專利名稱：新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血小板生成素?cái)M肽的生產(chǎn)方法，特別涉及一種在大腸桿菌中表達(dá)的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法。
背景技術(shù)：
慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)是一種自身性免疫性疾病，由致血小板減少的一種自身免疫反應(yīng)引起，其特征是血小板數(shù)降低，其患者面臨出血高風(fēng)險(xiǎn)，往往導(dǎo)致患者小血管出血，癥狀為淤青、鼻出血和牙齦出血，嚴(yán)重者可出現(xiàn)致命性胃腸道和腦內(nèi)出血。目前治療ITP的主要手段是使用免疫抑制類藥物，如皮質(zhì)類固醇、靜注免疫球蛋白、抗D免疫球蛋白和Genentech公司產(chǎn)品利妥昔單抗，而對嚴(yán)重衰竭性病人的最后辦法則是行脾切除術(shù)。 其中大多數(shù)治療藥物未曾經(jīng)歷隨機(jī)安慰劑對照臨床試驗(yàn)的考察，雖對不同患者群均有效， 但同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，其作用機(jī)制是阻止血小板破壞，而非促進(jìn)血小板產(chǎn)生。血小板生成素(TPO)為一種糖蛋白，主要產(chǎn)生于肝臟，在巨核細(xì)胞及血小板的產(chǎn)生中起著重要的調(diào)節(jié)作用。其與c-Mpl結(jié)合后可激活下游信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而導(dǎo)致巨核細(xì)胞的分化和增值，且伴隨著血小板水平升高。第1代促血小板生成劑-糖基化全長重組人血小板生成素(rhTPO)和聚乙二醇化重組人巨核細(xì)胞生長及發(fā)育因子(PEG-rHuMGDF)隨之問世。其可促進(jìn)健康受試者體內(nèi)巨核細(xì)胞生成，并提高血小板數(shù)量，且在用于治療癌癥患者、 免疫性血小板生成素減少性紫癜患者及接受非清髓性化療的癌癥患者的研究中均獲得了成功。然而，第1代促血小板生成劑可能會(huì)導(dǎo)致受試者體內(nèi)產(chǎn)生抗TPO抗體，因而具有誘發(fā)血小板減少癥的風(fēng)險(xiǎn)，糖基化全長重組人血小板生成素(rhTPO)和聚乙二醇化重組人巨核細(xì)胞生長及發(fā)育因子(PEG-rHuMGDF)的開發(fā)被迫停止。此后研究人員在多肽文庫中尋找隨機(jī)、無相關(guān)性的多肽，企圖在不產(chǎn)生抗TPO抗體的情況下刺激依賴于TPO的細(xì)胞株，嘗試將篩選得到的多肽連接于各種載體分子，以增加其半衰期。由此開發(fā)出以重組血小板擬肽為代表的第2代促血小板生成劑。此產(chǎn)品在健康受試者及ITP患者中的試驗(yàn)均獲得了成功， 且試驗(yàn)中亦未見受試者體內(nèi)產(chǎn)生抗TPO抗體。血小板生成素?cái)M肽為一種新型重組蛋白，可特異性結(jié)合并激活血小板生成素 (TPO)受體c-Mpl，從而顯著提高血小板水平。血小板生成素?cái)M肽含有兩個(gè)相同的亞單位， 每個(gè)亞單位分別由一個(gè)IgGl Fc結(jié)構(gòu)區(qū)和c-Mpl結(jié)合區(qū)共價(jià)結(jié)合構(gòu)成，且與TPO無氨基酸序列同源性，故不會(huì)在用藥者體內(nèi)產(chǎn)生抗TPO抗體。其主要用于治療脾切除及非脾切除的成人免疫性血小板減少癥。但是，目前尚無適合大規(guī)模生產(chǎn)血小板生成素?cái)M肽的生產(chǎn)工藝。

發(fā)明內(nèi)容
為了血小板生成素?cái)M肽大規(guī)模生產(chǎn)，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，包括下列步驟
(1)超聲破菌每克菌體加入IOml預(yù)冷TE緩沖液，所述緩沖液為50mMTris-Hcl和/ 或5mM EDTA，所述緩沖液的pH值為8. 5，混勻后加入溶菌酶至菌體的濃度為1%，充分混勻， 溫度保持在2、°C，作用1小時(shí)以上；超聲破菌2min/次，共6次；然后在2、°C溫度下以 8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀；
(2)TE緩沖液洗滌將步驟(1)收集的沉淀物按1:10 (重量/體積)加入含0. 5% tritron-100 TE緩沖液洗滌，收集沉淀；再重復(fù)此步驟，收集沉淀；所述緩沖液為50mM Tris-Hcl和/或5mM EDTA,所述緩沖液的pH值為8. 5 ；
(3)室溫裂解將步驟(2)收集的沉淀物按1 10 (重量/體積)加入包涵體裂解液中， 攪勻，室溫裂解1小時(shí)；所述包涵體裂解液為6M鹽酸胍、50mM Tris-Hcl和8mM DTT中的一種或多種，所述包涵體裂解液的PH值為9. 0 ；
(4)復(fù)性將步驟(3)裂解后的混合溶液滴加至復(fù)性液中，稀釋后的蛋白濃度為Hmg/ ml，在2 8°C的溫度下攪拌48小時(shí)，再用pH9. 0的IOmM Tris-Hcl和1. 5M尿素稀釋廣5倍；
(5)調(diào)節(jié)PH和離心用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，離心去除沉淀物，收集溶液；
(6)將溶液依次進(jìn)行Protein-Α Mabselect SuRe 層析、SP Sepharose H. P 層析和 Sephacryl S-200分子篩層析。其中，上述步驟(6)中的所述Protein-Α Mabselect SuRe層析如下進(jìn)行先用pH 值為 8.5 的含 2M 脲的 50mM 的 Tris-Hcl，平衡 Protein-Α Mabselect SuRe 柱子；Γ5 個(gè)柱體積，上樣，再用PH值為8. 5的含2M脲的50mM iTris-Hcl,充分平衡Protein-A Mabselect SuRe柱子2 3個(gè)柱體積，然后用pH值為7. 2的含20mM PBS的緩沖液平衡Protein-A Mabselect SuRe柱子2 3個(gè)柱體積，最后用pH3. O的含50mM醋酸-醋酸鈉的緩沖液洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。上述步驟(6)中的所述SP Sepharose H. P層析如下進(jìn)行用pH值為5. O的含 IOOmM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，充分平衡SP Sepharose H. P柱子，上樣，再用 PH值為5. O的含IOOmM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡柱子，然后用pH值為5. O 的含210mM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫雜質(zhì)，最后用pH值為5. O的含300mM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。上述步驟(6)中的所述kphacryl S-200分子篩層析如下進(jìn)行用pH值為5. O的 20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡kphacryl S-200分子篩柱子3_5個(gè)柱體積，上樣，上樣量為柱床體積的廣5%，用PH值為5. O的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液平衡，收集目的蛋白峰。上述kphacryl S-200分子篩層析中，所述上樣量優(yōu)選為柱床體積的3%。上述步驟(2)為將步驟(1)收集的沉淀物按1:10 (重量/體積)加入含0.5% tritron-100 TE緩沖液洗滌，在2、°C溫度下以8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀；再重復(fù)此步驟，收集沉淀；所述緩沖液為50mM Tris-Hcl和/或5mM EDTA，所述緩沖液的PH值為8. 5。上述步驟(4)中，所述稀釋后的蛋白濃度為1.5mg/ml，和/或用pH9.0的IOmM Tris-Hcl和1. 5M尿素稀釋3倍。上述步驟(4)中，所述復(fù)性液包括廣3M尿素、50mM Tris-Hcl, TlOmM還原性谷胱甘肽和ImM氧化性谷胱甘肽中的一種或多種，所述復(fù)性液的pH值為8. (Γ9. 0。上述步驟(4)中，所述復(fù)性液包括2M尿素、50mM Tris-Hcl,2mM還原性谷胱甘肽和ImM氧化性谷胱甘肽的一種或多種，復(fù)性液的pH值優(yōu)選為8. 5。
本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是復(fù)性工藝采用稀釋的復(fù)性方法，其復(fù)性率在30%-40%之間；同時(shí)建立了一種新型血小板生成素?cái)M肽分離純化方法，整個(gè)層析過程采用 Protein-Α Mabselect SuRe 層析、SP Sepharose H. P 層析和 kphacryl S-200 分子篩層析，三種不同分離機(jī)制的層析組合，具有很好的純化效果，可以去除絕大部分的雜蛋白、熱源、核酸片段和二聚體等雜質(zhì)，純化出的原液收率在2(Γ30%之間，相當(dāng)于每升發(fā)酵液可獲得血小板生成素?cái)M肽純品為300mg左右，比活在1. 0X106IU/mg以上，各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥典中的相關(guān)規(guī)定，且易于產(chǎn)業(yè)化放大，此外，整個(gè)工藝組合合理，不需要其他處理過程， 操作簡單，工藝穩(wěn)定。


圖1血小板生成素?cái)M肽原液高效液相純度檢測分析圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，將含有血小板生成素?cái)M肽基因的大腸桿菌工程菌高密度發(fā)酵后，取出后對菌體進(jìn)行洗滌融化，加入預(yù)冷的TE 緩沖液，攪勻，在4°C的溫度下以4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，棄上清留沉淀，除出發(fā)酵培養(yǎng)基中殘留的培養(yǎng)基成分；然后進(jìn)行以下步驟
(1)超聲破菌每克菌體加入IOml預(yù)冷TE緩沖液，緩沖液為50mM Tris-Hcl和5mM EDTA，緩沖液的pH值為8. 5，混勻后加入溶菌酶至菌體的濃度為1%，充分混勻，溫度保持在 2^80C，作用1小時(shí)以上；超聲破菌2min/次，共6次；然后在2、°C溫度下以8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀。通過溶菌酶和超聲破碎儀，提取血小板生成素?cái)M肽包涵體。(2) TE緩沖液洗滌將步驟(1)收集的沉淀物按1 10 (重量/體積)加入含0. 5% tritron-100 TE緩沖液洗滌，在2 8°C溫度下以8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀；再重復(fù)此步驟，收集沉淀；其中，緩沖液為50mM Tris-Hcl和5mM EDTA,緩沖液的pH值為8. 5 ;TE緩沖液洗滌可以除去蛋白酶，防止在后續(xù)的純化中蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定，還可以去除核酸和脂類物質(zhì)以及可溶性的細(xì)胞蛋白和其他組分。 (3)室溫裂解將步驟(2)收集的沉淀物按1 10 (重量/體積)加入包涵體裂解液中，攪勻，室溫裂解1小時(shí)；其中，包涵體裂解液為6M鹽酸胍、50mM Tris-Hcl和8mM DTT，包涵體裂解液的PH值為9. 0 ；通過包涵體裂解液將錯(cuò)配的無活性的包涵體溶解，為重新復(fù)性做準(zhǔn)備。 (4)復(fù)性將步驟(3)裂解后的混合溶液滴加至復(fù)性液中，稀釋后的蛋白濃度為 1. 5mg/ml，在2 8°C的溫度下攪拌48小時(shí)，再用ρΗ9· 0的IOmM Tris-Hcl和1. 5Μ尿素稀釋 3倍；其中，復(fù)性液包括2Μ尿素、50mM Tris-Hcl,2mM還原性谷胱甘肽和ImM氧化性谷胱甘肽，復(fù)性液的PH值為8. 5 ；將溶解的無活性的血小板生成素?cái)M肽包涵體重新復(fù)性成有活性的血小板生成素?cái)M肽。(5)調(diào)節(jié)pH和離心用醋酸調(diào)節(jié)pH至5. 0，離心去除沉淀物，收集溶液；血小板生成素?cái)M肽在pH=5.0時(shí)穩(wěn)定，其他雜蛋白不穩(wěn)定而產(chǎn)生沉淀，通過離心，去除沉淀的雜蛋白， 達(dá)到純化的目的。(6)將溶液依次進(jìn)行 Protein-Α Mabselect SuRe 層析、SP Sepharose H. P 層析和kphacryl S-200分子篩層析。
步驟(6)中的Protein-Α Mabselect SuRe層析如下進(jìn)行先用pH值為8. 5的含2M脲的50mM的Tris-Hcl，平衡Protein-Α Mabselect SuRe柱子3 5個(gè)柱體積，上樣，再用pH值為8. 5的含2M脲的50mM Tris-Hcl，充分平衡Protein-A Mabselect SuRe柱子2 3個(gè)柱體積，然后用PH值為7. 2的含20mM PBS的緩沖液平衡Protein-Α Mabselect SuRe柱子2 3 個(gè)柱體積，最后用PH3. O的含50mM醋酸-醋酸鈉的緩沖液洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。步驟(6)中的SP Sepharose H. P層析如下進(jìn)行用pH值為5. O的含IOOmM NaCl 的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，充分平衡SP Sepharose H. P柱子，上樣，再用pH值為5. O 的含IOOmM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡柱子，然后用pH值為5. O的含210mM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫雜質(zhì)，最后用pH值為5. O的含300mM NaCl的20mM 醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。步驟(6)中的kphacryl S-200分子篩層析如下進(jìn)行用pH值為5. O的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡kphacryl S-200分子篩柱子3_5個(gè)柱體積，上樣，上樣量為柱床體積的3%，用pH值為5. O的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液平衡，收集目的蛋白峰。
根據(jù)中國藥典有關(guān)規(guī)定對三批血小板生成素?cái)M肽原液進(jìn)行了相關(guān)檢測，具體項(xiàng)目如
下
①生物學(xué)活性測定用Mo7e細(xì)胞增值法/MTT法，用重組人血小板生成素?cái)M肽參考品校準(zhǔn)。②蛋白含量采用Lowry法，使用國家藥品食品檢定院提供的人血白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)
P
ΡΠ O③比活性測定將原液的蛋白濃度及活性單位數(shù)代入下列計(jì)算待測樣品的比活性比活性(IU/mg)=活性單位數(shù)(IU/ml) /蛋白質(zhì)含量(mg/ml)。④電泳純度采用非還原型SDS-PAGE電泳法，加樣量不低于10μ g(考馬斯亮藍(lán)染色法)經(jīng)掃描儀掃描，純度應(yīng)不小于95%。 高效液相色譜純度采用HPLC-C8反相柱(Waters(USA))，10% 80%含0. 1%TFA
乙腈梯度，流速為lml/min，檢測為^Onm。所得原液的純度應(yīng)不小于95%，檢測結(jié)果如圖1 所示。
⑥分子量測定采用還原型SDS-PAGE電泳法，加樣量應(yīng)不低于1. 0 μ g，分子量應(yīng)為 59KD士5. 9KD。⑦細(xì)菌內(nèi)毒素檢查采用凝膠限度試驗(yàn)測定，每500 μ g應(yīng)小于10EU。 外源性DNA殘留量采用地高辛標(biāo)記核酸法測定，應(yīng)不高于10rig/500 μ g。⑨菌體蛋白質(zhì)殘留量采用ELISA酶標(biāo)法，宿主菌蛋白殘留量不得超過總蛋白的 0. 05%。⑩紫外光譜掃描用水將供試品稀釋至約10(Γ500 μ g/ml，在光路1cm、波長 23(T360nm下進(jìn)行掃描，最大吸收峰波長應(yīng)為278nm士3nm。 肽圖測定采用胰蛋白酶裂解-反相高效液相色譜法，應(yīng)與血小板生成素?cái)M肽對照品一致。 N-末端氨基酸序列用氨基酸序列分析儀測定，應(yīng)為M DKTHTCPPCP A P E L0三批血小板生成素?cái)M肽成品檢測結(jié)果如表1所示，由表1的各項(xiàng)檢測結(jié)果可知，各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥典中的相關(guān)規(guī)定。此外，純化出的原液收率在20 30%之間，相當(dāng)于每升發(fā)酵液可獲得血小板生成素?cái)M肽純品為300mg左右，血小板生成素?cái)M肽最高規(guī)格為0. 5mg, 每升發(fā)酵液可得成品600支左右，完全可以滿足生產(chǎn)的需要，為血小板生成素?cái)M肽大規(guī)模生產(chǎn)提供可能。表1血小板生成素?cái)M肽成品檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，包括下列步驟(1)超聲破菌每克菌體加入IOml預(yù)冷TE緩沖液，所述緩沖液為50mMTris-Hcl和/ 或5mM EDTA，所述緩沖液的pH值為8. 5，混勻后加入溶菌酶至菌體的濃度為1%，充分混勻， 溫度保持在2、°C，作用1小時(shí)以上；超聲破菌2min/次，共6次；然后在2、°C溫度下以 8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀；(2)TE緩沖液洗滌將步驟(1)收集的沉淀物按1:10(重量/體積)加入含0.5% tritron-100 TE緩沖液洗滌，收集沉淀；再重復(fù)此步驟，收集沉淀；所述緩沖液為50mM Tris-Hcl和/或5mM EDTA,所述緩沖液的pH值為8. 5 ；(3)室溫裂解將步驟(2)收集的沉淀物按1:10(重量/體積)加入包涵體裂解液中， 攪勻，室溫裂解1小時(shí)；所述包涵體裂解液為6M鹽酸胍、50mM Tris-Hcl和8mM DTT中的一種或多種，所述包涵體裂解液的PH值為9. 0 ；(4)復(fù)性將步驟(3)裂解后的混合溶液滴加至復(fù)性液中，稀釋后的蛋白濃度為Hmg/ ml，在2 8°C的溫度下攪拌48小時(shí)，再用pH9. 0的IOmM Tris-Hcl和1. 5M尿素稀釋廣5倍；(5)調(diào)節(jié)PH和離心用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，離心去除沉淀物，收集溶液；(6)將溶液依次進(jìn)行Protein-Α Mabselect SuRe 層析、SP Sepharose H. P 層析和 Sephacryl S-200分子篩層析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(6)中的所述ftx)tein-A Mabselect SuRe層析如下進(jìn)行先用pH值為8. 5的含2M脲的50mM的Tris-Hcl，平衡Protein-A Mabselect SuRe柱子3 5個(gè)柱體積，上樣，再用pH值為8. 5的含2M脲的50mM Tris-Hcl，充分平衡Protein-A Mabselect SuRe柱子2 3個(gè)柱體積，然后用PH值為7. 2的含20mM PBS的緩沖液平衡Protein-Α Mabselect SuRe柱子2 3 個(gè)柱體積，最后用pH3.0的含50mM醋酸-醋酸鈉的緩沖液洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(6)中的所述SP Sepharose H. P層析如下進(jìn)行用pH值為5. O的含IOOmM NaCl的 20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，充分平衡SP Sepharose H. P柱子，上樣，再用pH值為5. O的含 IOOmM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡柱子，然后用pH值為5. O的含210mM NaCl 的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫雜質(zhì)，最后用pH值為5. O的含300mM NaCl的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，洗脫目的蛋白，收集洗脫峰。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(6)中的所S-200分子篩層析如下進(jìn)行用pH值為5.0的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液，平衡kphacryl S-200分子篩柱子3_5個(gè)柱體積，上樣，上樣量為柱床體積的 Γ5%,用pH值為5. O的20mM醋酸-醋酸鈉緩沖液平衡，收集目的蛋白峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，在所述kphacryl S-200分子篩層析中，所述上樣量為柱床體積的3%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(2)為將步驟(1)收集的沉淀物按1:10 (重量/體積)加入含0.5% tritron-100 TE 緩沖液洗滌，在f 8°C溫度下以8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，收集沉淀；再重復(fù)此步驟，收集沉淀；所述緩沖液為50mM Tris-Hcl和/或5mM EDTA，所述緩沖液的pH值為8. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1一6任一項(xiàng)所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述稀釋后的蛋白濃度為1.5mg/ml，和/或用pH9.0的IOmM Tris-Hcl和1. 5M尿素稀釋3倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1一6任一項(xiàng)所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述步驟(4)中，所述復(fù)性液包括廣3M尿素、50mM Tris-Hcl, TlOmM還原性谷胱甘肽和ImM氧化性谷胱甘肽中的一種或多種，所述復(fù)性液的pH值為8. (Γ9. 0。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，其特征在于，所述復(fù)性液包括2M尿素、50mM Tris-Hcl,2mM還原性谷胱甘肽和ImM氧化性谷胱甘肽，所述復(fù)性液的PH值為8.5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型血小板生成素?cái)M肽復(fù)性和純化方法，將含有血小板生成素?cái)M肽基因的大腸桿菌工程菌高密度發(fā)酵后，將菌體超聲破碎，尿素裂解，復(fù)性，調(diào)pH值，經(jīng)Protein-AMabselectSuRe層析、SPSepharoseH.P層析和SephacrylS-200分子篩層析進(jìn)行組合純化，生產(chǎn)出符合中國藥典規(guī)定的血小板生成素?cái)M肽蛋白。本發(fā)明的有益效果是復(fù)性率高，純化工藝組合合理，操作程序簡化，收率高，生產(chǎn)成本低，為血小板生成素?cái)M肽大規(guī)模生產(chǎn)提供可能。
文檔編號(hào)C07K1/16GK102321168SQ20111023528
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月17日
發(fā)明者劉寧, 劉紅軍, 宋磊, 陳文芳 申請人:山東泉港藥業(yè)有限公司