專利名稱：從山楂中精提熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于熊果酸的提取，具體涉及一種從山楂中精提熊果酸的方法。
背景技術(shù)：
熊果酸(Ursolic acid)又名烏蘇酸、烏索酸，為五環(huán)三萜酸，體外試驗(yàn)表明，本 品對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-8)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人黑色素瘤細(xì)胞(MV3)、人胃癌細(xì)胞 (BGC-823)、人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞(801-D)、人卵巢癌細(xì)胞(A2780)、人口腔上皮癌細(xì)胞(KB) 等有明顯的抑制作用；荷瘤小鼠試驗(yàn)結(jié)果表明本品對(duì)人移植性肝癌(Bel-7402)、人肝癌 (SMMC-7721)、小鼠Lewis肺癌(3LL)、S180、H22均有明顯抑制作用。熊果酸能直接殺傷腫 瘤細(xì)胞，其作用是通過激活癌細(xì)胞中的RARP及內(nèi)切酶攻擊核及核小體DNA，最終導(dǎo)致細(xì)胞 溶解；本品能促進(jìn)人肝癌細(xì)胞(HepG12)凋亡，降低H印G12的細(xì)胞活力，細(xì)胞主要被阻滯在 GO期和Gl期，并體S期細(xì)胞數(shù)的下降。體外試驗(yàn)證明本品顯著抑制SV40DNA復(fù)制在啟始， 并大大減少拓樸異構(gòu)酶I的DNA斷裂，顯著降低復(fù)制蛋白A的單鏈DNA的結(jié)合活性?，F(xiàn)有從山楂中提取熊果酸的方法，采用堿性乙醇回流提取后，在PH9 11條件下 溶解過濾后，濾液調(diào)PH3 4，得沉淀，水洗沉淀，用干燥后再乙醇去雜質(zhì)，過濾結(jié)晶等到熊 果酸。這種方法采用堿性溶解，再利用酸性沉淀，并且要求PH3 4，工藝要求高，經(jīng)本發(fā)明 人反復(fù)試驗(yàn)，上述方法只能適用于實(shí)驗(yàn)室的小試，在進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)，由于工藝控 制難度大，產(chǎn)品質(zhì)量、純度，收率均不穩(wěn)定，不適合藥用原料藥的生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能使與大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，質(zhì)量穩(wěn)定的從山楂中精提 熊果酸的方法，以解決上述問題。本發(fā)明的技術(shù)方案為(1)將山楂在70 100°C的溫度下水煮0.5 3小時(shí)，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干；(2)將烘干后的產(chǎn)物用乙醇回流提取1 3次，每次1 4h，合并提取液，減壓回 收至干浸膏且無醇味，干浸膏的比重控制在0. 85 1. 30(單位g/ml)之間；(3)用70°C的熱水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，調(diào)節(jié)干浸膏液的PH值至 11. 5 13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗第一沉淀物至第一沉淀物的濾液PH等于 7，得到第二沉淀物，抽濾第二沉淀物后，將第二沉淀物在70°C下烘干；(4)取步驟(3)中烘干物，用石油醚30-90或乙酸乙脂脫色過濾，保留濾渣，揮干溶 劑，過濾得沉淀；(5)取步驟(4)中沉淀，再用適量乙醇溶解，硅膠、氧化鋁、活性炭、硅藻土、離子交 換樹脂中的一種脫色，過濾，得到白色沉淀；(6)熊果酸重結(jié)晶取步驟(4)白色沉淀，用無水乙醇重結(jié)晶，即可獲得最后的結(jié) 晶產(chǎn)物；重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶12小時(shí)。所述步驟(3)中，利用堿調(diào)節(jié)所述干浸膏的PH值至12。
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所述步驟⑵中所述乙醇回流提取的要求是；第一次2 4小時(shí)；第二次1. 5 3 小時(shí)；第三次1 2小時(shí)。所述步驟(1)中，水煮時(shí)，水的重量為山楂重量的5 30倍。所述步驟(2)中，用乙醇回流提取時(shí)，第一次乙醇的重量是山楂重量的1 6倍； 第二次乙醇的重量是山楂重量的1 5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1 4倍。步驟(2)中，所述用乙醇回流提取時(shí)，乙醇體積濃度為50 100%。本發(fā)明的工藝中，先采用水煮將山楂中的水溶性雜質(zhì)驅(qū)除，為后續(xù)工藝步驟提供 “單純”的非水溶性物質(zhì)，有利于后續(xù)規(guī)模生產(chǎn)工藝步驟中的質(zhì)量控制，避免山楂中水溶性 物質(zhì)對(duì)后續(xù)工藝步驟的影響。本發(fā)明在利用乙醇回流提取濃縮后，進(jìn)行調(diào)節(jié)干浸膏液的PH 值至11. 5 13，放置得第一沉淀物，將第一沉淀物用蒸餾水洗至PH等于7，這樣先將乙醇 回流提取濃縮后，利用調(diào)節(jié)堿性，得到堿性沉淀物，該步驟避易于控制，再用水洗堿性沉淀 物至中性，更容易實(shí)現(xiàn)；它避免現(xiàn)有工藝中在PH9 11條件下溶解過濾后，濾再調(diào)PH3 4， 得沉淀物的質(zhì)量不穩(wěn)定性，由于在規(guī)?；a(chǎn)過程中，采用堿性溶解，再利用酸性得沉淀物 時(shí)，濾液調(diào)PH3 4的中和過程中的濾液均勻度受攪拌裝置、溫度和時(shí)間的影響，所以得到 得沉淀物的質(zhì)量難以控制，這也是現(xiàn)有技術(shù)中不適合規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的原因之一。本方法 提取的熊果酸的含量98%以上，本發(fā)明適合藥用原料藥的大規(guī)?；墓I(yè)生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(1)采用水煮對(duì)樣本除掉大部分水溶性；取10公斤山楂加5倍山楂重量的水；水 煮沸后保持在70°C下0. 5小時(shí)，抽濾后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產(chǎn)物用該產(chǎn)物6倍重量份的體積濃度為95%乙醇回流提取 1次，時(shí)間4h，減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml之間。(3)用5倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至11. 5，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉 淀物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用1倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚30倍 脫色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結(jié)晶用無水乙醇重結(jié)晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結(jié)晶產(chǎn)物。重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶2小時(shí)。得到最終結(jié) 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質(zhì)量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為42 %純度為 彡 98%。實(shí)施例2(1)取50公斤山楂加10倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80°C下1. 5小時(shí)，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產(chǎn)物用該產(chǎn)物3倍重量份的體積濃度為95%乙醇回流提取2次，第一次回流提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的6倍；時(shí)間3小時(shí)；第二次回流提取乙醇 的重量是產(chǎn)物用重量的5倍；時(shí)間lh，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比 重控制在0. 85 1. 30g/ml之間。(3)用10倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至12，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚60脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結(jié)晶用無水乙醇重結(jié)晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結(jié)晶產(chǎn)物。重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶2小時(shí)。得到最終結(jié) 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質(zhì)量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為50%純度為彡98%。實(shí)施例3(1)取100公斤山楂加30倍山楂重量的水；水煮沸后保持在70°C下3小時(shí)，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產(chǎn)物用該產(chǎn)物8倍重量份的體積濃度為50 100%乙醇回 流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的6倍；時(shí)間1. 5小時(shí)；第二次回流 提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的5倍；時(shí)間1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重 量的4倍；時(shí)間lh，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml 之間。(3)用40倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結(jié)晶用無水乙醇重結(jié)晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結(jié)晶產(chǎn)物。重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶2小時(shí)。得到最終結(jié) 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質(zhì)量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為49%純度為彡98%。實(shí)施例4(1)取80公斤山楂加20倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80°C下2. 5小時(shí)，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產(chǎn)物用該產(chǎn)物10倍重量份的體積濃度為50 100%的乙醇 回流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的8倍；時(shí)間2小時(shí)；第二次回流 提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的8倍；時(shí)間1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是產(chǎn)物用重量的8倍；時(shí)間0. 5h，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml 之間。(3)用25倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至12，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用5倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結(jié)晶用無水乙醇重結(jié)晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結(jié)晶產(chǎn)物。重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶2小時(shí)。得到最終結(jié) 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質(zhì)量為分子式C3tlH48O3分子量456.36;收率為51%純度為 彡 98%。
權(quán)利要求
一種從山楂中精提熊果酸的方法，其步驟是(1)將山楂在70～100℃的溫度下水煮1～5小時(shí)，抽濾后將濾渣在70℃下烘干；(2)將烘干后的用乙醇回流提取1～3次，每次1～4h，合并提取液，減壓回收至干浸膏狀且無醇味，比重控制在0.85～1.30g/ml之間；(3)用70℃的熱水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，調(diào)節(jié)干浸膏液的PH值至11.5～13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗第一沉淀物至第一沉淀物的濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾第二沉淀物后將第二沉淀物在70℃下烘干；(4)取步驟(3)中烘干物，用石油醚30 90或乙酸乙脂脫色過濾，保留濾渣，揮干溶劑，過濾得沉淀；(5)取步驟(4)中沉淀，再用適量乙醇溶解，硅膠、氧化鋁、活性炭、硅藻土、離子交換樹脂中的一種脫色，過濾，得到白色沉淀；(6)熊果酸重結(jié)晶取步驟(4)白色沉淀，用無水乙醇重結(jié)晶，即可獲得最后的結(jié)晶產(chǎn)物；重結(jié)晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結(jié)晶12小時(shí)。
2.如權(quán)利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(3)中，利用堿調(diào)節(jié) 所述干浸膏液的PH值至12。
3.如權(quán)利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述乙醇回 流提取的要求是；第一次第一次2 4小時(shí)；第二次1. 5 3小時(shí)；第三次1 2小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(1)中，水煮時(shí)，水 的重量為山楂重量的5 50倍。
5.如權(quán)利要求1或3所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中，用乙 醇回流提取時(shí)，第一次乙醇的重量是山楂重量的1 6倍；第二次乙醇的重量是山楂重量的 1 5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1 4倍。
6.如權(quán)利要求1或3所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中，所述用 乙醇回流提取時(shí)，乙醇體積濃度為50 100%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從山楂中精提熊果酸的方法。它是先將山楂水煮驅(qū)除水溶性雜質(zhì)后，利用乙醇回流提取濃縮，調(diào)節(jié)再濃縮物的pH值至堿性，得到沉淀物，水洗沉淀物至中性，脫色后重結(jié)晶得到熊果酸。該方法適于規(guī)模化的工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J63/00GK101983965SQ20101052015
公開日2011年3月9日 申請日期2010年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月26日
發(fā)明者張長弓, 易以木, 白巖 申請人:武漢利元亨藥物技術(shù)有限公司