專利名稱：一種脫氧野尻霉素提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物提取技術(shù)，特別涉及一種脫氧野尻霉素單體的提取方法。
背景技術(shù)：
1 一脫氧野尻霉素(1 一deoxynojirimycin，DNJ)為一種極性含N化合物，其化學(xué)名稱是3，4，5—三羥基一2—輕甲基四氫吡啶，分子式為C6H13NO4，相對分子質(zhì)量為163。 DNJ具有很強的抑制α —葡萄糖苷酶的作用，是降血糖、治療糖尿病的有效成分[1 4]，此外還具有抗病毒[5]、抗腫瘤轉(zhuǎn)移[6]等藥理作用。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對DNJ的來源、在生物體內(nèi)的合成機制及化學(xué)合成方法進行了大量的研究探索，希望找到一種穩(wěn)定、高效、經(jīng)濟的獲取DNJ的途徑[7]。李宇亮[8]等報道了從桑葉中提取脫氧野尻霉素的方法，主要包括提取，提取物過陽離子交換樹脂，正丁醇萃取等步驟，得到脫氧野尻霉素純品。該工藝需要用正丁醇萃?。?正丁醇較貴，生產(chǎn)成本較高。劉韋銎[9]等報道了一種從桑葉中提取脫氧野尻霉素的方法，包括桑葉加70%乙醇提取，將提取液濃縮后通過大孔吸附樹脂，通過大孔吸附樹脂的流出液，濃縮，通過陽離子交換樹脂，用蒸餾水洗，用0.5mol/L氨水洗脫，收集洗脫液，濃縮，濃縮液通過硅膠純化，將有雜質(zhì)的組分棄去，合并含1-脫氧野尻霉素較純的組分，濃縮，真空干燥，即得1-脫氧野尻霉素(DNJ)。該工藝需要乙醇提取，在上陽離子交換素質(zhì)之前需要通過大孔樹脂，并4次濃縮；工藝能耗高，使用乙醇成本也高。周惠燕_等報道了利用反向柱層析技術(shù)提取純化脫氧野尻霉素的方法，脫氧野尻霉素的含量達到10. 7% ；該技術(shù)未能得到純品。劉樹興[11]等以0乂八-6樹脂裝柱、pHIO、原液濃度0.352 mg/mL、流速2.0 BV/h 條件下吸附，80%乙醇溶液以2.5 BV/h的流速洗脫，提取脫氧野尻霉素。提取工藝需要使用乙醇，而且并未明確最終產(chǎn)物的純度。中國專利技術(shù)(03101988. 9)報道了一種含有桑葉總堿浸膏的制劑及其制備方法 桑葉用水或者親水溶劑提取，絮凝，上清液離子交換，親水性溶劑回流提取，濃縮至干得到浸膏。產(chǎn)品的純度達到50%以上，該制劑具有明顯的降血糖及改善糖耐量作用。該方法需要絮凝；被樹脂吸附的物資需要用親水溶劑回流洗脫下來，實際操作中有些不便。中國專利技術(shù)(02113004. 3)報道了桑枝提取物及其提取方法和新用途桑枝提取物由單味藥材桑枝用0 95%乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶劑或它們的組合在10 - 100°C溫度條件下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶劑即得；或用下列方法進一步純化提取液調(diào)PH為7. 5 - 9. 5，離心后上清液調(diào)pH為4 一 6，沉淀水洗至中性， 干燥即得；提取液經(jīng)石油醚或汽油脫脂而得；提取液經(jīng)石油醚或汽油脫脂后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分別或依次提取而得；提取液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附后，用10 — 95%乙醇水溶液解吸附而得；提取液經(jīng)硅藻土、氧化鋁等吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等溶劑洗脫后，濃縮干燥而得；提取液經(jīng)聚酰胺、硅膠或離子交換樹脂等柱層析分離。以上純化方法可單用或采用幾種方法的組合。所得的桑枝提取物中含有大量黃酮類成分，包括蘆丁、槲皮素、桑色素等。該專利技術(shù)未明確提取物含DNJ的純度，而且純化時石油醚脫脂、大孔樹脂吸附等，操作程序復(fù)雜。中國專利技術(shù)(200710060127. 2)報道了從桑葉中連續(xù)提取生物堿、黃酮和多糖活性成分的方法選用溶劑為20% 90%的乙醇或10% 90%的丙酮回流提取，得到濾液和濾渣；濾液濃縮、加水溶解后，通過大孔樹脂分離得含量為30% 50%的黃酮類化合物；經(jīng)過大孔樹脂后的溶液，再通過離子交換樹脂分離得含量為40% 60%的生物堿類化合物； 桑葉濾渣，用水煎煮并脫色，10% 60%醇沉，得含量為55% 85%的酸性多糖類化合物。 該技術(shù)需要大量的乙醇或者丙酮進行提取，工藝技術(shù)成本高，能耗高，未得DNJ純品。中國專利技術(shù)(200510030333. X)報道了從桑葉中提取有效成分的方法將吸附有桑葉提取物的樹脂置于萃取釜中，連續(xù)通入(X)2進行萃取洗脫，收集流出萃取釜的CO2，卸壓至常壓，CO2放空或加壓后回用，獲得卸壓后的殘留物，即為桑葉有效成分，萃取釜中(X)2 為超臨界狀態(tài)。本發(fā)明的方法，純化過程不易氧化，便于進行規(guī)?；瘡纳Ｈ~中提取、提純桑葉脫氧野尻霉素類生物堿和桑葉黃酮，選擇性高，產(chǎn)物中，脫氧野尻霉素生物堿和桑葉黃酮的總含量可達到75 90%。該技術(shù)采用超臨界萃取技術(shù)，最終產(chǎn)品也未得到脫氧野尻霉素純品。中國專利技術(shù)(200710067498. 3)報道了一種從桑葉中提取1_脫氧野尻霉素的方法通過在桑葉的提取液中加入無機酸酸化處理，經(jīng)冷卻除去雜質(zhì)，再經(jīng)過柱層析獲得?？墒股Ｈ~提取物含量不低于10%，但是未得純品。中國專利技術(shù)(200810122998. 7)報道了一種從桑葉總生物堿中分離1_脫氧野尻霉素單體的方法桑葉總堿溶于水，離子交換樹脂吸附，吸附完成后，分布洗脫并收集脫氧野尻霉素純品部分，減壓濃縮干燥，多次重結(jié)晶，得到純品。該方法要求原料的“總生物堿” 含脫氧野尻霉素40%以上，分步洗脫劑為不同濃度的醇溶液，重結(jié)晶為甲醇和丙酮混合溶液；分步洗脫時需要大量的檢測工作和收集純品部位，操作比較麻煩，重結(jié)晶的混合溶劑難以處理。中國專利技術(shù)(200810236144. 1)報道了一種聯(lián)產(chǎn)桑葉黃酮、多糖和生物堿的復(fù)合提取工藝，但是并未分離得到脫氧野尻霉素純品。中國專利技術(shù)(200910192M2. 2)報道了一種從桑葉中連續(xù)提取分離1_脫氧野尻霉素(DNJ)、黃酮的方法將桑葉和乙醇混合后提取，離心過濾，濃縮后加入絮凝劑絮凝沉淀；除去沉淀后將濾液加入連通的多個陽離子交換樹脂柱，并流經(jīng)與該樹脂柱串連在一起的大孔吸附樹脂柱；濾液加入結(jié)束后用純凈水洗至大孔樹脂柱流出液無色時將其斷開，再用氨水或含氨的乙醇溶液從陽離子樹脂柱上洗脫1-脫氧野尻霉素(DNJ)；洗脫液再上陽離子樹脂柱，重復(fù)操作后收集洗脫液，用80D納濾膜濃縮過濾后噴霧干燥，得棕黃色粉末狀 1-脫氧野尻霉素(DNJ)。用3 % 10 %的乙醇洗滌大孔樹脂柱以除去膠性雜質(zhì)，再用50 % 70 %乙醇洗脫黃酮，收集棕紅色洗脫液，減壓濃縮回收乙醇后噴霧干燥，得黃棕色粉末狀桑葉總黃酮。該技術(shù)原料需要用乙醇反復(fù)提取，生產(chǎn)成本較高，能耗也較高。中國專利技術(shù)(200710099911. 4)報道了一種用離子交換樹脂分離桑葉總生物堿的方法。該技術(shù)未獲得脫氧野尻霉素單體。中國專利技術(shù)(20101013(^63. 6)報道了一種從桑葉中制備黃酮、生物堿的方法堿水加熱提取黃酮，90-95 %乙醇和活性炭再提取生物堿，黃酮提取液調(diào)酸過大孔樹脂柱， 酸化結(jié)晶和70-80%乙醇溶解重結(jié)晶，生物堿提取液濃縮，丙酮再溶解，過氧化鋁短粗柱，氨化結(jié)晶和85-90%乙醇溶解重結(jié)晶。本技術(shù)需要大量的有機溶劑，而且未得到脫氧野尻霉素單體。中國專利技術(shù)(201110021131. 4)報道了桑葉中1_脫氧野尻霉素的制備方法采用高電壓脈沖電場技術(shù)生產(chǎn)1-脫氧野尻霉素的方法，由于是常溫提取，同時提高了產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)效率，降低了生產(chǎn)成本。該技術(shù)未得到脫氧野尻霉素純品。中國專利技術(shù)(200910167602. 5)報道了天然產(chǎn)物中提取分離高純1_脫氧野尻霉素的方法原料干粉用親水溶劑提取，提取液酸化、濃縮后以陰離子交換樹脂浸泡，流出液和水洗液濃縮后用陽離子交換柱層析、有機溶劑萃取、重結(jié)晶、凝膠柱層析純化，所得產(chǎn)物中1-脫氧野尻霉素含量不少于98%，具體實施已進入中試。該技術(shù)需要陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂，同時需要醇、丙酮、氯仿、丁醇等多種有機溶劑，尤其是涉及氯仿，毒性較大；提取過程中需要多次濃縮，能耗較高。中國專利技術(shù)(201110038204. 0)報道了由桑葉中提取分離高純度1_脫氧野尻霉素的方法將原料粉末用含水溶劑提取，濾掉藥渣，物料離心，得提取液；提取液濃縮至無乙醇，超濾膜過濾；再用無機酸調(diào)PH至3. 0-4. 0，沉淀，離心除雜；酸化料液上強酸性陽離子樹脂柱，水洗，再進行氨水洗脫；料液上大孔樹脂柱，水洗，再用不同濃度的乙醇梯度洗脫，收集目標洗脫液；目標洗脫液減壓濃縮、干燥，得到粗品；粗品用無水乙醇溶解，過堿性吸附柱除雜，收集流出液；流出液減壓濃縮，進行常溫結(jié)晶和重結(jié)晶，得到I-DNJ精制品。本發(fā)明整個工藝過程中，除乙醇外未使用其它有機溶劑，操作安全，I-DNJ含量可達98. 3%。該工藝需要采用超濾技術(shù)，乙醇分布洗脫，收集目標洗脫液需要不斷檢測流出組份等，操作復(fù)雜；能耗較高。到目前為止，從現(xiàn)有文獻和專利技術(shù)上看，提取脫氧野尻霉素純品或者使用過多的有機溶劑，尤其是使用氯仿，導(dǎo)致安全性不高；或者需要多次濃縮，能耗較高；或者需要使用過多的步驟，或者需要分步檢測并收集目標成分，由于脫氧野尻霉素沒有紫外吸收，檢測比較麻煩，操作復(fù)雜，工業(yè)生產(chǎn)難以控制；或者無法得到純品等。[1] Gross V, Andus Τ, Tran-ThiT A, et al. I-Deoxynojirimycin in pairs oligo saccharide processing of α j-proteinase inhibitor and inhibits its secretion in primary cultures of rat hepatocytes[J]. BiolChem, 1983, 258(20):12203-12209.Yoshiaki Y. Inhibition of intestinal α -glucosidase activity and post prandial hyperglycem ia by moranoline and its N-alkyl derivatives[J]. Agric Biol Chem, 1988， 52(1):121-128.原愛紅，馬駿，蔣曉峰，等。桑葉中糖苷酶抑制活性組分的篩選及體外活性研究[J]。同濟大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版，2005, 26 (4) :8-110[4] Oku T, YamadaM, Nakamura M, et al. Inhibitory effects of extractives from leaves of Morus alba on human and rat small intestinal disaccharides activity[J], J Nutr, 2006, 95(5):933-938.彭忠田，申璀，譚德明，等.脫氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的體外試驗研究[J]。中國藥房，2007，18(1): 22-24。[6] Tsuruka T, FukuyasuH. Inhibition of mouse turn or metastas is with nojirimycin—related compounds[J]. J Antibiot, 1996, 49(2):155-161。[7]周曉玲，孫凌云，張進，殷浩，崔為正。脫氧野尻霉素的來源及合成研究進展。 蠶業(yè)科學(xué)。2011，37(1) 0105-0111。[8]李宇亮，李劍敏，吳雅睿。脫氧野尻霉素提取分離方法研究。應(yīng)用化工。 2006，35 (9) 599 661.劉韋銎，趙駿，高秀梅，劉美平，曾森。1-脫氧野尻霉素提取精制工藝的研究。中華中醫(yī)藥學(xué)刊。2009，27 (10) :2079 2081。[10]周惠燕，胡曉渝，馬英。桑葉中脫氧野尻霉素的純化及含量測定。中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25 (5) :367 368。[11]劉樹興，花俊麗，馬文錦。樹脂法純化1-脫氧野尻霉素(DNJ)的研究。食品科技。2009，34 (7) :168 170。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有脫氧野尻霉素單體提取技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種脫氧野尻霉素(DNJ)單體的提取方法，能夠?qū)崿F(xiàn)DNJ的提取分離，并且工藝簡單，節(jié)約能源，無污染， 循環(huán)利用，實施容易，能夠適應(yīng)規(guī)?；a(chǎn)且成本低廉，同時提取效率高，產(chǎn)品純度好。本發(fā)明所述的DNJ單體的提取方法，包括如下步驟
(1)桑原料用2 10倍(w/v)的酸水(0 5%w/v)或者水溶液浸泡(室溫 100°C)提取1 3次，每次0. 1 48小時；
(2)提取液用0.1 1倍(ν/ν)體積比例的陽離子交換樹脂吸附，再用1 10倍陽離子交換樹脂體積(ν/ν)的水洗后，用1 10倍陽離子交換樹脂體積(ν/ν)的氨水(0. 05 2mol/L)洗脫；
(3)將氨水洗脫液反滲透預(yù)濃縮2 20倍后，蒸餾回收氨，得到中間體A；回收的氨水用于(2)的洗脫；
(4)中間體A溶于親水性溶劑并配制成1 20%(w/v)的溶液，催化轉(zhuǎn)化1小時，按照凝膠溶液為1 10 :1的體積比上凝膠層析柱，親水性溶劑洗脫；
(5)回收溶劑后得中間體B，中間體B溶于混合溶劑，配制成1 20%(w/v)的溶液，按照吸附劑溶液為1 10 :1的體積比上層析柱，溶劑洗脫；回收的親水溶劑用于(4)的洗脫；
(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品；回收的溶劑用于(5)的洗脫。本工藝技術(shù)可以得到10%、50%、90%、99%等各種純度級別的脫氧野尻霉素純品。進一步地本工藝步驟(1)中的桑原料指桑枝、桑葉、桑白皮等的一種或多種；酸水指硫酸或者鹽酸水溶液；浸泡指室溫到100°c下浸泡。由于室溫浸泡，降低了能耗。進一步地本工藝步驟(2)中的陽離子交換樹脂指普通的強酸性或者弱酸性陽離子交換樹脂，包括732、7320、001、0001、110、122、0113、0151、7對等各種陽離子交換樹脂。提取液不用處理直接上陽離子交換樹脂，大幅度節(jié)約成本并消除了環(huán)保問題。進一步地本工藝步驟(3)中的反滲透技術(shù)預(yù)濃縮氨水洗脫液；本工藝采用的反滲透技術(shù)為普通的反滲透技術(shù)。該技術(shù)濃縮氨水溶液的同時，將氨和DNJ富集，大幅度降低了常規(guī)濃縮所消耗的能耗，為節(jié)能的關(guān)鍵。進一步地本工藝步驟(4)中的催化轉(zhuǎn)化，是指上凝膠層析柱前，先用催化劑 (0. 01 1%W/V的鹽酸或者硫酸)在60 100°C下催化轉(zhuǎn)化；凝膠層析柱指Superose、 Sephdex LH-20、Hitrap SP、s印hodex等；所述的親水溶劑指水、甲醇、乙醇、丙酮等。本發(fā)明采用了催化轉(zhuǎn)化，其為層析時不需要監(jiān)控中間體的關(guān)鍵，也是增加收率的關(guān)鍵。進一步地本工藝步驟(5)中的層析柱指氧化鈣、氫氧化鋁、硅膠、活性炭、三氧化二鋁等；所述的溶劑指甲醇一乙酸乙酯、乙醇一乙酸乙酯、丙酮一乙酸乙酯等。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明的DNJ單體的提取方法以桑葉、桑枝、桑白皮中的至少一種作為原料，結(jié)合DNJ 各種成分的物理化學(xué)特性，對原料在室溫 100°C下提取，提取液直接上陽離子交換樹脂富集，氨水洗脫后的DNJ氨水溶液采用反滲透技術(shù)進行預(yù)濃縮富集，大幅度降低能耗；中間體進行催化轉(zhuǎn)化，層析時直接收集產(chǎn)品，無需監(jiān)控的操作。整個操作過程能耗很低，與傳統(tǒng)工藝相比，大大節(jié)約了能源。本發(fā)明洗脫陽離子交換樹脂上的DNJ使用的氨水溶液中的氨，回收后循環(huán)利用； 洗脫凝膠柱的親水溶劑，以及洗脫層析柱的混合溶劑等，均回收利用。整個工藝節(jié)能環(huán)保， 實現(xiàn)了提取溶劑的循環(huán)利用。本發(fā)明選用的洗脫溶劑和中間體催化轉(zhuǎn)化技術(shù)，自動實現(xiàn)了分級洗脫，三次分離中的每一次分離不用中間監(jiān)控，生產(chǎn)技術(shù)容易掌握。得到的產(chǎn)品，其純度可以控制在10%、 50%、90%、99%四個級別?？梢詽M足降糖藥物和抗癌藥物的原料藥，也可以作為對照品使用， 還可以作為其他產(chǎn)品原料之用。
具體實施例方式以下將對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選實施例僅為了說明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1
(1)桑枝條IKg用10升0. l%(w/v)的硫酸溶液室溫下浸泡48小時；過濾，得到提取液 (約9升)。(2)提取液9升用0. 9升預(yù)處理好的732陽離子交換樹脂攪拌吸附，然后，用0. 9 升水洗滌樹脂，再用0. 9升2mol/L氨水洗滌樹脂。約得到0. 9升氨水洗脫液。(3)0. 9升氨水洗脫液反滲透濃縮2倍后(約得到0. 45升濃縮液)，蒸餾回收氨，得到中間體A (約10克)；回收的氨水用于(2)的洗脫。(4)中間體A溶于水并配制成20%的溶液(約50毫升)，加0. 01%的鹽酸(w/v) 100°c下回流轉(zhuǎn)化1小時，上50毫升Superose凝膠層析柱，用水洗脫；收集洗脫液。(5)回收溶劑后得中間體B，中間體B (約1克)溶于5毫升甲醇一乙酸乙酯(1 :1) 混合溶劑，溶液上5克硅膠柱，用甲醇一乙酸乙酯(1 :1)混合溶劑洗脫。(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品。脫氧野尻霉素純度99%。實施例2
(1)桑葉IKg用2升5%(w/v)的鹽酸溶液100°C下浸泡0. 1小時，過濾，得到提取液(約1升)；殘渣再用2升0. 5% (w/v)的鹽酸溶液100°C下浸泡0. 1小時，過濾，得到提取液(約 1升)；殘渣再用2升水10(TC下浸泡0. 1小時，過濾，得到提取液(約1升)。合并三次提取液，得到提取液約3升。(2)提取液3升用3升預(yù)處理好的001陽離子交換樹脂攪拌吸附，然后，用30升水洗滌樹脂，再用30升0. 05mol/L氨水洗滌樹脂。約得到30升氨水洗脫液。(3) 30升氨水洗脫液反滲透濃縮20倍后(約得到1. 5升濃縮液)，蒸餾回收氨，得到中間體A (約20克)；回收的氨水用于(2)的洗脫。(4)中間體A溶于甲醇并配制成1%的溶液(約2000毫升)，加1%的硫酸(W/v)60°C 下保溫轉(zhuǎn)化1小時，上20000毫升kphdex LH-20凝膠層析柱，用甲醇洗脫；收集洗脫液。(5)回收溶劑后得中間體B，中間體B (約1克)溶于100毫升乙醇一乙酸乙酯(1 1 )，溶液上1000克三氧化二鋁柱，乙醇一乙酸乙酯(1 1)洗脫。(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品。脫氧野尻霉素純度50%。實施例3
(1)桑白皮IKg用5升l%(w/v)的硫酸溶液60°C下浸泡5小時，過濾，得到提取液(約 3升)；殘渣再用5升l%(w/v)的硫酸溶液60°C下浸泡5小時，過濾，得到提取液(約4升)。 合并二次提取液，得到提取液約7升。(2)提取液7升用3. 5升預(yù)處理好的D151陽離子交換樹脂攪拌吸附，然后，用7 升水洗滌樹脂，再用7升0. 5mol/L氨水洗滌樹脂。約得到7升氨水洗脫液。(3)7升氨水洗脫液反滲透濃縮10倍后(約得到0. 7升濃縮液)，蒸餾回收氨，得到中間體A (約30克)；回收的氨水用于(2)的洗脫。(4)中間體A溶于乙醇并配制成10%的溶液(約300毫升)，加0. 1%的硫酸(w/v) 75°C下保溫轉(zhuǎn)化1小時，上1500毫升Hitrap SP凝膠層析柱，用乙醇洗脫；收集洗脫液。(5)回收溶劑后，中間體B (約5克)溶于50毫升丙酮一乙酸乙酯(1 :1)，溶液上 250克活性炭柱，丙酮一乙酸乙酯(1 1)洗脫。(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品。脫氧野尻霉素純度10%。實施例4
(1)桑枝條IKg用6升水90°C下浸泡12小時，過濾，得到提取液(約4升)；殘渣再用 4升水90°C下浸泡12小時，過濾，得到提取液(約3升)。合并二次提取液，得到提取液約7升。(2)提取液7升用1. 4升預(yù)處理好的122陽離子交換樹脂攪拌吸附，然后，用2. 8 升水洗滌樹脂，再用2. 8升0. lmol/L氨水洗滌樹脂。約得到2. 8升氨水洗脫液。(3) 2. 8升氨水洗脫液反滲透濃縮5倍后(約得到0. 6升濃縮液)，蒸餾回收氨，得到中間體A (約10克)；回收的氨水用于(2)的洗脫。(4)中間體A溶于丙酮并配制成5%的溶液(約200毫升)，加0. 的鹽酸(w/v) 60°C下保溫轉(zhuǎn)化1小時，上200毫升s印hodex凝膠層析柱，用丙酮洗脫；收集洗脫液。(5)回收溶劑后得中間體B，中間體B (約2克)溶于40毫升甲醇一乙酸乙酯(1 1)，溶液上80克氧化鈣柱，甲醇一乙酸乙酯(1 1)洗脫。(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品。脫氧野尻霉素純度90%。最后說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
權(quán)利要求
1.一種脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于包括如下步驟(1)桑原料用2 10倍w/v的酸水溶液或者水浸泡提取1 3次，每次0.1 48小時；(2)將提取液用0.1 1倍體積的陽離子交換樹脂吸附；再用1 10倍陽離子交換樹脂體積的水洗后，最后用1 10倍陽離子交換樹脂體積的氨水洗脫；(3)將氨水洗脫液反滲透預(yù)濃縮2 20倍后，蒸餾回收氨，得到中間體A；(4)中間體A溶于親水性溶劑并配制成1 20%w/v的溶液，催化轉(zhuǎn)化1小時，按照凝膠溶液為1 10 :1的體積比上凝膠層析柱，親水性溶劑洗脫；(5)回收溶劑后得中間體B，將中間體B溶于混合溶劑，配制成1 20%w/v的溶液，按照吸附劑溶液為1 10 :1的體積比上層析柱，溶劑洗脫；(6)回收溶劑，真空干燥，即得脫氧野尻霉素純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(1)中的桑原料指桑枝、桑葉、桑白皮中的一種或多種；酸水指硫酸或者鹽酸水溶液，其濃度為> 0，并 (5% ；浸泡指室溫到100°C下浸泡。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(2)中的陽離子交換樹脂指普通的強酸性或者弱酸性陽離子交換樹脂，選擇732、7320、001、D001、110、 122、D113、D151、724。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(2)中氨水的濃度為0. 05 2mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(4)中的催化轉(zhuǎn)化，是指上凝膠層析柱前，先用0. 01 l%w/v的鹽酸或者硫酸做催化劑在60 100°C 下催化轉(zhuǎn)化；凝膠層析柱選自Superose、Sephdex LH-20、Hitrap SP、sephodex ；所述的親水溶劑指水、甲醇、乙醇或丙酮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(5)中的層析柱指氧化鈣、氫氧化鋁、硅膠、活性炭或三氧化二鋁；所述的混合溶劑指甲醇一乙酸乙酯、 乙醇一乙酸乙酯或丙酮一乙酸乙酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一項所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于步驟(3)回收的氨水用于第二步(2)的洗脫；步驟(5)回收的親水溶劑用于第(4)步的洗脫； 步驟(6)回收的溶劑用于第(5)步的洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6之任一項所述的脫氧野尻霉素單體的提取方法，其特征在于本提取方法能得到10%、50%、90%、99%各種純度級別的脫氧野尻霉素純品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脫氧野尻霉素單體的提取方法，包括如下操作將桑原料用酸水溶液浸泡提取1～3次；提取液上陽離子交換樹脂吸附，水洗后，用氨水洗脫；反滲透預(yù)濃縮洗脫液后，回收氨，中間體溶于親水性溶劑，催化轉(zhuǎn)化，溶液上凝膠層析柱，親水性溶劑洗脫；回收溶劑后，溶于混合溶劑，上層析柱，混合溶劑洗脫；回收混合溶劑，即得脫氧野尻霉素純品。本工藝技術(shù)能耗低，環(huán)保，可以得到10%、50%、99%等各種純度級別的脫氧野尻霉素純品。
文檔編號C07D211/46GK102276515SQ201110269118
公開日2011年12月14日 申請日期2011年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月13日
發(fā)明者葉小利, 張波, 李學(xué)剛 申請人:西南大學(xué)