專利名稱:一種抗菌肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及分子微生物學(xué)領(lǐng)域,具體的說是一種抗菌肽及其應(yīng)用。
背景技術(shù):
隨著漁業(yè)集約化養(yǎng)殖程度的不斷提高,水域生態(tài)環(huán)境遭到了嚴(yán)重破壞,致使水產(chǎn) 動(dòng)物病害不斷增多,病害問題已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展的瓶頸。傳統(tǒng)的抗生素治療不 僅導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生,而且造成了藥物殘留,嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的質(zhì)量,甚至威脅人類健 康。因此,尋找新的抗病物質(zhì)來代替抗生素就顯得非常迫切??咕氖且活悘V泛存在于 微生物及動(dòng)植物體內(nèi)的小分子多肽,通常由通常是由30多個(gè)氨基酸殘基組成,分子量為 2-7kDa.抗菌肽的殺菌機(jī)制在于它能破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物溢出,最終引起細(xì) 菌死亡??咕木哂锌咕V廣且不易產(chǎn)生耐藥性、熱穩(wěn)定性強(qiáng)等傳統(tǒng)抗生素藥物無可比擬 的優(yōu)勢,因而越來越受到人們的重視??咕淖畛跏窃谥参镏邪l(fā)現(xiàn)。近年來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)許多水產(chǎn)動(dòng)物中也存 在抗菌肽。研究表明,水產(chǎn)動(dòng)物的抗菌肽不僅具有抗菌活性,而且還有抗病毒及抗腫瘤活 性。無脊椎水產(chǎn)動(dòng)物具有非特異性免疫系統(tǒng),而魚類則兼有特異性和非特異性免疫系統(tǒng)。在 水產(chǎn)動(dòng)物抵御病原菌感染的過程中,非特異性免疫起著重要作用。由于抗菌肽是非特異性 免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在抵抗病原感染過程中起重要作用,因此,抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖病 害防控中具有巨大的應(yīng)用潛力。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種抗菌肽及其應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種抗菌肽T1-17為序列表SEQ ID No. 1中的氨基酸序列所示。抗菌肽T1-17的應(yīng)用所述抗菌肽T1-17具有抑制細(xì)菌的作用。所述抗菌肽T1-17具有抑制魚類細(xì)菌的作用。所述抗菌肽T1-17具有抑制遲緩愛 德華氏菌或鰻弧菌的作用。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的抗菌肽具有高效抑菌作用可以有效抑制多種魚類 致病菌,因此可望應(yīng)用于魚類病害防治。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例旨在對本發(fā)明進(jìn)行舉例描述,而 非以任何形式對本發(fā)明進(jìn)行限制。實(shí)施例1本發(fā)明的抗菌肽T1-17具序列表SEQ ID No. 1中的氨基酸序列。序列表SEQ ID No. 1 為KCRRRKVHGPMIRIRKK
(a)序列特征 長度17 類型氨基酸序列 鏈型單鏈 拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(b)分子類型蛋白質(zhì)(C)假設(shè)否(d)反義否(e)最初來源人工合成本實(shí)施例合成的抗菌肽T1-17按照BOC法固相多肽合成法,最終得到純度大于 90%的抗菌肽T1-17。合成時(shí)將一個(gè)Boc-氨基酸衍生物共價(jià)交聯(lián)到樹脂上(例如不溶性的 高分子樹脂,即氯甲基高分子樹脂),用TFA脫除Boc,用三乙胺中和游離的氨基末端,然后 通過DCC活化、偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸,最終脫保護(hù)多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。參見 Schnlzer M, Alewood P, Jones A, Alewood D, Kent SBH. In situ neutralization in Boc-chemistry solid phase peptide synthesis. Int J Pept Res Ther. 2007 ;13 :31_44。另,本實(shí)施例的抗菌肽由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司(上海,中 國)利用玻璃反應(yīng)柱(機(jī)器型號Φ3050)合成。實(shí)施例2抗菌肽T1-17的應(yīng)用1)遲緩愛德華氏菌和鰻弧菌制備。在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)遲緩愛德華氏菌和鰻弧菌 分別至OD600為0. 5,然后離心(5000g,4°C ) IOmin0收集菌體,將其懸浮于PBS中至終濃度 為 lxl06cfu/ml。所述PBS組成成分按重量百分比計(jì)0. 8 % NaCl,0. 02 % KCl,0. 358 % Na2HPO4. 12H20,0. 024% NaH2P04。2)抗菌肽T1-17的殺菌效應(yīng)。將IOul上述步驟1)的菌液與30ηΜΤ1_17或PBS (對 照)混合,25°C保溫3- !。隨后將混合液涂布于LB固體平板,培養(yǎng)32-4他。菌落計(jì)數(shù) 發(fā)現(xiàn),與PBS相比,T1-17處理導(dǎo)致遲緩愛德華氏菌數(shù)目減低約90%,鰻弧菌則完全不能存 活,即約90%的遲緩愛德華氏菌和100%的鰻弧菌被T1-17殺死。因此,T1-17具有高效的 殺菌作用,可望應(yīng)用于魚類細(xì)菌性病害的防治。
權(quán)利要求
1.一種抗菌肽T1-17,其特征在于抗菌肽T1-17為序列表SEQ ID No. 1中的氨基酸序 列所示。
2.—種權(quán)利要求1所述的抗菌肽T1-17的應(yīng)用,其特征在于所述抗菌肽T1-17具有 抑制細(xì)菌的作用。
3.按權(quán)利要求2所述的抗菌肽T1-17的應(yīng)用,其特征在于所述抗菌肽T1-17具有抑 制魚類細(xì)菌的作用。
4.按權(quán)利要求2或3所述的抗菌肽T1-17的應(yīng)用,其特征在于所述抗菌肽T1-17具 有抑制遲緩愛德華氏菌或鰻弧菌的作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及分子微生物學(xué)領(lǐng)域,具體的說是一種抗菌肽及其應(yīng)用??咕腡1-17為序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。所述抗菌肽T1-17具有抑制細(xì)菌的作用。本發(fā)明的抗菌肽具有高效抑菌作用可以有效抑制多種魚類致病菌,因此可望應(yīng)用于魚類病害防治。
文檔編號C07K14/00GK102140130SQ20101055241
公開日2011年8月3日 申請日期2010年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月12日
發(fā)明者孫黎, 張敏 申請人:中國科學(xué)院海洋研究所