專利名稱：用于治療或預(yù)防人表皮生長因子受體-3(her-3)相關(guān)疾病的材料和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過施用第一劑與第二劑的組合以治療患有人表皮生長因子受體-3(HER-3)相關(guān)疾病的受治療者的材料和方法，該第一劑與HER-3結(jié)合且該第二劑與人表皮生長因子受體(HER)家族的另一成員結(jié)合和/或抑制該成員。該第一劑和第二劑可能為分別與HER-3結(jié)合或與HER家族的另一成員結(jié)合和/或抑制該成員的任何種類的分子，包括但不限于生物性化合物，諸如抗原結(jié)合蛋白、小分子酪氨酸激酶抑制劑、SiRNA或天然物質(zhì)。
現(xiàn)有技術(shù)
HER-3 (也稱為Erb3)是一種受體蛋白酪氨酸激酶，其屬于受體蛋白酪氨酸激酶的表皮生長因子受體(EGF-R)家族，該家族也包括HER-I (也稱為EGF-R或erbB)、HER-2 (也稱為 erbB2)和 HER_4(也稱為 erbB4) (Plowman 等人· (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. US. 87 4905-4909 ；Kraus 等人·(1989)Proc. Natl. Acad. Sci. US. 86 :9193-9197 ；和 Kraus 等人· (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. US. 90 :2900-2904)。與原型表皮生長因子受體一樣，該跨膜受體HER-3是由胞外配體-結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ECD)、ECD內(nèi)的二聚化結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域(TMD)、胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(TKD)和C端磷酸化結(jié)構(gòu)域組成。HER-3的配體又稱為人表皮生長因子受體調(diào)節(jié)蛋白(heregulin) (HRG)，其與HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并通過促進(jìn)與其他人表皮生長因子受體(HER)家族成員的二聚化、隨后使該胞內(nèi)HER-3結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)磷酸化并活化下游信號級聯(lián)放大以活化受體介導(dǎo)的信號傳遞。與多個HER家族成員形成二聚體擴(kuò)大HER-3的信號傳遞潛力，且是一種使信號多樣化和使信號放大的方式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及通過施用第一劑與第二劑的組合以治療患有人表皮生長因子受體-3 (HER-3)相關(guān)疾病的受治療者的材料和方法，該第一劑與HER-3結(jié)合且該第二劑與HER家族的另一成員結(jié)合和/或抑制該成員。該第一劑和第二劑可能為分別與HER-3結(jié)合或與HER家族的另一成員結(jié)合和/或抑制該成員的任何種類的分子，包括但不限于生物性化合物，諸如抗原結(jié)合蛋白、小分子酪氨酸激酶抑制劑、siRNA或天然物質(zhì)。在一個方面中，本發(fā)明特征在于一種治療或預(yù)防受治療者的HER-3相關(guān)疾病的方法，該方法包含對該受治療者施用第一劑和第二劑，其中該第一劑與HER-3結(jié)合且該第二劑與HER家族的另一成員結(jié)合和/或抑制該成員的活性。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的小分子化合物或抗原結(jié)合蛋白。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列；該重鏈氨基酸序列包含選自由SEQ ID NO236、251、252和256組成的組的CDRHl、選自由SEQ ID NO :258、278、280和282組成的組的CDRH2和選自由SEQ ID NO :283、285、309、313和315組成的組的CDRH3 ;且該輕鏈氨基酸序列包含選自由SEQ ID N0:320、334、337 和 340 組成的組的CDRL1、選自由SEQ ID NO:343、356、351和344組成的組的CDRL2和選自由SEQ ID NO :360、381、385和387組成的組的CDRL3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含重鏈氨基酸序列，該重鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組的CDR中的至少一種(a)如SEQ IDNO :236、2 51、252 和 256 中所示的 CDRHl ;(b)如 SEQ ID NO :258、278、280 和 282 中所示的 CDRH2;和(c)如 SEQ ID NO :283、285、309、313 和 315 所示的 CDRH3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含輕鏈氨基酸序列，該輕鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組的CDR中的至少一種(d)如SEQ ID NO :320、334、337和340所示的 CDRLl ； (e)如 SEQ ID NO : 343、356、351 和 344 所示的 CDRL2 ;和(f)如 SEQ ID NO :360、381、385 和 387 所示的 CDRL3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列，該重鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組的CDR中的至少一種(a)如 SEQ ID NO :236、251、252 和 256 所示的 CDRHl ； (b)如 SEQ ID NO :258、278、280和 282 所示的 CDRH2 ;和(c)如 SEQ ID NO :283、285、309、313 和 315 所示的 CDRH3 ;且該輕鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組CDR中的至少一種(d)如SEQ ID NO :320、334、337和 340 所示的 CDRLl ； (e)如 SEQ ID NO :343、356、351 和 344 所示的 CDRL2 ;和(f)如 SEQID NO :360、381、385和387所示的CDRL3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含重鏈氨基酸序列或輕鏈氨基酸序列；該重鏈氨基酸序列包含選自由SEQ ID NO :236、251、252 和 256 組成的組的 CDRH1、選自由 SEQ ID NO :258、278、280 和 282組成的組的CDRH2和選自由SEQ ID NO :283、285、309、313和315組成的組的CDRH3 ;且該輕鏈氨基酸序列包含選自由SEQ ID NO :320、334、337和340組成的組的CDRL1、選自由SEQID NO :343、356、351 和 344 組成的組的 CDRL2 和選自由 SEQ ID NO :360、381、385 和 387 組成的組的CDRL3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含選自由SEQID N0:42、54、70、92和96組成的組的重鏈氨基酸序列。該抗原結(jié)合蛋白可包含選自由SEQID NO :44、56、72、94和98組成的組的輕鏈氨基酸序列。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含選自由SEQID N0:42、54、70、92和96組成的組的重鏈氨基酸序列和選自由SEQ ID NO :44、56、72、94和98組成的組的輕鏈氨基酸序列。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含SEQ ID NO 42的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO 44的輕鏈氨基酸序列。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含SEQ ID NO :54的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO 56的輕鏈氨基酸序列。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含SEQ ID NO :70的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO :72的輕鏈氨基酸序列。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含選自由SEQ ID NO :283、285、309、313和315組成的組的⑶RH3。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白包含選自由SEQ ID NO :360、381、385和387組成的組的CDRL3。該抗原結(jié)合蛋白可定向抗HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域。該抗原結(jié)合蛋白與HER-3的結(jié)合可減少HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)、減少HER-3的磷酸化、減少細(xì)胞增殖、減少細(xì)胞遷移和/或增加HER-3的下調(diào)。與HER-3結(jié)合的所述抗原結(jié)合蛋白可為抗體。該抗體可為單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人源化抗體、人源抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體片段(例如Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、雙價抗體(diabody)或單鏈抗體分子)。該抗體可為 IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4 類型。該第一劑可為與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白，且該抗原結(jié)合蛋白可與效應(yīng)基團(tuán)偶合。該效應(yīng)基團(tuán)可為放射性同位素或放射性核素、毒素、或治療性或化學(xué)治療性基團(tuán)(例如選自由刺孢霉素(calicheamicin)、耳抑素-PE(auristatin-PE)、格爾德霉素(geIdanamycin)、美登素(maytansine)及其衍生物組成的組的治療性或化學(xué)治療性基團(tuán))。該第二劑可為小分子化合物或抗原結(jié)合蛋白。該第二劑可為，例如，曲妥珠單抗(trastuzumab)、拉帕替尼(Iapatinib)、來那替尼(neratinib)、帕尼單抗(panitumumab)、 埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)和T-DM1。在另一個方面中，本發(fā)明特征在于一種治療或預(yù)防受治療者的HER-3相關(guān)疾病的方法，該方法包含對該受治療者施用第一劑和第二劑，其中該第一劑是與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白且包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO :42和輕鏈氨基酸序列SEQ ID N0:44，且其中該第二劑是選自由埃羅替尼、拉帕替尼和來那替尼組成的組。此外，本發(fā)明特征在于治療或預(yù)防受治療者的HER-3相關(guān)疾病的方法，該方法包含對該受治療者施用第一劑和第二劑，其中該第一劑是與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白且包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO 54和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :56，或與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白且包含重鏈氨基酸序列SEQID NO 70和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :72，且其中該第二劑選自由埃羅替尼、拉帕替尼和來那替尼組成的組。本發(fā)明特征還在于一種治療或預(yù)防受治療者的HER-3相關(guān)疾病的方法，該方法包含對該受治療者施用第一劑和第二劑，其中該第一劑是與HER-3結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白且包含重鏈氨基酸序列SEQ ID NO :42和輕鏈氨基酸序列SEQ ID NO :44，且其中該第二劑選自由曲妥珠單抗、T-DMl、帕尼單抗和西妥昔單抗組成的組。本發(fā)明所提供的方法可任選地包含施用第三劑或其他治療劑和/或放射性治療。該第三劑或其他治療劑可為抗腫瘤劑(例如抗腫瘤抗體或化學(xué)治療劑，諸如卡培他濱(capecitabine)、蒽環(huán)類(anthracycline)、多柔比星(doxorubicin)、環(huán)憐酸胺(cyclophosphamide)、紫杉醇(paclitaxel)、多西他奇(docetaxel)、順鉬(cisplatin)、吉西他濱(gemcitabine)或卡鉬(carboplatin))。該第一劑和該第二劑可經(jīng)靜脈、皮下、肌肉或口服施用。該疾病可為過度增殖性疾病(例如選自由乳癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肺癌、胰癌、表皮樣癌、纖維肉瘤、黑色素瘤、鼻咽癌和鱗狀細(xì)胞癌組成的組的疾病)。本文所提供的方法可包括以每6周至少一次的頻率施用約I至約20mg/kg體重劑量的該第一劑。該方法可包括以每6周至少一次的頻率施用約I至約20mg/kg體重劑量的該第二劑。所述方法還可包含在施用前使用包含分析預(yù)測性標(biāo)志以選擇患有HER-3相關(guān)疾病的受治療者的方法。所述方法還可包含在施用后監(jiān)測治療結(jié)果。除非另外定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明的相關(guān)領(lǐng)域的一名普通技術(shù)人員通常所理解的相同的意義。雖然與本文所描述的方法和材料類似或等同的方法和材料都可被用于實行本發(fā)明，但將適當(dāng)?shù)姆椒ê筒牧厦枋鲇谙挛摹１疚乃峒暗某霭嫖?、申請、專利及其他參考文獻(xiàn)中的每一個通過引用全文并入本文。在抵觸的情況下，以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。此外，所述材料、方法和實例僅為示例性的而非意圖限制。本發(fā)明的一個或多個實施方案的細(xì)節(jié)在下文所附的附圖和說明中闡述。本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點將是由詳細(xì)說明、圖式及由權(quán)利要求而顯而易見的。附圖簡沭圖I說明單獨使用人源抗-HER-3抗體和帕尼單抗或組合使用二者對非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)異種移植腫瘤(Calu-3)生長的影響。圖2說明單獨使用人源抗-HER-3抗體和埃羅替尼或組合使用二者對Calu_3生長的影響。 圖3說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4 (HER2 二聚化抑制劑)或曲妥珠單抗對SkBr_3乳癌細(xì)胞的基底非貼壁依賴性生長的影響。圖4說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4、曲妥珠單抗或西妥昔單抗對SkBr-3乳癌細(xì)胞的經(jīng)HRG刺激的非貼壁依賴性生長的影響。圖5說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4、曲妥珠單抗或西妥昔單抗對MDA-MB-435卵巢癌細(xì)胞的基底非貼壁依賴性生長的影響。圖6A至6D說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與曲妥珠單抗(圖6A)、拉帕替尼(圖6B)、吉西他濱(圖6C)或順鉬(圖6D)對MDA-MB-175VII乳癌細(xì)胞的增殖的影響。圖7說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4、曲妥珠單抗或拉帕替尼對ZR-75-30乳癌細(xì)胞的經(jīng)HRG刺激的增殖的影響。圖8說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4、曲妥珠單抗或拉帕替尼對BT474乳癌細(xì)胞的經(jīng)HRG刺激的增殖的影響。圖9說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與西妥昔單抗、c2C4或曲妥珠單抗對經(jīng)HRG刺激的DLD-I結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖的影響。

圖10說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4或曲妥珠單抗或拉帕替尼對HCC-1569乳癌細(xì)胞的經(jīng)HRG刺激的增殖的影響。圖11說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與c2C4、曲妥珠單抗或拉帕替尼對SkBr-3乳癌細(xì)胞的經(jīng)HRG刺激的增殖的影響。圖12說明單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與帕尼單抗對FaDu頭頸癌細(xì)胞的增殖的影響。圖13的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與西妥昔單抗、c2C4或曲妥珠單抗對MDA-MB-175VII乳癌細(xì)胞中HER-3 (上圖)、Akt (中圖)和ERK (下圖)的磷酸化的影響。圖14的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與西妥昔單抗、c2C4、曲妥珠單抗或拉帕替尼對經(jīng)HRG刺激的SkBr-3乳癌細(xì)胞中HER-3 (上圖)、Akt (中圖)和ERK (下圖)的磷酸化的影響。
圖15的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與西妥昔單抗、帕妥珠單抗(c2C4)或曲妥珠單抗對經(jīng)HRG刺激的Lsl74T結(jié)腸癌細(xì)胞中HER_3(上圖)或Akt (下圖)的磷酸化的影響。圖16的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與西妥昔單抗、c2C4或曲妥珠單抗對經(jīng)HRG刺激的HCC1569乳癌細(xì)胞中HER-3 (上圖)、Akt (中圖)和 ERK (下圖)的磷酸化的影響。圖17的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與帕尼單抗對A549肺泡上皮細(xì)胞中Akt、PGFR、HER-2、HER-3、HER-4和ERK的磷酸化的影響。第I行，IgG對照組；第2行，單獨使用帕尼單抗；第3行，單獨使用U1-59 ；第4行，組合使用U1-59與帕尼單抗。微管蛋白被用來作為相同上樣的對照。圖18的蛋白質(zhì)印跡照片顯示單獨使用人源抗-HER-3抗體或組合使用人源抗-HER-3抗體與帕尼單抗或拉帕替尼對Calu3 NSCLC細(xì)胞中HER-3、Akt、HER-2、ERK和EGF-R的磷酸化的影響。第I行，IgG對照組；第2行，單獨使用帕尼單抗；第3行，單獨使用U1-59 ;第4行，單獨使用拉帕替尼；第5行，組合使用U1-59與帕尼單抗；第6行，組合使用U1-59與拉帕替尼。圖19說明單獨使用人源抗-HER-3抗體和拉帕替尼或組合使用二者對乳癌異種移植腫瘤(HCC-1569)生長的影響。 圖20顯示以U1-59治療A549NSCLC細(xì)胞抑制HER3磷酸化和減少吉非替尼(gefitinib)治療后的再活化。A549細(xì)胞經(jīng)吉非替尼、U1-59或二者治療，HER3的磷酸化由ELISA分析評估。以吉非替尼治療I小時導(dǎo)致HER磷酸化的部分抑制，但在24小時后逆轉(zhuǎn)到對照量。相反地，以U1-59治療導(dǎo)致24小時后持續(xù)的HER磷酸化的較大抑制。組合兩種劑的治療防止在以吉非替尼單獨治療24小時后的細(xì)胞中所見到的該抑制作用的逆轉(zhuǎn)。實驗于一式三份的孔中進(jìn)行，并重復(fù)至少二次。結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。發(fā)明詳述本文使用的段落標(biāo)題僅供組織的目的，不可被視為限制所描述的主題。除非本文另外加以定義，關(guān)于本申請所使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常所理解的意義。另外，除非上下文中另外要求，單數(shù)術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)意義且復(fù)數(shù)術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)意義。一般來說，本文所描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、基因?qū)W以及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和雜交的相關(guān)使用的命名法和技術(shù)是本領(lǐng)域熟知且經(jīng)常使用的那些。本申請的方法和技術(shù)通常根據(jù)本領(lǐng)域中熟知的常規(guī)方法進(jìn)行，并且除非另外說明否則如同本說明書各處引用和討論的各種一般和更具體的參考文獻(xiàn)所述。見例如SambiOOk等人，Molecular Cloning A Laboratory Manual (分子克隆實驗室手冊)，第三版，ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001), Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology (分子生物學(xué)的現(xiàn)有程序)，Greene PublishingAssociates (1992)和 Harlow 和 Lane Antibodies A Laboratory Manual (抗體實驗室手冊)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. N. Y. (1990),每個參考文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用全文并入本文。酶反應(yīng)和純化技術(shù)是根據(jù)制造商說明書，以本領(lǐng)域通常完成或本文所描述的方式進(jìn)行的。本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)、醫(yī)學(xué)和制藥化學(xué)的相關(guān)使用的術(shù)語以及實驗室方法和技術(shù)是本領(lǐng)域熟知且經(jīng)常使用的那些。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可被用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制劑、配制和遞送及患者治療。應(yīng)理解的是，本發(fā)明并不限于本文所描述的特定方法、程序和試劑等，因此可以變化。本文所使用的術(shù)語只是為了描述特定實施方案的目的，并不意圖限制僅由該權(quán)利要求所定義的范圍。除了在操作實施例或另外說明的處以外，應(yīng)理解所有表示本文所使用的成分的量或反應(yīng)條件的數(shù)字在所有情況下由術(shù)語“約”所修飾。當(dāng)與百分比一起使用時，術(shù)語“約”可表不+/_1 %。I. 一般概況
本發(fā)明提供涉及使用第一劑與第二劑的組合以治療或預(yù)防HER-3相關(guān)疾病的材料和方法，該第一劑與HER-3結(jié)合且該第二劑與HER家族的其他成員結(jié)合和/或抑制該成員的活性。該第一劑和第二劑可以為生物性化合物，諸如抗原結(jié)合蛋白或小分子酪氨酸激酶抑制劑。舉例來說，本發(fā)明提供與HER家族的單個或多個成員(諸如HER-3、HER-2、EGF-R、HER-4和/或HER家族的任何其他成員)結(jié)合和/或抑制該成員的分離的多肽(例如結(jié)合蛋白諸如抗體)和/或小分子酪氨酸激酶抑制劑。本發(fā)明還提供包含第一劑和第二劑的組合物及使用其治療或預(yù)防HER-3相關(guān)疾病的方法，該第一劑與HER-3結(jié)合且該第二劑與其他HER家族成員中的一個或多個結(jié)合和/或抑制該成員的活性。本發(fā)明所描述的某些第一劑和/或第二劑為生物制劑，諸如抗原結(jié)合蛋白。在某些實施方案中，該抗原結(jié)合蛋白的多肽結(jié)構(gòu)分別基于抗體，包括但不限于單克隆抗體、雙特異性抗體、迷你抗體(minibody)、結(jié)構(gòu)域抗體、合成抗體(有時稱為“抗體擬物”)、嵌合抗體、人源化抗體、人源抗體、抗體融合物(有時稱為“抗體軛合物”)及其片段。不同的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步描述于下文。在其他實施方案中，該第一劑和/或第二劑是小分子酪氨酸激酶抑制齊U。在還有另外的實施方案中，該第一劑和/或第二劑是siRNA。在還有另外的實施方案中，該第一劑和/或第二劑是天然物質(zhì)。本發(fā)明所描述的組合物及使用其的方法已被證實對表達(dá)HER-3和HER家族的至少一種其他成員的實體腫瘤的生長的增加的抑制。特別是相較于單獨施用與HER-3結(jié)合的第一劑或結(jié)合和/或抑制HER家族的至少一種其他成員的第二劑，施用該第一劑與第二劑的組合已在本發(fā)明中證實在抑制各種腫瘤生長上的增加的功效。因此，本發(fā)明所公開的組合物和方法已證實于治療和預(yù)防腫瘤疾病諸如癌的改進(jìn)方法中的效用。2. HER-3 結(jié)合劑如本發(fā)明所述，與HER-3結(jié)合的劑可為生物性化合物，包括但不限于抗原結(jié)合蛋白，諸如抗體或小分子酪氨酸激酶抑制劑。本發(fā)明所使用的“抗原結(jié)合蛋白”或本文所使用的“結(jié)合蛋白”是指與特定目標(biāo)抗原諸如HER家族的成員(例如HER-3)特異性結(jié)合的蛋白。當(dāng)抗原結(jié)合蛋白與其目標(biāo)抗原的解離常數(shù)(KD)為< KT8M時，被稱為“特異性結(jié)合”。當(dāng)Kd為彡5X 10_9M時，該抗體以“高親和性”與抗原結(jié)合，當(dāng)Kd為彡5X IO^10M時則為“非常高親和性”的結(jié)合。在一個實施方案中，該抗體具有< KT9M的Kd并具有約1X10—4/秒的解離速率。在一個實施方案中，該解離速率為約IX IO5/秒。在其他實施方案中，該抗體將以約10_8M至ΙΟ,Μ之間的Kd與HER家族的特定成員結(jié)合，并且在還有另一個實施方案其將以Kd ( 2X IO-10結(jié)合。另外，如本文所使用的，小分子化合物是化學(xué)合成的以抑制一種或多種蛋白激酶(包括絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸激酶)的酶活性的低分子量化合物。在一些實施方案中，當(dāng)該HER-3結(jié)合劑為生物性化合物時，該劑為抗原結(jié)合蛋白，諸如可與HER-3結(jié)合的抗體。因此本發(fā)明提供用于治療HER-3相關(guān)疾病的組合物和方法中的HER結(jié)合蛋白，包括抗-HER-3抗體。在一些實施方案中，靶向HER-3的抗體可以定向抗HER-3的胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)。舉例來說，如本文所描述的，抗-HER-3抗體可與HER-3的胞外部分的至少一個表位相互作用。該表位可位于氨基末端的LI結(jié)構(gòu)域(氨基酸19至184)、SI (氨基酸185至327)和S2 (氨基酸500至632)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域以及在兩側(cè)為富 含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域的L2結(jié)構(gòu)域(328至499)或HER-3各結(jié)構(gòu)域的組合中。該表位也可能位于各結(jié)構(gòu)域的組合中，諸如但不限于包含LI和SI的部分的表位。HER-3結(jié)合蛋白的另一項表征在于，其與HER-3的結(jié)合減少HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)。HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)減少可能是因為例如HER-3下調(diào)導(dǎo)致至少部分的HER-3分子從細(xì)胞表面消失，或是因為細(xì)胞表面上HER-3以基本上無活性的形式(也就是相較于非穩(wěn)定形式呈現(xiàn)較低的信號傳導(dǎo)的形式)的穩(wěn)定化所致?？蛇x擇地，HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)減少也可能是因為影響(例如減少或抑制)配體或HER家族的另一成員與HER-3的結(jié)合所致。舉例來說，HER-3介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)減少也可通過減少與其他HER家族成員(例如EGF-R)形成含HER-3的二聚體所致。HER-3結(jié)合劑可為具有類抗體結(jié)合活性(例如具有類似抗-HER-3抗體的活性)的支架蛋白或抗體(意即抗-HER-3抗體)。本文所使用的術(shù)語“支架蛋白”是指具有對氨基酸插入、取代或缺失高度耐受的暴露的表面區(qū)域的多肽或蛋白?？捎糜诒景l(fā)明的支架蛋白的實例包括來自金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的蛋白質(zhì)A、來自大菜粉蝶(Pieris brassicae)的膽素結(jié)合蛋白或其他脂質(zhì)運載蛋白(Iipocalin)、錨蛋白(ankyrin)重復(fù)蛋白和人纖維粘連蛋白(fibronectin)(于 Binz 和 Pluckthun (2005) Curr.Opin. Biotechnol. 16 :459-69中綜述)。支架蛋白的工程化可被視為移植或嵌入親和性功能至穩(wěn)定折疊的蛋白的結(jié)構(gòu)骨架之上或之中。親和性功能是指如本發(fā)明所述的蛋白結(jié)合親和性。支架在構(gòu)造上可與賦予結(jié)合特異性的氨基酸序列分開。一般來說，看上去適用于發(fā)展這類人造親和性試劑的蛋白質(zhì)可能通過合理或最常見的組合式蛋白工程技術(shù)獲得，諸如在體外展示的人造支架庫中篩選抗HER_3(不論是經(jīng)純化的蛋白或在細(xì)胞表面展示的蛋白)的結(jié)合劑，該技術(shù)為本領(lǐng)域已知的(見例如Skerra(2000) J. Mol. Recog. 13 :167-87 ;和Binz和Pluckthun,同上)。此外,具有類抗體結(jié)合活性的支架蛋白可源自包含該支架結(jié)構(gòu)域的受體(acceptor)多肽，該受體多肽可接受供體多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的移植以將該供體多肽的結(jié)合特異性賦予包含支架結(jié)構(gòu)域的該受體多肽。該插入的結(jié)合結(jié)構(gòu)域可為例如抗體，特別是抗-HER-3抗體，的互補決定區(qū)(OTR)。插入可通過本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員已知的各種方法完成，包括例如多肽合成、編碼氨基酸的核酸合成以及本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員熟知的各種形式的重組方法。術(shù)語“抗體”包括單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人源化抗體(Jones等人(1986)Nature 321 :522-525 ;Riechmann 等人·(1988)Nature332 :323-329 ;和Presta (1992) Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596)、嵌合抗體(Morrison 等人· (1984) Proc.Natl. Acad. Sci. US. 81 =6851-6855)、由至少二個抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)或其抗體片段。術(shù)語“抗體片段”包含前述抗體的任何部分，諸如它們的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的實例包括Fab片段、Fab’片段、(Fab’)2片段、Fv片段、雙價抗體(Hollinger 等人.(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. US 90 :6444-6448)、單鏈抗體分子(Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies (單克隆抗體的藥理學(xué))Il3, Rosenburg 和 Moore 編輯，Springer Verlag,N. Y. (1994), 269-315)和能表現(xiàn)出與HER-3結(jié)合的所期望能力的其他片段。此外，本文所使用的術(shù)語“抗體”包括含有抗體的工程化亞結(jié)構(gòu)域的類抗體分子或天然存在的抗體變體。這些類抗體分子可能為單結(jié)構(gòu)域抗體，諸如來源于天然來源如駱駝(Muyldermans 等人.(2001) Rev. Mol. Biotechnol. 74 :277-302)或經(jīng)由人、胳馬它或其他物種的體外展示文庫(Holt等人(2003)Trends Biotechnol. 21 :484-90)獲得的RVh或僅Vlj的結(jié)構(gòu)域?！癋v片段”是包含完整抗原識別和抗原結(jié)合位點的最小抗體片段。此區(qū)是由一個重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域和一個輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域以緊密、非共價的連接形成的二聚體組成。在 這種構(gòu)型下，各可變結(jié)構(gòu)域的三個CDR相互作用以界定在Vh-'二聚體的表面上的抗原結(jié)合位點。這六個CDR賦予該抗體抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單一可變結(jié)構(gòu)域(或僅包含3個對抗原特異的⑶R的Fv的一半)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，盡管通常以低于完整的結(jié)合位點的親和性。“Fab片段”也包含輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域和重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(CHl)?！癋ab片段”與“Fab’片段”的不同處在于Fab’片段的重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基端增加數(shù)個殘基，包括一個或多個來自抗體鉸鏈區(qū)的半胱氨酸?！癋(ab’)2片段”最初被產(chǎn)生為之間具有鉸鏈半胱氨酸的一對“Fab’片段”。制備這類抗體片段的方法(諸如木瓜酶或胃蛋白酶消化)是本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的?？贵w可為IgA、IgD、IgE、IgG或IgM類型，包括IgG或IgM類型，諸如但不限于IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgMl和IgM2類型。舉例來說，在某些情況中，該抗體是IgGl、IgG2或IgG4類型。在某些方案中(例如關(guān)于作為抗HER-3的治療候選物的抗體的產(chǎn)生)，能夠固定補體并參與補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的抗體是所期望的。有一些具有相同作用的同種型的抗體，包括例如小鼠IgMdhIl IgG2a、小鼠IgG2b、小鼠IgG3、人源IgM、人源IgGl、人源IgG3和人源IgA。應(yīng)理解的是所產(chǎn)生的抗體最初不必然具備該同種型，所產(chǎn)生抗體反而可具有任何同種型且所述抗體可以通過利用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)分子生物技術(shù)于適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中通過將分子克隆的V區(qū)基因或cDNA添加至分子克隆的恒定區(qū)基因或cDNA，接著利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)于宿主細(xì)胞中表達(dá)該抗體而被同種型轉(zhuǎn)換。該同種型轉(zhuǎn)換的抗體也可具備經(jīng)分子工程化以具有相較于天然存在的變體較強(qiáng)⑶C(IduSOgie等人.(2001) J. Immunol. 166 2571-2575)并利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)于宿主細(xì)胞中重組表達(dá)的Fe區(qū)。這類技術(shù)包括使用直接重組技術(shù)(見例如美國專利第4，816，397號)、細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)(見例如美國專利第5，916，771和6，207，418號)等。在細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)中，制備具有帶有任何所期望的同種型的重鏈的骨髓瘤或其他細(xì)胞系諸如CHO并制備具有輕鏈的另一骨髓瘤或其他細(xì)胞系諸如CH0。該細(xì)胞之后可被融合并分離表達(dá)完整抗體的細(xì)胞系。舉例來說，具有與HER-3抗原的所期望的結(jié)合的人源抗-HER-3IgG4抗體可被輕易地同種型轉(zhuǎn)換以產(chǎn)生人源IgM、人源IgGl或人源IgG3同種型，同時仍具有該相同的可變區(qū)(該區(qū)界定抗體的特異性和部分的親和性)。該分子接著可能能夠固定補體并參與CDC。
另外，抗體也可以能夠與效應(yīng)細(xì)胞諸如單核細(xì)胞和自然殺傷(NK)細(xì)胞上的Fe受體結(jié)合并參與抗體依賴性細(xì)胞性細(xì)胞毒性(ADCC)。有一些抗體同種型具有相同作用，包括但不限于下列小鼠IgG2a、小鼠IgG2b、小鼠IgG3、人源IgGl和人源IgG3。應(yīng)了解的是所產(chǎn)生的抗體最初不必然具備該同種型，所述抗體反而可具備任何同種型且所述抗體可以通過利用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)分子生物技術(shù)于適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中通過將分子克隆的V區(qū)基因或cDNA添加至分子克隆的恒定區(qū)基因或cDNA，接著利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)于宿主細(xì)胞中表達(dá)該抗體而被同種型轉(zhuǎn)換。該同種型轉(zhuǎn)換的抗體也可具備經(jīng)分子工程化以具有相較于天然存在的變體較強(qiáng)ADCC(Shields等人.(2001) J. Biol. Chem. 276 :6591-604)并利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)于宿主細(xì)胞中重組表達(dá)的Fe區(qū)。這類技術(shù)包括使用直接重組技術(shù)(見例如美國專利第4，816，397號)、細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)(見例如美國專利第5，916，771和6，207，418號)等。在細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)中，制備具有帶有任何所期望的同種型的重鏈的骨髓瘤或 其他細(xì)胞系諸如CHO并制備具有輕鏈的另一骨髓瘤或其他細(xì)胞系諸如CH0。該細(xì)胞之后可被融合并分離表達(dá)完整抗體的細(xì)胞系。舉例來說，具有與HER-3抗原的所期望的結(jié)合的人源抗-HER-3IgG4抗體可被輕易地同種型轉(zhuǎn)換以產(chǎn)生人源IgGl或人源IgG3同種型，同時仍具有該相同的可變區(qū)(該區(qū)界定抗體的特異性和部分的親和性)。該分子接著可能能夠效應(yīng)細(xì)胞上的Fe Y R結(jié)合并參與ADDC。本文的表10提供抗HER-3的抗體中可包括的多種⑶R的氨基酸序列。在一些實施方案中，分離的靶向ffiR-3的結(jié)合蛋白可包括重鏈氨基酸序列和/或輕鏈氨基酸序列，該重鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組的至少一種⑶R : (a)如SEQ ID N0:2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 所示的 CDRHl ； (b)如 SEQ ID NO 2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、112、116、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 所示的 CDRH2 ;和(c)如 SEQ ID NO :2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、I12、I16、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230所示的CDRH3 ;且該輕鏈氨基酸序列包含選自由下列組成的組的至少一種CDR (d)如SEQID NO :4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 所示的 CDRLl ； (e)如 SEQID NO :4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、I10、I14、I18、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 所示的 CDRL2 ;和(f)如 SEQID NO :4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232 所示的 CDRL3，如本文隨本申請一起提交的序列表所示。
在一些實施方案中，分離的靶向HER-3的結(jié)合蛋白可包含選自由SEQ ID NO :2、6、10、14、18、22、26、30、34、36、40、42、46、50、54、60、62、66、70、74、78、80、84、88、92、96、100、104、108、I12、I16、120、122、126、130、134、138、142、146、150、154、158、162、166、170、174、178、182、186、190、194、198、202、206、210、214、218、222、226 和 230 所組成的組的重鏈氨基酸序列和 / 或選自由 SEQ ID NO :4、8、12、16、20、24、28、32、38、44、48、52、56、58、64、68、72、76、82、86、90、94、98、102、106、110、114、118、124、128、132、136、140、144、148、152、156、160、164、168、172、176、180、184、188、192、196、200、204、208、212、216、220、224、228 和 232所組成的組的輕鏈氨基酸序列，如本文隨本申請一起提交的序列表所示。
在一些實施方案中，抗-HER-3抗體可包含如SEQ ID NO :2和4、6和8、10和12、14 和 16、18 和 20,22 和 24,26 和 28,30 和 32,36 和 38,42 和 44,46 和 48,50 和 52,54 和56,60 和 58,62 和 64,66 和 68,70 和 72,74 和 76,78 和 82,80 和 82,84 和 86,88 和 90,92和 94,96 和 98,100 和 102,104 和 106,108 和 110,112 和 114,116 和 118,122 和 124,126和 128、130 和 132、134 和 136、138 和 140、142 和 144、146 和 148、150 和 152、154 和 156、158 和 160、162 和 164、166 和 168、170 和 172、174 和 176、178 和 180、182 和 184、186 和188,190 和 192,194 和 196,198 和 200,202 和 204,206 和 208,210 和 212,214 和 216,218和220、222和224、226和228、230和232中所示的重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列，或如SEQ ID NO :34、40、60、62或120中的任一個所示的重鏈氨基酸序列，或如SEQ ID NO 58或64所示的輕鏈氨基酸序列,如本文隨本申請一起提交的序列表所示。在一些實施方案中，靶向HER-3的蛋白可為具有類抗體結(jié)合活性的支架蛋白(例如具有類似抗-HER-3抗體的活性)或抗體(例如抗-HER-3抗體)。該抗-HER-3抗體可選自由命名為 U1-1、U1-2、U1-3、U1-4、U1-5、U1-6、U1-7、U1-8、U1-9、U1-10、U1-11、U1-12、U1-13、Ul-14、Ul-15、Ul-16、Ul-17、Ul-18、Ul-19、Ul-20、Ul-21、Ul-22、Ul-23、Ul-24、U1-25、Ul-26、Ul-27、Ul-28、Ul-29、Ul-30、Ul-31、Ul-32、Ul-33、Ul-34、Ul-35、Ul-36、U1-37、Ul-38、Ul-39、Ul-40、Ul-41、Ul-42、Ul-43、Ul-44、Ul-45、Ul-46、Ul-47、Ul-48、U1-49、Ul-50、Ul-51、Ul-52、Ul-53、U1-55. I、Ul-55、U1-57. I、Ul-57、Ul-58、Ul-59、U1-61. I、U1-61和U1-62的抗體所組成的組,或者是具有前述抗體中的一個的至少一個重鏈或輕鏈的抗體。命名為 U1-49(SEQ ID NO :42/44)、Ul-53 (SEQ ID NO :54/56)和 Ul-59 (SEQ ID NO:70/72)的抗體或具有所述抗體中的一個的至少一個重鏈或輕鏈的抗體可為特別有用的。應(yīng)了解的是本發(fā)明所提供的HER-3結(jié)合蛋白的氨基酸序列不限于20個常規(guī)氨基酸(見 Immunology-A Synthesis (免疫學(xué)-合成)(第二版,Golub 和 Gren 編輯.，SinauerAssociates, Sunderland,Mass. (1991),其通過引用全文并入本文)。舉例來說，所述氨基酸可能包含所述20個常規(guī)氨基酸的立體異構(gòu)物(例如D-氨基酸)、非天然氨基酸諸如a-，a - 二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其他非常規(guī)氨基酸。非常規(guī)氨基酸(其也可能為本發(fā)明所提供的結(jié)合蛋白的適合成份)的實例包括4-羥基脯氨酸、Y-羧基谷氨酸鹽、e -N, N, N-三甲基賴氨酸、e -N-乙酰基賴氨酸、0_磷酸絲氨酸、N-乙?；z氨酸、N-甲?；琢虬彼?、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、a -N-甲基精氨酸和其他類似的氨基酸和亞氨酸，例如4-羥基脯氨酸。另外，在SEQ ID NO :1至390(列示于本申請一起提交的附件中)所示的氨基酸序列中的輕微變異被認(rèn)為包含于本發(fā)明中，條件是所述氨基酸序列中的變異維持至少75 %(例如至少80%、90%、95%或99% )的SEQ ID NO :I至390所示序列。變異可發(fā)生在框架區(qū)內(nèi)(即⑶R之外)、⑶R之內(nèi)或在框架區(qū)和⑶R之內(nèi)。在一些實施方案中，SEQ ID NO:I至390所示的氨基酸序列中的變異，即至少一個氨基酸的缺失、插入和/或取代，可發(fā)生在靠近功能性結(jié)構(gòu)域的邊界處。結(jié)構(gòu)性和功能性結(jié)構(gòu)域可通過將該核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公開或?qū)Ｓ眯蛄袛?shù)據(jù)庫比較來確認(rèn)。計算機(jī)比較法可被用來確定存在于已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其他結(jié)合蛋白中的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)形結(jié)構(gòu)域。確定折疊為已知的三維結(jié)構(gòu)的蛋白序列的方法是本本領(lǐng)域已知的。(見例如Bowie等人.(1991) Science253 164 ；Proteins, Structures and Molecular Principles (蛋白質(zhì)、結(jié)構(gòu)和分子原理)(Creighton編輯,W H. Freeman and Company, New York (1984)) ；Introduction to ProteinStructure (蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)介紹)(Branden 和 Tooze 編輯，Garland Publishing, New York,N. Y. (1991);和Thornton等人.(1991)Nature 354 :105，所述參考文獻(xiàn)通過引用全文并入本文。)因此，本領(lǐng)域 的技術(shù)人員能識別可用來界定本文所述的蛋白的結(jié)構(gòu)性和功能性結(jié)構(gòu)域的序列基序和結(jié)構(gòu)構(gòu)形。在SEQ ID NO :1至390所示的氨基酸序列中的變異可包括那些導(dǎo)致對蛋白水解或氧化的感受性降低、改變糖基化模式或改變結(jié)合親和性或者賦予或修飾該結(jié)合蛋白的其他物理化學(xué)或功能性特性的變異。特別是可考慮保守性氨基酸取代。保守性取代是指那些發(fā)生于側(cè)鏈相關(guān)的氨基酸家族內(nèi)的取代。氨基酸家族包括下列酸性家族=天冬氨酸、谷氨酸；堿性家族=賴氨酸、精氨酸、組氨酸；非極性家族=丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；及不帶電的極性家族=甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸?？蛇x擇地家族包括脂肪族羥基家族=絲氨酸和蘇氨酸；含酰胺家族=天冬酰胺和谷氨酰胺；脂肪族家族=丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；及芳香性家族=苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。舉例來說，我們可以合理期待以異亮氨酸或纈氨酸獨立取代亮氨酸、以谷氨酸獨立取代天冬氨酸、以絲氨酸獨立取代蘇氨酸或以結(jié)構(gòu)相關(guān)的氨基酸類似地取代氨基酸將不會對所形成的結(jié)合蛋白的結(jié)合或特性產(chǎn)生重大影響，特別是如果該取代并未牽涉在框架區(qū)內(nèi)的氨基酸。然而，所有其他可能的氨基酸取代也被包含于本發(fā)明中。氨基酸改變是否產(chǎn)生減少ffiR-3信號傳導(dǎo)的功能性的HER-3結(jié)合蛋白，可容易地通過ELISA或FACS測定所形成的結(jié)合蛋白的特定HER-3結(jié)合活性或者體外或體內(nèi)的功能性測定來確定。在一些實施方案中，HER-3結(jié)合蛋白可與效應(yīng)基團(tuán)偶合。該結(jié)合蛋白特別適用于治療應(yīng)用。本發(fā)明所使用的術(shù)語“效應(yīng)基團(tuán)”是指細(xì)胞毒性基團(tuán)諸如放射性同位素或放射性核素、毒素、治療性基團(tuán)或其他本領(lǐng)域已知的效應(yīng)基團(tuán)。適當(dāng)效應(yīng)基團(tuán)的實例為放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、9°Y、99Tc、mIn、125I、mI)或非放射性同位素(例如2D)、刺孢霉素、多拉司他汀類似物諸如耳抑素和化學(xué)治療劑諸如格爾德霉素和美登素衍生物包括DMl。因此在一些情況中，基團(tuán)可為標(biāo)示基團(tuán)和效應(yīng)基團(tuán)。各種連接效應(yīng)基團(tuán)與多肽或糖多肽(諸如抗體)的方法是本領(lǐng)域本領(lǐng)域已知的，且可能被用于制備并進(jìn)行本發(fā)明描述的組合物和方法。在一些實施方案中，通過不同長度的間隔臂連接效應(yīng)基團(tuán)與結(jié)合蛋白可有用地減少例如潛在的空間位阻。本發(fā)明也涉及制備分離的HER-3結(jié)合蛋白的方法，該方法包含自表達(dá)該蛋白的宿主細(xì)胞制備該蛋白的步驟。可被使用的宿主細(xì)胞包括但不限于雜交瘤、真核細(xì)胞(例如哺乳動物細(xì)胞如倉鼠、兔、大鼠、豬或小鼠細(xì)胞)、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞(例如啤酒釀母菌(Saccharomyces cerevisiae)或巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)細(xì)胞)、原核細(xì)胞(例如大腸桿菌(E. coli)細(xì)胞)及其他用于產(chǎn)生結(jié)合蛋白的細(xì)胞。多種自宿主細(xì)胞制備和分離結(jié)合蛋白(諸如支架蛋白或抗體)的方法是本領(lǐng)域已知的且可能被用于實施本文所描述的方法。另外，制備結(jié)合蛋白片段(例如支架蛋白片段或抗體片段)的方法，諸如木瓜酶或胃蛋白酶消化、現(xiàn)代克隆技術(shù)、制備單鏈抗體分子(Pluckthun，同上)和雙價抗體(Hollinger等人，同上)的技術(shù)也為本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的且可被用于實施本文所描述的方法。在一些實施方案中，HER-3結(jié)合蛋白可自分泌該蛋白的雜交瘤制備。見例如Kohler 等人.(1975) Nature 256:495。
在一些實施方案中，HER-3結(jié)合蛋白可通過將該結(jié)合蛋白于宿主細(xì)胞中的表達(dá)優(yōu)化和/或放大并自該宿主細(xì)胞分離該結(jié)合蛋白來重組制備。為達(dá)此目的，宿主細(xì)胞可由編碼HER-3結(jié)合蛋白的DNA (例如載體)的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染，并于產(chǎn)生該結(jié)合蛋白的適當(dāng)條件下培養(yǎng)。見例如美國專利第4，816，567號。可用的宿主細(xì)胞包括例如CHO細(xì)胞、NS/0骨髓瘤細(xì)胞、人胚胎腎293細(xì)胞、大腸桿菌細(xì)胞和啤酒釀母菌細(xì)胞。為抗體的HER-3結(jié)合蛋白可自經(jīng)基因工程化以產(chǎn)生完全人源的抗體的動物制備，或自噬菌體、酵母、核糖體或大腸桿菌的抗體展示庫制備。見例如Clackson等人.(1991)Nature 352 :624-628 ；Marks 等人 (1991)J.Mol. Biol. 222 :581-597 ;Feldhaus 和Siegel (2004)J. TmmunoI. Methods 290 :69-80 ；Groves 和 Osbourn(2005)Expert Opin.Bioi. Ther. 5 125-135 ；和 Jostock 和 Dubel (2005) Comb. Chem. High Throughput Screen
8:127-133。在一些實施方案中，本文所提供的抗體可為完全人源或人源化的抗體。人源抗體避免了與異種抗體，諸如具有小鼠或大鼠可變區(qū)和/或恒定區(qū)的抗體，有關(guān)的某些問題。異種源性蛋白的存在可導(dǎo)致患者產(chǎn)生抗該抗體的免疫反應(yīng)，接著導(dǎo)致快速清除該抗體、經(jīng)由該抗體的中和而喪失治療效用和/或嚴(yán)重、甚至致命的過敏反應(yīng)。為了避免使用小鼠或大鼠源性抗體，完全人源的抗體可經(jīng)由將功能性人源抗體基因座引入嚙齒動物或其他哺乳動物或動物以使該嚙齒動物、其他哺乳動物或動物產(chǎn)生完全人源的抗體來產(chǎn)生。一種產(chǎn)生完全人源的抗體的方法是利用XEN0M0USE 品系的小鼠，該小鼠經(jīng)工程化以包含人重鏈基因座和K輕鏈基因座的245kb和190kb大小的種系構(gòu)型片段。其他XEN0M0USE 品系小鼠包含人重鏈基因座和K輕鏈基因座的980kb和800kb大小的種系構(gòu)型片段。還有其他XEN0M0USE 品系小鼠包含人重鏈基因座和K輕鏈基因座的980kb和800kb大小的種系構(gòu)型片段以和740kb大小的種系構(gòu)型的完全人源的\輕鏈基因座。見Mendez 等人.(1997) Nature Genetics 15 :146-156 和 Green 和 Jakobovits (1998) J. Exp.Med. 188 MSSigSoXENOMOUSE 品系可得自加州千橡市(Thousand Oaks, CA)安進(jìn)(Amgen)公司。XENOMOUSE , 小鼠的產(chǎn)生被進(jìn)一步討論和描述于美國專利公開案2003/0217373(2002 年 11 月 20 日提交)、美國專利第 5，939，598,6, 075，181,6, 114，598、6，150，584,6, 162，963,6, 673，986,6, 833，268 和 7，435，871 號和日本專利第 3068180B2、3068506B2 和 3068507B2 號中。也見歐洲專利第 EP0463151 號、PCT
發(fā)明者托爾·海特曼, 丹尼爾·J·弗里曼, 羅伯特·拉丁斯基 申請人:U3制藥有限公司, 安進(jìn)公司