專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從灰氈毛忍冬中快速提取木犀草素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從灰氈毛忍冬中快速提取木犀草素的工藝技術(shù)，屬于天然產(chǎn)物化 學(xué)的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
木犀草素(又稱(chēng)木犀黃定，Luteolin)，化學(xué)名稱(chēng)為3’，4’，5，7-四羥基黃酮(3’， 4’，5，7-Tetralydroxyflanone)。木犀草素在自然界中分布廣泛，因最初是從木犀草科木 犀草屬草本植物木犀草(ResedaodorataL.)的葉、莖、枝中分離出而得名，可從多種天然藥 材、蔬菜果實(shí)中分離得到。目前發(fā)現(xiàn)木犀草素主要存在于金銀花(金銀花和灰氈毛忍冬)、菊花、荊芥、白毛 夏枯草、洋薊、紫蘇屬、黃芩屬等天然藥材中，以及芽甘藍(lán)、菜花、甜菜、胡蘿卜、芹菜、甜椒、 辣椒、落花生等蔬菜果實(shí)中，其它如橄欖油和紅酒等植物產(chǎn)品以及野鳳仙花、百里香草、唇 形科植物筋骨草等也含有木犀草素。灰氈毛忍冬中的木犀草素的含量被認(rèn)為是最高的，均 超過(guò)0. 24%。木犀草素具有豐富的生物活性，主要有1、抗炎木犀草素的抗炎活性與抑制一氧化氮和其他炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因 子-α (TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL_6)的產(chǎn)生，抑制蛋白質(zhì)絡(luò)氨酸的磷酸化以及核轉(zhuǎn)錄因 子KB(NF-KB)介導(dǎo)的基因表達(dá)有關(guān)。2、抗腫瘤木犀草素可以選擇性抑制前列腺癌和乳腺癌細(xì)胞的脂肪酸合成酶活性， 與其抗腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)和調(diào)亡作用相關(guān)；木犀草素可以顯著降低結(jié)腸癌的發(fā)生率。3、抗過(guò)敏木犀草素可以抑制免疫球蛋白E(IgE)介導(dǎo)的人肥大細(xì)胞產(chǎn)生的變態(tài)反 應(yīng)遞質(zhì)。4、抗炎癥性脫髓鞘疾病木犀草素體外可以劑量依賴(lài)地保護(hù)少突膠質(zhì)細(xì)胞抵抗過(guò) 氧化氫誘導(dǎo)的氧化損害，強(qiáng)烈抑制巨噬細(xì)胞對(duì)髓鞘的吞噬作用。5、抗纖維化木犀草素可以降低肝纖維化程度，降低肝組織中羥脯氨酸、丙二醛的 含量以及I型前膠原HiRNA的表達(dá)。6、抗生育與激素作用木犀草素具有顯著的劑量依賴(lài)的抗著床活性。
7、對(duì)血管的作用木犀草素體內(nèi)可以抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)的兔角膜 血管的生成；可以抑制鼠異種移植腫瘤模型的腫瘤生長(zhǎng)和血管形成。8、其他木犀草素可以抑制多種細(xì)菌和病毒，如金葡球菌、大腸桿菌、單純皰疹病 毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇B3病毒等。能抑制艾滋病病毒HIV-1整合酶的活性，具有潛在 的抗HIV的作用。木犀草素可以與嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)冠狀病毒的S2蛋白結(jié)合， 從而抑制病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。此外，木犀草素還具有免疫調(diào)節(jié)的作用等。我國(guó)金銀花栽培面積、產(chǎn)量均位居世界首位。2009版藥典規(guī)定，金銀花分為北方金 銀花和南方金銀花，北方金銀花以山東產(chǎn)金銀花為代表；南方金銀花以湖南產(chǎn)金銀花為代 表，又叫山銀花或灰氈毛忍冬。迄今為止的文獻(xiàn)均著重于金銀花中中新化合物的發(fā)現(xiàn)及結(jié) 構(gòu)的確定，而對(duì)灰氈毛忍冬中木犀草素的快速提取工藝沒(méi)有研究。而且木犀草素在灰氈毛 忍冬中含量較高，取材方便，價(jià)格便宜，產(chǎn)品安全性高。因而，對(duì)灰氈毛忍冬進(jìn)行深加工意義 非凡。探索從灰氈毛忍冬中提取木犀草素，其意義相當(dāng)遠(yuǎn)大，不但可以解決合成木犀草素安 全性問(wèn)題，還可以增加農(nóng)民收入，服務(wù)地方經(jīng)濟(jì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用的技術(shù)方案包括干燥過(guò)后的灰氈毛忍冬經(jīng)用乙醇溶液提取、離心、減 壓濃縮，然后用樹(shù)脂吸附、乙醇洗脫、將洗脫液濃縮，萃取、減壓濃縮，脫色制得木犀草素純
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m o因此，本發(fā)明提供一種從灰氈毛忍冬提取木犀草素的方法，步驟包括1、粉碎干燥灰氈毛忍冬，并將灰氈毛忍冬、60%乙醇按重量(kg)/體積比(V)= 1 1-3進(jìn)行混合，加熱回流提?。?、過(guò)濾，離心取上清液，減壓濃縮至無(wú)乙醇味；3、將濃縮液用1.5-3倍體積的乙酸乙酯萃取三次，分離乙酸乙酯層并進(jìn)行濃縮， 直至獲得干燥物；4、加入60 %乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入活性碳進(jìn)行脫色，再進(jìn)行濃縮直至獲得 干燥物；5、加入90%乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入熱水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為30-40%，室溫
過(guò)夜結(jié)晶，得木犀草素純品。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟5的乙醇終濃度為35%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，步驟2的過(guò)濾過(guò)程是紗布過(guò)濾、然后離心取上清液。其中， 優(yōu)選是三層紗布過(guò)濾2次、離心取上清液1次。在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4中所加入的60%乙醇、活性碳，其體積(V)/重量(kg) 比=30-20 1。在另一個(gè)實(shí)施方案中，步驟4中不加入70%乙醇，只加入活性碳脫色，再進(jìn)行濃縮 直至獲得干燥物。技術(shù)效果1、本發(fā)明方法中所用的原料、設(shè)備均為常見(jiàn)的普通原料、設(shè)備，避免了工業(yè)化生產(chǎn) 過(guò)程中對(duì)于昂貴原材料、儀器的依賴(lài)，大大地降低了生產(chǎn)成本；2、灰氈毛忍冬種植容易，扦插、組培均可，產(chǎn)量高、價(jià)格適中，來(lái)源方便，后續(xù)資源有保障。使用灰氈毛忍冬作為原料，既大大提高了灰氈毛忍冬的利用效率，提高灰氈毛忍冬 的附加值，又?jǐn)[脫了對(duì)于其它材料如木犀草、落花生殼等原料的依賴(lài)，可以緩解市場(chǎng)對(duì)其它 原材料的大量需求，同時(shí)又能對(duì)廢棄灰氈毛忍冬充分利用，保護(hù)了木犀草等植物資源。3、本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，不必使用樹(shù)脂層析過(guò)濾技術(shù)，也不需要精密儀器或自動(dòng) 化設(shè)備，可在灰氈毛忍冬資源豐富的鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)進(jìn)行生產(chǎn)，這極大的降低了木犀草素的生產(chǎn) 成本，簡(jiǎn)化了生產(chǎn)過(guò)程。4、本發(fā)明所用的試劑均為無(wú)毒、廉價(jià)、量產(chǎn)的化學(xué)試劑，整個(gè)過(guò)程中可利用成熟的 試劑回收的常規(guī)技術(shù)，這極大地降低了向環(huán)境排放廢棄物。5、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期摸索，本發(fā)明確定了采用30-40% (優(yōu)選45% )乙醇終濃度在室溫條 件下進(jìn)行結(jié)晶，木犀草素的純度是最高，可達(dá)到93. 86-94. 43%。


圖1 木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜曲線(xiàn)圖，其中縱坐標(biāo)表示峰面積，橫坐標(biāo)表示分 離時(shí)間。圖2 從灰氈毛忍冬中提取木犀草素的液相色譜曲線(xiàn)圖，其中縱坐標(biāo)表示峰面積， 橫坐標(biāo)表示分離時(shí)間。
具體實(shí)施例方式下面，本發(fā)明將用實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明，但是它并不限于這些實(shí)施例的任一 個(gè)或類(lèi)似實(shí)例。實(shí)施例1 粉碎干燥灰氈毛忍冬100kg，加入60%乙醇300L，80°C加熱回流提取2h，三層紗布 過(guò)濾兩次、然后離心取上清液，減壓濃縮至80L (無(wú)乙醇味)，然后濃縮液用150L乙酸乙酯分 三次萃取，取乙酸乙酯層進(jìn)行濃縮至干，再用60%乙醇80L加熱溶解，加5kg顆粒活性碳進(jìn) 行脫色30min，再濃縮至干，90%乙醇2L加熱溶解后，再加熱水混勻，直至乙醇終濃度40%， 然后室溫結(jié)晶24h，得到木犀草素樣品。經(jīng)檢測(cè)，AgilentllOO高效液相色譜儀，色譜柱為 Hypersil 0DS(150mmX4. 6mm, 5iO，流動(dòng)相為60%甲醇的水溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)為298nm ；流速為lml/min ；進(jìn)樣量為20y L。 木犀草素樣品的純度為94. 43%，結(jié)果如表1和圖1所示。實(shí)施例2 粉碎干燥灰氈毛忍冬500kg，加入60%乙醇600L，80°C加熱回流提取2h，三層紗布 過(guò)濾兩次、然后離心取上清液，減壓濃縮至100L (無(wú)乙醇味)，然后濃縮液用300L乙酸乙酯 分三次萃取，取乙酸乙酯層進(jìn)行濃縮至干，再用60%乙醇150L加熱溶解，加15kg活性碳進(jìn) 行脫色30min，再濃縮至干，90 %乙醇6L加熱溶解后，再加熱水直至乙醇終濃度37%，室溫 結(jié)晶24h，得到木犀草素樣品。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行純度檢測(cè)，純度為94. 27%，結(jié)果如 表1所示°實(shí)施例3 粉碎干燥灰氈毛忍冬200kg，加入60%乙醇200L，80°C加熱回流提取2h，三層紗布 過(guò)濾兩次、然后離心取上清液，減壓濃縮至50L (無(wú)乙醇味)，然后濃縮液用150L乙酸乙酯分
5三次萃取，取乙酸乙酯層，再用60%乙醇100L加熱溶解，加8kg活性碳進(jìn)行脫色30min，再 濃縮至千，90%乙醇3L加熱溶解后，再加熱水直至乙醇終濃度30 %，室溫結(jié)晶24h，得到木 犀草素樣品。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行純度檢測(cè)，純度為93. 86%，結(jié)果如表1所示。實(shí)施例4 粉碎干燥灰氈毛忍冬300kg，加入60%乙醇300L，80°C加熱回流提取2h，三層紗布 過(guò)濾兩次、然后離心取上清液，減壓濃縮至80L (無(wú)乙醇味)，然后濃縮液用240L乙酸乙酯分 三次萃取，取乙酸乙酯層，再用60%乙醇120L加熱溶解，加10kg活性碳進(jìn)行脫色30min，再 濃縮至千，90%乙醇4L加熱溶解后，再加熱水4L混勻，室溫結(jié)晶24h,得到木犀草素固體， 90%乙醇2L加熱溶解后，再加熱水混勻直至乙醇終濃度35%，室溫結(jié)晶24h，得到木犀草素 純品。按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行純度檢測(cè)，純度為94. 06%，結(jié)果如表1所示。表 權(quán)利要求
一種從灰氈毛忍冬提取木犀草素的方法，步驟包括(1)粉碎干燥灰氈毛忍冬，并將灰氈毛忍冬、60％乙醇按重量(kg)/體積比(V)＝1∶1 3進(jìn)行混合，加熱回流提?。?2)提取液先紗布粗濾，然后離心取上清液，減壓濃縮至無(wú)乙醇味；(3)將濃縮液用1.5 3倍體積的乙酸乙酯萃取三次，分離乙酸乙酯層并進(jìn)行濃縮，直至獲得干燥物；(4)加入60％乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入活性碳進(jìn)行脫色，再進(jìn)行濃縮直至獲得干燥物；(5)加入90％乙醇進(jìn)行加熱溶解，然后加入熱水調(diào)節(jié)乙醇終濃度為30 40％，室溫過(guò)夜結(jié)晶，得木犀草素純品。
2.權(quán)利要求1的方法，其中步驟5的乙醇終濃度為35%。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中步驟2的過(guò)濾過(guò)程是紗布過(guò)濾、然后離心取上清液。
4.權(quán)利要求3的方法，其中過(guò)濾實(shí)是三層紗布過(guò)濾2次、離心取上清液1次。
5.權(quán)利要求1或2的方法，其中步驟4中所加入的60%乙醇、活性碳，其體積(V)/重 量(kg)比=30-20 1。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從灰氈毛忍冬中快速提取木犀草素的方法，大大地提高木犀草素得率和純度。提出了一整套從灰氈毛忍冬分離提取得到高純度的木犀草素，采用乙醇回流提取，離心，濃縮，萃取，活性炭脫色，乙醇結(jié)晶和重結(jié)晶，得到木犀草素純品。整個(gè)分離過(guò)程中對(duì)環(huán)境條件要求不高，分離時(shí)間最短，純度最高。分離材料易得便宜，分離操作過(guò)程簡(jiǎn)單，易控制，采用結(jié)晶和重結(jié)晶，純化效率高。
文檔編號(hào)C07D311/30GK101973975SQ201010509619
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月18日
發(fā)明者饒力群 申請(qǐng)人:饒力群