專利名稱：一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯b的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及銀杏內(nèi)酯B的分離方法，屬于化學工程技術領域，具體涉及一種從銀 杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法。
背景技術：
銀杏內(nèi)酯是銀杏葉中的一類主要活性成分，是強血小板活化因子 (platelet-activating factor, PAF)受體拮抗劑，具有擴張血管、增加血流量、改善微循 環(huán)、清除自由基、抗過敏、抗菌抗炎、抗腫瘤、抗器官移植中的排斥作用等療效。銀杏內(nèi)酯 具有十二碳骨架結(jié)構(gòu)，根據(jù)取代基的不同分為銀杏內(nèi)酯Afeinkgolide A, GA)、銀杏內(nèi)酯 B(ginkgolide B，GB)、銀杏內(nèi)酯 C(ginkgolide C，GC)、銀杏內(nèi)酯 M(ginkgolide Μ,GM)和銀 杏內(nèi)酯J(ginkgolide J，GJ)，此外還有白果內(nèi)酯(bilobalide, BB) 0銀杏內(nèi)酯的活性與化 學結(jié)構(gòu)密切相關，其中銀杏內(nèi)酯B對PAF的拮抗作用最強，具有更高的藥用價值，銀杏內(nèi)酯B 注射液已作為國家一類新藥上市。因此，有必要采用合適的方法將銀杏內(nèi)酯B從總銀杏內(nèi) 酯中分離出來，制備得到高純度的銀杏內(nèi)酯B。銀杏內(nèi)酯B的來源有提取分離、化學合成和植物細胞培養(yǎng)，其中從人工栽培的銀 杏中提取分離是目前生產(chǎn)中最常用的方法。銀杏內(nèi)酯B可以直接從銀杏葉或銀杏葉提取物 中分離，但這個過程很不經(jīng)濟，收率極低，也可先從銀杏葉中分離得到含有多種銀杏內(nèi)酯同 系物的總銀杏內(nèi)酯，再從總銀杏內(nèi)酯中精制獲得銀杏內(nèi)酯B，如中國專利ZL0315^21. 6中 公開的方法。銀杏內(nèi)酯B在銀杏葉中含量較低，約為0.2%，在銀杏提取物中也只有 2%。銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯C、銀杏內(nèi)酯J以及白果內(nèi)酯等與銀杏內(nèi)酯B結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)差 異小，這些物質(zhì)同時存在于總銀杏內(nèi)酯混合物中，對銀杏內(nèi)酯B的分離純化造成了很大的 困難。現(xiàn)有的銀杏內(nèi)酯B分離純化方法有(1)中國專利申請CN200510063407.X報道了一種以銀杏葉或銀杏葉水提物為原 料，正丁醇為萃取劑，將萃取得到的固體用結(jié)晶的方法精制，最后得到純度90%以上的銀杏 內(nèi)酯B單體，但該方法收率極低，僅在以上，不具備工業(yè)應用價值，同時常溫下總銀杏內(nèi) 酯在水/正丁醇萃取體系中分配系數(shù)僅為0. 05左右，這導致該方法處理量極低，不具備實 際應用價值。(2)中國專利申請CN200610097492. 6報道了以銀杏葉為原料，先用葉干重8 25 倍、濃度為5% 30%的乙醇回流提取，將濾液濃縮，加入吸附劑吸附，過濾，濾餅用3 10 倍乙醇回流提取，收集提取液，濃縮，靜置析出銀杏內(nèi)酯，再用10 50倍的甲醇重結(jié)晶若干 次，過濾結(jié)晶，干燥得到純度為97%以上的銀杏內(nèi)酯B的方法。由于銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B 和銀杏內(nèi)酯C的溶解度差異很小，結(jié)晶純化難度大，因此重結(jié)晶方法的收率很低，同時溶劑 消耗量大。(3)目前，制備銀杏內(nèi)酯B較常用的方法是柱層析法，其核心步驟是采用柱層析分 離銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C，得到高純度銀杏內(nèi)酯B。該方法首先以銀杏葉或銀杏葉提取物為原料，經(jīng)過吸附柱分離、溶劑萃取、高速逆流色譜等步驟得到總銀杏內(nèi)酯， 再經(jīng)柱層析將銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C分開，通過結(jié)晶精制，可得到純度大于 95%的銀杏內(nèi)酯B。柱層析的固定相包括如中國專利ZL200710050245. 5中公開的硅膠、如 中國專利ZL200710106040. 4中公開的大孔樹脂和如中國專利申請CN200810046162. 3中公 開的C18。柱層析法可以分離得到較高純度的產(chǎn)品，有一定的應用價值，但同時存在處理量 小、回收率低、溶劑消耗量大、吸附劑重復使用困難等不足。(4)中國專利ZL 200310104958. 7報道了一種用模擬移動床分離銀杏內(nèi)酯A、銀杏 內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C等同系物的方法，得到的銀杏內(nèi)酯B純度大于90%。這種方法與柱層 析法相比，收率較高，且模擬移動床過程為連續(xù)過程，但是該方法對設備要求較高，設備投 資大，且模擬移動床作為色譜操作過程，處理量小，溶劑消耗大。

發(fā)明內(nèi)容
萃取是一種裝置簡單、操作方便的分離技術，其關鍵在于萃取劑的選擇。銀杏內(nèi)酯 具有多個疏水環(huán)狀結(jié)構(gòu)，有一個或多個羥基，在甲醇、四氫呋喃、乙腈、乙酸乙酯有機溶劑中 溶解性良好，部分溶于水，而不溶于非極性溶劑(如氯仿、正己烷)。銀杏內(nèi)酯易溶的溶劑 可以形成的兩相體系較少，常規(guī)的有機溶劑難以構(gòu)建處理量大、能高效分離總銀杏內(nèi)酯混 合物中銀杏內(nèi)酯B的萃取體系。如30°C下以乙酸乙酯為溶劑，水/乙酸乙酯兩相體系單級 萃取銀杏內(nèi)酯混合物中的銀杏內(nèi)酯B，總銀杏內(nèi)酯的初始濃度很低時，平衡時水相的銀杏內(nèi) 酯就會達到飽和，銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的分配系數(shù)都小于0. 03，GA/GB選擇性系數(shù)約為 0. 9。相同條件下銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B在水/正丁醇體系中的分配系數(shù)都小于0. 07， GA/GB選擇性系數(shù)約為1. 2。雖然水/乙酸乙酯體系和水/正丁醇體系對銀杏內(nèi)酯A和銀 杏內(nèi)酯B有一定的選擇性，但是選擇性系數(shù)和處理量都很小，因此水/乙酸乙酯體系和水/ 正丁醇體系都不適合用于銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的分離。離子液體是由陰陽離子組成的室溫或接近室溫下為液態(tài)的物質(zhì)，在分離領域作為 一類綠色新型分離介質(zhì)而引人關注。與傳統(tǒng)有機溶劑作為萃取劑相比，離子液體作為萃取 劑具有一些獨特的性質(zhì)，如熱穩(wěn)定性和化學穩(wěn)定性好，幾乎沒有蒸汽壓，不揮發(fā)、不可燃等， 因而有助于工藝的安全環(huán)保；內(nèi)聚能高，因此容易形成兩相體系；離子液體還可與溶質(zhì)進 行多種分子間作用，如η - H、偶極-偶極、氫鍵等，因此對溶質(zhì)具有良好溶解性；同時離子 液體的陰陽離子結(jié)構(gòu)可調(diào)，即可以針對同系物結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上的微小差異，通過設計離子液 體的陰陽離子結(jié)構(gòu)以調(diào)節(jié)離子液體與溶質(zhì)的作用方式和強度，達到特定的分離效果。銀杏內(nèi)酯的各個組分結(jié)構(gòu)相近，銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C結(jié)構(gòu)差異僅 在于C-I和C-7位置羥基取代數(shù)目不同。銀杏內(nèi)酯A在這兩個位置都沒有羥基取代，銀杏 內(nèi)酯B在C-I有羥基取代而C-7位置沒有，銀杏內(nèi)酯C在這兩個位置都有羥基取代。銀杏 內(nèi)酯C因C-I和C-IO都有羥基取代而極性最大，銀杏內(nèi)酯B雖然C-I位置比銀杏內(nèi)酯A多 一個羥基，但是由于C-I和C-IO的兩個羥基形成分子內(nèi)氫鍵而導致極性降低，比銀杏內(nèi)酯A 略小。三者的極性順序為銀杏內(nèi)酯C >銀杏內(nèi)酯A >銀杏內(nèi)酯B。因此國外學者提出可以 以銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B為簡單的模型體系進行銀杏內(nèi)酯同系物的分離研究。根據(jù)銀杏 內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B結(jié)構(gòu)性質(zhì)的差異，采用具有一定極性和氫鍵堿性的離子液體作為萃取 劑，可加強銀杏內(nèi)酯與萃取劑的相互作用，提高分配系數(shù)和處理量，以及對銀杏內(nèi)酯B的選擇性。如果用純離子液體為萃取劑，存在離子液體粘度大、用量大、甚至有的離子液體在常 溫下是固體等不足，因此需要加入第三種溶劑。加入的第三種溶劑既要與離子液體有很好 的互溶度，又可以與銀杏內(nèi)酯的溶劑形成兩相體系。最后，本發(fā)明采用疏水性有機溶劑為總 銀杏內(nèi)酯溶劑，以離子液體或離子液體和水組成的二元混合溶劑為萃取劑，進行銀杏內(nèi)酯B 的選擇性萃取分離。對于銀杏內(nèi)酯混合物，以乙酸乙酯為溶劑，以摩爾百分比為13%的N-乙基吡啶溴 鹽水溶液為萃取劑，30°C下進行單級萃取，銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B的分配系數(shù)分別為0.61 和0. 36，GA/GB選擇性系數(shù)約為1. 7。與以純水為萃取劑相比，離子液體的加入可以明顯提 高銀杏內(nèi)酯的處理量，并提高GA/GB的選擇性?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，本發(fā)明提出了一種以親水性離子液體或親水性離子液體與水 組成的混合溶劑為萃取劑，經(jīng)過多級分餾萃取，從總銀杏內(nèi)酯混合物中分離得到純度較高 的銀杏內(nèi)酯B的方法。一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，包括以下步驟(1)以銀杏內(nèi)酯混合物為原料，與疏水性有機溶劑配成原料液，以親水性離子液體 或親水性離子液體與水組成的二元混合溶劑為萃取劑，以與原料液溶劑相同的溶劑為洗滌 劑，進行分餾萃??；所述的分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體 系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃 取體系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃 取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出 富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；(2)將步驟(1)中的萃余液經(jīng)真空濃縮、水洗及干燥，得到銀杏內(nèi)酯B。所述的疏水性有機溶劑選用乙酸乙酯、乙酸丁酯、碳鏈長度為4 8的伯醇或碳鏈 長度為4 8的仲醇，這些有機溶劑既對銀杏內(nèi)酯由較高的溶解度，又可以與離子液體-水 二元混合溶劑形成互溶度較小的兩相體系。所述親水性離子液體由陽離子M+和陰離子N-兩部分組成。離子液體的種類及其 繁多，理論上可達IO18種。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，離子液體對銀杏內(nèi)酯的選擇性主要由它的 陰離子決定。陰離子的極性和氫鍵堿性在一個恰當?shù)姆秶鷥?nèi)時，對銀杏內(nèi)酯B具有較好的 分離效果，極性和氫鍵堿性過大或過小分離效果均較差。經(jīng)優(yōu)選，確定陽離子M+為具有取 代基的一系列陽離子中的一種，包括但不限于具有取代基的咪唑型陽離子、具有取代基的 吡啶型陽離子、具有取代基的季鱗型陽離子、具有取代基的哌啶型陽離子、具有取代基的季 銨型陽離子或具有取代基的吡咯烷型陽離子等中的一種；陰離子為氯離子、溴離子、碘離 子、四氟硼酸根、三氟乙酸根、三氟甲磺酸根、乙基磺酸根、二甲基磷酸根、二乙基磷酸根、磷 酸二氫根或氨基酸根中的一種。為了達到更好的發(fā)明效果，優(yōu)選所述的陽離子的取代基選用C1 C6的烷基、羥乙基中的一種或兩種。取代基的數(shù) 目可以為單取代、二取代或三取代等多取代，多取代時不同位點上的取代基可以相同也可 以不同。本發(fā)明采用的銀杏內(nèi)酯混合物原料中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的總重量百分數(shù)為40%以上。所述的銀杏內(nèi)酯混合物可以直接從市場購買，也可將銀杏內(nèi)酯含量 較低的銀杏葉提取物經(jīng)眾所周知的萃取、沉淀等步驟，得到銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏 內(nèi)酯C總的質(zhì)量百分數(shù)為40%以上的原料。所述的銀杏內(nèi)酯混合物主要由銀杏內(nèi)酯A、銀 杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C組成，此外還含有銀杏內(nèi)酯M、銀杏內(nèi)酯J和白果內(nèi)酯等。根據(jù)不同萃取體系處理量的不同，原料液中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的 總濃度優(yōu)選為0. 5克/升 100克/升。若原料液中銀杏內(nèi)酯的濃度過高，不利于銀杏內(nèi) 酯B的有效分離；若原料液中銀杏內(nèi)酯的濃度過低，原料處理量小，溶劑損耗大，不利用工 藝的經(jīng)濟性。所述的萃取劑中離子液體的重量百分比為 100%。離子液體的加入可以使 銀杏內(nèi)酯各單體具有適當?shù)姆峙湎禂?shù)，提高對GB的選擇性。所述的洗滌劑和原料液中溶劑選用同種溶劑，在對銀杏內(nèi)酯具有較好溶解能力的 同時，能與萃取劑形成互溶度較小的液-液兩相體系。進行分餾萃取時，綜合考慮產(chǎn)品質(zhì)量、生產(chǎn)成本等因素，萃取劑、洗滌劑、原料液三 者之間的流比優(yōu)選為2 15 1 5 1。所述的分餾萃取的操作溫度以20°C 70°C為宜。如果溫度過低，萃取劑的粘度較 大，傳質(zhì)速率降低，處理量小，不利于生產(chǎn)操作；如果溫度過高，溶劑揮發(fā)嚴重，則會降低分 餾萃取的分配比和選擇性。所述的分餾萃取采用現(xiàn)有的分餾萃取設備，包括萃取段和洗滌段，其結(jié)構(gòu)如圖1 所示。萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃 取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在萃取段最后一級合并原料液一起 進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流接觸，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B 的萃余液，收集萃余液，經(jīng)過真空濃縮-水洗-干燥得到銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品。從洗滌段的第一 級流出富集銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯C的萃取液。經(jīng)本發(fā)明分離方法獲得的銀杏內(nèi)酯B的純度為絕對純度> 90% ；銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量>95 5 (質(zhì)量比，w w);銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量> 99. 5 0. 5 (質(zhì)量比，w w)。本發(fā)明采用高效液相色譜法分析銀杏內(nèi)酯單體的濃度，HPLC具體分析條件為 C18柱(3. 9 X 150mm,粒徑5 μ m，Waters Symmetry )，柱溫30°C，流動相為甲醇水四氫 呋喃=4 15 2卜八八)，流速11111/1^11，檢測器為紫外檢測器，波長為22511111。本發(fā)明中收率和純度的計算方法如下收率=產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的重量/原料中銀杏內(nèi)酯B的重量X 100%絕對純度=產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的質(zhì)量/產(chǎn)物的總質(zhì)量X 100%銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量=產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的質(zhì)量產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯A 的質(zhì)量銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量=產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的質(zhì)量產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯C 的質(zhì)量本發(fā)明的優(yōu)點在于1.本發(fā)明采用離子液體或離子液體與水組成的二元混合溶劑為萃取劑，對結(jié)構(gòu) 相近的銀杏內(nèi)酯同系物具有較高的選擇分離能力，同時所采用的萃取劑不僅便于回收再利
6用，而且較綠色環(huán)保，對環(huán)境的污染少，具有廣闊的應用前景；2.本發(fā)明采用分餾萃取技術，化工原料的消耗少、產(chǎn)能高、成本低；3.本發(fā)明方法采用優(yōu)化的條件，銀杏內(nèi)酯B的純度和回收率均可達到95%以上。


圖1為現(xiàn)有的多級分餾萃取設備的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施例方式實施例1將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的重量百分數(shù) 分別為60%、26%和10%)與乙酸乙酯配成20克/升的原料液，以N-乙基吡啶溴鹽([EPy] Br)-水混合溶劑為萃取劑([EPy]Br重量分數(shù)為70%)，以乙酸乙酯為洗滌劑，萃取劑、洗滌 劑、原料液三者的流比為3 2.7 1，40°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分 為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一 級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合 并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富 含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收 集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去乙酸乙酯，再經(jīng)過反復水洗除去離子液體，最后經(jīng)干 燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為95%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為99 1，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 9 0.1，收率為 96%。實施例2將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與乙酸丁酯配成0. 5克/升的原料液，以1- 丁基-3- 二甲基咪唑四氟硼酸根離 子液體([BMIm] [BF4])為萃取劑，以乙酸丁酯為洗滌劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比 為2 4.2 1，20°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃 取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系， 洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取 段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi) 酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng) 過真空濃縮除去乙酸丁酯，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。 經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為92%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為 97 3，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99.6 0.4，收率為99%。實施例3將銀杏葉提取物經(jīng)通用的萃取、沉淀、蒸發(fā)溶劑等步驟，分離得到銀杏內(nèi)酯A、銀杏 內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分數(shù)為42%的固體，將得到的固體與正丁醇配成100克/ 升的原料液，以三丁基銨氯鹽([HNBu3]Cl)-水混合溶劑為萃取劑([HNBuJCl重量分數(shù)為 95%)為萃取劑，以正丁醇為洗滌劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為13 1.7 1， 70°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌 段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和 洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液， 從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除 去正丁醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn) 物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為90%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為95 5，銀杏內(nèi) 酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 7 0.3，收率為98%。實施例4將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與正辛醇配成50克/升的原料液，以1- 丁基-2，3- 二甲基咪唑三氟甲磺酸鹽 ([BMMIm] [CF3SO3])-水溶液為萃取劑([BMMIm] [CF3SO3]重量分數(shù)為8% )，以正辛醇為洗滌 劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為15 2 1，40°C下在分餾萃取裝置中進行分餾 萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從 萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗 滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段 的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi) 酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去正辛醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子 液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為96%， 銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為98. 3 1.7，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為 99. 8 0. 2，收率為 99%。實施例5將銀杏內(nèi)酯提取物經(jīng)通用的萃取、沉淀、蒸發(fā)溶劑等步驟，分離得到銀杏內(nèi)酯A、銀 杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分數(shù)為64%的固體，將得到的固體與異丁醇配成80克/ 升的原料液，以1-羥乙基吡啶二乙基磷酸鹽([HOEtPy] [C2H5PO4])-水混合溶劑為萃取劑 ([HOEtPy] [C2H5PO4]重量分數(shù)為20% )為萃取劑，以異丁醇為洗滌劑，萃取劑、洗滌劑、原料 液三者的流比為6. 3 2 1，60°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分為萃取 段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入 分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合并原料 液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏 內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余 液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去異丁醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最后經(jīng)干燥除水得 到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為91%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯 A相對含量為96. 3 3. 7，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 5 0.5，收率為97%。實施例6將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與異戊醇配成20克/升的原料液，以1-乙基-3-甲基咪唑甘氨酸鹽([EMIm] [Gly])-水混合溶劑為萃取劑([EMIm] [Gly]重量分數(shù)為30% )為萃取劑，以異戊醇為洗滌 劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為3.1 2 1，45°C下在分餾萃取裝置中進行分餾 萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗 滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段 的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi) 酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去異戊醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子 液體，最后經(jīng)干燥除水得到銀杏內(nèi)酯B。HPLC分析，銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為97%，銀杏內(nèi) 酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為98 2，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 9 0.1， 收率為99%。實施例7將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與正庚醇配成10克/升的原料液，以1-乙基-1-甲基吡咯烷乙基磺酸根鹽 ([BMPr] [C2H5SO3])-水混合溶劑為萃取劑(([BMPr] [C2H5SO3])重量分數(shù)為40% )為萃取劑， 以正庚醇為洗滌劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為2. 9 2.7 1，40°C下在分餾萃 取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾 萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入 分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級 逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一 級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去正庚醇，再經(jīng)過 反復水洗出去離子液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B 的絕對純度為93%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為97. 2 2.8，銀杏內(nèi)酯B 銀杏 內(nèi)酯C相對含量為99. 7 0.3，收率為99%。實施例8將銀杏內(nèi)酯水提物經(jīng)通用的萃取、沉淀、蒸發(fā)溶劑等步驟，分離得到銀杏內(nèi)酯A、 銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分數(shù)為42%的固體，與正戊醇配成50克/升的原料 液，以1-丁基-I-甲基哌啶磷酸二氫鹽([BMPi] [H2PO4])-水混合溶劑為萃取劑([BMPi] [H2PO4]重量分數(shù)為20% )為萃取劑，以正戊醇為洗滌劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流 比為5 4 1，35°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃 取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系， 洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取 段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi) 酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液 經(jīng)過真空濃縮除去正戊醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。 經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為93%，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為 95.4 4. 6，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99.6 0.4，收率為99%。實施例9將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96 % )與正庚醇配成3克/升的原料液，以N，N，N-三甲基-N-丙基鱗賴氨酸鹽([P3111] [Lys])-水混合溶劑為萃取劑([P3111] [Lys]重量分數(shù)為15% )為萃取劑，以正庚醇為洗滌 劑，萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為2 1.5 1，45°C下在分餾萃取裝置中進行分餾 萃取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗 滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段 的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi) 酯B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去正庚醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子 液體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為98%， 銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為99. 2 0.8，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為 99. 9 0. 1，收率為 99%。實施例10將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96%)與正己醇配成5克/升的原料液，以三丁基銨三氟乙酸鹽([HNBu3] [CF3CO2D-ZjC 混合溶劑為萃取劑([HNBu3] [CF3CO2]重量分數(shù)為5% )為萃取劑，以正己醇為洗滌劑，萃取 劑、洗滌劑、原料液三者的流比為14 5 1，45°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾 萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的 最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后 一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級 流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃 余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去正己醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最 后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為91%，銀杏內(nèi) 酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為95 5，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 6 0.4， 收率為99%。實施例11將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與2-己醇配成50克/升的原料液，以1- 丁基-1-甲基哌啶碘([BMPi] I)-水 混合溶劑為萃取劑([BMPi]I重量分數(shù)為80% )為萃取劑，以2-己醇為洗滌劑，萃取劑、洗 滌劑、原料液三者的流比為2. 5 1 1，50°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃取，分餾萃 取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最 后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌段最后一 級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的第一級流 出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯B的萃余 液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去2-己醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液體，最后 經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為94%，銀杏內(nèi)酯 B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為97 3，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為99. 8 0.2，收率 為 97%。實施例12將市購銀杏內(nèi)酯混合物(其中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分 數(shù)為96% )與異辛醇配成5克/升的原料液，以1-羥乙基-3-甲基咪唑溴鹽([HOEtMIm] Br)-水混合溶劑為萃取劑([HOEtMInJBr重量分數(shù)為71%)為萃取劑，以異辛醇為洗滌劑， 萃取劑、洗滌劑、原料液三者的流比為4 2.3 1，30°C下在分餾萃取裝置中進行分餾萃 取，分餾萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體系，在洗滌 段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從洗滌段的 第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集銀杏內(nèi)酯 B的萃余液，收集萃余液；將萃余液經(jīng)過真空濃縮除去異辛醇，再經(jīng)過反復水洗出去離子液 體，最后經(jīng)干燥除水得到最終產(chǎn)物。經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中銀杏內(nèi)酯B的絕對純度為97%， 銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯A相對含量為98. 5 1.5，銀杏內(nèi)酯B 銀杏內(nèi)酯C相對含量為 99. 9 0. 1，收率為 99%。
權利要求
1.一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)以銀杏內(nèi)酯混合物為原料，與疏水性有機溶劑配成原料液，以親水性離子液體或親 水性離子液體與水組成的二元混合溶劑為萃取劑，以與原料液溶劑相同的溶劑為洗滌劑， 進行分餾萃?。凰龅姆逐s萃取分為萃取段和洗滌段，萃取劑從萃取段第一級進入分餾萃取體系，原 料液從萃取段的最后一級進入分餾萃取體系，洗滌劑從洗滌段的第一級進入分餾萃取體 系，在洗滌段最后一級合并原料液一起進入萃取段，萃取相和洗滌相進行多級逆流萃取，從 洗滌段的第一級流出富含銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯C的萃取液，從萃取段的第一級流出富集 銀杏內(nèi)酯B的萃余液，收集萃余液；(2)將步驟(1)中的萃余液經(jīng)真空濃縮、水洗及干燥，得到銀杏內(nèi)酯B;所述的疏水性有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁酯、碳鏈長度為4 8的伯醇或碳鏈長度為 4 8的仲醇；所述的親水性離子液體由陽離子M+和陰離子N—兩部分組成；所述的陽離子M+為具有取代基的咪唑型陽離子、具有取代基的吡啶型陽離子、具有取 代基的季鱗型陽離子、具有取代基的哌啶型陽離子、具有取代基的季銨型陽離子或具有取 代基的吡咯烷型陽離子中的一種；所述的陰離子為氯離子、溴離子、碘離子、四氟硼酸根、三氟乙酸根、三氟甲磺酸根、 乙基磺酸根、二甲基磷酸根、二乙基磷酸根、磷酸二氫根或氨基酸根中的一種。
2.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，所述 的取代基為C1 C6的烷基、羥乙基中的一種或兩種。
3.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，所述 的銀杏內(nèi)酯混合物中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總重量百分含量>40%。
4.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，所述 的原料液中銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C的總濃度為0. 5克/升 100克/升。
5.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，所述 的萃取劑中離子液體的質(zhì)量分數(shù)為 100%。
6.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，所述 的分餾萃取的操作溫度為20°C 70°C。
7.如權利要求1所述的從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，其特征在于，萃取 劑、洗滌劑、原料液三者之間的流比為2 15 1 5 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從銀杏內(nèi)酯混合物中分離銀杏內(nèi)酯B的方法，該方法以離子液體或者由離子液體水組成的二元混合溶劑為萃取劑，采用分餾萃取法高效地從含有銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C等銀杏內(nèi)酯同系物的混合物中分離銀杏內(nèi)酯B。該方法具有分離效率高、溶劑消耗少、安全環(huán)保、易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。
文檔編號C07D493/22GK102070647SQ20101060884
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權日2010年12月28日
發(fā)明者任其龍, 倪曉蕾, 張芮菡, 曹義風, 楊亦文, 楊啟煒, 蘇云, 蘇寶根, 邢華斌 申請人:浙江大學