60目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備 用；蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣粉用液氮研磨，再用濃度為0. 07mol/L,pH = 5. 0的磷 酸緩沖液在溫度4°C攪拌提取3小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉淀， 得到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為70 %，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和 多肽溶液再次低溫離心，時間20min，得到水溶性蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多 肽，并分別低溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例4鷹嘴豆豆瓣的制備將Ikg鷹嘴豆清洗除去外雜物，浸泡8h ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為30°C，水溫30°C，淋水 時間8秒，淋水間隔5小時，發(fā)芽6天；將發(fā)芽6天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過50目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備 用；蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣粉用液氮研磨，再用濃度為0. 01mol/L,pH = 9. 0的磷 酸緩沖液在溫度4°C攪拌提取5小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉淀， 得到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為40 %，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和 多肽溶液再次低溫離心，時間20min，得到水溶性蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多肽，并分別低溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例5鷹嘴豆豆瓣的制備將Ikg鷹嘴豆清洗除去外雜物，浸泡2h ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為22°C，水溫25°C，淋水 時間10秒，淋水間隔6小時，發(fā)芽7天；將發(fā)芽7天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過30目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備 用；蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣用液氮研磨，再用濃度為0. 03mol/L,pH = 4. 0的磷酸 緩沖液在溫度4°C攪拌提取4小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉淀，得 到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為60%，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和 多肽溶液再次低溫離心，時間20min，得到水溶性蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多 肽，并分別低溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例6鷹嘴豆豆瓣的制備將Ikg鷹嘴豆清洗出去外雜物，浸泡6h ；將清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，豆芽箱的溫度為20°C，水溫20°C，淋水 時間4秒，淋水間隔3小時，發(fā)芽4天；將發(fā)芽4天的鷹嘴豆的芽和豆瓣分開，并分別晾干；將干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過20目篩子后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉蛋白質(zhì)和多肽的提取取100克脫脂的鷹嘴豆豆瓣粉用液氮研磨，再用濃度為0. 08mol/L, pH = 10. 0的 磷酸緩沖液在溫度4°C攪拌提取3小時，將提取液先用紗布過濾，再用低溫離心機除去沉 淀，得到上清液備用；蛋白質(zhì)和多肽的分離將上清液根據(jù)體積添加無水硫酸氨至其飽和度為80 %，充分攪拌溶解后放入冰箱 中靜置24小時，低溫離心，時間20min，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽，將脫鹽后的蛋白質(zhì)和 多肽溶液再次低溫離心，時間20min，得到水溶性蛋白質(zhì)和多肽以及水不溶的蛋白質(zhì)和多 肽，并分別低溫干燥，水不溶的蛋白質(zhì)和多肽部位即為抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽。
7
所述的方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品或藥品的添加劑 的用途。實施例7通過本發(fā)明所述方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽進行分子量范圍的確 定試劑配制及樣品處理樣品緩沖液0. 5mL的0. 5mol/L的三羥甲基氨基甲烷-氯化氫(pH 6. 8)、2mL的 10%十二烷基磺酸鈉、ImL甘油、0. 5mL的β -巰基乙醇、ImL的水、微量的溴酚藍；樣品的處理樣品溶液和樣品緩沖液等體積混合，隔水煮沸l(wèi)Omin，離心IOmin ；電極緩沖液將15. 1克三羥甲基氨基甲烷、94克甘氨酸、50mL的10%十二烷基磺 酸鈉溶解并定容至4L。十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳儲存液30% (W/V)丙烯酰 胺、0. 8% (ff/V)N, N，-甲叉雙丙烯酰胺；15%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳的分離膠配制1. lmL&H20、2. 5mL的 30% (V/V)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳儲存液、1. 3mL的1. 5mol/L的三羥甲基 氨基甲烷-氯化氫(pH 8. 8)、0. 05mL的10% (W/V)十二烷基磺酸鈉、0. 05mL的10% (W/V) 過硫酸銨、0. 002mL的N，N，N，，N，-四甲基乙二胺；5%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳的分離膠配制0. 68mL的H20、0. 17mL 的30% (V/V)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳儲存液、0. 13mL的0. 5mol/L的三羥 甲基氨基甲烷_氯化氫(pH 6. 8)、0. OlmL的10% (W/V)十二烷基磺酸鈉、0. OlmL的10% (W/V)過硫酸銨、0. OOlmL的N, N，N，，N，-四甲基乙二胺；電泳條件恒壓100伏，電泳時間約2小時?？捡R斯亮藍脫色液25%無水乙醇、8%的冰乙酸?？捡R斯亮藍染色液將0. 6克的考馬斯亮藍G-250溶解在300mL的脫色液中，過 濾，棕色瓶儲存；電泳結(jié)束后將凝膠片置于考馬斯亮藍染色液中4h，再用脫色液浸泡至背景色褪色 完全為止。實施例8通過本發(fā)明所述方法獲得的鷹嘴豆豆瓣活性蛋白質(zhì)和多肽抗腫瘤活性的確定取培養(yǎng)4-5天，處于指數(shù)生長期的細胞培養(yǎng)一瓶，加入適量胰蛋白酶-乙二胺四乙 酸溶液，使貼壁細胞脫落，用IOmL含5%胎牛血清的美國Sigma 1640培養(yǎng)液配成懸液；用臺盼藍染色后在血球計數(shù)板上做細胞計數(shù)，一般不著色的活細胞應(yīng)在97%以 上；用完全培養(yǎng)基稀釋細胞懸液，配成每IOOmL含5000-40000個細胞；取96孔平板，每孔加細胞懸液100 μ L，加細胞的過程應(yīng)控制在4小時內(nèi)，將平板置 于37°C CO2 (5% )溫箱24小時；受試化合物作5個稀釋度，最大濃度為10-4mol/L，依次作1 10稀釋(10_4， 10-5，10-6，10-7，10-8mol/L)。天然產(chǎn)物的粗提物最大濃度用250 μ g/mL,也作1 10稀釋。 樣品一般不需要加熱消毒或過濾，為了避免污染，在稀釋樣品用的完全培養(yǎng)基中加50yg/ mL慶大霉素；
將平板在，含5% CO2空氣及100%濕度的溫箱中孵育2-4天；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽用無血清美國Sigma 1640培養(yǎng) 液配成lmg/mL溶液，每孔加50，37°C溫育4小時，使MTT還原為甲臜；吸出上清液，加入150yL 二甲基亞砜使甲臜溶解，用平板搖床搖勻；用自動化分光光度平板讀數(shù)計(Model312，BiotechResearchLaboratories，Inc.， Rockville, Md)在550nm處測定每個小孔的光密度。結(jié)果分析細胞的存活率將各測試孔的OD值減去本底OD值(完全培養(yǎng)基加3-(4，5- 二甲 基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，無細胞)或空白藥物孔OD值(完全培養(yǎng)基加受試藥 物的不同稀釋度加3- (4，5- 二甲基噻唑-2) -2，5- 二苯基四氮唑溴鹽，無細胞)，各重復孔的 OD值取均數(shù)士 SD。細胞的存活率以T/C%表示，T為加藥細胞的OD值，C為對照細胞的OD值。細胞存活率(加藥細胞OD/對照細胞0D) X 100求出T/C = 50時的藥物濃度(IC5tl)。所得蛋白質(zhì)和多肽的IC5tl濃度
權(quán)利要求
一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤蛋白質(zhì)和多肽的方法，其特征在于按下列步驟進行a、將鷹嘴豆清洗除去雜物，浸泡1h 8h；b、將步驟a清洗、浸泡的鷹嘴豆放入豆芽箱內(nèi)發(fā)芽，溫度為15 30℃，水溫15 30℃，淋水時間3 10秒，淋水間隔2 6小時，發(fā)芽時間3 7天；c、將步驟b發(fā)芽的鷹嘴豆豆芽上的芽和豆瓣分開，并分別晾干；d、將步驟c晾干燥的鷹嘴豆豆瓣粉碎，過10 60目篩后，用正己烷進行冷浸脫脂，所得脫脂粉備用；e、將步驟d脫脂粉用液氮研磨，再用磷酸緩沖液攪拌提取，時間為1 5小時，過濾，將濾液用低溫離心機除去沉淀，得到上清液備用；f、將步驟e上清液加入無水硫酸氨，充分攪拌溶解后放置冰箱靜置24小時，低溫離心，時間20min，將沉淀用水溶解透析脫鹽后，再進行低溫離心，時間20min，沉淀干燥即可得到抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽；g、再利用常規(guī)方法十二烷基磺酸鈉 聚丙烯酰胺凝膠電泳確定提取的蛋白質(zhì)和多肽的成分及其分子量，對提取的蛋白質(zhì)和多肽進行抑制結(jié)腸癌細胞的活性來確定提取的蛋白質(zhì)和多肽的抗腫瘤活性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟e、f和g中的提取、分離、純化過程所 用水均為三蒸水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟e、f中的低溫離心速度為12000轉(zhuǎn)/分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟e中磷酸鹽緩沖溶液的濃度為 0. 01-0. lmol/L, pH = 4. 0-10. 0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟f中無水硫酸銨飽和度為30%-80%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從鷹嘴豆豆瓣中提取天然抗腫瘤活性蛋白質(zhì)和多肽的方法，該方法通過磷酸緩沖溶液提取、硫酸銨沉淀，除鹽和離心等步驟，即可得到能夠抑制結(jié)腸癌細胞活性的蛋白質(zhì)和多肽。為維吾爾藥食兩用植物鷹嘴豆的生物活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并開發(fā)相應(yīng)的產(chǎn)品提供了依據(jù)。該方法提取過程簡單，又不易使蛋白質(zhì)和多肽失活，制備的多肽生物活性高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，易于擴大規(guī)模生產(chǎn)，降低提取過程的成本，是提取制備生物活性蛋白質(zhì)和多肽的理想方法之一。通過該方法獲得的蛋白質(zhì)和多肽作為制備功能食品或藥品添加劑的用途。
文檔編號C07K1/14GK101962399SQ201010502809
公開日2011年2月2日 申請日期2010年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月11日
發(fā)明者阿吉艾克拜爾·艾薩, 阿布力米提·伊力, 馬慶苓 申請人:中國科學院新疆理化技術(shù)研究所