專利名稱：一種高效提取喜樹堿衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效提取喜樹堿衍生物的方法。
背景技術(shù)：
進(jìn)入21世紀(jì)以來，癌癥已經(jīng)成了人類健康的一大隱患，嚴(yán)重威脅著人類的健康。 由于喜樹堿及10-羥基喜樹堿天然在抗腫瘤方面具有獨(dú)特的療效，近年來，國際醫(yī)藥主流 市場對(duì)喜樹堿和10-羥基喜樹堿的需求量急劇上升，但是現(xiàn)有的提取技術(shù)得率低，資源浪 費(fèi)大，因而嚴(yán)重制約了喜樹堿和10-羥基喜樹堿制藥工業(yè)的發(fā)展。喜樹堿的全合成及以喜樹堿為母體化合物經(jīng)人工半合成的方法獲得10-羥基喜 樹堿已經(jīng)取得成功，但是由于路線長、產(chǎn)率低、生產(chǎn)成本高，無法投入工業(yè)化生產(chǎn)。因此，利 用現(xiàn)代技術(shù)提取分離喜樹堿衍生物，提高喜樹堿衍生物產(chǎn)量已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)，而 目前的提取喜樹堿衍生物生產(chǎn)工藝落后，成本高昂，已成為喜樹堿類抗癌藥物發(fā)展的瓶頸。 因此找到一種得率高、節(jié)約資源的喜樹堿和10-羥基喜樹堿的生產(chǎn)方法勢(shì)在必行。采用具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的提取、分離技術(shù)，探索研究喜樹堿衍生物生產(chǎn)的新工藝 路線，這必將為喜樹堿衍生物的生產(chǎn)和喜樹資源的合理開發(fā)利用提供科學(xué)資料和研究方 向，同時(shí)也為抗癌藥物的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供一條具有重要價(jià)值的新渠道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于通過選取可再生的資源喜樹葉、喜樹果實(shí)和喜樹種芽為原料混 合高效提取喜樹堿衍生物。首先以脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉為原料，混合勻漿提取喜 樹堿和10-羥基喜樹堿，兩種原料的混合比例為1 2-1 5，勻漿溶劑為40-80%乙醇，料 液比為1 10-1 20，勻漿時(shí)間為6-15min。進(jìn)而采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中 喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以40-80%乙醇作為提取溶劑，料液比1 10-1 20，通氣量 50-100L/min，負(fù)壓空化提取15-30min。然后稱取經(jīng)過篩選的新喜樹種子，用25°C清水浸 泡后，在25°C，有光照的條件下進(jìn)行發(fā)芽11-13天。以新鮮喜樹葉和喜樹種芽為原料進(jìn)行 純水鮮磨混合勻漿，兩種原料的混合比例為1 3-1 8，料液比1 8-1 20，鮮磨勻漿 6-12min ；在此基礎(chǔ)上，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿， 以40-80%乙醇作為提取溶劑，料液比1 10-1 20，負(fù)壓空化提取15-25min。再將脫脂 的喜樹果和干燥喜樹葉的混合勻漿提取液與新鮮喜樹葉和喜樹種芽鮮磨勻漿提取液合并， 濃縮至3/5-4/5，以二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮物與萃取溶劑的比為1 1-1 2，負(fù)壓空化 攪拌時(shí)間為3-5min，萃取液經(jīng)濃縮加乙醇進(jìn)行4步重結(jié)晶，喜樹堿的純度可達(dá)95-98%。然 后對(duì)分離喜樹堿后的萃余液進(jìn)行分離純化，通過液相制備色譜精制10-羥基喜樹堿，以乙 腈-水(體積比為2:8-3: 7)為流動(dòng)相，流速為1. 5-2. OmL/min,上樣量為3_5mL ；在該 工藝條件下得到了 10-羥基喜樹堿單體，純度達(dá)95-98%。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.采用兩種原料以一定比例混合高效提取兩種抗腫瘤生物堿，提取率高于每種原料分別提取的提取率，對(duì)綜合利用植物資源，提高生產(chǎn)效率，增加設(shè)備利用率，減少設(shè)備投 資，具有高效、節(jié)能、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。2.打破了原料要經(jīng)過先干燥粉碎再提取的常規(guī)觀念，將新鮮細(xì)胞鮮磨混合勻漿引 用到植物提取領(lǐng)域并將二者有機(jī)結(jié)合，進(jìn)一步提高原料中的目的產(chǎn)物的產(chǎn)量，為高效利用 有限的寶貴資源進(jìn)行了一次全新的嘗試，與傳統(tǒng)提取工藝相比，具有安全、環(huán)保、提取率更 高等方面的優(yōu)勢(shì)。3.為喜樹堿、10-羥基喜樹堿的提取尋找到了可持續(xù)利用的新資源一喜樹果實(shí)、 喜樹種芽和喜樹葉，同時(shí)打破了利用單一原料進(jìn)行提取加工的傳統(tǒng)理念，為多種原料綜合 利用提供新思路，新技術(shù)，為植物提取物的產(chǎn)業(yè)開發(fā)拓寬了視角。
具體實(shí)施例方式下面，本發(fā)明將用實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的說明，但是它并不限于這些實(shí)施例的任一 個(gè)或類似實(shí)例。實(shí)施例一1喜樹果中含有大量的油脂類成分，在提取喜樹堿和10-羥基喜樹堿之前，采用超 臨界流體CO2萃取喜樹果去除油脂，萃取壓力30MPa、萃取溫度45°C、萃取時(shí)間3. 5h，分離壓 力在8-12MPa，分離溫度在25-35°C。2以脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉為原料，混合勻漿提取兩種生物堿，兩種原料的 混合比例為1 2. 6，勻漿溶劑為65%乙醇，料液比為1 12，勻漿時(shí)間為6.5min。進(jìn)而 采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以55%乙醇作為提取溶 媒，料液比1 15，通氣量70L/min，負(fù)壓空化提取25min。3稱取經(jīng)過篩選的新喜樹種子，用25°C清水浸泡后，在25°C，有光照的條件下進(jìn)行 發(fā)芽11天。4以新鮮喜樹葉和喜樹種芽為原料進(jìn)行純水鮮磨混合勻漿，兩種原料的混合比例 為1 5，料液比1 15，鮮磨勻漿7.5min。在此基礎(chǔ)上，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固 形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以75%乙醇作為提取溶劑，料液比1 12，負(fù)壓空化提取 20mino5將脫脂的喜樹果和干燥喜樹葉的混合勻漿提取液與新鮮喜樹葉和喜樹種芽鮮 磨混合勻漿提取液合并，濃縮至4/5，以二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮物與萃取溶劑的比為 1 1，負(fù)壓空化攪拌時(shí)間為細(xì)in，萃取液經(jīng)濃縮加乙醇進(jìn)行4步重結(jié)晶分離純化喜樹堿。6對(duì)分離喜樹堿后的萃余液進(jìn)行分離純化，通過液相制備色譜精制10-羥基喜樹 堿，以乙腈-水(體積比為3 7)為流動(dòng)相，流速為1. 5mL/min，上樣量為3mL。實(shí)施例二1喜樹果中含有大量的油脂類成分，在提取喜樹堿和10-羥基喜樹堿之前，采用超 臨界流體CO2萃取喜樹果去除油脂，萃取壓力33MPa、萃取溫度40°C、萃取時(shí)間4. 0h，分離壓 力在8-12MPa，分離溫度在25-35°C。2以脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉為原料，混合勻漿提取兩種生物堿，兩種原料的 混合比例為1 3，勻漿溶劑為60%乙醇，料液比為1 15，勻漿時(shí)間為7.0min。進(jìn)而采用 負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以60%乙醇作為提取溶媒，料液比1 12，通氣量75L/min，負(fù)壓空化提取20min。3稱取經(jīng)過篩選的新喜樹種子，用25°C清水浸泡后，在25°C，有光照的條件下進(jìn)行 發(fā)芽12天。4以新鮮喜樹葉和喜樹種芽為原料進(jìn)行純水鮮磨混合勻漿，兩種原料的混合比例 為1 6，料液比1 12，鮮磨勻漿7.0min。在此基礎(chǔ)上，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固 形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以70%乙醇作為提取溶劑，料液比1 15，負(fù)壓空化提取 25min。5將脫脂的喜樹果和干燥喜樹葉的混合勻漿提取液與新鮮喜樹葉和喜樹種芽鮮 磨混合勻漿提取液合并，濃縮至4/5，以二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮物與萃取溶劑的比為 1 1.5，負(fù)壓空化攪拌時(shí)間為3.5min，萃取液經(jīng)濃縮加乙醇進(jìn)行4步重結(jié)晶分離純化喜樹 堿。6對(duì)分離喜樹堿后的萃余液進(jìn)行分離純化，通過液相制備色譜精制10-羥基喜樹 堿，以乙腈-水(體積比為3 7)為流動(dòng)相，流速為2. Om L/min，上樣量為3. 5mL。實(shí)施例三1喜樹果中含有大量的油脂類成分，在提取喜樹堿和10-羥基喜樹堿之前，采用超 臨界流體CO2萃取喜樹果去除油脂，萃取壓力35MPa、萃取溫度45°C、萃取時(shí)間4.證，分離壓 力在8-12MPa，分離溫度在25-35°C。2以脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉為原料，混合勻漿提取兩種生物堿，兩種原料的 混合比例為1 4，勻漿溶劑為70%乙醇，料液比為1 18，勻漿時(shí)間為7.5min。進(jìn)而采用 負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以65%乙醇作為提取溶媒， 料液比1 14，通氣量80L/min，負(fù)壓空化提取30min。3稱取經(jīng)過篩選的新喜樹種子，用25°C清水浸泡后，在25°C，有光照的條件下進(jìn)行 發(fā)芽13天。4以新鮮喜樹葉和喜樹種芽為原料進(jìn)行純水鮮磨混合勻漿，兩種原料的混合比例 為1 5. 5，料液比1 16，鮮磨勻漿S.Omin。在此基礎(chǔ)上，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿 固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以65%乙醇作為提取溶劑，料液比1 16，負(fù)壓空化提 取 23min05將脫脂的喜樹果和干燥喜樹葉的混合勻漿提取液與新鮮喜樹葉和喜樹種芽鮮 磨混合勻漿提取液合并，濃縮至3/5，以二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮物與萃取溶劑的比為 1 2，負(fù)壓空化攪拌時(shí)間為4. 5min，萃取液經(jīng)濃縮加乙醇進(jìn)行4步重結(jié)晶分離純化喜樹堿。6對(duì)分離喜樹堿后的萃余液進(jìn)行分離純化，通過液相制備色譜精制10-羥基喜樹 堿，以乙腈-水(體積比為3 7)為流動(dòng)相，流速為2. OmL/min，上樣量為4. OmL。
權(quán)利要求
1.一種高效提取喜樹堿衍生物的方法，首先采用脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉混合勻 漿提取喜樹堿和10-羥基喜樹堿，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥 基喜樹堿；以新鮮喜樹葉和喜樹種芽為原料進(jìn)行純水鮮磨混合勻漿，采用負(fù)壓空化混旋法 提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿；采用負(fù)壓空化液液混旋萃取和多步重結(jié)晶工 藝對(duì)混合提取物濃縮物中喜樹堿進(jìn)行分離純化，喜樹堿的純度可達(dá)到95-98%，進(jìn)而通過液 相制備色譜精制10-羥基喜樹堿，得到了 10-羥基喜樹堿單體，純度達(dá)95-98%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效提取喜樹堿衍生物的方法，其特征是以脫脂的喜樹果 和干燥的喜樹葉為原料，混合勻漿提取兩種生物堿，兩種原料的混合比例為1 2-1 5，勻 漿溶劑為40-80%乙醇，料液比為1 10-1 20，勻漿時(shí)間為6-15min。進(jìn)而采用負(fù)壓空化 混旋法提取勻漿固形物中喜樹堿和10-羥基喜樹堿，以40-80%乙醇作為提取溶劑，料液比 1 10-1 20，通氣量 50-100L/min，負(fù)壓空化提取 15-30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效提取喜樹堿衍生物的方法，其特征是取經(jīng)過篩選的新 喜樹種子，用25°C清水浸泡后，在25°C，有光照的條件下進(jìn)行發(fā)芽11-13天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效提取喜樹堿衍生物的方法，其特征是以新鮮喜樹葉 和喜樹種芽為原料進(jìn)行純水鮮磨混合勻漿，兩種原料的混合比例為1 3-1 8，料液比 1:8-1: 20，鮮磨勻漿6-12min;在此基礎(chǔ)上，采用負(fù)壓空化混旋法提取勻漿固形物中喜 樹堿和10-羥基喜樹堿，以40-80%乙醇作為提取溶劑，料液比1 10-1 20，負(fù)壓空化提 取 15-25min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效提取喜樹堿衍生物的方法，其特征是將脫脂的喜樹果 和干燥喜樹葉的混合勻漿提取液與新鮮喜樹葉和喜樹種芽鮮磨勻漿提取液合并，濃縮至 3/5-4/5，以二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮物與萃取溶劑的比為1 1-1 2，負(fù)壓空化攪拌時(shí) 間為3-5min，萃取液經(jīng)濃縮加乙醇進(jìn)行4步重結(jié)晶，喜樹堿的純度可達(dá)95-98%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效提取喜樹堿衍生物的方法，其特征是對(duì)分離喜樹堿后 的萃余液進(jìn)行分離純化，通過液相制備色譜精制10-羥基喜樹堿，以乙腈-水(體積比為 2:8-3: 7)為流動(dòng)相，流速為1.5-2.0111171^11，上樣量為3-51^;在該工藝條件下得到了 10-羥基喜樹堿單體，純度達(dá)95-98%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高效提取喜樹堿衍生物的方法，采用脫脂的喜樹果和干燥的喜樹葉混合勻漿提取，并根據(jù)逆境生物學(xué)原理，應(yīng)用喜樹種芽與新鮮喜樹葉鮮磨混合勻漿，進(jìn)而提高原料中喜樹堿衍生物的產(chǎn)量。在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用負(fù)壓空化混旋高效強(qiáng)化浸取，負(fù)壓空化液液混旋萃取，重結(jié)晶和制備型高效液相色譜精制等系列創(chuàng)新研究，獲得了喜樹堿、10-羥基喜樹堿的高效提取、純化新工藝。
文檔編號(hào)C07D491/22GK102093374SQ20101056505
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月30日
發(fā)明者史偉國, 李慶勇, 楊磊, 祖元?jiǎng)? 祖柏實(shí), 趙春建 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué), 祖元?jiǎng)?br>