專利名稱：一種從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法。
背景技術(shù)：
車前子(Semenplantaginis)是我國(guó)傳統(tǒng)藥材之一，又名當(dāng)?shù)?、牛遺、蛤蟆衣，此夕卜，還有稱車前菜、牛舌草、車輪菜、豬耳草等，始見于《詩(shī)經(jīng)》，藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，并被列為藥中上品。車前子為車前科植物平車前(Plantago depressa Willd.)，又稱小粒車前或車前 (Plantago asiatica Lirm.)，又稱大粒車前的干燥種子，在全國(guó)各地均有分布，資源廣泛。 具有利水通淋、滲濕止瀉、清肝明目、清熱化痰的作用。車前子中含大量粘液質(zhì)(多糖類化合物)(參見 Tomoda Masashi, Yokoi Maemi, Ishikawa Kazuyo. Plant Mucilages. XXIX. [J], asiatica. J. Chen Pharm Bull, 1981，29 (10) :2884_2887.以及ohn F Kennedy, Jasbir S Sandhu, David A T. Southgate. [J]. Carbohydrate Research, 1979, 75 265-274.)及車前子酸、膽堿、腺嘌呤、琥珀酸、蛋白質(zhì)、微量元素等。含有黃酮類化合物主要有木犀草素、 高車前苷、車前苷等。三萜類化合物主要有熊果酸、齊墩果酸等。揮發(fā)油主要有2，6_ 二叔丁基對(duì)甲酚和3-叔丁基-4-羥基茴香醚等；環(huán)烯醚苷類化合物如桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸；苯乙醇苷類化合物毛蕊花糖苷等(參見王劭華，羅光明等.中藥車前子的化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進(jìn)展.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，9 (9)，133-135.)。其中最具有開發(fā)前景的活性部位之一的就是苯乙醇苷類化合物，包含毛蕊花糖苷等。現(xiàn)代研究表明，苯乙醇苷類化合物(phenylethanoid glycosides)是一類含有 (羥基、甲氧基)取代苯乙基和(羥基、甲氧基)取代肉桂酰基，通常以B—葡萄糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷，廣泛存在于雙子葉植物中，生物活性很強(qiáng)，受到植物化學(xué)及藥學(xué)工作者的高度重視。近年來(lái)許多研究表明，該類化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、增強(qiáng)記憶、保肝、強(qiáng)心等作用(參見靖會(huì)，佐建鋒等.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥· 2006,17(3) 440-441)。車前子在全國(guó)各地均有分布，來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，藥材中含量較高，從車前子提取苯乙醇苷類活性具有廣闊的市場(chǎng)前景。車前子成分復(fù)雜，很多化合物結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相近，因此，從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的提取分離較為困難，收率很低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷類成分質(zhì)量百分含量在50%以上。 本發(fā)明提供的從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法，包括以下步驟步驟1 將車前子粉碎，用第一極性溶劑提取1-4次或回流提取或超聲提取或冷浸或滲漉提取，抽濾出提取液；提取液離心或抽濾，分離出上清液；所述第一極性溶劑是0-100% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮與水的混合溶液或含酸或堿的上述溶劑；步驟2 將上清液混合于硅膠或硅藻土后或者直接將上清液用色譜進(jìn)行精制，洗脫溶劑洗脫，收集富含苯乙醇苷類化合物的流份，濃縮干燥，得所述車前子提取物，所述車前子提取物中苯乙醇苷類活性成分的質(zhì)量百分含量在50%以上，優(yōu)選為50%-95% ；其中所述色譜為大孔吸附樹脂色譜、聚酰胺色譜、正相硅膠或反相硅膠色譜或其組合。作為優(yōu)選，步驟1所述第一極性溶劑是50-95% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮與水的混合溶液或含酸或堿的上述溶劑，所述酸或堿為強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或弱酸、弱堿，優(yōu)選為 0. 5% HCL、1%醋酸、0. 5% NaOH、或的Na2CO3,所述含酸或堿的上述溶劑優(yōu)選為含0. 5% HCL、1%醋酸、0. 5% NaOH、或的Na2CO3的50-95% C1-C6烷基醇的水溶液、丙酮或丙酮與水的混合溶液。作為優(yōu)選，所述C1-C6烷基醇為甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇或它們組成的混合溶劑。作為優(yōu)選，步驟2所述洗脫溶劑為水，C1-C6烷基醇，鹵代烴，醚類溶劑，酮類溶劑， 酯類溶劑，以及其兩種以上組成的混合溶劑。作為優(yōu)選，步驟2所述洗脫溶劑為選自甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。更優(yōu)選所述洗脫溶劑為三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水組成的混合溶劑。用色譜進(jìn)行精制，當(dāng)所述色譜為大孔吸附樹脂色譜，優(yōu)選洗脫溶劑為水和10-75% 的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷類成分總含量在50%-60%;所述色譜為聚酰胺色譜，優(yōu)選洗脫溶劑為水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷類成分總含量在 50% -60% ；所述色譜為反相硅膠色譜，優(yōu)選洗脫溶劑為水和10-50%的乙醇水溶液或甲醇水溶液，提取物中苯乙醇苷類成分總含量在70% -95% ；所述色譜為正相硅膠，優(yōu)選洗脫溶劑為三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100%乙醇水溶液、甲醇或其組成的混合溶劑，提取物中苯乙醇苷類成分總含量在60% -80%。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，大孔樹脂選自HP-20型大孔樹脂或AB-8型大孔樹脂，用乙醇水溶液梯度洗脫，富含苯乙醇苷成分存在于30%乙醇的洗脫液中；用聚酰胺柱進(jìn)行精制時(shí)，富含苯乙醇苷成分存在于50%乙醇的洗脫液中，這與不同層析柱的填充物的理化特性相關(guān)。作為優(yōu)選，步驟1所述用第一極性溶劑提取為每次加4-20BV的第一極性溶劑在 0V至溶劑回流的溫度下提取。作為優(yōu)選，步驟1提取液在分離上清前進(jìn)行濃縮處理，優(yōu)選濃縮為至提取液與車前子原料的體積質(zhì)量比以ml/g計(jì)為0. 1-1 10-1。作為優(yōu)選，步驟1所述提取溫度范圍為室溫至溶劑回流的溫度。本發(fā)明提供的從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法，所得提取物中苯乙醇苷類成分總含量在50 %以上，且檢測(cè)到含有毛蕊花糖苷及其衍生物成分，毛蕊花糖苷結(jié)構(gòu)如下所示
權(quán)利要求
1.一種從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法，包括以下步驟步驟ι 將車前子粉碎，用第一極性溶劑提取1-4次或回流提取或超聲提取或冷浸或滲漉提取，抽濾出提取液；提取液離心或抽濾，分離出上清液；所述第一極性溶劑是0-100% C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮與水的混合溶液或含酸或堿的上述溶劑；步驟2 將上清液混合于硅膠或硅藻土后或者直接將上清液用色譜進(jìn)行精制，洗脫溶劑洗脫，收集富含苯乙醇苷類化合物的流份，濃縮干燥，制得車前子提取物，所述車前子提取物中苯乙醇苷類活性成分的質(zhì)量百分含量在50%以上；其中所述色譜為大孔吸附樹脂色譜、聚酰胺色譜、正相硅膠或反相硅膠色譜或其組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一極性溶劑為50-95%C 1-C6烷基醇的水溶液、丙酮、丙酮與水的混合溶液或含酸或堿的上述溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述C1-C6烷基醇為甲醇、乙醇、異丙醇或正丁醇或它們組成的混合溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脫溶劑為水，C1-C6烷基醇，鹵代烴，醚類溶劑，酮類溶劑，酯類溶劑，以及其兩種以上組成的混合溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脫溶劑為選自甲醇、乙醇、異丙醇、 正丁醇、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲基叔丁醚、丙酮、2-丁酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脫溶劑為三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇和水組成的混合溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜為大孔吸附樹脂色譜，洗脫溶劑為水和10-75%的乙醇或甲醇水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜為聚酰胺色譜，洗脫溶劑為水和 10-75 %的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜為反相硅膠色譜，洗脫溶劑為水和10-50%的乙醇水溶液或甲醇水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜為正相硅膠，洗脫溶劑為三氯甲烷、乙酸乙酯、90-100%乙醇水溶液、甲醇或其組成的混合溶劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1所述用第一極性溶劑提取為每次加4-20BV的第一極性溶劑在0°C至溶劑回流的溫度下提取。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1提取液在分離上清前進(jìn)行濃縮處理，優(yōu)選濃縮為至提取液與車前子原料的體積質(zhì)量比以ml/g計(jì)為0.1-1 10-1。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，步驟1所述用第一極性溶劑提取溫度范圍為室溫至溶劑回流的溫度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從車前子中提取苯乙醇苷類活性成分的方法，本發(fā)明所述方法采用溶劑提取，經(jīng)色譜方法精制，得到提取物；所制得的提取物中有效成分苯乙醇苷類總含量在50％以上，方法簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化生產(chǎn)，具有工業(yè)應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07H15/18GK102311466SQ20111024352
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2011年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月23日
發(fā)明者王振輝, 王珂, 趙大龍, 陳明霞 申請(qǐng)人:北京科萊博醫(yī)藥開發(fā)有限責(zé)任公司