專利名稱：一種萊鮑迪苷c的制備方法
一種萊鮑迪苷C的制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種萊鮑迪苷C (Rebaudioside C)的制備方法， 具體涉及的是從甜菊糖中分離高純度的萊鮑迪苷C的方法。
背景技術(shù)：
甜菊糖中的甜味成分均屬糖苷類。苷(glycoside或heteroside)亦稱甙或 配糖體雜糖體，是糖或糖的衍生物與另一非糖化合物，通過糖的端基碳原子連接縮合而 成的化合物。苷水解后能生成糖和非糖兩部分，其非糖部分稱為苷元或配基，配糖基 (agly-cone, genin)，國外研究先后從甜菊葉提取物中分離出8種不同甜味成分即甜菊糖 苷(stevioside)；萊鮑迪苷(renaudiside) A、B、C、D、E ；杜爾可苷(dulcoside) A、B，這 8 種 成分是以相同的雙萜配基構(gòu)成的配糖體，屬于四環(huán)雙萜化合物，它們在C-4位的α-羧基 上連接一個葡萄糖，其次C-13位上連接有二糖或三糖。其中以在C-13上連接一個槐糖的 甜菊糖苷(Mevioside簡稱Mv)和C_13上槐糖分子上又連一個葡萄糖分子的萊包迪甙A (RebaudiosideA簡稱RebA )為主要?，F(xiàn)已確定的甜菊甜味成分有6種即甜菊苷；萊鮑迪 苷A、D、C、E ；杜爾可甙Α。它們均屬甙類化合物，具有相同甙元——甜菊醇(steviol)。它們 之間的區(qū)別在于甙鍵上結(jié)合糖的種類數(shù)量和構(gòu)成型式不同。甜葉菊糖不但對人體沒有任何 不良影響，相反，它還有降血壓、強(qiáng)壯身體、治糠尿病等藥用價值，它不但奪得了 “甜味世界” 的冠軍，還被稱作“時髦的甜味品”。其中瑞鮑迪甙A甜度最高口感最接近蔗糖，甜菊甙具有 甜菊甙產(chǎn)品特有的甜味和清涼感，其他成分不僅甜度較低，而且還帶有不同程度的苦澀味， 雖然含量不高，但對產(chǎn)品的品質(zhì)影響較大，特別是瑞鮑迪甙C苦澀味較重，嚴(yán)重影響了甜菊 糖甙產(chǎn)品的口感和品質(zhì)，成為生產(chǎn)廠家千方百計(jì)想要出去的成分。但是，正是這種具有苦澀 味的物質(zhì)蘊(yùn)含著很多不為人知的潛在功效，成為科研開發(fā)的一個新方向，因其具有抗腫瘤、 降血壓、降血脂、減肥等功效，在日本被制成藥品在臨床上進(jìn)行應(yīng)用。我國作為一個甜菊甙 產(chǎn)品的生產(chǎn)和出口大國，科研開發(fā)部門也在時刻關(guān)注瑞鮑迪苷C的發(fā)展動向，因其潛在的 經(jīng)濟(jì)價值，國內(nèi)外眾多生產(chǎn)廠家也把目光聚焦到該產(chǎn)品上來，成為甜菊糖甙產(chǎn)品深加工的 又一個新方向。
目前甜菊糖的生產(chǎn)廠家大多數(shù)都采用結(jié)晶的方法來獲得高純度的STV及RA， 經(jīng)美國學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，萊鮑迪苷C可以作為甜味增強(qiáng)劑進(jìn)行應(yīng)用并能顯著降低蔗糖的使 用量，作為替代糖源的萊鮑迪苷C越來越受到人們的關(guān)注。因此獲得高純度萊鮑迪苷C (Rebaudioside C)的制備工藝，是該領(lǐng)域科研人當(dāng)前急待解決的課題之一。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以甜菊糖為原料制備高純度萊鮑迪苷C分離工藝，從 而獲得了高純度萊鮑迪苷C產(chǎn)品。
為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用的實(shí)施方案如下 一種高純度萊鮑迪甙C的制備工藝，實(shí)施步驟如下以甜菊糖為原料，原料中RC的含量為3%-15%之間，采用重結(jié)晶及柱層析技術(shù)相結(jié)合， 制備高純度的萊鮑迪苷C產(chǎn)品；其步驟如下1)將甜菊糖用甲醇于40°C水浴中加熱溶解進(jìn)行重結(jié)晶，甲醇的體積用量為干燥物質(zhì)量 的8 12倍；2)將結(jié)晶后的母液進(jìn)行硅膠柱層析，柱層析條件如下拌樣硅膠用量為母液質(zhì)量的 2. 5倍量，空白硅膠用量為母液質(zhì)量的20-50倍量，洗脫劑為三氯甲烷或二氯甲烷與含水乙 醇的混合溶劑，以薄層板進(jìn)行監(jiān)測，薄層條件為展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定 相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液；3)根據(jù)薄層檢識結(jié)果，將萊鮑迪苷C主段合并，減壓濃縮，干燥，檢測，得到高純度萊鮑 迪苷 C (Rebaudioside C，RC)。
所述的甜菊糖中萊鮑迪苷C的含量為3%_15%。
所述的含水乙醇中其中乙醇含水量為2%_10%。
所述的混合溶劑選自三氯甲烷-擬％乙醇、三氯甲烷_擬％乙醇、三氯甲烷-95%乙 醇、二氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-98%乙醇、二氯甲烷-90%乙醇。
所述的混合溶劑的比例為氯仿或二氯甲烷含水乙醇=2:廣4 1。
本發(fā)明采用了一種重結(jié)晶與柱層析技術(shù)相結(jié)合的方法制備了萊鮑迪苷C，該方法 簡便易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，且能提高產(chǎn)物的純度。


圖1為工藝流程圖； 圖2 RC對照品；圖3實(shí)施例1附圖； 圖4實(shí)施例2附圖； 圖5實(shí)施例3附圖； 圖6實(shí)施例4附圖； 圖7實(shí)施例5附圖； 圖8實(shí)施例6附圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一取甜菊糖:3Kg(RC含量為3. 5%，RA含量為38%，ST含量為33. 58%)，加入30L甲醇溶解， 于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶M小時，過濾，將結(jié)晶母液減壓回 收溶劑得濃縮物1.52Kg，備用；取20Kg硅膠(200-300目)，加入三氯甲烷-擬％乙醇(4 :1)混合溶劑，充分排除氣 泡，裝入直徑273mm、高1.5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以三氯 甲烷_擬％乙醇(4 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng)檢測萊鮑迪苷C的純度為97.四％，包裝，得萊鮑迪苷Cl 13. 2g ； 實(shí)施例二取甜菊糖Ig ((RC含量為3. 5%，RA含量為38%，ST含量為33. 58%)，加入ML甲醇溶 解，于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶36小時，過濾，將結(jié)晶母液減壓 回收溶劑得濃縮物1. 56Kg，備用；取25Kg硅膠(200-300目)，加入三氯甲烷_擬％乙醇(4 1)混合溶劑，充分排除氣 泡，裝入直徑273mm、高1.5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以三氯 甲烷_擬％乙醇(4 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng) 檢測萊鮑迪苷C的純度為96. 76%，包裝，得萊鮑迪苷Cl 15. 4g ； 實(shí)施例三取甜菊糖Ig (RC含量為10. 80%, RA含量為37. 14%，ST含量為35. 53%)，加入36L甲 醇溶解，于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶48小時，過濾，將結(jié)晶母液 減壓回收溶劑得濃縮物1. 54Kg，備用；取30Kg硅膠(200-300目)，加入三氯甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶劑，充分排除氣 泡，裝入直徑273mm、高1. 5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以三氯 甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng) 檢測萊鮑迪苷C的純度為97. 52%，包裝，得萊鮑迪苷Cl 14. 5g ； 實(shí)施例四取甜菊糖Ig (RC含量為10. 80%, RA含量為37. 14%，ST含量為35. 53%)，加入30L甲 醇溶解，于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶36小時，過濾，將結(jié)晶母液 減壓回收溶劑得濃縮物1. 5^(g，備用；取50Kg硅膠(200-300目)，加入二氯甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶劑，充分排除氣 泡，裝入直徑273mm、高1.5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥對小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以二氯 甲烷-95%乙醇(3 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng) 檢測萊鮑迪苷C的純度為96. 31%，包裝，得萊鮑迪苷Cl 10. 5g ； 實(shí)施例五取甜菊糖Ig (RC含量為4. 97%，ST含量為38. 81%，RA含量為42. 04%)，加入30L甲醇 溶解，于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶36小時，過濾，將結(jié)晶母液減 壓回收溶劑得濃縮物1. 61Kg，備用；取25Kg硅膠(200-300目)，加入二氯甲烷-98%乙醇(2 :1)混合溶劑，充分排除氣泡，裝入直徑273mm、高1. 5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以二氯 甲烷-98%乙醇(2 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng) 檢測萊鮑迪苷C的純度為96. 51%，包裝，得萊鮑迪苷Cl 12. 5g ；實(shí)施例六取甜菊糖Ig (RC含量為4. 97%，ST含量為38. 81%，RA含量為42. 04%)，加入30L甲醇 溶解，于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié)晶36小時，過濾，將結(jié)晶母液減 壓回收溶劑得濃縮物1. 52Kg，備用；取25Kg硅膠(200-300目)，加入二氯甲烷-98%乙醇(2 :1)混合溶劑，充分排除氣 泡，裝入直徑273mm、高1. 5m的層析柱中；另取1. OKg濃縮物，加入適量乙醇溶解，拌入 2. 5Kg200-300目硅膠，于45°C烘箱干燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以二氯 甲烷-98%乙醇(2 :1)混合溶劑進(jìn)行洗脫，IOL/份收集洗脫液，采用薄層監(jiān)測，薄層條件為 展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液。 根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪苷C主段洗脫液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng) 檢測萊鮑迪苷C的純度為97. 34%，包裝，得萊鮑迪苷Cl 13. 7g。
權(quán)利要求
1.一種萊鮑迪苷C的制備方法，其特征在于，采用重結(jié)晶及柱層析技術(shù)相結(jié)合，其步驟 如下1)將甜菊糖原料用甲醇于40°c水浴中加熱溶解進(jìn)行重結(jié)晶，甲醇的體積用量為干燥物 質(zhì)量的8 12倍；2)將結(jié)晶后的母液進(jìn)行硅膠柱層析，柱層析條件如下拌樣硅膠用量為母液質(zhì)量的 2. 5倍量，空白硅膠用量為母液質(zhì)量的20-50倍量，洗脫劑為三氯甲烷或二氯甲烷與含水乙 醇的混合溶劑，以薄層板進(jìn)行監(jiān)測，薄層條件為展開劑為正丁醇-冰醋酸-乙醚-水，固定 相為GF2M硅膠，顯色劑為50%硫酸-水溶液；3)根據(jù)薄層檢識結(jié)果，將萊鮑迪苷C主段合并，減壓濃縮，干燥，檢測，得到高純度萊鮑 迪苷C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的甜菊糖中萊鮑迪苷C的含量為 3%-15%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的含水乙醇中其中乙醇含水量 為 2%-10%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的混合溶劑選自三氯甲烷_ 92%乙醇、三氯甲烷_擬％乙醇、三氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-95%乙醇、二氯甲烷-98%乙 醇、二氯甲烷-90%乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的混合溶劑的比例為氯仿或 二氯甲烷含水乙醇=2:1 4 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其步驟如下A:重結(jié)晶取甜菊糖，加入甲醇于40°C加熱溶解，降至室溫后，置于4°C水浴中攪拌結(jié) 晶M-48小時，過濾，將結(jié)晶母液減壓回收溶劑的濃縮物，備用；B 層析分離取200-300目硅膠，加入三氯甲烷或二氯甲烷與含水乙醇的混合溶劑，充 分排除氣泡，裝入層析柱中；取濃縮物，加入乙醇溶解，拌入200-300目硅膠，于45°C烘箱干 燥M小時；將拌好樣品的硅膠裝入層析柱中，以三氯甲烷或二氯甲烷與含水乙醇2 :Γ4:1 的混合溶劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，根據(jù)薄層檢測結(jié)果進(jìn)行合并，得萊鮑迪甙C主段洗脫 液，減壓回收溶劑得濃縮物，干燥，經(jīng)檢測萊鮑迪甙C的純度為95%以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度甜菊糖苷萊鮑迪苷RC的制備方法，屬于食品添加劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以甜菊糖為原料，原料中萊鮑迪苷RC含量約為3-15%之間，利用重結(jié)晶和柱層析技術(shù)相結(jié)合，以甲醇溶解甜菊糖原料進(jìn)行重結(jié)晶，于4℃攪拌結(jié)晶24-48小時，結(jié)晶母液減壓回收溶劑得濃縮物，將濃縮物進(jìn)行硅膠柱層析，條件為固定相為200-300目硅膠，拌樣硅膠為濃縮物質(zhì)量的2.5倍，空白硅膠為濃縮物質(zhì)量的20-50倍；二氯甲烷-乙醇(2:1)或二氯甲烷-乙醇(2:1)混合溶劑系統(tǒng)洗脫，其中乙醇中含水量為2%-10%。收集含萊鮑迪苷RC的主段洗脫液，合并，濃縮，干燥，檢測，包裝。使用本發(fā)明可以得到純度95%以上的萊鮑迪苷C產(chǎn)品，工藝簡單，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/08GK102030788SQ201110001000
公開日2011年4月27日 申請日期2011年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月5日
發(fā)明者張春婷, 朱兵兵, 李英娜, 王文, 王繼文, 雷茂林 申請人:沈陽天峰生物制藥有限公司