專利名稱：一種從女貞中聯(lián)合制備高純度熊果酸和齊墩果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及了一種從女貞中提取并純化其主要的活性成分熊果酸、齊墩果酸。
背景技術(shù)：
女貞為木樨科女貞屬植物，學(xué)名為Ligustrum Lucidum Ait，它是四季常綠大灌木或小喬木，全球有約50種，在我國就有38種，廣泛分布于華東，華南，西南及華中地區(qū)，植物資源豐富，分布極廣。隨著藥理作用研究的深入，發(fā)現(xiàn)女貞屬植物具有多種生理活性，但對女貞屬植物的化學(xué)成份研究還并不充分。長期以來，對女貞屬植物我們所研究的部位利用不徹底，基本不入藥，浪費很大。熊果酸⑴rsolic acid，UA)，又名烏索酸，烏蘇酸、α -香樹脂醇，是一種弱酸性五環(huán)三萜類化合物。在自然界分布很廣，是多種天然產(chǎn)物的功能成分。熊果酸純品為白色針狀結(jié)晶(乙醇中結(jié)晶)，味苦，其基本骨架是多氧菔的五環(huán)母核?；瘜W(xué)名 (3 β ) -3-HydroxyurS-12-en-28-oic acid,分子式 C30H4803，相對分子質(zhì)量 456. 68，熔點 ^549rC，易溶于二氧六環(huán)、吡啶，可溶于甲醇、乙醇、丁醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、 氯仿、乙醚，不溶于水和石油醚。UA在自然界分布較廣，如在陸英、枇杷葉、熊果、女貞子、山楂、車前草、夏枯草、白花蛇舌草等植物中以游離形式存在或與糖結(jié)合成甙存在。熊果酸具有多種生物活性，日本等國家已經(jīng)將其作為天然抗氧化劑應(yīng)用于食品中。齊墩果酸是熊果酸的同分異構(gòu)體，又稱土當(dāng)歸酸，具有清熱、抗炎、強心、降血糖， 降血脂、抑制變態(tài)反應(yīng)、利膽和退黃等活性，為保肝良藥。熊果酸和齊墩果酸廣泛存在于特定科屬的葉和果實中，不同的原材料分離純化得到純度較高的熊果酸或齊墩果酸，主要采用柱層析或大孔樹脂富集等手段，可是要把理化性質(zhì)極其相似的熊果酸和齊墩果酸分別得到純度較高的產(chǎn)品，難度依然較大，盡管柱層析法能很好地分離熊果酸和近似雜質(zhì)，但該法上樣量小，收得率低，不利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。同時洗脫劑需用石油醚、苯、氯仿、甲醇、乙酸乙酯等有機溶劑，成本大，不利于生產(chǎn)安全，還對環(huán)境造成危害。女貞葉和女貞子中都含有一定量的熊果酸和齊墩果酸。已報道的提取方法主要以有機溶液浸提結(jié)合一定分離手段為主，例如CN1358733以乙醇回流提取、 活性炭脫色、干燥等相結(jié)合的方法得到女貞葉中的熊果酸，雖然該發(fā)明較簡便，但只能得到熊果酸粗品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述方法的不足之處，研究設(shè)計一種成本低、環(huán)境友好，便于工業(yè)化生產(chǎn)的簡易制備高純度熊果酸和齊墩果酸的方法。本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種從女貞中聯(lián)合制備高純度熊果酸和齊墩果酸的方法，所述女貞為女貞葉或女貞子；將女貞葉片或女貞子用堿水煮沸，趁熱過濾，堿化物用熱水洗滌，除去含蠟雜質(zhì)。將得到的藥渣以純水為提取液，在沸水水浴中提取，過濾，除去糖類、鞣質(zhì)等水溶性雜質(zhì)。將過濾得到的濾渣，以乙醇溶液為溶劑，在水浴中回流提取后過濾， 得到乙醇提取液；將乙醇提取液用活性炭脫色，濾除活性炭，調(diào)節(jié)乙醇提取液PH值至11左右，靜置過濾雜質(zhì)后將濾液減壓濃縮至小體積(濃縮前體積的1/3-1/4)，有大量不溶物析出，過濾，濾出物為齊墩果酸粗品，濾液調(diào)節(jié)PH值至3-4，加等體積的純水，置于4°C過夜，濾出不溶物，得到熊果酸粗品；將齊墩果酸粗品用純水洗，不溶物用無水乙醇溶解，調(diào)節(jié)PH為 11，加活性炭脫色，放置過濾，濾液PH調(diào)至1，析出沉淀物，將沉淀物用堿水煮沸，過濾，重復(fù) 2-3次，將不溶物用純水煮沸，趁熱過濾得水洗物，將水洗物再次用無水乙醇溶解，活性炭脫色，過濾，濾液PH調(diào)至1，析出沉淀物，沸蒸餾水水洗即可得到高純度的齊墩果酸。將熊果酸粗品用NaOH水溶液洗，接著用純水洗，然后用無水乙醇重結(jié)晶兩次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重結(jié)晶，即得到高純度的熊果酸。本發(fā)明采用上述方法，以廉價易得的女真葉或女貞子為原料用乙醇回流提取。“三廢”處理量小且容易，乙醇可回收再用，提取后所剩廢渣可用作肥料。因而本發(fā)明對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，而且所獲得的熊果酸成本較低。主要是利用熊果酸和齊墩果酸在水中不溶解，在乙醇中不同PH溶解性能不同的特性設(shè)計的。得率高，產(chǎn)品純。產(chǎn)物經(jīng)波譜分析，其結(jié)果與熊果酸和齊墩果酸的標(biāo)準(zhǔn)一致。另外，本發(fā)明的方法簡便、快捷，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實施例方式一種從女貞葉或女貞子中提取和分離純化熊果酸、齊墩果酸的方法。將女貞葉片或女貞子用堿水煮沸，趁熱過濾，堿化物用熱水洗滌，除去含蠟雜質(zhì)。將得到的藥渣以純水為提取液，在沸水水浴中提取，過濾，除去糖類、鞣質(zhì)等水溶性雜質(zhì)。將過濾得到的濾渣，以乙醇溶液為溶劑，在水浴中回流提取后過濾，得到乙醇提取液；將乙醇提取液用活性炭脫色，濾除活性炭，調(diào)節(jié)乙醇提取液PH值至11左右，靜置過濾雜質(zhì)后將濾液減壓濃縮至小體積(濃縮前體積的1/3-1/4)，有大量不溶物析出，過濾，濾出物為齊墩果酸粗品，濾液調(diào)節(jié) PH值至3-4，加等體積的純水，置于4°C過夜，濾出不溶物，得到熊果酸粗品；將齊墩果酸粗品用純水洗，不溶物用無水乙醇溶解，調(diào)節(jié)PH為11，加活性炭脫色，放置過濾，濾液PH調(diào)至 1，析出沉淀物，將沉淀物用堿水煮沸，過濾，重復(fù)2-3次，將不溶物用純水煮沸，趁熱過濾得水洗物，將水洗物再次用無水乙醇溶解，活性炭脫色，過濾，濾液PH調(diào)至1，析出沉淀物，沸蒸餾水水洗即可得到高純度的齊墩果酸。將熊果酸粗品用NaOH水溶液洗，接著用純水洗，然后用無水乙醇重結(jié)晶兩次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重結(jié)晶，即得到高純度的熊果酸。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明詳細(xì)說明實施例1 取女貞葉干品lKg，加入5%氫氧化鈉水溶液8L，煮沸30分鐘，趁熱濾除堿水液， 用熱水洗滌藥渣，將殘渣加入到IOL水中煮沸1. 5小時，傾去水煮液，殘渣用95%乙醇分3 次回流提取，每次乙醇用量為6L ；合并醇提液，加醇提液體積0. 3%的活性炭，在50-60°C下攪拌脫色1小時；濾除活性炭，脫色醇提液用lmol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)至PH為11左右，靜置12小時后過濾，除沉淀，濾液減壓濃縮至未濃縮前體積的1/3左右(5L)；有大量不溶物析出，此不溶物為齊墩果酸粗品，過濾，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH在3_4之間。向濾液中加入5L水，放置4°C過夜，有大量沉淀析出。過濾，析出物為熊果酸粗品。齊墩果酸的純化將上述得到的齊墩果酸粗品10. 4g用適量純水洗，水不溶物用175ml無水乙醇溶解，用10%氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH至11，加入3g活性炭，置于50-60°C水浴攪拌15分鐘， 濾除活性炭，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH至1，析出沉淀物9. 6g。將沉淀物加入到 60ml，5%氫氧化鈉水溶液中煮沸30分鐘，過濾，將不溶物用60ml煮沸純水洗滌，趁熱過濾得水洗物8. Ig,將水洗物用80ml無水乙醇溶解，加入0. Sg活性炭，置于50_60°C水浴攪拌 15分鐘，過濾，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH至1，析出齊墩果酸，過濾，沸蒸餾水水洗得到齊墩果酸4. 7g。產(chǎn)物經(jīng)波譜分析，其結(jié)果與齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)一致。熊果酸的純化將上述得到的熊果酸粗品42. 8g用適量氫氧化鈉溶液洗滌，接著用適量純水洗滌，將不溶物37. 9g用適量無水乙醇重結(jié)晶兩次，再用200ml體積比為1 1的甲醇乙醇混合溶液結(jié)晶一次，最終得到熊果酸19. 3g。產(chǎn)物經(jīng)波譜分析，其結(jié)果與熊果酸標(biāo)準(zhǔn)一致。實施例2:取女貞子干品lKg，加入5%氫氧化鈉水溶液8L，煮沸30分鐘，趁熱濾除堿水液，用熱水洗滌藥渣，將殘渣加入到IOL水中煮沸2小時，傾去水煮液，殘渣用90%乙醇分3次回流提取，每次乙醇用量為6L ；合并醇提液，加醇提液體積0. 3%的活性炭，在50-60°C下攪拌脫色1小時；濾除活性炭，脫色醇提液用lmol/L氫氧化鈉水溶液調(diào)至PH為11左右，靜置12 小時后過濾，除沉淀，濾液減壓濃縮至未濃縮前體積的1/3左右(5L)；有大量不溶物析出， 此不溶物為齊墩果酸粗品，過濾，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH在3_4之間。向濾液中加入5L水，放置4°C過夜，有大量沉淀析出。過濾，析出物為熊果酸粗品。齊墩果酸的純化將上述得到的齊墩果酸粗品17. 9g用適量純水洗，水不溶物用無水乙醇溶解，用10%氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)PH至11，加入5. 7g活性炭，置于50-60°C水浴攪拌15分鐘，濾除活性炭，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH至1，析出沉淀物15. 4g。將沉淀物加入到90ml，5%氫氧化鈉水溶液中煮沸30分鐘，過濾，將不溶物用60ml煮沸純水洗滌，趁熱過濾得水洗物13. lg，將水洗物用120ml無水乙醇溶解，加入1. 2g活性炭，置于50-60°C水浴攪拌15分鐘，過濾，濾液用6mol/L鹽酸水溶液調(diào)節(jié)PH至1，析出齊墩果酸，過濾，沸蒸餾水水洗得到齊墩果酸8. 7g。產(chǎn)物經(jīng)波譜分析，其結(jié)果與齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)一致。熊果酸的純化將上述得到的熊果酸粗品62g用適量氫氧化鈉溶液洗滌，接著用適量純水洗滌，將不溶物50. 7g用適量無水乙醇重結(jié)晶兩次，再用200ml體積比為1 1的乙醇醋酸混合溶液結(jié)晶一次，最終得到熊果酸29. 7g。產(chǎn)物經(jīng)波譜分析，其結(jié)果與熊果酸標(biāo)準(zhǔn)一致。
權(quán)利要求
1.一種從女貞中聯(lián)合制備高純度熊果酸和齊墩果酸的方法，其特征在于，所述原料女貞為女貞葉或女貞子；該制備方法包括下列步驟A)將女貞葉片或女貞子用堿水煮沸，趁熱過濾，堿化物用熱水洗滌，除去含蠟雜質(zhì)。將得到的藥渣以純水為提取液，在沸水水浴中提取，過濾，將過濾得到的濾渣，以乙醇溶液為溶劑，在水浴中回流提取后過濾，得到乙醇提取液；B)將乙醇提取液用活性炭脫色，濾除活性炭，調(diào)節(jié)乙醇提取液PH值至堿性，靜置過濾雜質(zhì)后將濾液減壓濃縮至小體積，過濾，濾出物為齊墩果酸粗品，濾液調(diào)節(jié)PH值至酸性，加等體積的純水，置于4°C過夜，濾出不溶物，得到熊果酸粗品；C)將齊墩果酸粗品用純水洗，不溶物用無水乙醇溶解，調(diào)節(jié)PH為堿性，加活性炭脫色， 放置過濾，濾液調(diào)至酸性，析出沉淀物，將沉淀物用堿水煮沸，過濾，重復(fù)2-3次，將不溶物用純水煮沸，趁熱過濾得水洗物，將水洗物再次用無水乙醇溶解，活性炭脫色，過濾，濾液調(diào)至酸性，析出沉淀物，沸蒸餾水水洗即可得到高純度的齊墩果酸；D)將熊果酸粗品用堿水洗，接著用純水洗，然后用無水乙醇重結(jié)晶兩次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重結(jié)晶，即得到高純度的熊果酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟A中堿水為5%氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，除雜時堿水的加入量(mL)與加入的女貞葉或女貞子質(zhì)量((g)的液固比為6-8倍， 煮沸時間控制在20-30分鐘；步驟A中水提時純水的加入量(mL)與女貞葉或女貞子質(zhì)量((g)的液固比為8-12倍， 沸水水浴中提取時間為1-2小時；步驟A中醇提時乙醇溶液的濃度為80%以上，加入量(mL)與女貞葉或女貞子質(zhì)量 ((g)的液固比為10-15倍，每次提取時間為1.5-2小時，提取2-3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟B中所用調(diào)堿試劑為lmol/L氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，PH應(yīng)控制在9-11范圍內(nèi)；步驟B中所用調(diào)酸試劑為6mol/L鹽酸水溶液，PH應(yīng)控制在3-4范圍內(nèi)；步驟B中濾液減壓濃縮體積應(yīng)為濃縮前體積的1/3-1/4范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟C中所用調(diào)堿試劑為10%氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，PH應(yīng)控制在11 ；步驟C中所用調(diào)酸試劑為6mol/L鹽酸水溶液，PH應(yīng)控制在1 ；步驟C中所用煮沸堿水為5%氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液，煮沸時間應(yīng)控制在 15-30分鐘，所用量(ml)和沉淀物(g)的液固比為6-8倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟D中所用的堿水洗液為氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液；重結(jié)晶所采用的甲醇和乙醇混合溶液的體積比為1 1，重結(jié)晶所采用的乙醇和醋酸混合溶液的體積比為1 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，各步驟中脫色醇提液加入液固比為 0. 1-1. 0%活性炭，攪拌吸附15-60分鐘，重復(fù)2-3次，脫色溫度為50-60°C。
全文摘要
一種從女貞中聯(lián)合制備高純度熊果酸和齊墩果酸的方法，所述女貞為女貞葉或女貞子。該制備方法以女貞葉或女貞子為原料，通過將女貞葉或女貞子堿水除雜、水煮、乙醇提取、活性炭脫色、調(diào)堿除雜、減壓濃縮析出齊墩果酸粗品，調(diào)酸析出熊果酸粗品及采用水洗、重結(jié)晶等步驟純化齊墩果酸和熊果酸。本發(fā)明以廉價易得的女真葉或女貞子為原料用乙醇回流提取。“三廢”處理量小且容易，乙醇可回收再用，提取后所剩廢渣可用作肥料。因而本發(fā)明對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染；得率高，產(chǎn)品純。另外，本發(fā)明的方法簡便、快捷，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C07J63/00GK102351939SQ20111026022
公開日2012年2月15日 申請日期2011年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月5日
發(fā)明者付鴻, 華慧穎, 司方博, 司福亭, 周曉莉, 姚虹, 寧建中, 岳福興, 曾超, 李靖靖, 王宇飛, 王文武, 高建炳 申請人:曾超