專利名稱：從蛇床子中制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從天然植物中制備活性成分的方法，具體地說，涉及一種從蛇床子中制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法。
背景技術(shù)：
蛇床子系傘形科植物蛇床Cnidium monnieri (L.) Cuss.的干燥成熟果實(shí)，夏秋二季果實(shí)成熟時(shí)采收。性辛、苦，溫，有小毒，歸腎經(jīng)?！吨袊幍洹?010年版一部記載具有燥濕祛風(fēng)、殺蟲止癢、溫腎壯陽之功效，中醫(yī)用于陰癢帶下、濕疹瘙癢、濕痹腰痛、腎虛陽痿、宮冷不孕。蛇床子主要含有蛇床子素(osthole)、香柑內(nèi)酯(bergapten)、異茴芹內(nèi)酯 (isopimpinellin)、花椒毒素(xanthotoxin)、歐前胡素(imperatorin)等具有生物活性的香豆素類化合物。現(xiàn)代藥理研究表明，蛇床子中香豆素類成分在抗心律失常、抗骨質(zhì)疏松、 抗艾滋病、抗真菌、抗腫瘤及抗誘變等方面均有作用。蛇床子素，即甲氧基歐芹素，分子式C15H16O3,分子量M4. 29,mp. 83-84°C，為白色針狀結(jié)晶。藥理研究表明蛇床子素具有抗高血壓、抗心律失常、抗衰老、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松癥等功效。異茴芹內(nèi)酯，又名異茴芹素、異茴芹靈、異虎耳草素，分子式C13HltlO5,分子量 M6.21，為無色針晶(乙酸乙酯)，mp.200-201°C。藥理研究表明，異茴芹內(nèi)酯體外試驗(yàn)對(duì)發(fā)癬菌的須發(fā)癬菌有強(qiáng)的活性，同時(shí)對(duì)體外培養(yǎng)的骨細(xì)胞代謝有積極作用。現(xiàn)有工藝主要有1、中國專利(申請(qǐng)?zhí)?01010531931. 6) “一種蛇床子素的制備方法”，采用80%醇
提、堿洗雜、二次堿沉、重結(jié)晶，得到蛇床子素，該方法使用大量堿液，對(duì)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了破壞。2、中國專利(申請(qǐng)?zhí)?01010527673. 4) “一種從中藥蛇床子中提取蛇床子素的方法”，通過滲漉、醇提水沉、結(jié)晶和重結(jié)晶等步驟，該方法提取率不高、產(chǎn)品純度低。3、中國專利(申請(qǐng)?zhí)?006100^997. 2) “中藥蛇床子有效成分歐前胡素和蛇床子素的提取方法”，采用超臨界流體萃取、乙醚超聲提取和重結(jié)晶的方法得到歐前胡素和蛇床子素，該方法使用大量乙醚溶液，不適宜工業(yè)生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從蛇床子中制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法， 以同時(shí)得到高純度的蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下1)將蛇床子藥材粉碎，置于萃取釜中，進(jìn)行超臨界(X)2萃取，解析，收集蛇床子提取物；幻將蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 1-3充分混勻，裝入層析柱，然后用20-95%乙醇洗脫，流速為0. 5-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；3)用水和乙腈按體積比1 1-1 3混合，配制混合液A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2-2 1，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置 10-12小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為800-950rpm，以l-;3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分，濃縮、低溫干燥即得蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯。所述超臨界萃取溫度為43_50°C，萃取壓力為22_33MPa，解析溫度為20-40°C，解析壓力為8-10MPa，CO2流量為20_30L/h。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于(1)采用超臨界提取技術(shù)，高效無溶劑殘留，對(duì)環(huán)境無污染；(2)通過聚酰胺樹脂對(duì)香豆素類化合物的吸附和洗脫，操作簡(jiǎn)單、分離效果好；(3)本發(fā)明采用高速逆流色譜制備工藝，較制備液相色譜制備工藝而言，克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失和峰形拖尾等缺點(diǎn)，且HSCCC法具有制備量大、易于工業(yè)推廣等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明加以說明實(shí)施例1 將蛇床子藥材粉碎，取Ikg置于萃取釜中，通入超臨界CO2流體，CO2流量為21L/h， 超臨界萃取溫度為45°C，萃取壓力為30MPa，解析溫度為34°C，解析壓力為lOMPa，進(jìn)行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 1充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、50%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0. 8BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 1混合，配制混合液A， 用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為900rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫干燥得到蛇床子素，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為98.2% ；將異茴芹內(nèi)酯流分濃縮、低溫干燥得到異茴芹內(nèi)酯，經(jīng) HPLC檢測(cè)，純度為98. 1%0實(shí)施例2 將蛇床子藥材粉碎，取3kg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為ML/h， 超臨界萃取溫度為43°C，萃取壓力為^MPa,解析溫度為^°C，解析壓力為8MPa，進(jìn)行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 2充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脫，流速為0. 5BV/h，收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 3混合，配制混合液A， 用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置12小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為800rpm，以lml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫干燥得到蛇床子素，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為98. 0% ；將異茴芹內(nèi)酯流分濃縮、低溫干燥得到異茴芹內(nèi)酯，經(jīng) HPLC檢測(cè)，純度為97.6%。實(shí)施例3 將蛇床子藥材粉碎，取5kg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為^L/h， 超臨界萃取溫度為50°C，萃取壓力為22. 5MPa，解析溫度為38°C，解析壓力為9MPa，進(jìn)行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 3充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、40 %乙醇溶液和95 %乙醇溶液洗脫，流速為1. OBV/h, 收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 2混合，配制混合液 A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 1，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置11小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為850rpm，以2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫干燥得到蛇床子素，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為98.6% ；將異茴芹內(nèi)酯流分濃縮、低溫干燥得到異茴芹內(nèi)酯， 經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為98.4%。實(shí)施例4 ；將蛇床子藥材粉碎，取IOkg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體，CO2流量為30L/ h，超臨界萃取溫度為47°C，萃取壓力為32MPa，解析溫度為20°C，解析壓力為8MPa，進(jìn)行超臨界CO2萃取，解析，收集蛇床子提取物。蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 3充分混勻，裝入層析柱，依次用去離子水、20 %乙醇溶液和85 %乙醇溶液洗脫，流速為2. OBV/h, 收集高濃度乙醇洗脫液，減壓濃縮，得粗品。用水和乙腈按體積比1 3混合，配制混合液 A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比2 1，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為950rpm，以3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣，分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分。將蛇床子素流分濃縮、低溫干燥得到蛇床子素，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為97. 3% ；將異茴芹內(nèi)酯流分濃縮、低溫干燥得到異茴芹內(nèi)酯， 經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度為96.7%。
權(quán)利要求
1.從蛇床子中制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法，其特征在于1)將蛇床子藥材粉碎，置于萃取釜中，進(jìn)行超臨界(X)2萃取，解析，收集蛇床子提取物；2)將蛇床子提取物與聚酰胺樹脂按重量比1 1-3充分混勻，裝入層析柱，然后用 20-95%乙醇洗脫，流速為0. 5-2BV/h，收集洗脫液，濃縮，得粗品；3)用水和乙腈按體積比1 1-1 3混合，配制混合液A，用乙酸乙酯和正己烷按體積比1 2-2 1，配制混合液B，將混合液A和混合液B均勻混合，充分飽和后，靜置10-12小時(shí)，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將粗品用流動(dòng)相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為800-950rpm，以l-3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入，待機(jī)子穩(wěn)定后進(jìn)樣， 分別收集蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯流分，濃縮、低溫干燥即得蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法，其特征在于所述超臨界萃取溫度為43-50°C，萃取壓力為22-33MPa，解析溫度為20-40°C，解析壓力為 8-IOMPa, CO2 流量為 20_30L/h。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從蛇床子中制備蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯的工藝方法。方法是蛇床子粉末先經(jīng)超臨界CO2萃取，得到蛇床子提取物，然后經(jīng)聚酰胺樹脂分離純化，得粗品，最后經(jīng)高速逆流色譜進(jìn)一步提純，得蛇床子素和異茴芹內(nèi)酯純品。本發(fā)明首先在國內(nèi)建立了異茴芹內(nèi)酯的提純工藝，得到高純度的異茴芹內(nèi)酯，而且本發(fā)明采用高速逆流色譜法制備工藝，較制備液相色譜法，克服了樣品吸附、損失等缺點(diǎn)，且高速逆流色譜具有制備量大、易于工業(yè)化等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07D493/04GK102267968SQ20111015174
公開日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2011年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月7日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司