專利名稱：羅漢果甜苷v半抗原和人工抗原及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是羅漢果甜苷V半抗原和人工抗原及其制備方法。
背景技術(shù)：
免疫分析是一種基于抗原抗體特異性識(shí)別和結(jié)合反應(yīng)的分析方法，不僅可用于測(cè)定蛋白質(zhì)、酶等大分子物質(zhì)，而且還廣泛用于測(cè)定小分子量的藥物，特別適用于那些色譜法難以分析的藥物。免疫分析不僅為臨床診斷提供了依據(jù)，在內(nèi)分泌學(xué)、病毒學(xué)、藥理學(xué)、血液學(xué)及腫瘤學(xué)等研究方面得以應(yīng)用，而且在農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境保護(hù)、生態(tài)學(xué)及法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用也有所進(jìn)展。免疫分析具有檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)、前處理簡(jiǎn)單、反應(yīng)速度快、檢測(cè)費(fèi)用低廉，適于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大批量樣品分析的特點(diǎn)。羅漢果甜甙V為葫蘆素烷三萜類化合物是羅漢果的主要有效成分，在羅漢果干果中的總含量為3. 755%-3. 858%。羅漢果甜苷V在醫(yī)藥領(lǐng)域與食品工業(yè)方面運(yùn)用非常廣泛，其社會(huì)需求呈逐年上升趨勢(shì)。羅漢果甜苷V為小分子天然化合物，相對(duì)分子質(zhì)量較小，僅具有反應(yīng)原性，而不具有免疫原性，因此不能直接采用免疫方法檢測(cè)，需要與大分子蛋白等偶聯(lián)形成復(fù)合物后才能成為完全抗原。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種羅漢果甜苷V的半抗原和人工抗原；
本發(fā)明的另一個(gè)目的是要提供上述羅漢果甜苷V的半抗原和人工抗原的制備方法，所制備出的產(chǎn)品可用于誘導(dǎo)生成抗羅漢果甜苷V特異性抗體的免疫方法研究，可用于羅漢果甜苷V特異性抗體效價(jià)的檢測(cè)，其制備方法合成步驟簡(jiǎn)單，條件溫和，產(chǎn)率較高。本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)
一種羅漢果甜苷V半抗原和人工抗原的制備方法，以羅漢果甜苷V為原料，利用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應(yīng)生成羅漢果甜苷V 丁二酸單酯(羅漢果甜苷V-HQ，得到羅漢果甜苷V人工半抗原，用紅外光譜和紫外光譜確定半抗原的結(jié)構(gòu)；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之分別與牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HAS)結(jié)合，制得羅漢果甜苷V人工抗原羅漢果甜苷V-HS-BSA復(fù)合物和羅漢果甜苷V-HS-HAS復(fù)合物，用紅外光譜和紫外光譜鑒定羅漢果甜苷V人工抗原，測(cè)定其結(jié)合比；其反應(yīng)方程式為 (1)羅漢果甜甙V-HS人工半抗原
權(quán)利要求
1. 一種羅漢果甜苷V半抗原，其特征是以羅漢果甜苷V為原料，應(yīng)用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應(yīng)生成羅漢果甜苷V 丁二酸單酯制得，其結(jié)構(gòu)式為
2.一種羅漢果甜苷V半抗原的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟(1)取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應(yīng)瓶中，加入新蒸餾的吡啶，攪拌溶解，加入適量的4- 二甲基氨基吡啶(DMAP)，于室溫下反應(yīng)；(2)用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)度，反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)液；(3)取反應(yīng)液用氯仿和甲醇制備薄層，得油狀純羅漢果甜苷V-HS半抗原，置于4°C冰箱保存，所述氯仿與甲醇的體積比為Vlttt Vw=I 1。
3.一種羅漢果甜苷V-HS-BSA人工抗原，其特征是以羅漢果甜苷V為原料，應(yīng)用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應(yīng)生成羅漢果甜苷V 丁二酸單酯制得，用紅外光譜和紫外光譜確定半抗原的結(jié)構(gòu)；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之與牛血清蛋白-BSA結(jié)合制得，其結(jié)構(gòu)式為
4.一種羅漢果甜苷V-HS-BSA人工抗原的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟1)取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應(yīng)瓶中，加入新蒸餾吡啶，攪拌溶解，加入適量的 4-二甲基氨基吡啶，于室溫下反應(yīng)；2)用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)度，反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)液；
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是步驟4)所述BSA-碳酸緩沖液是將 IOmgBSA 溶于 ImlNii2CO3-NaHCO3 緩沖液。
6.一種羅漢果甜苷V-HS-HSA人工抗原，其特征是以羅漢果甜苷V為原料，應(yīng)用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應(yīng)生成羅漢果甜苷V 丁二酸單酯制得，用紅外光譜和紫外光譜確定半抗原的結(jié)構(gòu)；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之與人血清蛋白-HAS結(jié)合制得，其結(jié)構(gòu)式為
7.一種羅漢果甜苷V-HS-HSA人工抗原的制備方法，其特征是該方法包括如下步驟1)取羅漢果甜苷V、丁二酸酐投入反應(yīng)瓶中，加入新蒸餾吡啶，攪拌溶解，加入適量的 4-二甲基氨基吡啶，于室溫下反應(yīng)；2)用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)度，反應(yīng)結(jié)束，得到反應(yīng)液；3)取步驟2)的反應(yīng)液，不分離，加入適量二環(huán)己基碳二酰亞胺，攪拌反應(yīng) IOmin ；4)攪拌下滴加HSA-碳酸緩沖液，加完后繼續(xù)反應(yīng)，反應(yīng)中用碳酸緩沖液調(diào)pH值為9， 于室溫反應(yīng)5小時(shí)；5)反應(yīng)液過濾，濾液裝入透析袋，用超純水于4°C透析，每5小時(shí)換水一次，透析3天， 經(jīng)冷凍干燥，得羅漢果甜苷V-HS-HSA人工抗原，置于-20°C下保存。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征是步驟4)所述HAS-碳酸緩沖液是將 IOmgHSA 溶于 ImlNii2CO3-NaHCO3 緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種羅漢果甜苷V半抗原和人工抗原及其制備方法，所制備的羅漢果苷V人工半抗原的結(jié)構(gòu)式為羅漢果甜苷V-HS-BSA人工抗原的結(jié)構(gòu)式為羅漢果甜苷V-HS-HSA人工抗原的結(jié)構(gòu)式為其制備方法是以羅漢果甜苷V為原料，以吡啶為溶劑，利用丁二酸酐與羅漢果甜苷V反應(yīng)生成羅漢果甜苷V丁二酸單酯(羅漢果甜苷V-HS)，得到人工半抗原；人工半抗原不分離，在堿性條件下，使之分別與牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HAS)結(jié)合，制得羅漢果甜苷V人工抗原羅漢果甜苷V-HS-BSA復(fù)合物和羅漢果甜苷V-HS-HAS復(fù)合物，用紅外光譜和紫外光譜鑒定羅漢果甜苷V人工抗原，這為后續(xù)的羅漢果甜苷V抗血清的制備和抗血清效價(jià)的檢測(cè)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C07J17/00GK102153612SQ20101061728
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2010年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者盧曦, 李麗, 李勇文, 李芳耀, 楊新平, 林家遜, 段小群, 陳旭 申請(qǐng)人:桂林醫(yī)學(xué)院