專(zhuān)利名稱：同時(shí)制備niga-ichigoside F1和suavissimoside R1化學(xué)對(duì)照品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種應(yīng)用樹(shù)脂柱分離和高速逆流色譜技術(shù)同時(shí)制備niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品的方法。
背景技術(shù)：
茅莓(JMms parvifolius L.)是薔薇科懸鉤子屬植物茅莓的干燥全草，是民間常用草藥，具有清熱解毒、散瘀止血、祛風(fēng)利濕、活血涼血、殺蟲(chóng)療瘡等功效，用于婦科止血，療效顯著。現(xiàn)代研究表明，茅莓提取物對(duì)腦缺血有保護(hù)作用，具有止血和活血化瘀的作用，并且與丹參的藥理作用相同。茅莓主要含有活性成分為皂苷類(lèi)，其主要為三萜皂苷類(lèi)化合物。制備 niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品對(duì)于茅莓藥材的開(kāi)發(fā)利用具有重要
眉、ο目前，尚未見(jiàn)分離制備niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種工藝簡(jiǎn)單、易于規(guī)?；闹苽浞椒?，可以以茅莓提取物為原料，同時(shí)制備 niga-ichigoside Fl 和 suavissimoside Rl 兩種化學(xué)對(duì)照品。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
同時(shí)制備niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品的方法，其特征在于包括以下步驟
1)樹(shù)脂柱粗分離茅莓藥材用水或乙醇水溶液提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物為原料，用低濃度乙醇溶液溶解，上大孔樹(shù)脂柱分離，先用水洗去雜質(zhì)，再用50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；
2)高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，體積比為 4-7:5-8:2-5，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，進(jìn)行高速逆流色譜分離得到niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品。所述的大孔樹(shù)脂可選HPD-100或AB-8型。所述高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為700-1000r/min，流動(dòng)相的流速為1. 5_;3ml/min。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
1)本發(fā)明采用兩步法制備對(duì)照品，工藝簡(jiǎn)單。采用樹(shù)脂柱粗分離，相較文獻(xiàn)中應(yīng)用較多的萃取方法，對(duì)目標(biāo)成分更有針對(duì)性，可實(shí)現(xiàn)最大程度的去粗存精，有利于下步精制純化。2)本發(fā)明采用的技術(shù)手段非常適合放大進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。3)本發(fā)明同時(shí)制備得到兩種對(duì)照品，純度高(大于98%)，收率高(大于80%)，色澤好(白色)。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，實(shí)施例僅限于說(shuō)明本發(fā)明，而非對(duì)本發(fā)明的限定。實(shí)施例1
1、樹(shù)脂柱粗分離以茅莓提取物為原料，取log，用15%乙醇溶液溶解，過(guò)濾，濾液上 HPD-100型大孔樹(shù)脂柱分離，先用5BV的水洗去雜質(zhì)，再用4-7BV50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品408mg ；
2、高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(體積比為4:5:2)，置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時(shí)間后，取上相作為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動(dòng)主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)速控制在lOOOr/min，同時(shí)將流動(dòng)相以3ml/min流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出、兩相達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進(jìn)樣200mg， 紫外檢測(cè)，收集流出液，減壓蒸干得到niga-ichigoside Fl對(duì)照品32mg和suavissimoside Rl對(duì)照品35mg。實(shí)施例2
1、樹(shù)脂柱粗分離以茅莓提取物為原料，取50g，用15%乙醇溶液溶解，過(guò)濾，濾液上 AB-8型大孔樹(shù)脂柱分離，先用4BV的水洗去雜質(zhì)，再用5BV50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品2. 2g；
2、高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(體積比為7: 8:2)，置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時(shí)間后，取上相作為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動(dòng)主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)速控制在750r/min，同時(shí)將流動(dòng)相以1. 5ml/min流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出、兩相達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進(jìn)樣200mg，紫外檢測(cè)，收集流出液，減壓蒸干得到niga-ichigoside Fl對(duì)照品130mg和 suavissimoside Rl 對(duì)照品 155mg。實(shí)施例3
1、樹(shù)脂柱粗分離以茅莓提取物為原料，取50g，用15%乙醇溶液溶解，過(guò)濾，濾液上 HPD-100型大孔樹(shù)脂柱分離，先用5BV的水洗去雜質(zhì)，再用4BV50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品2. 3g ；
2、高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(體積比為7:5: 5)，置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時(shí)間后，取上相作為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動(dòng)主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)速控制在700r/min，同時(shí)將流動(dòng)相以2ml/min流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出、兩相達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進(jìn)樣200mg，紫外檢測(cè)，收集流出液，減壓蒸干得到niga-ichigoside Fl對(duì)照品145mg和suavissimoside Rl對(duì)照品162mgo實(shí)施例41、樹(shù)脂柱粗分離以茅莓提取物為原料，取100g，用15%乙醇溶液溶解，過(guò)濾，濾液上 AB-8型大孔樹(shù)脂柱分離，先用3BV的水洗去雜質(zhì)，再用5BV50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品4. Ig;
2、高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(體積比為7:6:3)，置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時(shí)間后，取上相作為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動(dòng)主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)速控制在900r/min，同時(shí)將流動(dòng)相以3ml/min流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出、兩相達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進(jìn)樣200mg，紫外檢測(cè)，收集流出液，減壓蒸干得到niga-ichigoside Fl對(duì)照品315mg和suavissimoside Rl對(duì)照品348mg。 實(shí)施例5
1、樹(shù)脂柱粗分離以茅莓提取物為原料，取100g，用15%乙醇溶液溶解，過(guò)濾，濾液上 AB-8型大孔樹(shù)脂柱分離，先用5BV的水洗去雜質(zhì)，再用7BV50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品3. 9g；
2、高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，室溫下將系統(tǒng)二氯甲烷-甲醇-水(體積比為6:5:2)，置于分液漏斗中振搖，放置，平衡一段時(shí)間后，取上相作為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動(dòng)主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)，轉(zhuǎn)速控制在950r/min，同時(shí)將流動(dòng)相以2. 5ml/min流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出、兩相達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)中，每次進(jìn)樣200mg，紫外檢測(cè)，收集流出液，減壓蒸干得到niga-ichigoside Fl對(duì)照品342mg和 suavissimoside Rl 對(duì)照品 357mg。
權(quán)利要求
1.同時(shí)制備niga-ichigosideFl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品的方法，其特征在于包括以下步驟1)樹(shù)脂柱粗分離茅莓藥材用水或乙醇水溶液提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物為原料，用低濃度乙醇溶液溶解，上大孔樹(shù)脂柱分離，先用水洗去雜質(zhì)，再用50%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮干燥得到粗品；2)高速逆流色譜精制以二氯甲烷-甲醇-水體系為兩相溶劑系統(tǒng)，體積比為 4-7:5-8:2-5，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，用上相和下相的混合溶液溶解粗品，進(jìn)行高速逆流色譜分離得到niga-ichigoside Fl和suavissimoside Rl化學(xué)對(duì)照品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1)中所述的大孔樹(shù)脂可選HPD-100或 AB-8 型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2)中所述高速逆流色譜儀轉(zhuǎn)速為 700-1000r/min，流動(dòng)相的流速為 1. 5_3ml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種同時(shí)制備niga-ichigosideF1和suavissimosideR1化學(xué)對(duì)照品的方法。茅莓藥材經(jīng)提取得到粗提物，或直接以茅莓提取物為原料，經(jīng)樹(shù)脂柱分離及高速逆流色譜兩步高效純化，即可獲得純度大于98%的niga-ichigosideF1和suavissimosideR1化學(xué)對(duì)照品。本發(fā)明工藝步驟簡(jiǎn)單、純度高，并且易于規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J63/00GK102311480SQ20111018730
公開(kāi)日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司